BG103238A - РТХ-ЧУВСТВИТЕЛНИ g-ПРОТЕИНИ, МЕТОД ЗА ТЯХНОТО ПРОИЗВОДСТВО И ПРИЛОЖЕНИЯТА ИМ - Google Patents

РТХ-ЧУВСТВИТЕЛНИ g-ПРОТЕИНИ, МЕТОД ЗА ТЯХНОТО ПРОИЗВОДСТВО И ПРИЛОЖЕНИЯТА ИМ Download PDF

Info

Publication number
BG103238A
BG103238A BG103238A BG10323899A BG103238A BG 103238 A BG103238 A BG 103238A BG 103238 A BG103238 A BG 103238A BG 10323899 A BG10323899 A BG 10323899A BG 103238 A BG103238 A BG 103238A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
protein
human
nucleic acid
acid sequence
subunit
Prior art date
Application number
BG103238A
Other languages
English (en)
Inventor
Winfried Siffert
Original Assignee
Winfried Siffert
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Winfried Siffert filed Critical Winfried Siffert
Publication of BG103238A publication Critical patent/BG103238A/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4722—G-proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Neurology (AREA)

Abstract

Изобретението се отнася до нови човешки G-протеини, по-специално 3-подединиците на G-протеините, до метод за тяхното производство и приложението им в диагностиката и терапията. 3-подединица на тозиG-протеин съдържа не повече от шест WD повтарящи се мотива и е кодираща за G-протеина.

Description

Изобретението се отнася до нови човешки G-протеини и по-специално рЗ-подединиците на G-протеините, метод за тяхното производство и приложенията им в диагностиката и терапията.
ПРЕДШЕСТВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА Хетеротримерните, свързващи гуаннннуклеотид протеини (G-протеини) имат изключително значение при вътрешноклетьчната трансдукция на сигнали. Те спомагат за предаването на външноклетьчни сигнали, след стимулацията на хормонални и други рецептори, които след активирането на рецепторите претърпяват конформационна промяна. Това води до активиране на G-протеини, които в последствие могат да активират или възпират вътрешноклетъчни ефектори (напр. йонни канали, ензими). Хетеротримерните G-протеини са съставени от три подединнци, а именно подеднниците α, β и γ. Досега с помощта на биохимични и молекулярно-биологични методи е доказано съществуването на няколко различни α-подединнци, на 5 β-подединици и на около 12 γ-подединици (Birnbaumer, L. & Birnbaumer, М. Signal transduction by G proteins: 1994 edition. J.Recepy.Res. 15:213β252, 1995; Offermanns, S. and Schultz, G. Complex information processing by the transmembrane signaling system involving G proteins. Naunym Schmiedebergs Arch. Pharmacol 350:329-338, 1994; Nurnberg, B., Gudermann, T., & Schultz, G. Receptors and G rpoteins as primery components of transmembrane signal transduction. Part 2. G proteins: structure and function. J. Mol. Med. 73:123-132, 1995; Neer, E.J. Heterotrimeric G proteins: Organizers of Transmembrane Signals. Cell 80:249-257, 1995; Rens-Domiano, S. & Hamm, Η. E. Structural and functional relationship of Heterotrimeric G-proteins. FASEB J. 9:1059-1066, 1995).
Способстването от рецептори активиране на определени подединнци, може да бъде възпряно чрез предварителна обработка с пертусиетоксин (РТХ). Към тях се числят по-специално α-изоформнте ail, ai2 и ai3, както и различни ао-подединици. Тези видове G-протеини се отнасят също така към “чувствителни към РТХ G-протенни”.
βγ подеднниците изпълняват важни функции при активацията на Gпротеина и при модулацията на вътрешноклетьчните реакции. Всичките β-подединици на G-протеина, открити до днес, са с висока степен на хомология на нивото на нуклеотидна последователност и на • « »········· ·· ·· · · · · · · · • · ··· ···· • · ·· · · · ······ • · ···· · · нивото на аминокиселиннаЪоследователност. Освен това тези прилики са открити не само в човешките β-подединици (βΐ, β2, β3), но също и в сравнение с β-подединици от други видове, например плодовата муха.
Рентгеновите структурни анализи могат да определят онези аминокиселини в α, β и γ подединиците, които не са в контакт с никои други и са необходими за подредените хетеротримерни формации.
Всичките β-подединици на G-протеина, открити до днес, принадлежат към WD повтарящите се протеини. N-терминът на β-подединиците взаимодейства основно с γ-подединиците, а С-терминът е включен във взаимодействието с рецепторите.
β-подединиците образуват така наречените пропелерни структури, βпропелерите на Οβ-ποΑβΑΗΗΗΗΗτε съдържат 7 β пропелерни листа, всеки пропелерен лист съдържа 4 аминокиселинни участъка, подредени антипаралелно. Седмолъчевата симетрия на β пропелера може да бъде откри+а на нивото на аминокиселинната последователност, обхващаща 7 WD повторения. Един мотив на WD повторенията обхваща около 40 аминокиселини и има голям брой консервирани аминокиселини, включително Trp-Asp дипептидни последователности. Този WD мотив често определя WD повторението (фиг.1).
СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Изненадващо беше открито, че βЗ-πoдeдинициτe на G-протеина, съдържащи само 6 вместо 7 мотиви на WD повторенията, казано по друг начин, се срещат например в хипертензивите (свръхнапрежение). Клетъчната ускорителна способност на “чувствителните към РТХ Gпротеини” в тези хипертензиви е увеличена в сравнение с нормотензивите.
Молекулярните анализи разкриха нова аминокиселинна последователност за β3-Π0ΛβΛΗΗΗΠΗΤβ в тези хипертензиви, по-кратка от известната последователност, поради 41 аминокиселини. Последователността е изобразена в SEQ ID N0:2. Формално тя е взета от известната човешка β3-ποΑεΑΗΗΗΗΒ при изтриване на аминокиселини 167-207.
Съответната DNA последователност кодираща за това е описана в SEQ ID N0:1.
Β*»Τ>ΛΙ· • · ···· ·♦ ♦ · • · · · · · · • · · · · · · • · · ·· · · · · · · • · · · · · на ’’съкратените СЗЗ-подединици
Причината за срещането на съкратените ьрз-подединици в хипертензивите е вероятно алтернативна сплетка на съответния ген. На DNA ниво има интрон точно пред предполагаемото място на сплитане. Интронът започва след нуклеотид 497 в литературата (номерация като при SEQ ID N0:1).
Беше възможно също така да се открие интрон, започващ около нуклеотид 620 при PCR на геномна DNA. Съкратената форма очевидно идва от изтриване на целия ексон. Друг предмет на изобретението е изготвянето на съкратени форми на човешките СрЗ-подединицн, споменати по-горе чрез израз на нуклеиново-киселинна последователност, кодираща за това в организма-гостоприемник.
Рекомбинираният израз, за предпочитане се осъществява чрез подготовка на генна конструкция, която, освен кодиращата нуклеиновокиселинна последователност, обхваща и други сигнални и регулаторни последователности, като ускорители, терминатори, места с рибозомни връзки, полиаденилационни места и други подобни. Основната процедура за рекомбинирания израз на гена е позната на квалифицирания работник.
Друг предмет на изобретението е приложението на нуклеиновокиселинни последователности, съгласно изобретението за производство на лекарства за генна терапия. Представянето на тези нуклеиновокиселинни последователности в директна форма или след изготвяне на съответния генен вектор в клетките на пациентите може да достигне увеличена способност за активиране на G-протеините в тях.
Това се препоръчва при голям брой болести, при които съществува дисрегулация, свързана с G-протеина.
Болести свързани с G-протеиновата дисрегулация са тези, при които Gпротеинът е включен в сигналната трансдукция и не изпълнява физиологичната си функция.
В случая става дума за заболявания на сърдечно-съдовата система, за смущения в обмяната на веществата и за имунни заболявания.
Като заболявания на сърдечно-съдовата система следва да посочим: хипертонията, хипертонията при бременност (гестоза, “hypertension in pregnancy”), коронарните сърдечни заболявания, локализираната и/или генерализираната артеросклероза, стенозите на кръвоносните съдове, рестенозите след реваскуларизиращи съдови операции (напр. РТСА със • · · · · ···· • · ·· · ·· ······ • · ···· · · и без стент-имплантация),‘склонността към*апо*плексия, тромбофилия и повишеното натрупване на тромбоцити.
Като смущения в обмяната на веществата следва да посочим: метаболичния синдром, инсулиновата резистентност и хиперинсулинемията, Тур II-Diabetes mellitus, усложненията при диабета (напр. нефропатията, невропатията, ретинопатията и др.), смущенията в обмяната на мастните вещества, нарушената централна хеморецепция (СО2-толерантност, ацидозната толерантност, внезапната смърт при децата (SIDS)).
Като имунни заболявания следва да посочим: нарушената устойчивост на телесната имунна реакция (образуването на имунни глобулини, агресивността на Т-клетките и на NK-клетките), нарушената обща склонност към пролиферация включително способността за заздравяване на рани, склонността към образуване на тумори и пролиферация включително възможността за възникване на метастази на злокачествено трансформирани клетки, продължителността на латентния период след HIV-инфекция до клиничното развитие на заболяването, саркома на Капоши, склонността към цироза на черния дроб, толерантността при трансплантации и отхвърлянето на трансплантирани органи.
Друг предмет на изобретението е приложението на нуклеиновокиселинни последователности съгласно изобретението, за диагностициране на заболявания, включващо в частност определяне на риска от страдане от болести, свързани с G-протеиновата дисрегулация.
Освен определяне на риска от някои болести, също е възможно да се изведат основни физиологични данни и твърдения, посредством употребата съгласно изобретението, например на централна хеморецепция, С02-толерантност, ацидозната толерантност, внезапната смърт при децата (STDS), физическото и здравословно състояние при някои видове спорт.
Друг предмет на изобретението е приложението на нуклеиновокиселинни последователности, допълнителни към използването на нуклеиново-киселинните последователности, кодиращи за съкратената форма на СрЗ-подединиците. Последователности от този тип могат да се използват като незначителни конструкции за лечение или предпазване от болести, свързани с G-протеиновата дисрегулация.
• · ······ * · · · ·· · · ·· · ···· • · ··· · · · · • · ·· · · · ······ • · ···· · ·
Друг предмет на изобретението* е* методът за определяне на относителния риск от страдание от болести, свързани с G-протеиновата дисрегулация за един субект, чрез сравнение на генната последователност на Р3-подединиците на човешкия G-протеин на субекта с генната последователност SEQ ID N0:1 и в случай, че съвпада с SEQ ID N0:1, прехвърляйки нараснал риск на субекта.
В метода, съгласно изобретението, за определяне на относителния риск, телесния материал, съдържащ субективната генетична информация, е взет от субекта. Това, като правило, се постига чрез взимане на нуклеиновата киселина от кръвната проба.
Структурата на гена за Р3-подединиците на G-протеина се определя от взетата от субекта нуклеинова киселина, сравнена с последователността посочена в SEQ ID N0:1. Генната структура може да се определи чрез секвенциране на нуклеиновата киселина. Това може да се осъществи или директно от геномната DNA, или след амплификация на нуклеиновата киселена, например с помощта на PCR-техника.
Генната структура може да се извърши на mRNA, или на cDNA равнище.
За предпочитане е определянето чрез секвенциране на cDNA, след PCRамплификация. Подходящите за PCR-реакция примери могат лесно да се извлекат от специалиста от представените в SEQ ID N0:1 последователности. Препоръчително е да се действна така, че да се избере съответно по една последователност и противоположна й последователност от свързващи примери, пред и зад мястото на изтриване.
Генетичното сравнение може да се извърши и чрез други методи, например чрез селективна хибридизация или чрез съответното картиране с рестрикционни ензими.
Диагностичните методи, описани по-горе, могат да бъдат осъществени и на протеиново ниво. Например протеините, съгласно изобретението могат да се използват за създаване на специални антитела за разпознаване на съкратената форма на СрЗ-подединицата. Антителата от този тип могат след това да бъдат използвани за осъществяване, където е подходящо, чрез конвенционални ELISA методи, на протеинови химични проучвания в допълнение или алтернативно на генетичните проучвания.
Друг предмет на изобретението е приложението му за създаването на трансгенни животни, имащи описаната по-горе генетична модификация (съкратено от СрЗ-подединиците). Трансгенните животни от този тип са от голямо значение, в частност като животински модели за проучване и лекуване на гореописаните болести. Процесите за създаване на трансгенни животни са известни главно на специалистите в областта.
ОПИСАНИЕ НА ПРИЛОЖЕНИТЕ ФИГУРИ
По-подробно изобретението е пояснено на приложените фигури, където: Фиг.1 е структурата на рЗ-подединицата на G-протеина и взаимодействието с γ-подединиците;
Фиг.2 е зависимостта на концентрацията от активацията, причинена от мастипаран 7 (MAS-7) от G-протеините на местата на нормотензивите (NT) и хипертензивите (НТ);
Фиг.З е ходът във времето на връзката на |35S]GTPyS с дигитонинпермеабилизираните клетки от нормотензивите (NT) и хипертензивите (НТ), стимулирана от мастипаран 7;
Фиг.4 е GDP- зависимостта на връзката Ha|35S]GTPyS с клетъчни мембрани от нормотензивите (NT) и хипертензивите (НТ), стимулирана от мастопаран 7;
Фиг.5 eMg2+ зависимостта на връзката, Ha[35S|GTPyS с клетъчни мембрани от нормотензивите (NT) и хипертензивите (НТ), стимулирана от мастопаран 7;
Фиг.6 илюстрира реактивирането на активността на Gпротеините с cholate extracts от клетъчни мембрани от нормотензивите (NT) и хипертензивите (НТ);
Фиг.7 изобразява структурата на новия вариант на човешкия Gпротеин.
ПРИМЕРНО ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Изобретението е пояснено със следните примери:
Нример.1:
Функционални резултати от G-протеиновата активация в основната хипертензия.
Беше съставена детайлна, характеристика от активацията на Gпротеините от клетки на нормотензивни субекти и хипертензивни пациенти. За тази цел беше сумирана комбинацията от рентгеноозначените |35S]GTPyS по метода, описан от Wieland et al. (Wieland, T., Liedel, K., Kaldenbarg-Stasch, S., Meyer zu Heringdorf, D., Schmidt, M., Jacobs, K. H. Analysis of receptor-G protein interaction in
>
permeabilized cells. Naunyn-Scfimiedeberg’s A*rch.* Pharmacol. 351: 329-336, 1995). G-протеините бяха активирани първоначално чрез стимулация на клетките, които бяха обработени с дигитонин, използвайки пептидния мастопаран 7. Този пептид симулира конфигурация от активиран рецептор, състоящ се от G-протеинови двойки, така че да бъде използван за директно предизвикване на G-протеиновата активация, независимо от рецепторите (Ross, Е. М. and Higashijima, Т. Regulation of G protein activation by mastoparan and other cationic peptides. Methods Enzymol. 237: 27-38, 1994). Свързването на GTPyS, предизвикан от MAS-7, е изцяло РТХ-чувствително, така че може да бъде използвано за сумиране на активацията на хетеротермичннте Gпротеини от типа Gi. Фиг. 2 показва концентрационната зависимост на G-протеиновата активация, предизвикана от мастипаран 7 (MAS-7) в нормотензивно (NT) и хипертензивно (НТ) състояние. MAS-7 предизвиква силна GTPyS връзка на НТ клетките с ЕС50 на около 5μΜ (фиг.2). Максималната връзка е достиганата на около 25 до 5μΜ MAS-7. Обратно на това, концентрацията, изисквана за същата |3?S]GTPyS връзка с NT клетките е |sic] 10 пъти по-голяма (фиг.2). Тези данни показват, че активацията на РТХ-чувствителните G-протеини в НТ клетките изисква доста по-малко активирани рецептори, в сравнение с тази в NT клетките.
Фиг. 3 показва във времето хода на връзката, стимулирана от мастопаран 7, на |35SJGTPyS с клетъчни редове от нормотензивите (NT) и хипертензивите (НТ).
Връзката на |35S)GTPyS с хипертензивните клетки е доста по-ускорена (стойност на константите 0.005 s'1 в нормотензивните, срещу 0.01 s'1 при хипертензивните).
Фиг. 4 показва GDP-зависимостта от връзката, стимулирана от мастопаран 7 на |35S|GTPyS с изолираните клетъчни мембрани от нормотензивите и хипертензивите. Очевидно максимално стимулираната връзка на |35S|GTPyS с изолираните клетъчни мембрани от хипертензивите се осъществява на по-ниски концентрации на GDP (около 0.2 μιηοΙ/Ι), като за същия ефект, при нормотензивите се изисква концентрация от 1 pmol/l GDP.
По подобен начин максималната връзка, стимулирана от мастопаран 7 Ha|35S]GTPyS с мембранните препарати от хипертензивните клетки има ниска концентрация на свободен Mg2+ (около 0.01 mmol/l), докато за същата максимална връзка Ha[35S|GTPyS с мембрани от • · ······ ·· · · ·· · · · · · · · · ·
V · · · · · · · · · · « · ♦ · · ······ ···«···· нормотензивните клетки е'необходима'концентрация на свободен Mg2+ от 0.01 mmol/1 (фиг. 5).
В последствие бяха проведени опити за повторното извеждане на увеличената активатна способност на G-протеините от хипертензивните клетки. За тази цел фоторецепторния родопсин и трансдукцията на Gпротеиновите а подединици (at) от волско око бяха пречистени (Phillips, W. J., Wong, S. С., Cerione, R. A. Rhodopsin/transducin interactions. II. Influence of the transducin-βγ subunit complex on the coupling of the transducin-a subunit to rhodopsin. J. Biol. Chem. 267: 17040-17046, 1992). Като допълнение, G-протеините бяха извлечени от мембраните от нормотензивни и хипертензивни клетки чрез допълнение на cholate (Mitchell, J., Northup, J. K., Schimer, В. P. Defective guanyl nucleotidebinding protein βγ subunits in a forskolin-resistant mutant of the Y1 adrenocortical cell line. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89 (19): 8933-8937, 1992). Специфичната връзка, предизвикана от родопсин (като рецептор), HapSJGTPyS с α-трансдуцина (at) беше измерена и беше проучен ефектът на cholate екстракти от мембрани на нормотензивни и хипертензивни клетки върху тази връзка. Протеиновата концентрация в cholate екстракти беше идентична при всички експерименти.
Фиг.6 показва ефекта на cholate екстракти от нормотензивни и хипертензивни клетки върху връзката на I^SJGTPyS с at, стимулирана от родопсин.
В този случай става ясно, че cholate екстракти от хипертензивните клетки подпомагат родопсинно-катализираната връзка на f^SJGTPyS с at, доста повече, отколкото посредничеството на cholate екстракти от нормотензивите.
Представените опити позволяват да бъдат направени следните заключения:
В хипертензивните клетки има увеличена активатна способност на Gпротеини. Това е по-ефикасно, тъй като в сравнение с G-протеиновата активация в нормотензивните клетки, при хипертензивните се изискват доста по-малко активирани рецептори и, като допълнение, кинетиките на G-протеиновата активация са значително ускорени (фигури 2 и 3). Освен това максималната G-протеинова активация изисква доста пониски концентрации на свободен GDP и свободен Mg2+ в случая с хипертензивни клетки, отколкото при нормотензивните. Това води до заключението, че протеиновите взаимодействия на α, β и γ подединиците се осъществяват явно по-ефективно в хипертензивните, отколкото в нормотензивните клетки (фигури 4 и 5).
Родопсинно-катализираната връзка на f35S]GTPyS с at е повишена доста повече при cholate екстракти от хипертензивни клетки, отколкото при cholate екстракти от нормотензивни клетки. Това доказва, че
• · »····· ·· ·· • · «· ·· · · · ·· • · · · 9 9 · ·· • · ·· · · 9 999999 • · ···· ·· повишената G-п ротен но&Г Активация в ’случая на хипертензивни клетки може да бъде пресъздадена в инвитро система (фиг. 6). Освен това е възможно, от тези открития недвусмислено да се заключи че основното изменение в хипертензивните клетки ще бъде открито в βγ подединиците на хетеротримерните G-протеини. В упоменатата пресъздадена система няма активация на а подединиците, представена понастоящем само в cholate екстракти на at. Освен това прибавеният фоторецептор родопсин активира само прибавените at, а не и a подединици, оставащи вътре в cholate екстрактите.
Новият протеин съдържа 299 аминокиселини. В сравнение с преди това описаните човешки СрЗ-подединици, тук имаме заличаване в региона на четвъртото WD повторение. Въпреки това обаче, поради регулярната последователност на някои аминокиселини, може да се предскаже, че новият съкратен СрЗ-протеин ще формира също така правилна пропелерна структура, но този нов пропелер този път ще съдържа 6 пропелерни листа (фиг. 9) а не вече 7 (фиг.1).
Тъй като и N терминът и С терминът на новите съкратени Gp3подединици не се променят от преди това известните СрЗ-подединици, може да се предвиди безвредно взаимодействие с а и γ подединиците от хетеротримерните G-протеини и със съединителните рецептори. Очевидно, във връзка с функционалните резултати, описани по-горе, новата съкратена СрЗ-подединица спомага за нарасналата активация на хетеротримерните G-протеини, наблюдаваща се в хипертензивите. Счита се, че причината за появата на съкратените СрЗ-подединици в хипертензивите е алтернативната свръзка на гена, кодиращ за човешки Gp3. Всъщност DNA нивото, тук е интрон, точно пред предполагаемото място на свръзка (фиг.10).
Интронът започва зад база 497 в литературата, когато А от ATG началния кодон е определена като +1.
Интроновите граници и местата на разклоняване са показани с наклонен шрифт и подчертани.
GGA CAC CAC GTG atgaggctgaacattgctggtgctggggcttgggagtgggcccgg cctttctctaacaqtctccctccattttgqcag TGC СТТ GTG GGA
Тъй като един интрон също може да започва около база 620 в литературата, чрез PCR на геномна DNA, съкратената форма на човешките Gp3, описана тук, очевидно е резултат от алтернативна свръзка на първични G₽3, водеща до заличаване на целия ексон.
И ···· • · • ♦
Γ”
ПРОТОКОЛ НА*ПОСУ1ЕДОВАТЕЛНОеТИТЕ (1) ОБЩА ИНФОРМАЦИЯ:
(i) ЗАЯВИТЕЛ:
(A) ИМЕ: BASF Aktiengesellschaft (B) УЛИЦА: Карл-Бош-Щрасе 38 (C) МЯСТО: Лудвигсхафен (E) ДЪРЖАВА: Федерална Република Германия (F) ПОЩЕНСКИ КОД: D-67056 (G) ТЕЛЕФОН: 0621/6048526 (H) ТЕЛЕФАКС: 0621/6043123 (I) ТЕЛЕКС: 1762175170 (й) НАИМЕНОВАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО: РТХ-чувствителни G-протеини, метод за тяхното производство и приложението им (in) БРОЙ НА ПОСЛЕДОВАТЕЛНОСТИТЕ: 2 (iv) КОМПЮТЪРНА КОНФИГУРАЦИЯ:
(A) УСТРОЙСТВО: флопи диск (B) КОМПЮТЪР: IBM PC съвместим (C) РАБОТНА СИСИТЕМА: PC-DOS/MS-DOS (D) СОФТУЕР: Patentin Release #1.0, версия #1.25 (ЕРА) (2) ИНФОРМАЦИЯ ЗА SEQ ID N0:1:
(i) ХАРАКТЕРИСТИКА НА ПОСЛЕДОВАТЕЛНОСТТА:
(A) ДЪЛЖИНА: 1349 основни чифтове (B) ВИД: нуклеинова киселина (C) ФОРМА НА ВРЪЗКИТЕ: двойна (D) ТОПОЛОГИЯ: линейна (й) ВИД НА МОЛЕКУЛАТА: cDNA към mRNS (iii) ХИПОТЕТИЧНО: не (iv) АНТИЧУВСТВИТЕЛНОСТ: не (v) ПЪРВОНАЧАЛЕН ПРОИЗХОД:
(А) ОРГАНИЗЪМ: Homo sapiens (ix) БЕЛЕЗИ:
(A) ИМЕ/КЛЮЧ: CDS (B) ПОЛОЖЕНИЕ: 1..900 (xi) ОПИСАНИЕ НА ПОСЛЕДОВАТЕЛНОСТТА: SEQ ID NO: 1
ATG GGG GAG ATG GAG CAA CTG CGT CAG GAA GCG GAG CAG CTC AAG AAG 48
Met Gly Glu Met Glu Gin Leu Arg Gin Glu Ala G1U Gin Leu Lys Lys
1 5 10 15
CAG ATT GCA GAT GCC AGG AAA GCC TGT GCT GAC GTT ACT CTG GCA GAG 96
Gin lie Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Vai Thr Leu Ala Glu
20 25 30
CTG GTG TCT GGC CTA GAG GTG GTG GGA CGA GTC CAG ATG CGG ACG CGG 144
Leu Vai Ser Gly Leu Glu Vai Vai Gly Arg Vai Gin Met Arg Thr Arg
35 40 45
CGG ACG TTA AGG GGA CAC CTG GCC AAG ATT TAC GCC ATG CAC TGG GCC 192
Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys He Tyr Ala Met His Trp Ala
50 55 60
ACT GAT TCT AAG CTG CTG GTA AGT GCC TCG CAA GAT GGG AAG CTG ATC 240
Thr Asp Ser Lys Leu Leu Vai Ser Ala Ser Gin Asp Gly Lys Leu He
65 70 75 80
GTG TGG GAC AGC TAC ACC ACC AAC AAG GTG CAC GCC ATC CCA CTG CGC 288
Vai Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val HiS Ala He Pro Leu Arg
85 90 95
TCC TCC TGG GTC ATG ACC TGT GCC TAT GCC CCA TCA GGG AAC TTT GTG 336
Ser Ser Trp Vai Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val
100 105 110
GCA TGT GGG GGG CTG GAC AAC ATG TGT TCC ATC TAC AAC CTC AAA TCC 384
Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser He Tyr Asn Leu Lys Ser
115 120 125
CGT GAG GGC AAT GTC AAG GTC AGC CGG GAG CTT TCT GCT CAC ACA GGT 432
Arg Glu Gly Asn Vai Lys val Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly
130 135 140
TAT CTC TCC TGC TGC CGC TTC CTG GAT GAC AAC AAT ATT GTG ACC AGC 480
Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn He Val Thr Ser
145 150 155 160
TCG GGG GAC ACC ACG TGT GCC AAG CTC TGG GAT GTG CGA GAG GGG ACC 528
Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Thr
165 170 175
TGC CGT CAG ACT TTC ACT GGC CAC GAG TCG GAC ATC AAC GCC ATC TGT 576
Cys Arg Gin Thr Phe Thr Gly His Glu Ser Asp He Asn Ala He Cys
180 185 190
TTC TTC CCC AAT GGA GAG GCC ATC TGC ACG GGC TCG GAT GAC GCT TCC 624
Phe Phe Pro Asn Gly G1U Ala He Cys Thr Gly Ser Asp Asp Ala Ser
195 200 205
TGC CGC TTG TTT GAC CTG CGG GCA GAC CAG GAG CTG ATC TGC TTC TCC 672
Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg Ala Asp Gin Glu Leu He Cys Phe Ser
210 215 220
CAC GAG AGC ATC ATC TGC GGC ATC ACG TCT GTG GCC TTC TCC CTC AGT 720
His Glu Ser He lie Cys Gly He Thr Ser Val Ala Phe Ser Leu Ser
225 230 235 240
GGC CGC CTA CTA TTC GCT GGC TAC GAC GAC TTC AAC TGC AAT GTC TGG 768
Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp
245 250 255
GAC TCC ATG AAG TCT GAG CGT GTG GGC ATC CTC TCT GGC CAC GAT AAC 816
Asp Ser Met Lys Ser Glu Arg Val Gly He Leu Ser Gly His Asp Asn
260 265 270
AGG GTG AGC TGC CTG GGA GTC ACA GCT GAC GGG ATG GCT GTG GCC ACA 864
Arg Vai Ser Cys Leu Gly Val Thr Ala Asp Gly Met Ala Val Ala Thr
275 280 285
GGT TCC TGG GAC AGC TTC CTC AAA ATC TGG AAC TGAGGAGGCT < GGAGAAAGGG 917
Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu Lys lie Trp Asn
290 295 300
AAGTGGAAGG CAGTGAACAC ACTCAGCAGC CCCCTGCCCG ACCCCATCTC ATTCAGGTGT
977
TCTCTTCTAT ATTCCGGGTG CCATTCCCAC TAAGCTTTCT CCTTTGAGGG CAGTGGGGAG
1037
·· ··♦·
Υ
CATGGGACTG TGCCTTTGGG AGGCAGCATt • · ·
TCCTCCCATG GCCTTCCCTC CCCACAGTCC • ·· ··♦· ·· ·· ·· ·· · ····
ACGGaEaCAG JGteG^iAAtSAA CTGCCCCATC tcacag’cctc tcccttaatg agcaaggaca >*
ACCTGCCCCT CCCCAGCCCT TTGCAGGCCC AGCAGACTTG AGTCTGAGGC CCCAGGCCCT AGGATTCCTC CCCCAGAGCC ACTACCTTTG TCCAGGCCTG GGTGGTATAG GGCGTTTGGC CCTGTGACTA TGGCTCTGGC ACCACTAGGG TCCTGGCCCT CTTCTTATTC ATGCTTTCTC CTTTTTCTAC CTTTTTTTCT CTCCTAAGAC ACCTGCAATA AAGTGTAGCA CCCTGGT
1097
1157
1217
1277
1337
1394
(2) ИНФОРМАЦИЯ ЗА SEQ ID No: 2:
(i) ХАРАКТЕРИСТИКА HA ПОСЛЕДОВАТЕЛНОСТТА (A) ДЪЛЖИНА: 299 аминокиселини (B) ВИД: аминокиселина (D) ТОПОЛОГИЯ: линейна (й) ВИД НА МОЛЕКУЛАТА: протеин (xi) ОПИСАНИЕ НА ПОСЛЕДОВАТЕЛНОСТТА: SEQ ID NO: 2:
Met Gly Glu Met Glu Gin Leu Arg Gin Glu Ala Glu Gin Leu Lys Lys
1 5 10 15
Gin lie Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Val Thr Leu Ala Glu
20 25 30
Leu Val Ser Gly Leu Glu Val Val Gly Arg Val Gin Met Arg Thr Arg
35 40 45
Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys lie Tyr Ala Met His Trp Ala
50 55 60
Thr Asp Ser Lys Leu Leu Val Ser Ala Ser Gin Asp Gly Lys Leu He
65 70 75 80
Val Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala He Pro Leu Arg
85 90 95
Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val
100 105 110
Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser He Tyr Asn Leu Lys Ser
115 120 125
Arg Glu Gly Asn Val Lys Val Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly
130 135 140
Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn He Val Thr Ser
145 150 155 160
Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Thr
165 170 175
Cys Arg Gin Thr Phe Thr Gly His Glu Ser Asp He Asn Ala He Cys
180 185 190
Phe Phe Pro Asn Gly Glu Ala He Cys Thr Gly Ser Asp Asp Ala Ser
195 200 205
Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg Ala Asp Gin Glu Leu He Cys Phe Ser
210 215 220
His Glu Ser He lie Cys Gly He Thr Ser Val Ala Phe Ser Leu Ser
225 230 235 240
Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp
245 250 255
Asp Ser Met Lys Ser Glu Arg Val Gly lie Leu Ser Gly His Asp Asn
260 265 270
• · ·· ···· ·· ·· ···· · · * ···· • · 9 · · · · 999999 • · ···· · · ··· ··· 99 99 99 99

Claims (22)

1. Бета-З подединица на човешкия G-протеин, характеризираща се с това, че съдържа не повече от шест WD повтарящи се мотива.
2. Бета-З подединица на човешкия G-протеин , съгласно претенция 1, характеризираща се с това, че има аминокиселинна последователност, изобразена в SEQ ID N0:2.
3. Бета-З подединица на човешкия G-протеин съгласно претенция 1 и 2, характеризираща се с това, че нуклеиновокиселинна последователност е кодираща за G-протеина.
4. Бета-З подединица на човешкия G-протеин съгласно претенция 1 и 2, характеризираща се с това, че нуклеиновокиселинна последователност има секвенция изобразена в SEQ ID N0:1.
5. Метод за производство на Бета-З подединица на човешкия Gпротеин, обхващащ нуклеиново киселинна последователност, характеризиращ се с това, че се снабдява на определено място с подходящи регулаторни сигнали и изрази чрез причиняването им в организъм-гостоприемник.
6. Метод, съгласно претенция 5, където изразът се осъществява в имунните клетки на лица с имунна недостатъчност.
7. Метод, съгласно претенция 6, където лицата са HIV-позитивни.
8. Метод, съгласно претенция 5, където изразът се осъществява в клетки на човешко тяло.
9. Приложение на нуклеиново-киселинна последователност както е посочено по-горе във всяка една от предшестващите претенции, за изготвянето на лекарствено средство за лечение на болести, свързани с G-протеиновата дисрегулация.
10. Приложение на генетична модификация в гена на рЗ-подединицата на човешкия G-протеин за диагностициране на болести.
11. Приложение на генетична модификация в гена на рЗ-подединицата на човешкия G-протеин съгласно претенция 10, характеризиращо се с това, че, се определя рискът от страдание от болести, свързани с Gпротеиновата дисрегулация.
12. Приложение съгласно претенции 10 или 11, характеризиращо се с това, че генетичната модификация обхваща нуклеиновокиселинната последователност, изобразена в SEQ ID N0:1.
• · · * ···· ·· ·· ···· · · · · · ·· • · ··· · · ·· е · · · · ·· ······ • · · · · · ··
13. Приложение съгласно претенции 1*0, 11, 12, характеризиращо се с това, че диагностираната болест е сърдечно-съдова, на обмяната на веществата или имунологична.
14. Приложение съгласно претенции 10, 11, 12, характеризиращо се с това, че диагностираната болест е хипертензия.
15. Приложение на нуклеиново-киселинната последователност за създаване на трансгенни животни.
16. Приложение на нуклеиново-киселинна последователност, която е добавъчна към нуклеиново-киселинната последователност, посочена в претенция 3 или 4, за производството на античувствително лекарствено средство за терапия или предпазване от болести.
17. Приложение съгласно претенция 16, характеризиращо се с това, че болестите са хипертония, хипертония при бременност, коронарни сърдечни заболявания, локализирана и/или генерализирана артеросклероза, хипертензия, рестенози след ангиопластични процедури или удар.
18. Приложение съгласно претенция 16, характеризиращо се с това, че болестите [sic] са диабетична секвела, като нефропатия [sic], полиневропатия или ретинопатия [sic].
19. Приложение съгласно претенция 16, характеризиращо се с това, че болестта е метастатичен тумор.
20. Метод за определяне на относителния риск от страдание от болести, свързани с G-протеиновата дисрегулация за един субект, чрез сравнение на генната последователност на рЗ-подединицата на човешкия G-протеин на субекта с генната последователност SEQ 1D N0:1 и в случай, че тя съвпадне с SEQ ID N0:1, определяне на субекта като повишено рисков по отношение на диагностираната болест.
21. Метод съгласно претенция 20, характеризиращ се с това, че генното сравнение се осъществява чрез секвенция, ограничителни анализи или селективна хибридизация.
22. Приложение на протеин съгласно претенция 1 или 2 за подготовка на антитела, насочени специално срещу този протеин.
BG103238A 1996-09-13 1999-03-11 РТХ-ЧУВСТВИТЕЛНИ g-ПРОТЕИНИ, МЕТОД ЗА ТЯХНОТО ПРОИЗВОДСТВО И ПРИЛОЖЕНИЯТА ИМ BG103238A (bg)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19637518A DE19637518A1 (de) 1996-09-13 1996-09-13 PTX-sensitive G-Proteine, ihre Herstellung und Verwendung
PCT/EP1997/004709 WO1998011212A1 (de) 1996-09-13 1997-08-29 Ptx-sensitive g-proteine, ihre herstellung und verwendung

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BG103238A true BG103238A (bg) 2000-06-30

Family

ID=7805651

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG103238A BG103238A (bg) 1996-09-13 1999-03-11 РТХ-ЧУВСТВИТЕЛНИ g-ПРОТЕИНИ, МЕТОД ЗА ТЯХНОТО ПРОИЗВОДСТВО И ПРИЛОЖЕНИЯТА ИМ

Country Status (22)

Country Link
US (1) US6251853B1 (bg)
EP (1) EP0931145A1 (bg)
JP (1) JP2001501811A (bg)
KR (1) KR20000036058A (bg)
CN (1) CN1230222A (bg)
AU (1) AU4619297A (bg)
BG (1) BG103238A (bg)
BR (1) BR9711475A (bg)
CA (1) CA2265467A1 (bg)
CZ (1) CZ73499A3 (bg)
DE (1) DE19637518A1 (bg)
EA (1) EA199900253A1 (bg)
EE (1) EE9900092A (bg)
HU (1) HUP9904110A3 (bg)
IL (1) IL128746A0 (bg)
IS (1) IS4987A (bg)
NO (1) NO991227D0 (bg)
PL (1) PL332417A1 (bg)
SK (1) SK34099A3 (bg)
TR (1) TR199900500T2 (bg)
WO (1) WO1998011212A1 (bg)
ZA (1) ZA978220B (bg)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19619362A1 (de) * 1996-05-14 1997-11-20 Basf Ag Verwendung einer Genveränderung im Gen für humanes G-Protein beta-3-Untereinheit zur Diagnostik von Erkrankungen
WO1999058669A1 (en) * 1998-05-11 1999-11-18 Axys Pharmaceuticals, Inc. Rhoh genes and their uses
DK1112362T3 (da) * 1998-09-10 2006-06-19 Eurofins Medigenomix Gmbh Genforandring i genet for G$g(b)3-underenheden i det menneskelige G-protein
FR2803525B1 (fr) * 2000-01-06 2002-05-03 Sod Conseils Rech Applic Inhibiteur de la transduction des signaux des proteines g heterotrimeriques associe a un agent anti-hypertenseur dans le traitement de l'hypertension arterielle
CA2399141A1 (en) * 2000-02-03 2001-08-09 Snip Biotech Gmbh & Co. Kg Use of a mutation in the gene for the .beta.3-subunit of human g-protein

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5587561A (en) 1995-07-28 1996-12-24 Budayr; Mahdi Stethoscope shield
DE19619362A1 (de) * 1996-05-14 1997-11-20 Basf Ag Verwendung einer Genveränderung im Gen für humanes G-Protein beta-3-Untereinheit zur Diagnostik von Erkrankungen

Also Published As

Publication number Publication date
IS4987A (is) 1999-02-26
EA199900253A1 (ru) 1999-10-28
NO991227L (no) 1999-03-12
KR20000036058A (ko) 2000-06-26
EE9900092A (et) 1999-10-15
SK34099A3 (en) 2000-05-16
WO1998011212A1 (de) 1998-03-19
CA2265467A1 (en) 1998-03-19
DE19637518A1 (de) 1998-04-09
BR9711475A (pt) 1999-08-24
HUP9904110A3 (en) 2001-09-28
CN1230222A (zh) 1999-09-29
JP2001501811A (ja) 2001-02-13
IL128746A0 (en) 2000-01-31
HUP9904110A2 (en) 2000-07-28
TR199900500T2 (xx) 1999-06-21
US6251853B1 (en) 2001-06-26
ZA978220B (en) 1999-03-12
EP0931145A1 (de) 1999-07-28
NO991227D0 (no) 1999-03-12
AU4619297A (en) 1998-04-02
PL332417A1 (en) 1999-09-13
CZ73499A3 (cs) 1999-07-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6524799B1 (en) DNA encoding sparc-related proteins
Banerjee et al. TULP1 mutation in two extended Dominican kindreds with autosomal recessive retinitis pigmentosa
US7063958B1 (en) Nucleic acids db, the receptor for leptin
US6803448B1 (en) GBS toxin receptor
US20020106655A1 (en) Human GPCR proteins
JP2000505301A (ja) Ｃ−ｃ ｃｋｒ−５，ｃｃ−ケモカインレセプタ、その誘導体及びこれらの利用
AU7713098A (en) Ntn-2 member of tnf ligand family
Janssen et al. Connexin32 gene mutations in X-linked dominant Charcot-Marie-Tooth disease (CMTX1)
US20160282350A1 (en) Methods of diagnosing cancer
US6566096B2 (en) Mammalian EDG-7 receptor homologs
US6251853B1 (en) PTX sensitive G proteins, the production and use thereof
US20020077309A1 (en) Diagnostics and therapeutics for pancreatic disorders
BG63214B1 (bg) Приложение на мутация в гена на човешката g-протеинова бета 3-субединица за диагностициране на заболявания
JPH10337189A (ja) 新規化合物
JPH09508267A (ja) 自然抵抗性結合マクロファージタンパク質およびその使用法
JP2002300892A (ja) 神経細胞付着スプライシング変種
US20030022186A1 (en) Novel human G-protein coupled receptor, hgprbmy18, expressed highly in pituitary gland and colon carcinoma cells
JPH10304883A (ja) 新規化合物
US20030054444A1 (en) Novel human G-protein coupled receptor, HGPRBMY8, expressed highly in brain
EP1308458A1 (en) New polynucleotides and polypeptides of the CX26 gene
Maves et al. Cloning and characterization of the cDNA encoding guinea-pig properdin: a comparison of properdin from three species
JP2004041175A (ja) ヒトｌｉｇ−１相同体（ｈｌｉｇ−１）
CN1279716A (zh) 人HsgⅢ基因
US7619079B2 (en) Db, the receptor for leptin, nucleic acids encoding the receptor, and uses thereof
CN1375503A (zh) 雄激素受体复合物相关蛋白