<Desc/Clms Page number 1>
La présente invention est relative à un procédé pour le traitement de la coccidiose chez les jeunes poulets.
La maladie complexe très répandue que l'on désigne communément sous l'appellation "coccidiose" est causée par diverses espèces de parasites protozoaires du genre Eimeria.
Ainsi, l'espèce E. tenella est la cause d'une infection sérieuse et fréquemment fatale du caecum des jeunes poulets. Par ailleurs, d'autres espèces de Eimeria et, en particulier, le E. acervulina,le E. necatrix, le E. maxima et le E. brunetti sont la cause d'infections intestinales sérieuses de la vo- laille. Lorsqu'on ne la combat pas, la coccidiose provoque des pertes étendues .chez les éleveurs de volaille. Il s'ensuit que la lutte contre la codcidiose est essentielle pour un élévage fructueux de la volaille .
La présente invention a pour objet principal un procédé pour empêcher le développement et la propagation de la coccidiose chez les jeunes poulets. D'aubes objets secondaires de l'invention ressortiront de la description détaillée suivante .
La présente invention concerne un procédé efficace pour empêcher le développement et la propagation de la coccidiose chez les poulets, ce procédé consistant à développer et à maintenir dans le sang du poulet une concentration de 4,4'dinitrocarbanilide ( un composé connu, parfois désigné en abrégé par DNC) d'au moins 0,25 microgrammes par cm3 de plasma sanguin.
La méthode préférée pour développer et maintenir ce DNC dans le sang consiste à administrer une substance appropriée par la bouche aux poulets, notamment dans leur nourritu-
<Desc/Clms Page number 2>
re ou leur eau de breuvage, en une quantitée appropriée non toxique. Une telle substance peut être soit du DNC lui-même, soit un complexe dont fait partie le DNC et dont le poulet . absorbe le DNC, soit encore certains dérivés de DNC, qui sont métabolisés par les poulets en DNC. Ces dérivés sont le N-méthyl-DNC,le N,N'-diméthyl-DNC, le N-éthyl-DNC, et le N,N'-di@ éthyl-DNC.
Comme exemples de complexes ayant la caractéristique en question, on peut citer le complexe 4,4'-dinitrocarba- nilide-2-hydroxy-4,6-diméthylpyrimidine, qui est décrit en détail dans le brevet belge n& 534.190 et est parfois dénommé complexe DNC.HDP ou nicarbazine .
Certaines de ces substances sont plus efficaces que d'autres pour développer et maintenir la concentration efficace de DNC dans le sang du poulet, mais aucune d'elles ne requiert une concentration telle pour l'absorption par la voie buccale par le poulet qu'elle entrave la croissance de celui-ci. Par ailleurs, lorsque ces substances ne sont plus administrées aux poulets, le DNC contenu dans le plasma sanguin diminue après quelques jours.
Lorsque la substance, qui doit développer et maintenir du DNC dans le sang du poulet, est administrée par la voie buccale au poulet, elle est de préférence combinée à un véhicule ou diluant inerte. Une telle somposition est avantage; sement produite en dispersant intimement la substance dans un véhicule .Le véhicule ou diluant peut être liquide ou solide.
Des dispersions liquides peuvent être préparées, de manière satisfaisante, en utilisant des émulsifiants et des agents activité superficielle. Connue véhicules solide? on peut utiliser n'importe quel solide inerte vis-à-vis @ La substance et pouvant être administré sans danger aux animaux Des exemples de véhicules appropriés sont les coquilles d'huitres broyées, l'argile d'attapulgus et des matièr&s végétales cornes
<Desc/Clms Page number 3>
-tibles, telles que les aliments commerciaux pour animaux et volaille, l'urée, la farine de mais, le mais moulu, la fa- rine de citrus, les résidus de fermentation et les grains séchés de distillateurs.
La substance est avantageusement dispersée dans un véhicule solide par les procédés habituels, tels que agitation, malaxage, mélange, etc... De cette maniè- re, en choisissant des véhicules différents et en modifiant le ranport du véhicule à la substance, on peut préparer des compositions de concentrations diverses.
Des pré-mélanges peuvent être préparés de la même manière générale. Les pré-mélanges contiennent la substance active dans un véhicule, mais en concentration supérieure à celle utilisée dans les aliments pour volaille. Les pré-mélan- ges constituent des produits intéressants pour être livrés aux éleveurs de volaille, qui réduisent la teneur de la sub- stance en mélangeant ces pré-mélanges à l'aliment pour vo- laille.
L'efficacité de ce mode de traitement des poulets, en vue d'empêcher le développement et la propagation de la coccidiose a été démontrée expérimentalement par les essais suivants :
Des groupes de 10 poulets vieux de 10 jours ont été alimentés à l'aide 1., une pâtée contenant la substance dévelop- pant du DNC uniformément disposée dans cette pâtée. 24 heu- res après l'absorption de cette pâtée, chaque poulet a été inc- culé au moyen de 50.000 oocystes sporulés de E.tenella. Par ailleurs, des groupes de 10 poulets ont également été infec- tés, mais ont été alimentés normalement, c'est-à-dire qu'ils n'ont pas reçu de substance active, et utilisés comme contrô- les positifs.
Après administration des aliments pendant 8 jours (e'est-à-dire sept jours après l'inoculation) les essais étaient terminés. Après avoir noté la mortalité survenue pen- dant les essais, les volatiles survivants ont été, après a- -4-
<Desc/Clms Page number 4>
voir été pesés et soumis à un prélèvement de sang (1 ce de chaque animal) sacrifiés et le compte d'oocystes (à savoir le nombre d'oocystes de E. te ne lia développés) a été détermi- né en examinant les organes infectés au microscope. Le sang des 10 poulets de chaque groupe a été versé dans un tube à essai, héparinisé par addition de 1 ce d'héparine et agité, après quoi on a bouché le tube à essai à l'aide d'un tampon de coton et mis le tube en glacière.
Subséquemment et au plus tard 3 jours après le-prélèvement du sang des animaux, le tube a été centrifugé, après quoi le plasma (constituant la couche supérieure jaunâtre du liquide) a été retiré du tu be et analysée, en vue de déterminer sa teneur en DNC.
Le tableau I suivant résume les essais et les ré- sultats obtenus :
TABLEAU I
EMI4.1
DEVELOPPEMENT ET EFFET DE LA 4,4l-Dim.TRQCAKBANILIDE (DNC) DANS LE SANG DE POULETS w w 4.-x -14 %dans Quantité de DNC Essai No. t1ère dans aliment % dans dans plasma DNC animaux traités non traités 1. a DNC (1-3 microns) 0,05 0 z5 b 0,1 0 0,6 c 0,15 0 0,5 2. a Complexe DNC.HDP 0,0075 0 0,42 b 0,015 0 1,03 3. a Monométhyl DNC 0,01 0 0,10 b 0,04 0 ,83 4. a Diméthyl DNC 0,01 0 0,63 b 0,02 0 1,42 5. a Monoéthyl DNG... 0,1 0 0,27 6. a Diéthyl DNC 0,02 0 1,03 b 0,1 0 7, la
<Desc/Clms Page number 5>
TABLEAU I(Suite).-
EMI5.1
B's.sai Pourcentage .de morta- Nombre d'oocystes - l'ocrrI:en:
ta6e de ain No.. lités x x06 de poids des anima= chez x animaUX 10 SUrVi- survivants ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ ¯¯¯vaut s ¯¯¯¯¯¯¯,¯¯¯¯ ¯
EMI5.2
<tb>
<tb> Animaux
<tb> non <SEP> traités <SEP> traités <SEP> non <SEP> traités <SEP> traités <SEP> non <SEP> traités <SEP> traités
<tb> 1. <SEP> a <SEP> 11 <SEP> 0 <SEP> 32,4 <SEP> 20,5 <SEP> 25 <SEP> 51
<tb> b <SEP> 11 <SEP> 0 <SEP> 32,4 <SEP> 15,1 <SEP> 25 <SEP> 45
<tb> c <SEP> 50 <SEP> 0 <SEP> 33,1 <SEP> 4,6 <SEP> -2 <SEP> 53
<tb> 2. <SEP> a <SEP> 20 <SEP> 0 <SEP> 10,5 <SEP> 1,5 <SEP> 2 <SEP> 33
<tb> b <SEP> 20 <SEP> 0 <SEP> 10,5 <SEP> #0,1 <SEP> 2 <SEP> 40
<tb> 3. <SEP> a <SEP> 17 <SEP> 5 <SEP> 23,0 <SEP> .19,6 <SEP> 31 <SEP> 40
<tb> b <SEP> 17 <SEP> 0 <SEP> 23,0 <SEP> 0,9 <SEP> 31 <SEP> 66
<tb> 4. <SEP> a <SEP> 26 <SEP> 13 <SEP> 20,3 <SEP> 13,3 <SEP> 24 <SEP> 60
<tb> b <SEP> 29 <SEP> 0 <SEP> 19,0 <SEP> #0,1 <SEP> 24 <SEP> 57
<tb> 5.
<SEP> a <SEP> 29 <SEP> 10 <SEP> 15,5 <SEP> 12,9 <SEP> 16 <SEP> 36
<tb> 6. <SEP> a <SEP> 10 <SEP> 0 <SEP> 15,6 <SEP> #0,1 <SEP> 21 <SEP> 58
<tb> b <SEP> 10 <SEP> 0 <SEP> 15,6 <SEP> 0 <SEP> il <SEP> 21. <SEP> 91
<tb>
L'essai de détermination de la teneur en DNC du plasma sanguin est basé sur des déterminations colorimétriques. 3 ce du phsma héparinisé sont agités vigoureusement pendant 1 minute avec 6 cc d'un mélange d'acétate d'éthyle et de chloroforme (dans le rapport de 2:1) et centrifugés, de manière à former deux phases. La couche inférieure est constituée par le solvant.
La DNC,qui est préférentiellement soluble dans le système de solvant organique, est extrait dans la couche inférie ure. Cette couche aqueuse est prélevée à l'aide d'une aiguille attachée à une seringue et transférée à un papier filtre plié contenant environ 1 gr de sulfate de sodium anhydre (à des fins de déshydratation).
6 ce d'un mélange acétate d'éthyle-chloroforme sont ensuite ajoutés à ce qui reste dans le tube et le mode opératoire susdécrit est répété, le second extrait étant transféré au filtre. Après lavage du papier-filtre avec quelques ce d'acétate d'éthyle, le filtrat est place dans un courant d'air poux
<Desc/Clms Page number 6>
évaporer les solvants. Le résidu est alors dissoum@dans 6 ce d'alcali alcoolique, obtenu en mélangeant 0,5 ce d'hydroxyde de sodium aqueux à 60% dans 100 ce d'éthanol à 95%. Lorsque la solution contient du DNC .elle prend une teinte jaune clair. La densité optique de la solution est mesurée par un spectrophotomètre à la longueur d'onde de 440 microns.
Deux gouttes d'acide acétique glacial sont alors ajoutées à la solution pour détruire la coloration due au DNC , après quoi la densité optique de la solution est à nouveau mesurée à la même longueur d'onde. La différence dans les densités optiques est celle due au DNC présent dans la solution.
Pour déterminer la teneur en DNC présente dans la solution, la densité optique nette est multipliée par un facteur K, qui est déterminé expérimentalement à partir d'une courbe de calibrage standard. Ainsi, en utilisant le même spectrophotomètre à la même longueur d'onde, la densité optique d'une quantité connue de DNC dans une fraction de 6 ce de l'alcali alcoolique (préparé de la manière susdécrite) est mesurée. Cette quantité est avantageusement de 10 microgrammes de DNC dans 6 ce de solution. Ainsi, 10 divisé par la densité optique ionne le chiffre pour le .-acteur K. Lorsque la densité optique nette de la solution présentant la teneur inconnue en DNC est multipliée par ce facteur K, le produit est la quantité de DNC contenue dans les 3 cc de départ de plasma sanguin.
En divisant ce produit par 3, on obtient la valeur de la concentration en DNC du plasma sanguin en microgrammes par ce.
Les exemples suivants décrivent plusieurs pré-mélanges spécifiques, qui donnent satisfaction pour incorporer la 4,4'-dinitrocarbanilide (DNC) ou les complexes ou dérivés de celle-ci dans l'alimentation pour volaille, de façon que cel
<Desc/Clms Page number 7>
le-ci se développe et que des concentrations désirées de DNC soient maintenues dans le plasma du sang. Ces exemples sont illustratifs et ne doivent pas être considérés comme limitant l'invention.
EXEMPLE 1.-
Pour préparer 1000 livres anglaises d'un pré-mélan- ge, on utilise les ingrédients suivants : - 300 livres anglaises de complexe 4,4'-dinitrocarbanilide -2-hydroxy-4,6-diméthylpyrimidine (complexe DNC.HDP); - 175 livres anglaises de grains de mais séchés de distilla- teur (passant au tamis à 30 mailles); - 455 livres anglaises de remoulages de blé (30-80 mailles); - 70 livres anglaises de solubles de fermentation de vitami- ne B12 séchés (30-80 mailles).
Les quantités totales ,de remoulages de blé et de solubles de fermentation et environ 150 livres anglaises de grains de mais sont mélangés, après quoi on incorpore le complexe DNC.HDP et le restant des grains de mais. Après malaxage pendant 2 heures, le mélange est prêt à l'empaqueta- ge.
L'éleveur de volaille mélange ce pré-mélange à l'a- liment pour volaille dans des proportions telles que ce der- nier présente la concentration désirée en complexe DNC.HDP.
Ainsi, une livre anglaise de ce pré-mélange mélangée à 2.000 livres anglaises d'aliment donne une concentration de 0,015% du complexe dans l'aliment. Cette concentration développe et maintient à son tour dans le sang de la volaille une concentra -tion en DNC d'environ 1 microgramme par ce de plasma san- guin. Avec une telle concentration, le nombre d'oocystes est réduit chez la volaille à des proportions négligeables et la mortalité de la volaille par la coccidiose est réduite à zéro.
<Desc/Clms Page number 8>
EXEMPLE 2.-
Pour préparer 1000 livres anglaises d'un autre prémélange alimentaire, on utilise les mêmes ingrédients en quantités équivalentes à celles décrites dans 1' exemple 1, si ce n'est qu'on emploie de la N,N'-diéthyl-4,4'-dinitro- carbanilide (également appelée "diéthyl-DNC") au lieu du complexe DNC.HDP. Les processus de mélange sont les mêmes.
Une livre anglaise de ce pré-mélange incorporée à 1500 livres anglaises d'aliment donne dans ce dernier une concentration en diéthyl-DNC de 0,02. Cette concentration développe et maintient, à son tour, dans le sang de la volail- le une concentration en DNC d'environ 1 microgramme par ce de plasma sanguin. Avec une telle concentration, le nombre d'oocystes est réduit dans la volaille à des proportions négligeables et la mortalité de la volaille due à la coccidiose est réduite à zéro.
REVENDICATIONS.-
1.- Procédé pour réduire le développement et la propagation de la coccidiose chez la volaille qui y est sensibledans lequel procédé on développe et on maintient dans le sang de la volaille une concentration en 4,4'-dinitrocarbanilide d'au moins 0,25 microgrammes par cc de plasma sanguin.
2. - Procédé pour réduire le développement et la propagation de la coccidiose chez la volaille qui y est sensible, dans lequel procédé on développe et on maintient dans le sans de la volaille une concentration en 4,4'-dinitrocarbanilide comprise entre environ 0,50 et environ 3 icrogrammes par ce de plasma sanguin.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.