BE724363A - - Google Patents

Description

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 concentré contenant de I>insuiine et procédé pour le préparer, 
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 La présente invention concerne un concentré contenant 
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 de l'insuline et un procède pour le préparer. En particulier elle concerne un concentré d'insuline anhydre et W:;r:âsé ayant une durée de conservation indéfinie et dont 1'irzsaline peut être 
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 extraite pdr les techniques classiques. 
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  Habituellement, on extri l'insuline de rJ's.:cCrt;ilâ irais, enplement congelé. On connaît 4ivei,se::.vuiiant?x de ce procédé, nais on traite da'::b. :de le 'ri-n-ci,-eLs frais par extraction alcoolique en Milieu acide. L-'aciJe ù3si#etli,c à>eni;y:ic ^.:..5 non .':.f2. .:..'.'le qui est extraite par ::.' ;;.1.<:0\;1. Un rrocààà 

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 classique d'extraction par l'alcool éthylique et l'acide chlorhydrique est décrit, par exemple, dans le brevet des   Etats-Unis   d'Amérique n    2.695.861.   Ce brevet décrit aussi une variante   de ce   procédé qui est exécutée à l'aide d'acide phosphorique, lequel peut être élimine ultérieurement sous forme de sel d'ammonium insoluble.

   De tels procédés sont décrits également dans Research Today, volume 10, n    3,   58 à 86 (1954) et Science, volume   129,   1340 - 1344   (1959).   



   Le recours au pancréas frais entraine évidemment des difficultés de manipulation et de conservation. Lorsque le pancréas frais n'est pas traité immédiatement, il faut veiller à le conserver en vue de l'extraction de   l'insuline.   Habituellement, on   congelé   le pancréas lorsque l'extraction n'est pas effectuée immédiatement. En pratique, on   congelé   habituellement le pancréas avant l'extraction à l'échelle   industrielle.   



   Il est évident qu'au départ de pancréas frais, il est nécessaire de manipuler une masse importante de tissu   pancréati,-,   que pour obtenir une certaine quantité d'insuline. Cette manipulation suscite de graves difficultés et des dépenses   importan-   tes en raison des frais de transport et de main-d'oeuvre pour la manipulation et le traitement du tissu pancréatique frais congelé. De plus, il est nécessaire de disposer d'installations frigorifiques pour congeler rapidement le tissu pancréatique et pour le maintenir à   l'état   congelé jusqu'au moment de l'extraction de   l'insuline.   



   Il serait très intéressant de disposer d'un concentré dont l'insuline puisse être extraite avec un rendement équivalent à celui du tissu frais, mais qui soit moins volumineux et plus facile à manipuler. 



   La présente invention a donc principalement pour but de procurer un concentré d'insuline qui est du tissu pancréatique à l'état solide et sec, ayant un poids et un volume nettement 

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 moindres mais conservant la teneur en insuline de la quantité correspondante de tissu pancréatique frais. 



   La présente invention a aussi pour but de procurer un procède de préparation d'un concentra de tissu   pancréatique   sensiblement séché et dégraissé et en substance exempt d'enzymes, mais contenant de l'insuline et dont l'insuline peut être extrai- te par des procédés classiques en quantités équivalentes à celles obtenues à partir des quantités correspondantes de pancréas frais, 
Ces buts et d'autres de l'invention sont atteints comme décrit ci-après. 



   Jusqu'à présent, l'insuline était isolée du pancréas trais ou congelé par extraction alcoolique acide classique, mais il est   possible   suivant l'invention de soumettre le   pancréas   frais à un dégraissage et une dessiccation pour l'obtenir sous une forme finement divisée et sèche qui conserve sa teneur en insuline. On sait qu'on peut dégraisser et dessécher des tissus animaux, par exemple du tissu pancréatique, en éliminant   l'eau   sous forme   d'azéotrope   avec un solvant organique et en extrayant simultanément la graisse par le même solvant. Un tel procédé est décrit dans les brevets des   Etats-Unis   d'Amérique n  2.503.313 et   2.619,425   de la Demanderesse.

   Le tissu pancréatique séché et dégraissé obtenu ainsi a une teneur élevée en enzymes pancréati- ques comme la protéase, la lipase, l'amylase, la collagénase,   l'élastase   et ainsi de-suite. Toutefois, ce produit séché ne contient sensiblement pas d'insuline parce qu'elle est désactivée      par ces enzymes pancréatiques. 



   La présente invention a pour objet un procédé suivant lequel on obtient un concentré de tissu pancréatique sec et dégraissé qui est sensiblement exempt de ces enzymes pancréati- ques et qui conserve, comme on l'a constaté avec surprise une teneur élevée en insuline, laquelle peut être extraite avec succès, même après une longue conservation du concentré à la température ambiante. 

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   En pratique, le tissu pancréatique frais est mis en contact avec une quantité d'acide suffisante pour désactiver les enzymes pancréatiques. Le tissu qui a subi le traitement en milieu acide est alors dégraissé et déshydraté par élimination de   l'eau   sous forme d'azéotrope avec-un solvant organique des graisses, comme décrit dans les brevets des Etats-Unis   d'Amérique   
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 n  2.503.313 et 2.619,/y25a L'éliminntion de l'eau sous forme   d'azéotrope   est effectuée à une température modérée évitant la désactivation de l'insuline, par exemple inférieure à envlron 38 C. 



   La désactivation des enzymes pancréatiques peut se faire de diverses façons, mais il est préférable de mélanger le tissu pancréatique avec un acide minéral fort, comme 1'acide sulfurique,   l'acide   chlorhydrique, l'acide nitrique, etc.   Après   la mise en contact avec un acide, le pancréas est divisé, par exemple par passage dans un broyeur. Le tissu pancréatique, divisé est alors immergé dans un solvant organique des graisses porté à l'ébullition sous pression réduite pour que sa   températu-   re soit peu élevée. 



   L'azéotrope formé par   l'éau   et le solvant organique des graisses est séparé dans une zone de distillation voisine du solvant en   ébullition.   Il est préférable d'ajouter le tissu pancréatique à raison de 1 partie en volume à plusieurs parties en volume de solvant organique des graisses de façon qu'il y ait suffisamment de solvant pour former l'azéotrope et extraire la graisse du pancréas, En général, on prend de préférence 3 à 4 parties en volune de solvant par partie en volume de tissu à traiter et le solvant consommé est remplacé de façon continue ou non, On poursuit la distillation azéotropique jusqu'à diminution de la teneur en eau du tissu pancréatique dans la mesure recherchée, généralement jusque une teneur inférieure à 6% en poids, A ce   moment,

     la teneur en graisse du tissu pancréatique 

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 est aussi abaissée jusque la valeur requise   inférieure   à envi- ron 2 à   3$µ en   poids. 



   Le tissu   pancréatique     sensiblement   dégraissé et desséché est séparé du solvant organique des graisses par   soutirage   du solvant de l'enceinte; sous vide. On pout alors effectuer un rinçage au moyen d'un suppléent de solvant en vue d'éliminer la graisse éventuellement occluse. Les solvants uti- lisés pour le rinçage peuvent aussi être   divines   par soutirage ou par des moyens analogues et le concentre peut alors être séché à l'air pour donner le solide finement divisé. On peut conserver ce solide tel quel ou   aprbs   un broyage supplémentairc. 



   En général il est préférable de forcer un solide pulvérulente qui est encore  '4 moins   encombrant à manipuler, Cette force   finement   pulvérulente facilite aussi l'extraction ultérieure de L'insuline par des procédés classiques. 



   On préfère généralement préparer le produit à partir de pancréas de porc ou dé boeuf et recourir à des hydrocarbures halogénés du type décrit dans les brevets des Ftats-Onis d'Amérique précités. Ces solvants sont, notamment, le dichlorure de   propylène,   le trichloroéthylène, le perchloroéthylène, etc. 



  Le solvant préféré est le   dichlorure   d'éthylène. Toutefois, on peut utiliser aussi des solvants non halogénés, comme le bonzène,   l'hexane,   le pentane, le toluène, le cyclopentane, le cyclohexane, etc. Si on le   désira   on peut interrompre la déshydra- tation et le dégraissage pour encore diminuer la Granulométrie par des moyens mécaniques, par exemple à l'aide d'un moulin ou d'un broyeur à boulets. On peut alors renvoyer ces particules plus fines au solvant organique des   graisses'qui   est chauffé dans un récipient dans l'enceinte sous vide et on peut poursuivre le   dégraissage   et la dessication du produit jusqu'au degré requis. 

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  LeH exemples suivants illustrûnt l'ixivention sans la limiter. r:ir;''.i PT,T; 1,.- Concentré contc-rant de l'insuline. 



  On ajoute 16,5 m1 d'acide sulfuriquo 9N zut 500 9 do   pancréas   de porc congelé et on fait passer le mélange acidifia ,au moulin à viande pour assurer le   mélange   intime de   l'acide   avec le tissu pancréatique . Ce traitement par l'acide détruit les enzymes pancréatiquos mais non l'insuline. 



   Après mélange intime, on introduit le pancréas acidifia dans un flacon muni d'un condenseur et   d'un   dispositif pour faire le vide, Comme solvant organique des graisses, on introduit dans 
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 le flacon du dichlorure de6thylène en une.quantité de 2 à 3 l.-- tres, qui est suffisante pour assurer le contact requis du pancréas acidifié avec le solvant. on   entretient un   vide de 58,42 cm de mercure. On chauffe 
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 le flacon suffisamment pour porter le dichlorure d'i:thy7,ne va l'ébullition et on ajoute des suppléments de dichlorure d'éthylène à mesure que l'azéotrope se forme et est   élimine   par le condenseur. La température de distillation est maintenue en dessous de 38 C.

   On poursuit l'élimination azéotropique de   1,'eau   jusqu'au moment où le tissu pancréatique résultant appelé 
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 aussi farine pancréatique, est sensiblement sec, c'est.-d-d.re a une teneur en humidité n'*excédant pas environ 6 en poids. La farine pancréatique est   séparée   du solvant orga- 
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 nique des graisses par iiitration du mélange sur un entonnoir de ï3uciua .

   La suisse résiduelle ou occluse éventuelle est. élimi- née de la   farine   pancréatique par plusieurs lavages au dichlorure d'éthylène et la farine est alors séchée à l'air pour donnor environ   100 g   de tissu pancréatique   sensiblement   séché 
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 et dégraisse dont la teneur en insuline est "or.y :x=tnle à celle d'une   quantité   correspondante de   pancréas  frais. 

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  EXEMPLE 2. -      Extraction de l'insuline du concentra. 



   On utilise comme intermédiaire ou comme matière pre-   mière   pour une extraction classique d'insuline un   concentre        sensiblement séché et dégraissé obtenu par le   procède   de l'oxem- ple 1, On obtient un extrait brut contenant   de-   l'insuline on immergeant un échantillon de ce concentra dans plusieurs   volumes   d'eau pour effectuer une extraction aqueuse. On précipite alors   l'insuline   extraite soit par addition d'un mélange d'alcool et d'éther, soit par modification du pH jusqu'à une valeur de 5,2 provoquant la précipitation isoélcctrique. 



   Il ressort de l'exemple 1 que le concentra   sèche   et dégraisse a un poids environ égal au cinquième de celui du pan- créas frais initial. Ceci constitue une diminution remarquable du poids et du volume de la substance permettant l'extraction ultérieure de l'insuline. Cette diminution de volume permet évidemment de réaliser des économies de transport et de manipu- lation et élimine la nécessité de la congélation, Aux avantages relatifs au poids et au volume du concentré, s'ajoute celui que la teneur en   hormone   n'est pas sensiblement moindre que dans le pancréas frais de départ, En d'autres termes, la teneur cn insuline n'est pas sensiblement moindre dans le produit solide séché et dégraissé.

   L'invention procure donc un nouveau produit et un nouveau procédé de traitement du tissu   pancréatique   n'abais- sant pas sensiblement la teneur en insuline attendue. 



   Le nouveau procédé présente de nombreux avantages, parmi lesquels   il   convient de citer la possibilité d'extraire   l'insuline   à un moment quelconque en un lieu éloigné de celui de la préparation du concentré. Par   exemple, le   concentré peut   être'   transporté dans un pays où   l'extraction   peut être effectuée par des procédés classiques et où il peut être transformé   en un   pro- 

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 duit prêt à   l'utilisation.   Il n'est donc plus nécessaire de produire les compositions pharmaceutiques au lieu même où on extrait l'insuline du pancréas frais,
Bien que divers modes et détails de réalisation aient été décrits pour illustrer   l'invention,

     il va de soi que celle-ci est susceptible de nombreuses variantes et modifications sans sortir de son cadre. 



   REVENDICATIONS 
1.- Concentré   pancréatique  solide stable constituant une source d'insuline pour une utilisation ultérieure et contenant du tissu pancréatique finement divisé sensiblement exempt d'eau, de graisse et d'enzymes pancréatiques, caractérise en ce qu'il comprend, en une quantité équivalente à celle présente dans la quantité correspondante de pancréas frais, de l'insuline qui a une activité hormonale équivalente à celle de l'insuline obtenue à partir d'une quantité correspondante de pancréas frais.

Claims (1)

1. 2. - Concentré suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le concentré sec a une teneur en eau inférieure à envi. ron 6% en poids et une teneur en graisse inférieure à environ 3%.

   3.- Concentré suivant la revendication 2, caractérisé en ce que le concentré divisé est présenté sous forme pulvérulente.

   4.- Concentré suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le tissu pancréatique est un produit intermédiaire pour l'extraction classique du tissu pancréatique et le concentré est stable à la température ambiante, de sorte que l'insuline peut être amenée sous une forme pharmaceutiquement acceptable sans altération sensible de la teneur. <Desc/Clms Page number 9>

   5,- Procède de préparation d'un concentre stable con- tenant de l'insuline qui peut être isolée ultérieurement sans modification sensible de la teneur en insuline par rapport à la teneur du pancréas frais de départ, caractérisé en cc:

   qu'on met du pancréas frais divisé en contact avec une quantité d'acide suffisante pour désactiver sensiblement tous les enzymes pancréatiques, on mélange le pancréas frais désactivé avec un solvant organique des graisses bouillant dans une zone de distillation sous pression réduite de manière que le solvant organique se trouve en ébullition au dessous d'environ 38 C, on élimine sensiblement toute l'eau fraîche du pancréas sous forme d'azéotrope, on soutire l'aéotrope de la ?one de distillation, on maintient le contact du pancréas avec le solvant organique des graisses jusqu'à dissolution sensiblement complète de ,

   la graisse du pancréas frais et on sépare le tissu pancréatique sensiblement sèche et sensiblement dégraisse du solvant pour obtenir le concentré stable contenant de l'insuline,, 6,- Procédé suivant la revendication 5, caractérisé en ce qu'on met le pancréas frais en contact avec un acide minéral, on broie le pancréas en présence de l'acide pour assurer leur mélange intime, on introduit.le mélange désactivé dans plusieurs fois son volume du solvant organique des graisses en ébullition pour que la quantité de solvant soit suffisante pour éliminer l'eau du pancréas sous forme d'azéotrope et pour dissoudre la graisse du pancréas, puis on soumet le tissu pancréatique séparé à un traitement par du solvant organique des graisses pour éliminer la graisse occluse éventuelle.

   7. - Procédé suivant la revendication 5, caractérisé en ce que le pancréas traité est du pancréas de boeuf ou de porc et le solvant organique des graisses est .Le dichlorure d'éthylène, le tissu pancréatique est séparé du solvant organique des graisses par soutirage du solvant de la zone de distillation, <Desc/Clms Page number 10> le tissu pancréatique isole est soumis à plusieurs lavages au dichlorure d'éthylène et le produit obtenu constituant le concentré stable est séché,, 8.- Procédé suivant la revendication 5, caractérisé en ce que le concentré sensiblement sec et dégraisse est utilisé comme matière première pour un procède suivant lequel on disperse le concentré dans un milieu aqueux pendant une durée suffisante pour extraire toute l'insuline,

   on sépare le concentré sensiblement épuisé du milieu aqueux et on précipite de manière habituelle l'insuline du milieu aqueux.