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Publication number: BE633874A
Authority: BE

Description


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  Nouveaux dérivés de la céphalosporine et procédé de préparation Faisant l'objet de deux   premières   demandes de brevet déposées en SUISSE, les 
21 juin 1962 et 
12 octobre 1962 
La présente invention est relative à un procédé 
 EMI1.1 
 de propagation da nouveaux dérivés 4-,rapetitiquement actifs de la céphalofipor-Jft-s C de formula 
 EMI1.2 
 
 EMI1.3 
 dans laquelle R représente un: reste aminc-arylique dont un groupe f'm1n"t.onc peut être lié avec le groupe Ciirboxy- Hquc '?a la chaîne lat4lc en donnant lieu à la forma- tion d'un anneau .c ;:w et de composas dans lesquels le u3.::,,;a.tc;, en piGY) 3 est., cvcc le groupe oarbo- ::;y11que en position 4. fermé en un anneau ll1ctone ainsi que des celz de ce3 crmY'5ii$. 

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   Le reste   arylique   est   un   reste mono- ou   poly-   nucléaire, par exemple un reste   naphtyle,   mais en parti- culier un reste phényle.Le reste   arylique   est substitué par un ou plusieurs groupes aminogènes, de préférence par 
2 ou 3 groupes aminogènes. L'anneau peut encore présenter d'autres substituants, par exemple des groupes NO2, des atomes d'halogène, des groupes alcoyles, alcoxy ou oarbal- ooxy inférieurs. 



   Les sels des nouveaux composés sont soit des sels d'addition acides, soit des sels métalliques, soit des sels avec des bases organiques tertiaires azotées, par exemple avec la triéthylamine ou la N-éthyl-pipéri- dine. Les sels d'addition acides sont, par exemple, ceux avec des acides inorganiques comme les hydracides   halogè-   nés, par exemple l'acide chlorhydrique   ou l'acide   bromhy- drique, avec les acides azotique,   thiocyanique,   sulfuri- que, phosphorique, ou avec des acides organiques comme les acides acétique, propionique, glycolique, lactique, pyruvique, oxalique, malonique, succinique, maléique, fumarique, tartrique, citrique, benzoïque, cinnamique, 
 EMI2.1 
 salicylique, 2-phénoxy-benzolque ou 2 acétoxy-benzoique, mandélique, méthane-sulfonique, é+;ha.ne-::mJ ron14ue;

   droxy- éthane-sulfonique, benzène'-stilfonlque , éthane-sulfonique, benzene-sulfonique ou tolu:ne-sul. oni.. que.. Les sels métalliques sont surtout ceux de métaux al- calins ou alcalino-terreux thérapeutiquement utilisables, comme le sodium, le potassium ou le calcium. 
 EMI2.2 
 



  Les nouveaux composés de la formule (I), leurs laokones et leurs sels possèdent une activité ant1bact- -'. x-.i9 v1::>à-vin ,.If; tl'l\:t,"¯1 ''. G[\r!) positif, par'exem- cI" 'is-à-v1- du Ihc:U..lus wb' 1115, du Bacterium megathe- 

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 rium et du Staphylococcus aureus, en particulier aussi vis-   à-vis   des souche  pénicilline-résistantes. Ils peuvent par suite être utilisés comme médicaments en médecine   hu- '        maine et vétérinaire ainsi que comme adjuvants à la nour- riture des animaux ou pour la conservation   d'alimenta.   
 EMI3.1 
 



  Sont particulièrement intéressantes la N-(2,-diaminoph5- nyl )-cphalo.3,vrln eC ou le lactame formé à partir de , celle-ci, l'acide 7['-(3'-oxo-6'-amino-l',2', ,'  tétranydro-quinoxal.n-2'-yl)-butyryl]-amino-céphalo- sporanique, et la N¯(2,4,6-triaminophényl)-oéphalosporine C et son lactame, l'acide 7-[iY-(3'-oxo-6l,8'-diamino-> l',',3','..tétrahydro-quinoxalin-2' yl)-butyrylj-amino- céphalosporanique, et leurs lactones et leurs sels. 



   Les nouveaux composés sont préparés suivant des méthodes connues en elles-mêmes. C'est ainsi qu'on les obtient en traitant par des agents réducteurs des dé- rivés nitro-arylés de la cephalosporine C de formule 
 EMI3.2 
 dans laquelle R1 représente un   reste nitro-arylique   et R2 représente de l'hydrogène ou un benzyle, ou les laoto- nes correspondantes, puis, si on le désire, en transfor- mant les composés libres obtenus en leurs lactones et/ou en leurs sels. 



   Des agents réducteurs sont, par exemple,   l'hydro - '   gène naissant ou l'hydrogène activé catalytiquement, de préférence de l'hydrogène activé avec du charbon au palladium. 

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   Les substances de départ sont connues ou peuvent être préparées suivant des méthodes connues en elles-mêmes . 



  C'est ainsi qu'on obtient par exemple les dérivés nitro- arylés de la céphalosporine C en faisant réagir de la ce    phalosporine   C sur des composés   nitro-aryliques   présen- tant un substituant échangeable, par exemple un atome 
 EMI4.1 
 d 'halogène ou un groupe ester de l'acide toluène-sultoni- que, en particulier sur le dinitrofluorobenzne ou le tr1nttrochlorobenzène. 



   Les nouveaux composés peuvent être utilisés com-   @   me   médicaments    par exemple sous la forme de préparations pharmaceutiques les renfermant, eux ou leurs sels, en mé- lange avec une matière de support pharmaceutique, organi- que ou inorganique, solide ou liquide, appropriée pour une application   entéi-ale,   parentérale ou topique. Pour la formation de cette matière de support, on envisage des substances ne réagissant pas sur les nouveaux composés, comme par exemple l'eau, la gélatine, le lactose, l'ami- don, l'alcool   stéarylique,   le stéarate de magnésium, le talc, des huiles végétales, des alcools benzyliques, des gommes, le propylène-glycol, des polyalcoylène-glycols, la vaseline, la cholestérine ou d'autres excipients connus. 



  Les préparations pharmaceutiques peuvent se présenter, par exemple, à l'état de comprimés, de dragées, d'onguents, de crèmes, de capsules, ou sous forme liquide à l'état de solutions, de suspensions ou d'émulsions. Le cas échéant, elles sont stérilisées   et/ou   renferment des substances auxiliaires, telles que des agents de conservation, de stabilisation, des agents mouillants ou émulsifiants, des   solubilisants   ou de. sels servant à faire varier la 

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 pression osmotique.

   Elle  peuvent aussi renfermer encore d'autres substances thériqetiquement   précieuses.   Les préparations sont obtenues suivant les méthodes   usuelles,  
L'invention concerne   également, à   titre de produits industriels   nouveaux,   les   composes   obtenue par la mise en oeuvre du procédé défini ci-dessus.      



     L'invention   est décrite plus en   détail   dans les exemples   non-limitatifs   qui suivant, dans lesquels les températures sont indiquées en degrés   centigrades.   

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EXEMPLE 1 Dans   20 om3   d'acide acétique glacial, on dissout 
 EMI6.1 
 100 mg (0,172 m.mole) de N-(2,4-dlnitrophényl)-oéphalospo- rine C et hydrogène à la température ambiante et sous la 
 EMI6.2 
 pression normale en présence des 200 mg d'un charbon à 10% de palladium. 



   Après absorption de 25,7 om3   (740   mm/25 )   d'hy   drogène au cours de 2 heures (5,9 moles d'hydrogène par mole   ae   substance), on débarrasse la solution réactionnel- le du catalyseur par filtration, la lave ensuite avec 100 cm3 d'acide acétique glacial et l'évapore sous un vide poussé. Le produit obtenu sous la forme d'une masse solide (66 mg, rendement:   73,5%)   est soluble dans l'acide 
 EMI6.3 
 acétique glacial, le diméthylformamide, l'acide ohlorhydri- que normal et une solution normale de bicarbonate de so- dium, moins bien soluble dans le méthanol et l'eau, et in- soluble dans l'éther de pétrole, le benzène, l'acétate d'éthyle, l'acétone et l'éthanol.

   Le composé est constitué 
 EMI6.4 
 par l'acide 7[y-(3'-oxo-'-amino-l',2',3',+'-tétrahydro- quinoxalin-2'-yl)-butyryl.j-amino-céphalosporanique de 
 EMI6.5 
 
 EMI6.6 
 La caractérisation a lieu par chromatographle sur . ^..L #=r et par chromatographie sn couche mince dans u ays - tt1J11e de 100 parties en VOU1re de butanol normal et de 10 

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 EMI7.1 
 parties en volume aa:e aotique glacial, système qui est saturé d'eau.   Le   chromatogramme sur papier est effectua sur du papier Whatman No. 1 et le chromatogramme en couche mince sur du gel de silice G suivant Stahl. 
 EMI7.2 
 
<tb> 
<tb> 
<tb> 



  Dérivé <SEP> de <SEP> la <SEP> chroma- <SEP> chroma- <SEP> Détection
<tb> 
<tb> céphalosporine <SEP> C <SEP> togramme <SEP> togramme
<tb> 
<tb> sur <SEP> en <SEP> couche
<tb> 
<tb> papier <SEP> mince
<tb> 
 
 EMI7.3 
 -(2, d.nitro- l a) couleur hényl) oéphalo- R. 0,73 Rr O,PO propre 
 EMI7.4 
 
<tb> sporine <SEP> C <SEP> b) <SEP> bio-auto-
<tb> 
<tb> gramme
<tb> 
<tb> avec <SEP> du
<tb> 
<tb> Bac <SEP> il <SEP> lus <SEP> 
<tb> 
<tb> subtilis
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> acide <SEP> 7-[-(3'-oxo- <SEP> a) <SEP> fluores-
<tb> 
 
 EMI7.5 
 '-amtno-l',2',', oenoe d'un '-tétrahydro- vert-bleu ulnoxalin-21-Yl)- Rf 0, 50 Rf 0,12 lors d'une butyryl]-arn1no- et excitation céphalospor'an1que Ru 0,22 avec une 
 EMI7.6 
 
<tb> radiation
<tb> 
<tb> de <SEP> 357 <SEP> mu
<tb> 
<tb> b) <SEP> p-diméthyl-
<tb> 
<tb> amino-benzal-
<tb> 
<tb> déhyde
<tb> 
<tb> o)

   <SEP> bio-auto-
<tb> 
<tb> gramme <SEP> avec
<tb> du <SEP> Bacillus
<tb> 
<tb> subilis
<tb> 
 La détection effectuée suivant b) avec du 
 EMI7.7 
 p-diméthylamino-benzaldéhyde est effectuée en arrosant la plaque avec une   solution h   un pour cent Clans l'acide acétique glacial. Il apparaît   aussitôt   des taches jaunes à rouges sur fond blanc. 



   Spectre d'absorption en ultra-violet (dans l'a- 
 EMI7.8 
 aide acétique glacial) de l'acide 7''['Y-'(3'"oxo-6'-amino- <1 '   2 ' > 3 ' , 4 - tétrahydro-quinoxalin-2 ' -yl ) -butyryl ] -araino- céphalosporanique: A Max 368 m (E 1 1% c m m 173) 

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 EMI8.1 
 et "'max 253 mu r 1 '" 223 j . 



  Dans un test de dilution (effectué pendant 24 heures à "IQ dans du bouillon'4glucomé), on obtient les concentration suivantes qui son encore inhibanteat pour le Staphylococcus aureua 20701 2 'Y/on!' pour le Staphylococcus aureus. 2999  * à 12 Vem3 du nouveau composé. A titre comparatif, on a les valeurs suivantes pour la céphalosporine C: 
 EMI8.2 
 pour le Staphyloccfcus aureus 2070: 60 - 100 y/om3 pour le Staphyloeoocus aureus 2999s 100 - 125 'Y/cm3. 



  Le nouveau composé est également actif in vivo* Sur dix souris inreot6e avec du Staphylocoooue aureua 10 (sensible à la pénicilline), huit Survivent le   dixième   jour de l'essai lorsqu'elles reçoivent au cours de 30 heures après   l'infection,   par voie   sous-cutanée,   cinq fois 10   mg/kg   du composé. Lors de la môme application, on observe trois survivantes pour une dose envisagée de 
 EMI8.3 
 5 mg/kg. S1:.1' 01, infecte 10 sauris avec la souche 2999 qui   résista     à   la pénicilline, toute les dix survivant alors le dixième jour lorsqu'elles reçoivent à cinq reprises 50   mg/kg   du nouveau composé et huit survivent pour une donc envisage!: de 25 mg/kg.

   Dans les mêmes conditions, 
 EMI8.4 
 on obtient, danJ le uac de la céphalosporPne C, les valeur suivantes pour le Staphyloco:1cuS aureus 10s pour 100 mg/kg chaque fois, 10 survivantes   pour   50 mg/kg chaque fois, 7 survivantes, pour 25 mg/kg chaque fois, 3 survivantes et pour 5   mg/kg   chaque fois, 1 survivante; 

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 pour le Staphylococcus aureus   2999=  pour chaque rois   lOOmg   par kg, 3 survivantes; les souris non-traitées meurent toutes au plus tard le quatrième jour. 



   EXEMPLE 2 
Dans 20 cm3 d'acide acétique glacial, on dissout   100   mg   (0,1314   mole) d'ester dibenzylique de la 2,4-di- 
 EMI9.1 
 nitrophenyl-oéphilosporlne C, puis hydrogène pendant une heure et demie à 25  sous une pression de 738   mm   de mer- cure, en ajoutant 200 mg d'un charbon à   10 %   de palladium. 



  Par mole de substance, 7,3 moles de H2 sont absorbées. 



  On sépare le catalyseur, le lave à   l'acétate   d'éthyle et évapore le   filtrat à   sec sous un vide poussé. On obtient 57 mg d'une matière amorphe, faiblement teintée en jaune. 



     Specture   d'absorption ultra-violet dans l'acide 
 EMI9.2 
 acétique glaai.a.a max 368 mu- (E i cm " 224) et ?1 max 252 mu- (E1 * - 242). max 1 om 
Le produit réactionnel est   chromatographiquement   identique au produit décrit dans l'exemple 1. 



   Pour purifier le produit d'hydrogénation brut, on le chromatographie sur une colonne de cellulose en utilisant comme éluant un mélange de butanol et d'eau. 



  La   celLulosc   est apportée sur la colonne par sédimentation et, préalablement à l'apport de la substance, on lave et équilibre pendant 6 jours avec un mélange de butanol et d'eau (95:5), à une vitesse de traversée de   3,8 à   4,4 om3 
 EMI9.3 
 par centimtre-arré et par heure. 



   On dissout   7,0 g   du produit d'hydrogénation dans peu d'acide acétique glacial, lyophilise en ajoutant 10 g 
 EMI9.4 
 de célite 545. DU!... tzrc,:,E: à Hce en une colonne d'une 

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 hauteur de couche de 120 cm et d'une section de 34 cm2. 



  On commence la répartition à la température ambiante avec      le   syctème   solvant utilisé pour l'équilibrage;   lavitesse   do traversée est de 130 cm3 par heure. 



   L'éluat est recueilli en fractions de   35 cm3   sur un collecteur automatique de fractions. Après une durée d'élution de 50 heures, on inverse, à la fraction No. 189, sur 1'caution gradient. Dans ce cas, le butanol qui pénètre dans la colonne et présente une teneur en eau de 5% est constamment modifié dans une chambre de mélange de 500 cm3 par un gros apport de butanol saturé d'eau, ce qui augmente de façon continue son effet d'élution. Les fractions du chromatogramme sont diluées avec du méthanol 1 :10 et l'on contrôle l'activité biologique à l'aide de la méthode de diffusion sur du Bacillus   subtilia.   Les fractions peuvent aussi être contrôlées par voie   colori-   métrique.

   A cet effet, on mélange 0,2 cm3 de la solution- test et 0,2 cm3 d'une solution à un pour cent de p-di-   méthylamlno-benzaldéhyde   dans l'acide acétique glacial, laisse reposer pendant 15 minutes à la température ambiante   rt   dilue à 3, respectivement   6 onr   avec de l'acide acétique glacial. La couleur jaune-rouge de la base de 
 EMI10.1 
 Schiff formée est mesurée au opectrophotomètre à 456 mg. 



  Le résultat du test colorimétrique concorde avec celui du test biologique. 



   Parmi les fractions rassemblées en groupes sur la base de cette estimation, le groupe comprenant les frétions 349 - 370 présente l'activité antibiotique spécifique la plus élevée. 

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 EMI11.1 
 



  Cette mâtine possède une haute activité anti- biotique vis-à-vis d1 différents organismes-tests. C'est ainsi que dans des essais effeotués in-vitro (dans du bouillon glucose), e e. est, par rapport à la céphalosporine C, 50 tôis plus active vis-à-vis du Streptoooccus pyogenes A B ',8iJt 5 fois plu active vis-à-vis du Staphylococcus ; aur+s 11977 poly-résistent. 
 EMI11.2 
 



  '' ' L'ester dienzyl1que de la N-(2e4-dinitrophényl)-      céphalosporine C, utilise comme matière de départ et pouvant être obtenu sous forme bien cristallisée, peut être préparé comme suit: 
Dans   125   cm3 de dioxanne, on dissout 11,63 g de 
 EMI11.3 
 N¯2,4-dinitrophényl-ééphalosporine C et ajoute à 22 , en agitant pendant 25 minutes, 250 cm3 d'une solution à 2% 
 EMI11.4 
 de phenyldiazoniëthanë dans de l'éther. Lorsque l'addition .est terminée, on laisse encore reposer pendant 20 minutes et   concentre     ehsultelargement   sous vide. Le résidu re- pris dans du chloroforme est ensuite lavé chaque fois à trois reprises avec de l'acide chlorhydrique binormal, avec une solution normale de bicarbonate de sodium et avec de l'eau.

   En séchant la phase organique et en évaporant, on obtient 15,54 g d'un produit brut. En malax- ant avec de l'éther,;on élimine les fractions (2,42 g) qui sont solubles dans l'éther. Les fractions non-solubles dans l'éther (12,84 g) fournissent sous forme cristalline, dans un mélange d'acétone et d'éther, 9,98 g de l'éther dibenzylique de la   N-2,4-dinitrophényl-céphalosporine   C. 



  Après recristallisation, le composé fond à   109 -   111  et    25  présente un pouvoir rotatoire spécifique [Ó] 5  + 31,5    + 1 c   1   dans le chloroforme).      

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 EMI12.1 
 



  EXEMPLE 3 Dans 20 em3 d'acide acétique glacial, on dissout 100 mg (0,16 m.mole) de N- ( 2,", b-trinitrophënyl j -cbphelo- sporine C et hydrogène en pr *ence de 200 mg d'un, charbon à J.0;6 de palladium. Après absorption (745 mm/300) de 26,4 cn!3 d'hydrogène, on interrompt l'hydrogénation, sé- pare le catalyseur, lave ensile avec 100 em3 d'acide acétique glacial et lyophilise la solution. Le rendement est de 46 mg. La substance est facilement soluble dans une solution normale de bicarbonate de sodium, dans   l'acide   
 EMI12.2 
 chlorhydrique normal, dans le diméthyltormamide, dans l'acide acétique glacial, moins bien soluble dans le méthanol et l'éthanol, et insoluble dans l'acétone, ainsi que dans les solvants non-polaires.

   Le composé est con- 
 EMI12.3 
 stitué par l'acide 7-(-(3'-oxo-6t,$'-diamino-l',2',3',4' tétrahydro-quinoxalin-2'-yl)-butyryl]-amino-céphalosporanl'- que. 



   La   caractérisation  a lieu par chromatographie sur papier dans un système (saturé d'eau) constitué par   @   100 parties en volume de butanol normal et par 10 parties en volume d'acide acétique glacial (Rf 0,15; détection bio-autographique avec du Bacillus subtilis). 



   Spectre d'absorption ultra-violet dans un mélange d'acide acétique glacial et d'eau (1:1): 
 EMI12.4 
  max 246 m ( L -304) 273 m  (E1 cm= 268)   @   
 EMI12.5 
 340 m..(Ei Jm - 164 )# 

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   L'activité   antibiotique dans du bouillon glucose 
 EMI13.1 
 vis-a-vis de trois souches différentes de Staphylooooou8 ressort du tableau suivant: 
 EMI13.2 
 
<tb> Concentration <SEP> inhibant.
<tb> 
 
 EMI13.3 
 



  Staphylococcus ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯(tig/cm3)¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ aureus acide-7-[-(3'-oxo-6', souche No. 8'-diamina-1,2',3', céphalosporine C 4'-tétrahydro-quinoxa- lin-21-yl)7utyryll- am1no-oéphalo-spora- 
 EMI13.4 
 
<tb> nique
<tb> 
<tb> 
<tb> 2070 <SEP> 100 <SEP> 8
<tb> 
<tb> 2999
<tb> (pénicilion- <SEP> 100 <SEP> 16
<tb> résistant)
<tb> 
<tb> 2977
<tb> (poly-résis- <SEP> 100 <SEP> 31
<tb> tant)
<tb> 
 
 EMI13.5 
 La N(2,4,6-.trinitrophényl)-abphaloapar3ne C utilisée   oomne  matière de départ peut être préparée comme suit; 
Dans 80 om3 d'une solution normale de bicarbonate de sodium et 80 cm3 de dioxanne, on dissout 4 g de   céphalo-   sporine C. On refroidit la solution à 0 , puis, tout en 
 EMI13.6 
 agitant, ajoute goutts-.-outte 4,2 g de chlorure de   picryle   dans 80 om3 de dioxanne.

   On agite encore ne mé- lange pendant une nuit à la température ambiante et évapore ensuite le solvant à 25  sous un vide poussé. On dissout le résidu dans 100 cm3 d'eau et, tout en   refroidissant à   la glace, ajusté à un pH de 2 avec de l'acide chlorhydrique à 10%. On sépare par filtration,   à   l'aide de célite 545, le précipité qui se forme, le lave à l'eau, élue avec de 

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 l'acétone et évapore l'éluat sous vide jusqu'à   siccité.   Le rendement est de 4,38 g. 



   Dans un appareillage de répartition à contre- courant, on répartit en 100 stades, dans un système 2:2:1 de chlorure de méthylène, de méthanol et d'eau, 1,0 g du produit brut, avec des volumes de phase de   25 om3   chaque fois. Les solutions des éléments 21 à 40 qui ont une activité antibiotique sont réunies et évaporées à sec sous un vide poussé. Le rendement est de 262 mg. 



   La substance est facilement soluble dans l'étha- nol, l'acétone, une solution normale de bicarbonate de sodium, soluble dans l'acétate d'éthyle et insoluble dans l'eau, l'acide chlorhydrique normal, le chloroforme, ainsi que dans les solvants moins polaires comme le benzène, par exemple. 



   La   caractérisation   a lieu par ohromatographie sur papier dans le même système que celui décrit dans l'exemple l'en utilisant la méthode de détection bio-auto- graphique sur du Bacillus   subtilis   (Rf 0,68). 



   Spectre d'absorption ultra-violet dans un mé- lange (1:1) d'acide acétique glacial et d'eau: 
 EMI14.1 
 ax S56 (* ?m   290) 332 ( -190) . 332 mIJ. 190) . EXEMPt 4   Dans 40 cm3 d'acide acétique glaciale on dissout    
 EMI14.2 
 300 mg (0,50 m.mole) de N-(2-n1tro-4-oarbométhoxy-pHenyl)- céphalosporine C et hydrogène pendant 6 heures à   300 sous   une pression de 742 mm de mercure, en ajoutant 600 mg d'un charbon à 105 de palladium. fl est absorbé 97% de la 

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 quantité théorique d'hydrogène.   On   sépare le catalyseur, le lave ensuite avec 200 on,3 d'acide acétique glacial et lyophilise la solution. Le rendement est de 217 mg d'acide 
 EMI15.1 
 7- [7- ( 3 ' -oxo-6 ' -carbométhoxy-1 ' , 2 ' , 3 ' , 4 ' -tétrahydro- quinoxalin-2'-yl)-butyryl]-amino-oéphalosporanique.

   La substance est soluble dans une solution aqueuse normale de bicarbonate de sodium, dans   l'acide   acétique glacial, le   diméthylformamide,   peu soluble dans le méthanol,   l'acé-   tone, et insoluble dans les solvants plus lipophiles. 



   Spectre d'absorption ultra-violet dans l'acide acétique glacial : 
 EMI15.2 
 Amax 257 mg (Eî m 1& )46) 313 mu (El m '- 16+) . 



   L'activité antibiotique de la matière de départ et du produit d'hydrogénation dans du bouillon glucosé vis-à-vis de trois souches différentes de Staphylococcus ressort du tableau qui suit : 
 EMI15.3 
 
<tb> Concentration <SEP> inhibante
<tb> Staphylococcus <SEP> ( g/cm3)
<tb> 
 
 EMI15.4 
 aureus M N-(2-nitro-4- acide 7-[<y-(3'-oxo- 
 EMI15.5 
 
<tb> souche <SEP> No.

   <SEP> carbométhoxy- <SEP> 6'-carbométhoxy-
<tb> 
 
 EMI15.6 
 phényl)-cépha- 1,2,3l,i-tétra- 
 EMI15.7 
 
<tb> losporine <SEP> C <SEP> hydro-quinoxalin-2'-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> yl)-butyryl]-amino-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> céphalosporanique
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 2070 <SEP> 13 <SEP> 1,6
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 2999
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> (pénicillino- <SEP> 25 <SEP> 12,5
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> résistant)
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 2977
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> (polyrésistant) <SEP> -- <SEP> 25
<tb> 
 

 <Desc/Clms Page number 16> 

 
Tout comme la matière de départ,

   le produit d'hy-   drogénation   peut être décelé Par voie bio-autographique dans un chromatogramme sur du'papier Whatman No. 1 (Bac. subtilis). 
 EMI16.1 
 
<tb> 



  Valeurs <SEP> de <SEP> Rf
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> butanol <SEP> normal <SEP> Mélange <SEP> d'acétate
<tb> 
<tb> saturé <SEP> d'eau <SEP> d'éthyle, <SEP> d'acide
<tb> 
<tb> acétique <SEP> glacial
<tb> 
<tb> et <SEP> d'eau
<tb> 
<tb> (60:20:6:11)
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> N-(2-nitro-4-carbo-
<tb> 
 
 EMI16.2 
 éthoxy-phényl)- 0,00 z 
 EMI16.3 
 
<tb> céphalosporine <SEP> C
<tb> 
<tb> acide <SEP> 7-[r-(3'-oxo-
<tb> 
 
 EMI16.4 
 t-carbométhoxy- i,2f,3t,+'..tétra- 0,25 0,51 pydro-quinoxa11n-2'- yi)-butyryll-amino- 
 EMI16.5 
 
<tb> céphalosporanique
<tb> 
 
 EMI16.6 
 L'acide 7-[-(3-oxo-6-earbométhoxy-1,2,3tr- tétrahydro-quinoxalin-2t-yl)-butyryll-amino-céphalosporanî- que présente également in vivo une activité antibactérienne élevée.

   Si l'on traite dix souris infectées avec du Staphylococcus anreus 10, dans les 30 heures après l'in- fection, à 5 reprises avec chaque fois 5m/kg du nouveau composé, deux souris survivent alors le dixième jour après l'infection. Si l'on infecte les souris avec du Staphylococcus aureus 2999 et les traite dans les mêmes conditions avec 5 
 EMI16.7 
 fois 50 mg/kg ou 25 mg/kg d'acide 7-['Y-(3'-oxo-6'-carbométhoxy- 1t,2',i,4-tétrahydro-quinoxalin-2=-yl)-butyryl]-amlno- céphalosporanique, on observe alors respectivement six sur- vivante ou une.

   Les souris infectuées qui ne sont pas traitées par le composé périssent au plus tard le quatrième jour après l'infection. 

 <Desc/Clms Page number 17> 

 
 EMI17.1 
 La N-(2-nitro-4-carbométhoxy-phényl)-o'phalo- sporine C utilisée comme matière de départ peut être préparée comme suit: 
Dans 30 cm3 d'une solution normale de bicarbonate de sodium et dans 5 cm3 de   dioxanne,   on dissout un gramme (2,07   m.moles)   du sel de baryum de la   céphalosporine   C. 
 EMI17.2 
 



  Tout en agitant, on ajoute lentement goutte-à-goutte# à la température ambiante, 0,8 g de   3-nitro-4-fluoro-   benzoate de méthyle dans 5 cm3 de dioxanne, puis agite pendant 15 heures à 35 . Aveo 100 om3 d'acétate d'éthyle, on lave le mélange réactionnel à trois reprises chaque fois, à un pH de 8,5 et à un pH de 5,0 (en ajoutant   5 om3   d'acide chlorhydrique à 10%). On ajuste la solution aqueuse à un pH de 2,5 avec 1,5 cm3 d'acide chlorhydrique   à   10%, puis extrait à quatre reprises avec 100 cm3 chaque fois d'acétate d'éthyle, lave la solution   à   trois re- prises avec 20 om3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, sèohe et évapore sous vide. Le rendement est de 640 mg, soit de 54%. 



   Dans un appareillage de répartition à contre- oourant, on répartit en 20 stades 400 mg du produit brut dans un système (1:1) d'acétate d'éthyle et d'une solution molaire d'un tampon à l'acétate de sodium (pu 4,0), avec des volumes de phase de 10 cm3 chaque fois. On réunit les solutions des éléments 3 à 9 qui sont actives du point de vue antibiotique, ajuste à un pH de 2,5 avec de l'acide chlorhydrique à 10% extrait à quatre reprises avec la même quantité d'acétate d'éthyle, lave avec une solution de chlorure de sodium, sèche sur du sulfate de sodium et 

 <Desc/Clms Page number 18> 

 évapore le solvant.

   Le rendement est de 230 mg, Cette substance est facilement soluble dans le méthanol, l'éthanol. l'acétone, dans une solution aqueuse normele de bicar- bonate de sodium, moins bien soluble dans le ohloroforme, l'acétate d'éthyle, l'eau, et insoluble dans le chlorure de méthylène, le benzène, l'éther de pétrole et l'acide ohlorhydrique normal. 



   Spectre d'absorption ultra-violet dans l'acide acétique glacial : 
 EMI18.1 
 ' max 260 mw (El . 450) 285 mu (El cm . 410) 398 mu. El % . 115).

Claims

EMI19.1 rndicat,4n If Un procédé de préparations dérivée de la formble EMI19.2 EMI19.3 dan<! 1'lle n représente un reste amino-arylique dont in "!'.l1pe aminogène est relié avec le groupe carboxylique ..- .!, J[r.I-:''rl latérale avec formation d'un anneau laotame, 1 a composes dans lesquels le substituant en position "' Irùé avec le groupe carboxyliqueen position 4 :c , - .J' un annoau lactone, ainsi que des sels de ces , :5 uéa, ledit procédé étant caractérisé par le fait . :r,'.:'..;e par des agents réducteurs des dérivés nitro- x r ri i la '1é-rhalospor1ne C de formule EMI19.4 EMI19.5 <u : *-le R1 représente un reste nitro-arylique et -:..t te ('I,f l'hydrogène ou un benzyle, ou les lactones el.. r ,':lr".w1I1:'úS, puis, si on le désire,, qu'on transforme -t.'.- '.n..j'jt.\:

libres obtenus en leurs lactones et/ou en sL',.4t1=é.ae .' '-s. <Desc/Clms Page number 20>

Le présent procédé peut encore être caractérise par les points suivants: 1) On utilise,comme agent réducteur de l'hydrogène activé catalytiquement.

2) On utilise, comme substance de départ, la EMI20.1 N-(2,4-dinitrophényl)-céphalosporine C.

3) On utilise, comme substance de départ, la N-(2,4,6-trinitrophényl)-oéphalosporine C.

4) On utilise, comme substance de départ, la -(2-nitro-4-carbométhoxyphényl)-céphalosporine C.

II.- A titre de produits industriels nouveaux 5) Les dérivés amino-arylés de la céphalosporine C de formule (VI) EMI20.2 dans laquelle R'représente un reste amino-arylique dont un groupe aminogène est relié avec le groupe carboxylique de la chaîne latérale en formant un anneau laotame, et les composés dans lesquels le substituant en position 3 est cyclisé avec le griupe carboxylique en position 4 pour former un anneau lactone, ainsi que les sels de ces oom- posés. EMI20.3

6) L'acide T-[-'-oxo-6-amino-l',2',3,4- tétrahydro-quinoxalin-2t-yl)-butyryl]-amino-céphalospora- nique, sa lactone et ses sels. <Desc/Clms Page number 21> EMI21.1

7) L'acide 7-IY-i3-oxc-6,8-diamno-1, ,. t -ttrahydro-qu3noxa,lln-2 -y. -butyryl, a-eua,noophs. poranlque, 8a laotone et 8e8 sels.

8) L'acide 7-t'Y-<3l-oxo-6t-oarbora4thoxy-Xl#2f# 3 , 4 t tétrdhydro-quinoxalin-2 -yl ) ..butyry3 aru.no-caipho- eporanique, sa laotone et Me Bêle..