<Desc/Clms Page number 1>
L'invention concerne un procédé pour la production de nouveaux produits synthétiques constitués par les esters phosphoriques de dextrane naturel ou partiellement décomposé ;les composés obtenus suivant la pré- sente invention correspondent à la formule générale
EMI1.1
dans laquelle R représente la molécule simple du dextrane, n = 1,2 ou 3 et n' > 1.
Ces composés peuvent être sous forme de sels et présenter divers degrés d'estérification (de 1 à 3 hydroxyles estérifiés pour chaque molécu- le simple). Les composés partiellement décomposés ont un poids moléculaire compris entre 50.000 et 60.000. (Par exemple, en se référant à la formule ci-dessus, pour n =¯3, n'est d'environ 9 pour un poids moléculaire de 5000 et d'environ 11 pour un poids moléculaire de 60.000).
Les composés conformes à la présente invention (et ceux , par exemple les esters phosphoriques du lactose, obtenus conformément au brevet français déposé le 1er février 1956 par la demanderesse pour ' Procédé d'obtention d'esters phosphoriques du lactose") sont les premiers produits synthétiques qui puissent être utilisés en thérapeutique en vue d'une action antilipémique (ce qui n'exclut pas d'autres actions plus importantes).
On connaît déjà les esters sulfuriques de polysaccharides, ayant une action thérapeutique :par exemple, les pro- duits connus sous les dénominations de "Treburon" et '"Trombostop" (esters sulfuriques de l'acide polygalacturonique) ; le "Paritol" (ester sulfurique de l'acide polymannurônique) etc... ainsi.que le sulfate de dextrane, qui est toxique, sauf pour certaines dimensions de la molécule.Cependant, de tels esters, déjà connus, ont, à côté d'une action antilipémique (c'est-à- dire une action qui abaisse la teneur en graisse, ou qui émulsifie les grais- ses du plasma sanguin) une action, par-dessus tout, angicoagulante.
L'impor- tance des composés obtenus par le procédé faisant l'objet de la présente invention est due au fait que, bien qu'ils montrent une action antilipémique importante, ils ne sont ni toxiques, ni anticoagulants, de sorte qu'ils conviennent à la thérapie de l'artériosclérose où il est justement très im- portant qu'il n'y ait pas de risque, en raison de l'absence d'action anti- coagulante (c'est-à-dire, absence d'une influence pratique quelconque sur le temps de coagulation), alors 'que les anticoagulants ne peuvent, en raison du danger qu'ils représentent, être employés en thérapeutique comme agents antilipémiques, même s'ils présentent par eux-mêmes une action antilipémique.
On note, en particulier, deux actions physioligiques des produits obtenus par le procédé de la présente invention. L'une se manifeste par une augmentation du taux de migration des lipoprotéines supérieures (c'est-à-dire de celles ayant un poids moléculaire supérieur) ; on a contrôlé cette action par élec- trophorèse sur papier. L'autre se manifeste par une clarification du plas- ma lipémique. On représente un exemple d'une telle clarification dans le diagramme du dessin annexé où l'on donne des courbes de clarification, obte- nues sur le plasma d'un chien auquel on a administré les produits obtenus par le procédé de l'invention, 3 heures après un repas de 'graisse, par injec- tion intraveineuse (courbe 1) et par injection intramusculaire (courbe2).
On indique, en ordonnées les pourcentages de transmission, lus à # = 700m au spectrophotomètre de Beckman, et en abscisses les temps en minutes à par- tir de l'injection desdits produits.Ce diagramme est traduit par le tableau suivant (la colonne de gauche donne pour chaque courbe les valeurs, rappor- tées à un échantillon d'eau auquel on attribue un coefficient de transmis- sion T de 100 pour un rayon de lumière monochromatique).
<Desc/Clms Page number 2>
EMI2.1
<tb>
Courbe <SEP> 1 <SEP> Courbe <SEP> 2
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> T <SEP> % <SEP> temps <SEP> (minutes) <SEP> T <SEP> % <SEP> temps <SEP> (minutes). <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
43 <SEP> 0 <SEP> 5 <SEP> 0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 90 <SEP> 30 <SEP> 13 <SEP> 30
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 94 <SEP> 60 <SEP> 21 <SEP> 60
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 84 <SEP> 90 <SEP> 60 <SEP> 90
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 67 <SEP> 120 <SEP> 75 <SEP> 120
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 30 <SEP> 150 <SEP> 78 <SEP> 150
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> : <SEP> 75 <SEP> 180
<tb>
On peut résumer comme suit le procédé faisant l'objet de la présente invention :
On purifie d'abord le dextrane à l'alcool et l'acétone et on le rend plus réactif par traitement à la pyridine anhydre, ou on le traite par de l'ammoniaque et du potassium.
Après séchage, on le met en suspension dans de la pyridine anhydre et on traite à basse température (entre-22 et -15 C) par'de l'oxychlorure de phosphore, en quantité de 20 à 40 % supérieure à la quantité stoechiométrique. Il est indispensable d'ajouter le réactif lente- ment et d'agiter vigoureusement la suspension de dextrane dans de la pyridi- ne, car il est important (pour la formation de liaisons intérieures particu- lières d'estérification) qu'une petite quantité de réactif soit en contact avec une grande quantité de la matière à estérifier. On agite alors la sus- pension chaude (à 38 C) pendant 20 heures, puis on la refroidit de nouveau (, -40 C) et on forme le sel de sodium de l'ester par traitement à la soude tout en maintenant la température entre-15 et -5 C.
On sépare la couche la plus épaisse et on la pulvérise, s'il y a lieu, au désintégrateur, puis on précipite le sel de sodium de l'ester phosphorique de dextrane par l'alcool éthylique. On redissout le précipité dans de l'eau, on le purifie par dia- lyse, on le concentre, on le reprécipite à l'alcool éthylique, et on le sè- che. Il est important de maintenir la température entre -22 et -15 C pendant l'addition de POCl., ainsi que de maintenir le bain exactement à 38 C pen- dant les 20 heures pendant lesquelles se fait l'estérification. Il est aus- si indispensable de maintenir la température entre -15 et -5 C pendant l'ad- dition de NaOH ayant pour but d'amener à un pH neutre.
Il est possible d'utiliser, au lieu d'oxychlorure de phosphore, des quantités correspondantes de P2O et d'acide phosphorique..Dans ce cas, le dextrane purifié et activé est mis en aispension dans de la pyridine anhy- dre contenant en solution du P2O5, puis on ajoute, goutte à goutte, de l'aci- de phosphorique, à environ 0 C, on maintient la masse d'abord à température ambiante pendant environ une heure et ensuite au chaud (à environ 40 C pen- dant environ 45 heures. Après refroidissement à 0 C, on amène le pH à 7-7,5 par NaOH, et on sépare le produit comme dans le premier cas.
Le traitement de déshydratation des esters dans un désintégra- teur (désintégrateur mécanique) est nouveau, et, du point de vue technique, il permet de réduire à 1/4 le temps nécessaire pour obtenir le produit pul- vérisé, et à 50 % la consommation d'alcool.
Finalement, il est à noter que les esters libres du type décrit ci-dessus ne sont pas stables, de sorte qu'on les prépare sous forme de leurs sels, en particulier de leurs sels de sodium, comme décrit ci-dessus et dans les exemples suivants. Tous les produits obtenus conformément au procé- dé de la présente invention sont des produits nouveaux. On donne ci-après quelques exemples de préparation des esters phosphoriques de dextrane, exem- ples qui illustrent l'invention et ne sont nullement limitatifs. Dans ces exemples, les rendements sont égaux à 60 % des rendements théoriques. Les poids moléculaires des produits respectifs sont d'environ 60.000, sauf spécifica-
<Desc/Clms Page number 3>
tion particulière.
EXEMPLE 1.
On met en suspension 40 g de dextrane dans 50 cm3 d'alcool éthy- lique à 99?9 %. On ajoute d'un coup 200 cm3 d'eau, et on agite mécanique- ment le mélange. Lorsque le dextrane s'est gélifié, on ajoute 500 on? d'acé- tone, et on continue l'agitation pendant 20 minuteso Après repos de 30 minu- tes, on sépare le dextrane par filtration, on le traite par 600 cm3 de pyri- dine anhydre, et on agite le mélange pendant 30 minutes. Après avoir lais- sé reposer toute la nuit, on filtre le mélange. On recommence encore deux fois le traitement, d'abord avec 400 cm , puis avec 200 cm3 de pyridine.
Ensuite on sèche le dextrane sous vide à 40 C.
Dans un flacon d'un litre, muni d'un agitateur étanche, d'un en- tonnoir permettant de verser goutte à goutte, et d'un tube rempli de CaCl2, on introduit 30 g de dextrane prétraité comme décrit ci-dessus et 300 cm3 de pyridine anhydre ; on refroidit le mélange avec de la glace sèche à une température de -22 C, et on verse lentement 40 cm de POCl3, par l'entonnoir, en un temps de 55 minutes, tout en maintenant la température entre-22 et -15 C. Lorsque l'addition est terminée, on élève la température de la solu- tion à +4 C en 10 minutes, puis ensuite à +23 C en environ 30 minutes.
On met alors le flacon dans un bain à 38 C et il atteint cette température en 15 minutes.On maintient la suspension à cette température pendant 20 heures tout en l'agitant continuellement.On enlève le bain, on refroidit de nou- veau la solution avec de la glace sèche et, toujours en agitant, on ajoute goutte à goutte une solution de NaOH à 40 % refroidie, tout en réglant cet- te addition de manière à maintenir à maintenir la température de la solu- tion entre -15 et -5 C. Après addition de 40 cm3 de NaOH, on ajoute 300 cm3 d'eau, par petites quantités, pour élever la température à 0 C. On ajoute encore delà soude jusqu'à ce que l'on ait atteint un pH de 7-7,5. On continue à agiter la masse à température ambiante pendant 60 minutes, puis on chauffe à 30-32 C, pendant 10 minutes.
Ensuite on filtre et on introduit la masse dans un entonnoir à séparation ; après enlèvement de la couche supé- rieure, on traite la couche inférieure par de l'éthanol à 99 %. Il se forme d'abord une huile, qui se transforme en une pâte ; on enlève les liqueurs- mères par décantation, et on traite de nouveau la pâte par de l'éthanol à 99 % et on l'introduit dans un désintégrateur ;elle se transforme ainsi en une poudre que l'on sépare par filtration, redissout dans une petite quan- tité d'eau et reprécipité par l'éthanolo Le précipité est redissous dans l'eau et dialysé pendant 120 heures dans de l'eau courante. On concentre alors la solution jusqu'à un faible volume, sous vide, à 40 C, et on préci- pite par l'alcool éthylique.
On sèche le précipité sous vide, à °0 Ce On obtient ainsi le sel de sodium de l'ester phosphorique de dextrane. C'est une poudre blanche inodore et insipide, qui, par chauffage, se décompose sans fondre. Par hydrolyse suivant des procédés connus, elle donne des molé- cules simples de glycose liées avec des liaisons a 1,6 et a 1,4. L'analyse donne s C= 13,5 ; H = 1,3 % ; Na = 25,9 ; P = 17,4 %, ce qui correspond à 3 groupes hydroxyle estérifiés pour chaque molécule simple.
Au lieu de purifier la matière de départ (dextrane) et la rendre plus réactive par traitement par la pyridine, comme décrit ci-dessus, on peut opérer comme suit, avec l'ammoniaque et le potassium
On dissout 38 g de dextrane dans de l'ammoniaque liquide à une température de -50 C. On ajoute, par petites quantités, 6,2 g de potassium métallique, tout en agitant la solution et en attendant, avant de faire une nouvelle addition, que la couleur bleue qui apparaît après chaque addition de potassium ait disparu. L'ammoniaque est évaporée progressivement et les dernières fractions en sont enlevées dans une étuve sous vide à 45 C9 On ef-
<Desc/Clms Page number 4>
fectue alors l'estérification comme décrit ci-dessus.
EXEMPLE 2.
Dans un flacon d'un litre, muni d'un agitateur étanche et d'un tube de CaCl2, on introduit 10 g de dextrane prétraité par la pyridine comme dans l'exemple 1, et on ajoute 200 cm de pyridine anhydre dans laquelle on a fait dissoudre 6,3 g de P2O5. On met le flacon dans un bain de glace et on ajoute goutte à goutte 1,9 cm.d'acide phosphorique de poids spécifique 1,59, en 20 minutes. On enlève alors le bain de glace et on laisse le flacon à température ambiante pendant 60 minutes.On met ensuite le flacon dans un bain chauffé à 40 C et on l'y laisse pendant 45 heures. Après refroidis- sement à 0 C, on règle le pH à 7-7,5 par de la soude, et on enlève la couche plus dense (inférieure) qu'on traite dans un désintégrateur par de l'alcool éthylique à 99 %.
On sépare par filtration la poudre obtenue, on la redis- sout dans une petite quantité d'eau, on dialyse dans l'eau courante pendant 60 heures et on reprécipite par l'alcool éthylique. On filtre le précipité et on le sèche sous vide à 600C. Ce produit a les mêmes propriétés chimiques que le produit obtenu comme décrit dans l'exemple 1.
EXEMPLE 3.
Dans un;flacon de.1000 cm3 muni d'un condenseur à reflux, on introduit 5 g de dextrane, 200 cm3 d'eau et 40 cm3 d'HCl N. Le mélange est passé au re- flux pendant 8 heures. Après refroidissement on amène la solution au pH 7 avec NaOH N et on la traite par 200 cm3 d'acétone. On centrifuge le résidu et on concentre le liquide séparé sous vide jusqu'à 75 cm3, puis on précipi- te par l'alcool éthylique ; on obtient une fraction a, dont le poids molécu- laire est entre 1000 et 20.000.
On dissout 5 g du solide séparé par centrifugation dans 100 cm3 d'eau, dans un flacon de 500 cm3 muni d'un réfrigérant à reflux, on traite par 10 on? de HC1 N et on passe au reflux pendant 12 heures. Après refroi- dissement, on amène la solution aupH 7 avec NaOH N et on traite par 100 cm d'acétone. On centrifuge le précipité, on le redissout dans une petite quantité d'eau, on reprécipite par l'alcool éthylique et on sèche sous vide on a une fraction b dont le poids moléculaire est supérieur à 60.000.
On concentre le liquide séparé par centrifugation, sous vide, jusqu'à 75 cm3 et on précipite par l'éthanol ; on obtient une fraction c, dont le poids moléculaire est entre 20. 000 et 60.000. On obtient ainsi des fractions de dextrane de poids moléculaires différents. Ceci est important, pour autant que l'actionantilipémique, la toxicité, etc.. varient avec la grandeur de la molécule. Pour des produits obtenus par le procédé de la pré- sente invention, on a trouvé que le poids moléculaire optimum est en général d'environ 20. 000.
EXEMPLE 4.
La fraction ¯a de dextrane, décomposée comme dans l'exemple 3, est soit soumise au prétraitement et à l'estérification comme décrit dans l'exemple 1, soit traitée suivant la technique de l'exemple 2. Le produit ob- tenu a les mêmes propriétés chimiques que celui de l'exemple 1. Le poids mo- léculaire est compris dans les limites indiquées pour la fraction a de l'exemple 3.
EXEMPLE 5.
La fraction b de dextrane, décomposée comme dans l'exemple 3, est traitée suivant la technique de l'exemple 4. Le produit obtenu a les mêmes propriétés chimiques que celui de l'exemple 1. Le poids moléculaire est compris danx les limites indiquées pour la fraction b de l'exemple 3.
<Desc/Clms Page number 5>
EXEMPLE 6.
La fraction de dextrane, décomposée comme dans l'exemple 3, est traitée suivant la technique de l'exemple 4. Le produit obtenu a les mêmes propriétés chimiques que celui de l'exemple 1. Le poids moléculaire est compris dans les limites indiquées pour la fraction c de l'exemple 3.
<Desc / Clms Page number 1>
The invention relates to a process for the production of new synthetic products consisting of phosphoric esters of natural or partially decomposed dextran; the compounds obtained according to the present invention correspond to the general formula
EMI1.1
in which R represents the single molecule of dextran, n = 1,2 or 3 and n '> 1.
These compounds can be in the form of salts and have varying degrees of esterification (from 1 to 3 esterified hydroxyls for each single molecule). Partially decomposed compounds have a molecular weight of between 50,000 and 60,000. (For example, referring to the above formula, for n = ¯3, is only about 9 for a molecular weight of 5000 and about 11 for a molecular weight of 60,000).
The compounds in accordance with the present invention (and those, for example the phosphoric esters of lactose, obtained in accordance with the French patent filed on February 1, 1956 by the applicant for 'Process for obtaining phosphoric esters of lactose') are the first products. synthetic which can be used therapeutically for an anti-lipemic action (which does not exclude other more important actions).
Sulfuric esters of polysaccharides, having a therapeutic action, are already known: for example, the products known under the names of "Treburon" and "Trombostop" (sulfuric esters of polygalacturonic acid); "Paritol" (sulfuric ester of polymannurônic acid) etc ... as well as dextran sulphate, which is toxic, except for certain dimensions of the molecule. However, such esters, already known, have, alongside an antilipemic action (ie an action which lowers the fat content, or which emulsifies the fat from the blood plasma) an action, above all, angicoagulant.
The importance of the compounds obtained by the process forming the subject of the present invention is due to the fact that, although they show a significant antilipemic action, they are neither toxic nor anticoagulant, so that they are suitable. to arteriosclerosis therapy where it is precisely very important that there is no risk, due to the absence of anti-coagulant action (that is to say, absence of any practical influence on the coagulation time), whereas anticoagulants cannot, because of the danger they represent, be employed in therapy as antilipemic agents, even if they themselves exhibit an antilipemic action.
In particular, two physiological actions of the products obtained by the process of the present invention are noted. One is manifested by an increased rate of migration of higher lipoproteins (i.e., those with higher molecular weight); this action was checked by electrophoresis on paper. The other is manifested by a clarification of the lipemic plasma. An example of such a clarification is shown in the diagram of the appended drawing where clarification curves are given, obtained on the plasma of a dog to which the products obtained by the process of the invention have been administered, 3 hours after a fat meal, by intravenous injection (curve 1) and by intramuscular injection (curve 2).
The percentages of transmission, read at # = 700m on a Beckman spectrophotometer, and the times in minutes from the injection of said products are indicated on the ordinate. This diagram is shown in the following table (the column of left gives for each curve the values, related to a water sample to which we attribute a transmission coefficient T of 100 for a monochromatic light ray).
<Desc / Clms Page number 2>
EMI2.1
<tb>
Curve <SEP> 1 <SEP> Curve <SEP> 2
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> T <SEP>% <SEP> time <SEP> (minutes) <SEP> T <SEP>% <SEP> time <SEP> (minutes). <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
43 <SEP> 0 <SEP> 5 <SEP> 0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 90 <SEP> 30 <SEP> 13 <SEP> 30
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 94 <SEP> 60 <SEP> 21 <SEP> 60
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 84 <SEP> 90 <SEP> 60 <SEP> 90
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 67 <SEP> 120 <SEP> 75 <SEP> 120
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 30 <SEP> 150 <SEP> 78 <SEP> 150
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>: <SEP> 75 <SEP> 180
<tb>
The method forming the subject of the present invention can be summarized as follows:
The dextran is first purified with alcohol and acetone and made more reactive by treatment with anhydrous pyridine, or treated with ammonia and potassium.
After drying, it is suspended in anhydrous pyridine and treated at low temperature (between -22 and -15 ° C.) with phosphorus oxychloride, in an amount of 20 to 40% greater than the stoichiometric amount. It is essential to add the reagent slowly and to stir the suspension of dextran in pyridine vigorously, since it is important (for the formation of particular internal esterification bonds) that only a small amount of reagent is in contact with a large amount of the material to be esterified. The hot suspension is then stirred (at 38 C) for 20 hours, then cooled again (-40 C) and the sodium salt of the ester is formed by treatment with sodium hydroxide while maintaining the temperature. between -15 and -5 C.
The thicker layer is separated and pulverized, if necessary, with a disintegrator, then the sodium salt of the phosphoric ester of dextran is precipitated with ethyl alcohol. The precipitate is dissolved in water, purified by dialysis, concentrated, reprecipitated with ethyl alcohol, and dried. It is important to maintain the temperature between -22 and -15 C during the addition of POCl., As well as to maintain the bath at exactly 38 C during the 20 hours during which the esterification is carried out. It is also essential to maintain the temperature between -15 and -5 C during the addition of NaOH in order to bring to a neutral pH.
It is possible to use, instead of phosphorus oxychloride, corresponding amounts of P2O and phosphoric acid. In this case, the purified and activated dextran is placed in aispension in anhydrous pyridine containing in solution P2O5, then phosphoric acid is added dropwise at about 0 C, the mass is kept first at room temperature for about an hour and then warm (at about 40 C for approximately 45 hours After cooling to 0 ° C., the pH is brought to 7-7.5 with NaOH, and the product is separated off as in the first case.
The dehydration treatment of esters in a disintegrator (mechanical disintegrator) is new, and, from a technical point of view, it makes it possible to reduce to 1/4 the time required to obtain the pulverized product, and to 50% the time required to obtain the pulverized product. alcohol consumption.
Finally, it should be noted that the free esters of the type described above are not stable, so that they are prepared in the form of their salts, in particular of their sodium salts, as described above and in the following examples. All the products obtained according to the process of the present invention are new products. Some examples of the preparation of phosphoric esters of dextran are given below, examples which illustrate the invention and are in no way limiting. In these examples, the yields are equal to 60% of the theoretical yields. The molecular weights of the respective products are about 60,000, unless otherwise specified.
<Desc / Clms Page number 3>
particular tion.
EXAMPLE 1.
40 g of dextran are suspended in 50 cm3 of 99.9% ethyl alcohol. 200 cc of water are added all at once, and the mixture is stirred mechanically. When the dextran has gelled, 500 oz. acetone, and stirring is continued for 20 minutes. After standing for 30 minutes, the dextran is filtered off, treated with 600 cm3 of dry pyridine, and the mixture is stirred for 30 minutes. . After allowing to stand overnight, the mixture is filtered. The treatment is repeated twice more, first with 400 cm 3, then with 200 cm 3 of pyridine.
Then the dextran is dried under vacuum at 40 ° C.
30 g of dextran pretreated as described above are introduced into a one liter flask, fitted with a leak-proof stirrer, a funnel for pouring dropwise, and a tube filled with CaCl2. 300 cm3 of anhydrous pyridine; the mixture is cooled with dry ice to a temperature of -22 C, and 40 cm of POCl3 are slowly poured through the funnel over a period of 55 minutes, while maintaining the temperature between -22 and -15 C When the addition is complete, the temperature of the solution is raised to + 4 ° C in 10 minutes, then to + 23 ° C in about 30 minutes.
The flask is then placed in a bath at 38 ° C. and it reaches this temperature in 15 minutes. The suspension is maintained at this temperature for 20 hours while stirring continuously. The bath is removed, the solution is cooled again. with dry ice and, still with stirring, a cooled 40% NaOH solution is added dropwise, while adjusting this addition so as to maintain the temperature of the solution between -15 and - 5 C. After addition of 40 cm3 of NaOH, 300 cm3 of water are added, in small quantities, to raise the temperature to 0 C. Soda is added further until a pH of 7 has been reached. -7.5. The mass is continued to be stirred at room temperature for 60 minutes, then the mixture is heated to 30-32 C for 10 minutes.
Then filtered and the mass is introduced into a separating funnel; after removing the top layer, the bottom layer is treated with 99% ethanol. First, an oil is formed, which turns into a paste; the mother liquors are removed by decantation, and the paste is again treated with 99% ethanol and introduced into a disintegrator; it is thus transformed into a powder which is separated by filtration, redissolved in a small amount of water and reprecipitated with ethanolo. The precipitate is redissolved in water and dialyzed for 120 hours in running water. The solution is then concentrated to a small volume, under vacuum, at 40 ° C., and the precipitation is carried out with ethyl alcohol.
The precipitate is dried under vacuum at ° 0 ° C. This gives the sodium salt of dextran phosphoric ester. It is an odorless and tasteless white powder, which, on heating, decomposes without melting. Upon hydrolysis according to known methods, it gives single glycose molecules linked with α 1,6 and α 1,4 bonds. Analysis gives s C = 13.5; H = 1.3%; Na = 25.9; P = 17.4%, which corresponds to 3 esterified hydroxyl groups for each single molecule.
Instead of purifying the starting material (dextran) and making it more reactive by treatment with pyridine, as described above, one can operate as follows, with ammonia and potassium
38 g of dextran are dissolved in liquid ammonia at a temperature of -50 C. 6.2 g of metallic potassium are added in small amounts, while stirring the solution and while waiting, before making a new addition , that the blue color that appears after each addition of potassium has disappeared. The ammonia is gradually evaporated and the last fractions are removed in a vacuum oven at 45 C9.
<Desc / Clms Page number 4>
then perform the esterification as described above.
EXAMPLE 2.
10 g of dextran pretreated with pyridine as in Example 1, and 200 cm of anhydrous pyridine in which one adds 200 cm of anhydrous pyridine, is introduced into a one liter flask fitted with a sealed stirrer and a CaCl 2 tube. dissolved 6.3 g of P2O5. The flask is placed in an ice bath and 1.9 cm. Of phosphoric acid of specific gravity 1.59 are added dropwise over 20 minutes. The ice bath is then removed and the vial is left at room temperature for 60 minutes. The vial is then placed in a bath heated to 40 C and left there for 45 hours. After cooling to 0 ° C., the pH is adjusted to 7-7.5 with sodium hydroxide, and the denser (lower) layer is removed and treated in a disintegrator with 99% ethyl alcohol.
The powder obtained is filtered off, redissolved in a small amount of water, dialyzed in running water for 60 hours and reprecipitated with ethyl alcohol. The precipitate is filtered off and dried under vacuum at 600C. This product has the same chemical properties as the product obtained as described in Example 1.
EXAMPLE 3.
In a 1000 cm3 flask fitted with a reflux condenser, are introduced 5 g of dextran, 200 cm3 of water and 40 cm3 of N HCl. The mixture is refluxed for 8 hours. After cooling, the solution is brought to pH 7 with N NaOH and treated with 200 cm3 of acetone. The residue is centrifuged and the separated liquid is concentrated in vacuo to 75 cm 3, followed by precipitation with ethyl alcohol; an a fraction is obtained, the molecular weight of which is between 1000 and 20,000.
5 g of the solid separated by centrifugation are dissolved in 100 cm3 of water, in a 500 cm3 flask fitted with a reflux condenser, treated with 10 ounces? of HCl N and refluxing for 12 hours. After cooling, the solution is brought to pH 7 with N NaOH and treated with 100 cm 3 of acetone. The precipitate is centrifuged, it is redissolved in a small quantity of water, it is reprecipitated with ethyl alcohol and it is dried in vacuo to give a fraction b whose molecular weight is greater than 60,000.
The separated liquid is concentrated by centrifugation, under vacuum, to 75 cm3 and precipitated with ethanol; a fraction c is obtained, the molecular weight of which is between 20,000 and 60,000. This gives dextran fractions of different molecular weights. This is important, as the antilipemic action, toxicity, etc. vary with the size of the molecule. For products obtained by the process of the present invention, it has been found that the optimum molecular weight is generally about 20,000.
EXAMPLE 4.
The dextran fraction ¯a, decomposed as in Example 3, is either subjected to pretreatment and esterification as described in Example 1, or treated according to the technique of Example 2. The product obtained has the same chemical properties as that of Example 1. The molecular weight is within the limits given for fraction a of Example 3.
EXAMPLE 5.
The dextran fraction b, decomposed as in Example 3, is treated according to the technique of Example 4. The product obtained has the same chemical properties as that of Example 1. The molecular weight is included within the limits indicated. for fraction b of Example 3.
<Desc / Clms Page number 5>
EXAMPLE 6.
The dextran fraction, decomposed as in Example 3, is treated according to the technique of Example 4. The product obtained has the same chemical properties as that of Example 1. The molecular weight is within the limits indicated for fraction c of Example 3.