CZ73499A3 - Podjednotka ß3 lidského G proteinu - Google Patents

Podjednotka ß3 lidského G proteinu Download PDF

Info

Publication number
CZ73499A3
CZ73499A3 CZ99734A CZ73499A CZ73499A3 CZ 73499 A3 CZ73499 A3 CZ 73499A3 CZ 99734 A CZ99734 A CZ 99734A CZ 73499 A CZ73499 A CZ 73499A CZ 73499 A3 CZ73499 A3 CZ 73499A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
protein
disease
subunit
nucleotide sequence
human
Prior art date
Application number
CZ99734A
Other languages
English (en)
Inventor
Winfried Siffert
Original Assignee
Winfried Siffert
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Winfried Siffert filed Critical Winfried Siffert
Publication of CZ73499A3 publication Critical patent/CZ73499A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4722—G-proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)

Description

(57) Anotace:
Podjednotka beta-3 lidského G-proteinu, kde tato podjednotka zahrnuje maximálně šest opakování motivu WD.
CZ 734-99 A3
0« 0000
9 ·
0 • 0
9 9 4
11/ · 99 99
9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 • » 0 0000 · 00« 000 «·· 99
0 0* ··
Podjednotka β3 lidského G-proteinu
Oblast techniky
Vynález popisuje nově objevené lidské G-proteiny, zvláště pak podjednotky β3 G-proteinů, a způsoby přípravy a použití těchto proteinů v diagnóze a terapii.
Dosavadní stav techniky
Heterotrimerní proteiny vázající nukleotidy guaninu (Gproteiny) jsou velmi důležité při přenosu signálu uvnitř buňky. Zprostředkovávají přenos extracelulárních signálů po stimulaci hormonálních receptorů a dalších receptorů, které po aktivaci procházejí konformační změnou. Ta vede k aktivaci G-proteinů, které mohou následně aktivovat nebo inhibovat intracelulární efektory (například iontové kanály, enzymy). Heterotrimerní G-proteiny jsou složené ze tří podjednotek α, β a γ. K dnešnímu dni bylo biochemickými a molekulárně biologickými metodami charakterizováno několik různých podjednotek a, 5 podjednotek β a přibližně 12 podjednotek γ (Birnbaumer L. a Birnbaumer M., Signál transduction by G proteins: vydáno v roce 1994, J. Recept. Res. 15:213 až 252, 1995; Offermanns S. a Schultz G., Complex Information Processing by the transmembrane signaling systém involving G proteins. Naunyn Schmiedebergs-Arch. Pharmacol. 350:329 až 338, 1994; Nurnberg B., Gudermann T. a Schultz G., Receptors and G proteins as primary components of transmembrane signál transduction. 2. část G proteins: structure and function. J. Mol. Med. 73:123 až 132, 1995; Neer E. J., Heterotrimeric G
99
9 9 9
9 9 9
999 99 9
9
99
9 9 • 9 « · ···· proteins: Organizers of Transmembrane Signals. Cell 80:249 až 257, 1995; Rens-Domiano S. a Hamm Η. E., Structural and functional relationšhips of heterotrimeric G-proteins. FASEB J. 9:1059 až 1066, 1995).
Aktivace určitých podjednotek a prostřednictvím receptorů může být inhibována preinkubací s toxinem černého kašle (PTX-pertussis toxin). Mezi tyto podjednotky zahrnujeme především a izoformy ail, ai2 a ai3 a různé podjednotky ao. G-proteiny těchto typů jsou také označovány jako PTXsenzitivní G-proteiny.
Podstata vynálezu
Podjednotky γ a β jsou nositeli základních funkcí při aktivaci G-proteinů a při modulaci intracelulárních reakcí. Všechny podjednotky β G-proteinů, které byly dosud popsány, vykazují vysoký stupeň homologie na úrovni nukleotidové sekvence a rovněž na úrovni aminokyselinové sekvence. Tato homologie existuje nejenom mezi lidskými podjednotkami β (βΐ, β2 a β3), ale rovněž při srovnání podjednotek β jiných druhů, například octomilky nebo kvasinek.
Rentgenostrukturní analýzou byly v podjednotkách α, β a γ určeny ty aminokyseliny, které jsou ve vzájemném kontaktu a jsou tudíž nepostradatelné pro uspořádanou tvorbu heterotrimerů.
Všechny podjednotky β G-proteinů, které byly dosud popsány, náleží ke skupině proteinů obsahujících WD motivy. Nkonec podjednotky β přednostně interaguje s podjednotkami γ a C-koncová část se účastní interakcí s receptory.
Podjednotky β vytvářejí takzvané „vrtulovité struktury (propeller structure). Tyto vrtulovité struktury
99
9 9 9
9 9 9
999 999
9
99
9999 99 9
9 9 9 *9
9 9 ·99 • 9 «99 9999
9 9 9 9
9999 9 9·· v podjednotkách β G-proteinů jsou složeny ze sedmi β-listů, a každý β-list zahrnuje 4 oblasti aminokyselin v antiparalelním uspořádání. Sedmičetná symetrie vrtulovité struktury může být detekována na úrovni aminokyselinové sekvence, kde je zahrnuto sedm opakování motivu WD (tryptofan-kyselina asparágová). Motiv WD je tvořen přibližně 40 aminokyselinami a zahrnuje množství konzervativních aminokyselin včetně sekvence dipeptidu Trp-Asp. Zmíněný motiv WD je často ukončen opakováním WD (obrázek 1) .
Nedávno bylo překvapivě zjištěno, že podjednotka β3 Gproteinů obsahující pouze 6 (namísto původně popsaných 7) motivů WD se vykytuje například u pacientů trpících hypertenzí. Ve srovnáni s osobami s normálním tlakem je u pacientů trpících hypertenzí usnadněna buněčná aktivace PTXsenzitivních G-proteinů.
Molekulová analýza odhalila u podjednotky β3 pacientů trpících hypertenzí novou aminokyselinovou sekvenci, která je ve srovnáni se známou sekvencí o 41 aminokyselin kratší. Tato sekvence je znázorněna jako SEK. ID. Č: 2. Formálně je tato sekvence odvozena ze známé lidské podjednotky β3 delecí aminokyselin 167 až 207 .
Odpovídající sekvence DNA kódující protein popsaný SEK. ID. Č: 2 je popsána jako SEK. ID. Č: 1.
Příčinou výskytu zkrácené formy podjednotky ΰβ3 u pacientů trpících hypertenzí je pravděpodobně alternativní sestřih odpovídajícího genu. Na úrovni DNA se těsně před předpokládaným místem sestřihu nalézá intron. Tento intron začíná za nukleotidem 497 (číslování jako v SEK. ID. Č: 1) .
Z templátu genomové DNA bylo pomocí PCR rovněž možné detekovat intron začínající přibližně za nukleotidem 620. Zkrácená forma zřejmě vznikla delecí celého exonu. Vynález dále popisuje způsob přípravy zkrácených forem lidských •
0
0 0
0 0
000 •0 0000 « 0 0 • · ·
• 0 00 0 0 0 ♦ · 0 • ·0
W 0 0 0
0 0000 0 0 0 podjednotek Θβ3 (popsaných výše). Tento způsob zahrnuje expresi nukleotidové sekvence kódující takovou zkrácenou formu v hostitelském organizmu.
Pro expresi rekombinantního proteinu je nutné vytvořit konstrukt, který kromě kódující nukleotidové sekvence obsahuje rovněž signální a regulační sekvence jako například promotory, terminátory, místa odpovědná za vazbu na ribozom, polyadenylační signál a podobně. Obecné postupy pro expresi rekombinantních genů jsou odborníkům dobře známé.
Vynález se dále týká použití nukleotidových sekvencí podle vynálezu k přípravě účinných látek pro genovou terapii. Zavedením těchto nukleotidových sekvencí, buď samostatně nebo ve formě vhodného vektoru, do buněk pacientů může být dosaženo snadnější aktivovatelnosti G-proteinů v těchto buňkách.
Toto je žádoucí u velkého množství patologických stavů, které jsou spojeny s poruchami regulace funkce G-proteinů. .....
Jako onemocnění spojená s poruchou regulace funkce Gproteinu jsou označována onemocnění, při kterých se Gprotein účastní přenosu signálu, ale vykonává tuto svoji funkci nefyziologických způsobem.
Mezi tyto poruchy patří kardiovaskulární onemocnění, metabolické poruchy a poruchy imunitního systému.
Kardiovaskulárními onemocněními, které mohou být zmíněny, jsou:
Hypertenze, gravidní hypertenze (gestóza, hypertenze v těhotenství), nemoc srdečních věnčitých tepen, lokalizovaná a/nebo nelokalizovaná ateroskleróza, stenóza krevních cév, restenóza po revaskularizačních procedurách (např. PTCA-perkutánní transluminální koronární angioplastikas nebo bez implantovaného stentu), sklon k mrtvicím nebo trombózám a zvýšená agregace krevních destiček.
·· 9 44 44
4 4 9 9 4 4 ···· 4 9 4 9
4 444 4444 4 994 444
4 9 9 4 4 4
9444 4 44 4 44 44 ·« ····
Metabolickými poruchami, které mohou být zmíněny, jsou: Syndrom látkové výměny, inzulínová rezistence a hyperinzulinémie, diabetes II. typu, diabetické komplikace (např. nefropatie, neuropatie, retinopatie atd.), poruchy metabolizmu lipidů, poruchy centrální chemorecepce (C02 tolerance, acidózní tolerance, syndrom náhlého úmrtí kojenců (SIDS)).
Poruchami imunitního systému, které mohou být zmíněny, jsou:
Snížená síla imunitní odpovědi organizmu (tvorba imunoglobulinů, agresivita T-buněk a NK-buněk), obecně snížená schopnost proliferace včetně snížené schopnosti hojit zranění, sklon ke vzniku nádorů a proliferace zahrnující možnost metastázování zhoubně přeměněných buněk, doba trvání latentní fáze po nákaze HIV, než se nemoc stane klinicky pozorovatelnou, Kaposiho sarkom, sklon k cirhóze jater, transplantační tolerance a odmítnutí transplantátu.
Do rozsahu vynálezu dále spadá použití nukleotidových sekvencí podle vynálezu k diagnóze patologických stavů, zvláště pak ke stanovení rizika postižení onemocněním spojeným s poruchou regulace funkce G-proteinů.
Vynález může být rovněž využit, mimo stanovení rizika určitých poruch, k získání obecných fyziologických údajů týkajících se například chemorecepce, C02 tolerance, acidózní tolerance, rizika syndromu náhlého úmrtí kojenců (SIDS) nebo způsobilosti k různým druhům sportů.
Do rozsahu vynálezu dále spadá použití nukleotidových sekvencí komplementárních k nukleotidovým sekvencím kódujícím zkrácenou formu podjednotky Θβ3. Sekvence tohoto typu mohou být použity jako antisense konstrukty k léčbě nebo prevenci patologických stavů spojených s poruchami regulace funkce G-proteinů.
• 4 44
4 *
4 4
444 444 ke ·* ···· > 4 4 • 4 *
4 ·
4 4 4
4 4444 • · ·
4
Do rozsahu vynálezu dále spadají způsoby použitelné ke stanovení relativního rizika výskytu onemocnění spojeného s poruchou regulace funkce G-proteinů u daného subjektu, kde je toto stanovení provedeno srovnání sekvence genu kódujícího podjednotku β3 lidského G-proteinu daného subjektu s nukleotidovou sekvencí popsanou jako SEK. ID. Č: 1.
V případě, že jsou tyto dvě sekvence shodné, je danému subjektu připsáno zvýšené riziko onemocnění.
Použití vynálezu pro stanovení relativního rizika vývinu nemoci předpokládá odebrání vzorku, který obsahuje genetickou informaci, z organizmu pacienta. Toho je zpravidla dosaženo odebráním krve, ze které je izolována nukleová kyselina .
Z izolované nukleové kyseliny pacienta je určena struktura genu pro podjednotku β3 G-proteinu a jeho sekvence je porovnána se sekvencí zobrazenou jako SEK. ID. Č. ·. 1.
Struktura genu může být určena metodou sekvenování nukleové kyseliny. To může být provedeno bud' přímo z genomové DNA anebo po amplifikaci nukleové kyseliny například technikou polymerázové řetězové reakce (PCR).
Struktura genu může být určena bud' na úrovni genomové DNA anebo na úrovni mRNA nebo cDNA.
Ve výhodném provedení je sekvence stanovena po amplifikaci cDNA metodou PCR. Primery vhodné pro metodu PCR mohou být odborníky snadno vyvozeny ze sekvencí zobrazených jako SEK. ID. Č.:l. Ve výhodném provedení je v každém případě vybrán primer vázající se k řetězci a ke komplementárnímu řetězci před a za zvoleným místem delece.
Pro srovnávání genů mohou být použity i další metody, například metoda selektivní hybridizace nebo metoda mapování restrikčními enzymy.
Diagnostické metody popsané v předchozím textu mohou být rovněž prováděny na úrovni proteinu. Proteiny podle vynálezu ·· ···· • · · · • · · · ··· ···
9··4
mohou být například použity k produkci specifických protilátek rozpoznávajících zkrácenou formu podjednotky Ωβ3. Protilátky tohoto typu mohou být, tam kde je to vhodné, použity při stanoveních ELISA nebo k diagnostice (prováděné spolu s nebo jako náhrada diagnostiky na úrovni genů) na úrovni proteinů.
Vynález se dále týká přípravy transgenních zvířat nesoucích výše popsanou genetickou mutaci (zkrácenou podjednotku Θβ3). Transgenní zvířata tohoto typu jsou velmi důležitá, zvláště jako živočišný model pro výzkum a léčbu poruch popsaných výše. Odborníkům jsou dobře známy způsoby přípravy transgenních zvířat.
Popis obrázků na výkresech
Obrázek 1 znázorňuje strukturu podjednotky β G-proteinu a její interakci s podjednotkou γ.
Obrázek 2 znázorňuje závislost aktivace G-proteinů indukované působením mastoparanu 7 (MAS 7) na koncentraci mastoparanu, a to u buněk získaných z organizmu osob s normálním tlakem (NT-buňky, prázdné kroužky) a u buněk získaných z organizmu pacientů trpících hypertenzí (HT-buňky, plná kolečka) . Hodnoty EC50 jsou 5 μΜ pro HT-buňky a 47 μΜ pro NTbuňky.
Obrázek 3 znázorňuje časovou závislost vazby [35S] GTPyS (stimulované působením mastoparanu 7) na buněčné linie NT (NT, prázdné kroužky) a na HT-buňky (HT, plná kolečka).
Obrázek 4 znázorňuje závislost vazby [35S] GTPyS (stimulované působením mastoparanu 7) na buněčné membrány izolované z NT-buněk (NT, prázdné kroužky) a z HT-buněk (HT, plná kolečka) na koncentraci GDP.
44
4 9 4
4 9 4
494 444
4
44 ·· ···· • · · • · ·
• ·
9949 9
9
4 9
9 9 9
4 4944
9 4
4
Obrázek 5 znázorňuje závislost vazby [35S] GTPyS (stimulované působením mastoparanu 7) na buněčné membrány izolované z NT-buněk (NT, prázdné kroužky) a z HT-buněk (HT, plná kolečka) na koncentraci Mg+2.
Obrázek 6 znázorňuje rekonstituci aktivace G-proteinů působením extraktů (získaných pomocí cholátu) z buněčných membrán z NT-buněk (NT, prázdné kroužky) a z HT-buněk (HT, plná kolečka).
Obrázek 7 znázorňuje strukturu nové varianty lidského proteinu G 3 a její interakci s podjednotkou γ.
Příklady provedení vynálezu
Vynález je dále ilustrován na následujících příkladech.
Příklad 1
Funkční výsledky aktivace G-proteinů při esenciální hypertenzi
Aktivace G-proteinů byla detailně charakterizována na NT-buňkách a na HT-buňkách. Za tímto účelem byla sledována (a kvantifikována) stimulovaná inkorporace radioaktivně značeného [35S] GTPyS postupem popsaným v publikaci Wieland a další (Wieland T., Liedel K., Kaldenberg-Stasch S., Meyer zu Heringdorf D., Schmidt M. a Jakobs K. Η. , Análysis of receptor-G-protein interactions in permeabilized cells. NaunynSchmiedeberg's Arch. Pharmacol. 351: 329 až 336, 1995). Gproteiny byly na počátku aktivovány stimulací buněk (permeabilizovaných pomocí digitoninu) působením peptidu mastoparan
7. Tento peptid simuluje konfiguraci „aktivovaný G-protein spojený s receptorem, a tudíž může být použit k indukci ·· ···· aktivace G-proteinů, která není závislá na přítomnosti receptorů (Ross E. M. a Hagashijima T., Regulation of G protein activation by mastoparan and other cationic peptides, Methods Enzymol. 237:27 až 39, 1994). Vazba GTPyS indukovaná pomocí MAS-7 je plně PTX-senzitivní a může být tudíž využita ke kvantifikaci aktivace heterotrimerních G-proteinů typu Gi. Obrázek 2 znázorňuje závislost aktivace G-proteinů indukované působením mastoparanu 7 (MAS 7) na koncentraci mastoparanu, a to u buněk získaných z organizmu osob s normálním tlakem (NT) a buněk získaných z organizmu pacientů trpících hypertenzí (HT). MAS-7 indukuje vytvoření pevné vazby [35S] GTPyS na HT-buňky, a to s hodnotou EC50 přibližně 5 μΜ (Obr. 2). Maximální vazby je dosaženo při koncentraci MAS-7 přibližně 25 až 50 μΜ. Naproti tomu, koncentrace potřebná k indukci stejně intenzivní vazby [35S] GTPyS na NT-buňky je desetinásobně vyšší (obrázek 2). Tato data ukazují, že k aktivaci PTX-senzitivních G-proteinů v HT-buňkách (ve srovnání s NT-buňkami) postačuje podstatně méně aktivovaných receptorů.
Vazba [35S] GTPyS na HT-buňky je podstatně zrychlena (rychlostní konstanta 0,005 s1 u NT-buněk ve srovnání s konstantou 0,01 s'1 u HT-buněk) .
Obrázek 4 znázorňuje závislost vazby [35S] GTPyS (stimulované působením mastoparanu 7) na buněčné membrány izolované z NT-buněk a HT-buněk na koncentraci GDP. Je zřejmé, že maximální stimulace vazby [35S] GTPyS k membránám z HT-buněk je dosaženo při nižších koncentracích GDP (přibližně 0,2 μπιοί/ΐ) než je tomu u NT-buněk, kde je k dosažení stejného účinku nutné použít GDP v koncentraci 1 μιηοΐ/ΐ.
Podobně, maximální intenzity vazby (stimulované působením mastoparanu 7) [35S] GTPyS k membránám izolovaným z HTbuněk je dosaženo při nižších koncentracích volných iontů ·
• ·
Mg+2 (přibližně 0,01 mmol/l) než je tomu u NT-buněk, kde je k dosažení vazby [35S] GTPyS o maximální intenzitě nutné použít volné ionty Mg+2 v koncentracích 0,1 mmol/l (obrázek 5).
Další experimenty sledovaly zvýšenou aktivovatelnost Gproteinů odvozených z HT-buněk. Za tímto účelem byly z očí hovězího dobytka purifikovány fotoreceptor rhodopsin a transductin-podjednotka a G-proteinu (at) ; Phillips W. J., Wong S. C. a Cerione R. A. Rhodopsin/transductin interactions.
II. Influence of thé transductin-βγ subunit complex on the coupling of the transductin-a subunit to rhodopsin. J. Biol. Chem. 267:17040 až 17046, 1992. G-proteiny byly navíc pomocí cholátu extrahovány z membrán HT- a NT-buněk (Mitchell J., Northup J. K. a Schimmer Β. P. Defective guanyl nucleotide binding protein βγ subunits in a forskolin-resistant mutant of the Yl adrenocortical cell line. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 89(19):8933 až 8937, 1992). Byla sledována specifická vazba (indukovaná rhodopsinem = receptorem) [35S] GTPyS k atransductinu (at) a byl zkoumán vliv extraktů (získaných pomocí cholátu) z membrán HT- a NT-buněk na tuto vazbu. Koncentrace proteinů ve zmíněných extraktech byla ve všech experimentech stejná.
Obrázek 6 znázorňuje vliv extraktů (získaných pomocí cholátu) z HT- a NT-buněk na vazbu [35S] GTPyS k atransductinu, kde je tato vazba stimulována rhodopsinem.
V tomto případě je zřejmé, že extrakty (získané pomocí cholátu) z HT-buněk stimulují vazbu (katalyzovanou rhodopsinem) [35S] GTPyS k at podstatně účinněji než extrakty (získané pomocí cholátu) z NT-buněk.
Provedené experimenty umožňují vyvození následujících závěru • V HT-buňkách je zvýšena aktivovatelnost G-proteinů. Tato aktivovatelnost je, ve srovnání s aktivovatelnost! G10 ·· ···· ·· I • 9 · · · · « · » · · • · · · · ·*<* • · · * · ··*« · ·· · »·
I · » · • 9 9 proteinů z NT-buněk, daleko účinnější a vyžaduje podstatně méně aktivovaných receptorů a navíc je kinetika aktivace těchto G-proteinů zřetelně rychlejší (obrázky 2 a 3) .
Ve srovnání s NT-buňkami je u HT-buněk maximální aktivace G-proteinů dosaženo při nižších koncentracích GDP a volných iontů Mg+2. Toto pozorování vede k závěru, že proteinové interakce podjednotek α, β a γ probíhají v HT-buňkách podstatně účinněji než je tomu v NT-buňkách (obrázky 4 a 5).
Vazba [35S]GTPyS k at, kde je tato vazba indukována rhodopsinem, je působením extraktů (získaných pomocí cholátu) z HT-buněk stimulována podstatně účinněji než při použití extraktů (získaných pomocí cholátu) z NT-buněk. Tato skutečnost dokazuje, že zvýšená aktivovatelnost Gproteinů z HT-buněk může být rekonstituována v systému in vitro (obrázek 6). Z těchto zjištění je. navíc možné jednoznačně říci, že příčiny zásadních změn v HT-buňkách jsou situovány v podjednotkách βγ heterotrimerních Gproteinů. V experimentech sledujících možnost rekonstituce G-proteinů (o vyšší aktivovatelnosti) z HT-buněk není, v přítomnosti at, pozorována žádná aktivace podjednotek a přítomných v extraktech buněk (získaných pomocí cholátu). Fotoreceptor rhodopsin navíc specificky aktivuje pouze at a neaktivuje podjednotky a přítomné ve zmíněných extraktech.
Nově popsaný protein se skládá z 299 aminokyselin. Ve srovnání s lidskou podjednotkou ΰβ3 popsanou dříve, se v této nově popsané podjednotce nachází delece v oblasti čtvrtého opakování WD. Vzhledem k pravidelnosti výskytu určitých aminokyselin v sekvenci je nicméně možné předpoklá11 «· ···· ·· r ·· ·* ··· ···· • t · · · · · · · · • · · · · ···· · ··· *·· • · · » · · * «·»« · ·· · ·· ·· dat, še nový, zkrácený protein Θβ3 bude rovněž vytvářet vrtulovitou strukturu, v níž ale bude namísto sedmi listů vrtule (obrázek 1) pouze šest listů (obrázek 9).
Jelikož jsou jak N-konec, tak C-konec nové, zkrácené podjednotky Θβ3 stejné jako u dříve popsané podjednotky Θβ3, je možné u této zkrácené podjednotky předpokládat stejnou intenzitu interakcí s a a γ podjednotkami heterotrimerních G-proteinů a spřažení s receptory. Ve spojení s výsledky funkčních studií popsaných výše je zřejmé, že nová, zkrácená podjednotka Θβ3 je příčinou zvýšené aktivovatelnosti heterotrimernich G-proteinů, pozorované u pacientů trpících hypertenzí.
Předpokládá se, že důvodem výskytu zkrácené podjednotky σβ3 u pacientů trpících hypertenzí je alternativní sestřih genu kódujícího lidskou ΰβ3. Na úrovni DNA se přímo před předpokládaným místech sestřihu nalézá intron.
Tento intron začíná za baží 497 v otevřeném čtecím rámci (kde je A ve startovním kodonu ATG je definován jako +1).
Místa sestřihu tohoto intronu a místo větvení jsou znázorněny podtrženou kurzívou.
GGA CAC CAC GTG gtgaggctgaacattgctggtgctggggcttgggagtgggcccgg ccť.ttctctaacaqtctccctccattttqqcaq TGC CTT GTG GGA
Jelikož pomocí PCR je možné rovněž detekovat intron začínající v otevřeném čtecím rámci za baží 620, je zřejmé, že zkrácená forma lidského Θβ3 popsaná v této přihlášce je důsledkem alternativního sestřihu původní podjednotky Οβ3, kde tento alternativní sestřih vede k deleci celého exonu.
·· • · 0 0 • · · · · ·
000 0 *
SEZNAM SEKVENCÍ (1) OBECNÉ INFORMACE:
1. PŘIHLAŠOVATEL:
(A) Jméno: BASF Aktiengesellschaft (B) Ulice: Carl-Bosh-Strasse 38 (C) Město: Ludwigshaften (D) Stát: Spolková republika Německo (E) PSČ: D-67056 (F) Telefon: 0621/6048526 (G) Telefax: 0621/6043123 (H) Telex: 1762175170 (ii) NÁZEV VYNÁLEZU: Podjednotka β3 lidského G-proteinu (iii) POČET SEKVENCÍ: 2 (iv) ADRESA PRO KORESPONDENCI:
(A) ADRESÁT: ČERMÁK-HOŘEJŠ-VRBA, Advokátní a patentová kancelář (B) ULICE (C) MĚSTO (D) STÁT (E) PSČ:
Národní 32
Praha 1
Česká Republika 116 66 (v) STROJNĚ ČITELNÁ FORMA:
(A) TYP MÉDIA: Floppy disk (B) POČÍTAČ: IBM PC kompatibilní (C) OPERAČNÍ SYSTÉM: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Release č. 1.0, Verze č.
1.25 (2) INFORMACE O SEK. ID. Č.:l:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 1394 párů bázi
(B) TYP: nukleová kyselina
(C) POČET ŘETĚZCŮ: dva
(D) TOPOLOGIE: lineární
(ii) TYP MOLEKULY: cDNA k mRNA
iii) HYPOTETICKÝ: NE
(iv) ANTISENSE: NE
(vi) PŮVODNÍ ZDROJ:
(A) ORGANIZMUS : Homo Sapiens
(ix) CHARAKTERISTICKÉ ZNAKY:
(A) NÁZEV/KLÍČ : CDS
(B) UMÍSTĚNÍ: 1..900
(xi) POPIS SEKVENCE: SEK. ID. Č.;1:
ATG GGG GAG ATG GAG CAA CTG CGT CAG GAA GCG GAG CAG CTC AAG AAG 48
Met Gly Glu Met Glu Gin Leu Arg Gin Glu Ala Glu Gin Leu Lys Lys
1 5 10 15
CAG ATT GCA GAT GCC AGG AAA GCC TGT GCT GAC GTT ACT CTG GCA GAG 96
Gin Ile Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Val Thr Leu Ala Glu
20 25 30
CTG GTG TCT GGC CTA GAG GTG GTG GGA CGA GTC CAG ATG CGG ACG CGG 144
Leu Val Ser Gly Leu Glu Val Val Gly Arg Val Gin Met Arg Thr Arg
35 40 45
CGG ACG TTA AGG GGA CAC CTG GCC AAG ATT TAC GCC ATG CAC TGG GCC 192
Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys Ile Tyr Ala Met His Trp Ala
50 55 60
• · · · • · • · • · · · · · • · · ·· ·
ACT Thr GAT Asp TCT AAG CTG CTG GTA AGT GCC TCG CAA GAT GGG AAG CTG ATC Ile 240
Ser Lys Leu Leu Val Ser Ala Ser Gin Asp Gly Lys Leu
65 70 75 80
GTG TGG GAC AGC TAC ACC ACC AAC AAG GTG CAC GCC ATC CCA CTG CGC 288
Val Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala Ile Pro Leu Arg
85 90 95
TCC TCC TGG GTC ATG ACC TGT GCC TAT GCC CCA TCA GGG AAC TTT GTG 336
Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val
100 105 110
GCA TGT GGG GGG CTG GAC AAC ATG TGT TCC ATC TAC AAC CTC AAA TCC 384
Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser Ile Tyr Asn Leu Lys Ser
115 120 125
CGT GAG GGC AAT GTC AAG GTC AGC CGG GAG CTT TCT GCT CAC ACA GGT 432
Arg Glu Gly Asn Val Lys Val Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly
130 135 140
TAT CTC TCC TGC TGC CGC TTC CTG GAT GAC AAC AAT ATT GTG ACC AGC 480
Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn Ile Val Thr Ser
145 150 155 160
TCG GGG GAC ACC ACG TGT GCC AAG CTC TGG GAT GTG CGA GAG GGG ACC 528
Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Thr
165 170 175
TGC CGT CAG ACT TTC ACT GGC CAC GAG TCG GAC ATC AAC GCC ATC TGT 576
Cys Arg Gin Thr Phe Thr Gly His Glu Sér Asp Ile Asn Ala Ile Cys
180 185 190
TTC TTC CCC AAT GGA GAG GCC ATC TGC ACG GGC TCG GAT GAC GCT TCC 624
Phe Phe Pro Asn Gly Glu Ala Ile Cys Thr Gly Ser Asp Asp Ala Ser
195 200 205
TGC CGC TTG TTT GAC CTG CGG GCA GAC CAG GAG CTG ATC TGC TTC TCC 672
Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg Ala Asp Gin Glu Leu Ile Cys Phe Ser
210 215 220 1
CAC GAG AGC ATC ATC TGC GGC ATC ACG TCT GTG GCC TTC TCC CTC AGT 720
His Glu Ser Ile Ile Cys Gly Ile Thr Ser Val Ala Phe Ser Leu Ser·
225 230 235 240
GGC CGC CTA CTA TTC GCT GGC TAC GAC GAC TTC AAC TGC AAT GTC TGG 768
Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp
245 250 255
GAC TCC ATG AAG TCT GAG CGT GTG GGC ATC CTC TCT GGC CAC GAT AAC 816
Asp Ser Met Lys Ser Glu Arg Val Gly Ile Leu Ser Gly His Asp Asn
260 265 270
AGG GTG AGC TGC CTG GGA GTC ACA GCT GAC GGG ATG GCT GTG GCC ACA 864
Arg Val Ser Cys Leu Gly Val Thr Ala Asp Gly Met Ala Val Ala Thr
275 280 285
GGT TCC TGG GAC AGC TTC CTC AAA ATC TGG AAC TGAGGAGGCT < GGAGAAAGGG 917
Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu Lys Ile Trp Asn
290 295
AAGTGGAAGG CAGTGAACAC ACTCAGCAGC TCTCTTCTAT ATTCCGGGTG CCATTCCCAC
CCCCTGCCCG
TAAGCTTTCT
300
ACCCCATCTC
CCTTTGAGGG
ATTCAGGTGT
CAGTGGGGAG
977
1037 • ·
1097
1157
1217
1277
1337
1394 ·· fefe·· ·· ·
CATGGGACTG TGCCTTTGGG AGGCAGCATC AGGGACACAG GGGCÁSÁGAA CTGCCCCATC *’ TCCTCCCATG GCCTTCCCTC CCCACAGTCC TCACAGCCTC TCCCTTAATG AGCAAGGACA ACCTGCCCCT CCCCAGCCCT TTGCAGGCCC AGCAGACTTG AGTCTGAGGC CCCAGGCCCT AGGATTCCTC CCCCAGAGCC ACTACCTTTG TCCAGGCCTG GGTGGTATAG GGCGTTTGGC CCTGTGACTA TGGCTCTGGC ACCACTAGGG TCCTGGCCCT CTTCTTATTC ATGCTTTCTC CTTTTTCTAC CTTTTTTTCT CTCCTAAGAC ACCTGCAATA AAGTGTAGCA CCCTGGT (2) INFORMACE O SEK. ID. Č.:2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 299 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein
(xi; ) POPIS SEKVENCE: SEK. ID. v C. : 2 :
Met 1 Gly Glu Met Glu Gin Leu Arg 5 Gin Glu 10 Ala Glu Gin Leu Lys Lys 15
Gin Ile Ala Asp 20 Ala Arg Lys Ala Cys 25 Ala Asp Val Thr Leu Ala Glu 30
Leu Val Ser Gly 35 Leu Glu Val Val 40 Gly Arg Val Gin Met Arg Thr Arg 45
Arg Thr 50 Leu Arg Gly His Leu Ala 55 · Lys Ile Tyr Ala Met His Trp Ala 60
Thr 65 Asp Ser Lys Leu Leu Val Ser 70 Ala Ser Gin Asp Gly Lys Leu Ile 75 80
Val Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn 85 Lys Val 90 His Ala Ile Pro Leu Arg 95
Ser Ser Trp Val 100 Met Thr Cys Ala Tyr 105 Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val 110
Ala Cys Gly Gly 115 Leu Asp Asn Met 120 Cys Ser Ile Tyr Asn Leu Lys Ser 125
Arg GlU 130 Gly Asn Val Lys Val Ser 135 Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly 140
Tyr 145 Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu 150 Asp Asp Asn Asn Ile Val Thr Ser 155 160
Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Lys 165 Leu Trp 170 Asp Val Arg Glu Gly Thr 175
Cys Arg Gin Thr 180 Phe Thr Gly His Glu 185 Ser Asp Ile Asn Ala Ile Cys 190
·· • · · ··· * · « · • · ···· · · · · • 9 · · · ···· · ··· ··· • · · · · · ·
999 9 99 9 99 99
Phe Phe Pro 195 Asn Gly Glu Ala Ile Cys Thr Gly Ser Asp Asp Ala Ser
200 205
Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg Ala Asp Gin Glu Leu Ile Cys Phe Ser
210 215 220
His Glu Ser Ile Ile Cys Gly Ile Thr Ser Val Ala Phe Ser Leu Ser
225 230 235 240
Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp
245 250 255
Asp Ser Met Lys Ser Glu Arg Val Gly Ile Leu Ser Gly His Asp Asn
260 265 270
Arg Val Ser Cys Leu Gly Val Thr Ala Asp Gly Met Ala Val Ala Thr
275 280 285
Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu Lys Ile Trp Asn
290 295
·· ©··· • to · ··· · · · · • · · · · · · · · · • · · · · ···· · ··· ··· « · · · · ·· ···· · ♦· · ·· ··
PATENTOVÉ
NÁROKY

Claims (22)

  1. Podjednotka beta-3 lidského G-proteinu, notka zahrnuje maximálně šest opakování kde tato podjedmotivu WD.
  2. 2. Protein podle nároku 1, kde tento protein má aminokyselinovou sekvenci popsanou jako SEK. ID. Č: 2.
  3. 3. Nukleotidová sekvence kódující protein podle nároku 1 nebo 2.
  4. 4. Nukleotidová sekvence podle nároku 3, kde tato sekvence je popsána jako SEK. ID. Č: 1.
  5. 5. Způsob přípravy proteinu podle jakéhokoliv z předchozích nároků vyznačující se tím, že tento způsob zahrnuje použití nukleotidové sekvence podle jakéhokoliv z předchozích nároků spolu s vhodnými regulačními sekvencemi a expresi provedenou v hostitelském organizmu.
  6. 6. Způsob podle nároku 5 vyznačující se tím, že zmíněná exprese je provedena v buňkách imunitního systému pacientů trpících selháním imunity.
  7. 7. Způsob podle nároku 6 vyznačující se tím, že zmíněný pacient je HIV pozitivní.
  8. 8. Způsob podle nároku 5 vyznačující se tím, že zmíněná exprese je provedena v lidských somatických buňkách.
  9. 9. Použití nukleotidové sekvence podle jakéhokoliv z předchozích nároků k přípravě léčivých látek použitel18
    A· ·· t A A 4
    A A A
    A A • A AAAA • AAA · ných k léčbě onemocnění spojených s poruchou funkce Gproteinů.
  10. 10. Použití genetické modifikace v genu pro podjednotku β3 lidského G-proteinu k diagnóze onemocnění.
  11. 11. Použití genetické modifikace v genu pro podjednotku β3 lidského G-proteinu ke stanovení rizika postižení onemocněním spojeným s poruchou regulace funkce G-proteinů.
  12. 12. Použití podle nároku 10 nebo 11, kde zmíněná genetická modifikace zahrnuje nukleotidovou sekvenci popsanou jako SEK. ID. Č: 1.
  13. 13. Použití podle nároků 10 až 12, kde zmíněným onemocněním je kardiovaskulární porucha, metabolická porucha nebo porucha imunitního systému.
  14. 14. Použití podle nároků 10 až 12, kde zmíněným onemocněním je hypertenze.
  15. 15. Použití nukleotidové sekvence podle jakéhokoliv z předchozích nároků k přípravě transgenních živočichů.
  16. 16. Použití nukleotidové sekvence komplementární k nukleotidové sekvenci podle nároku 3 nebo 4 k přípravě antisense léčiva k léčbě nebo prevenci onemocnění.
  17. 17. Použití podle nároku 16, kde zmíněným onemocněním je hypertenze, gravidní hypertenze, onemocnění srdečních věnčitých tepen, restenóza po revaskularizačních procedurách nebo mrtvice.
    00 0000
    00 0 ·* ··
    00 0 000 0000 • · 0 0 0 0 0 · 0 · • 0 · 0 0 0000 · 000 ···
    0 0 0 0 0 0 0
    00000 ♦· · ·♦ ··
  18. 18. Použití podle nároku 16, kde zmíněným onemocněním je onemocnění, které je důsledkem diabetů, jako například nefropatie, polyneuropatie nebo retinopatie.
  19. 19. Použití podle nároku 16, kde zmíněným onemocněním je metastázující nádor.
  20. 20. Způsob použitelný ke stanovení relativního rizika postižení pacienta onemocněním spojeným s poruchou regulace funkce G-proteinů vyznačující se tím, že tento způsob zahrnuje srovnání sekvence genu pro podjednotku β3 lidského G-proteinu s nukleotidovou sekvencí popsanou jako SEK. ID. Č: 1 a v případě, že zmíněná sekvence genu pro podjednotku β3 lidského G-proteinu odpovídá SEK. ID. Č: 1, přiznání zvýšeného rizika onemocnění danému subjektu.
  21. 21. Způsob podle nároku 20 vyznačující se tím, že srovnání genů je provedeno sekvenováním, restrikční analýzou nebo selektivní hybridizací.
  22. 22. Použití proteinu podle nároku 1 nebo 2 k přípravě protilátek specificky namířených proti tomuto proteinu.
    ·« ····
    Obrázek 1 ·· 9
    9 9 · 9 9 9
    9 9 9 9 9 9
    9 9 999 999
    9 9 9 9 9
    99999 99 9
    99 99
    9 9 9 9
    9 9 9 9
    999 999
    9 9
    Podjednotka γ
CZ99734A 1996-09-13 1997-08-29 Podjednotka ß3 lidského G proteinu CZ73499A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19637518A DE19637518A1 (de) 1996-09-13 1996-09-13 PTX-sensitive G-Proteine, ihre Herstellung und Verwendung

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ73499A3 true CZ73499A3 (cs) 1999-07-14

Family

ID=7805651

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ99734A CZ73499A3 (cs) 1996-09-13 1997-08-29 Podjednotka ß3 lidského G proteinu

Country Status (22)

Country Link
US (1) US6251853B1 (cs)
EP (1) EP0931145A1 (cs)
JP (1) JP2001501811A (cs)
KR (1) KR20000036058A (cs)
CN (1) CN1230222A (cs)
AU (1) AU4619297A (cs)
BG (1) BG103238A (cs)
BR (1) BR9711475A (cs)
CA (1) CA2265467A1 (cs)
CZ (1) CZ73499A3 (cs)
DE (1) DE19637518A1 (cs)
EA (1) EA199900253A1 (cs)
EE (1) EE9900092A (cs)
HU (1) HUP9904110A3 (cs)
IL (1) IL128746A0 (cs)
IS (1) IS4987A (cs)
NO (1) NO991227D0 (cs)
PL (1) PL332417A1 (cs)
SK (1) SK34099A3 (cs)
TR (1) TR199900500T2 (cs)
WO (1) WO1998011212A1 (cs)
ZA (1) ZA978220B (cs)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19619362A1 (de) * 1996-05-14 1997-11-20 Basf Ag Verwendung einer Genveränderung im Gen für humanes G-Protein beta-3-Untereinheit zur Diagnostik von Erkrankungen
WO1999058669A1 (en) * 1998-05-11 1999-11-18 Axys Pharmaceuticals, Inc. Rhoh genes and their uses
AU6079999A (en) * 1998-09-10 2000-04-03 Winfried Siffert Gene modification in the gene for the die gbeta3-sub-unit of human g-protein
FR2803525B1 (fr) * 2000-01-06 2002-05-03 Sod Conseils Rech Applic Inhibiteur de la transduction des signaux des proteines g heterotrimeriques associe a un agent anti-hypertenseur dans le traitement de l'hypertension arterielle
WO2001057246A1 (de) * 2000-02-03 2001-08-09 Winfried Siffert VERWENDUNG EINER GENVERÄNDERUNG IM GEN FÜR DIE β3-UNTEREINHEIT DES HUMANEN G-PROTEINS

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5587561A (en) 1995-07-28 1996-12-24 Budayr; Mahdi Stethoscope shield
DE19619362A1 (de) * 1996-05-14 1997-11-20 Basf Ag Verwendung einer Genveränderung im Gen für humanes G-Protein beta-3-Untereinheit zur Diagnostik von Erkrankungen

Also Published As

Publication number Publication date
IS4987A (is) 1999-02-26
PL332417A1 (en) 1999-09-13
DE19637518A1 (de) 1998-04-09
HUP9904110A3 (en) 2001-09-28
US6251853B1 (en) 2001-06-26
BG103238A (bg) 2000-06-30
NO991227L (no) 1999-03-12
AU4619297A (en) 1998-04-02
EP0931145A1 (de) 1999-07-28
CA2265467A1 (en) 1998-03-19
HUP9904110A2 (en) 2000-07-28
WO1998011212A1 (de) 1998-03-19
CN1230222A (zh) 1999-09-29
IL128746A0 (en) 2000-01-31
BR9711475A (pt) 1999-08-24
NO991227D0 (no) 1999-03-12
EA199900253A1 (ru) 1999-10-28
JP2001501811A (ja) 2001-02-13
ZA978220B (en) 1999-03-12
EE9900092A (et) 1999-10-15
SK34099A3 (en) 2000-05-16
KR20000036058A (ko) 2000-06-26
TR199900500T2 (xx) 1999-06-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kayano et al. Human facilitative glucose transporters. Isolation, functional characterization, and gene localization of cDNAs encoding an isoform (GLUT5) expressed in small intestine, kidney, muscle, and adipose tissue and an unusual glucose transporter pseudogene-like sequence (GLUT6).
Bradley et al. Alternative splicing of the human serotonin transporter gene
Miller et al. Primate trace amine receptor 1 modulation by the dopamine transporter
US20020106655A1 (en) Human GPCR proteins
CA2418215A1 (en) Novel fibroblast growth factor (fgf23) and methods for use
EP0920534A1 (en) MUTATIONS IN THE DIABETES SUSCEPTIBILITY GENES HEPATOCYTE NUCLEAR FACTOR (HNF) 1 ALPHA ($g(a)), HNF-1$g(b) AND HNF-4$g(a)
Levine Clinical spectrum and pathogenesis of pseudohypoparathyroidism
EP0614487A1 (en) Dna encoding a glycine transporter and uses thereof
JPH09501831A (ja) 膵臓島細胞におけるインシュリン表現を刺激する新しいホメオボックス因子
WO1995027785A1 (en) Behab, a brain hyaluronan-binding protein
CZ73499A3 (cs) Podjednotka ß3 lidského G proteinu
Philipson et al. Human, rodent, and canine pancreatic β-cells express a sodium channel α1-subunit related to a fetal brain isoform
CA2379541A1 (en) Polymorphisms in the human cyp3a4 and cyp3a7 genes and their use in diagnostic and therapeutic applications
US20050147987A1 (en) Polymorphisms in known genes associated with type II diabetes and obesity, methods of detection and uses thereof
AU732535B2 (en) The use of a genetic modification in the gene for human G protein beta3 subunit for the diagnosis of diseases
JPH06507062A (ja) 毛様体神経栄養因子レセプター
JP2001503631A (ja) 緑内障に関連するタンパク質ならびに対応する核酸とそれらの治療および診断への利用
US6309874B1 (en) Selection marker
US20030073162A1 (en) Signal peptide-containing proteins
JP2004533847A (ja) Ｇｐｒ５０の対立遺伝子変異体
US20020164785A1 (en) Novel orphan receptors
JP2002502260A (ja) 新しい選択マーカー
Maves et al. Cloning and characterization of the cDNA encoding guinea-pig properdin: a comparison of properdin from three species
WO1997026371A9 (en) Macular degeneration diagnostics
US20020127636A1 (en) Ankyrin repeat domain 2 protein variant

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic