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M. von LILLIENSKIOLD, résidant à DORMAGEN Rheinland (Allemagne).
PERFECTIONNEMENT AU PROCEDE DE PREPARATION DE PRODUITS DE DECOMPOSITION DE
LA DEXTRANE.
L'invention concerne un procédé de préparation de la dextrane d'un poids moléculaire compris entre 104 et 4 x 105, à usage pharmaceutique, en particulier sous forme dissoute pour injections, telle qu'on l'obtient par fermentation de solutions de sucres et hydrolyse des solutions de dextrane obtenues.
Pour obtenir, à partir de la dextrane, un produit facile à dis- soudre et pouvant servir en particulier sous forme d'injections intra-vei- neuses, il est nécessaire de la dépolymériser partiellement. Ce résultat peut être obtenu de diverses manières, par exemple par hydrolyse acide (voir Sta- cey & Yound, Bioohem, Journal 32, 1943-1945, (1938) et le brevet américain n 2.565.507) par hydrolyse alcaline (voir le brevet allemand n 836.704) et par décomposition enzymatique (voir le brevet allemand n 837. 007, le brevet français n 1.015.147 et le brevet autrichien n 172.062).
De plus, il est nécessaire d'obtenir à partir de l'hydrolyse mo- léculairement dispersée des molécules d'une grosseur telle qu'elles ne pas- sent pas trop vite dans le rein, ni, en raison de leur poids moléculaire trop élevé, donnent lieu à des manifestations secondaires indésirables, tel- les qu'un accroissement de dépression sanguine et une accumulation. De pré- férence, les poids moléculaires considérés comme satisfaisants sont compris entre 25. 000 et 200.000.
Or, un procédé universellement connu permet de séparer les corps de poids moléculaire élevé, polydispersés au moyen d'un mélange d'un solvant et d'un agent non solvant en deux fractions de poids moléculaires différents, dont la moins soluble a le poids moléculaire le plus élevé.
Les principes théoriques de cette précipitation fractionnée ont été étudiés par G. V. Schulz (voir Journal Phys. Chem. A, 179. 321-355 (1937).
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Ce procédé a été appliqué plus tard par H.J. Staudinger au glycogène (voir Makromal, Chemie 2,89 (1948) et par Schoch aux amidons (voir Journal Am.
Chem. Soc. 64., 2957-2961, (1942). Une dissertation de G.Swift, Birmingham, 1946, pages 93-94, donne pour la première fois la description d'un procédé de fractionnement de la dextrane par l'alcool. Ce procédé a été appliqué en- suite dans la technique, et le fractionnement par l'acétone a été décrit par exemple dans le brevet américain n 2. 565.507 et principalement par l'al- cool dans le brevet suisse n 282.873, dans le brevet anglais n 673.103, dans le brevet français n 1.015.148 et dans le brevet autrichien n 172.943.
La précipitation fractionnée de la dextrane donne lieu à la for- mation de deux phases liquides, dont la séparation par décantation ou siphon- nage dure plusieurs jours.
Suivant l'invention, on accélère notablement le traitement de la dextrane décomposée en n'effectuant pas la séparation des phases liquides de poids spécifiques différents par l'action de la pesanteur, mais en l'ef- fectuant au moyen de séparateurs, lorsqu'il s'agit de quantités importan- tes, on emploie des séparateurs diviseurs et pour les petites quantités, des séparateurs décanteurs. Dans certains cas, il convient de faire passer l'ef- fluent du séparateur diviseur dans un séparateur décanteur.
Pour gagner du temps, il est avantageux d'employer une combinai- son des deux séparateurs, en ne conservant pas le faible débit de passage ordinaire dans le séparateur diviseur, mais en rendant légèrement trouble la phase légère par une circulation plus rapide et en faisant disparaître ce trouble dans un séparateur décanteur. Les traces de la phase lourde res- tant alors dans le tambour du séparateur décanteur et peuvent être réunies à l'effluent sortant à la partie inférieure du séparateur diviseur ou mieux, introduites dans un nouveau mélange à fractionner. On sépare ainsi des fractions de poids moléculaire intermédiaire qu'on désire obtenir, non seu- lement les fractions de poids moléculaire trop faible, mais encore les frac- tions de poids moléculaire trop élevé.
Dans l'un des cas, on utilise direc- tement les fractions lourdes et dans l'autre, les fractions légères, tan- dis qu'on fait subir de nouveau à la phase inutilisable l'opération de pré- paration. En choisissant une cloison de séparation appropriée dans le sépa- rateur, on peut obtenir la couche supérieure ou la couche inférieure indé- pendamment l'une de l'autre.
L'agent non solvant peut être ajouté à la solution aqueuse de dextrane à la température ambiante et la centrifugation peut s'effectuer à cette température. Mais, de préférence, on précipite d'abord partiellement la solution aqueuse à la température ambiante par l'addition de l'agent non solvant, on la chauffe jusqu'à ce qu'elle soit de nouveau dissoute, et elle ne subit la centrifugation qu'une fois refroidie. On peut aussi ajouter l'a- gent non solvant à chaud, et refroidir la solution ensuite. En principe, la centrifugation peut s'effectuer à n'importe qu'elle température inférieure au point de séparation d'une phase liquide du mélange de solvants, cepen- dant, la température ambiante est la plus avantageuse, étant donné qu'il est avantageux d'effectuer la centrifugation à température constante.
On peut accélérer la vitesse de refroidissement par un refroidissement artificiel et, par suite, effectuer la centrifugation peu de temps après avoir ajouté l'agent non solvant.
L'invention concerne les applications industrielles ainsi que les applications pharmaceutiques,,en particulier sous forme dissoute de la dextrane convenant aux injections, d'un poids moléculaire compris entre 104 et 4 x 105 et préparée par fermentation de solutions de sucres et par hydrolyse acide de la solution de dextrane obtenue.
Suivant l'invention, on prépare ces solutions en séparant la dextrane brute obtenue par fermentation de solutions de sucre et par préci- pitation par l'alcool des solutions fermentées, en la broyant en particules très fines, en la faisant gonfler par l'acide chlorhydrique, de préférence
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de 1 à 10 % ou par une solution d'eau oxygénée de préférence à 0,15 % et en hydrolysant les gels ainsi obtenus par addition d'eau et chauffage. La décomposition par l'eau oxygénée s'effectue extrêmement vite à une tempé - rature comprise entre 40 et 90 C et la vitesse de décomposition augmente avec la température. Cependant, on ne dépasse pas de préférence la tempé- rature d'ébullition du liquide pour empêcher la dextrane de se colorer par caramélisation.
De plus, il convient de maintenir le pH de la solution à une valeur égale à 7, par exemple en ajoutant des alcalis ou sels alcalins pour neutraliser les acides qui se forment, par exemple l'anhydride carbo- nique. On surveille d'une manière continue, en déterminant la viscosité, la décomposition de la molécule, de même que par les procédés de décomposi- tion connus par l'acide chlorhydrique. Dès qu'on a obtenu la viscosité qu'on désire, on peut empêcher la décomposition de continuer par addition d'agents réducteurs, par exemple de glycose ou d'acide ascorbique.
Puis on fractionne le produit de l'hydrolyse.
Pour préparer la matière première, on ajoute d'une manière con- nue à des solutions de sucres bruts, par exemple à 12 %, des sels nutritifs et on les ensemence avec des bactéries appropriées, par exemple une culture pure de Leuconostoc mésentéroides et on les fait fermenter pendant trois jours, par exemple à 25 C. On précipite par l'alcool la dextrane brute ain- si formée, on lave le précipité par l'alcool pour ledéshydrater dans la plus large mesure, on le broie, on le sèche et on le broie encore une fois en particules extrêmement fines.
EXEMPLE 1.-
On ajoute à 82 litres d'une solution de dextrane à 8 % obtenue en dissolvant la dextrane brute dans HCl à 0,056 N, d'une viscosité rela- tive = 2,96, à une concentration = 3,63 %, 60 litres d'alcool à 93 %. La solution se trouble à 48 C On la refroidit pendant 45 minutes en l'agi- tant avec de l'eau, et on lui fait subir une centrifugation = à 18 C, à une vitesse de 60 litres par heure. La viscosité relative de la dextrane contenue dans la phase légère est égale à 4,33 à une concentration de 5,96 % en solution aqueuse, tandis que la viscosité relative de la frac- tion de poids moléculaire élevé = 9,14 avec un résidu de 6,01 %.
EXEMPLE 2.-
On fait subir à une solution de dextrane à 5 % d'une viscosité relative = 8,8, l'action de dextranase du Celvibric fulva jusqu'à ce que la valeur ait diminué à 4,1 puis on la chauffe à 6l C, on ajoute de l'al- cool, jusqu'à ce qu'elle se trouble légèrement on la chauffe jusqu'à ce que le trouble ait disparu et on la refroidit à la température ambiante.
On sépare les deux phases ainsi obtenues dans un séparateur du type Laval.
La vitesse de passage étant de 60 litres à l'heure,la phase légère ne comporte pas de gouttelettes en suspension. En la précipitant par un excès d'alcool, on obtient un précipité d'une viscosité relative = 2,6 à une con- centration = 5,9 %.
EXEMPLE 3.-
On chauffe une solution de dextrane en grande partie de faible poids moléculaire dans l'alcool aqueux qu'on a obtenu en séparant la dex- trane de faible poids moléculaire, par fractionnement, de solutions de dextrane polydispersées dissoutes dans HCl, jusqu'au point d'ébullition et on y ajoute de l'alcool jusqu'à ce qu'elle se trouble légèrement. Après re- froidissement, il ne se forme qu'une faible quantité de la phase lourde. On fait passer le mélange simplement dans un séparateur-décanteur et on ob- tient un effluent limpide, d'une viscosité relative = le 42 seulement à une concentration de 6,04 %. La viscosité relative de la phase qui reste dans le tambour = 2,51 à une concentration de 5,90 %.
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EXEMPLE 4.-
On ajoute à chaud de l'alcool à une solution de dextrane obtenue par dissolution dans l'acide chlorhydrique, d'une viscosité relative = 3,61 avec un résidu de 5,97 % et qu'on avait débarrassée par fractionnement an- térieur de la majeure partie des hauts polymères, jusqu'à ce qu'un faible trouble commence à apparaître à 80 C. Après refroidissement, on sépare la solution à l'aide d'un séparateur. La viscosité relative de la phase lour- de, après élimination de l'alcool, est égale à 5,86 à une concentration de 5,95 %. On fait subir une nouvelle centrifugation à la phase légère pour la rendre limpide et sa viscosité relative en solution aqueuse est égale à 2,48 avec un résidu de 6,23 %.
EXEMPLE 5. -
On continue à décomposer par hydrolyse par l'acide chlorhydrique une fraction de dextrane de poids moléculaire trop élevé. On ajoute à la so- lution à 7 % d'une viscosité relative de 3,63 à une concentration de 5,68 %, une quantité d'alcool suffisante pour que le mélange commence à se troubler à 40 C. Après avoir refroidi le mélange à la température ambiante, on le sépare dans un séparateur-diviseur. La phase légère n'est pas encore abso- lument limpide et on la rend limpide à deux reprises au moyen d'un sépara- teur-décanteur. La viscosité de la dextrane contenue dans la phase lourde est égale à 6,73 à une concentration de 5,79 % tandis que celle de la dextra- ne de la phase légère est égale à 3,54 à une concentration de 5,99 %.
EXEMPLE 6. -
On hydrolyse pendant 50 minutes à 84 C une solution de dextrane d'une viscosité relative = 8,91 à une concentration de 6,0 % dans une solu- tion de HC1 à 0,34 %. La viscosité de la solution une fois neutralisée = 4,55 à une concentration de 5,75 % et on y ajoute à une concentration de 7 Bx mesurée au moyen d'un réfractomètre, une quantité d'alcool suffisante pour faire apparaître un trouble à 49 C. On la refroidit à 13 C et on la sépare en deux phases dans un séparateur-diviseur. La couche la plus légè- re peut être rendue complètement limpide par une seconde opération et con- tient de la dextrane d'une viscosité relative de 3,01 à une concentration de 5,95 %, tandis que la viscosité relative de la dextrane de la couche in- férieure est égale à 6,25 à une concentration de 5,85.
EXEMPLE 7 . -
On fait bouillir pendant 7 heures une dextrane de viscosité relative = 8,15 à une concentration de 5,9 % dans une solution de NaOH à 10 % jusqu'à ce que la viscosité de la dextrane ait diminué à 5,3 à une concentration de 5,76 %. Puis on la neutralise et on la précipite dans l'alcoolOn ajoute à une solution à 8 % de cette dextrane d'une viscosité relative = 5,30 avec un résidu de 5,76 % et à une température de 56 C, une quantité d'alcool suffisante pour faire apparaître un trouble intense. De ce fait, la température s'est abaissée à 49 C.
On lui fait prendre en l'a- gitant et en la refroidissant une température de 19 C Puis on la sépare en deux phases au moyen d'un séparateur-diviseur et on resépare à deux reprises la phase légère qui contient les molécules de grosseur convenant aux applications pharmaceutiques au moyen d'un séparateur-décanteur. La viscosité relative de la dextrane de la couche légère = 2,46 dans l'eau à une concentration de 5,76 % et celle de la dextrane de la couche lourde = 8,75 à une concentration de 5,98 %.
EXEMPLE 8.-
On décompose la dextrane brute par chauffage dans une solution d'eau oxygénée à 0,15 % à une viscosité relative = 2,85 à une concentra- tion de 3,23 %. On ajoute à la solution à 59 C en agitant une quantité d'alcool suffisante pour faire apparaître un trouble très intense et pour faire descendre la température à 51 C. On la chauffe jusqu'à ce que le
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trouble disparaisse, et après refroidissement à la température ambiante on la sépare au moyen d'un séparateur et on rend la phase légère complètement limpide par une seconde opération. La viscosité relative de la dextrane con- tenue dans cette phase = 2,63 en solution aqueuse à une concentration de 6,03 %, tandis que la viscosité de la phase lourde = 8,91 à une concentra- tion de 6,00 %.
EXEMPLE 9.-
On dissout dans l'eau à la température ambiante 21,47 kg de dex- trane brute contenant 92,33 % de substance sèche = 19,83 kg de dextrane sè- che dans 350 litres d'eau et on y ajoute 1, 275 % H2O2, proportion calcu- lée d'après celle de la dextrane sèche. On élève la température à 60 C en 40 minutes et on maintient la solution à cette température.
La solution ini- tiale titre 5,0 Bx, son pH = 7 et sa viscosité relative est de :
EMI5.1
<tb> Au <SEP> bout <SEP> de <SEP> 120 <SEP> minutes <SEP> 14,6
<tb>
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> 180 <SEP> " <SEP> 10,4
<tb>
<tb>
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<tb>
<tb>
<tb> 0 <SEP> il <SEP> 300 <SEP> " <SEP> 4, <SEP> 65 <SEP>
<tb>
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> 360 <SEP> " <SEP> 3,90
<tb>
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> 420 <SEP> " <SEP> 3,38
<tb>
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> 480 <SEP> " <SEP> 2,76
<tb>
L'eau oxygénée est consommée entotalité; on règle le pH de la solution à une valeur = 7 au moyen de NaOH et on la fait bouillir EXEMPLE 10. -
On dissout à 20 C 24,17 kg de dextrane brute = 21,75 kg de dex- trane sèche dans 450 litres d'eau.
On ajoute 1,3 H2O2, on élève la tempe- rature à 80 C et on maintient la solution à cette température à un pH = 7.
Sa viscosité relative est égale à :
EMI5.2
<tb> Au <SEP> bout <SEP> de <SEP> 90 <SEP> minutes <SEP> 10,9
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> 120 <SEP> " <SEP> 6,86
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> 120 <SEP> " <SEP> 5,40
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> 170 <SEP> " <SEP> 4,72
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<tb> " <SEP> " <SEP> 190 <SEP> " <SEP> 4,02
<tb>
On interrompt la décomposition oxydante par l'addition de 500g de glucose. On règle son pH à une valeur = 7 au moyen de Na2CO3 et on fait bouillir la solution.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.
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Mr. von LILLIENSKIOLD, residing in DORMAGEN Rheinland (Germany).
IMPROVEMENT OF THE PROCESS FOR THE PREPARATION OF DECOMPOSITION PRODUCTS
DEXTRANE.
The invention relates to a process for preparing dextran with a molecular weight of between 104 and 4 x 105, for pharmaceutical use, in particular in dissolved form for injections, as obtained by fermentation of solutions of sugars and hydrolysis of the dextran solutions obtained.
To obtain, from dextran, a product which is easy to dissolve and which can be used in particular in the form of intravenous injections, it is necessary to partially depolymerize it. This result can be achieved in various ways, for example by acid hydrolysis (see Sta- cey & Yound, Bioohem, Journal 32, 1943-1945, (1938) and U.S. Patent No. 2,565,507) by alkaline hydrolysis (see patent German Patent No. 836,704) and by enzymatic decomposition (see German Patent No. 837,007, French Patent No. 1,015,147 and Austrian Patent No. 172,062).
In addition, it is necessary to obtain from molecularly dispersed hydrolysis molecules of a size such that they do not pass too quickly in the kidney, nor, due to their molecular weight too high. , give rise to unwanted side effects, such as increased blood pressure and accumulation. Preferably, the molecular weights considered satisfactory are between 25,000 and 200,000.
However, a universally known process makes it possible to separate the high molecular weight bodies, polydispersed by means of a mixture of a solvent and a non-solvent agent into two fractions of different molecular weights, of which the less soluble has the molecular weight. The highest.
The theoretical principles of this fractional precipitation have been studied by G. V. Schulz (see Journal Phys. Chem. A, 179. 321-355 (1937).
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This method was later applied by H.J. Staudinger to glycogen (see Makromal, Chemie 2.89 (1948) and by Schoch to starches (see Journal Am.
Chem. Soc. 64., 2957-2961, (1942). A dissertation by G. Swift, Birmingham, 1946, pages 93-94, gives for the first time the description of a process for the fractionation of dextran by alcohol. This process has subsequently been applied in the art, and acetone fractionation has been described, for example, in US Pat. No. 2,565,507 and mainly by alcohol in Swiss Pat. No. 282,873, in US Pat. English No. 673,103, in French patent No. 1,015,148 and in Austrian patent No. 172,943.
The fractional precipitation of dextran gives rise to the formation of two liquid phases, the separation of which by settling or siphoning lasts several days.
According to the invention, the treatment of the decomposed dextran is notably accelerated by not effecting the separation of the liquid phases of different specific weight by the action of gravity, but by effecting it by means of separators, when these are large quantities, dividing separators and for small quantities, settling separators. In some cases, it is appropriate to pass the effluent from the divider to a decanter separator.
In order to save time, it is advantageous to employ a combination of the two separators, not keeping the ordinary low flow rate in the dividing separator, but making the light phase slightly cloudy by a more rapid circulation and making disappear this cloudiness in a separator settling tank. The traces of the heavy phase then remaining in the drum of the settling separator and can be combined with the effluent leaving the lower part of the separating separator or better, introduced into a new mixture to be fractionated. Fractions of intermediate molecular weight are thus separated which it is desired to obtain, not only fractions of too low molecular weight, but also of fractions of too high molecular weight.
In one case the heavy fractions are used directly and in the other the light fractions are used, while the preparation phase is again subjected to the unusable phase. By choosing a suitable partition wall in the separator, the top layer or the bottom layer can be achieved independently of each other.
The non-solvent agent can be added to the aqueous solution of dextran at room temperature and centrifugation can be carried out at this temperature. But preferably, the aqueous solution is first partially precipitated at room temperature by the addition of the non-solvent agent, heated until it is again dissolved, and it is not subjected to centrifugation. that once cooled. The non-solvent can also be added while hot, and the solution then cooled. In principle, the centrifugation can be carried out at any temperature below the point of separation of a liquid phase from the mixture of solvents, however, room temperature is most advantageous, since it is possible. advantageous to perform the centrifugation at constant temperature.
The cooling rate can be accelerated by artificial cooling, and hence centrifugation can be carried out shortly after adding the non-solvent agent.
The invention relates to industrial applications as well as pharmaceutical applications, in particular in the dissolved form of dextran suitable for injections, with a molecular weight between 104 and 4 x 105 and prepared by fermentation of sugar solutions and by acid hydrolysis. of the dextran solution obtained.
According to the invention, these solutions are prepared by separating the crude dextran obtained by fermentation of sugar solutions and by precipitation with alcohol from the fermented solutions, by grinding it into very fine particles, by making it swell with acid. hydrochloric, preferably
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from 1 to 10% or with a solution of hydrogen peroxide, preferably at 0.15%, and by hydrolyzing the gels thus obtained by adding water and heating. Decomposition by hydrogen peroxide takes place extremely quickly at a temperature between 40 and 90 C and the rate of decomposition increases with temperature. However, the boiling temperature of the liquid is preferably not exceeded to prevent the dextran from becoming colored by caramelization.
In addition, the pH of the solution should be maintained at a value of 7, for example by adding alkalis or alkali salts to neutralize the acids which form, for example carbon dioxide. The decomposition of the molecule is monitored continuously, determining viscosity, as well as by known hydrochloric acid decomposition methods. Once the desired viscosity has been obtained, decomposition can be prevented from continuing by the addition of reducing agents, for example glycose or ascorbic acid.
The hydrolysis product is then fractionated.
To prepare the raw material, nutrient salts are added to solutions of crude sugars, for example 12%, in a known manner and seeded with suitable bacteria, for example a pure culture of Leuconostoc mesenteroids and ferment them for three days, for example at 25 C. The crude dextran thus formed is precipitated with alcohol, the precipitate is washed with alcohol in order to dehydrate it to the greatest extent, it is ground and dried. and it is crushed again into extremely fine particles.
EXAMPLE 1.-
To 82 liters of an 8% dextran solution obtained by dissolving crude dextran in HCl at 0.056 N, of a relative viscosity = 2.96, at a concentration = 3.63%, is added 60 liters of 93% alcohol. The solution becomes cloudy at 48 ° C. It is cooled for 45 minutes with stirring with water, and it is subjected to centrifugation = at 18 ° C., at a speed of 60 liters per hour. The relative viscosity of the dextran contained in the light phase is 4.33 at a concentration of 5.96% in aqueous solution, while the relative viscosity of the high molecular weight fraction = 9.14 with a residue by 6.01%.
EXAMPLE 2.-
A 5% dextran solution with a relative viscosity = 8.8 is subjected to the dextranase action of Celvibric fulva until the value has decreased to 4.1 then it is heated to 6l C, Alcohol is added until slightly cloudy, heated until cloudiness has disappeared and cooled to room temperature.
The two phases thus obtained are separated in a separator of the Laval type.
As the flow rate is 60 liters per hour, the light phase does not contain any droplets in suspension. By precipitating it with an excess of alcohol, a precipitate is obtained with a relative viscosity = 2.6 at a concentration = 5.9%.
EXAMPLE 3.-
A solution of largely low molecular weight dextran in aqueous alcohol obtained by separating low molecular weight dextran, by fractionation, from polydisperse dextran solutions dissolved in HCl, is heated to the point boiling and alcohol is added until it becomes slightly cloudy. After cooling, only a small amount of the heavy phase is formed. The mixture is simply passed through a separator-settler and a clear effluent is obtained, of relative viscosity = 42 only at a concentration of 6.04%. The relative viscosity of the phase which remains in the drum = 2.51 at a concentration of 5.90%.
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EXAMPLE 4.-
Alcohol is added hot to a dextran solution obtained by dissolving in hydrochloric acid, of a relative viscosity = 3.61 with a residue of 5.97% and which had been freed by previous fractionation. most of the high polymers, until a slight cloudiness begins to appear at 80 ° C. After cooling, the solution is separated using a separator. The relative viscosity of the heavy phase, after removal of the alcohol, is 5.86 at a concentration of 5.95%. The light phase is centrifuged again to make it clear and its relative viscosity in aqueous solution is 2.48 with a residue of 6.23%.
EXAMPLE 5. -
A dextran fraction of excessively high molecular weight is decomposed by hydrolysis with hydrochloric acid. Sufficient alcohol is added to the 7% solution having a relative viscosity of 3.63 at a concentration of 5.68% so that the mixture begins to cloud at 40 C. After cooling the mixture. mixed at room temperature, separated in a separator-divider. The light phase is not yet absolutely clear and is made clear twice by means of a separator-settler. The viscosity of the dextran contained in the heavy phase is equal to 6.73 at a concentration of 5.79% while that of the dextran of the light phase is equal to 3.54 at a concentration of 5.99%. .
EXAMPLE 6. -
A dextran solution with a relative viscosity = 8.91 at a concentration of 6.0% in a solution of HCl at 0.34% is hydrolyzed for 50 minutes at 84 ° C.. The viscosity of the solution once neutralized = 4.55 at a concentration of 5.75% and one adds to it at a concentration of 7 Bx measured by means of a refractometer, a quantity of alcohol sufficient to reveal a cloudiness at 49 C. It is cooled to 13 C and separated into two phases in a separator-divider. The lightest layer can be made completely clear by a second operation and contains dextran of a relative viscosity of 3.01 at a concentration of 5.95%, while the relative viscosity of dextran of the lower layer is 6.25 at a concentration of 5.85.
EXAMPLE 7. -
A dextran of relative viscosity = 8.15 at a concentration of 5.9% in 10% NaOH solution is boiled for 7 hours until the viscosity of the dextran has decreased to 5.3 at a concentration. 5.76%. Then it is neutralized and precipitated in alcohol. To an 8% solution of this dextran with a relative viscosity = 5.30 with a residue of 5.76% and at a temperature of 56 C, an amount of alcohol sufficient to cause intense cloudiness to appear. As a result, the temperature dropped to 49 C.
It is made to take by stirring and cooling it to a temperature of 19 ° C. Then it is separated into two phases by means of a separator-divider and the light phase which contains the molecules of suitable size is re-separated twice. for pharmaceutical applications using a separator-settler. The relative viscosity of the dextran of the light layer = 2.46 in water at a concentration of 5.76% and that of the dextran of the heavy layer = 8.75 at a concentration of 5.98%.
EXAMPLE 8.-
The crude dextran is decomposed by heating in 0.15% hydrogen peroxide solution at a relative viscosity = 2.85 at a concentration of 3.23%. Sufficient alcohol is added to the solution at 59 ° C. while stirring to cause a very intense cloudiness to appear and to bring the temperature down to 51 C. It is heated until
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The cloudiness disappears, and after cooling to room temperature it is separated by means of a separator and the light phase is made completely clear by a second operation. The relative viscosity of the dextran contained in this phase = 2.63 in aqueous solution at a concentration of 6.03%, while the viscosity of the heavy phase = 8.91 at a concentration of 6.00% .
EXAMPLE 9.-
21.47 kg of crude dextran containing 92.33% dry substance = 19.83 kg of dry dextran in 350 liters of water are dissolved in water at room temperature and 1.275 are added thereto. % H2O2, proportion calculated from that of dry dextran. The temperature is raised to 60 ° C. over 40 minutes and the solution is maintained at this temperature.
The initial solution has a titre of 5.0 Bx, its pH = 7 and its relative viscosity is:
EMI5.1
<tb> At <SEP> end <SEP> of <SEP> 120 <SEP> minutes <SEP> 14.6
<tb>
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<tb> "<SEP>" <SEP> 180 <SEP> "<SEP> 10.4
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<tb> "<SEP>" <SEP> 480 <SEP> "<SEP> 2.76
<tb>
The hydrogen peroxide is consumed entirely; the pH of the solution is adjusted to a value = 7 by means of NaOH and it is boiled EXAMPLE 10. -
24.17 kg of crude dextran = 21.75 kg of dry dextran are dissolved at 20 ° C. in 450 liters of water.
1.3 H2O2 is added, the temperature is raised to 80 ° C. and the solution is maintained at this temperature at pH = 7.
Its relative viscosity is equal to:
EMI5.2
<tb> At <SEP> end <SEP> of <SEP> 90 <SEP> minutes <SEP> 10.9
<tb>
<tb> "<SEP>" <SEP> 120 <SEP> "<SEP> 6.86
<tb>
<tb> "<SEP>" <SEP> 120 <SEP> "<SEP> 5.40
<tb>
<tb> "<SEP>" <SEP> 170 <SEP> "<SEP> 4.72
<tb>
<tb> "<SEP>" <SEP> 190 <SEP> "<SEP> 4.02
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The oxidative decomposition is interrupted by the addition of 500 g of glucose. Its pH is adjusted to a value = 7 by means of Na2CO3 and the solution is boiled.
** ATTENTION ** end of DESC field can contain start of CLMS **.