BG61842B1

BG61842B1 - Метод за получаване на дорамектин и противопаразитни междиннисъединения

Info

Publication number: BG61842B1
Application number: BG100470A
Authority: BG
Inventors: Thomas C. Crawford; Neil Demers; Stephen P. Gibson; Charles W. Murtiashaw; Constantine Sklavounos
Original assignee: Pfizer Inc
Priority date: 1993-10-05
Filing date: 1996-04-02
Publication date: 1998-07-31
Also published as: CN1040113C; PL177039B1; HU219020B; HU9600875D0; ES2138090T3; RO115884B1; KR960704906A; GT199400065A; IL111075A0; HRP940642A2; CZ287404B6; NO961380D0; SI9420059A; CN1202493A; EG20802A; JP2761296B2; CA2173494C; AP9400678A0; US5665708A; CZ96396A3

Description

Изобретението се отнася до нови междинни съединения при получаване на съединението със следващата формула

което съединение е означавано по-нататък като дорамектин, и до подобрени методи за получаване на посочените междинни съединения. Изобретението се отнася също така и до приложението на междинните съединения за борба с паразити. Освен това изобретението се отнася и до подобрен метод за получаване на дорамектин от съединения със следващата формула

Предшестващо състояние на техниката

Дорамектинът е противопаразитен и противоглистен агент с широк спектър на действие, принадлежащ към класа на вторичните метаболити, известни като авермектини. Дорамектин може да се получи чрез ферментация на авермектин продуциращи щамове на микроорганизмите Streptomyces avermitilis като АТСС 31267, 31271 или 31272 в аеробни условия, във водна хранителна среда, съдържаща неорганични соли и усвоими източници на въглерод и азот, както е описано в патент на US No 5,089,480, който е даден тук като използвана литература. Друг щам на авермектин продуциращи микроорганизми е Streptomices avermitilis АТСС 53568, който е описан от Dutton et al., Journal of Antibiotics, 44, 357 - 65 (1991). Щамовете Streptomyces avermitilis ATCC 31267,31271, 31272 и 53568 са депозирани в American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA съгласно на Будапещенското споразумение (Budapest Treaty).

По време на ферментационния процес, при който се получава съединението с формула, дадена по-горе, могат да се изолират различни съпътстващи продукти. Основният съпътстващ продукт, който може да се изолира по време на ферментацията на идентифицираните погоре микроорганизми, има структурната формула II, дадена по-горе. Изолирането на съединението с формула II от ферментационната среда на Streptomyces avermitilis АТСС 53568 е описано от Dutton et al., ibid. Съединението c обща формула II е активно противопаразитно и противоглистно съединение, което е описано и заявено в патент на US No 5,089,480. Обаче, дорамектинът е за предпочитане. Методът съгласно изобретението използва съпътстващия продукт с формула II, като го превръща в по-ценния противопаразитен агент дорамектин с формула I.

Основното превръщане при този метод е елиминирането на хидроксилната група при С-23, при което на местата С-22.С-23 в молекулата остава олефин. Докладвани са методи с ниски добиви, при които се извършва същото превръщане при слабо различаващи се авермектини. Например, когато на 25-то място се намира циклохексилна група, вместо вторичен бутил, превръщането се постига, като се използват пет последователни етапа, при общ добив от около 3.6% Mrozik et al., Tetrahedron Letters, 1982, 23, 2377-78). В светлината на споменатите методи с нисък добив е желателно да се отдели метод, при който да се получи по-ефективно превръщане на изходния материал в дорамектин.

Задачата на изобретението е да се създаде метод за превръщане на съединение с формула II в дорамектин с висок краен добив.

Друга задача на изобретението е да се осигурят полезни междинни съединения за този метод.

Техническа същност на изобретението

Изобретението се отнася до нови междинни съединения с формула

в която R, е (С₂-С₅) алканоил или арилоксиацетил и R₂ е водород или арилокситиокарбонил.

Освен това изобретението се отнася и до нови междинни съединения с формула

OR, в която R₂ е (С,-С,(алканоил или арилоксиацетил.

Особено предпочитани съединения съгласно изобретението са тези съединения с формула III, в които R, е (С.-С₅) алканоил, феноксиацетил или (С₁-С₄)алкилфеноксиацетил и R₂е водород или (С,-С₄)алкилфенокситиокарбонил. Специално предпочитани съединения от тази група са съединенията с формула III, в която R, е ацетил или феноксиацетил и R₂ е водород или р-толиолкситиокарбонил.

Също така предпочитани съединения съгласно изобретението са съединенията с формула IV, в която R, е (С.-Сралканоил, феноксиацетил или (С₁-С₄)алкилфеноксиацетил. Специално предпочитани съединения от тази група са съединенията с формула IV, в която R, е ацетил или феноксиацетил.

Съгласно изобретението е създаден метод за получаване на съединение с формула

включващ следните етапи:

а) взаимодействие на съединение с формула

с ацилиращ агент с формула (R₄CO)₂0 или R₄COX, в която R₄ арилоксиметил и X е С1 или Вг, за да се получи съединение съгласно формула III, в която R₁ е арктоксиацетил и R₂е Н;

б) взаимодействие на посоченото съединение с формула III, в която R₂ е арилоксиацетил и R₂ е Н, със съединение с формула R₃OC(=S)X, в която R_J е арил и X е С1 или Вг за получаване на съединение съгласно формула III, в която R₂ е арилоксиацетил и R₂ е арилокситиокарбонил;

в) взаимодействие на споменатото съединение с формула III, в която R, е арилокситиокарбонил, в среда на инертен разтворител при температура приблизително от 150°С до 200°С в границите приблизително от 2 до 48 Ь,в присъствието на калциев карбонат и при непрекъснато продухване на инертен газ, за да се получи съединението съгласно формула IV, в която Rj е арилоксиацетил, и

д) взаимодействие на съединение с формула IV, в която Rj е арилоксиацетил, с основа в алкохолна среда за получаване на съединението с формула I.

Особено предпочитан метод съгласно изобретението е този, при който инертният газ е азот. Друг предпочитан метод съгласно изобретението е този, при който основата е NH₃, КОН, Na₂CO₃, NaHCO₃ или NaOAc. Оптимални изпълнения в рамките на препожения метод са тези, при които се използват предпочитаните съединения съгласно изобретението.

По-нататък изобретението се отнася до метод за получаване на съединение с формула I, включващ следващите последователно етапи:

а) взаимодействие на съединение с формула II с ацилиращ агент с формула (R₄CO)₂или R₄COX, в която R₄ е (Cj-C₄) алкил и X е С1 или Вг, за да се получи съединението с формула III, в която Rj е (Cj-C₄)алканоил и R₂ е Н;

б) взаимодействие на съединение, в което Rj е (С|-С₄)алканоил и Rj е Н, със съединение с формула R₃OC(=S)X, в която R₃ е арил и X е С1 или Вг, за поучаване на съединение съгласно формула III, в която Rj е (С|-С₄)алканоил и R₂ е арилокситиокарбонил;

в) взаимодействие на съединение с формула III, която Rj е (С|-С₄)алканоил и R₂ арилокситиокарбонил, в среда на инертен разтворител при температура приблизително от 150°С до 200°С в границите приблизително от до 48 h, в присъствието на калциев карбонат и при непрекъснато продухване с инертен спрямо реакционната среда газ, за да се получи съединението с формула IV, в която Rj е (Cj-Сралканоил, и

г) взаимодействие на съединение с формула IV, в която Rj е (Cj-Сралканоил, с литиево-алуминиев хидрид, натриев цианоборхидрид или литиев триетилборхидрид в среда на инертен разтворител за получаване на съединението с формула I.

Особено предпочитано изпълнение в рамките на предложения метод е това, при което инертният газ е азот. Най-предпочитаните изпълнения в рамките на предложения метод са тези, при които се използват особено предпочитаните съединения съгласно изобретението.

Съгласно изобретението е създаден метод за лечение на бозайници, страдащи от болести, причинени от паразити, включващ приемане от бозайниците на противопаразитно ефективно количество съединенията с формула III или IV.

Подробно описание на изобретението

Съединенията съгласно изобретението се получават лесно, като се следва метода съгласно изобретението, който е описан подробно по-долу.

Съединението с формула I съгласно изобретението е дорамектин, полезен противопаразитен и противоглистен агент, който е описан в патент на US No 5,089,480, включен като литературна справка. Дорамектинът се получава при взаимодействието на съединението с формула IV, дадена по-горе, с литиево-алуминиев хидрид, натриев цианоборхидрид или литиев триетилборхидрид или чрез осапунване естера, в зависимост от природата на естера, който трябва да се отцепи.

В случая, когато Rj е (С₂-С-₅) алканоил, (С₂-С₅)алканоилокси групата се превръща в хидроксилан група при реакцията на съединението с формула IV, в която R, е (С₂-С₅)алканоил, с литиево-алуминиев хидрид, натриев цианоборхидрид или литиев триетилборхидрид в среда на инертен разтворител, при температура приблизително от -100°С до 0°С, в границите от 15 min до около 24 h. Подходящите реакционни инертни разтворители за тази реакция зависят от избора на редуциращ агент и се подбират, но без това да бъде ограничение, измежду такива разтворители като диетилов естер, диоксан, тетрахидрофуран, 2-метоксиметилов етер и 1,2-диметоксиетан.Особено предпочитан редуктор при тази реакция е литиевият триетилборхидрид, а особено предпочитан разтворител е тетрахидрофуранът. Обикновено по време на смесването на реагента със субстрата температурата се поддържа между -78°С и -70°С и то за кратко време, обикновено в границите от 15 min до около 1 h след това. Малко след като смесването е приключило, обикновено 15 min до 1 h, температурата се оставя да се повиши до стайна. Реакционната смес се охлажда бързо и продуктът с формула I се изолира съгласно известните за целта процедури.

В случай, че Rj е арилоксиацетил, арилоксиацетилокси групата се превръща в хидроксилна група при взаимодействие на споменатото съединение с формула IV, в която R, е арилоксиацетил, с хидроксид на алкален метал в алкохолен разтворител при температура приблизително -75° до 0°С в границите от около 15 min до около 24 h. Особено предпочитан хидроксид на алкален метал е калиевият хидроксид, а особено предпочитан разтворител е метанолът. Обикновено реакцията се провежда при температура -35°С в продължение на около 1 h, след което съединението с формула I се изолира съгласно известните стандартни процедури. Респ., тази реакция може да се извърши като алкалният хидроксид се замени с амоняк. В случаите, когато се използва амоняк, реакцията се провежда при температура приблизително -35°С до 0°С в границите от около 1 до около 16 h. За предпочитане е реакцията да се извършва в метанол при -15°С за около пет до шест часа. Полученото съединение с формула I се изолира съгласно добре познатите в органичната химия стандартни процедури.

Съединенията с формула IV от представеното изобретение се получават лесно съгласно метода от това изобретение, като се осъществи взаимодействие на съединение с формула III от изобретението във висококипящи разтворители, каквито са, без да се ограничава до тях, 2-метоксиетилов етер или 2-етоксиетилов етер, при температура в границите приблизително от 150°С до 200°С, в продължение на 2 до около 48 h. За да се получи максимален добив, реакционната смес се продухва непрекъснато с инертен газ, например азот или аргон. Особено препоръчително е провеждането на реакцията при температура от 156°С до 158°С в 2-метоксиетилов етер при непрекъснато продухване с азот в продължение на 12 h. Когато реакцията приключи, продуктът - съединението с формула 1 Vq се изолира съгласно известните стандартни методи.

Съединенията с формула III съгласно изобретението, в което R₂ е арилокситиокарбонил, се получават съгласно метода от изобретението при взаимодействие на съединение с формула III от представеното изобретение, в която R₂ е водород, с халогентионоформиат с формула R₃OC(=S)X, в която R₃ има значението, дефинираното по-горе, в среда на инертен разтворител, в присъствието на протонен акцептор, като пиридин или 4-диметиламинопиридин за време в границите от около 30 min до около 12 h. Подходящите инертни разтворители за тази реакция включват етилацетат,

1,2-диметоксиетан,2-метоксиметилов етер, 2метоксиетилов етер, ароматни разтворители като толуен, ксилен и бензоен и хлорсъдържащи разтвориетли като хлороформ и метиленхлорид. Предпочитани разтвориетли за тази реакция са етилацетат или толуен. За препоръчване е времето на реакцията да бъде от 2 до 4 h. Реакционната смес се нагрява от около 40°С до температурата на кипене на избрания разтворител под обратен хладник. Реакционната смес се охлажда бързо и продуктът - съединението с формула III, в която R₂ е арилокситиокарбонил, се изолира съгласно стандартните методи.

Съединенията с формула III, съгласно изобретението, в която R₂ е водород и R₁ е (С₂-С₅) алканоил или арилоксиацетил, се получават лесно съгласно метода от това изобретение. Съединението с формула II от изобретението взаимодейства с ацилиращ агент в среда на инертен разтворител в присъствието на протонен акцептор, като пиридин, 4-диметил-аминопиридин, пиперидин, пиролидин, триетиламин, морфолин или диизопропилетиламин, без това да ги ограничава, при температура от около-75°С до около 0°С в границите от 5 min до около 8 h. Подходящите инертни разтворители за тази реакция включват ароматни разтворители като толуен, бензоен, или ксилен или хлорсъдържащи разтворители като метиленхлорид, хлороформ или 1,2-дихлорметан. Подходящи ацилиращи агенти са или киселинни халиди, обикновено киселинни хло5 риди или киселинни анхидриди, когато се използва киселинен хлорид като ацилиращ агент при тази реакция, особено предпочита органичен амин е пиридинът. Когато като ацилиращ агент се използва киселинен анхидрид, особено предпочитан органичен амин е триетиламинът. Общо взето, предпочитани разтворители за тези реакции, независимо дали е използван киселинен хлорид или киселинен анхидрид като ацилиращ агент, са хлорсъдържащите разтворители. Особено предпочитан е метиленхлоридът. Когато реакцията приключи, реакционната смес се охлажда бързо и продуктът съединението с формула III, в която 1% е водород и R, е (С₂-С₅)алканоил или арилоксиацетил, се изолира съгласно стандартните познати методи в органичната химия.

Съединенията с формула II могат да бъдат изолирани чрез ферментация на авермектин продуциращ щам на Streptomyces avermitilis, като АТСС 31267, 31271 или 31272, както е описано в патент на US No 5,089,480. Други методи за получаване на съединенията с формула II включват изолирането от ферментационната среда на Streptomyces avermitilis АТСС 53568, както е описано от Dutton et al., Journal of Antibiotics, 44, 357-65 (1991).

Новите съединение ΠΙ-IV съгласно изобретението са полезни като междинни съединения при синтеза на съединението с формула I - дорамектин, като се излиза от съединението с формула II.

Новите съединения III - IV съгласно изобретението са също така полезни като противопаразитни агенти. Полезността на споменатите съединения III - IV като противопаразитни агенти е демонстрирана чрез активността им in vivo при гризачи, описан от Gration et al., Veterinary Parasitology, 42, 1992, 273-279.

Съединенията c формули III и IV са силно активни противопаразитни агенти, имащи подчертано действие срещу глисти, ектопаразити, като и срещу инсекти и акари.

Съединенията с формули III и IV са ефективни при лечението и профилактиката на голям брой състояния, предизвикани от ендопаразити, включващи, по-точно, хелминтиаза, която най-често се предизвиква от група паразитни червеи, означени като нематоди, които могат да предизвикат тежки икономически загуби при свине, овце, коне и едър рогат добитък, както и да засегнат домашните животни и птиците.

Дорамектинът е също така ефикасен спрямо други нематода, които засягат различни животни, вкл. например Dirofilaria при кучета и спрямо различни паразити като Ancylostoma, Necator, Ascaris, Strongyloides, Trichinella, Capillaria, Trichuris, Enterobius и спрямо паразити, които са открити в кръвта или в други тъкани и органи, например филариоални глисти и екстратестинални стадии на Strongyloides и Trichinella.

Съединенията с формули III и IV са също така от значение при лечението и профилактиката на ектопаразитни инфекции, включително артроподни ектопаразити при животните и птиците като кърлежи, червейчата, въшки, бълхи, мухи месарки, хапещи насекоми, движещи се двукрили ларви, които могат да засегнат говедата и конете.

Съединенията с формули III и IV, също така активни инсектициди спрямо домашни вредни насекоми като хлебарки, молци и домашни мухи, както и спрямо насекоми, развъждащи се в складирани зърнени продукти и селскостопански вредители като гъсеници, паяци, листни въшки, както и спрямо мигриращи правокрили като скакалци.

Съединенията с формули III и IV се приемат като лекарствено средство, подходящо приготвено във връзка със специфичното приложение и в зависимост от вида на животното гостоприемник, което ще се лекува, и вида на самия паразит. За използване като противоглистно средство съединението може да се приеме орално под формата на капсула, болус, таблета или, за предпочитане в течна форма, но може да се приема и чрез инжектиране, обливане или като имплантант. Тези лекарствени средства се приготвят по традиционните техники съгласно стандартната ветеринарна практика. Така например капсулите, болусите или таблетите могат да се приготвят чрез смесване на активната съставка с подходящ финораздробен разредител или носител, като могат да съдържат допълнително и дезинтигриращ агент и/или свързващо вещество ,като нишесте, лактоза, талк, магнвезиев стеарат и др. Течната лекарствена форма може да бъде приготвена чрез диспергиране на активната съставка във воден разтвор заедно с диспергиращи, омокрящи агенти и други, а разтворите за инжектиране могат да бъдат приготвени под формата на стерилен разтвор, който да съ6 държа и други субстанции, например достатъчно соли или глюкоза, за да бъде разтворът изотоничен с кръвта. Тези лекарствени форми ще се различават по отношение на теглото на активната съставка, в заивисимост от вида на животното гостоприемник, което ще се обработва, сериозността и типа на инфекцията и живото тегло на самото животно. Обикновено за орално приемане или приемане с инжекции, количество приблизително от 0.001 до 10 mg/ kg живо тегло, дадено като единична доза или разделено на дози за време от 1 до 5 дни ще бъде задоловително, но разбира се може да има случаи, в които да се налагат по-високи или по-малки дозировки, които случаи също така влизат в обсега на действие на представеното изобретение. За орално приемане или приемане чрез инжекции по-предпочетеното количество е от около 0,02 до 2 mg/kg живо тегло, дадено като единична доза или разделено на дози за време от 1 до 5 дни.

Като алтернатива съединенията могат да бъдат приети заедно с фуража и за тази цел може да се направи концентрирана добавка или предварителна смес, която след това да се смеси с нормалното количество фураж.

При използването като инсектициди или за борба срещу селскостопанските вредители съединенията се нанасят под формата на спрейове, прахове, емулсии и други съгласно стандартната селскостопанска практика.

Така, както е използван по-горе, и в приложение патентни претенции терминът “среда на инертен разтворител” означава всеки разтворител, който не влиза във взаимодействие с изходните материали, реагенти, междинни съединения или продукт и, така че да повлияе отрицателно върху добива от желания продукт. Терминът “реакционен инертен газ” означава всеки газ, който не влиза във взаимодействие с изходните материали, реагент, междинни съединения или продукти, така че да повлияе отрицателно върху добива от желания продукт.

Така, както е използван по-горе, и в приложените патентни претенции, терминът “арил” означава фенил или фенил, евентуално заместен с един до три заместителя (Cj-Сралкил, (С,-С₄) алкокси или халоген.

Така, както е използван по-горе, и в приложените патентни претенции, терминът “арилокси” означава фенокси или фенокси, евен туално заместен с елин ло три заместителя (CjС₄)алкил, (С_|-С₄)алкокси или халоген.

Изобретението е пояснено с описаните по-нататък примери, които не го ограничават.

Примери за изпълнение на изобретението

Пример 1. Съединение с формула III, в която R_] е феноксиацетил и R₂ е водород.

Разтвор на 20 g от съединението с формула II в 400 ml метиленхлорид и 10 ml безводен пиридин пол азот се охлажда до -78°С и в продължение на 10 min се прибавя на капки 15,1 ml феноксиацетилхлорид. Реакционната смес се задържа при 7О^:С ло 78°С в продължение на 1,5 h и след това се добавя 250 ml наситен разтвор на натриев бикарбонат. Сместа се разбърква в продължение на 1,5 h, ограниченият слой се отделя, реекстрахира се с 250 ml наситен разтвор на натриев бикарбонат и се суши върху безводен MgSO₄. След това разтворителят се отстранява под вакуум, за да се получат 25,7 g от продукта от заглавието с 97 % чистота под формата на белезникаво твърдо вещество (96% добив). Времето на задържане при HPLC (високоефективна-течна хроматография) е 7,9 min (Ultrasphere ODS 5 цт 25 cm χ 4,6 mm (Beckman); метанолгацетонитрил:вода 559:383:58; 1,5 ml/min; УВ 245 nm).

Пример 2. Съединението с формула III, в която R_; е феноксиапетил и R2 е р-толилокситиокарбонил.

Разтвор на 10 g от съединението от примера 1 в 100 ml то.ту ен и 30 ml безводен пиридин под азот се нагрява до 100°С и в продължение на 5 min се прибавя 7,7 ml 0-р-толилхлоротионоформиат. Сместа се задържа при температура 100 ± 5°С в продължение на 2 h за приключване на реакцията, охлажда се до около 50°С и разтворителите се отстраняват под вакуум, като се получава на кафяв остатък. Той се разтваря в 120 ml толуен, разтворът се екстрахира с 120 ml вода и двукратно с 100 ml наситен разтвор на натриев бикарбонат. Отделеният органичен слой се кондензира до около 80 ml, филтрува се и се хроматографира, като се използва система Prep-500 (Waters Associates), снабдена с две касети силикагел. Елюентът е хексан:етилацетат 75:25. Фракциите, съдържащи продукта, се събират и разтворителят се отстранява под вакуум за получаването на 9,8 g продукт с чистота 95,7% във вид на жълто-кафяво твърдо вещество (83,2% добив). Време на задържане при HPLC е 15,2 min (Ultrasphere ODS 5 μπι, 25 cm χ 4,6 mm (Beckman); метанол:ацтонитрил:вода 559:383:

58; 1,5 ml/min; YB 245 nm).

Пример 3. 5,4-0-дифеноксиацетил-дорамектин (съединение с формула IV, в която R е феноксиацетил)

Към разтвор на 8,5 g от съединението от заглавието на примера 2 в 90 ml 2-метоксиетилетер се прибавя 4,5 g калциев карбонат. След това сместа се нагрява до 156 -158°С при интензивно разбъркване и непрекъснато продухване с поток азот. След 24 h при 156 - 158°С анализът на сместа показва присъствието на 6,68 g продукт (90% добив). След филтруване на сместа разтворителят се изпарява под вакуум за получаването на продукта във вид на жълта смолиста маса. Времето на задържане при HPLC е 10,4 (Ultrasphere ODS 5 цт, 25 cm χ 4,6 тт (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 559:383:58; 1,5 ml/min; YB 245 nm).

Пример 4. 5,4-0-дифеноксиацетил-дорамектин (съединение с формула IV, в която R₍е феноксиацетил)

Към разтвор на 1 g от съединението от заглавието на пример 2 в 20 ml 2-етоксиетилетер се прибавя 500 mg калциев карбонат. След това сместа се нагрява до 185®С при интензивно разбъркване и непрекъснато продухване с поток азот. След 5 h при 185°С сместа се температура до стайна температура и се филтрира. HPLC-анализът на разтвора Ultrasphere ODS 5 цт, 25 cm χ 4,6 тт (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 559:383:58; 1,5 ml/min; YB 245 nm) показва присъствието на 796 mg продукт (91%).

Пример 5. Дорамектин (съединение с формула I)

Разтвор на 500 mg от съединението от заглавието на пример 3 в 1 ml 2-метоксиетилетер и 3,5 ml метанол се охлажда до -35°С и се прибавя на капки в продължение на 1 min 2,1 ml 2М метанолов разтвор на КОН. Сместа се поддържа при -35°С при интензивно разбъркване в продължение на 1 час за завършване на реакцията и след това се прибавя 252 mg ледена оцетна киселина, разтворена в 0,5 ml метанол. Охлаждането се прекъсва и се прибавя 2,2 ml вода на капки в продължение на 1 h, при което започва кристализация. След разбъркване при стайна температура в продължение на 1 h кристалите се събират с филтруване, промиват се две порции по 0,5 ml метанол:вода 7:3 и се сушат във вакуумна сушилня. Прекристаризацията из метанол/вода дава 272 mg продукт с чистота 93,8% (70,6% добив). Времето на задържане при HPLC е 6,5 min (Ultrasphere ODS 5 цт, 25 cm χ 4,6 mm (Beckman); метанол: ацетонитрил:вода 860:51:89; 1,5 ml/min; У В 245 nm).

Пример 6. Дорамектин (съединение с формула I)

Към разтвор на 6,6 g (?) от съединението от пример 3 в 75 ml метанол, охладен до 15°С се прибавя 75 ml наситен разтвор на амоняк в метанол. Сместа се задържа при -15°С в продължение на 5,5 h за завършване на реакцията и след това се продухва с азот в продължение на 30 min. Летливите съставки се отделят под вакуум, полученото светложълто масло се разтваря в 45 ml метанол и разтворът се избистрая с филтруване. Към този разтвор се прибавя на капки 5 ml вода, при което започва кристализация. Сместа се разбърква при стайна температура в продължение на 2 h, след което в продължение на 2,5 h се прибавя 6,3 ml вода. След допълнително разбъркване в продължение на 1,5 h твърдата фаза се събира с филтруване и се примива двукратно с по 2,5 ml метанол:вода (7:3). След сушене във вакуумна сушилня при стайна температура в продължение на 24 h, се получава 3,75 g продукт с чистота 87,7% (добив 64%).

Пример 7. Съединението с формула III в която R, е ацетил и R₂ е водород

Към разтвор на 20 g от съединението с формула II в 200 ml метиленхлорид се прибавя под азот 28,6 g триетиламин и 1,06 g 4диметиламинопиридин. Разтворът се охлажда от -5_flC до 0°С и в продължение на 5 min се прибавя на малки порции 14,5 g ацетанхидрид. Сместа се поддържа при 0°С в продължение на 20 min за завършване на реакцията и след това са закалява при 0°С с 200 ml наситен разтвор на натриев бикарбонат. Органичният слой се реекстрахира двукратно с наситен разтвор на натриев бикарбонат, суши се (MgSO₄) и разтворителят се отстранява под вакуум за получаването на 22,2 g продукт с чистота 95 % във вид на бяла твърда маса (96,7% добив). Времето на задържане при HPLC е 6,6 min (Ultrasphere ODS 5 цт, 25 cm χ 4,6 mm (Beckman): метанол:ацетонитрил:вода 902:36: 62; 1,0 ml/min; YB 245 nm).

Пример 8. Съединението с формула III в която R, е ацетил и R₂ е водород

Към суспензия на 5 g от съединението с формула II в 100 ml толуол се прибавят под азот 7,24 g триетиламин и 266 mg 4-диметиламинопиридин. Сместа се охлажда до -15°С и се прибавя на порции 3,58 g ацетанхидрид в продължение на 5 min. Сместа се разбърква при 10°С до -150°С в продължение на 30 min до завършване на реакцията, закалява се с 50 ml наситен воден разтвор на натриев бикарбонат и се разбърква при стайната температура в продължение на 1 h. Органичният слой се реекстрахира двукратно с по 50 ml наситен воден разтвор на натриев бикарбонат и се суши чрез частично дестилиране на разтворителя с апарат на Dean-Stark. Разтворът се анализира е HPLC (Ultrasphere ODS 5 цт, 25 cm х 4,6 тт (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 902:36: 62; 1,0 ml/min; YB 245 nm), при което се установява наличието на 5,27 g продукт (96,5% добив).

Примера 9. Съединението с формула III, в която R1 е ацетил и R2 е Р-толилокситиокарбонил

Към разтвор на 20 g от съединението от заглавието на пример 7 в 200 ml етиалцетат се прибавят под азот 60 ml безводен пиридин и след това от 22,2 0-р-толилхлоротионоформиат, при което се получава жълта утайка. Сместа се нагрява под обратен хладник с инетнизво разбъркване в продължение на 2 h до завършване на реакцията и след това се охлажда до стайна температура. Летливите съставки се отстраняват под вакуум, остатъкът се разпределя между 150 ml етилацетат и 150 ml вода и органичният слой се екстрахира двукратно с наситен воден разтвор на натриев бикарбонат и един път с вода. Етилацетатният слой се суши (MgSO₄) и разтворителят се отстранява под вакуум. Остатъкът се разтваря в 25 ml етилацетат и 5 ml метиленхлорид, разтвор се избистря чрез филтруване и се хроматографира, като се използва система Prep-500 (Waters Associates), снабдена с две силикагелови касети. Фракциите, съдържащи продукта ,се събират и разтворителят се отстранява под вакуум аз получаването на 19 g (82,6% добив) продукт като светложълта твърда маса. Времето на задържане при HPLC е 17,1 min (Uitrasphere ODS 5 pm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 902:36:62; 1,0 ml/min; YB 245 nm).

Пример 10. 5,4-0-диацетил-дорамектин (съединение c формула IV, в която R, е ацетил)

Суспензия на 9,5 g калциев карбонат се нагрява до 156-158°С при непрекъснато продухване с поток азот. Към тази смес се прибавят 18,7 g от съединението от пример 9. Нагряване, разбъркване и продухване с азот се извършва в продължение на 25 h. След охлаждане до 50°С сместа се филтрува и разтворителят се отстранява под вакуум. Остатъкът се разтваря в 55 ml метиленхлорид, прибавят се 25 ml етилацетат и 70 ml хексан, разтворът се филтрува и хроматографира, като се използва система Prep-500 (Waters Associates), снабдена с две силикагелови касети. Елюентьт е хексан: етилацетат:метиленхлорид (70:25:5). Фракциите, съдържащи продукта, се събират и разтворителят се отстранява под вакуум за получаването на 13,7 g продукт с чистота 87% като жълто твърдо вещество (74,8% добив). Времето на задържане при HPLC е 11,1 min (Ultrasphere ODS 5 pm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 902:36: 62; 1,0 ml/min; YB 245 nm).

Пример 11. 5,4-0-диацетил-дорамектин (съединение c формула (IV), в която R, е ацетил)

Към разтвор на съединението от заглавието на пример 9 в 25 Ml 2-етоксиетилов етер се прибавя 250 mg калциев карбонат. След това сместа се нагрява до 183-185°С при инетнзивно разбъркване и непрекъснато продухване с поток азот. След 1,5 h при 183-185°С анализът на сместа показва наличието на 364,4 mg продукт (84,7% добив).

Пример 12. Дорамектин (съединение с формула I) към разтвор на 7,3 g от съединението от пример 10 в 145 ml безводен тетрахидрохуран, охладен до -72°С, се прибавя под азотна атмосфера на капки 59,5 ml 1,0М разтвор на литиев триетилборхидрид в тетрахидрофуран в продължение на 45 min. Реакционната смес се разбърква при -72°С до -70°С в продължение на 1 h и след това се темперира бавно до стайна температура за завършване на реакцията. След това сместа се закалява с 75 ml вода и 75 метиленхлорид и се разбърква още 1 h. Слоевете се разделят, водният слой се екстрахира с 75 ml метиленхлорид и събраните органични слоеве се промиват двукратно с 75 ml наситен воден разтвор на натриев бикарбонат. Разтворителите се изпаряват под вакуум, остатъкът се разтваря в 54 ml метанол и разтворът се избистря чрез филтруване. Към този разтвор се прибавя в продължение на 20 min и на капки 6,9 ml вода, при което започва кристализация. Сместа се разбърква при стайна температура в продължение на 15 min, след което се прибавя 6,2 ml вода в продължение на 30 min и на капки. Сместа се разбърква 18 h, твърдата фаза се събира с филтруване, промива се двукратно с по 2 ml смес метанол.вода (75:25) и се суши във вакуумна сушилня за получаването на 4,27 g от продукта с чистота 89,5% (57,3% добив).

Пример 13. Влияние на продухването с азот върху реакцията на термично елиминиране

Към разтвор на 5,3 g от пример 2 в 55 ml 2метоксиетилов етер се прибавя 2,5 g калциев карбонат. След това сместа се нагрява до 157°С при интензивно разбъркване, като се продухва непрекъснато азот през газова тръбичка. След 30 h при температура 154-157°С сместа се оставя да се темпарира до стайна температура, филтрува се и се анализира с HPLC (Ultrasphere ОDS 5gm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 559:383:58; 1,5 ml/min; YB 245 nm). Анализът показва наличието на 3,93 g 5,4-0дифеноксиацетил-дорамектин (84,8% добив).

Примерът се повтаря при същите условия, вкл. с използването на същото количество от съединението от пример 2, но без продухване с азот. Добивът от продукта в този случай е 47,5%, с което се доказва благоприятният ефект от продухването с азот.

Claims

Патентни претенции

в която R, е (С₂-С₅) алканоил или арилоксиацетил и R₂ е водород или арилокситиокарбонил.
2. Съединение съгласно претенция 1, в което R, е (С₂-С₅) алканоил, феноксиацетил или (С,-С₄) алкилфеноксиацетил и R₂ е водород или (С₁-С₄)алкил-фенокситиокарбонил.
3. Съединение съгласно претенция 2, в която R₁ е С₆Н₅ОСН₂С(=0)-.
4. Съединение съгласно претенция 3, в което R₂ е водород.
5. Съединение съгласно претенция 3, в което R₂ е p-CH₃-C₆H₅OC(=S)-.
6. Съединение съгласно претенция 2, в което R] е СН₃С(=0)-.
7. Съединение съгласно претенция 6, в което R₂е водород.
8. Съединение съгласно претенция 6,в което R₂ е p-CH₃-C₆H₅OC(=S)-.
9. Съединение с формула

в която R_f е (С₂-С₅) алканоил или арилоксиацетил.
10. Съединение съгласно претенция 9, в което R, е (С₂-С₅) алканоил, феноксиацетил или (Cj-C₄) алкилфеноксиацетил.
11. Съединение съгласно претенция 10, в което R, е СН₃С(=0)-.
12. Съединение съгласно претенция 10,в което R, е С₆Н₅ОСН₂С(=0)-.
13. Метод за получаване на съединение с формула

характеризиращ се с това, че включва следващите последователни етапи:

а) взаимодействие на съединение са формула в която R, е арилоксиацетил и R₂ е водород;

б) взаимодействие на съединението с формула III, в която R е арилоксиацетил и R₂е водород, със съединение с формула R₃OC (=S)X, в която R₃ е арил и X е С1 или Вг, за да се получи съединение с обща формула III, в която R, е арилоксиацетил и R₂ е арилокситиокарбонил;

в) взаимодействие на съединението с формула III, в която R. е арилоксиацетил и R₂ е арилокситиокарбонил. в среда на инертен разтворител при температура приблизително от 150°С до 200°С в границите от 2 до около 48 h в присъствието на калциев карбонат при непрекъснато продухване с инертен спрямо реакцията газ, като се получава съединение с формула

с ацилиращ агент с формула (R₄CO)₂O или R₄COX, в която R₄ е арилоксиметил и X е С1 или Вг, за да се получи съединение с формула

в която R] е арилоксиацетил, и

г) взаимодействие на съединението с формула IV, в която R. е арилоксиацетил, с основа в алкохолна реакционна среда, за да се получи съединението с формула I.
14. Метод съгласно претенция 13, характеризиращ се с това, че реакционният инертен газ е азот.
15. Метод съгласно претенция 14, характеризиращ се с това, че основата е NH₃,KOH, Na₂CO₃, NaHCO₃ или NaOAc.
16. Метод за получаване на съединение с формула

характеризиращ се с това, че включва следващите последователни етапи:

а) взаимодействие на съединение са формула

с ацилиращ агент с формула (R₄CO)₂O или R₄COX, в която R₄ е (С₂ -С₄) алкил и X е С1 или Вг, за да се получи съединение с формула

в която R, е (С,-С₄)алканоил и R₂ е водород;

б) взаимодействие на съединението с формула III, в която R, е (С,-С₄) алканоил и R₂ е водород, със съединение с формула R₃OC(=S)X, в която R₃ е арил и X е С1 или Вг, за да се получи съединение с формула III, в която Rj е (С₁-С₄)алканоил и R₂ е арилокситиокарбонил;

в) взаимодействие на съединението с формула III, в която R₂ е (СЩСЦалканоил и R₂ е арилокситиокарбонил, в среда на инертен разтворител при температура приблизително от 150°С до 200°С в продължение на около 2 до около 48 h в присъствието на калциев карбонат при непрекъснато подухване на инертен газ за получаване на съединение с формула

в която R, е (СЦ-СЦалканоил, и

г) взаимодействие на съединението с формула IV, в която R, е (Cj-C₄) алканоил, с литиево-алуминиев хидрид, натриев цианоборхидрид или литиев триетилборхидрид в среда на инертен разтворител, за да се получи съединението с формула I.
17. Метод съгласно претенция 16, характеризиращ се с това, че инертният газ е азот.
18. Метод съгласно претенция 17, характеризиращ се с това, че включва взаимодействие на съединението с формула IV, в която R_]е (С₁-С₄)алканоил, с литиев триетилборхидрид.
19. Метод съгласно претенция 18, характеризиращ се с това, че включва смесване на съединението с формула IV, в която R, е (С₁-С₄)алканоил, с литиев триетилборхидрид при температура от -78°С до -70°С, като температурата се поддържа от -78°С до 70°С в продължение на 15 min до 1 h, след което се довежда до стайна температура.
20. Метод за получаване на съединение с формула

в която R, е (С₂-С₅)алканоил или арилоксиацетил и R₂ е арилокситиокарбонил, в среда на инертен разтворител при температура приблизително от 150°С до 200°С в про5 дължение на 2 до около 48 h в присъствието на калциев карбонат, при непрекъснато продухване с инертен спрямо реакцията газ.
21. Метод съгласно претенция 20, характеризиращ се с това, че инертният газ е

10 азот.
22. Метод за лечение на бозайници, страдащи от паразитно заболяване или заболявания, характеризиращ се с това, че включва прилагане на противопаразитно ефективно ко-

15 личество от съединение съгласно претенция 1.
23. Метод за лечение на бозайници, страдащи от паразитно заболяване или заболявания, характеризиращ се с това, че включва прилагане на противопаразитно ефективно ко-

20 личество от съединение съгласно претенция 9.

в която R, е(С₂-С₅)-алканоил или арилоксиацетил, характеризиращ се с това, че включва взаимодействие на съединение с формула