BE636667A - - Google Patents

Description

  Nouveau polypeptide et sa préparation*

  
 <EMI ID=1.1>  moniac liquide, de préférence le groupe formyle, en condensant le

  
 <EMI ID=2.1> 

  
l'acide malonique, l'acide succinique, l'acide maléique, l'acide  fumarique, l'acide tartrique, l'acide citrique, l'acide benzoïque, l'acide cinnamique, l'acide salicylique, l'acide 2-phénoxy- ou 2-

  
 <EMI ID=3.1> 

  
acides halohydriques, par exemple l'acide chlorhydrique ou l'acide  <EMI ID=4.1> 

  
qui peuvent causer de dangereuses réactions anaphylactiques, le bout !  veau composé synthétique peut être obtenu directement à l'état 

  
 <EMI ID=5.1> 

  
préparation du nouveau composé synthétique est indépendante de la 

  
 <EMI ID=6.1> 

  
 <EMI ID=7.1> 

  
Le nouveau composé peut trouver des applications corne 

  
 <EMI ID=8.1> 

  
 <EMI ID=9.1> 

  
parentérale ou locale. Comme supports on peut envisager des corps 

  
 <EMI ID=10.1> 

  
latine, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le talc,   <EMI ID=11.1> 

  
des agents de conservation, des stabilisants, des mouillants ou des émulsionnant,. Elles peuvent contenir en outre d'autres corps doués d'activités thérapeutiques.

  
De même que l'ACTH naturelle, le nouveau composé peut être administré sous forme d'une préparation retard.

  
Le pentacosapeptide conforme à l'invention, ainsi que ses sels, peut .aussi servir de produit intermédiaire pour la préparation de produits pharmaceutiques.

  
 <EMI ID=12.1> 

  
condensation, par action du sodium dans l'ammoniac liquide, sans que soit rompue parallèlement la liaison entre le reste lysine en position 11 et le reste proline en position 12, lorsque le groupe 

  
 <EMI ID=13.1> 

  
ne forme pas de produits secondaires colorés, comme le p-nitrophénol, lors d'une hydrogénation catalytique ultérieure. 

  
Dans la présente description on utilise les abréviations  suivantes : 

  

 <EMI ID=14.1> 


  
Il exista un grand nombre de possibilité pour faire la 

  
 <EMI ID=15.1>   <EMI ID=16.1> 

  
ailleurs, on condense CBO-(Tos)Arg-OCP avec H-Pro-OTB, on élimine lesgroupes CBO et OTB, on condense arec une deuxième molécule 

  
de CBO-(Tos)Arg-OCP, on élimine le groupe CBO, on condense avec CBO-(For)Lys-OCP, on élimine le groupe CBO, on condense avec une deuxième molécule de CBO-(For)Lys-OCP et, après élimination du

  
 <EMI ID=17.1> 

  
OCP avec H-Pro-OTB, on élimine le groupe CBO, on condense avec  CBO-Try-Gly-OCP, on chasse le groupe CBO et on condense avec 

  
 <EMI ID=18.1> 

  
dans l'ammoniac liquide, les groupes CBO, le groupe Bz et la totali-  té des groupes Tos sont éliminés (voir le schéma E ci-dessous).Par

  
 <EMI ID=19.1> 

  
pentacosapeptide protégé duquel on élimine les derniers groupes protecteurs par traitement avec de l'acide chlorhydrique-aqueux dilué et chaud, ou, d'abord par traitement avec l'acide trifluor-'  acétique, l'acide acétique aqueux ou l'acide chlorhydrique méthanolique, et ensuite avec un acide fort aqueux dilué et chaud, 
 <EMI ID=20.1> 
 <EMI ID=21.1> 
 
 <EMI ID=22.1> 
 <EMI ID=23.1> 
 
 <EMI ID=24.1> 
 <EMI ID=25.1> 
 
 <EMI ID=26.1> 
 <EMI ID=27.1> 
 
 <EMI ID=28.1> 
 <EMI ID=29.1> 
 
 <EMI ID=30.1> 
 <EMI ID=31.1> 
 Les exemples suivants Illustrent la présente invention  sans aucunement en limiter la portée.  EXEMPLE !..

  
 <EMI ID=32.1> 

  
On secoue pendant 1 heure et on filtre. Apres évaporation du solvant on reprécipite le résidu au moyen de benzène et d'éther. On obtient

  
 <EMI ID=33.1>  

EXEMPLE 

  
 <EMI ID=34.1> 

  
carbonyl-L-phénylalanine CBO-Phe-OCP. 

  
On dissout 90 g de N-benzyloxycarbonyl-L-phénylalanine et 80 g de 2.4.5-trichlorophénol dans 100 ml d'acétate d'éthyle et

  
 <EMI ID=35.1> 

  
On filtre et on évapore à siccité. Après recristallisation dans le méthanol on obtient 100 g d'ester 2.4.5-trichlorophénylique de la

  
 <EMI ID=36.1>  

  
 <EMI ID=37.1> 

  
secoué pendant 2 heures on élimine l'urée par filtration, on évapore le solvant sous pression réduite et on recristallise le résidu dans

  
 <EMI ID=38.1> 

  
 <EMI ID=39.1> 

  
d'acide chlorhydrique normal et on dissout le résidu huileux dans  l'acétate d'éthyle. Après lavage avec de l'acide chlorhydrique  dilué et une solution de bicarbonate de sodium on évapore à siccité. Après recristallisation dans un mélange d'acétate d'éthyle et  <EMI ID=40.1> 

  
heure à la température ambiante et on ajoute 1000 ml d'acide chlorhydrique normal. On lave le résidu d'abord avec de l'eau et, après séchage, avec de l'acétate d'éthyle. On obtient 60 g de CBO-Tyr-Pro-

  
 <EMI ID=41.1> 

  
formamide.

  
On dissout le produit obtenu dans 200 ml d'une solution

  
 <EMI ID=42.1> 

  
 <EMI ID=43.1> 

  
hydrique normal. On dissout dans l'acétate d'éthyle le produit qui a précipité et on lave avec de lucide chlorhydrique dilué et .avec une solution de bicarbonate de sodium" .Dans la solution d'acétate d'éthyle on provoque la précipitation par addition d'éther. On ob-

  
 <EMI ID=44.1> 

  
formamide et on ajoute 7,5 ml de triéthylamine. On secoue pendant
48 heures à 20[deg.]C, on ajoute 500 ml d'acide acétique normal et on lave le produit précipité d'abord à l'eau puis à l'acétate d'éthyle.

  
 <EMI ID=45.1>   <EMI ID=46.1> 

  
 <EMI ID=47.1> 

  
tétranormale d'acide bromhydrique dans l'acide acétique glacial et 

  
 <EMI ID=48.1> 

  
et on ajoute 1000 ml d'acide acétique normal. On sépare par filtra- 

  
 <EMI ID=49.1> 

  
 <EMI ID=50.1> 

  
On dissout le produit obtenu dans 500 ml de méthanol et  on l'hydrogène pendant 3 heures sous la pression normale en présence 

  
 <EMI ID=51.1> 

  
 <EMI ID=52.1> 

  
phosphoreux dilué et avec une solution saturée de chlorure de sodium,  on sèche sur sulfate de sodium et on .évapore le solvant sous pression  réduite. Après recristallisation dans un mélange de benzène et 

  
 <EMI ID=53.1>  res. On ajoute de l'éther et on dissout le précipité formé dans de

  
 <EMI ID=54.1> 

  
ammoniacale normale, on lave avec de l'acide acétyle et on acidifie avec de l'acide sulfurique tétranormal . Le produit qui a précipité est extrait avec un mélange d'acétate d'éthyle et de n-butanol et

  
 <EMI ID=55.1> 

  
mide.

  
On dissout le produit obtenu dans 500 ml d'une solution tétranormale d'acide bromhydrique dans l'acide acétique glacial et on laisse reposer la solution à 20*C pendant une heure. Après addition d'éther en isole 86 g de bromhydrate de H-(Tos)Arg-(Tos)Arg-  Pro-OH.

  
 <EMI ID=56.1> 

  
précipite est extraite avec un mélange d'acétate d'éthyle et de  <EMI ID=57.1> 

  
On dissout le produit obtenu dans 300 ml d'une solution tétranormale d'acide bromhydrique dans l'acide acétique glacial et

  
 <EMI ID=58.1> 

  
ajouté de l'éther on isole 39 g de bromhydrate de H-(For)Lys-(Tos) Arg-(Tos)Arg-Pro-OH.

  
 <EMI ID=59.1> 

  
secoue pendant 48 heures à 20*Ce on filtre et on ajoute 500 ml d'acide acétique tétranormal. On dissout l'huile quia précipite dans une solution normale d'ammoniaque et on lave la solution

  
 <EMI ID=60.1> 

  
 <EMI ID=61.1> 

  
On dissout 17 g de CBO-Val-Gly-OCP (voir exemple 7) et 

  
40 g de bromhydrate de H-(For)Lys-(For)Lys-(Tos)Arg-(Tos)Arg-Pro-OH &#65533; 
(voir exemple 10) dans 100 ml de diméthylformamide et on ajoute 

  
 <EMI ID=62.1>   <EMI ID=63.1> 

  
l'huile qui a précipité dans une solution ammoniacale diluée et on lave la solution à l'acétate d'éthyle. Apres acidification arec de lucide sulfurique tétranormal on extrait avec un mélange de nbut&nol et d'acétate d'éthyle, on sèche sur sulfate de sodium et on

  
 <EMI ID=64.1> 

  
On dissout le produit obtenu ainsi que 19 g de H-Val-(For)

  
 <EMI ID=65.1> 

  
élimine par filtration la dicyclohexyl-urée. On ajoute de lucide chlorhydrique dilué à la solution et on lave le produit précipité

  
 <EMI ID=66.1> 

  
On dissout le produit obtenu dans 400 ml d'une solution

  
 <EMI ID=67.1> 

  
 <EMI ID=68.1> 

  
te 500 ml de-acétate d'éthyle, on lave la solution obtenue avec une solution diluée d'acide phosphorique et avec une solution de bicarbonate de potassium. -Apres séchage sur sulfate de sodium on évapore la solution et on lave de l'éther de pétrole le résidu huileux

  
 <EMI ID=69.1>  

  
 <EMI ID=70.1> 

  
dium. On élimine le catalyseur par filtration, on évapore le soldant  et on sèche le résidu sous vide poussé. On dissout ce dernier dans 

  
 <EMI ID=71.1> 

  
on lave avec une solution diluée d'acide sulfurique, avec une solution de carbonate de sodium et avec de l'eau. On sèche sur sulfate  de sodium, on concentre la solution et on précipite le produit par addition d'éther. Après filtration et séchage on obtient 108 g de  CBO-(Tos)Arg-Try-Gly-(For)Lys-Pro-OTB. Son point de fusion est de 

  
 <EMI ID=72.1> 

  
noir animal, on filtre et on évapore. On lave le résidu avec de 

  
 <EMI ID=73.1> 

  
 <EMI ID=74.1>   <EMI ID=75.1> 

  
ambiante, on -ajoute 2000 ml d'acétate d'éthyle, on lave avec une solution diluée d'acide sulfurique et avec une solution de carbonate de sodium, on bêche sur sulfate de sodium, on évapore et on lave le résidu avec de l'éther. Après séchage sous vide poussé on

  
 <EMI ID=76.1> 

  
On dissout le produit obtenu ci-dessus dans 1600 ml de méthanol et on l'hydrogène en présence d'un catalyseur au palladium, sous la pression normale, jusque enlèvement total du groupe CBO.

  
.Après filtration on concentre la solution et on précipite le pro- <EMI ID=77.1> 

  
de.

  
On dissout le produit obtenu dans 740 ml d'acide trifluor* acétique et on conserve la solution à 20*C pendant une heure. On / évapore et on lave le résidu à l'éther, on le dissout dans un mé- 

  
 <EMI ID=78.1> 

  
geur d'ions basique.afin d'éliminer les dernières traces d'acide 

  
 <EMI ID=79.1> 

  
 <EMI ID=80.1> 

  
dans le diméthylformamide. 

  
On dissout le produit obtenu dans 100 ml de pyridine et 

  
t.

  
 <EMI ID=81.1> 

  
On laisse reposer pendant 16 heures à 20*Ce on ajoute de  l'éther, on filtre, on lave avec de l'acétate d'éthyle chaud et on 

  
 <EMI ID=82.1> 

  
Pro-OCP. 

  
 <EMI ID=83.1> 

  
pendant 18 heures. On ajoute 1000 ml d'acétone bouillante, on lave  le produit précipité soigneusement avec de l'acétone et on le sèche  sous pression réduite. On le dissout dans un mélange 4:1 de dioxanne et d'eau, on filtre sur une colonne acide échangeuse d'ions et on évapore à siccité. On lave le résidu avec de l'acétate d'éthyle et on le sèche sous pression réduite.

  
 <EMI ID=84.1>   <EMI ID=85.1> 

  
On ajoute ensuite 2 g de chlorure d'ammonium, on évapore l'ammoniac, on sèche le résidu sous vide poussé et on le dissout dans 250 ml

  
 <EMI ID=86.1> 

  
filtre, on lave avec 1,5 litre de pyridine, on évapore les filtrats mélangés jusqu'à siccité et on cristallise le résidu dans l'acétate <EMI ID=87.1> 

  
On dissout le produit obtenu dans 500 ml de diméthylformamide et on ajoute 100 ml d'hydrazine. Au bout de 24 heures à

  
 <EMI ID=88.1>   <EMI ID=89.1> 

  
tion tétra-normale d'hydroxyde de sodium et on abandonne le mélange 

  
à 20*C pendant 1 heure. On concentre à environ 400 ml, on ajoute 2  litres d'eau et on lave avec de l'acétate d'éthyle. On refroidit la 

  
 <EMI ID=90.1> 

  
essorage le précipité formé, on le lave à l'eau et on le sèche. On 

  
 <EMI ID=91.1> 

  
résidu avec de l'éthanol, puis avec de l'éther, on le sépare par  filtration et on le sèche sous pression réduite. On 'obtient 87 g 

  
 <EMI ID=92.1> 

  
on refroidit à -10[deg.]C, on ajoute 44 ml d'acide chlorhydrique 6-n et,

  
 <EMI ID=93.1> 

  
Au bout de 5 minutes on ajoute 250 ml d'une solution normale de bicarbonate de potassium et 1500 ml d'eau. On essore, on dissout le

  
 <EMI ID=94.1>  d'hydroxyde d'ammonium, on lave la solution obtenue, qui est presque

  
 <EMI ID=95.1> 

  
extrait avec de l'acétate d'éthyle l'huile qui a précipite, on sèche la solution obtenue sur sulfate de sodium et on l'évapore. Après

  
 <EMI ID=96.1> 

  
On dissout 37 g de CBO-Glu(OTB)-OEt dans 200 ml d'éthanol, on ajoute 6 ml d'acide acétique glacial, on hydrogène en présence d'un catalyseur au palladium jusqu'à disparition totale du groupe CBO, on élimine le catalyseur par filtration, on évapore la solu-

  
 <EMI ID=97.1> 

  
de potassium, on recouvre avec de l'éther, on extrait, on sèche la solution éthérée sur sulfate de sodium et on l'évapore. On dissout le résidu dans 400 ml d'acétonitrile, on ajoute 50 ml de diméthyl-

  
 <EMI ID=98.1> 

  
4 heures à 20[deg.]C. On sépare par filtration la dicyclohexylurée, on évapore le filtrat, on lave le résidu avec de l'éther de pétrole, on 

  
 <EMI ID=99.1> 

  
l'acide sulfurique dilué et avec de l'ammoniaque, on la sèche sur

  
 <EMI ID=100.1> 

  
thanol et on précipite le produit par addition d'éther. On filtre, on lave à l'éther, on sèche et on obtient 57 g de Tri-Ser-Tyr-8er..

  
 <EMI ID=101.1> 

  
On dissout le produit obtenu ci¯dessus dans 200 ml d'étha-

  
 <EMI ID=102.1> 

  
dant 24 heures, on ajoute 200 ml d'éther, on filtre, on lave à l'éther et on sèche sous pression réduite sur anhydride phosphorique

  
 <EMI ID=103.1> 

G 

  
 <EMI ID=104.1> 

  
 <EMI ID=105.1> 

  
pendant 12 heures, on ajoute encore une quantité supplémentaire

  
 <EMI ID=106.1>  <EMI ID=107.1> 

  
sèche sous pression réduite. Après un partage à contre-courant dans

  
 <EMI ID=108.1> 

  
 <EMI ID=109.1>  activité que la corticotropine pure et qui se comporte comme un pro-

  
 <EMI ID=110.1> 

  
on sait que la tyrosine est décomposée par l'hydrolyse acide totale.

  
Le produit peut être utilisé tel quel,ou une fois transformé en un autre sel. Il peut être conservé à l'état solide, en

  
solution ou sous forme adsorbée,

  
 <EMI ID=111.1> 

  
fe pendant 10 minutes à 100[deg.]C, on évapore, on dissout dans 5000 ml

  
d'acide chlorhydrique décinormal, on chauffe pendant 3 heures à

  
 <EMI ID=112.1> 

  
 <EMI ID=113.1>  d) On dissout 10 g du pentaoosapeptide protégé dans
4500 ml d'une solution méthanolique 0,5-n d'acide chlorhydrique, on

  
 <EMI ID=114.1> 

  
pore, on dissout dans 1000 ml d'acide chlorhydrique 0,1-n, on chauffe à 100[deg.]C pendant 1 heure et on effectue le traitement complémentaire décrit sous a).

Claims (1)

1. RESUME. <EMI ID=115.1>

   1[deg.]) Un procédé de préparation d'un pentacosapeptide

   jusqu'à présent inconnu, répondant à la formule L-séryl-L-tyrosyl-

   <EMI ID=116.1>

   L-prolyl-L-valinamide, procédé selon lequel on traite par le sodium

   dans l'ammoniac liquide anhydre le nouvel eicosapeptide N-benzyloxy- <EMI ID=117.1>

   anhydride dissymétrique formé.avec un ester alkyllque d'acide carboxylique ou en produit réactionnel de l'acide avec le dicyclo-

   <EMI ID=118.1>

   ou en plusieurs stades la totalité des groupes protecteurs du nou- veau pentacosapeptide protégé obtenu et on transforme éventuellement le peptide obtenu en un sel formé aven des acides minéraux ou orga- j niques.

   <EMI ID=119.1>

   <EMI ID=120.1>

   temps la liaison entre le reste lysine de la position 11 et le reste

   <EMI ID=121.1> l'action du sodium dans l'ammoniac liquide, de préférence par le groupe forayle.

   <EMI ID=122.1> <EMI ID=123.1>

   mide, dans laquelle X représente un groupe acyle non éliminable sous l'action du sodium dans l'ammoniac liquide, de préférence le groupe formylej; <EMI ID=124.1>

   '01 <EMI ID=125.1>

   L-valinamide, dans laquelle X représente un groupe acyle non

   <EMI ID=126.1>

   valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide.

   <EMI ID=127.1>

   décrit avec référence aux exemples cités.