BE593853A - - Google Patents

Description

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  "Nouvelles substances antibiotiques et leurs procédés de prépa- ration."      
La présente invention est relative à de nouvelles substances antibiotiques et à leurs procédés de préparation. 



  Dans les brevets belges N  581.408 et n* prov.   471.009,   la de- manderesse a décrit la production de la rifomyoine antibiotique par fermentation d'une souche de   Streptomyces   mediterranei. 



  Corme signalé dans les brevets précédents, le rifomyoine est un mélange de diverses substances ayant un degré élevé d'activité antibiotique, Une de ces substances, qui a été appelée   rifomycine   B, est le composé de départ de l'antibiotique qui fait l'objet 

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 du présent brevet. 



   Bien que très stable pendant une longue période de temps lorsqu'elle est emmagasinée sous forme de poudre cristalline, le   rifomyoine   B tend à subir une certaine transformation lorsqu'elle est dissoute dans de l'eau, comme telle ou sous la forme de ses sels et emmagasianée en présence d'air. Bien qu'il soit connu que plusieurs antibiotiques, lorsqu'ils sont dissous ou mis en suspension dans de l'eau, soient rapidement instivés en don- nant des produits de décomposition n'ayant aucun intérêt prati- que, on a trouvé de façon surprenante que la rifomyoine B subit une conversion en une nouvelle substance antibiotique, qui est de loin plus active que la rifomycine B elle-même, et que la demanderesse à nommé rifomyoine S.

   Bien que le mécanisme de cette phase ne soit pas totalement compris, on suppose que la conversion de rifomycine B en   rifomyoine   S comprend un processus oxydant provoqué par la présence d'oxygène atmos- phérique. 



   La rifomycine S àson tour, lorsqu'elle est soumise à un processus réducteur très modéré, par exemple par traitement avec de l'acide ascorbique, est convertie en une nouvelle subs- tance antibiotique qui est également beaucoup plus active que la   rifomyoine   B et qui a reçu le nom de la rifomycine SV. 



   Par une variante du processus décrit ci-avant, la rifo- myome S intermédiaire peut être préparée en soumettant la ri- fomycine B à l'action d'une classe d'agents oxydants, tels que l'eau oxygénée ou l'acide nitreux, dens un solvant qui est habi- tuellement un alcool alipetique inférieur dilué sous des condi- tions fortement acides. On a également noté qu'en mettant en oeuvre cette oxydation à un pH à peu près neutre, on obtient une nouvelle substance antibiotique, appelée rifomycine 0 par la demanderesse et qui, lorsqu'elle est laissée au   renos   dans le même solvant que celui dans lequel l'oxydation a eu lieu, 

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 subit une conversion lente en rifomycine S sous l'action d'acides minéraux ajoutés.

   Cette dernière rifomycine est ensuite convertie en rifomycine SV par une réduction modérée grâce au processus décrit précédemment. 



   Un but de la présente invention est de procurer la nouvelle substance antibiotique très active, la rifomycine SV Un autre but est de décrire des procédés par lesquels cette rifo. mycine SV est préparées par des transformations chimiques en partant de la rifomycine B antibiotique déjà connue. D'autres buts de l'invention consistent à prévoir les substances anti- biotiquement actives, rifomycine S et rifomycine 0, qui sont formées au cours de la conversion de rifomycine B en rifomycine SV. D'autres buts encore de l'invention apparaîtront de la des- cription suivante . 



   Suivant une forme de réalisation de l'invention, la rifomycine B est mise en suspension dans de l'eau, une quantité équivalente d'un hydroxyde de métal alcalin est ajoutée et le mélange est laissé au repos pendant une période de 15 à 20 jours à la température ambiante en présence d'air atmosphérique. Après acidification, le mélange est extrait avec un acétate d'alkyle inférieur, l'extrait organique est évaporé jusqu'à un petit volu- me et versé dans une grande quantité d'éther de pétrole. Le rifo- mycine S brute précipitée est recueillie. La pfication peut être mise en oeuvre par un partage à contre-courant, en utilisant un mélange de tampon phosphate de pH 7,6, de butanol, et de   ligrolne,   dans le rapport 1/1/0,25, dans un appareil Craig à 200 tubes.

   Après 170 transferts, l'activité microbiolgique maxi- mum se présente aux eviroons du 160me tube. Ou bien, avec un système éther de pétrole-chloroforme-méthanol-eau, dans un rapport de 25/15/25/5, le maximum après 194 transferts se pré- sente aux environs du 102me tube. 



   La rifomycine S est une poudre cristalline jaune-oragne, 

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 fondant à 180 -182 [Ó]2D + 476 (o : 0,1, méthanol) . Elle n'est pas soluble dans l'eau et dans les acides minéraux di- lués ; elle se dissout lentement dans des hydroxydes de métaux alcalins, en donnant une coloration rouge-violet. Elle est moyennement soluble dans le méthanol, l'éthanol, l'aoétone, l'acétate d'éthyle, moins soluble dans l'éther diéthylique et très légèrement soluble dans l'éther de pétrole. Elle donne des réactions Tollens, Fehling et au chlorure ferrique positi- ves.

   Dans les zones ultraviolette et visible du spectre, elle   montre les maxima suivants dans du HC1 0,1N 279 m  (E1cm 1 cm     329),   340 m  (E1cm 117) et 401 m  (e1mm   84).   Dans un tampon phosphate au pH 7,3, les maxima sont à 317 m  (e1cm   424) et à 525 m  (e1cm 62), voir figure 1 : laligne en   trait plein se rapporte au cas du tampon phosphate, tendis que la ligne en trait interrompu se rapporte au cas du HC1 0,1N Par essai potentiométrique, elle montre un seul groupe acide faible avec un pK d'environ 7,1 (poids équivalent de 685). 



  La rifomycine S a la propriété d'apparaître en deux formes cir tallines différentes ; cependant, aucune règle déterminée n'a été découverte pour l'obtention sélective de l'une ou l'autre forme. 



   Le solvant de   cristallisation)par   exemple, n'a pas d'influence sur la forme cristalline. Sur des échantillons obte- nus à partir de méthanol, le spectre infrarouge d'une forme, que l'on appelle ici "forme A", montre les maxima suivants exprimés en   cm -1 :   3480,3365, 2925 (nujol), 2850 (nujol), 1728, 1702, 1643, 1622, 1600, 150,1467 (nujol), 1418,1377 (nujol), 1325, 
918 1265, 1200, 1183, 1160, 1118, 1095, 1070, 1024, 977, 948,/895, 
432 877 850, 833, 822, 790, 765,743 721,685. Le spectre infra- rouge est montré à la figure 2 (forme A dans du nujol). 



   Le spectre infrarouge de l'autre forme cristalline de rifomycine S (forme B) montre les maxima suivants exprimés en 

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 cm-1 3410, 3340, 2920, (nujol), 2850 (nujol), 1732, 1664, 
1655, 1640, 1622,1598, 1502, 1467 (nujol), 1410, 1390, 1378, (nujol), 1320, 1267, 1240, 1200, 1177, 1163, 1129, 1112, 1100, 1087, 1076, 1055, 1033, 1006, 987, 963 935, 920, 886, 837, 825, 805, 789,784, 765, 740, 735, 730, 718, 664.Le spectre in- frarouge de la seconde forme cristalline de rifomyoine S est donné à la figure 3. 



   Une analyse de composé donnait : C :   63,34%;   H :   6,79%;   N :   2,18%;   0 :   27,8%;   OCH3 4,5%; Coca 3 :   6,la±.   De ceci, la formule empirique approximative suivante peut être explicitée: C37H45-49NO12 
Par traitement avec de l'anhydride acétique dans de la pyridine, on obtient une rifomyoine S monoacétyle d'un point de fusion de   151 -153 C.   



   La substance antibiotique intermédiaire rifomyoine S peut encore être préparée, comme signalé ci-avant, par l'inter- médiaire de la substance antibiotique rifomyoine 0. A cet effet, la rifomyoine B est dissoute dans un mélange d'un alcool ali- phatique inférieur et d'acétone, et traitée à environ c  avec une solution aqueuse d'un nitrite de métal alcalin. Une solu- tion aqueuse à   10%   de HC1 est ensuite lentement ajoutée sans dépasser 10 A la fin de l'addition, la solution contenant la rifomycine 0 est laissée au repos pendant 8 à 9 heures à envi- 0-10 C, de sorte que la rifomycine 0 est convertie en rifomy ne S. 



   Si on désire isoler la rifomycine 0, la réaction pré- cédente ou une réacon oxydante similaire peut être mise en oeuvre en l'absence de solvants qui sont capables de dissoudre la rofimycine 0. Dans le cas précédent,   l'acétone   peut être omise, de sorte que la rofomycine précipite, lorsque la solu- tion aqueuse à 10% de HC1 est ajoutée à un pH seulement légère- 

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 ment acide. Les cristaux sont recueillis et séchés. 



   La rifomyoine 0 est une poudre cristalline jaune claire,' qui se décompose à   160 C   et ne fond pas en dessous de 300 C [Ó[20D 71,5 (C:1 dioxane). Elle est pratiquement insolu- ble dans l'eau et les acides minéraux diliés, lentement soluble dans les hydroxydes de métaux alcalins aveo une coloration rouge-violet intense. Elle est légèrement soluble dans le métha- nol, l'éthanol, l'acétate d'éthyle, et moyennement soluble dans   l'anétone.   La rifomyoine 0 donne des réactions au Fec13 Fehling et Tilens positives. Elle a un caractère faiblement   acide :   lors d'un essai potetionétrique dans du méthanol aqueux, elle montre deux groupes acides faibles (Pk1 1/2, 7,7 ; PK2 1/2 10,75). 



   Le spectre ultraviolet de la rifomyoine 0 dans du métha- nol montre des maxima à   226 yu   (E1cm 365), à 273 m  (E1cm 440) et à 370 m  (e1cm 60 voir figure 4. 



   Le spectre infrarouge montre les maxima suivants, ex- primés en cm 3380,3100, 2925 (nujol), 2850 (nujol), 1822, 1728, 1682, 1660, 1635, 1605,1513, 1465 (nujol), 1418, 1382 (nu- jol), 1347,1310, 1257, 1212, 1187, 1174, 1137, 1120, 1100, 1084, 1072, 1025,980, 952,925, 910,896,   846,   820, 793, 783, 757, 725, 60.Lespectre infrarouge est montré à la figure 5. 



   Le maximum à 1822 cm-1 est très caractéristique et sa disposition graduelle peut être considérée comme une mesure de la conversion de la rifomyoine 0 en rifomyoine S au cours de la réaction décrite ci-avant. 



   Une analyse du composé donnait : C : 62,53%; H :   6,46%;   N :   1,74%;   0 : 29.37%; OCH3   4,23%;     COCH3 :     5,59%.   De ceci, la formule empirique approximative suivante pourrait être estimée :   C39H47-51   NO 14 
Par traitement avec de l'anhydride acétique dans de la pyridine, on obtient de la rifomyoine 0 monoacétyle d'un point avec de fusion de   203-205'C.   Lorsqu'elle est traitée/de l'acide ascor- bique, la rifomycine 0 donne la rifomycine B en une bonne produc- t ion. 

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   Comme signalé ci-avant, la dernière phase de la prépa- ration de rifomycine SV est la réduction modérée de rifomycine S. Cette réduction est facilement mise en oeuvre par mise en con- tact d'une solution de rifomycine S avec de l'acide ascorbique. 



  Par exemple, à une solution de rifomyoine S dans un   mélange   d'eau et d'un alcool aliphatique inférieur, on ajoute une solu- tion aqueuse d'acide ascorbique. Par un processus plus direct, le mélange de réaction provenant de la conversion de rifomycine B en rifomycine S par l'intermédiaire de la formation de rifo- myoine 0, et oonsistant en une solution acide de rifomycine S dans un mélange acétone-eau-alcool aliphatique Inférieur, peut être direotement traité avec de l'acide ascorbique, ce qui assu- re ainsi une préparation très convenable de rifomyoine SV sans isolement des substances intermédiaires. En tout vas la rifomy- cine SV peut être extraite avec un solvant non miscible à l'eau, dans lequel la rifomycine SV est soluble, tel que le benzène, un acétate d'alkyle, un alcool aliphatique insoluble dans l'eau, etc.

   Par concentration de l'extrait dens le vide dans un courant d'azote, on obtient de la rifomycine SV pure. apparaît 
La rifomycine SV spous forme de cristaux bril- lants, jaune-orange, qui tendent à s'assombrie lorsqu'ils sont exposés à l'air et avec chauffage. Elle se   décompose  environ 
20 140  et ne fond pas en dessous de 3300 =-4 (c: 1,   métha-   nol). Elle est un acide monobasique moyennement forte (pK 1/2, 2,7) qui se dissout facilement dans des bicarbonates alcalins et est très légèrement soluble dns les   soldes   minéraux dilués. 



  Elle est très soluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, l'acétate d'éthyle, soluble dans l'éther diéthylique et légè rement soluble dans l'éther de pétrole. La rifomycine SV donne des réactions au FeC13 Tollens et Fehling positives. Dans les zones ultrav-iolettes et visibles du spectre , elle montre les maxima suivants dans un tampon phosphate à un pH de 7,3 : 223 m    (E1Cm 565), 314 ?Il (E1cm 309) et 445 ?Il (e10cm 188) voir 1cm 1cm 1cm   

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 figure 6. Le spectre infrarouge montre les maxima suivants ex- primés en cm1 3440, 2925 (nujol), 2845 (nujol), 1700, 1658, 1605, 1545, 1463 (nujol), 1415, 1378 (nujol), 1325, 1290, 1260, 1218, 1197, 1164, 1125, 1115, 1102, 1083, 1050,1020, 776, 962, 
930 150 960,/915, 898, 871, 845, 830, 801, 785, 772,   760,/717,   703.

   Le spectre infrarouge est montré à la figure 7. 



   Une analyse du composé pur donnait : C :   62,85%;   H :   7,15%;     N :   2,08%; OCH3   4,4%;   COH3 6,15% De ceci, la for- mule empirique suivante pouvait être estimée : C37H47-51NO12 
Par traitement avec de l'anhydride acétique et de la pyridine, la rifomyoine 3V donne un dérivé triaoétyle d'un point de fusion de 23-4236 C 
Avec des métaux alcalins et alcalino-terreux, la rifo-   myoine   SV donne des sels neutres. Des sels stables sont formés également avec des bases organiques, tels que la dibenzylamine, la   dibenzyléthylènediamine,   la quinine, le 2-méthlaminoheptane, le 1-p-chorobenzyl-2pyrodyméthyl-benoimdazole le pipéri- dine, la pipérazine, -la procaïne, etc. 



   L'activité antibactérienne exceptionnellement élevée de la rifomyoine SV est montrée par le tableau suivant, qui donne la concentration inhibitrice minimum en /ml contre une série de micro-organismes pathogènes. 



   TABLE.AU   Microorganismes   
 EMI8.1 
 
<tb> M <SEP> puegenes <SEP> var.aureus <SEP> ATCC <SEP> 6538 <SEP> 0,0025
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> M. <SEP> pyogenes <SEP> var.aureus <SEP> ATCC <SEP> 13301 <SEP> 0,005 <SEP> - <SEP> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> M. <SEP> pyogenes <SEP> var.aureus <SEP> ATCC <SEP> 9144 <SEP> 0,0025
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> M <SEP> pyogenes <SEP> var. <SEP> albus <SEP> ATCC <SEP> 12228 <SEP> 0,0025
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> S. <SEP> pyogenes <SEP> var. <SEP> Aureus <SEP> grey <SEP> Weinstein <SEP> 0,0025
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> S <SEP> fazcalis <SEP> ATCC <SEP> 10541 <SEP> 0,025
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> S. <SEP> faecalis <SEP> ATCC <SEP> 7830 <SEP> 0,$
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> S.

   <SEP> haemolyticus <SEP> C <SEP> 203 <SEP> 0,001
<tb> 
 

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 EMI9.1 
 
<tb> S. <SEP> mastitidis <SEP> ATCC <SEP> 7077 <SEP> 0,025
<tb> 
<tb> 
<tb> S <SEP> bovis <SEP> ATCC <SEP> 9809 <SEP> 0,01
<tb> 
<tb> 
<tb> Neisseria <SEP> oatharralis <SEP> ATCC <SEP> 8176 <SEP> 0,01
<tb> 
<tb> Neisseria <SEP> gonorrhoeae <SEP> ATCC <SEP> 9826 <SEP> 0,01
<tb> 
<tb> 
<tb> Diplooooous <SEP> pneumoniae <SEP> XXXVII <SEP> L <SEP> 0,0025
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Saroina <SEP> lutea <SEP> ATCC <SEP> 9341 <SEP> 0,1
<tb> 
<tb> Saroina <SEP> aubflava <SEP> ATCC <SEP> 7468 <SEP> 0,01
<tb> 
<tb> 
<tb> M. <SEP> flavus <SEP> ATCC <SEP> 10240 <SEP> 0,005
<tb> 
<tb> 
<tb> B. <SEP> aubtilia <SEP> ATCC <SEP> 6633 <SEP> 0,025
<tb> 
<tb> 
<tb> B. <SEP> oereus <SEP> ATCC <SEP> 10876 <SEP> 0,25
<tb> 
<tb> 
<tb> B.

   <SEP> anthraoia <SEP> 0,05
<tb> 
 
 EMI9.2 
 Clostridium parfrigens ATCC 3226 0,025 Klebsle11a pneumoniae ATCC 10031 25 Klebsiella pneumoniae oapsulata 100 Esoherâchia ooUtoleod ATCC 10536 50 Pseudmmonas aerigàmone Gottlieb 50 Pseudomones fluorescens ATCC 11251 25 
 EMI9.3 
 
<tb> Proteus <SEP> vulgaris <SEP> X <SEP> 19 <SEP> H <SEP> ATCC <SEP> 881 <SEP> 50
<tb> 
<tb> Proteus <SEP> morganil <SEP> ATCC <SEP> 9237 <SEP> 50
<tb> 
<tb> 
<tb> Proteus <SEP> rettgeri <SEP> ATCC <SEP> 9919 <SEP> 50
<tb> 
<tb> 
<tb> Shigella <SEP> sonnei <SEP> ATCC <SEP> 9290 <SEP> 200
<tb> 
 
 EMI9.4 
 Shigella àysenteriae ATCC 9583 50 
 EMI9.5 
 
<tb> Salmonella <SEP> typhi <SEP> 150
<tb> 
<tb> Salmonella <SEP> paratyphi <SEP> 200
<tb> 
<tb> Salmonella <SEP> schottmuellerü <SEP> ATCC <SEP> 9149 <SEP> 200
<tb> 
<tb> Brucella <SEP> abortus <SEP> 5
<tb> 
<tb> Brucella <SEP> melitensis <SEP> ATCC <SEP> 

  4309 <SEP> 2,5
<tb> 
<tb> Pasteurella <SEP> pestis <SEP> ATGC <SEP> 87 <SEP> NIH <SEP> 10
<tb> 
 
 EMI9.6 
 Myaobacterium ranae 2 Myoobacterium phlei ATCC 10142 0,01 iycobacterium minetti 5 Hycobaoterium sp. 607 5 

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 EMI10.1 
 
<tb> Nocardie <SEP> assteroides <SEP> 50
<tb> 
<tb> Mycobacterium <SEP> tuberoolosis <SEP> var.hominis <SEP> H <SEP> 37 <SEP> Rv
<tb> 
<tb> ATCC <SEP> 9360 <SEP> 0,05
<tb> 
<tb> Candida <SEP> albicans <SEP> ATCC <SEP> 10231 <SEP> 200
<tb> 
<tb> Trichophyton <SEP> mantagrophytes <SEP> ATCC <SEP> 8757 <SEP> 200
<tb> 
 
Les exemples suivants illustrent l'invention. 



     EXEMPLE   1 
Une suspension de 10 gr de rifoxmycine B dans de l'eau (10 litres) est traitée avec une quantité   stoechiométrique   de soude caustique, de sorte qu'on obtient une solution du sel   monosodique   de rifomyoine B avec un pH de 4,1. Après 20 jours à la température ambiante, la solution est réglée à un   pH   de 2,2 par l'addition d'acide chlorhydrique, et extraite avec de l'acétate d'éthyle. L'extrait est évaporé jusqu'à environ 50 ml. 



  La   rifomyoine   B cristallisée non altérée est enlevée par filtra- tion et le filtrat est versé dans environ 2 litres d'éther de pétrole. Le précipité brut est recueilli et purifié par un partage à cntre-courant dans un appareil Craig à 200 tubes, en utilisant un mélange de tampon phosphate de pH 7,6, de   butbnol   et de ligroine, dans un rapport de 1/1/0,25. Après 170 trans- ferts, l'activité la plus élevée est voisine do 160me tube. Le solvant issu des 155me à 165me tubes est évaporé jusqu'à siccité en donnant la rifomycine S brute. 



   EXEMPLE 2 
A une solution de 10 gr de rifomycine B dans 2000 ml de méthanol, on ajoute 3000 ml d'eau, puis 100 ml d'une solu- tion à environ 40% d'eau oxygénée dans de l'eau. Après chauffage à 45-50 C pendant 30 minutes, le mélange est refroidi à 0 C Les cristaux précipités sont recueillis et séchés à 40  sous le vide. Production : 6,5 gr de rifomycine   0 .   



   EXEMPLE 3 
A une solution de 10 gr de rifomycine B dans 1000 ml de 

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 méthanol, on ajoute une solution de 50 gr de nitrite de sodium dans 250 ml d'eau, puis la quantité stoechiométrique d'acide chlorhydrique à 10% jusqu'à une réaction légèrement acide (pH d'environ 4). La rifomycine 0 précipite au cours de l'addi- tion d'acide. Après refroidissement à 0 C le précipité est re- cueillie et séché. Production :9 gr de rifomyoine 0. Par cris- tallisation dans du méthanol, on obtient 8,5 gr de rifomycine 
0 pure. 



     EXEMPLE   4 
Une solution méthanolique contenant environ 1000 /ml de rifomycine 0 est diluée avec 10 volumes d'eau et réglée à un pH de 3. Après quatre jours à température ambiante, la plus gran de partie du méthanol est enlevée par distillation sous un vide élevé à 25 et le mélange résiduaire est extrait avec de l'ecéta- te d'éthyle. Le solvant est concentré sous le vide jusqu'à un petit volume et versé dans de l'éther de pétrole. Par un   partege   à contre-courant avec un mélange éther de pétrole-chloroforma- méthanol-eau, dans un   rapport   de 25/15/25/5, après 194   transfert   on trouve le maximum au 102me tube. Les tubes du 85me eu 115me sont distillés sous un vide élevé jusqu'à un petit volume.

   Le résidu aqueux est extrait avec de l'acétate d'éthyle, ce qui, lors d'une concentration jusqu'à siccité, donne la rifomycine S brute. 



     EXEMPLE   5 
A une solution de 10 gr de rifomycine B dans un mélange de 1000 ml de méthanol et de 2000 ml d'acétone une solution de 50 gr de nitrite de sodium dans 500 ml d'eau est ajoutée à 0 C Graduellement et avec refroidissement extérieur, 2500 ml d'acide chlorhydrique aqueux   à,10%   sont introduits, ce qui provoque la formation de rifomycine 0 qui est maintenue en solution par la présence d'acétone. Du fait de la forte acidité du milieu, la rifomycine 0 est graduellement transformée en rifomycine S; 

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 la oonversion est totale en 8 heures environ à une température de 0  à 5 C. Le mélange de réaction est versé dans une grande quantité d'eau et extrait avec de l'acétate d'éthyle.

   L'extrait est lavé à fond à l'eau, concentré sous le vide jusqu'à un volu- me d'environ 50 ml et versé dans environ 500 ml d'éther de pé- trole. La rifomyoine S est recueillie. et cristallisée dans du méthanol. Production : 6,5 gr. 



   EXEMPLE 6 
A une solution de 10 gr de rifomycin S dans 500 ml d'éthanol, on ajoute une solution de 10 gr d'acide ascorbique dans 60 ml d'eau. Après 10 minutes, on ajoute   3000   ml d'eau et le mélange est extrait avec du benzène. Lors d'une concentra- tion de l'extrait au benzène, le   ritomyoine   SV cristallise et est recueillie et recristallisée dans du benzène. 



   EXEMPLE 7 
Une solution de 10 gr de rifomycine SV dans 200 ml d'eau est traitée avec une quantité stoechiométrique d'une solution à 10% de soude oaustique en présence d'une petite quantité d'es- corbate de sodium qui empêche l'oxydation de rifomycine SV en rifomyoine S. Par l'addition de 20 gr de phosphate monosodique, le sel sodique de rifomycine SV précipite. Production 9 gr. Il est soluble dans l'eau dans un rapport 1/40 poids/poids, et et très stable en solution aqueuse au pH neutre, spécialement en présence d'ascorbate de sodium. 



   EXEMPLE 8 
A une solution de rifomyoine B (10 gr) dans un mélange de 1000 ml de méthanol et de 2000 ml d'acétone, on ajoute à 0 C une solution de 50 g± de nitrite de sodium dans 500 ml d'eau, puis 2500 ml d'acide chlorhydrique aqueux à 10% ajouté graduelle- ment et avec refroidissement extérieur. A la fin de l'addition d'acide, le mélange est laissé au repos pendant 8 heures à 0  5 C puis on ajoute 30 gr d'acide ascorbique.. Après 10 minutes, 

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   le mélange est versé dans 5000 ml d'eau et extrait avec du benzène. Par concentration du solvant, la rifomycine SV cristallise sous forme pure. 



  EXEMPLE 9 Dix grammes de ritomycine B sont traités comme décrit dans l'exemple 8, sauf qu'à la fin de l'addition d'acide et qu' après que le mélange a été laissé au repos pendant 8 heures à 0-5 C il est versé dans 30 litres d'une solution aqueuse tamponnée au pH 7 et contenant 20 gr d'asoorbete de sodium. En même temps, la soude caustique est ajoutée afin de maintenir le pH neutre. Le sel sodique de rifomyoine SV est ainsi formé dans la solution. Après acidification, la ritomyoine SV est extraite avec du benzène et l'extrait est évaporé jusqu'à un petit volume, de sorte que la rifomycine SV pure cristallise. 

**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.

Claims (1)

1. REVENDICATIONS 1. La substance antibactérienne définie 20 comme étant la rifomyoine S, fondant à 180-182 c ayant un ([Ó]20 d'environ + 478 (c : D,l, méthanol), insoluble dans l'eau et les acides minéraux dilués, se dissolvant lentement dans les hydroxydes de métaux alcalins avec une coloration rouge-violet, moyennement soluble dans le métanol, l'éthanol, l'acétone, l'acétate d'éthyle, peu soluble dans l'éther diéthylique et très légèrement soluble dans l'éther de pétrole, donnant des réactions, Tollens, Fehling et au FeC13 positives, montrant dans les zones ultraviolette et visible du spectre, les maxima suivants dans du HC1 0,1 N : 279 m (e1cm 329), 340 m (e1cm 117) et 401 m (e1cm 84) et les maxima suivants dans un tampon phosphate de pH 7,3 :

   317 m (E1cm 424) et 525 m (e1% 62), de nature 1cm 1cm acide avec i, pK d'environ 7,1, apparaissant sous deux formes cristallines différentes, dont l'une montre dans la zone infrarouge du spectre, les maxima suivants exprimés en c-1 3480, 3365, 2925 (nujol), 2850 (nujol), 1728,1702, 1643, 1622,1600, 1500, 1467 (nujol), 1418,1377 (nujol), 1325,1265, 1200, 1183, <Desc/Clms Page number 14> 1160, 1118, 1095, 1070, 1024, 977, 948, 918, 895, 877, 850, 833, 822, 790, 765, 743, 732 721, 685, et dont l'autre montre les maxima: 3410, 3340, 2920, (nujol), 2850, (nujol), 1732, 1664, 1665, 1640, 1622, 1598,1502, 1467 (nujol), 1410,1390, 1378, (nujol), 1320, 1267,1240, 1200, 1177, 1163, 1129, 1112, 1100, 1087, 1076, 1055 1033,1006, 987, 963, 935, 920,886, 837, 825, 805, 789, 784, 765, 740, 735, 730, 718, 664, et ayant la formu- le empirique approximative suivante :

   C37H45-49NO12 2. La substance antibactienne définie comne étant la rifomycine 0, se décomposait à 160 C et ne fondait pas en dessous de 300'C, ayant un [Ó]20D d'environ + 71,5 (c : 1, dio- xane), insoluble dans l'eau et les acides minéraux dilués, len- tement soluble dans les hydroxydes de métaux alcalins avec une coloration rouge-violet intense légèrement soluble dans le mé- thanol, l'éthanol, l'acétate d'éthyle, moyennement soluble dans l'acétone, donnait des réactions Tollens, Fehling et au FeCl3 positive, de nature acide avec pK1 1/2 7,7 et pK2 1/2 10,75, montrant dans la zone ultraviolette du spectre, des maxime à EMI14.1 226 mu (Ell% :

   365), 273 mu (Elp . 440) et 370 mu (elle 60) 1cm 1cm 1cm montrant dans la zone infrarouge duépectre, les maxima suivants exprimés en cm-1 3380, 3100, 2925 (nujol), 2850 (nujol), 1822, 1728, 1682,1660, 1635,1605, 1513,1465 (nujol), 1418, 1382 (nujol), 1347, 1310, 1257, 1212, 1187, 1174, 1137, 1120, 1100, 785 1084, 1072, 1025, 980,952, 925, 910, 896,846, 820, 793,757 725, 680, et ayant la formule empirique approximative suivante : C39H447-51 NO14 3.

   Un compté de la classe comprenant la substance anti- bactérienne: . définie comme étant la rifomycine SV, se décompo- sant à environ 140 C et ne fondant pas en dessous de 300 C ayant un [Ó]D20 d'environ -48 (c 1,5, dioxane), de nature acide avec pK 1/2 2,7, soluble dans les bicarbonates de métaux alcalins, très légèrement soluble dans les acides minéraux dilués, très <Desc/Clms Page number 15> soluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, l'acétate d'éthy- le, soluble dans l'éther diéthylique, légèrement soluble dans l'éther, de pétrole, donnant des réactions Tollens, Fehling et au Fec13 positives, montrant dans les zones ultraviolette et visible du spectre dans un tampon phosphate de pH 7,3, des maxi- ma à 313 m (E1% 1cm285) et 445 m (E1% 1cm 173), montrant dans la zone infrarouge du spectre, les maxima suivants exprimés en cm-1 3440,

   2925 (nujol), 2845 (nujol), 1700,1658, 1605, 1545,1463 (nujol), 1415, 1376(nujol), 1325,1290, 1260,1218, 1197, 1164, 1125, 1115, 1102, 1083, 1050, 1020, 776,962, 960, 930,915, 898,871, 845, 830, 801,785, 772,760, 750,717, 703, et ayant la formule empirique suivante : C37H47-51NO1e2 ainsi que ses sels par addition de bases organiques non toxiques.

   4. Un procédé de préparation du composé de le revendica- tion 1, qui comprend le mélange d'un composé de la classe compre- nant la rifomycine B et ses sels de métaux alcalins avec de l'eau, et la mise au repos de ce mélange pendant 15 à 20 jours en présence d'oxygène atmosphérique.

   5. Un procédé de préparation du composé de le revendica- tion 2, qui comprend la dissolution de rifomycine B dans un mé - lange eau-méthanol et l'addition à la solution d'un agent oxydant de la classe comprenant l'eau oxygénée et l'acide nitreux.

   6. Un procédé de préparation du composé de la revendica- tion 1, qui comprend le mélange d'une solution de rifomycine B dans un mélange méthanol-acétone avec une solution aqueuse de nitrite de sodium, 1'additond'acide chlorhydrique jusqu'à réac- tion acide, et la mise au repos du mélange à 0 0-5 C pendant environ 8 heures.

   7. Un procédé de préparation du composé de la revendica- tion 3, qui comprend le mélange d'une solution de rifomy- cine S dans un alcool aliphatique inférieur avec une solution aqueuse d'acide ascorbique, et la mise aurpos de la solution pendant environ 10 minutes à une température comprise entre 0 C <Desc/Clms Page number 16> et la température ambiante.

   8. Un procédé de préparation de la substance antibioti- que définie comme étant la rifomycine SV, qui comprend le mé- lange d'une solution de rifomycine B dans un mélange méthanol- acétone avec une solution aqueuse de nitrite de sodium à 0 C l'addition d'acide chlorhydrique jusqu'à réaction acide, la mise au repos du mélange pendant environ 8 heures à 0 -5 C l'addi- tion d'acide ascorbique au mélange, la mise au repos du mélange pendant environ 10 minutes à une température omprise entre 0 C et la température ambiante, et l'extraction de la solution avec du benzène.

   9. Un procédé de préparation du sel sodique de la subs- tance antibiotique définie comme étant le rifomycine SV, qui comprend le mélange d'une solution de rifomycine B dans un mélan- ge méthanol-acétone avec une solution aqueuse de nitrite de sodium à 0 C l'addition d'acide chlorhdrique jusqu'à réaction acide, la mise au repos du mélange pendant environ 8 heures à 0 -5 C le réglage du pH de la solution à 7, et l'addition d'as- corbate de sodium à la solution.