BG108280A - Мастни киселини със средно дълга верига, техни глицериди и аналози като фактори, активиращи неутрофилите и удължаващи живота им - Google Patents

Мастни киселини със средно дълга верига, техни глицериди и аналози като фактори, активиращи неутрофилите и удължаващи живота им Download PDF

Info

Publication number
BG108280A
BG108280A BG108280A BG10828003A BG108280A BG 108280 A BG108280 A BG 108280A BG 108280 A BG108280 A BG 108280A BG 10828003 A BG10828003 A BG 10828003A BG 108280 A BG108280 A BG 108280A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
treats
stimulating
patients
neutropenia
compounds
Prior art date
Application number
BG108280A
Other languages
English (en)
Other versions
BG66418B1 (bg
Inventor
Lyne Gagnon
Jean Barabe
Pierre Laurin
Christopher Penney
Boulos Zacharie
Original Assignee
Prometic Biosciences Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Prometic Biosciences Inc. filed Critical Prometic Biosciences Inc.
Publication of BG108280A publication Critical patent/BG108280A/bg
Publication of BG66418B1 publication Critical patent/BG66418B1/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/22—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton having nitrogen atoms of amino groups bound to the carbon skeleton of the acid part, further acylated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/18—Sulfonamides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/194—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having two or more carboxyl groups, e.g. succinic, maleic or phthalic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/255—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of sulfoxy acids or sulfur analogues thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7024—Esters of saccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2013—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2086—IL-13 to IL-16
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/16—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C233/17—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
    • C07C233/18—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom having the carbon atom of the carboxamide group bound to a hydrogen atom or to a carbon atom of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/45—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
    • C07C233/46—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
    • C07C233/47—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom having the carbon atom of the carboxamide group bound to a hydrogen atom or to a carbon atom of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C235/06—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atoms of the carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C235/08—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to an acyclic carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
    • C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
    • C11C3/003—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom by esterification of fatty acids with alcohols
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
    • C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
    • C11C3/02—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom by esterification of fatty acids with glycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/11—Compounds covalently bound to a solid support
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Изобретението се отнася до превенцията и/или лечението на неутропения. Това включва лечение на неутропения, асоциирана с прилагането на химиотерапия и лъчева терапия, а също и лечение на неутропения, възникнала вследствие на инфекции, хематологични заболявания и нутриционна недостатъчност. Също така изобретението се отнася най-общо до намаляване на токсичността и повишаване на ефикасността на лекарството. По-специално, изобретението се отнася до приложението на мастни киселини със средно дълга верига като капрова киселина, каприлова киселина, или техни соли, или триглицериди, или моно- или диглицериди, или техни аналози като фактори, активиращи неутрофилите и удължаващи живота им, или като пролиферативен фактор за костномозъчните стволови клетки.
ПРЕДШЕСТВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
В химиотерапията се използват цитотоксични агенти като, например, циклофосфамид, доксорубицин, даунорубицин, винбластин, винкристин, блеомицин, етопозид, топотекан, иринотекан, таксотер, таксол, 5флуороурацил, метотрексат, гемцитабин, цисплатин, карбоплстин или хлорамбуцил с цел да се унищожат раковите клетки и туморите. Тези агенти са неспецифични и са токсични за нормалните и бързо делящите се клетки, особено, когато са във високи концентрации. Това често води до различни странични ефекти при пациенти, подложени на химиотерапия и лъчева терапия. Такъв страничен ефект е миелосупресията, тежко потискане на производството на кръвни клетки от костния мозък. Характеризира се с левкопения, неутропения и тромбоцитопения. Тежката хронична неутропения (идиопатична, циклична и конгенитална) се характеризира със селективно .· намаляване на броя на неутрофилите в циркулацията и с повишена податливост на бактериални инфекции.
Същността на лечението на рака с химиотерапевтични лекарства е да се комбинира механизма на цитотоксичност с механизма на селективност към високо пролиферативните туморни клетки пред нормалните клетки на организма. Но химиотерапевтичните лекарства рядко притежават такава селективност. Цитотоксичността на химиотерапевтичните агенти ограничава дозите на приемане, повлиява на лечебните цикли и сериозно излага на риск качеството на живот на онкологичните пациенти.
Въпреки че и други нормални тъкани могат да се повлияват неблагоприятно, костният мозък е особено чувствителен към специфични пролиферативни терапии като химиотерапия и лъчева терапия. Остра или хронична токсикоза на костния мозък е често срещан страничен ефект на раковите терапии, която води до понижаване на броя на кръвните клетки и анемия, левкопения, неутропения, агранулоцитоза и тромбоцитопения. Една от причините за такъв ефект е намаляването на броя на хематопоетичните клетки (например, плурипотентни стволови клетки и други прогениторни клетки), причинено, както от леталния ефект на цитотоксичните агенти или на радиацията върху тези клетки, така и от диференциацията на стволовите клетки, която се провокира по механизма на обратна връзка, включен от изпразването на все повече зрели компартменти на костния мозък. Втората причина е намаляването на себеобновяващия капацитет на стволовите клетки, което също е свързано и с директните (мутация) и с индиректните (стареене на популацията от стволови клетки) ефекти. (Tubiana, М., et al., Radiotherapy and Oncology, 29:1-17, 1993). Така раковото лечение често води до намаляване на полиморфонуклеарните неутрофили (ПМН) или неутропения. ПМН са първата защитна линия срещу инвазиращите патогени и играят централна роля при острите възпаления. Тяхната първична функция е фагоцитозата и убиването на инфекциозните агенти. За да осъществяват функцията си, ПМН напускат кръвната циркулация в отговор на химиотаксични фактори и навлизат в афектираната област, за да изпълнят биологичните си функции. При индивиди с нормален брой кръвни клетки неутрофилите представляват около 60 % от тоталното количество левкоцити. (SI Units Conversion Guide, 66-67 (1992), New England Journal of Medicine Books). Един от всеки трима пациенти, подложени на химиотерапия за рак, може да страда неутропения. Нормално, средният брой на неутрофилите за здрав възрастен човек е от порядъка на 4400 клетки/рЬ като може да варира от 1800-7700 клетки/рЬ. Количество на неутрофилите от 1000 клетки до 500 клетки/pL се означава като умерена неутропения, а количество от 500 клетки/pL и по-малко се означава като тежка неутропения. Пациентите с миелосупресивни състояния са предразположени към инфекции и често страдат от нарушения в кръвосъсирването, изискващи хоспитализация. Недостигът на неутрофили и тромбоцити е главната причина за заболеваемостта и смъртността след раково лечение и допринася за високите разходи за ракова терапия. При гореспоменатите състояния прилагането на всякакъв агент, способен да инхибира неутрофилната апоптоза или да стимулира активирането и мобилизацията на неутрофилите, има терапевтична стойност. Усилията да се възстанови имунната система на пациента след химиотерапия включва приложението на хемопоетични растежни фактори, за да се стимулират останалите стволови клетки да пролиферират и да се диференцират в зрели клетки за борба с инфекциите.
При костномозъчните трансплантации е известен феномен, наречен “мобилизация”, който се използва за повишаване на броя на стволовите/прогениторните клетки от периферната кръв. Този метод се използва напоследък при авто- и алогенни трансплантации на костен мозък. Използват се растежни фактори, за да се увеличи броя на периферните прогениторни стволови клетки преди миелоаблативна терапия и инфузия на прогениторни стволови клетки.
Терапия след костномозъчна трансплантация също може да причини неутропения. Тези терапии изискват продължителност 10-15 дни, което оставя пациентите уязвими от инфекции. Агенти, стимулиращи костномозъчните стволови клетки, могат да улеснят и ускорят “захващането” на трансплантираните стволови клетки и така да стеснят посттрансплантационния период на неутропения.
Макар че хемопоетичните растежни фактори като гранулоцитномакрофагов колония-стимулиращ фактор (GM-CSF) и гранулоцитен колониястимулиращ фактор (G-CSF) имат същия ефект, но използването им е скъпо, тъй като трябва да се произвеждат по рекомбинантна технология. Такива посттерапевтични укрепващи лечения са ненужни, ако пациентите могат да бъдат “химически защитени” от имунна супресия.
Следователно, съществува необходимост от нови композиции и методи за намаляване на нежеланите странични ефекти при миелосупресивни състояния, предизвикани от химиотерапия или лъчева терапия.
ТЕХНИЧЕСКА СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Изобретението удовлетворява необходимостта от химиопротективни агенти като предлага нов метод за стимулиране на хемопоетичната система при бозайници, включително и хора. Също така изобретението предлага нов метод за лечение на миелосупресивните ефекти на химиотерапията и лъчевата терапия и при всякакви други случаи, при които стимулирането на хемопоетичната система може да има терапевтична стойност, например, трансплантации на костен мозък и хронична неутропения, а също и неутропения, вследствие на инфекции, хематологични заболявания и нутриционна недостатъчност. Този метод подпомага хемопоетичната система в борбата с миелосупресията като активира неутрофилите и удължава живота им при пациенти, подложени на такова лечение.
Съгласно този метод композиция, съдържаща една или повече мастни киселини със средно дълга верига като капрова киселина, каприлова киселина, или техни соли, или триглицериди, или моно- или диглицериди, или техни аналози във фармацевтично подходящ носител, се приема от бозайници, поспециално хора, в количество, което може ефективно да предотврати или лекува неутропения, например, с цел да намали неблагоприятните ефекти от химиотерапия и лъчева терапия и с цел лечение на неутропения, възникнала вследствие на инфекции, хематологични заболявания и нутриционна недостатъчност.
Предмет на изобретението са композиции, използващи капрова киселина, каприлова киселина, лаурова киселина, или техните метални соли (натриеви, калиеви, калциеви, магнезиеви), или триглицериди, или моно- или диглицериди, или техни аналози, за производството на химиопротективни фармацевтични композиции като единствен агент или като комбинация от два или повече агенти с и/или без други химиотерапевтични агенти или лекарства, които водят до състояние на миелосупресия.
Друг предмет на изобретението се отнася до използването на капрова киселина, каприлова киселина, или техни натриеви соли, или техни триглицериди, или моно- или диглицериди, или подобни съединения като фактори, стимулиращи хемопоезата.
Освен това изобретението включва композиции, съдържащи капрова киселина, каприлова киселина, или техни натриеви соли, или техни триглицериди, или моно- или диглицериди, или други техни аналози и приложението им за лечение на миелосупресия и последваща имуносупресия.
Също така предмет на изобретението се отнася до приложението на капрова киселина, каприлова киселина, или техни натриеви соли, или техни триглицериди, или моно- или диглицериди, или други техни аналози за лечението на пациенти с тежка хронична неутропения.
Друг предмет на изобретението се отнася до приложението на капрова киселина, каприлова киселина, или техни натриеви соли, или техни триглицериди, или моно- или диглицериди, или други техни аналози като фактор, активиращ неутрофилите и удължаващ живота им.
Също така изобретението се отнася до приложението на капрова киселина, каприлова киселина, или техни натриеви соли, или техни триглицериди, или моно- или диглицериди, или други техни аналози при състояния, при които неутрофилната мобилизация има терапевтична стойност като авто- или алогенна трансплантация на костен мозък.
Друг предмет на изобретението е метод за ефективна химиозащита за бозайници, включително хора.
Друг предмет на изобретението е метод, увеличаващ ефективността на химиотерапията и лъчевата терапия при бозайници, включително хора.
Друг предмет на изобретението е метод за приложение на повече обичайни дози или дори увеличаване на дозата химиотерапевтични композиции, необходима за постигане на по-добра терапевтична полза като се избягва увеличаването на страничните ефекти.
Друг предмет на изобретението е метод за ефективно намаляване или елиминиране на химиотерапевтично индуцирана неутропения при бозайници, включително хора.
Друг предмет на изобретението е метод за ефективно лечение на неутропения, възникнала вследствие на хематологични заболявания като хронични идиопатични неутропении, циклична неутропения, синдром на мързеливите левкоцити, левкемия със синдром на Chediak-Higashi и анапластична анемия.
Друг предмет на изобретението е метод за лечение на неутропения, възникнала вследствие на инфекции като вирусни (например, СПИН, дребна шарка, хепати, жълта треска, мононуклеоза) и бактериални (например, тифни, паратифни инфекции, бруцелоза) инфекции.
Друг предмет на изобретението е метод, причиняващ минимални или никакви неблагоприятни странични ефекти в реципиента.
Тези и други предмети, характеристики и предимства на изобретението ще бъдат разкрити в следващото подробно описание на вариантите и приложените претенции.
ОПИСАНИЕ НА ПРИЛОЖЕНИТЕ ФИГУРИ
Фигура 1 показва ефекта на ТСВ върху апоптозата на ПМН.
Фигура 2 показва ефекта на ТСВ върху фагоцитозата на ПМН.
Фигури ЗА и ЗВ показват ефекта на доксорубицин върху апоптозата на ПМН.
Фигура 4А представлява ефекта на ТСВ върху третирани с доксорубицин неутрофили в зависимост от времето и курс.
Фигура 4В представлява ефекта на доксорубицин върху третирани с ТСВ неутрофили в зависимост от времето и курс.
Фигура 5 показва ефекта на ТСВ и трикаприн върху пролиферацията на костен мозък.
Фигура 6 показва ефекта на ТСВ върху броя на костномозъчните клетки в имуносупресирани животни.
Фигура 7 показва ефекта на ТСВ върху броя на клетки в слезката в имуносупресирани животни.
Фигура 8 показва ефекта на ТСВ и GM-CSF върху теглото на тимуса върху нормални мишки.
Фигура 9 показва ефекта на ТСВ, натриев каприлат и натриев капрат върху броя на костномозъчните клетки в имуносупресирани животни.
Фигура 10 представлява химиопротективния ефект и антитуморната ефективност на ТСВ в комбинация със субтерапевтична концентрация доксорубицин в B16F10 модел на меланом.
Фигура 11 представлява химиопротективния ефект и антитуморната ефективност на ТСВ в комбинация със субтерапевтична концентрация циклофосфамид или таксотер в DA-3 модел на гръден карцином.
Фигура 12 представлява химиопротективния ефект и антитуморната ефективност на ТСВ в комбинация с терапевтична концентрация циклофосфамид или таксотер в DA-3 модел на гръден карцином.
ПРИМЕРНО ИЗПЪЛНЕНИЕ И ДЕЙСТВИЕ НА ИДОБРЕТЕНИЕТО
Високите дози в химиотерапията и лъчевата терапия разрушават хемопоетичните клетки в костния моък, поради което пациентите остават със силно ограничен брой неутрофили и тромбоцити. След такъв тип лечения пациентите прекарват няколко седмици в отделения за интензивни грижи поради инфекции и фебрилни състояния вследствие на неутропения. Тромбоцитопенията води до удължаване на времето за съсирване и нарушения при кървене, което налага трансфузия на тромбоцити. Миелосупресията предствлява фактор, ограничаващ дозата при раково лечение, а недостигът на неутрофили и тромбоцити е главната причина за заболеваемостта и смъртността след раково лечение с химиотерапия и лъчева терапия.
При трансплантациите на костен мозък могат да се използват два подхода. Преди трансплантацията стимулирането на костния мозък може да увеличи броя на периферните прогениторни стволови клетки. Прясно трансплантираният костен мозък не съдържа достатъчно зрели неутрофили или предшественици на неутрофилите, за да възстанови имунната система на пациента. Това излага пациента на рисков период с повишена податливост към инфекции и удължено време на съсирване. Терапия, включваща стимулиране и активиране на неутрофилите ускорява възстановяването след костномозъчна трансплантация като редуцира неутропенията и тромбоцитопенията.
Изобретението се отнася до метод за активиране на неутрофилите и удължаване на живота им. Напоследък методите са насочени към възстановяване на хемопоетичната система на пациента. Хемопоетичните растежни фактори, които се използват по настоящем за такова лечение, са гранулоцитен колония-стимулиращ фактор (G-CSF), фактор на стволовите клетки (SCF) и гранулоцитно-макрофагов колония-стимулиращ фактор (GMCSF). G-CSF и GM-CSF могат да скъсят тоталния период на неутропения и тромбоцитопения, но въпреки това остава значителен период, през който пациентите страдат от нарушения на кръвосъсирването и повишена податливост към инфекции.
При костномозъчните трансплантации се използва т. нар. “мобилизация”, чрез която се повишава на броя на стволовите/прогениторните клетки от периферната кръв. Хемопоетичните стволови клетки в костния мозък се мобилизират в кръвната циркулация след лечение с растежни фактори. Растежните фактори, използвани за такова лечение включват интерлевкин-3 (IL-3), G-CSF, GM-CSF, SCF и рекомбинантен смесен протеин с активността на IL-3 и GM-CSF заедно. Мобилизираните след лечение с растежни фактори стволови клетки се “събират” и след следващия цикъл химиотерапия или облъчване с високи дози се реинфузират в пациента с цел да се възстановят неутрофилите и тромбоцитите на пациента.
Триглицериди със средно дълга верига (означавани в текста като ТСВ) са съставени от глицерол, естерифициран с мастни киселини с дължина на въглеводородната верига 8 въглеродни атома (С8, октанова киселина или още каприлова киселина) и 10 въглеродни атома (С10, деканова киселина или още капрова киселина). ТСВ обикновено съдържат смес от глицеролови естери с С8 и С10 мастни киселини. Също така ТСВ могат да съдържат малки количества (2±1 за всеки) глицеролови естери с С6 (хексанова киселина) и С12 (додеканова киселина или още лаурова киселина). CRODAMOL™ представлява ТСВ, пуснат на пазара от Croda Ltd., Торонто (Канада). Както е показано в пример 1 CRODAMOL™ е ТСВ, който съдържа глицеролови триестери с С8 и С10 мастни киселини в различни пропорции. CRODAMOL™ не съдържа никакви естери на С6 и С12 мастни киселини. От друга страна, триглицериди с дълга въглеводородна верига (означавани в текста като ТДВ) съдържат глицерол, естерифициран с мастни киселини с дължина на въглеводородната верига над 12 въглеродни атома. Типичните мастни киселини в ТДВ включват палмитинова (С16) и стеаринова (С18) киселина. За разлика от ТСВ, ТДВ са първичен компонент на хранителните мазнини. Освен това, ТСВ и ТДВ значително се различават по биологичните си свойства. Някои от физиологичните различия между ТСВ и ТДВ са описани в Harrison’s Principles of Internal Medicine, 8th Edition, 1520-1521 (1997), McGraw Hill Book Company или 15th Edition, 1668-1669 (2001). Например, ТСВ, за разлика от ТДВ, не изисква хидролизиране от панкреатична липаза, тъй като могат директно да се абсорбират от клетките на чревния епител.
ТСВ и техният компонент мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига са нетоксични материали, които намират приложение в хранителната и фармацевтичната индустрия. Например, К. A. Traul et al. в Food and Chemical Toxicology 38:79-98 (2000) посочва, че ТСВ се използват за увеличаване на броя на храните и приложението им поради многото им предимства пред ТДВ. Също така ТСВ се използват широко като емулгатори в различни хуманни и ветеринарни фармацевтични препарати и в козметични средства. Много токсикологични изследвания потвърждават безопасността на ТСВ. Например, много от тези изследвания посочват, че безопасността от консумиране на ТСВ от хора при нива до 1 g/kg е потвърдена при клинични тестове. С8 и С10 мастни киселини имат подобни безопасност и приложение. Например, в The Merck Index, 11th Edition, 266 (1989) за каприловата киселина се посочва, че има LD50 (перорално, при плъхове) = 10.08 g/kg, което показва съществена нетоксичност. Всъщност, според секция 184 на Code of Federal Regulations (CFR), U.S. Federal Drug Agency (FDA) (Държавната комисия по лекарствата на САЩ) на каприловата киселина е поставен гриф GRAS (Generally Recognized As Safe - най-общо безопасна). Подобно, според секция 172 (CFR) свободните мастни киселини (например, капрова, каприлова киселина) и техните метални соли са определени като безопасни хранителни добавки. Както отбелязва D. Dimitrijevic et al. в Journal of Pharmacy and Pharmacology 53:149-154 (2001), капровата киселина (натриевата й сол) е одобрена за приложение при човека в Япония и Швеция като улесняващо абсорбцията вещество за лекарствени продукти с ректално приложение. U.S. Patent 4 602 040 (1986) описва приложението на ТСВ като фармацевтичен ексципиент. Още по-скоро РСТ публикацията WO 01/97799 описва приложението на мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига, поспециално, каприлова и капрова киселина, като антимикробни агенти.
До този момент ефективността на мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига като каприлова киселина, капрова киселина, или металните им соли, или триглицеридите им (ТСВ), или моно- или диглицеридите им като фактор, активиращ неутрофилите и удължаващ живота им не бе известна. Както беше описано, ТСВ съдържат триглицериди на С8 (каприлова) и С10 (капрова) мастни киселини, които представляват поне 98 % от активността, стимулираща хемопоезата и узряването на неутрофилите. D. Waitzberg et al. в Nutrition 13:128-132 (1997) твърди, че липидните емулсии (ТСВ и ТДВ) намаляват умерено неутрофилната бактерицидна функция и нямат никакъв ефект върху моноцитите. Единствената публикация, която дава далечни индикации, че ТСВ може да повлиява неутропенията, описва клинични изследвания, при които ТСВ се приемат заедно с ТДВ и се сравнява с приема на чисти ТДВ. Няма изследвания, които да са се заели само с ТСВ, поради което ефектът им върху имунната система остава скрит. Резултатие, описани от S. Demirer et al. в Clinical Nutrition 19:253-258 (2000), показват, че ТСВ утежняват неутропенията, когато са в комбинация с ТДВ в сравнение с чисти ТДВ. Затова е предположено, че ТСВ инхибира неутрофилната функция и/или живота им. Донякъде това предположение се подкрепя и от РСТ публикацията WO 95/30413, където се посочва, че ненаситените мастни киселини с дълга въглеводородна верига като линоленовата киселина, а също и наситените киселини с дълга въглеводородна верига (С16 и по-дълги) могат да усилват пролиферацията на хемопоетичните стволови клетки.
Изобретението се отнася до приложението на мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига или металните им соли, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ като растежен фактор, като фактор, активиращ хемопоезата или като фактор, активиращ неутрофилите и удължаващ живота им. Когато се прилагат като химиотерапия или лъчева терапия, композицията съдържа мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига или металните им соли, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ и се приема преди, по време и/или след лечението с цел да се скъси неутропеничния период и да се ускори възстановяването на хемопоетичната система. Освен това, възможно е да се прилага комбинация от мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига заедно с металните им соли, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози и/или ТСВ в различни етапи в зависимост от лечението с химиотерапия и лъчева терапия (например, мастни киселини преди лечението и ТСВ след него). Като алтернатива е възможно комбинацията да се приема едновременно: преди, по време и/или след лечението с химиотерапия и лъчево лечение. При тежка неутропения като терапевтичен агент се използва композиция, съдържаща мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига или металните им соли, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ. При трансплантации на костен мозък се използват мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига или металните им соли, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ с цел да се увеличи броя на периферните стволови клетки, които да могат да се трансплантират след аблативно лъчево лечение или химиотерапия. Мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига или металните им соли, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ могат да се прилагат още след костномозъчни трансплантации, за да се стимулират стволовите клетки на
костния мозък и така да се скъси периода за възстановяване от неутропенията.
Методът е полезен още и за стимулиране на хематопоезата при лечение на миелосупресия, възникнала вследствие на химиотерапия или лъчева терапия; хронична или временна неутропения; лекарствено индуцирана неутропения; неутропения вследствие на хематологично заболяване, нутриционна недостатъчност, инфекция или лъчева терапия. Временна неутропения може да възникне вследствие на стрес поради превоз на животни с кораб или при хора и животни вследствие на продължително пътуване. Също така методът е полезен за стимулиране на хемопоезата за лекуване на рани или да се предизвика неутрофилна мобилизация за улесняване на костномозъчни трансплантации.
За използваните в текста термини се има предвид “един или повече”, в зависимост от контекста, в който са използвани.
Под “композиция от мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига като капрова киселина или каприлова киселина, или металните им соли, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ” трябва да се разбира композиция, включваща споменатата активна съставка и един или повече фармацевтично приемливи носители.
Терминът “фармацевтично приемлив носител” се отнася за вещество, което не повлиява физиологичните ефекти на мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига като капрова киселина или каприлова киселина, или металните им соли, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ и което не е токсично за бозайници,включително хора.
Композициите от капрова киселина или каприлова киселина, или солите им, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ съгласно изобретението са формулирани като се използват капрова киселина или каприлова киселина, или солите им, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ и фармацевтично приемливи носители по методи, известни на специалистите в областта (MERCK INDEX, Merck & Co., Rahway, NJ). Тези композиции включват течности, масла, емулсии, аерозоли, инхалаторни агент, капсули, хапчета, пластири и супозитории, без тези примери да изчерпват възможните за формата на споменатата композиции.
Всички методи включват етап на асоцииране на активната съставка/активните съставки с носителя, който може да включва една или няколко допълнителни съставки.
Под термина “химиотерапия” се разбира процес на убиване на пролифериращи клетки с помощта на цитотоксичен агент. Фразата “по време на химиотерапията” означава периода, в който продължава действието на цитотоксичния агент. От друга страна, фразата “след химиотерапията” покрива всички ситуации, при които композицията се приема след приемането на цитотоксичен агент, независимо от предишно приемане на същия и независимо от продължителността на ефекта на приемания цитотоксичен агент.
Когато методът съгласно изобретението се прилага при химиотерапия, композицията от капрова киселина или каприлова киселина, или солите им, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ може да се приема преди, по време на или веднага след химиотерапията (т.е. преди, по време на или веднага след приемането на цитотоксичен агент).
Под “цитотоксичен агент” се разбира агент, който убива високо пролифериращи клетки, например, туморни клетки, инфектирани с вируси клетки или хемопоетични клетки. Примери на цитотоксични агенти, които могат да се прилагат в практиката съгласно изобретението, са циклофосфамид, доксорубицин, даунорубицин, винбластин, винкристин, блеомицин, етопозид, топотекан, иринотекан, таксотер, таксол, 5-флуороурацил, метотрексат, гемцитабин, цисплатин, карбоплатин или хлорамбуцил и агонист на всяко от изброените по-горе съединения. Цитотоксичен агент може да бъде също и антивирусен агент, например, AZT (например, 3’-азидо-3’-деокситимидин) или ЗТС/ламивудин (например, 3-тиацитидин), без тези примери да изчерпват изобретението.
Използваният тук термин “левкопения” се отнася за абнормална редукция на броя на левкоцитите в кръвта.
Използваният тук термин “неутропения” се отнася за абнормална редукция на броя на неутрофилите в кръвта.
В един от предпочитаните варианти на изобретението фармацевтичната композиция е под формата на всяка подходяща композиция за перорално, сублингвално, инхалационно (назален спрей), интравенозно, интрамускулно, подкожно приемане, която ще се прилага за лечение на неутропения, тромбоцитопения, или като фактор, активиращ неутрофилите и удължаващ живота им.
Препоръчително е количеството композиция съгласно изобретението, необходимо за лечение, да варира в зависимост от начина на приемане, лекуваното състояние, възрастта и състоянието на пациента и да е съобразено от лекуващия лекар. За удобство желаната доза може да се даде като единична доза или да се раздели на няколко дози, които да се приемат през подходящ интервал от време, например, на две, три, четири или повече дози на ден.
Доколкото е възможно за целите на терапията мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига или металните им соли, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ могат да се приемат като суров химичен материал, но е препоръчително активната съставка да се представи като фармацевтична формула.
В предпочитан вариант на изобретението количеството активна съставка се приема така, че концентрацията в кръвта (свободно и/или свързано със серумен албумин) да е над 1 μΜ. В особено предпочитан вариант концентрацията на активната съставка в кръвта е над 1 тМ.
В друг предпочитан вариант на изобретението фармацевтичната композиция е под форма, подходяща за перорално (включително и сублингвално) или парентерално (включително и интравенозно, интрамускулно, подкожно и ректално) приемане. Когато е подходящо, формулите могат да бъдат в удобни дискретни дозиращи единици, които могат да се получат по различни методи, добре познати в сферата на фармацевтиката. Всички методи включват етап на асоцииране на активната съставка с течни носители или с фини твърди носители или и с двата вида заедно. След това, ако е необходимо, продуктът се оформя в желаната формула. По желание, гореописаните формули могат да се адаптират за продължително отделяне на активната съставка.
Мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига или металните им соли, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ могат да се прилагат в комбинация с други терапевтично активни агенти като цитотоксични противоракови агенти или други противоракови агенти (имуномодулатори, имунорегулатори, терапевтични ваксини или антиангиогенни лекарства и др.), имуносупресори (включително и противовъзпалителни лекарства), растежни фактори като колония-стимулиращ фактор (за предпочитане GM-CSF или G-CSF), цитокини като интерлевкин 2 или интерлевкин 15 или техни комбинации. Индивидуалните комоненти на такива комбинации могат да се приемат последователно (преди или след) или едновременно в отделни или комбинирани фармацевтични формули. Гореспоменатата комбинация може да бъде представена за удобство под формата на фармацевтична формула и така получените фармацевтични формули, включващи комбинация, дефинирана погоре, заедно с фармацевтично приемлив носител и представлява друг аспект на изобретението.
В предпочитан вариант на метода за стимулиране на хемопоезата се приема фармакологично ефективно количество композиция, съдържаща едно или повече от следните съединения, или тяхна комбинация:
ί
RjCOAYBO·^
I Y*=O,NH fl
RjC-X fl
R,Zj|-X o ш ζ-ο,νη,οη/) “zero където
Ri е наситена или ненаситена C7-C11 алкилова група с права или разклонена верига;
А и В са, независимо един от друг, водороден атом или Ri-C=O; и
X е хидроксилна група, окси анион с метален моно- или дикатионен противойон или алкокси група с права или разклонена С1-С4 верига.
За специалистите в областта ще бъде ясно, че във формула III терминът “2=нула” означава, Z може да се елиминира или да се замести с водороден атом.
В алтернативно предпочитан вариант композицията включва смес от поне две съединения, описани във формула I, които са Триглицериди със Средно дълга Верига (ТСВи), където и А и В и R] са едно и също и представляват, съответно, наситени или ненаситени С7 и С9 алкилови групи с прави или разклонени вериги. Като алтернатива композицията съдържа смес от два триглицерида, където първият ТСВ е описан във формула I, където и А и В и R, са СН3(СН2)6, а вторият ТСВ е описан във формула I, където и А и В и R| са СНз(СН2)8· Алтернативно, композицията съдържа от 0.1 % до 3 % всяко, описано във формула I съединение, като трето съединение, където и А и В и R] са СН3(СН2)4, и четвърто съединение, описано във формула I, където и А и В и Rt са СН3(СН2)1о. Алтернативно, композицията е смес, съдържаща четири геометрични изомера на триглицериди на С8 и С10 мастни киселини, описани от следната формула:
^о1 2 η = 66 m = 66 ρ = 68
4
8
8
8
В алтернативно предпочитан вариант композицията включва смес от поне две съединения, описани във формула II или формула III, където X е ОН или X е окси анион с метален противойон като калциев, магнезиев, калиев и натриев.
В още по-предпочитан вариант композицията представлява каприлова киселина, капрова киселина, натриев каприлат, натриев капрат, калциев каприлат, калциев капрат, триглицерид на каприловата киселина или триглицерид на капровата киселина.
Описаните тук композиции и методи включват следните аналози и съединения:
Аза аналози на триглицерид на каприловата киселина или триглицерид на капровата киселина като за предпочитане е аза аналогът да е 1,2,3-Ο,Ν,Οтриоктаноилсеринол или 1,2,3-О,НО-тридеканоилсеринол;
Съединението, описано във формула IV /СООН ^>CNH СООН η = 6,8 m= 1,2
IV
Съединението, описано във формула V
-Л п=б, 8
Съединението, описано във формула VI, които осигуряват фармацевтична формула чрез in vivo разграждане с цел да се освободят активните вещества, описани по-горе.
пв 6,8 ш=1,2 ft
X = H,OH,C-NH2
VI
Следващите примери илюстрират допълнително практическото приложение на изобретението, без да го изчерпват. Препоръчително е подбора на дозата мастни киселини със средно дълга въглеводородна верига или металните им соли, или триглицеридите им, или моно- или диглицеридите им, или други техни аналози или ТСВ и свързаните фармацевтични формули, приемани от индивидуален пациент (човек или животно), да се извършва от лекуващия лекар, съобразено със стадия на заболяването и с други фактори, които са в компетенцията на лекуващия лекар.
Пример 1: Анализ на CRODAMOL™ (ТСВ: трнглицерид на каприлова/ капрова кислина)
CRODAMOL™ GTCC lot #Т1033-1299 от Croda Ltd. (Торонто, Канада) е анализиран чрез газ хроматография. GC FID-анализ, условия на градиента: 100°С-250°С за 10 минути, след това 250°С за 25 минути; FID 250°С.
Наблюдават се четири пика: при 22.04 минути (26 %), 25.07 минути (43 %), 29.16 минути (25 %) и 34.75 минути (5 %).
Проба от каприлов триглицерид (трикаприлин), получена от SigmaAldrich lot &079Н1212 се анализира чрез газ хроматография. GC FID-анализ, условия на градиента: 100°С-250°С за 10 минути, след това 250°С за 25 минути; FID 250°С. Наблюдава се главно един пик при 22.31 минути (98 %).
Пример 2: Ацилиране на алкохол с киселинен хлорид и пиридинова основа
Метод В
Метод А: пиридин, СН2С12
Метод В: DMAP, СН2С12
Метод А > или
η=6-10
Общ метод А (пиридин)
Разтвор на алкохола (-0.1 М) в сух СН2С12 и пиридин (4:1) се охлажда до 0°С в азотна атмосфера и се обработва с киселинния хлорид (1.2 еквивалент). Реакционната смес се оставя да се затопли до околната температура и се разбърква в продължение на цялата нощ. TLC анализ (SiO2, EtOAc 1:9 хексан) не показва никакъв алкохол. Реакционната смес се разрежда с СН2С12 и се промива с наситен воден разтвор на NH4CI. Водната фаза се екстрахира с СН2С12 (х 1) и с хексан (х 1), след което комбинираните органични фази се промиват с наситен воден разтвор на NaCl, изсушава се над Na2SO4, филтрира се и се изпарява във вакуум до получаването на суров продукт.
Общ метод В (DMAP)
Разтвор на алкохола (-0.1 М) в сух СН2С12 се охлажда до 0°С в азотна атмосфера и се обработва с DMAP (1.3 еквивалент) и с киселинния хлорид (1.2 еквивалент). Реакционната смес се оставя да се затопли до околната температура и се разбърква в продължение на цялата нощ. TLC анализ (SiO2, EtOAc 1:9 хексан) не показва никакъв алкохол. Реакционната смес се разрежда c CH2CI2 и се промива с наситен воден разтвор на NH4CI. Водната фаза се екстрахира с СН2С1г (х 1) и с хексан (х 1), след което комбинираните органични фази се промиват с наситен воден разтвор на NaCl, изсушава се над Na2SO4, филтрира се и се изпарява във вакуум до получаването на суров продукт.
Пример 3: Триглицерид на нонанова киселина
Глицерол (120 mg, 1.30 mmol) се ацилира с нонаноилхлорид (751 μΐ, 4.16 mmol) съгласно Общ метод А, пример 2. Пречистване чрез колонна хроматография (Isolute™ SiO2, елюиране с 0-5 % EtOAc в хексан) дава две фракции, съдържащи продукта, които се изпаряват във вакуум до получаването на желания продукт като безцветна течност, респективно 89 % (127 mg, 19 %) и 93 % (475 mg, 71 %) чистота (GC/FID). Rf 0.46 (SiO2, 10 % етилов ацетат в хексан); !Н NMR (CDC13, MHz) δΗ = 5.27 (m, 1H), 4.29 (dd, 2H), 4.14 (dd, 2H), 2.31 (m, 6H), 1.61 (m, 6H), 1.27 (m, 30H), 0.88 (t, 9H); MS (FAB4) m/z = 510 (ΜΗ1); GC FID-анализ, условия: градиент 100°C-250°C за 10 минути, след това 250°С за 25 минути; FID 250°С; 27.25 минути.
Пример 4: Диглицерид и моноглицерид на нонанова киселина
о
Глицерол (100 mg, 1.09 mmol) се ацилира с един еквивалент нонаноилхлорид (205 μΐ, 1.09 mmol) съгласно Общ метод А, пример 2. Пречистване чрез Biotage™ (40S, SiO2, елюиране с 10 % етилацетат в хексан 100 % етилацетат) дава безцветна маслена течност. Получават се две различни съединения:
Диглицерид на нонанова киселина се получава (73 mg, 18 %) като твърдо бяло вещество. Т. т. 24-26°С; Rf 0.52 (SiO2, обработен предварително с Et3N, 30 % етилацетат в хексан); ’Н NMR (CDC13, 300 MHz) δΗ = 4.17 (m, 5H), 2.35 (t, 4H), 1.63 (m, 4H), 1.27 (m, 20H), 0.88 (t, 6H); MS (FAB) m/z = 373 (M-H+);
Моноглицерид на нонанова киселина се получава (85 mg, 34 %) като твърдо бяло вещество. Т. т. 37-38.5°С; Rf 0.08 (SiO2, обработен предварително с Et3N, 30 % етилацетат в хексан); *Н NMR (CDC13, 300 MHz) δΗ = 4.18 (m, 2H), 3.94 (m, 1H), 3.69 (m, 1H), 3.62 (m, 1H), 2.36 (t, 2H), 1.62 (m, 2H), 1.28 (m, 10H), 0.88 (t, 3H); MS (FAB4} m/z = 233 (M+II+).
Пример 5:1,23-О^,О-тридеканоилсеринол
Серинол (51 mg, 0.56 mmol) се ацилира c деканоилхлорид (372 μΐ, 1.76 mmol) съгласно Общ метод В, пример 2. Пречистване чрез MPLC (SiO2, елюиране с 0, а след това с 10 % ЕЮАс в хексан) дава желания продукт като твърдо бяло вещество (301 mg, 97 %). Т. т. 54°С; TLC, Rf 0.85 (S1O2, ЕЮАс 2:3 хексан); ’Н NMR (CDC13, 300 MHz) δΗ = 0.84 (9Н, t), 1.20-1.27 (36Н, m), 1.521.60 (6Н, m), 2.13 (2Н, t), 2.28 (4Н, t), 4.03 (2Н, 2 х А на 2 х АВХ), 4.19 (2Н, 2 х В на 2 х АВХ), 4.41-4.46 (1Н, т), 5.70 (1Н, d); HRMS т/е изчислено за C33H^3NO5 553.4706 Намерено 553.4713. GC FID-анализ, условия на градиент: 100°С-250°С за 10 минути, след това 250°С за 25 минути; FID 250°С. Главно един пик при 14.80 минути (98 %).
Пример 6:13-О,О-додеканонлсеринол
a) BOC-ON, Et3N; b) DMAP, СНгС12; с) НС1
Разтвор на серинол (1.57 mg, 17.2 mmol) в ацетон (17 ml) и вода (17 ml) се обработва с триетиламин (3.60 ml, 25.9 mmol) и BOC-ON (4.67 mg, 19.0 mmol), след което реакционната смес се разбърква в азотна атмосфера в продължение на цялата нощ. Ацетонът се изпарява във вакуум, след което грубата смес се разделя на порции между EtOAc и вода. Водната фаза се екстрахира с EtOAc (х 3), а комбинираните органични екстракти се изсушават над Na2SO4, филтрират се и се изпаряват във вакуум до получаването на твърдо жълто вещество. Пречистване чрез MPLC (SiO2, елюиране с 40 до 80 % EtOAc в хексан) дава NВОС-диолово междинно съединение като твърдо кристално вещество (2.10 mg, 64 %). TLC, Rf 0.15 (SiO2, EtOAc 4:1 хексан); lH NMR (CDC13, 300 MHz) δΗ 1.40 (9H, s), 3.54-3.56 (5H, m).
N-ВОС-диоловото междинно съединение (50 mg, 0.26 mmol) се ацилира c деканоилхлорид (173 μΐ, 0.83 mmol) съгласно Общ метод В. Пречистване чрез MPLC (SiO2, елюиране с 0, а след това с 10 % EtOAc в хексан) дава N-BOCдиацилово междинно съединение като безцветна маслена течност (115 mg, 88 %). TLC, Rf 0.80 (SiO2, EtOAc 2:3 хексан); JH NMR (CDC13, 300 MHz) δΗ 0.87 (6H, s), 1.23-1.30 (24H, m), 1.44 (9H, s), 1.56-1.70 (4H, m), 2.31 (4H, t), 4.04-4.21 (4H, m), 4.77-4.80 (1H, m), 6.73 (1H, d).
Разтвор на N-ВОС-диациловото междинно съединение (76 mg, 0.15 mmol) в сух СН2С12 (1.5 ml) се охлажда до 0°С и се обработва с разтвор на 4.0 М безводен НС1 в 1,4-диоксан (375 μΐ, 1.50 mmol; крайна концентрация 0.8 М). Реакционната смес се оставя да се затопли до стайна температура и се разбърква в продължение на 3 часа при същата температура. Добавя се друга порция 4.0 М безводен НС1 в 1,4-диоксан (375 μΐ, 1.50 mmol), след което реакционната смес се разбърква в продължение на още 2 часа. Изпаряване на разтворителите дава желания продукт като твърдо бяло вещество (69 mg, 100 %). Т. т. 101°С; TLC, Rf 0.40 (SiO2, EtOAc 2:3 хексан); Ή NMR (CDC13, 300 MHz) δΗ = 0.88 (6H, t), 1.20-1.29 (24H, m), 1.55-1.65 (4H, m), 2.45-2.52 (4H, m), 3.72-3.80 (1H, m), 4.30-4.51 (2H, m), 8.6-9.0 (3H, br m); HRMS m/e изчислено за (M-HC1), C23H45NO4 339.3348 Намерено 339.3340; GC FID-анализ, условия на традиента: 100°С-250°С за 10 минути, след това 250°С за 25 минути; FID 250°С.
Главно един пик при 17.40 минути (94 %).
Пример 7: а- и р-1-С>-метил-1,2,3>4-О,О,О-тридеканоил-1г-фукопираноза
a) DMAP, СН2С12
1-О-метил-Ь-фукопираноза (593 mg, 3.33 mmol) се синтезира съгласно метода на Levene & Muskat (J. Biol. Chem. 105:431-441, 1934) и се ацилира с деканоилхлорид (2.90 ml, 14.0 mmol) съгласно Общ метод В, пример 2. Пречистване чрез MPLC (SiO2, елюиране с 0 до 5 % EtOAc в хексан) дава а (1.18 mg, 55 %) и β (0.52 mg, 24 %) от желания продукт като безцветна маслена течност.
Данни за а аномер: TLC, Rf 0.45 (SiO2, EtOAc 1:9 хексан); *Н NMR (CDC13, 300 MHz) δΗ 0.87 (9Η, t), 1.14 (ЗН, d), 1.20-1.35 (36H, m), 1.52-1.68 (4H, m), 2.18 (2H, t), 2.29 (1H, А от ABX2), 2.32 (1H, В от ABX2), 2.41 (2H, t) 3.38 (3H, s), 4.13 (1H, qd, J 6.5), 4.93 (1H, d), 5.15 (1H, dd), 5.30 (1H, dd), 5.36 (1H, dd); HRMS m/e изчислено за (M-CH3O), СзбН^О? 609.4730 Намерено 609.4720.
Данни за β аномер: TLC, Rf 0.40 (SiO2, EtOAc 1:9 хексан); 'Н NMR (CDCI3, 300 MHz) δΗ 0.87 (9Η, t, J 6.5), 1.22 (ЗН, d), 1.20-1.35 (36H, m), 1.49-1.67 (4H, m), 2.18 (2H, t), 2.25 (1H, А от ABX2), 2.29 (1H, В от ABX2), 2.34 (2H, t) 3.50 (3H, s), 3.81 (1H, qd), 4.35 (1H, d), 5.03 (1H, dd), 5.19 (1H, dd), 5.24 (1H, dd).
Пример 8: L-глутамат-капрамид
a) EDCI, DMAP, iPr2EtN, CH2C12; b) НС1/1,4-диоксан, CH2C12
Към разтвор на капрова киселина (1.26 g, 7.30 mmol) в сух СН2С12 (60 ml) се добавят, в азотна атмосфера, НС1 сол (6.09 mmol, 1.80 mg) на диЧ-бутилов ©естер на L-глутамовата киселина, DMAP (1.8 mmol, 0.22 g), диизопропилетиламин (18 mmol, 3 ml) и НС1 (EDC1) сол на (7.30 mmol, 1.40 mg) 1-(3-диметиламинопропил)-3-етилкарбодиимид. Полученият безцветен разтвор се разбърква при стайна температура в продължение на 24 часа. След това разтворителят се отстранява под намалено налягане до получаването на бяла маслообразна утайка. Пречистване чрез Biotage™ (40S, SiO2, елюиране с 5 % етилацетат в хексан - 30 % етилацетат в хексан) дава безцветна маслена течност, която е диЧ-бутилов естер на L-глутамат-капрамид. (2.47 mg, 98 %) Rf 0.56 (SiO2, 30 % етилацетат в хексан); ’Н NMR (CDCI3, 300 MHz) 6н - 6.05 (d, 1Н), 4.45 (m, 1Н), 2.30 (т, 2Н), 2.27 (т, 2Н), 2.16 (t, 2Н), 2.07 (т, 1Н), 1.87 (т, С 1Н), 1.58 (т, 2Н), 1.43 (s, 9Н), 1.41 (s, 9Н), 1.23 (т, 12Н), 0.84 (t, ЗН).
Депротектиране на ВОС групата се постига чрез бавно добавяне на 4.0 М разтвор на НС1 (23 ml) към разтвор на производно на диЧ-бутилов естер (5.75 mmol, 2.38 mg) в СН2С12 (35 ml) при 0°С. Полученият безцветен разтвор се оставя да се затопли до стайна температура и се разбърква в продължение на 20 часа. След това разтворителят се отстранява под намалено налягане и полученото твърдо бяло вещество се изсушава до получаването на L-глутаматкапрамид (1.71 mg, 99 %). Т. т. 95-96.5°С; ’Н NMR (CD3OD, 300 MHz) 6н = 4.39 (m, 1Н), 3.27 (d, 1Н), 2.36 (t, 2Н), 2.20 (t, 2Н), 2.13 (т, 1Н), 1.90 (т, 1Н), 1.58 (т, 2Н), 1.27 (т, 12Н), 0.86 (t, ЗН), MS (ES*) m/z = 324 (Μ + Na+), 302 (Μ + H4); MS (ES‘) m/z = 300 (M - H4); условия на HPLC анализ: градиент 0.01 % TFA в 1070% ацетонитрил за 10 минути; поток 1.0 ml/min; 210 nm; 8.93 минути.
Пример 9: Ν,Ν-диметилацетамиден естер на капровата киселина
Към разтвор на кадрова киселина (1.5 g, 8.7 mmol) в безводен DMF (80 ml), в азотна атмосфера, се добавят натриев йодид (0.87 mmol, 130 mg), а след това и диметилхлороацетамид (9.6 mmol, 985 μΐ). След това се добавя калиев карбонат (9.6 mmol, 1.3 g) и получената суспензия се разбърква при 90°С в продължение на 5 дни. Реакционната смес се оставя да се охлади до стайна температура, след което се смесва с дестилирана вода. Продуктът се екстрахира с етилацетат (х 3). Комбинираните органични фази се промиват с воден разтвор на NaHCCh, изсушава се с Na2SO4, филтрира се и се концентрира под намалено налягане. Получената жълта течност се пречиства чрез Biotage (40М, SiO2, елюиране с 25 % етилацетат в хексан - 50 % етилацетат в хексан) Ν,Νдиметилацетамидният естер на капровата киселина се получава (2.03 mg, 92 %) като бял прах. Т. т. 42-42.5°С; Rf 0.55 (SiO2, етилацетат); *Н NMR (CDC13, 300 MHz) δΗ = 4.64 (s, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.91 (s, 3H), 2.38 (t, 2H), 1.62 (qt, 2H), 1.22 (m, 12H), 0.83 (t, 3H), MS (ES4) m/z=537 (2M + Na4), 280 (M + Na4) 258 (M + H4).
Пример 10: Проба in vitro за неутрофилна апоптоза и преживяване
Преживяването на неутрофилите се измерва, както е описано от Lagraoui и Gagnon (Cell. Mol. Biol. 43:313-318, 1997). Неутрофилите се получават от периферна кръв на здрави доброволци. Кръвта се подлага на центрофугиране в градиент с Lympholyte-poly (Cedarlane, Homby, Канада), след което контаминиращите еритроцити се подлагат на хипотонична хемолиза. Клетките се суспендират в RPMI (Gibco, Burlington, Канада), допълнен с 10 % FBS (Hyclone, Logan, USA). Крайните клетъчни препарати съдържат > 95 % неутрофили, установено с оцветяване по Wright Giemsa. Жизнеността е над 97 %, установено с оцветяване с трипаново синьо. Полиморфонуклеарните левкоцити (ПМН) имат кратък полуживот и бързо претърпяват характерни промени, които са индикация за апоптоза. Апоптозата се определя по метода, описан от Nicoletti et al., J. Immunol. Meth. 139:271-279 (1991). Ha кратко, прясно изолирани неутрофили се инкубират в продължение на 24 часа при 37°С с различни концентрации ТСВ. След инкубацията клетките се оцветяват с пропидиев йодид (PI, Sigma) и се анализират за апоптоза с XL Flow цитометър (Coulter). Данните се изразяват като процент апоптотични клетки.
Фигура 1 представя компилация от няколко експеримента, при които неутрофилната апоптоза се измерва при липсата (контрола) или наличието на различни концентрации на ТСВ. Резултатите показват, че присъствието на ТСВ in vitro инхибира неутрофилната апоптоза до 90 % като инхибирането е зависимо от дозата. Така ТСВ повишава неутрофилното преживяване и може да се прилага като фактор, удължаващ живота на неутрофилите.
Пример 11: Проба in vitro за фагоцитоза на ПМН
Неутрофилите (2 х 106/ml) се инкубират в продължение на 24 часа, при 37°С в 5 % СО2 и 95 % влажност с различни концентрации ТСВ. След 24 часа жизнеността се определя с оцветяване с трипаново синьо и клетките се промиват три пъти с PBS, съдържащ 2 тМ глюкоза, 1 тМ MgCl2 и 1тМ СаС12. След това клетъчната концентрация се коригира до 1 х 106 клетки/ml, след което се инкубират с микросфери флуоресбиткарбоксилат (разреждане 1/10). След 30 минутна инкубация неутрофилите се промиват и се фиксират в 2 % параформалдехид. Фиксираните неутрофили се анализират за преработване на микросферите с XL Flow цитометър (Coulter). Данните се изразяват като процент фагоцитиращи клетки.
Фигура 2 представя компилация от няколко експеримента, които измерват фагоцитиращата активност на ПМН при липсата (контрола) или наличието на различни концентрации на ТСВ. Резултатите показват, че ТСВ увеличава фагоцитиращата активност на човешки ПМН. Фагоцитиращата активност се увеличава от два до три пъти спрямо контролните стойности като степента на стимулиране зависи от имунния статус на донора.
Пример 12: Ефект на доксорубицин върху неутрофилната апоптоза
ПМН се изолират, както е описано в пример 10. Клетките (2 х 106/ml) се инкубират в продължение на 4 часа, при 37°С в 5 % СО2 и 95 % влажност в присъствието на различни концентрации химиотерапевтичен агент, доксорубицин. Апоптотичните клетки се оценяват, както е описано в пример 10. Данните се изразяват като процент апоптотични клетки. Фигури ЗА и ЗВ показват, че доксорубицина предизвиква апоптоза на ПМН.
Пример 13: ТСВ предпазва неутрофилите от доксорубицин-индуцирана апоптоза
ПМН се изолират, както е описано в пример 10. Клетките (2 х 106/ml) се инкубират в продължение на 4 часа, при 37°С в 5 % СО2 и 95 % влажност в присъствието на различни концентрации доксорубицин с или без ТСВ (2.5 % и 5.0 %). Апоптотичните клетки се оценяват, както е описано в пример 10. Данните се изразяват като процент апоптотични клетки.
Таблица 1 представя два експеримента, отчитащи химиопротекгивния ефект на ТСВ върху ПМН. Резултатите са представени като процент апоптотични клетки след 4-часова инкубация в присъствието на различни концентрации доксорубицин с или без ТСВ. Както е посочено в пример 12, доксорубицина предизвиква апоптоза на ПМН in vitro. В присъствието на ТСВ в концентрации от 2.5 % и 5.0 % (v/v) апоптотичният ефект на доксорубицина се инхибира. Така ТСВ упражнява антиапоптотично действие върху ПМН. Апоптозата се изследва още с анексинов V-FITC/PI (пропидиев йодид) метод съгласно упътването на производителя (Apotarget Annexin-VFITC Apoptosis Kit #PHN 1018). Анексии V c фосфатидилсерина, който преминава от вътрешната към външната мембрана в ранната до късната фаза на апоптозата. На кратко, неутрофилите се инкубират в присъствието или отсъствието на различни концентрации ТСВ. След 24 часа клетките се промиват с PBS и се оцветяват с 2 μΐ анексии V-FITC и 10 μΐ PI (Sigma, 1 mg/ml) в продължение на 20 минути. След инкубация оцветените клетки се фиксират в параформалдехид (1 %) и се анализират за апоптоза с XL Flow цитометьр (Coulter). Данните се изразяват като процент апоптотични клетки.
Фигура 4А представя ефект на ТСВ върху третирани с доксорубицин неутрофили в зависимост от времето и курса. ТСВ предпазва неутрофилите от доксорубицин-индуцирана апоптоза в зависимост и от периода и от дозата.
Фигура 4В представя ефекта на доксорубицин върху третирани с ТСВ неутрофили в зависимост от времето и курса. ТСВ предпазва, в зависимост от дозата, неутрофилите от доксорубицин-индуцирана апоптоза до 4 часа преди въвеждането на токсичния агент (доксорубицин).
Таблица 1. Предпазващ ефект на ТСВ от доксорубицин-индуцирана неутрофилна апоптоза
Концентрация на доксорубицина Апоптоза на неутрофили (ПМН) в %
Експеримент 1 Експеримент 2
Контрола ТСВ 2.5 % (v/v) ТСВ 5% (v/v) Контрола ТСВ 2.5 % (v/v) ТСВ 5% (v/v)
0 12.4 9.5 12.3 49.6 23.6 4.6
1О',оМ 9.3 11.7 7.4 60.6 14.7 23.9
пНм 18.7 14.2 8.3 59.2 32.5 14.8
104М 23.2 12.7 3.5 55.0 21.6 16.9
10’5М 23.8 12.3 8.3 66.2 74.7 12.1
104М 27.5 35.2 17.1 53.2 58.6 55.7
Пример 14: ТСВ предпазва неутрофилите от доксорубицин-индуцирана апоптоза: Сравнение с GM-CSF
Таблица 2 представя ефекта на GM-CSF, ТСВ и трикаприлин върху доксорубицин-индуцирана апоптоза в човешки неутрофили. GM-CSF и ТСВ могат да предпазят човешките неутрофили от доксорубицин-индуцирана апоптоза. Трикаприлинът предпазва от доксорубицин-индуцирана апоптоза и освен това подобрява жизнеността на човешките неутрофили в по-голяма степен в сравнение с нетретирани неутрофили (контрола, липса на доксорубицин)
Таблица 2. Предпазващ ефект на ТСВ и GM-CSF от доксорубицининдуцирана неутрофилна апоптоза
Жизненост на ПМН в %
Контрола 35.9 ±0.71
Доксорубицин (DOX) (10-5 М) 6.82 ±0.5
GM-CSF(10'7M) + DOX 16.75 ±2.05
GM-CSF (10^^1) + DOX 6.99 ±0.23
ТСВ (24 mM) + DOX 14.20 ±1.98
TCB(12mM) + DOX 12.37 ±1.72
Трикаприлин (24 mM) + DOX 12.13 ±1.25
Трикаприлин (12 mM) + DOX 42.59 ±6.15
Пример 15: ТСВ и трикаприн повишават in vitro пролиферацията в костния мозък на мишки
Костномозъчните клетки се получават от бедрената кост на женски C57BL/6 мишки (възраст от 6 до 8 седмици). Клетките се промиват със силна струя PBS. Събраните клетки се центрофугират и се ресуспендират в концентрация 2 х 106 клетки/ml. 100 μΐ клетки (2 х 106 клетки/ml) се инкубират в микротитърна плака с 96 ямки в продължение на 48 часа в присъствието или отсъствието на ТСВ или трикаприн. След инкубацията клетките се белязват с 1 pCi [3Н]-тимидин в продължение на 6 часа. Плаките се поставят в Tomteck и се изброяват с Microbeta β-брояч. Включването на [3Н]-тимидин в ДНК е пряк показател за клетъчната пролиферация.
Фигура 5 представя типичен експеримент върху ефекта на ТСВ и трикаприн върху костномозъчната пролиферация. ТСВ и трикаприн повишават пролиферацията в костния мозък 3 до 5 пъти в сравнение с контролата.
Пример 16: Изследване на химиопротекцията: In vivo индукция на пролиферацията или защита на имунни клетки с ТСВ
Имунитетът на женски C57BL/6 мишки на възраст от 6 до 8 седмици се супресира с 80 mg 5-флуороурацил (5-FU) или 100-200 mg циклофосфамид (СУ) или с 12 mg таксотер (ТХ), приети интравенозно в ден 0. За да се изследва имунопротективния ефект на ТСВ или други съединения, мишките се третират предварително с тестовото съединение или перорално в -3, -2 или -1 ден или интравенозно в ден 0. Мишките се умъртвяват чрез сърдечна пункция и цервикална дислокация в ден + 5. След това се приготвят клетъчни суспензии от тимус, слезка и костен мозък.
Тъканите се разбиват до получааване на отделни клетки в PBS буфер и контаминиращите еритроцити се лизират в АСК буфер (155 mM NH4CI, 12 тМ NaHCO3, 0.1 тМ EDTA, pH 7.3) в продължение на 5 минути. След това клетките се събират чрез центрофугиране и се промиват три пъти в PBS и се ресуспендират в среда от тъканна култура. Клетките се изброяват с хемоцитометър.
Резултатите показват, че ТСВ повишава съществено броя на клетките в имунните тъкани в нормални и имуносупресирани животни, сравнено с чистия носител, както е показано в следните таблици и фигури. В зависимост от експериментите и имунния статус на мишките ТСВ може да увеличи броя на костномозъчните клетки и/или клетките на слезката и/или тези на тимуса.
Фигура 6 показва ефекта на ТСВ върху броя на костномозъчните клетки в имуносупресирани животни. Само CY и 5-FU понижават броя на костномозъчните клетки в сравнение с контролата (без цитотоксично третиране). При мишки третирането с таксотер няма съществен ефект върху броя на костномозъчните клетки. В супресирания костен мозък приемането на ТСВ (6.25 pmol на мишка) в ден -3, -2 и -1 увеличава съществено броя на костномозъчните клетки.
Фигура 7 представя ефекта на ТСВ върху броя на клетките на слезката в имуносупресирани мишки, третирани предварително с ТСВ по схема о. s. Всички цитотоксични лекарства (CY, 5-FU и ТХ) понижават значително броя на клетките на слезката в сравнение с контролата. Приемането на ТСВ (6.25 pmol на мишка) в ден -3, -2 и -1 увеличава съществено броя на клетките на слезката с Рн по-малко от 0.0017,0.009 и 0.0036 съответно за CY, 5-FU и ТХ.
Освен това ТСВ увеличава съществено броя на костномозъчните клетки в нормални мишки, когато се приема i. v. В ден 0 (таблица 3).
Таблица 3. Ефект на циклофосфамид (CY) и CY + ТСВ върху клетките на костния мозък и слезката (нормални мишки)
Костен мозък Слезка
# Клетки (х 106) Р # Клетки (х 10б) Р
Контрола 16 ±3.94 94 ± 11 -
CY 13 ±3.92 0.17 60 ±12 0.0014
CY +ТСВ (50 pmol) 17 ±4.28 0.87 53 ±10 0.0003
CY + ТСВ (12.5 pmol) 17± 6.15 0.95 51 ±10 0.0002
ТСВ (50 pmol) 41 ±6.11 >0.0001 103 ±7 0.19
ТСВ (12.5 pmol) 27 ±4.19 0.0018 101 ±11 0.31
Пример 17: Изследване на химиопротекцията: In vivo дозозависим отговор спрямо ТСВ-нндукцня на пролиферацията на имунни клетки при приемане в ден -3, -2 и -1 в нормални мишки
In vivo дозозависим отговор спрямо ТСВ-индукция на пролиферацията на имунни клетки в нормални мишки се определя по протокола, от пример 16.
Таблица 4 представя дозозависимия отговор при третиране с ТСВ, приет перорално в ден -3, -2 и -1 в нормални мишки. ТСВ увеличава съществено броя на клетките на костния мозък и слезката.
Таблица 4. Ефект на ТСВ върху нормални мишки
Костен мозък Слезка
# Клетки (х 106) Р # Клетки (х 106) Р
Контрола 45 ± 7.3 120 ±12.9 -
ТСВ (3.15 pmol) 52 ±4.3 0.10 144 ±15.8 0.018
ТСВ (6.25 pmol) 59 ± 11.3 0.05 134 ±13.9 0.129
ТСВ (12.5 pmol) 54±6 0.04 144 ±19.8 0.04
ТСВ (25 pmol) 56 ±3.9 0.01 127 ± 17.0 0.48
Пример 18: Изследване на хнмиопротекцията: In vivo индукция на пролиферация или защита на имунни клетки - сравнение с ефекта на ТСВ срещу GM-CSF
In vivo сравнение на индукцията на пролиферацията/регенерацията или защитата на имунни клетки се извършва по протокола, описан в пример 16.
Сравнителни изследвания на ТСВ и GM-CSF се извършват върху нормални и имуносупресирани животни. В сравнение с ТСВ GM-CSF няма съществена активност върху броя на клетките на костния мозък и слезката в имуносупресирани животни. Съществен ефект на GM-CSF се наблюдава само върху теглото на тимуса в нормални мишки (фигура 8). В този случай ТСВ показва ефект, подобен на този на GM-CSF.
Пример 19: Изследвания на хнмнопротекцията
Ефектът на каприловата и капровата киселина върху in vivo индукция на пролиферация или защита на имунни клетки се извършва по протокола, описан в пример 16.
Както е показано в таблица 5 само капровата киселина увеличава съществено броя на костномозъчните клетки. Не се наблюдава никакъв съществен ефект върху броя на клетките на слезката в сравнение с мишки, третирани с циклофосфамид.
Таблица 5. Ефект на циклофосфамид (CY), CY + каприлова киселина и
CY + капрова киселина върху клетките на костния мозък и слезката
Костен мозък Слезка
# Клетки (х 106) Р/Контрола P/CY # Клетки (хЮ6) Р/Контрола P/CY
Контрола 54 ±5.9 66 ±7.3
CY 22 ±5.7 >0.0001 23 ±4.0 >0.0001
CY + каприлова к-на 26 ±3.58 0.001 0.21 28 ±6.4 >0.0001 0.17
CY + капрова к-на 32 ±2.71 0.0004 0.006 27 ±8.4 >0.0001 0.27
Пример 20: Изследвания на химнопротекцията
Ефектът на трикаприлин и трикаприн върху in vivo индукция на пролиферация или защита на имунни клетки се извършва по протокола, описан в пример 16.
И трикаприлинът и трикапринът оказват ефект върху пролиферацията или защитата на броя на костномозъчните клетки в мишки, третирани с CY (таблица 6). Не се наблюдава никакъв съществен ефект върху броя на клетките на слезката в сравнение с мишки, третирани с циклофосфамид.
Таблица 6. Ефект на циклофосфамид (CY), CY + трикаприлин и CY + трикаприн върху клетките на костния мозък и слезката
Костен мозък Слезка
# Клетки (х 106) Р/Контрола P/CY # Клетки (хЮ6) Р/Контрола P/CY
Контрола 55 ±9.3 113 ±15.9
CY 22 ±5.8 0.0001 36 ±13.6 >0.0001
CY + трикаприлин 34 ±7.8 0.0033 0.022 37 ±12.6 >0.0001 0.8
CY + трикаприн 31 ±3.8 0.0008 0.012 38 ±6.8 >0.0001 0.7
Пример 21: Изследвания на химнопротекцията
Ефектът на нонановата и лауровата киселина върху in vivo индукция на пролиферация или защита на имунни клетки се извършва по протокола, описан в пример 16.
При предварително третиране на CY-третирани мишки с лаурова киселина се наблюдава значително увеличаване на пролиферацията или защитата на броя на клетките на костния мозък и слезката. Нонановата киселина демонстрира слаба (незначителна) активност спрямо броя на имунните клетки (таблица 7) в сравнение с мишки, третирани с циклофосфамид.
Таблица 7. Ефект на циклофосфамид (CY), CY + нонанова киселина и CY + лаурова киселина върху клетките на костния мозък и слезката
Костен мозък Слезка
# Клетки (х 106) Р/Контрола P/CY # Клетки (хЮ6) Р/Контрола P/CY
Контрола 58 ±11.8 99 ±22
CY 32 ±6.3 0.0016 1.0 24±6 0.0002
CY + нонанова киселина (6.25 pmol) 36 ±5.6 0.0044 0.26 28±4 0.0004 0.27
CY + лаурова киселина (6.25 μπιοί) 42 ±7.8 0.0185 0.04 32±5 0.0005 0.03
Пример 22: Изследвания на химиопротекцията
Ефектът на трилаурин и тримиристин върху in vivo индукция на пролиферация или защита на имунни клетки се извършва по протокола, описан в пример 16.
Трилауринът и тримиристинът имат слаба (незначителна) активност спрямо броя на имунните клетки върху мишки, имунисупресирани с CY (таблица 8).
Таблица 8. Ефект на циклофосфамид (CY), CY + трилаурин и CY + тримиристин върху клетките на костния мозък и слезката
Костен мозък Слезка
# Клетки (х 106) Р/Контрола P/CY # Клетки (х 106) Р/Контрола P/CY
Контрола 49 ±7.3 105 ±23
CY 27 ±2.8 0.0014 19 ±6.5 0.0007
CY + трилаурин (6.25 pmol) 31 ±6.8 0.0028 0.219 28 ±19.5 0.0004 0.302
CY + тримиристин (6.25 pmol) 31 ±9.9 0.0067 0.402 15 ±4.6 0.0007 0.314
Пример 23: Изследвания на химиопротекцията
Ефектът на трикапроин и натриев капроат върху in vivo индукция на пролиферация или защита на имунни клетки се извършва по протокола, описан в пример 16. Трикапроинът и натриевият капроат имат слаба (незначителна) активност спрямо броя на имунните клетки върху мишки, имунисупресирани с CY (таблица 9).
Таблица 9. Ефект на циклофосфамид (CY), CY + трикапроин и CY + натриев капроат върху клетките на костния мозък и слезката
Костен мозък Слезка
# Клетки (х 106) Р/Контрола P/CY # Клетки (Х106) Р/Контрола P/CY
Контрола 48 ±4.9 98 ±24.2
CY 25 ±4.9 >0.0001 33 ± 13.2 0.0018
CY + трикапроин (6.25 pmol) 29 ±4.1 0.0001 0.17 37 ±8.7 0.0035 0.51
CY + натриев капроат (6.25 μπιοί) 39 ±17.9 0.2403 0.09 35 ±10.6 0.0026 0.77
Пример 24: Изследвания на химиопротекцията
Ефектът на натриевият каприлат и натриевият капрат върху in vivo индукция на пролиферация или защита на имунни клетки се извършва по протокола, описан в пример 16.
При предварително третиране на CY-третирани мишки с натриев каприлат и натриев капрат се наблюдава значително увеличаване на пролиферацията или защитата на броя на клетките на костния мозък (фигура 9).
Пример 25: Изследвания на химиопротекцията: Режими след лечението
Изследванията на хемопротекцията се извършват, както е описано в пример 16, с изключение на това, че мишките се третират (след процедурата) с ТСВ, натриев каприлат, натриев капрат или капрова киселина в ден 1, 2, 3 и 4, 0 приети р.о.
При предварително третиране на CY-третирани мишки с ТСВ, натриев каприлат и натриев капрат се наблюдава значително увеличаване на пролиферацията или защитата на броя на клетките на костния мозък (фигура 10). Когато се използва за третиране след лечението, капровата киселина предизвиква значително увеличение на броя на клетките на слезката и слабо понижаване на броя на клетките на костния мозък (таблица 11).
Таблица 10. Ефект на циклофосфамид (CY), CY + ТСВ, CY + натриев каприлат и CY + натриев капрат върху клетките на костния мозък и слезката при третиране след лечението
Костен мозък Слезка
# Клетки (х 106) Р/Контрола P/CY # Клетки (х Ю6) Р/Контрола P/CY
Контрола 52 ±6.17 110 ±29.3
CY 19 ±4.99 >0.0001 30 ±9.5 0.0007
CY +ТСВ (12.5 μΜ) 26 ±3.70 >0.0001 0.0189 38 ±7.2 0.0014 0.163
CY + натриев каприлат (12.5 μΜ) 26 ±5.33 >0.0001 0.0455 36 ±12.5 0.0009 0.394
CY + натриев капрат(12.5 μΜ) 29 ±4.45 0.0001 0.0140 28 ±6.3 0.0007 0.696
Таблица 11. Ефект на циклофосфамид (CY), CY + капрова киселина върху клетките на костния мозък и слезката при третиране след лечението
Костен мозък Слезка
#Клетки (х 106) Р/Контрола P/CY # Клетки (х 106) Р/Контрола P/CY
Контрола 48 ±7.9 88 ±15.9
CY 31 ±6.7 0.0026 21 ±4.3 0.0001
CY ± капрова киселина (3.125 μιηοΐ) 37 ±7.8 0.0326 0.209 31 ±8.7 0.0001 0.035
CY + капрова киселина (6.25 μτηοΐ) 38 ±4.6 >0.0274 0.066 25 ±6.3 0.0001 0.187
CY + капрова киселина (12.5 μπιοί) 38 ±7.4 0.0412 0.134 36 ±7.8 0.0002 0.003
Пример 26: Изследвания на химиопротекцията: Имунофенотипен тест
Женски, 6- до 8-седмични, C57BL/6 мишки се третират предварително р.о. в ден -3, -2 и -1 или интравенозно в ден 0 с различни концентрации ТСВ. Имунофенотипизирането се извършва също и при имуносупресирани животни. Имуносупресия се предизвиква с 80 mg 5-флуороурацил (5-FU) или 100 до 200 mg циклофосфамид (CY) или с 12 mg таксотер (ТХ), приети интравенозно в ден 0. Мишките се умъртвяват на петия (5) ден чрез сърдечна пункция. Взимат се кръвта и слезката и се приготвят клетъчни суспензии като еритроцитите се лизират в АСК буфер (155 mM NH4CI, 12 тМ NaHCO3, 0.1 тМ EDTA, pH 7.3) в продължение на 5 минути. Клетките се промиват три пъти в PBS, pH 7.4 и се ресуспендират в среда от тьканна култура. След това клетките се инкубират за минути върху лед с флуоресцин-изотиоцианат- (FITC) или фикоеритрин(РЕ) маркери, които конюгират с клетъчната повърхност, съгласно упътването на на производителя (Gibco/BRL, Cedarlane, Boehringer Mannheim). След това клетките се промиват с PBS, фиксират се с 1 % параформалдехид и се анализират с Coulter XL течен цитометър. Анализът на клетъчните субпопулации се извършва чрез определяне на стандартните клетъчно повърхностни маркери, които са: TCR (Т-клетъчен рецептор), CD4 (Т-хелпер), CD8 (Т-убиец/супресор), CD1 lb (макрофаг), NK (NK-клетки) и Ly-5 (В-клетки). Костномозъчните клетки се получават, както е описано в пример 15. Клетките се оцветяват чрез инкубация за 45 минути на FITC или РЕ, които са конюгирани към клетъчната повърхност съгласно упътването на на производителя. След това клетките се промиват с PBS, фиксират се с 1 % параформалдехид и се анализират с Coulter XL течен цитометър. Анализът на клетъчните субпопулации се извършва чрез определяне на стандартните клетъчно повърхностни маркери, които са: CD34 (хемопоетични прогениторни клетки), CD41 (тромбоцити, мегакариоцити), CD 13 (миеломоноцитни стволови клетки, миелоцити, промоноцити) и CD38 (лимфоидни стволови клетки, про-В, пре-В).
Таблица 12 представя ефекта на ТСВ върху имунофенотипизирането на кръвта и слезката при нормални мишки. Спрямо имунофенотипизирането на кръвта ТСВ увеличава CD8+ и LY5+ клетъчни субпопулации. При някои експерименти ТСВ увеличава слабо LY5-TCR клетъчните субпопулации (данните не са отразени). Спрямо имунофенотипизирането на слезката ТСВ увеличава съществено относителния процент на LY5+TCR+ и CD4+ клетки. LY5-TCR- са не-В- и не-Т-клетки, които могат да представляват неутрофили.
Когато се приема от имуносупресирани мишки, ТСВ увеличава относителния процент на LY5-TCR (вероятно неутрофили) и CD 11+ (макрофаги) клетки при имунофенотипизирането на кръвта и слезката в сравнение с прилагане само на циклофосфамид. Тези клетъчни субпопулации произлизат от миелоидните клетъчни прекурсори (таблица 13).
Таблица 12. Ефект на ТСВ върху имунофенотипизирането на кръвта и слезката в нормални мишки
Клетъчни субпопулации Контрола 6.25 μΜ 12.5 μΜ 50 μΜ
Имунофенотипизиране на кръвта
CD8+ 12.76 ±1.23 16.41 ±1.16 р< 0.0004 - 13.18 ±2.08 р = 0.68
LY5+ 15.57 ±6.91 24.0 ±4.92 р< 0.037 - 26.75 ±4.11 р<0.01
Имунофенотипизиране на слезката
LY5-TCR- 13.02 ±2.54 - 16.84 ±0.83 р< 0.0257 -
CD4+ 19.9 ±1.09 22.25 ±1.64 р< 0.013 - 22 ±0.47 р< 0.091
Таблица 13. Ефект на ТСВ върху имунофенотипизирането на кръвта и слезката в мишки, имуносупресирани с циклофосфамид (CY, 200 mg/kg)
Клетъчни субпопулации CY 6.25 μΜ 12.5 μΜ 50 μΜ
Имунофенотипизиране на кръвта
LY5-TCR- 36.82 ± 9.93 - 51.67± 11.10 р<0.05 46.32 ±5.63 р = 0.1254
CD11+ 26.41 ± 4.54 - 42.12 ±8.77 р< 0.0119 42.56 ±8.62 р < 0.0098
Имунофенотипизиране на слезката
LY5-TCR- 20.2 ±4.05 23.92 ±1.61 р < 0.07 (слаб) - -
CD11+ 16.31 ± 4.85 27.47 ±11.48 р < 0.06 (слаб) - -
Пример 27: Изследвания на химиопротекцията: Имунофенотипен тест
Имунофенотипизирането от тримиристин, трилаурин, капрова киселина и натриев капроат се извършват по протокола, описан в пример 16.
Таблица 14 представя ефекта на тези аналози на ТСВ върху имунофенотипизирането на кръвта и слезката. Спрямо имунофенотипизирането на кръвта тримиристинът и трилауринът нямат съществени ефекти в сравнение с приложение на чист циклофосфамид. Спрямо имунофенотипизирането на слезката тримиристинът и трилауринът увеличават относителния процент на CD11+. Освен това, трилауринът индуцира значително увеличаване на LY5TCR- и NK+ клетъчните субпопулации.
Интересно е, че капровата киселина и натриевият капроат повишават съществено относителния процент на LY5-TCR- в кръвта. Спрямо слезката капровата киселина няма съществен ефект в сравнение с приложение на чист циклофосфамид.
Таблица 14. Ефект на тримиристин, трилаурин, капрова киселина и натриев капроат върху имунофенотипизирането на кръвта и слезката в мишки, имуносупресирани с циклофосфамид (CY, 200 mg/kg)
Съединения Клетъчни субпопулации CY 6.25 μΜ 12.5 μΜ
Имунофенотипизиране на кръвта
Тримиристин Няма съществен ефект
Трилаурин Няма съществен ефект
Капрова киселина LY5-TCR- 56.36 ±7.26 61.52 ±5.16 р = 0.189 70.79 ±3.95 р< 0.0029
Натриев капроат LY5-TCR- 40.91 ± 8.84 52.43 ± 10.16 р = 0.063 (слаб) -
Имунофенотипизиране на слезката
Тримиристин CD11+ 16.31 ±4.85 42.94 ±8.45 р< 0.0002 -
Трилаурин CD11+ 16.31 ±4.85 43.94 ±4.78 р< 0.0001 -
LY5-TCR- 73.17 ±1.41 77.86 ±2.94 р< 0.0097 -
NK+ 7.53 ±2.52 17.46 ±5.80 р< 0.0067 -
Капрова киселина Няма съществен ефект
Натриев капроат Не е изследвано
Пример 28: Изследвания на химиопротекцията: Имунофенотипен тест на костен мозък
Ефектът на ТСВ, натриев каприлат и натриев капрат върху имунофенотипизирането на костния мозък се извършват по протокола, описан в пример 26. Третирането с циклофосфамид индуцира съществено увеличение на всички изследвани клетъчни линии (CD34+, CD13+, CD41+ и CD38+). Добавянето на ТСВ или натриев каприлат или натриев капрат увеличава броя на CD 13+ линия, които са миеломоноцитни стволови клетки, миелоцити и промоноцити. Това увеличение на относителния процент на CD 13+ е съществено в сравнение с прилагане на чист циклофосфамид. Резултатите ясно демонстрират, че ТСВ и други подобни съединения индуцират съществено увеличаване на броя на костномозъчните клетки (както бе дадено за пример в предишните примери), а освен това и повишава относителния процент на прекурсора на фагоцитиращите клетки (ПМН и моноцити). Това може да доведе до по-добро възстановяване след цитотоксично лечение или защита от инфекциозни агенти (таблица 15).
Таблица 15. Ефект на ТСВ, натриев каприлат и натриев капрат върху имунофенотипизирането на костния мозък в мишки, имуносупресирани с циклофосфамид (CY, 200 mg/kg)
% Клетки CD34+ CD13+ CD41+ CD38+
Контрола 1.1 ±0.3 0.8 ±0.2 1.6 ±0.2 29.8 ±6.5
Циклофосфамид (CY) 10 ±1.0 3.2 ±0.5 4.2 ± 0.6 39.6 ±13.6
CY + TCB 11.2± 1.3 4.5 ± 0.5 р< 0.001 4.5 ±0.4 42 ±15.7
CY + натриев каприлат 11.2 ± 1.3 4.9 ±1.2 р< 0.017 4.6 ±1.3 36 ±9.7
CY + натриев капрат 9.1 ±3.1 4.7 ±1.7 р < 0.06 3.7 ±0.7 44.3 ±22.8
Пример 29: Изследване на хнмиопротекцията
Ефектът на тридеканоилсеринол и дидеканоилсеринол върху in vivo индукция на пролиферацията или протекцията на имунни клетки се определя по протокола, описан в пример 16.
Както е показано в таблица 16, тридеканоилсеринолът увеличава значително броя на клетките на слезката. Не се демонстрира никакъв съществен ефект върху броя на клетките на костния мозък.
Таблица 16. Ефект на циклофосфамид (CY), CY + тридеканоилсеринол и
CY + дидеканоилсеринол върху клетките на костния мозък и слезката
Костен мозък Слезка
# Клетки (х 106) Р/Контрола P/CY # Клетки (х 10б) Р/Контрола P/CY
Контрола 53 ±4.8 113 ±15.5
CY 28 ±3.4 >0.0001 29 ±9.2 >0.0001
CY + тридеканоилсеринол 28 ±4.6 >0.0001 0.95 42 ±8.4 >0.0001 0.035
CY + дидеканоилсеринол 30 ±3.8 >0.0001 0.54 36 ±9.9 >0.0001 0.27
Пример 30: Изследване на химиопротекцнята
Ефектът на а-метилтридеканоил-Ь-фукопираноза и β-метилтридеканоилL-фукопираноза върху in vivo индукция на пролиферацията или протекцията на имунни клетки се определя по протокола, описан в пример 16.
Както е показано в таблица 17, р-метилтридеканоил-Е-фукопиранозата демонстрира слаба (незначителна) активност спрямо броя на клетките на костния мозък в сравнение с мишки, третирани с циклофосфамид. Липсата на активност от страна на α-метил-аномера се очакваше поради факта, че нестабилността на а-алкилпиранозидите е добре известна.
е Таблица 17. Ефект на CY, CY + а-метилтридеканоил-Ь-фукопираноза и
CY + р-метилтридеканоил-Ь-фукопираноза върху клетките на костния мозък
Костен мозък
# Клетки (х 10ь) Р/Контрола P/CY
Контрола 53 ± 8.0
CY 26.2 ±2.6 0.0058
CY + а-метилтридеканоил-Ь-фукопираноза 30.4 ±9.3 0.0133 0.334
СУ + р-метилтридеканоил-Ь-фукопираноза 34.6 ±8.5 0.0068 0.061
Пример 31: Изследване на химиопротекцнята
Ефектът на етилкапрат и Ν,Ν-диметилацетамиден естер на кадровата киселина върху in vivo индукция на пролиферацията или протекцията на имунни клетки се определя по протокола, описан в пример 16.
Както е показано в таблица 18, само Ν,Ν-диметилацетамидния естер на капровата киселина увеличава значително броя на клетките на костния мозък.
Няма никакъв съществен ефект върху броя на клетките на слезката.
Таблица 18. Ефект на CY, CY + етилкапрат и CY + Ν,Ν-диметилацетамиден естер на капровата киселина върху клетките на костния мозък
Костен мозък
# Клетки (х 106) Р/Контрола P/CY
Контрола 50.2 ±4.8
CY 27.5 ± 8.0 0.0031
CY + етилкапрат 27.5 ±4.4 0.0032 1.0
CY + Ν,Ν-диметилацетамиден естер на капровата киселина 37.4 ±5.9 0.042 0.036
Пример 32: Антитуморна активност
Женски, 6- до 8-седмични, C57BL/6 мишки се инжектират интравенозно в ден 0 с 1 х 105 B16F10 клетки от меланома от АТСС (източник на клетъчната култура, Dr. I. J. Fidler). След това животните се инжектират i.v. с или без ТСВ (25 μπιοΐ/мишка) в ден 7, 9, 14 и 16 и с 10 mg/kg доксорубицин в ден 10 и 17. Мишките се умъртвяват в ден 22. Отчитат се телесното тегло и обема на тумора. Серийният туморен обем се получава чрез измерването на два диаметъра с дебеломер по формулата 0.4 (а х Ь2), където “а” е главния туморен диаметър и “Ь” е по-малкия перпендикулярен диаметър.
Този експеримент се првежда с цел да се потвърди, че ТСВ не влошава и не защитава раковите клетки в сравнение с имунните клетки.
Фигура 10 представя химиопротективния ефект и антитуморната ефективност на ТСВ в комбинация със субтерапевтична концентрация доксорубицин в B16F10 модел на меланома. ТСВ предизвиква слаба редукция на (Т/С около 20 %) на туморния обем, подобен на този при използване само на субтерапевтична концентрация доксорубицин (Т/С около 25 %). Допълнителен ефект се наблюдава, когато ТСВ се използва в комбинация с доксорубицин (Т/С около 45 до 50 %). Тези резултати показват, че е възможно да се постигне терапевтична активност, когато ТСВ се комбинира с субтерапевтична концентрация цитотоксични лекарства.
Пример 33: Антитуморна активност
Сингенният тумор DMBA3 (DA-3, модел на гръден карцином) се получава чрез пренеопластична лезия, третирана с 7,12-диметилбензантрацен при женски BALB/c мишки. DA-3 клетките се културират в еднослойни култури в пластмасови епруветки в RPMI-1640, съдържащ 0.1 тМ неесенциални аминокиселини, 0.1 μΜ натриев пируват, 2 тМ L-глутамин и 100 pg/ml гентамицин сулфат. След това се добавят 50 μΜ 2-меркаптоетанол и 10 % фетален телешки серум. DA-3 туморите се инокулират s.c. in vivo с 5x105 жизнеспособни туморни клетки, за да произведат локализирани тумори в 6- до
8-седмични BALB/c мишки. След това животните се наблюдават периодично чрез мануална палпация за наличие на тумор. Серийният туморен обем се получава чрез измерването на два диаметъра с дебеломер по формулата 0.4 (а х Ь2), където “а” е главния туморен диаметър и “Ь” е по-малкия перпендикулярен диаметър. Най-общо, туморите могат да се палпират около 7-10 ден след инокулирането.
Използват се два режима на третиране за оценяване на антитуморната ефективност и защита на ТСВ в комбинация с циклофосфамид (CY, 100 mg/kg) и таксотер (ТХ, 20 mg/kg) в DA-3 туморния модел. BABL/c мишки се инжектират с туморни клетки в ден 0. Третирането с ТСВ се извършва р.о. в ден 6, 7 и 8; в ден 20, 21 и 23, след третирането с СУ и ТХ, приети i.v. като еднократна инжекция в ден 9 и 16. Телесната маса и туморният обем се отчитат от ден 4 до ден 23. В ден 23 всички животни се умъртвяват. Процентът % Т/С (третирани спрямо контрола) се изчислява като съотношение на туморните обеми на третираната група животни в последния ден, разделени на относителните обеми в контролната група животни, умножено по 100. По NCI критериите продуктът се смята за ефективен, когато % Т/С е < 40 %.
Този експеримент се првежда с цел да се потвърди, че ТСВ не влошава и не защитава раковите клетки в сравнение с имунните клетки.
Фигура 11 представя химиопротективния ефект и антитуморната ефективност на ТСВ в комбинация със субтерапевтична концентрация CY и ТХ в DA-3 модел на гръден карцином. ТСВ предизвиква слаба редукция на (Т/С около 18 %) на туморния обем в сравнение с контролата. Когато ТСВ се използва в комбинация с CY или ТХ, не се наблюдава никакво увеличаване на туморния обем. Когато се използва в комбинация с CY, се наблюдава терапевтичен отговор (Т/С = 39.4 %). Тези резултати показват, че е възможно да се постигне терапевтична активност, когато ТСВ се комбинира с субтерапевтична концентрация CY. Този ефект може да се дължи на общото увеличаване на ефективността на имунните клетки при третирани с ТСВ животни (фигура 11 и таблица 19).
Таблица 19. Ефект на ТСВ върху туморния обем в комбинация със субтерапевтична концентрация циклофосфамид (CY, 100 mg/kg) и таксотер (ТХ, 20 mg/kg)
Туморен обем Третирани/Контрола (%)
Контрола 58.8 ±60.1
CY 27.5 ±15.9 46.8
ТХ 37.9 ±41.5 64.5
CY + TCB 23.2 ±13.1 39.4
ТХ + ТСВ 38.8 ±31.0 66.1
ТСВ 48.5 ±35.2 82.5
Пример 34: Антитуморна активност
Отчитането на антитуморната и химиопротективната ефективност се извършва по протокола, описан в пример 30, с изключение на приложението на терапевтична концентрация цитотоксични лекарства (циклофосфамид, 200 mg/kg; таксотер, 30 mg/kg).
Експериментът се првежда с цел да се потвърди, че ТСВ не влошава и не защитава раковите клетки в сравнение с имунните клетки. Фигура 12 показва химиопротективния ефект и антитуморната ефективност на ТСВ в комбинация с терапевтична концентрация CY и ТХ в DA-3 модел на гръден карцином. ТСВ предизвиква слаба редукция на туморния обем в сравнение с контролата. Когато ТСВ се използва в комбинация с CY или ТХ, не се наблюдава никакво увеличаване на туморния обем. Когато третирането е с CY или CY + ТСВ, се наблюдава значителна редукция на туморния обем. Освен това, съществен отговор с редукция на туморния обем може да се постигне с третиране с ТСВ в комбинация с ТХ (р < 0.0327), в сравнение с третиране само с ТХ, което пък е незначително в сравнение с контролните мишки (р = 0.1211) (таблица 20). Резултати показват, че е възможно да се постигне терапевтична активност, когато ТСВ се комбинира с незначителна терапевтична концентрация ТХ. Този ефект може да се дължи на общото увеличаване на ефективността на имунните клетки при третирани с ТСВ животни.
Таблица 20. Ефект на ТСВ върху туморния обем в комбинация с терапевтична концентрация циклофосфамид (CY, 200 mg/kg) и таксотер (ТХ, 30 mg/kg)
Третиране Т/С (%) Р/Контрола P/CY Р/ТХ
Контрола
ТСВ 0.4299
CY 18.8 0.0337
CY-TCB 22.1 0.0022 0.2928
ТХ 64.7 0.1211
ТХ-ТСВ 46.7 0.0327 0.5468
Всички справки, цитирани в този документ, се включват в пълния си смисъл.
Модификациите и вариантите на композициите и методите, описани погоре, са очевидни за специалистите в областта. Тези модификации и варианти се включват в сферата на приложените претенции.

Claims (81)

1. Метод за стимулиране на хемопоезата при пациенти с необходимост от лечение, характеризиращ се с това, че включва приемане от споменатия пациент на фармакологично ефективно количество от композиция, включваща едно или повече съединения съгласно формула I, едно или повече съединения съгласно формула II, едно или повече съединения съгласно формула III или тяхна комбинация където
RjCO-η
AYBO·^
I Y*=O,NH fl
RjC-X fl
R^-X o
Ш Z = O,NH, CH2O «zero
Ri е наситена или ненаситена C7-C11 алкилова група с права или разклонена верига;
А и В са, независимо един от друг, водороден атом или Ri-C=O; и
X е хидроксилна група, окси анион с метален моно- или дикатионен противойон или алкокси група с права или разклонена С1-С4 верига.
2. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че споменатата композиция включва смес от поне две съединения съгласно формула I, които са Триглицериди със Средно дълга Верига (ТСВи), където А = В = Rj са, съответно, наситени или ненаситени С7 и С9 алкилови групи с права или разклонена верига.
3. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че споменатата смес се състои от два триглицерида като първият ТСВ е съгласно формула I и А = В = Ri = СНз(СН2)б’, а вторият ТСВ е съгласно формула I и А == В = Ri = СН3(СН2)8-.
4. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че споменатата композиция включва от 0.1 % до 3 % всяка трето съединение съгласно формула I и А = В = Rj = СН3(СН2)4' и четвърто съединение съгласно формула I и А = В = Rj = СН3(СН2)10-.
5. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че споменатата смес включва четири геометрични изомера на триглицериди на С8 и С10 мастни киселини съгласно следната формула:
^0-
2 34
6 68
6 88
8 88
6. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че споменатата композиция включва едно или повече съединения съгласно формула II и X е ОН, което е мастна киселина със средно дълга верига.
7. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че композицията включва едно или повече съединения съгласно формула III и X е ОН.
8. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че споменатата композиция включва едно или повече съединения съгласно формула II и X е окси анион с метален противойон, селектиран от група, състояща се от калциев йон, магнезиев йон, калиев йон и натриев йон.
9. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че споменатата композиция включва едно или повече съединения съгласно формула III и X е окси анион с метален противойон, селектиран от група, състояща се от калциев йон, магнезиев йон, калиев йон и натриев йон.
10. Метод съгласно претенция 6, характеризиращ се с това, че споменатото едно или повече съединения е каприлова киселина или капрова киселина.
11. Метод съгласно претенция 8, характеризиращ се с това, че споменатото едно или повече съединения е натриев каприлат или натриев капрат.
12. Метод съгласно претенция 8, характеризиращ се с това, че споменатото едно или повече съединения е калциев каприлат или калциев капрат.
13. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че споменатото едно или повече съединения е триглицерид на каприловата киселина или триглицерид на капровата киселина.
14. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че споменатото едно или повече съединения е с концентрация в кръвта над 1 μΜ.
15. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува миелосупресия вследствие на химиотерапия при споменатите пациенти.
16. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува миелосупресия вследствие на лъчева терапия при споменатите пациенти.
17. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува хронична неутропения при споменатите пациенти.
18. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува временна неутропения при споменатите пациенти.
19. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на хематологични заболявания при споменатите пациенти.
20. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува лекарствено индуцирана неутропения при споменатите пациенти.
21. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на нутриционна недостатъчност при споменатите пациенти.
22. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на инфекция при споменатите пациенти.
23. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на лъчева терапия при споменатите пациенти.
24. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекуват рани при споменатите пациенти.
25. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата предизвиква мобилизация на неутрофилите с цел да се улесни трансплантацията на костен мозък при споменатите пациенти.
26. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че включва едновременно приемане на фармакологично ефективно количество човешки колония-стимулиращ фактор като фармакологично ефективното количество се намалява в присъствието на едно или повече съединения.
27. Метод съгласно претенция 26, характеризиращ се с това, че колониястимулиращият фактор е G-CSFoh GM-CSF.
28. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че включва отделно приемане на фармакологично ефективно количество човешки колониястимулиращ фактор преди и/или след приемането на едно или повече съединения, но не едновременно приемане.
29. Метод съгласно претенция 28, характеризиращ се с това, че колониястимулиращият фактор е G-CSFhah GM-CSF.
30. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че включва едновременно приемане на фармакологично ефективно количество човешки цитокин.
31. Метод съгласно претенция 30, характеризиращ се с това, че цитокинът е интерлевкин 2 или интерлевкин 15.
32. Съединение, характеризиращо се с това, че включва аза аналог на триглицерид на каприловата киселина или на триглицерид на капровата киселина като аза аналогът е 1,2,3-0,НО-триоктаноилсеринол или 1,2,3-0,N,0 тридеканоилсеринол.
33. Съединение съгласно формула IV, асоциирано с един или повече разредители, носители и/или ексципиенти по желание и са в количество или дозировка, достатъчна да осигури получаването на фармацевтична формула.
СООН ^^CNH^OOOH η = 6,8 m= 1,2
IV
34, Съединение съгласно формула V, асоциирано с един или повече разредители, носители и/или ексципиенти по желание и са в количество или дозировка, достатъчна да осигури получаването на фармацевтична формула.
35. Съединение съгласно формула VI, асоциирано с един или повече разредители, носители и/или ексципиенти по желание и са в количество или дозировка, достатъчна да осигури получаването на фармацевтична формула с in vivo разграждане, за да се отделят лекарствата съгласно претенция 1.
п = 6,8 т=1,2 х=н,он,
VI
36. Метод за стимулиране на хемопоезата при пациенти с необходимост от лечение, характеризиращ се с това, че включва приемане от споменатия пациент на фармакологично ефективно количество едно или повече съединения съгласно всяка претенция от 32-35.
37. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува миелосупресия вследствие на химиотерапия при споменатите пациенти.
38. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува миелосупресия вследствие на лъчева терапия при споменатите пациенти.
39. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува хронична неутропения при споменатите пациенти.
40. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува временна неутропения при споменатите пациенти.
41. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на хематологични заболявания при споменатите пациенти.
42. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува лекарствено индуцирана неутропения при споменатите пациенти.
43. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на нутриционна недостатъчност при споменатите пациенти.
44. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на инфекция при споменатите пациенти.
45. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на лъчева терапия при споменатите пациенти.
46. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува рани при споменатите пациенти.
47. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата предизвиква мобилизация на неутрофилите с цел да се улесни трансплантацията на костен мозък при споменатите пациенти.
48. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че включва едновременно приемане на фармакологично ефективно количество човешки колония-стимулиращ фактор като фармакологично ефективното количество се намалява в присъствието на едно или повече съединения.
49. Метод съгласно претенция 48, характеризиращ се с това, че колониястимулиращият фактор е G-CSFmh GM-CSF.
50. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че включва отделно приемане на фармакологично ефективно количество човешки колониястимулиращ фактор преди и/или след приемането на едно или повече съединения, но не едновременно приемане.
51. Метод съгласно претенция 50, характеризиращ се с това, че колониястимулиращият фактор е G-CSFhjih GM-CSF.
52. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че включва едновременно приемане на фармакологично ефективно количество човешки цитокин.
53. Метод съгласно претенция 52, характеризиращ се с това, че цитокинът е интерлевкин 2 или интерлевкин 15.
54. Приложение на едно или повече съединения за производството на медикамент за стимулиране на хемопоезата, характеризиращо се с това, че едно или повече съединения се селектират от група, състояща се от съединения съгласно формули I, II, III и техни комбинации
RjCO^ ο AY- ft ft R^S-x BO·^ jqc-x II 0 I Y '=O,NH П Ш Z = O,NH,CH2O където βζσο Ri е наситена или ненаситена C7-C11 алкилова група с права или
разклонена верига;
А и В са, независимо един от друг, водороден атом или R]-C=O; и
X е хидроксилна група, окси анион с метален моно- или дикатионен противойон или алкокси група с права или разклонена С1-С4 верига.
55. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува временна неутропения при животни вследствие на стреса от превозване с кораб или продължително пътуване.
56. Метод съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува временна неутропения при животни вследствие на стреса от превозване с кораб или продължително пътуване.
57. Приложение съгласно претенция 54, характеризиращо се с това, че 0 едно или повече съединения е съединение съгласно формула II.
58. Приложение съгласно претенция 57, характеризиращо се с това, че X е ОН.
59. Приложение съгласно претенция 57, характеризиращо се с това, че X е окси анион с метален противойон, селектиран от калциев катион, магнезиев катион, калиев катион и натриев катион.
60. Приложение съгласно претенция 57, характеризиращо се с това, че съединението е каприлова киселина.
61. Приложение съгласно претенция 57, характеризиращо се с това, че съединението е кадрова киселина.
62. Приложение съгласно претенция 57, характеризиращо се с това, че съединението е натриев каприлат или натриев капрат.
63. Приложение съгласно претенция 57, характеризиращо се с това, че съединението е калциев каприлат или калциев капрат.
64. Приложение съгласно всяка претенция от 57 до 63, характеризиращо се с това, че осигурява концентрация на съединението в кръвта 1 μΜ.
65. Приложение съгласно претенция 64, характеризиращо се с това, че концентрацията е над 1 шМ.
66. Приложение съгласно всяка претенция от 57 до 65, характеризиращо се с това, че хемопоезата е при хора.
67. Приложение съгласно претенция 66, характеризиращо се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува миелосупресия вследствие на химиотерапия при хора.
68. Приложение съгласно претенция 66, характеризиращо се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува миелосупресия вследствие на лъчева терапия при хора.
69. Приложение съгласно претенция 66, характеризиращо се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува хронична неутропения при хора.
70. Приложение съгласно претенция 66, характеризиращо се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува временна неутропения при хора.
71. Приложение съгласно претенция 66, характеризиращо се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на хематологични заболявания при хора.
72. Приложение съгласно претенция 66, характеризиращо се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува лекарствено индуцирана неутропения при хора.
73. Приложение съгласно претенция 66, характеризиращо се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на нутриционна недостатъчност при хора.
74. Приложение съгласно претенция 66, характеризиращо се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на инфекция при хора.
©
75. Приложение съгласно претенция 66, характеризиращо се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува неутропения вследствие на лъчева терапия при хора.
76. Приложение съгласно претенция 66, характеризиращо се с това, че стимулирайки хемопоезата лекува рани при хора.
77. Приложение съгласно претенция 66, характеризиращо се с това, че стимулирайки хемопоезата предизвиква мобилизация на неутрофилите с цел да се улесни трансплантацията на костен мозък при хора.
©
78. Приложение съгласно всяка претенция от 58 до 77, характеризиращо се с това, че се приема отделно или едновременно с човешки колониястимулиращ фактор.
79. Приложение съгласно претенция 78, характеризиращо се с това, че колония-стимулиращият фактор е G-CSF или GM-CSF.
80. Приложение съгласно всяка претенция от 58 до 77, характеризиращо се с това, че се приема отделно или едновременно с човешки цитокин.
81. Приложение съгласно претенция 80, характеризиращо се с това, че цитокинът е интерлевкин 2 или интерлевкин 15.
BG108280A 2001-04-18 2003-10-17 Мастни киселини като фактори, активиращи неутрофилите и удължаващи живота им BG66418B1 (bg)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28445801P 2001-04-18 2001-04-18
PCT/CA2002/000535 WO2002083120A2 (en) 2001-04-18 2002-04-18 Medium-chain length fatty acids, glycerides and analogues as neutrophil survival and activation factors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BG108280A true BG108280A (bg) 2004-09-30
BG66418B1 BG66418B1 (bg) 2014-03-31

Family

ID=23090294

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG108280A BG66418B1 (bg) 2001-04-18 2003-10-17 Мастни киселини като фактори, активиращи неутрофилите и удължаващи живота им

Country Status (30)

Country Link
US (2) US7745488B2 (bg)
EP (2) EP1385498B1 (bg)
JP (3) JP5026655B2 (bg)
KR (1) KR20030096323A (bg)
CN (1) CN1633286A (bg)
AP (1) AP1740A (bg)
AU (2) AU2002308456B2 (bg)
BG (1) BG66418B1 (bg)
BR (1) BR0208984A (bg)
CA (2) CA2763637C (bg)
CY (1) CY1107081T1 (bg)
CZ (1) CZ305273B6 (bg)
DE (1) DE60223670T2 (bg)
DK (2) DK1900364T3 (bg)
EA (1) EA007322B1 (bg)
EE (1) EE200300510A (bg)
ES (2) ES2439738T3 (bg)
HU (1) HUP0303817A3 (bg)
IL (3) IL158322A0 (bg)
MX (1) MXPA03009436A (bg)
NO (1) NO335105B1 (bg)
NZ (2) NZ541140A (bg)
OA (1) OA12506A (bg)
PL (2) PL223348B1 (bg)
PT (2) PT1385498E (bg)
SI (1) SI1385498T1 (bg)
SK (1) SK12772003A3 (bg)
TN (1) TNSN03089A1 (bg)
WO (1) WO2002083120A2 (bg)
ZA (1) ZA200307778B (bg)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL158322A0 (en) 2001-04-18 2004-05-12 Prometic Biosciences Inc Medium-chain length fatty acids, glycerides and analogues as neutrophil survival and activation factors
DK1592416T3 (da) * 2003-02-07 2009-04-20 Prometic Biosciences Inc Fedtsyrer med middel kædelængde, glycerider og analoger som stimulatorer af erythropoiesis
JP5214880B2 (ja) 2003-07-25 2013-06-19 プロメティック、バイオサイエンシーズ、インコーポレーテッド 中鎖脂肪酸の金属塩の製造
US20070219131A1 (en) * 2004-04-15 2007-09-20 Ben-Sasson Shmuel A Compositions capable of facilitating penetration across a biological barrier
US8241670B2 (en) * 2004-04-15 2012-08-14 Chiasma Inc. Compositions capable of facilitating penetration across a biological barrier
KR20070063507A (ko) * 2004-09-03 2007-06-19 프로메틱 바이오사이언시즈 인코포레이티드 면역조절작용과 화학방어활성을 가진 치환된 퓨리닐 유도체및 단독 또는 중쇄 길이 지방산이나 글리세리드와의 혼합사용
US8071580B2 (en) 2004-10-01 2011-12-06 Prometic Biosciences Inc. Medium-chain length fatty alcohols as stimulators of hematopoiesis
MX2007003967A (es) * 2004-10-01 2008-03-04 Prometic Biosciences Inc Alcoholes grasos con longitud de cadena media como estimuladores de hematopoyesis.
AU2006217544B8 (en) * 2005-02-28 2012-04-05 Alphabeta Ab Compounds for reducing aggregation of amyloid beta-peptide
EP2669368B1 (en) * 2006-05-17 2016-08-03 Cognate Therapeutics, Inc. Isolation and purification of hematopoietic stem cells from post-liposuction lipoaspirates
EP2679224A1 (en) 2007-08-01 2014-01-01 University of Pittsburgh of the Commonwealth System of Higher Education Nitro oleic acid modulation of type II diabetes
CN101878028A (zh) 2007-11-02 2010-11-03 普罗米蒂克生物科学公司 作为肾保护剂的中链长度脂肪酸和甘油酯
NZ586249A (en) 2007-12-19 2012-05-25 Prometic Biosciences Inc A combination of medium-chain length fatty acids, salts or triglycerides, gemcitabine, and optionally erlotinib, for the treatment of pancreatic cancer
CN102083787A (zh) 2008-05-01 2011-06-01 康普雷克萨公司 乙烯基取代的脂肪酸
US20140024713A1 (en) 2008-06-19 2014-01-23 University Of Utah Research Foundation Use of nitrated lipids for treatment of side effects of toxic medical therapies
WO2009155439A2 (en) * 2008-06-19 2009-12-23 University Of Utah Research Foundation Use of nitrated lipids for treatment of side effects of toxic medical therapies
CN102176900B (zh) 2008-09-17 2017-09-26 克艾思马有限公司 药物组合物和相关的给药方法
EP2165713B1 (en) * 2008-09-19 2012-11-14 Nestec S.A. Whey and thymus function
EP2459189A4 (en) 2009-07-31 2013-01-16 Univ Pittsburgh FATTY ACIDS AS ANTI-INFLAMMATORY AGENTS
WO2011041639A2 (en) 2009-10-02 2011-04-07 Miller Raymond A Heteroatom containing substituted fatty acids
EP2394636B1 (en) * 2010-05-28 2014-03-19 Novagali Pharma S.A. Method for treating retinal conditions using an intraocular tamponade
EP2744491B1 (en) 2011-08-19 2020-07-29 The University of Utah Research Foundation Combination therapy with nitrated lipids and inhibitors of the renin-angiotensin-aldosterone system
TWI572352B (zh) * 2012-03-01 2017-03-01 波麥堤克藥學Ｓｍｔ有限公司 用於製備具中鏈長度之脂肪酸的三酸甘油酯之方法
CN108498532B (zh) 2012-05-09 2021-07-23 坎泰克斯制药股份有限公司 骨髓抑制的治疗
KR101621856B1 (ko) 2013-08-19 2016-05-17 한국생명공학연구원 모노아세틸디아실글리세롤 화합물을 유효성분으로 함유하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료용 조성물
CA3037762C (en) 2014-05-15 2022-03-22 Enzychem Lifesciences Corporation Methods for treating leukopenia and thrombocytopenia
HUE071943T2 (hu) 2015-02-03 2025-10-28 Amryt Endo Inc Akromegália kezelése oktreotid orális alkalmazásával
US10052346B2 (en) 2015-02-17 2018-08-21 Cantex Pharmaceuticals, Inc. Treatment of myelodysplastic syndromes with 2-O and,or 3-O desulfated heparinoids
HRP20240082T1 (hr) 2015-07-07 2024-03-29 H. Lundbeck A/S Inhibitor pde9 s okosnicom imidazopirazinona za liječenje perifernih bolesti
IL258476B2 (en) 2015-10-02 2023-04-01 Complexa Inc Prevention, treatment and reversal of disease using therapeutically effective amounts of activated fatty acids
US9808438B2 (en) * 2015-11-09 2017-11-07 Enzychem Lifesciences Corporation Method for treating mucositis
EP3928776B1 (en) 2016-04-22 2025-11-12 Spoke Sciences, Inc. Fast-acting plant-based medicinal compounds and nutritional supplements
US11406616B2 (en) 2016-06-08 2022-08-09 Sunregen Healthcare Ag Lipids with odd number of carbon atoms and their use as pharmaceutical composition or nutritional supplement
EA201892396A1 (ru) 2016-12-02 2019-04-30 Ресептор Лайф Сайенсиз, Инк. Быстродействующие растительные лекарственные соединения и биологически активные добавки
CN107382710B (zh) * 2017-08-19 2020-11-06 中国铁道科学研究院集团有限公司铁道建筑研究所 一种接枝抗氧剂分子的多元醇
WO2019052629A1 (en) * 2017-09-12 2019-03-21 Sunregen Healthcare Ag LIPIDS HAVING AN IMPERATIVE NUMBER OF CARBON ATOMS AND THEIR USE AS A PHARMACEUTICAL COMPOSITION OR FOOD SUPPLEMENT
MX2020003330A (es) * 2017-10-05 2020-07-28 Receptor Holdings Inc Composiciones de hierbas con mejor biodisponibilidad.
CA3078549A1 (en) * 2017-10-05 2019-04-11 Receptor Holdings, Inc. Rapid onset and extended action plant-based and synthetic cannabinoid formulations
KR102054401B1 (ko) * 2018-03-26 2019-12-10 주식회사 엔지켐생명과학 1,2-디아실글리세롤 화합물, 그 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 면역조절제
FI3801526T3 (fi) 2018-05-25 2024-03-20 Cardurion Pharmaceuticals Inc 6-[(3s,4s)-4-metyyli-1-(pyrimidin-2-yylimetyyli)pyrrolidin-3-yyli]-3-tetrahydropyran-4-yyli-7h-imidatso[1,5-a]pyratsin-8-onin monohydraattimuotoja ja kiteisiä muotoja
EP3843737A4 (en) 2018-08-31 2022-06-01 Imara Inc. PDE9 INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF SICKLE CELL DISEASE
MA53188A1 (fr) 2018-10-11 2021-12-31 Basf As Composés aromatiques et leurs utilisations pharmaceutiques
AU2019385420A1 (en) 2018-11-19 2021-07-08 Spoke Sciences, Inc. N-acylated fatty amino acids to reduce absorption variability in cannabinoid based compositions
JP7735864B2 (ja) * 2019-10-31 2025-09-09 日本ゼオン株式会社 電気化学素子用機能層およびその製造方法、電気化学素子用機能層付きセパレータおよびその製造方法、並びに電気化学素子およびその製造方法
US11141457B1 (en) 2020-12-28 2021-10-12 Amryt Endo, Inc. Oral octreotide therapy and contraceptive methods
US20240415798A1 (en) * 2021-10-18 2024-12-19 Enzychem Lifesciences Corporation Compositions and methods for treating mucositis
CN119421865A (zh) * 2022-04-21 2025-02-11 默沙东有限责任公司 制备附聚的结晶中链脂肪酸钠盐的方法
WO2026013252A1 (en) * 2024-07-12 2026-01-15 Paoli Alessio A mixture of mono-, di- and triglycerides of nonanoic acid for use in the treatment of muscle atrophy, sarcopenia and muscle-injury

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2002A (en) * 1841-03-12 Tor and planter for plowing
US2004A (en) * 1841-03-12 Improvement in the manner of constructing and propelling steam-vessels
US2008A (en) * 1841-03-18 Gas-lamp eok conducting gas pkom ah elevated buhner to one below it
US2003A (en) * 1841-03-12 Improvement in horizontal windivhlls
US2006A (en) * 1841-03-16 Clamp for crimping leather
US4528197A (en) * 1983-01-26 1985-07-09 Kabivitrum Ab Controlled triglyceride nutrition for hypercatabolic mammals
US4703062A (en) * 1984-01-16 1987-10-27 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Parenteral nutrition with medium and long chain triglycerides
US4871768A (en) 1984-07-12 1989-10-03 New England Deaconess Hospital Corporation Dietary supplement utilizing ω-3/medium chain trigylceride mixtures
US4816440A (en) * 1985-09-26 1989-03-28 Cetus Corporation Stable formulation of biologically active proteins for parenteral injection
US7307166B1 (en) * 1987-10-28 2007-12-11 Wellstat Therapeutics Corporation Oxpurine nucleosides and their congeners, and acyl, derivatives thereof, for improvement of hematopoiesis
US5011852A (en) * 1988-07-25 1991-04-30 Applied Analytical Industries, Inc. Liquid oral pharmaceutical compositions of non-steroidal anti-inflammatory drugs
JPH02134326A (ja) * 1988-11-14 1990-05-23 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 高度侵襲用経腸栄養剤
JP3249147B2 (ja) * 1990-06-01 2002-01-21 キリン−アムジエン・インコーポレーテツド 生理活性蛋白含有経口製剤
FI924778A0 (fi) * 1991-02-22 1992-10-21 Amgen Inc Anvaendning av gm-csf och g-csf foer foersnabbande av saorlaekning
JP3132085B2 (ja) * 1991-09-06 2001-02-05 ウェルファイド株式会社 脂肪乳剤
JPH05163160A (ja) * 1991-12-13 1993-06-29 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 免疫低下に伴う感染症の予防及び治療用栄養剤
US5214035A (en) * 1992-04-16 1993-05-25 Hoechst-Roussel Agri-Vet Company Thixotropic formulations
US5308832A (en) * 1992-07-27 1994-05-03 Abbott Laboratories Nutritional product for persons having a neurological injury
US5318781A (en) * 1993-04-06 1994-06-07 Hoffmann-La Roche Inc. Absorption enhancement of antibiotics
US20010003739A1 (en) 1993-06-24 2001-06-14 Astrazeneca Ab Systemic administration of a therapeutic preparation
US5631219A (en) * 1994-03-08 1997-05-20 Somatogen, Inc. Method of stimulating hematopoiesis with hemoglobin
AU7082694A (en) * 1994-05-10 1995-11-29 Kitasato Institute, The Hematopoietic stem cell proliferation accelerator
US5470861A (en) * 1994-08-04 1995-11-28 Hoffmann-La Roche Inc. Method of promoting hair growth
US5549905A (en) * 1994-10-18 1996-08-27 Clintec Nutrition Co. Enternal composition for pediatric patients
JPH08208510A (ja) 1994-11-03 1996-08-13 F Hoffmann La Roche Ag インターフェロン組成物
GB9516268D0 (en) * 1995-08-08 1995-10-11 Danbiosyst Uk Compositiion for enhanced uptake of polar drugs from the colon
US5733884A (en) * 1995-11-07 1998-03-31 Nestec Ltd. Enteral formulation designed for optimized wound healing
CN1259908C (zh) * 1995-11-28 2006-06-21 B·布朗·梅尔松根有限公司 最优化水解的脂质乳剂及其用途
AUPN933396A0 (en) * 1996-04-17 1996-05-09 Pfizer Pty Limited Non-aqueuos oral-drench compositions containing avermectin compounds
US5851534A (en) * 1996-05-03 1998-12-22 Dynagen, Inc. Methods for prevention and/or treatment of neutropenia
JPH10265380A (ja) * 1997-03-17 1998-10-06 Bristol Myers Squibb Co 抗ガン剤
US6017531A (en) * 1997-06-02 2000-01-25 W. R. Grace & Co. Hydrophilic composition containing protease produced by Vibrio
AU9221698A (en) 1997-09-04 1999-03-22 Biozone Laboratories, Inc. Oral liposomal delivery system
ES2238775T3 (es) * 1997-11-19 2005-09-01 Hercules Incorporated Suspensiones polimericas fluidificadas de polisacaridos cationicos en emolientes y su uso en la preparacion de composiciones para el cuidado personal.
EP1061932B1 (en) 1997-11-20 2006-01-25 Gil Ja Jhon Pharmaceutical composition containing extracts of cervus nippon antlers having growth-stimulating activities of hematopoietic stem cells and megakaryocytes
DE69910183T2 (de) 1998-03-11 2004-06-03 Grelan Pharmaceutical Co., Ltd., Hamura Darmlösliche sprudelnde zusammensetzungen
US6267985B1 (en) * 1999-06-30 2001-07-31 Lipocine Inc. Clear oil-containing pharmaceutical compositions
KR20020059415A (ko) * 1999-09-27 2002-07-12 스티븐 씨. 큐웨이 토콜-가용성 치료요법제
US6835750B1 (en) * 2000-05-01 2004-12-28 Accera, Inc. Use of medium chain triglycerides for the treatment and prevention of alzheimer's disease and other diseases resulting from reduced neuronal metabolism II
AU2001264079A1 (en) * 2000-06-14 2001-12-24 William Leslie Porter Lipids for modulating immune response
ES2234877T5 (es) * 2000-06-20 2010-10-18 Nutrition Sciences Acidos grasos de cadena media utilizables como agentes antimicrobianos.
US6967028B2 (en) * 2000-07-31 2005-11-22 Mainelab Prolonged release microspheres for injectable administration
IL142535A0 (en) 2001-04-11 2002-03-10 Yeda Res & Dev Pharmaceutical compositions for the treatment of inflammation
IL158322A0 (en) 2001-04-18 2004-05-12 Prometic Biosciences Inc Medium-chain length fatty acids, glycerides and analogues as neutrophil survival and activation factors
US20040052836A1 (en) 2002-09-13 2004-03-18 Li Luk Chiu Pharmaceutical compositions containing at least one stable liposphere having an improved shelf life
DK1592416T3 (da) 2003-02-07 2009-04-20 Prometic Biosciences Inc Fedtsyrer med middel kædelængde, glycerider og analoger som stimulatorer af erythropoiesis
US6725510B1 (en) * 2003-04-25 2004-04-27 Almetta Clyburn Inclining coffin
JP5214880B2 (ja) 2003-07-25 2013-06-19 プロメティック、バイオサイエンシーズ、インコーポレーテッド 中鎖脂肪酸の金属塩の製造
KR20070063507A (ko) * 2004-09-03 2007-06-19 프로메틱 바이오사이언시즈 인코포레이티드 면역조절작용과 화학방어활성을 가진 치환된 퓨리닐 유도체및 단독 또는 중쇄 길이 지방산이나 글리세리드와의 혼합사용
US8071580B2 (en) 2004-10-01 2011-12-06 Prometic Biosciences Inc. Medium-chain length fatty alcohols as stimulators of hematopoiesis

Also Published As

Publication number Publication date
IL195200A0 (en) 2009-08-03
NO20034644D0 (no) 2003-10-17
DK1900364T3 (da) 2014-01-13
HUP0303817A2 (hu) 2004-03-01
PL222876B1 (pl) 2016-09-30
IL158322A (en) 2011-09-27
DE60223670T2 (de) 2008-03-06
CA2763637A1 (en) 2002-10-24
ES2295397T3 (es) 2008-04-16
IL195200A (en) 2011-11-30
JP5026655B2 (ja) 2012-09-12
EP1385498A2 (en) 2004-02-04
NZ541140A (en) 2006-11-30
CY1107081T1 (el) 2012-10-24
JP6420089B2 (ja) 2018-11-07
EP1900364A3 (en) 2009-09-23
SI1385498T1 (sl) 2008-04-30
PT1385498E (pt) 2007-12-14
WO2002083120A2 (en) 2002-10-24
PL366435A1 (en) 2005-01-24
JP2004525957A (ja) 2004-08-26
EA200301131A1 (ru) 2004-04-29
AU2006201163B2 (en) 2006-10-05
BR0208984A (pt) 2004-06-29
NZ528690A (en) 2005-08-26
NO335105B1 (no) 2014-09-15
WO2002083120A3 (en) 2003-05-22
AU2002308456B2 (en) 2005-12-22
CA2763637C (en) 2016-08-23
ZA200307778B (en) 2004-04-21
EA007322B1 (ru) 2006-08-25
SK12772003A3 (sk) 2004-07-07
EP1900364B1 (en) 2013-09-25
NO20034644L (no) 2003-11-25
CZ20032685A3 (cs) 2004-06-16
US8487001B2 (en) 2013-07-16
US20040147599A1 (en) 2004-07-29
IL158322A0 (en) 2004-05-12
JP2014231519A (ja) 2014-12-11
OA12506A (en) 2006-05-29
BG66418B1 (bg) 2014-03-31
KR20030096323A (ko) 2003-12-24
PL402948A1 (pl) 2013-05-13
US7745488B2 (en) 2010-06-29
AP2003002888A0 (en) 2003-12-31
PT1900364E (pt) 2013-12-19
HUP0303817A3 (en) 2009-10-28
EE200300510A (et) 2004-02-16
DE60223670D1 (de) 2008-01-03
MXPA03009436A (es) 2004-12-06
AP1740A (en) 2007-05-10
PL223348B1 (pl) 2016-10-31
AU2006201163A1 (en) 2006-04-13
EP1900364A2 (en) 2008-03-19
JP5657879B2 (ja) 2015-01-21
EP1385498B1 (en) 2007-11-21
ES2439738T3 (es) 2014-01-24
DK1385498T3 (da) 2008-03-25
CA2444463C (en) 2012-03-20
CN1633286A (zh) 2005-06-29
US20100279959A1 (en) 2010-11-04
CZ305273B6 (cs) 2015-07-15
JP2010053135A (ja) 2010-03-11
CA2444463A1 (en) 2002-10-24
TNSN03089A1 (en) 2005-12-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG108280A (bg) Мастни киселини със средно дълга верига, техни глицериди и аналози като фактори, активиращи неутрофилите и удължаващи живота им
AU2002308456A1 (en) Medium-chain length fatty acids, glycerides and analogues as neutrophil survival and activation factors
EP1592416B1 (en) Medium-chain length fatty acids, glycerides and analogues as stimulators of erythropoiesis