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La présente invention est relative à des substances antibiotiques et à des procédés pour les synthétiser. Elle concerne plus particulièrement la synthèse de novobiocine et de substances antibiotiques apparentées.
La novobiocine (nom générique d'un antibiotique, dont une marque est désignée par la dénomination "Cathomyci- ne") est produite par la croissance, dans des conditions contrôlées, d'une espèce précédemment inconnue de microorga-' nisme, qui a été appelée Streptomyces spheroides. Ce micro- organisme, qui a été isolé d'un échantillon de terre prove- nant d'une vieille pâture gazonnée dans le Vermont, a été désigné sous l'appellation de Streptomyces spheroides MA 319 dans la collection de .cultures de la société Merck # CO., Inc. , Rahway, Mew Jersey.
Une uulture viable de ce microorganisme a été. déposée à la section de fermentation .du Northern Utilization Research Bureau du Département de l'Agriculture des Etats-Unis à Peoria,, Illinois, et ajoutée à sa collection permanente de cultures .sous le, n NRRL 2449. lies milieux aqueux convenant pour la culture aérobie de souches de Streptomyces Spheroides en vue de produire de la novobiocine sont, de manière générale, ceux convenant pour la production d'autres antibiotiques par culture d'au- tres organismes du genre Streptomyce.
Ces milieux contien- nent des sources de carbone assimilable, telles qu'un hydra- te de carbone, des sourcesd'azote assimilable, telles que liqueur d.e macération de mais, hydrolysat de caséine, solu- bles de distillateur ou analogues, et des sels inorganiques, ainsi que des traces de métaxu reduis pour assurer un méta-
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bolisBie convenable du microorganisme. De préférence, le mi-, lieu est maintenu à une température de 24-20 C pendant la période, ordinairement d'environ 1 à 7 jours,
pendant laquelle le microorganisme est cultivé et une aération est prévue pour assurer une croissance optimum de l'organisme et la production de novobiocine. Les bouillons fermentés produits de cette manière ont une activité d'environ 150-2000 unités de novobiocine, telles que définies plus loin, par cc et les matières solides du bouillon de fermentation ont une activité dé l'ordre d'environ 2,25 unités de novobiocine par mgr de matières solides. La matière antibioactive peut être purifiée et récupérée sous forme plus pure par plusieurs procédés.
Ainsi,, tôut le bouillon peut être filtré à la concentration en ions hydrogène de la récolte, ordinairement à environ pH 7,0-8.0; le filtrat peut être extrait à une concentration en ions hydrogène dans la région acide en dessous d'environ pH 7,0, à l'aide d'un solvant organique li-' quide sensiblement neutre, seulement légèrement polaire, non miscible à l'eau, soluble dans de 'l'acide sulfurique concentré froid et dans de l'acide orthophosplioriqùe sirupeux froid.
L'extrait organique peut être extrait à l'aide d'une solution tampon alcaline aqueuse à une'concentration en ions hydrogène d'au moinspH 8,5, de 'manière à obtenir une solution contenant une teneur substantielle en sel de novobiocine. Les deux stades d'extraction peuvent être répétés en succession, de manière à obtenir une solution encore glus concentrée , dont la matière novobiocinique active peut être récupérée par précipitation à l'acide. Le produit ainsi obtenu peut être purifié par recristallisation dans une solution alcoolique acide aqueuse.
Il est à noter qu'en plus de Streptomycdes spheroides
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NRR 2449, d'autres souches productrices CI(: novobiocine de .
Streptomyces spheroides peuvent être utilisées pour obtenir de la novobiocine; ainsi, des mutantes de l'organisme décrit, obtenues par sélection naturelle, ou celles produites par un agent de mutation, par exemple irradiation aux rayons X, irradiation aux rayons ultra-violets, moutardes azotées et analogues, peuvent être utilisées pour produire de la novobiocine.
Le- nouvel antibiotique, la novobiocine, comprend les éléments suivants : carbone, hydrogène, azote et oxygène combinés en une substance ayant approximativement la formu- le C31H36N2O11 selon les données dont on dispose actuellement. Il réagit'comme un composé organique acide vis-à-vis des réactifs alcalins, tels que des solutions aqueuses d'hydroxydes de carbonates et de bicarbonates de métaux alcalins, et est soluble dans ces réactifs; il comporte deux groupes de liaison avec des bases et peut être précipité de sa. solution dans des alcalis par acidification.
Il est soluble dans les alcanils inférieurs, les cétones aliphatiques inférieurs, l'acide acétique, l'acétate d'éthyle, le dioxane; il est insoluble ou seulement peu soluble dans l'éther, le benzène, le chloroforme, le tétrachlorure de carbone, le dichlorure d'éthylène, l'eau et l'acide chlorhydrique.
De la novobiocine sensiblement pure a été obtenue sous deux formes cristallines : une forme cristallisant sous forme de rosettes et fondant à environ 152-154 C et une autre forme ayant l'aspect d'aiguilles platesfondant à environ 170-172 C Chacune de ces formes cristallines de l'antibiotique peut être convertie en une forme dite normalisée, oui peut être une forme amorphe ou sous-microcristal- line par dissolution descristaux dans de l'acétone, par addition ranide à cette solution d'un volume relativement'.
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grand d'éther de pétrole, et par récupération de la matière¯ normalisée précipitée par liltration.
Les solutions aqueuses alcalines de novobiocine et . les suspensions dans de l'huile minérale de la forme normali- sée de l'antibiotique présentent une absorption caractéris- tique, les premières dans les fonctions ultraviolettes et les dernières dans les fractions infra-rouges du spec- tre. Une solution de novobiocine sensiblement pure dans de l'hydroxyde de sodium aqueux 0,1JN présente une pointe d'absorption d'ultra-violet caractéristique à 3070 cet- te pointe d'absorption est l'indication d'une matière sensi- blement pure ayant une absorbance spécifique de 60U, mesu- rée à cette longueur d'onde, en utilisant une solution con- tenant un gramme de novobiocine pure par 100 cc de la solu- tion, contenue dans une celLule ayant un trajet dtabsorp- tion d'un centimètre.
Une solution de novobiocine pure dans de l'acide chlorhydrique méthanolique aqueuse 0,1N présente une pointe d'absorption d'ultra-violet caractéristique à
3240 A avec e1 = 390. Une suspension dans-de l'huile minérale de novobiocine normalisée sensiblement pure pré-
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sente des pointes d'absorption d'infra-rouge daractéristiquei aux longueurs d'ondes suivantes, exprimées en microns : 5,8-6,0 (large), 6,10, or1, o30$ u,4Y, 6 63e 7,4- 7,ô (large épaulement), '/ , '/ + , '1,')6, 8,7 (fiable), $,6U (épaulement), 8,7 (Épaul.emetlt), a,13, Y, 40, lU, 0-10,1 .
(large), 10,2, lU,uO (1;irge ) , 12,0-12,30 (large), 12,0-. il,-1,75 (large), 13,07 et 13,3'.
Les unités de novobiocine indiquent l'activité microbiologique de la novobiocne cristalline sensiblement pure;
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l'activité 1<'icrobiolo.xiqu;. de la novobiocine sensiblement pure a été fixée arbitrairement à 5000 unités par mgr et déterminée par des méthodes de diffusion en plaque cuvette
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standard, PIl ubilisnnt du Hacillun nubti lis lrl".L' 1.-3:=
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comme organisme d'essai.
En bref, dans ce procédé, on cultive du B.subtilis ATTC 12.432 sur des milieux de culture inclinés d'infusion de coeur et de cerveau dans de la gélose (Difco Manual, 9e. édition, pages 90,91) pendant 24 heures à 37 c et la, cultu- re est alors stockée à 5 C pendant des périodes n'excédant pas un mois. Pour préparer des spores, on prépare un inocu- lum en ajoutant 5 cc dteau distillée, stérile à une 'souche fraîchement cultivée sur un milieu incliné de B.subtilis.
Les cellules sont grattées aseptiquement du milieu de cul- ture inclinée; bien mélangées et transférées dans 50 cc d'eau distillée stérile dans un flacon d'Erlenmeyer.2 cc de la suspension bactérienne sont introduits, sous forme d'noculu, dans.un flacon de Roux contenant un milieu comprenant 3%'de farine de soja, 0l,2% de NaCl, ,4% de solubles de distillateur, 0,8% de NaCl et 2,0% de gélose.
Après incubation pendant 7 jours à 37 C, la culture bactéri- enne obtenue est mise en suspension dans 50 cc d'eau dis- 'tillée stérile et pasteurisée à 65 C pendant 30 minutes.
4 cc d'une dilution à 1:50 de cette suspension de spores ; utilisés par litre de milieu d'essai contenant 0,5% de peptone, 0,3% d'extrait de bugui 0,3% d'extrait de levu- re et 1,5% de gélose à. un pH de 5,9-6,1. Des fractions de
15 cc de milieu ensemencé sont réparties dans des bottes de petri profondes à fond plat. i
Six cylindres en acier inoxydables sont placés;sur la gélose ensemencée.
Trois de ces cylindres sont remplis à l'aide d'une solution standard de 4 mecrogrammes de novobiocine par cc (cc qui correspond à 20 unités de novo biocine/cc) et les trois autres cylindres sont remplis à l'aide de la solution inconnue dilues approximativement jus- qu'à la même activité à l'aide d'un phosphate tampon /M/20
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à pIl die ,0/ Ume COurbE' standard journalière est trac'ée- avee de la bovobicoine pure diluée à diverses concentrations allant de à 16ugr/cc.
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Après 1.L hre1!D!'eS d'incubation à 8 t les diamètres des zones d'inhibition des solutions inconnues et standard sur chaque plaque sont mesurées.
L'activité du produit inconnu est déterminée à partir d'un Homographe basé sur le degré de réponse à diverses concentrations établie à partir de la courbe standard journalière.
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La novdbiocine est optiquement active, C41 21¯ -27" (c=1 .dans hydroxyde sodique IN) et L i7 5= -44 ' (c=l dans pyridine).
La novobione est active en ce sens qu'elle inhi-
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i be surtout la.croissance de-microorganismes à gram positif, bien qu'elle présente également une certaine activité vis- à-vis des microorganismes à gram négatif. Elle inhibe notamment la croissance des organismes suivants :
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D¯T...yo,enes var. albus . pyogenes var. aureus iplococcus pneumoniae ,...
Uoryllebacterium diphteriae type gravis uoryiiebacteriiti dinhteriae t pe intertitedius Coryne bacteri u)tt diphteriae type mitis C oryne b ac t e r i um xerose Coryilebacteriani renale Neisseria meningtidis Sarcina l.utea (VD0
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0.. Eyo/3enes var. aureus rcaistant à 1.' auréomycine . pyosenes var. nurcus résistant à :La streptomyci- ne-streptothricine
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. J1yoelles var. aureus résistant à la pénicilline
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Les sels de novobiocine ont également une activité - antibiotique.
Ainsi, on a constaté que 1.e sel sodique de novobicoine inhibe, lorsqu'il est' testé par l'essai de dilu. tion sur gélose, la croissance de diverses souches de M.
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pyogeties var. aureus, ldeisser ia plenin'\itid:ls (% 274) et Sarchina lutea (VD) à des concentrations inférieures à 0,5 mcrgrpar cc. D'autres microorganismes sont également affectés par la novobiocine ou ses sels à divers degrés.
On a découvert à présent, conformément à la présente invention, qu'on petit préparer de la novobiocine et des substances' apparentées, en faisant réagir du chlorure de
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2-acyloxy-3-carbainyl-4-méthyInovobiosyle (XIIR) avec un'e 3-acylamido-4)7-dihydroxy-ë-méthylcou!Rarine (V R) eh présence d'oxyde d'argent, puis en hydrolysant le produit de réaction résultant. Cetl;e réaction peut être représentée comme suit :
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R représentant un radical acyle/
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Ainsi, lorsqu'on fait réagir de la s-(3-/ p Y -diméthyla11.y1?-4-acy7.o:çybonzarnido) 4â-dihydroxy-$-méthylcouMarine (IX R) avec du chlorure de 2-acyloxy-3-carbamyl-4- méthylnovobiosyle en présence d'oxyde d'argent et lorsqu'on
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hydrolyse le produit de ndensation, on botient de la novobiocine.
De même, lorsqu'on fait réagir de la 3-(3- 3-méthyl -butyl-acyLoxybetxzamido )-, 7-dihydroxy-$..méthylcoumamine (IXAR) avec du chlorure de 2-aoyloxy-3-oarbamyl-4-méthylnovo- biosyle et lorsqu'on hydrolyse le 1 dérivé acylé intermédiaire, on obtient de la dihydronovobiocine. De cettemanière, d'autres composés apparentés à la novobiocine et à la dihydronovobiocine et possédant une activité antibiotique peuvent être produits.
Ainsi, lorsqu'on fait réagir de la 3-(2-
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2-diméthylchroman-6-carboxamido )-4 7-dihydroxy-8-méthylcoumamine (IX B) et de la 3-acétarttido-7-dihydroxy-$-méthylcoumarine (V B) avec du chlorure de 2-acyloxy-3-carbamyyl-4-méthyltiovobiosyle et lorsqu'on hydrolyse les produits de condensation intermédiaire, on obtient respectivement de la cyclonovobiocine (XIII B) et'de la 3-acétamido-7-(3-carbami- ... do-4-méthylnovobiosylcxy )-li.-ltydroxy-$-triPthlcournariue (XIII C) Les réactions peuvent être schématisées comme s uit : .
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R ?:tant un madical acyle .
.Pour l'exécution de ce procédé de préeparatin de
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novobiociac et des coitnosés y apparentés suivant 1'invention, la 3-acjri.nmi<io-lF,7-di>iydroxy-8-iuôtliylcouinarine est dissous dans un solvant approprié, tel que le dioxane, et
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de l'oxyde d'argent y est ajouté. A la suspension résul- tante, on ajoute alors le chlorure de 2-acyloxy-3-carbamyl-
4-méthylnovobiosyle et le mélange réactionnel est agité pendant un temps suffisant pour compléter la formation du produit de condensation. Ordinairement, on constate qu'une agitation à température ambiante pendant 5 à 10 heures est suffisante pour achever la réaction.
En général, il s'avère souhaitable d'exécuter la réaction en l'absence de lumière et dans des conditions sensiblement anhydres, afin d'obtenir des rendements optima en produit de réaction désiré. On constate également que la réaction progresse plus rapidement si une petite quantité d'iode'est ajoutée au mélange réactionnel, bien que l'additiond'iode ne soit pas essentielle pour la réaction de condensation .
Lorsque la réaction de réaction est terminée, le substituant acylé de la partie novobiosylique est aisément . éliminé par hydrolyse avec un alcali. Ainsi, après filtra- tion du mélange réactionnel pour séparer les sous-produits insolubles et après réduction de l'excès d'iode avec du bisulfite de sodium, le filtrat-est concentré jusqu'à petit volume à pression réduite et traité avec de l'hydroxyde de sodium ,jusqu'à un pH d'environ 7, de façon à séparer le substituant acyle de la partie novobiosylique par hydrolyse.
La novobiocine ou le composé analogue à la novobiocine est avantageusement récupéré de la solution neutralisée par lyophilisation. Le nroduit ainsi obtenu peut encore être purifié par recristallisation dans des solvants appropriés ou des mélanges de solvants appropriés .
Suivant une autre particularité de la présente in- vention, on a constaté à présent que le chlorure de 2-acyl-
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Oxy-3-carbamyl-4-môthylnovobiosyle (XII R) utilisé dans les
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réactions de condensation décrites plus haut peut être
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préparé par acylation de 3-carba)nyl-4-méthylnovobiose (X) de manière à' former le dérivé diacyl.é, 1,2-diacyloxy-3-ear- bamyl-4-méthylhovobiose (XI R), et en faisant réagir ce composé diacylaté avec du chlorure d'hydrogène dans des conditions anhydres , de Manière à produire du chlorure de
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2-acyloxy-.3-carballlyl-4-méthylnovobiosyle (XII R). Ces réactions peuvent être schématisées comme suit:
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R représentant un radical acyle .
. Lors de l'exécution du. premier stade du procédé précédente '' on préfère utiliser les dérivés acylés, dans lesquels les groupes acyle sont.dérivés d'acides aliphtaiques inférieur ne comportant pas plus de huit atomes de carbone, bien que d'autres groupes acyle puissent .aussi être utilisés à cette fin. Ce stade est exécuté avantageusement, en utilisant un anhydride d'acide aliphatique inférieur comme agent d'acyla- tion. Ainsi, le dérivé diacétylé' se prépare aisément en
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faisant réagir la 3-carbarnyl-4-méthyluovobiose avec un excès d'anhydride acétiaue, en présence d'acétate de sodium à 100 C pendant environ 1 heure.
Lorsque la réaction est terminée, le mélange résultant est dilué avec de la glace et de l'eau et neutralisé avec du bicarbonate de sodium.
Le dérivé acétylé est récupérépar extraction avec un solvant anproprié, tel flue le chloroforme, et évaporation de
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l'extrait cgloroiomnique ; ,- Selon une autre forme d'exécution de la présente
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invention, on a trouvé que, la 3-acylamido-4t7-dihydroxy-6- méthylcoumarine (V R) utilisée connue matière de départ dans les procédés décrits plus haut peut être. préparée en
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acylant de la 3-amino-4., t-d.Piydroxy-$-méthylcoumaritle. Cette réaction peut être schématisée Comme suit :
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R représentant' un substituant acyle.
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Ainsi, la 3-amino-4,7-dihydroxy-8-niéthylcownarine peut être caylée par réaction avec un anhydride d'acide en présence .de pyridine , par exemple, de 1'anhdride 'acétique = en présence de pyridine, de manière à produire le dérivé
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acylé correspondant.
Ou bien, la 3-arnino-.,7-dihydroxy-$- coumarine peut être acylée par réaction-avec un chlorure d'acide. Par exemple, lorsqu'on fait réagir de la 3-amino-
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4,7...dihydroxy-$-méthylcoumarine avec du chlorure de 3-(', -dirnéthyl,a.lyl)-.-'acyloxybenzoy.e (VIII R) dru chlorure de 3-(3-éthylbutyl)'-4-acyloxybelizoyle (VIII AR) ou du chlorure de 2,2-dinréthylchroman-6-carbonyle (VIII B) en présence d'acétate de sodium, on obtient respectivement de la 3- (3-±-y-, V- dimnthy1a7.1y.7-4-acyloxybetzarrrido)-.,7dihydroxy-8-1I1éthylcoullwrine (IX R), de la 3-(3--nualzylbuty -4-acy loxy-be uzanrido )-r, 7-dilhydroxy-8-mathylcoumarine (IX AR) et de la 3-(l,2-.diméthylcliromatl-6-caxboxar:rido)-.,'7d:klycrroxy-8-m.;thyZ.coumarine (IX L3).
Ces réactions peuvent être schématisée comme suit :
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R représentant un groupe acyle.
Ces réactions sont; avantageusement, exécutées en met- tant le composé coumarinique en suspension dans de l'eau, en y ajoutant 1'acétate de sodium, puis en ajoutant le chlorure c'acylc en petites quantités, tout en agitant le mélange réactionnel. Lorsque la réaction est achevée, le produit désiré est obtenu en acidifiant la solution aqueuse jusqu'à un pH d'environ 2. A ce pH, le produit est insoluble
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et peut être récupéré par filtration. Si on le désire, le produit neuf- être encore purifié par cristallisation dans des solvants appropriés .
Suivait une autre tome d'exécution de la. présente invention, on a découvert à présent que le chlorhydrate
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de 3-antitzo-.,7-dihydroxy-$-rnëthylcounraritze (V) peut être préparé en plusieurs stades, en partant de 2-méthylrésorcinol.
Ce procédé consiste à l'aireréagir du 2-méthylrésorci- nol avec un ester d'acide cyanoacétique en présence de chlorure de zinc et de chlorure d'hydrogène dans des con- ditions anhydrides, de manières à produire du 7-hydroxy-
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4-imino-6-méthyl-2-oxochromane (II) à chauffer ,ce composé, imino avec de l'acide sull'urique à 50jl, de manière à obtenir de la 4,7-dihydroxy-ë-méthylcou)ttarine (III)j à traiter ce composé avec de l'acide nitreux de manière à produire du 2,4-dioxo-7-hydroxy-8-méthyl-3-oximinochromane (IV) , et à réduire'*ce produit avec de l'hydrogèneen présence d'un catalyseur constitué par un métal noble, tel que dU pal.la- dium sur du charbon de bois,
de manière à produire le
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chlorhydrate de 3-amitzo=G., 7dihydroxy-F3-nétlzyl.couinarine (V). Ces réactions peuvent être schématisées comme suit :
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R1 représentant un groupe hydrocarbure.
Pour exécuter :e preier stade des réactions sus- décrites, on pe ututiliser n'importe quel ester de cya,no- acétate, bien qu'on préfère utiliser .un ester d'alcoyle in- férieur dans cette réaction, par exemple desesters l'alca- nols inférieurs comportant 1 à 8 atomes de carbone. 'Ainsi, cette réaction est avantageusement exécutée en utilisailt du cyanoacétate d'éthyle;
Lorsqu'on utilise cet ester,.'la condensation est aisément exé-cutée en faisant réagir le
2-méthylrésorcoinal avec du cyanoacétate d'éthyle dans un solvant approprié, tel que l'éther, en refroidissant cette solution, en ajoutant du chlorure de zinc et finalement en 'faisant passer du chlorure d'hydrogène sec dans le mélange froid . Lorsque la réaction est. terminée, on permet à la température d'augmenter jusqu'à température ambiante et le mélange réactionnel est abandonné pendant environ 1 jour . pour assurer l'achèvement de la réaction.
Le produit de la réaction, à savoir le chlorhydrate de 7-hydroxy-4-imino-
8-méthyl1-2-oxochromane, se sénare du mélange et est aisé- ment récupéré par filtration. Le nroduit récupéré peut encore être purifié , si on le dôsire, par cristallsattion dans des solvants appropriés ou des mélanges de- solvants appronriés.
Le second stade du procédé décrit plus haut s'ef- fectue aisément en chauffant une solution du composé imino (11) dans un grand volume d'acide sulfurique à 50% à envi- ron 100 C Le produit est récupéré pa refroidissement du
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mélange réactionne l et filtration de la .,7-dihroxy-$-méthßlc oumar ine ( IIî ) .
, ]Le stade de conversion de la -,'7-dihydroxy-$-lnéthylcoumarine en 2, .-dioxo--kiyd.axy t-rnéthyl-3-owcimiuo-chromane (IV) est aisément exécuté en mst-tant la ma.tüiêrwa de dé- part en suspension dans de l'eau et en ajoutant une solu-
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tion de iiltîité de sodiwn, Pour assurer l'achèvement de la réaction,, le mélange est agité fréquemillent pendant 3 heures, au cours desquelles le composé coumarinique se dissout gra- duellement. Apres filtration de ce mélange réactionnel, il est refroidi dans unbain de glace, de manière à càuser la précipitation du composé oximino sous forme cristalline, ce composé pouvant être aisément récupéré par filtration.
Le stade final du procédé de préparation de chlor-
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hydrate de 3-amino-.,7-dihydroxy-$-méthylcoturtaritie est avantageusement exécuté au dissolvant la 2,4-dioxo-7-hydroxy-$-me'.:thyl-3-oxirnino, coumarine dans un solvant approprié) tel que l'éthanol, en ajoutant un catalyseur constitue'' par un métal noble, et au moins un équivalent diacide chlorhy- drique, et en hydrogénant le mélange réactionnel résultant.
L'hydrogénation est poursuivie jusqu'@ ce que la quantité requise d'hydrogène ait été absorbée. Pour exécuter cette' réduction, on préfère utilisé du palladium sur charbon de bois, bien que d'autres formes de matières nobles ou de métaux nobles appliqués sur des supports inertes puissent être utilisés à cette fin. Lorsoue 1.a réaction est exécu- tée de cette manière, le nroduit est aisément récupéré en séparant le catalyseur par filtration @@ et en évaporant la solution résultante jusqu'à siccité.
Selon une autre J'orme d'exécution de la présente ' invention, on a découvert à présent que le chlorure de
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3-18. 8-diméthylallyl)-4-acyloxybenzolyle (VIII R) utilisé comme matière de départ dans ,le procédé susdécrit peut être préparé par acylation d'acide 3-(#, # -diméthylaollyl)-4- hydroxybeuzoïque (VI), et par traitement du sel de sodium du produit acylé à l'aide de chlorure d'oxalyle. Ces réactions peuvent être schématisées conuue suit:
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R représentant un radical acyle.
Pour exécuter l'acylation de l'acide 3-(#, # -diméthylallyl)-4-hydroxybenzoïque, on peut appliquer l'un quelconque des divers procédés utilisés -pour ,acyler des composés phénoligues. Il a été constaté que le +6'rivés acylés d'acides carboxyliques aliphatiques inférieurs comportant 2 à 8 atomes de carbone sont particulièrement avantageux dans le procédé décrit et constituant, par conséquent, des produits intermédiaires préférés. Ces dérivés acylés, se préparent aisément par réaction avec l'anhdride d'acide en présence de pyridine.
Par exemple, le dérivé acétoxylé est avantageusement obtenu en mélangeant l'acide Ilydrgxybelizoique avec de l'anhydride acétique en présence de pyridine sèche et en abandonnant le mélange réactionnel résultant jusqu'au lendemain. Le produit.acétylé peut être récupéré par des méthodes conventionnelles, notamment en traitant le mélange réactionnel avec de l'eau, en acidifiant la solution résul-.
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tante et. et) récupérant le'produit précipité par filtrat-ion*
Le.
second stage dû procédé de préparation de chloru-
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re de 3-( - diméthylâiLyl)-4-acétoxybenzoyle s'exécu- te aisément en traitant le sel sodique du produit acylé avec du chlorure dtoxal.yle à des températures peu élevées dans un solvant approprie tel que le benzène. Lorsque la réaction est terminée, le chlorure de sodium précipité est séparé et le filtrat est. concentré sous pression réduite, en sorte qu'on obtient le chlorure d'acide .
Suivant, une autre, forme d'exécution de la présente
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invention le chlorure de 3-(3-/3-in6tliylbutyl7-4-acyloxyberi- zoyle (VIIIAR) est obtenu d'une manière similaire à celle décrite plus haut pour :La. $réparation de chlorure de
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.. 3- ( ' , " .: -diméthylally1") -4-acyloxybenzoyle, en utilisant de l'acide 3-(3-méthylbutyl)-4-hydroxybenz-oique,(VI A) com- me matièrede départ. Ainsi, la matière de départ est d'abord. acylée de manière à former le dérivé acylé correspondant et
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ce dérivé acyle est mis en réaction avec du cliiorure de thionyle, de manière à produire du chlorure de 3-(3-m- ¯-thylbutyl)-4-a,cyloxy-belJ;zoyie (VIII AR).
Ces réactions peu- veut être schématisées connue suit : :
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. R représentant un groupe acylc.
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Le chlorure de 2-dinth,ylcriromatl--carbotlßJ.e (VIII B) utilisé dans le procé'dé décrit ci-dessus peut être préparé par réaction de 2,2-dirtualiylchroman-6-carboxylate avec du chlorure de ttÜol1yle à température ambiante. Après achèvement de l.a re:action, le mélange est concentré sous /1.
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pression, réduite pour obtenir le produit desiré sous forme -solide .
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La 3-acylatuitro-, 7-dihydroxy- -m>iNi filco alnarine utilisée comme matière de départ dans les réactions décri- tes .ci-desus se prépare aisément en faisant réagir de -la
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3-anrito,-dihydroy--mëthyleoutrtarïne avec un agent dtacylation, de manière à produire le composé diacylé qui est converti par l'hydrolyse sélective en 3-acy:Latnino-.'7-dihydroxy-,8-iné-tliylcownarine (V B).
Ces réactions peuvent être schématisées comme suit :
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R représentant un groupe acyle.
Lorsqu'on prépare ainsi le composé V B, on préfère utiliser des esters d'acides aliphatiques inférieurs à cette fin. Ainsi, le dérivé diacylé est avantageusement obtenu en faisant réagir la matière de départ en présence de pyridine avec.un anhydride d'un acide aliphatique inférieur comportant 2 à 8 atomes de carbone. Le dérivé diacylé ainsi
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obtenu est sélect Lvouent hydrolyse par l'(;actl,ol1 avec une solution d'un alcali, tel que l'hydroxyde de sodiu.
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Dans .Les rf actioun décrites plus haut, la 3-ainino- 4,-ditiydro:y-t.-lnéthylcoarnaritle (V) et ses dérivés i,-acyl(s,
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tels. que les composés V B, IX, IX. A et IX B, ont été décrits et. représemtés comme étant des, composés coumariniques. Toutefois, ces composés peuvent exister et réagir comme composés chromone.dans lesquels les positions du groupe 4-hydroxyet, du groupe cétonique sont renversées. Ainsi, ces composés peuvent être représentés comme suit ;
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R1 représentant' de l'hydrogène ou un groupe acyle.
La novo,biocine et ses sels constituent des' agents antimicorbines de valeur. Ils peuvent par exemple être uti- lisés pour éliminer les microorganismes susceptibles des équipements phammaceutiques et analogues ou pour séparer . certains microorganismes de solutions contenant des mélanges de divers microorganismes. La novobiocine et ses sels sont ' également utili,sables pour le traitement d'animaux infectés par de s microorganismes sensibles à l'action du nouvel antibiotique. Ainsi, la novobiocine s'est révélée très uti- le dans le traitement de la mastite chez les vaches. Des onguents contenant 20 à 100 mgr par 7,5 gr de novobiocine sodique conviennent à cette fin.
La novobiocine et ses sels sont .actifs vis-à-vis des staphylocoques résistant à la pénicilline, ainsi'que vis-à-vis des pneumocoques et streptocoques. 1!:tant donné que ces microorganismes sont la cause de la plupart des infec- -tions respiratoires bactériennes, la novobiocine peut être utilisée pour le traitement de ces infections cliez les êtres humains. A cette fin, le sel. sodique de novobiocine peut être administré par la bouche sous forme de capsules conte- nant, par exemple, environ 100 à 500 mgr de l'antobiocique
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à une dose quotidienne de 1 à 21 grlwiii; s.
Ain';i, un dosage aonropric neuf e'tre :11"(pur' en nettant 2i50 :,,:r du Gel monosodirue dans une capsule de. ig. latine mole 11 1... La llOV,0biochie et ses sets peut :.1\IQ1Ü tre .administrée sous la forme de tablettes. Ces [;.;.;bl13'I;1;os peuvent 0.tre prépaies en !nél8il..;cnn.:b de In novobiocine sodique' eu poudre ;
une petite ('u[111t.Lt6 d'une solution à 5/-de ,htr:.at( hydrogène d'acétate cellulosique d[!ns un 1:1''lale (.iu:50) de !11(tI1Jt107. et d'acétone, etr, granulant la iiiatlùrc sur un tc.au.i.c 11 tI 0, en séchant les ;;r:'l1ules résultants, en '%%-11.1..SFlilt les granules sèches
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sur un taillis n 1 et en c01'lpr1 Dnt les granules résultants avec addition d'une petite C1.LC?lltlt' de stéarate de magnésium,.. de 'tanière fi. former des tablettes contenant 50 mgr de novobicoine sodiqup. ' La novobiocine est, :'glJlement efficace pour le traite!'eut .et le contrôle de naladies des plantes. Ainsi, elle pectétre utilisée pour lutter contre la nielle du haricot causée par .la ',aiitlloi-toii<i,,4 l2!.laseaoli.
A cette fin, on pulvéri-
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se les plantes à l'aide d'une solution aqueuse contenant en-
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viron 11-u parties par 1n,Ll1.ioll du sel sodique de novobiocine. Los produits de pulvérisation peuvent contenir divers agents
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de mouillage ou d'étalement et/ou d'autres agents actifs
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et nr'uvent #ttrP préparas par des tnéthodes bien connues dans
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la technique.
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La dil1ydronovobiocinc et ses sels 1;ont clu moins aussi actifs et, dans ln plupart des cas, plus actifs que 1.a novobiocine vis-à-vis den iticroorganismcs d'cnsai, en partici>lJLrr V 1.:-l-V.L;1 d' .lI.lDrwt: llt.;1 t)rf)('9 de Jlicroorr;[\i1i:3lneS t7a til0^,alt:S. ,ilns.l, ln Cl.l.ilyC1rO110V?).LOC.lIIC ecib plus de dt-<5t fois ai>zr;1 nctive V .;:- .-V.L:. (le' ii<.ur de ces t'I:LCX OOr;;='117.I11C^ savoir le G. pocudotl1br'rcu ',0:113 5/éj et G. psoudodiphthc1"ificulIl 5<J . Co)npar''c a In 110Vr)I)i.OC:.i.tlf la dihydronovobiocine est beaucoup pl,v>; active in vlvo vi.;>-1-vi.s d'infectLonn dues tz;
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Proteus sn. 1-licrococcus nyogenes var. aureas i3mith, Streptococcus oyol;eues et Diplococcus pueuntotl:r.ae résistant ..léry;t:hramyciue.
'Si1Uilaireme.lït la cyclonovobiocine et la 3-acétamido- 7- ( 3=c arbawyfl-*-mnôtkyInovobio ssr loxsr ) -4-hydroxy- 8-mé thyl.coumariiie sont des age.nts allrtimicrobiens de valeur et inhibant la croissance de divers mii.'croorganismes pathogènes.
Les exemples 'suiivaM't's illustrent de's formes d'exécu' tison de [t:'invention.
E1T'ïL; 1. Préparation de chlorhydrate de 3-amino-4,7-dihydroxy.:8-méthylcoumarine (V) à partir de 2-méthylrésoroinol (I) A. - Préparation:de 7-hydroxy-h-imino-8-méthyl-2-oxochromane ##.##-#JEL#######.-##-# 37 gr de -;rnéthylrésorc:io1 (I) (R. C. Shah et Ivi.C.
Laiwalla, J.Chem. Joc. -1)3ç"j,, 1828) et 34'g. de cyaiioacétate d'éthyle sont dissous dans 150 cc d'éther. La:solution refroidie dans un bainde, glace et 20 gr de chlorure' de zinc fondu, sont ajoutés par portions en agitant..Un fait alors passer du HCl gazeux sec dans le mélange glacé pendant 2 heures. Le bain de glace est enlevé et'.'le mélange est admis à revenir jusqu'à la température ambiante et abandonnée pen-
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dant 2 jours. Le produit solide 7-hydroxy-4.-arnitlo--trtéthy:L- 2-oxochromane est séparé par filtration, lavé avec un peu d'eau froide et séché dans un dessicateur à vide sur du pentoxyde de phosphore.
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B.- Préparatiott de i+, 7-dihydroxxy-h-métliy7.coumar ine (III).une solution de 1'c p; de 7-hydroxy-4-intino-8-méthyl- 2-oxochromane (II) dans 400 cc d'acide sulfurique à 50% est chauffée au bain de vapeur pendant 2U heures. Le mélange
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est refroidi. dans un bain de glace et la 4,'/-d:Lhydroxy-8méthylcoumarine solide est recueillie sur un filtre, lavée
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avec de l'eau glacée et séchée dans un dessicateur à vide sur du pentoxyde de phosphore.
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C.- Préparation de 2,4.-dioxo-7-lydro.>y--ntthyl-3-oxitnitlochroiiiaiie 1- (IV-. ---------------------- ---------A une suspension de 0,54 gr de 4,'?-diliydroxy-8- méthylcoumarine (III) dans 100 cc d'eau, on ajoute-une solution de 0,20 g de nitrite de sodium dans 5 cc d'eau. Le mélange est maintenu à température ambiante et fréquemment agité pendant 3 heures, pendant lesquelles la cownarine se dissout lentement. La solution claire de teinte brun-verdâ- tre est filtrée pour éliminer une trace de matière solide et est ensuite refroidie dans un bain de glace et acidifiée avec de l'acide acétique.
Lorsque la cristallisation est
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terminée, le 2 , 4L,dioko-7-hyàrôxy-8-méJthyl-3-oxiininochroinane est recueilli'.sur un filtre, lavé avec un peu d'eau glacée et séché dans un dessicateur à vide sur du pentoxyde de phosphore.
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D.- Préparation de chlorhydrate de 3-amino-4,7-dihydroxy-8méthylcownarille (V).. - Une solution de 100 mg, de 2,1-d3.oxo-7.-hydroxy-$méthyl-3-oximinochroniane (1V} dans 20 ce d'éthanol absolu est ajoutée à une suspension de 0,5 g de palladium préréduit sur du Darco (10%) dans 20 cc d'alcool absolu et 0,6 cc de HCl 2,5 N. Le mélange est agité avec de l'hydrogène à 25 C jusqu'à ce que la Quantité calculée .soit (absorbée. Le cata- lyseur est séparé par filtration et le filtrat est évaporé jusqu'à siccité sous pression réduite. Le chlorhydrate d'a- mine est recristallisé dans l'alcool.
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Xlu:.aPh; 2e- Préparation d'acide 3-( Y, Y-dznuéthyl.a11.y1)-r-hydroxybenL- zoic en partant de p-hydro.ybet2ôate dtéthyl.A.- Préparation de 3-{ y, (-c1!iJ.n6hYlallYl}-/+-hYdrOXYbenzoa" te d'éthyle -- ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯
Un mélange de 7 g de sodium métallique coupé en petits morceaux, 300 cc de toluène, sec et 50 g de p-hydroxy- . benzoate d'éthyle est chauffa sous reflux et agité pendant quelques heures. Le mélange est ;refroidi dans un bain de glace et agité, tandis que 50grde bromure de {', ( -dimé'.- ; thylallyle sont ajoutés goutte à goutte en l'espace de 2 heures. Le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à température ambiante, puis chauffé à 50 C pendant 1/2 heure.
Après filtration, pour 'séparer le bromure de sodium la solution toluénique est concentrée sous pression réduite jusqu'à 100 cc et extraite à trois reprises avec des frac- tions de 100 cc d'hydroxyde de sodium 2,5 N. Les extraits alcalins sont combinés, refroidis à 0 C et soigneusement acidifiés jusqu'à pH 6 avec de l'acide sulfurique 2N. L'huile lourde qui se sépare est extraite à l'éther, séchée sur sulfate de magnésium et concentrée sous vide; poids :
42 gr. Cette huile est dissoute dans du cyclohexane et ex- traite avec une solution saturée de carbonate de sodium,
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pour Eliminer la petite'fraction de..p-hydroxy-benzoate d'éthyle n'ayant pas réagi. La couche cyclohexanique est 'séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée sous vide.
Le résidu est dissous dans un mélange bouillant à parties égales
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de cyclohexane et d'éther de pétrole (P.L. 3U-fi0 ). Après refroidissement jusqu'à température ambiante pendant quelque: heures et à 3 jusqu'au lendemin, les.! prismes incolores
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sont recu,l-1.llis sur un filtre; P.l''. 62-6o'. Par recristallisa -tion dans un m41?njge dp cyclohexane et <1'<'tlier de pétrole
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(P.E. : 30-60 ) on obtient 18,9 gr de prismes incolores; P.F. 66-69 c.
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B.- Préparation d'acide 3-(), 6-diméthylàllyl)-4-hydroxy- benzoïque.-
Une solution de 7 gr de 3- (#, # -diméthylallyl)- 4-hydroxybenzoate d'éthyle dans 30 cc d'hydroxyde de sodium 4N est chauffée sur une cuve de vapeur pendant 4 heures.
Après refroidissement dans un bain de glace, la solution
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résultante du sel sodique d'acide 3-( ( f, ( -diméthylallyl)- 4-hydroxybenzolque est acidifiée avec de l'acide chlorhydrique dilué et extraite à l'éther. Les extraits éthérés combi- nés sont lavés à l'eau, séchés sur du sulfate de magnésium, filtrés et concentrés sous vide. Le résidu est dissous'dans du benzène chaud et cristallisé lentement en ajoutant du cyclohexane; P.F. 80-84 . Par recristallisation dans un mélange de benzène et de cyclohexane, on obtient des pris-
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mes incolores fondant à'94-95 C.
L'acide 3-( (, "( -diméthyl- allyl)-4-hydroxybenzolque peutêtre purifié en le dissolvant dans une solution de carbonate de sodiwn et en.extrayant à l'éther. Après acidification de la solution.glacée de car- bonate de sodiwn à l'aide d'acide chlorhydrique, lé produit est recueilli sur un filtre et lacé à it.eau froide.
Par re- cristallisation dans un mélange de méthanol et d'eau, on obtient des aiguilles incolores; P.F. 101-108 C
EXEMPLE 3. -
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Préparation de chlorure de 3-( ie t -di rnéthylallyl)-4-acétoxybenzoyle (VIII) à partir d'acide 3-( ( , -d.méthylal.lyl ) 4-acétoxy benzoïque (VII).A.- Préparation d'acide 3-( ( (, { -dimcthylallyD-4-acétoxy- ¯¯¯¯¯¯ benzoïque (VII).- ----------------------------------------------------Une solution de 2U, E gr (0, ;1. mole ) d'acide 3-( ysydil"4thYlaîl-Yl)-4-ilY<IrO?ty'Jenzotque (Vil' dans 100 cc de pyri-
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dine sèche est traitée avec c 12 J S gr z5 mole) d'anhydri- de acétique et maintenue à température ambiante jusqu'au lendemain. Le mélange réactionnel'est dilué avec 400 cc de glace et d'eau et acidifié avec de l'acide chlorhydrique concentré.
Le produit précipite est séparé par filtration.
Le produit brut est recristallisé dans de l'éther de pétro-
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le (P.D. 5-l0U ), en sorte qu'on obtient de l'acide 3-(r, -ditnéthylallyl)-4-acétoxyben?oique purifié.
B.- Préparation de chlorure, de 3-( , -diméthylallyD-4acétoxybenzoyie (VIII).- ¯¯¯ ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ Une suspension de 24 J g gr (U,1 mole) d'acide 3-( 1 -diinétliylallyl)-4-acétoxybenzotque (VII) dans 50 cc d'eau est traitée avec 40 cc d'hydroxyde de sodium 2,5 N . La solu-. tion résultante est lyophilisée pour produire un résidu
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de 3-( , ydintétriylallyl)-4-acétoxybetizoate de sodium. Le sel sodique est ajouté par portions, en agitant, à la température de la glace, à une solution de 127 gr (1 mole])) de chlorure oxalyle dans 400 cc de benzène sec. Après l'addition finale, l'agitationest poursuivie pendant environ 2 heures. Le chlorure de sodium précipité .est séparé et le filtrat est concentré à pression réduite.
Le résidu est redissous dans du benzène et reconcentré' pour éliminer les dernières traves' de chlorure d'oxalyle de chlorure de 3-(#,
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1 -diméthyla l lyl ) -4- ao ét oxybe nz oyle q , J.!;1ilil'lPLJ 4.....
Préparation de 3-carbaittyl-.-nétliyhlovobiosa.-, une solution de 20 gr de novobiocine dans 1 litre
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d'alcool méthyl.iau.e, on ajoute 1U cc d'acide chlorhydrique (densité 1,19). La solution résultante est chauffée au re- fl.ux pendant environ 1 1/4 heure, après quoi elle est diluée volume avec un/équivalent d'eau et refroidie. Le précipité résul- tant est recueilli et le filtrat est concentré ,jusqu'à envi-
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ron 300 cc sous pression réduite. Après filtration, la solution concentrée est rendue alcaline avec du bicarbonate de sodium et lyophylisée.
Les solides résiduels sont extraits par fractions avec environ 300 cc d'acétone et les extraits acétoniques combinés sont concentrés jusqu'à environ 25 cc. La méthyl-
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3-carbamyl-4-méthylnovobiosirle crmstallise dans la solution résultante,et est recueillie et lavée avec de l'acétone. Après recristallisation dans de l'acétone chaude, le produit fond à 190-192 C.
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1,5 gr de méthyl 3-carbamyl-4-mbthylnovobioside est chauffé au bain de vapeur dans 150 cc d'acide chlorhydrique 0,1N, pendant environ 45 minutes, jusqu'à ce que la rota- ? tion de la solution atteigne une valeur constante. L rots(- tion de la solution observée au bout de cette période est;'
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de+0,501 dans un tube de 1 cm (D li;tie de sodium utilif}éà.1 La solution résultante est lyophylisée, de manière à produi-
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re de la 3'carbamy1..4-méthylnovobiose sous forme d'une mas' .se vitreuse; / ( ï 2 =" +46" (c= 1 dans CH3 H ) EXEPLE 5.-'
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Préparation de chlorure de -acétyl-3-carbantylr-ntét!iy.tlovobiosyle à partir de -carba.nty7.-4-ntcalnßltlovobiose.
A.- Préparation de 1,Z-àiacetyl-3-carbai,iyl-4-wetliyInovobio- se (XI).= une fraction de 2,35 gr (0, 01 mole) de 3-carbamyl- ,
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4-ihéthylnovobiose est ajoutée à 15 cc d'anhydride acétique et 12 gr d'acétate de sodium et le mélange est chauffé à- 10U C pendant environ 1 lifurc. Le lI1r'lan:;c]rp.D.ctiollnel refroidi estdilué avec 30 cc de glace et d'eau et neutralise à l'aide de sodium. le produit est extrait dans du chloroforme, quj
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est lavé A l'eau ct ;J<Fch<5. Par liniuut.i.ott du chloroforme, on obtient de la l,-diac6tyl-3-carbnmyl-4-mothylnovobiose (XL).
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Pr,i-Daratioil de chlorure de, 2-acétyl-3-cai?t>iimyl-lp-inéthylnovobiosyle (XII).- une solution de 1,Ô gr inole) de 1,2-diacretul-3-carbamyl-r-nuthy7.uovobîose (XI) dans 40 cc d'éther anhydre et ¯sat:urce .(à -,uwd.rou .Ua) a:ve.c -du i7¯rtrure :d hydregène -iiiliyd-re- La -réactioil eati..waitiveune. à la température de la -glace perWaut:.une période pro.1-ongéei L'other et l'excès -de 'chlorure d'hydrogène sont éliminés sous pression réduite. les dernières traces sont éliminées par dissolution de résidt dans du benzène et séparation sous pression réduite, en sorte qu'on obtient le produit XII.
EXEMPLE 6. -
Préparation de novobiocine.-
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A. - Préparation de 3- ( 3-r , -diméthyla7.l,y:l.7 -acétoxybenzarrüdo)-. 7-dihyd.roxy-b-méthylcountarine (IX).- Une suspension de 12,1- gr (0,U5 mole) de chlorhydrate de 3-atttino-+,7-dihydroxy-.-ntcahylcoumarine .(V) dans 100 cc d'eau contenant 16 gr d'acétate de sodium est traitée .par portions avec 13,4 gr (0,05 mole) de chlorure de 3-(#,
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0' -diméthylallyD-4-acétoxybenzoyle (VIII) tandis que le mélange est agité. Le mélange est agité pendant environ 1
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heure après 7.'addition finale de cltl.or.ure d'acide. Le iriélange est acidifié jusqu'à -pli ;--, e.nviron avec de l'acide chlorhydrique.
Le produit (IX) est'sépare et purifié par recristallisât ion.
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13.-' lré:pirattoii-de-iiovobiocitie-(XIII).UtW solution de2,2 pr (0,00 mole) de 3-(3-/ , dimahylall.yl 4-accaoxybett.^ai:rido)--'r,%-dihydro.y- -tnéthyl- coumarine (IX) dans 50 cc de dioxane anhydre purifie est agitée, tandis qu'environ 4 gr de sulfate de calcium anhy-
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dre et 4, gr (U,U2t mole) d'oxyde d'argent sont ajoutés
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Le rttg"eß est protégé contre la lumière ." agité pendant 1, l'leuJ:lt!."" Une petite quantité d idb est ajoutée après quoi mi a3-ue' une- zoLutiàca1 der -1,9 gr-*(4,,Li)l mo:te) de. chlorure de -aeëty7-3-bamyl--tnéttlylnovotsyle (.L:C)1 dans 10 cc de dioxatin pure anhydre.. Le mélange 1réae;tJiollllsl est agité pendant x-7 le ures.
Le méiange est filtré pour éliminer,- les sous-prod.'uiirtls' insolubles et après réduction de l'excès d'iode av6r du bésu16ite de sodium, le filtrat est conesn- tré sous pression réduite. Le résidu est hydrolyse avec deux équivalents d'une solution diluée d'hydroxyde de sodium
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à teiiipératiure ambiaiite. La solution est lyophilisée et le résidu est lavé avec du méthanol ahaud, qui dissout le. ser7l. monosodiqas de uovobioei. Le sel sodique peutêtre cristallisé par dd3,iz.ü. de hlazène, ou bien l'acide libre peut t- tre précipité par addition successive d'acide acétique et d'eau.
EXEMPLE 7. -
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Préparation d'acide 3-(3-méthylbutyl)-4-hydroxyben'zoigue.Une solution de 3 gr de 3- %(-dimétliylallyl)- 4-hydroxybenzoate d'éthyle dans 50 cc d'éthanol est hydrogénée sur 0,5 gr d'oxyde de platine comme catalyseur. La quantité théorique d'hydrogène est absorbée en une heure. Après séparation du catalyseur par filtration, l'alcool est dis-
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tillé sous pression réduite; Le 3-(3-méhyl-butyl-l-hydro.y- benzoate déthyle est dissous dans 20 cc d'hydroxyde de sodium 4N et chauffé sur la vapeur pendant 4 heures. Après
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acidification avec de l'acide chlorhydrique,> le mélange est extrait avec de l'xther. L'extrait est séché sur sul- fate de magnésium, filtré et; concentré sous vide.
Le résidu est dissous dans du benzène chaud et du cyclohexane est a-
3-(3-méthylbutyl)-4-
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,jouté. Après refroidissement, l'acidc/hydroxybel1zoIgue est recueilli sur un filtre. Par recristallisation dans un mélan-
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ge de chloroforme et de cyclohexane, on obtient' des aiguil-. les incolores; P.F. 106-9 .
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Analyse : Calculé pour c12F11603 : G=69,20%a; x=7,75%o Trouvé : 0=, 9i; H==7,29%. EXEMPLE 8. -
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Préparation de dihydronovobiocine au départ d'acide 3-(3méthylb utyl-4-hydroxyb enz o iq ue . A.- Préparation d'acide 3-(3-méthylbutyl)-4-acétoxybenzol- que (VII A).- Un mélange de 10,4 gr (0,005 mole) d'acide 3-(3-
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méthylbutyl)-4-hyàroxybenzoique (VI A) et de 50 ce de pyri- dine est traité avec 10 cc d'anhydride acétique. Le mélange est maintenu à température ambiante jusqu'au.lendemain.
Le mélange est versé dans 300 cc dé glace et d'eau. Le mélange résultant est acidifié jusqu'à un pH d'environ 2 avec de l'acide chlorhydrique concentré. Le produit précipité est séparé et purifié par recristallisation dans de l'éther
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de pétrole '(P.E.85-lOÙ).
B.- Préparation de chlorure de 3- (3-nétliylbutyl)<-4-acétoxybenzoy7.e (VITl A).- -- ' Un mélange de 13 gr (0,05 mole). d'acide 3-(3-méthyl-
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butyl) -4-acétoxybenzoique (VII A) et de 50 cc de chlorure de thionyle est maintenu à température ambiante jusqu'au lendemain. La solution est concentrée sous pression réduite. Le résidu est dissous dans 50 cc de benzène anhydre et reconcentré à pression réduite, en sorte qu'on, obtient une résidu du chlorure d'acide désiré.
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C.- Préparation de 3-(3-/'3-m6thylbuty]y-4-acétoxybenzamido- 4 7-dihydroxy-$-iii(thylcownarinë (IX A). - ¯¯ ¯ une suspension de zur (0 05 mole) de chlorhydrate de 3-amitlo-4, l-dilydroxy-a-uf:l,hy7.coumaritle (V ) dans 100 cc d'eau contenant 16 gr d'acétate de sodium est traitée
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par fractions avec 14,3 gr (0,055 mole) de chlorure de
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3-(3-rttéthylbutyl)-4-acétoxybenzoyle (VIII L),taudis que le mélange est agite. Le mélange est agite pendant environ 1 heure après la fin de l'addition de chlorure d'acide.
Le mélange réactionnel est acidifié jusqu'à pH d'environ 2 à l'aide d'acide chlorhydrique. Le produit est séparé et purifié par recristallisation dans de l'isopropanol .
D. - Préparation de dihydronovobiocine (XIII A)
Une solution de 2,2 gr (0,005 mole) de 3-(3-3-mé-
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thy Ibuty'ß -4-ac'étoxy.benz all!ido '),-4,7 -dinydroxy- 8-méthy l-couma- rine (IX A) dans 50 cc de dioxane purifié anhydreest agitée,tandis que l'on y ajoute environ 4 gr de sulfate de calcium anhydre et 4,6 gr (O,Q2 mole ) d'oxyde d'argent. Une petite auantité d'iode est ajoutée,après quoi on ajoute une solution de 2,9gr (0,01 mole) de chlorure de 2-acétyl-3- car- bamyl-4-méthylnovobiosyle (XII) dans 10 cc de dioxane
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pur anhydre. Le"mélange réactionnel est il-it, pendant 5 à 10 heures. Le produit de réaction désire est récupéré du mélange réactionnel de .La manière décrite dans l'exemple 6B.
EXEMPLE 9.- Préparation de cyclonovobiocine au départ de 2,2-diméthyl-
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chroman-6-carboxylate.
A-.- Préparation de chlorure de ¯212:d1lltèycrmn:6:cro:' le (VIIIB).-
Un mélauge de 10,3 gr (0,05 mole) de 2,2-diméthyl-
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chroman-6=carboxylate (VII B) et de 50 cc de chlorure de thionyle est maintenu à tpperaturo autbi7ute jusqu'au lendemain. Le mélange est concentré sous pression réduite.
Le résidu est redissous dans 50 cc de benzène anhydre et
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reconcentré, de manière à produire un résidu de chlorure d'acide désire.
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B.- Préparation de ¯3: (, -il.!}é!:hilh± !.l.la!.!--saEb2xm!d2)= r,'7-dihydroxy-$-méthylcoumarine (IB).¯ Une suspension de 1.2,2: gr (, '):105 mole) de chlorhydrate de 3-amiuo-4,7-.dihydroxy--rrcthylcounariue (V) dans lU0 ac dreaur contenairt 16 gr d'acétate de sodium .est traitée par fractions avec 11, gr (0,055 mole) de chlorure de 2,2dimôthyl- chroman-6- c arbonjrle (VIIIB), tandis, que le mélange est agité. Le mélange est agité pendant une heure après la fin de l'addition de chlorure d'acide . Le mélange réaction.., nel est acidifié jusqu'à un pH d'environ 2 avec de l'acide chlorhydrique :Le produit est séparé et'purifié par écris- tallisatiou
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G.- rPêr!t1on e¯cyc1ono!obtQcn 1XI;C B)¯.
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Une solution de bzz2 gr (0,UU5 mole) de 3-(2y2;-d,iméthylchromatl-6-carUottrrido )-r, 7-dihydroxy-3-néthyl-coüma- ,rine IX B) dans. 50 ce de dioxeiie anhydre purifié est , , agitée, tandis qu'on ajoute environ 4gr de sulfate de
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c ; 1.c 1 w anhydre et 4 , à gr ( U , u2 mole) d'oxyde d'argent* ' Une petite auanbitG d'iode est àjouté e,,,après quoi on ajoute une sol.ut i.on de ,9 gr (uUl mole) de clilorure ;-l1cétyl-3carbamyl-4-11ltthylnovoIÜc'S,i le (XII) .dans 10 cc de dioxane anhydre nur. Le ni l[ll1r!:e réactionnel est agité pendant 5 à lU heures. Le produit do réaction d6s.Lré est récuporè du mélange réactiotntel de la nléJ.a.L8re ctécribe dans l'exeinpie 6B.
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Lï,.l;,1'LL lU. Pr6paration de 3-ac<'ta. :i.do-'l-(:3-carbantyl-l.-mthy7.novobiosyloxy) -lt-hyÔroxy-,;-rn8thylcoulllnr .Lue au départ de chlorhydrate de 3-anritio-47-dirtydzoxy- -ottliylcounmriue .
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A.- Préparation de 3-acrStam.Ldo-J-ac0toxy':'LI--hydro:h.7-S"mcthy7.com:ariue (V-).- ¯ - - - - ¯ ¯ . .. - ¯ Une solution de 2 gr de chlorhydrate de 3-amino-
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r,7-dihydrbay-L-mC.thylcouoarine JV) d!!l1S 4U cc de pyridine est traitée avec 6 cc d'anhydride acétique , La solution est maintenue à température ambiante jusqu'au lendemain.
Le m@lange rêactionnel est versé dans environ 400 cc de glace et d'eau. Le mélange résultant est acidifié jusqu'à un pH d'environ 2 avec du HCl concentré et extrait avec du chloroforme. La couche chloroformique est concentrée jusqu'à siccité sous pression réduite. Le produit résiduel 'est purifié par recristal Lisation dans de l'acétate d'éthy- le.. : -
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B. Préparation de 3-actamido-4.,'Ï-d:i.hydroxy-F-méthylcoumarine -(V B) Une solution de 10,0 ger de 3-aciftainido-7-aoétoxy- 4-hydroxy-e-hlÓthylcoumarine (V A) dans 120 cc de NaOH TN , ,est chauffée à 50 pendant 30 minutes. La solubion est refroidie et acidifiée jusqu'à un pH d'environ 2, avec du
HCl concentré .
Le précipité' est filtré et lavé à l'eau.
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Le nroduit est purifié par recris1.a1.lsntion dans du dioxane.
C. Préparation de 3-acétamido-7-(3-carba)uyl-4-méthylnovobio szl.o 1 ) = 4=hy< < roµyd8=1!iF,thylco L1wag ine ¯ ( llII¯C ) . ¯ -- l Une solution de 1,:5 gr (0,UU5 mole) de 3-acétamido-4'l-dihyJroxy-E:-nv th;lcomrarine (V B) dans 5U cc de diox:1n anhydre nurifié est agité tnnc1 Ls qu'environ 4 sur de sulfate de calcium et 4,6 gr (U,02 mole) d'oxyde d'ar-
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gent sont ajoutas . Une ncbibe ftu:m1; LU d'iode est ajoutée nl)r(',-s quoi ou ajoute une 'jn1.nt.i.nn dr c ,1 , <J ier (u,U7. mole ) de c?il,orL1r<. de 2¯ac tyl.-3--cr,rl3:,myl.-r-iathyl.awob.i.osyle (,CIl) dans 10 cc de dioxiiin anhydre pur . -ue inél¯;n;o rt'-actionu01...
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-est agité pendant 5 à 10 heures, Le produit de réaction désiré est récupéré du mélange réactionnel de la manière décrite dans l'exemple 6B.
REVENDICATIONS .-
1.- Composés choisis dans le groupe comprenant la cyclonovobiocine et la 3-acétamido-7-(3-carbamyl-4-méthyl.-
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novobiosyloxy)-4-hydroxy-8-méthylcoumarine .
2.- Gyclonovobiocitxe .
3.- 3-ae6tatriido-7-(3-carbaitlyl"4-inéthyltiovobiosyloxy 4'hydroxy-8-métliyieouTiiariiie 4.- Procédé dans lequel on fait réagir de la 3-acylamido-4,7-dihydroxy-8-utétktylcoumnrine avec un chloru' re de 2-acyl-3-càrbamyl-4-inéthyliio vobiosyle en présence d'oxyde d'argent et on soumet le produit de réaction résultant à une .hydrolyse-avec une base, de manière à produire un composé .de formule
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dans laquelle R représente un groupe acyle .
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.