BG97281A

BG97281A - Кристални хормони на растежа и метод за производството им

Info

Publication number: BG97281A
Application number: BG97281A
Authority: BG
Inventors: Flemming Junker; Claus Theisen
Original assignee: Novo Nordisk A/S
Priority date: 1990-07-13
Filing date: 1993-01-12
Publication date: 1994-03-24
Also published as: ZA915446B; ATE110745T1; EP0540582A1; PT98297A; JP2524446B2; HU210323B; IE67054B1; RU2108341C1; EP0540582B1; NZ238904A; IE912444A1; CA2086087C; BG61267B1; HU9300067D0; ES2060399T3; HUT64086A; DK0540582T3; US6117984A; JPH05507497A; PT98297B

Abstract

1. Метод за производство на катионни кристали на РХ или негови деривати, характеризиращ се с това, че към разтвор от РХ или негови деривати се долавят катиони от органичен или неорганичен произход и органични разтворители или смес от органични разтворители при рН между 5,0 и 6,8, кристалите израстват при температура приблизително от 0 до 300С, след които посочените кристални катиони се изолират.19 претенции

Description

__>г .Настоящото изобретение се отнася за метод на производство на·‘кристални хормони на растежа при наличието на натисни, новй кристални хормони на растежа и фармацефтични препарати съдържащи такива'ноци кристали.

.ί:'···'у'Данна за изобретението Хормоните на растежа при хора и домашни животни са протеини, изградени приблизително от 191 аминокиселини, синтезирани И-секретирани от предния дял на хипофизата. Хормонът на растежа е ключов хормон, отговорен не само за соматичния растеж, но също и за регулиране на метаболизма на белтъци, въглехидрати и мазнини.

През последните 40 години, се отдава голямо значение иа разкриването! '.на биохимичната функция на хормоните на растежа. Причината за този интерес в молекулярната функция на горния протеин.почива на, търговските интереси на ветеринарните и медицински среди. Генът на расежния хормон /РХ/ е клониран, човешкия растежен хормон /чРХ/ и Ме£- чРХ обикновено се произ.веждат биосиятетичнс чрез употреба на култури от бактерия и клетка на бозайник.

фармацевтичните препарати на ХР' са нестабилни. Разпадни проi '· дукти. такива като сулфоксидни -продукти и димерни или полимерни форми са произведени-! особено в разтвори на ХР. Ето защо, ‘ днес ХР е лиофилизиран и, съхраняван в лиофилизврана’форма при 4° докато бъде създаден отново от.пациента преди започване на употребата. . ..

Предпочита се отново създадените препарати да се съхраняват при 4°С, за да се намали’разграждането в разтвора. Обаче, извест но разграждане са появява..по време на такова съхранение, кое· то.може.-да продължи юколо 14 дни. Ето защо в производството има нужда от повече стабил ни препарати на РХ.

Предимство би могло да бъде предотвратяване на лиофилица- -циятащзри производство на препарати с ХР. Лиофилицацията е о/г, -мащ. време и скър процес и често ограничаващо процедурата по/щ, .ради-.обема на сухото за?лръзяване.

' -ίΛ^J ί ' . ¹ \ , ' _: ^v' ·щф Настоящото изобрешение се основава на изненадващото приз-наваце, че гореспоменатите-необходимости са изпълнени чрез к ,етапа на кристализация в производството на ХР.

Еъпреки лесно достъпно в достатъчно количество за кристализация, ХР досега отбягва успешна кристализация. Рикрокристали или аморфни материали са докладвани от различни източни,ци: /JontS и сътр., Биотехнология /1987/ 5, 499-500; МСМпи и сътр.<Х$/Ь^ Chew , /1834/ 176, 735-745;

сътр.,списание Молекулярна биология /1989/ 208, 719-721;

и сътр., списание Биохимия /1965/ 260, 2520-8525.

Капковият метод е най- използвания метод за тази дол.

видно поради хетерогеносттз сред препаратите на растежа размера и формааа на кристалите се мени Най-големите кристали са били открити от J® М&З значително, и сътр. /1987/.

За успешните-си опити са използвали смес'от полиетилен гликол ' · б неутрално t < ,3500 и бета октил глюкозид в еехевдевенк. pH. (ЛллЬк.З&и. и ’ - ........... ’ ·<:< П <' сътр, допускат нарастване на кристалите от 0,001 до 0,005 мм' с различни форми. Никой от известните методи обаче ле е гюд0 ходящ за търговско производство на кристали на ХР поради факта, че за растежа са необходими от. няколко седмици до една годила.

’ . Говеждия хормон.на растежа е образуван за ветеринарна употреба в смес с-т двувалентни йони и -мазнини на /ЕР 34 3 696/.¹’рез добавянето наиликъм говежди или към овнешки хормон на растежа в присъствието на неопределени липидни частици са

произведени, за да създадат пролопгирано освобождаваща се формула. Растежният хоромон е разпръснат в носителя по такъв навчйн, це;да хване Гдо 4.молекули й/ за 1 молекула хормон на растежа. Разтворите са приготвени при наличието на разли ки концентарции от деаатуриращи.· раз твори /1 до 4 М от урея/ при високо pH /9,5/. Възпроизводството на този процес с чРХ показва, че. .не е възможно да .де произвеждат кристали по този начин.

.рОт'литературата е добре известно, че наличието на двуг.ален^;тни катиони но време на процеса на кристализация позволява но само отлична ориентация по време на аналица, но също подобрява физичните условия за кристализацията на инсулина / US патент N? 2174662/. . Хормона на paci ежа е повече , от три пъти по-гелам от инсулина и има съвсем различна структура. Учудващо добавянето на катиони към. разтвори съдържащи чХР допускат нарастване на_: устойчивостта, еднородни кристали на растежния хормон в голямо количество. Попа, атък, времето необходимо за формирането . иа-висококачествени кристали на.чХР е сравнително кратко, т.щ Съдържание на изобретението .

В най-широк аспект, настоящото изобретение с свързано с процес на производство на катионни кристали на ХР или деривати на ХР, включвайки следните етапи:

а; Добавяне на катиони от,-неорганично или органично естество към разтвор на ХР или деривати при. pH между 5 и 6, . б.Нарастване на кристалите при Т^с от около 0 до около ЗО°С, ' в. Изолиране на катийнните кристали чрез известни· средства.

... · ЩЛ- '· 0

В настоящия контекст, ХР се възнамерява да покрие ьзсички разновидности на ХР включвайки човешки, говежди, свински, ов-нешки, и такъв от сьомга, пастърва или тон. Дериватите на ХР възнамеряват да покрият ХР на човешки или животински видове с 'малка·, раз лик а в протеинната редица. Така няколко аминокиселинни

остатъци.могат да бъдат .премахнати или изместени от други аминокиселинни остатъци. При' това покриването е общи форми за растежния хормон и неговите деривати така добре както растежния хормон,,.с аминокиселините остатъци добавени към// и/или С-тер-мйналния край на протеина,'така както Mef-чРХ, • **ζ * _ц t ^J ‘ \

Процесът,'съгласно настоящото изобретение, за първи път пра- / 1 ‘ ~ Λ” rt виjвъзможно-производството на хичически устойчиви и еднакви ка.тйонни, кристали на ХР. Също .така настоящия процес осигурява производството и на по-големи и по-малки кристали на хормона на растежа, според необходимостта.

•pH в етап а., е за предпочитане от 5 до ?,5 , по-желатслно от 5,0 до 6,8 , още по-желателно - от 5,8 до 6,5 и най за предпочитане от 6,0 до 6,5.

?н ф-Според препочитаното: включване^а изобретението, хормонът на растежа е от човешки произход.

Катийоните могат да бъдат от органичен или неорганичен произход. Двувал.ентните катйони за да предпочитане ий^от неорганичните се.-оказва, че е подходящ за бързо ^ормиране на стабилни криста ли на ХР. Също така могат да бъдат използвани смесите па тези катийони.

Катйоните трябва да бъдат добавени,в количество осигуряващо бързо и ефективно формиране на добре оформенихкривтали. Горната граница за количеството на добавените катйони е количеството, което.причинява неспецифично утаяване на големи количества а•морфни материали. v . _от' .Ако се използва?^ подходящите концентрации с,а около 6,2 до мол£*/ / мел РХ. Обаче, ако сместа с кристализиращата реакция съдържа.буфер илидруго съединение, което е способно да свързва някои от катйоните, т.е,.‘ в комрлексна форма, по-голяма концентрация на катйоните ще е' необходима, защото някои от’последните

не са подходящи за процеса- на кристализация.

За предпочитане е да се използва в количество, което предизвиква образуването на кристали на ХР с моларно съотношение , между и ХР.от около,0,2 до .около'10, за предпочитане от око.рб.ъ. ’ ¹ Ί ,^г ί ^: .

<: ло_;0,5 до около 5 и по-желателно.от около 0,5 _Αο около 2.

В предпочитаното включване?на изобретението се добавя органичен разтворител или смес'от,органични разтворители в етап а. Органичният разтворител може да се избере от групата на късо верижни алифатни,'циклични или'ароматни алкохоли и кетони, подходящи органични разтворители са ацетон, метанол, етанол и2-нропанол. Предпочитаният.органичен· разтворител е етанол или ацетон. Концентрацията на органичния, разтворител но,е да бъде от 0,1 до 50% V/V, за предпочитане ст 0,1.до 30%, по-желателно от 0,1 _л,,о 20%, оце по-желателно - от 5 до 15% и аай-лелателпо -ит 0 до 12<

; 2 Настоящият процес/може даусе използва като бърз и ефикасен за производството на растежен хормон*' ‘ Настоящото изобретение/същоice отнася до нови катйоини кристали на ХР или на негови· деривати.

.Предпсчитанитекристали сакристалито на чРХ или кристалите на .дериватите/чРХ. Предпочитаният катйон е този на& и молар-

почитане от 0,5 до. 5 , по-желателно' от 0,5 до 2. Размерът на

жанието на разтворителя използван в процеса.

Според настояЕ.ото изобретение, кристалите на чХР и дат биологична активност еднаква с тази на стандарта на разтворения чХР в ин виво и ин винтро тестове. Новите кристали на ХР могат да, бъдат използвани/за, същата/цел ,· както търговските препарати

. . Настоящото . изобретение предвижда възможас-е!та аа нрсизводство •J на фармацевтични<препарати, които-са·по-подходящи, особи.ю за пациентите. Поради голямата стабилност на кристалите в разтвор настоящото изобретение,/например, ‘прави възможно произво/;стг>сто .на .готови за употреба фармацефтични препарати под форма те разтвор; който не е.'необходимо; да^бъде създаден отново от пациента преди употреба. / \/ .Е по-натътен аспект, изобретението.осигурява ценен инстумелт за.производство и пречистване на РХ.

. Подробно описание на изобретението

Началният материал, хормонът, на растежа, който може да бъде от какъвто и да е произход и при.желание неговите деривати в разтвор, с приспособен'към концентрация, желателно по-голяма ст около 0,1 мг/мл, по-желателно от около 4. до ®коло 7 мг/мл и най- желателно около 6-мг/мл., pH за предпочитано е от 6 до 6,3 . ' Към горепосочения разтвор'може да бъде добавен органичен разтворител. Предпочитаният органичен разтворител- е етанол, в концентрация, която може да варира между 0,1 и 20/, за предпочитане 5 и 15/ и най- за предпочитанеб и 12%.

Други разтворители, такива като ацетон,' метанол или иропанол, могат да съдат използвани самостоятелно и ли като смес или заедно с етанол. в .концентрация в границите от 1 до 50%.

Катионите- от неорганично или.органично естество или смесите се добавят към получения разтвор.

Предпочитан катйон е 2*7 'който 'обикновено се използва в концентрация от 0,5 до 10 мол/мол РХ, за предпочитане от 1,0 до 3,0 мол/молХР, по-желателно от 1,1 до 2,2 мол/молРХ и най- за предпочитане.е от.1,2 до .2,0 мол/мол РХ.

Ако се използват други катйони от неорганично естество, а че ся·, .концентрацията може да варира между 0,1 и 10 мол/мсл РХ.

Тогава кристалите нарастват за период от 1 до 120 часа, за предпочитане 5-72 часа, най-желателно - 20 - 48 часа, на температура между 0 и 30°С, .за-предпочитане от 4 до 25°С.

Кристалите могат да бъдат възстановени чрез центрофугиране ьли филтрация,/последвана от промиване и /или сухо замртзяване ,.до премахване останалите органични разтворители.

Фармац^-хични препарати на цхи кристали или на кристали в сусленсия могат да бъдат създадени чрез използване на различни избрани буфери и други фармацевтично приемливи добавки.

По-нататък изобретението е илюстрирано, но не. ограничено од? следните примери: 'ОАбДАн·:''

ФЖ Т< 0 ' - ₄ стализация. на чРХ в присъствие на мл от разтвор на чРХ произведен според-А.и

сътр,, Еиотехнология /1967/, 5, 161-164, в концентрация 6 мг/мл е инкубиран в 10 мМ фосфатен буфер /Дба^РОц/ и приспособен към рЯ 6,Г с Н3РО4.Добавя се ацетон към крайна концентрация ст 10% A7V/ И след това се добавя разтвор-на цинков ацетат към крайна концентрация 0,08 мг?Я Acgr .ЗНдО /мл ~ 1,34 усл^/юл чРХ

Гилученият разтвор се оставя при температура 15°С за 20 часа, ιΐρπ което·се оформят кристалите.

След това кристалите се възстановяват и промиват кри пъти с кристализационен буфер бец ацетон. Кристализацията сс проверява под микроскоп и размера на кристалите о до 8-12^^¼. 1а фигура 1 е показан ^отомикрограф, ^λ

Производството ,ia кристали на чРХ се определя от разтворимостта на промитите кристали в 7М уреа, последвано от йо юж обменен HPLC анализ.

....Произподетвото сс. основава :8.7 повече от 50%.

'/'-. Пример 1·се повтарй^шизключение на това, чс се използва Vet -чРХ вместо' .чРХ. Кристалите получени при този процес са /•Д®нтични по форма ,и размер на.тези, които са получпи с чРХ. Производството е по-галяло ст 50%.

приппр з . . ·

Пример 1 сс повтаря с изключение на топа, чс се пропуска добавянето на ацетон, .-/7/7. :о^:· ^1;.п..' j p’pnciзлите, на чРХ,' получени по/този начин са.много по-малки околното кристалите, получени .при пример 1, по-малки ст 2^.

. · - ^: ППт/р./грП / : . СД,.. .’’· ' '· _ хЛВ-Хлс Ъ ; : χ< · / /Пример '1 се повтаря. 'при' условия 'където ацетона е сменен с етанол и температурата по време на ίсрие .а за расте с 20°С вместо¹ 15°С. Всички'други експер; че·.;тални у ювия с· ц/епични на тези описа;κι в при .,ер 1. Чрез измеяент.е на концентрацията яа станела, оптимална!а-концентрация става 7,5% / ’,7'^т /. Производството се повишава над 60% аио създадения ._ллуид следващ първоначалната' кристализация за 16 се допълва с още 4H/V/V/ етаяол и крисФализационната температура, сс понижи ст па 10°С по. време на. .период от 16 часа. Размерът на кристалите е •между 3 до .6 с форма ..подобна на описаната в пример 1.

ПР1ЩР 57 . ./--57/. 7pf7

Определяне количеството Ди свързан в кристалите на чРХ

Примерът 1.се повтаря с .изключение на това, че е добавен етанол в концентрация 7,5% / У/V. / вместо ацетон и че кристалите се оформят за 16 часа при.20°С, след което кристалите се отделят от Създадения .^уид чрез центрофугиране в се.вре ечзат един, пат с 10 мМ-фосфатен буфер. Кристалите се разт_: чр;. т чре з повишаване нарП до. 8,0,.с Д/аОН. чРХ се измерва чрез' иояообмен HPLC или чрез УВ определяне. Концентрацията нй£и се измерва чрез атомна абсорбция . и резултатите се сравняват ч този получеии за цялата кристална.суспенсия. Съотношението към чРХ.е 1,9 молай/за 1мол чРХ. ·

ПРИМЕР 6 ' ' ' . д /.

.' . Формулиране на фармацефтичен препарат съдържащ

Кристалите нарастват,дкакто описаните в пример няват.при Т°- 4°С. Тогава кристалите се изолират чрез па свързания чРХ тиране и след това се отстраняват от ствие кристалите се подлагат на сухо се съхрацентрофусъздадения йеиешхих. флуид. D послсдзамразяване през нощта, за да се получат сухи кристали без да остане органичен разтворител. Фармацевтичната суспенсия на сухите кристали се пригот-

вя съгласно, следната формула:
чРХ- кристали··	1,3	мг/мл
ЩаН₂РО₄, 2Н_г0	3/	мг/ м л
Зи /Ас/_а ,Н₂0	3,1	мг/мл
Глицерол	1 Π η J. о , /	яг/мл
Гензилов алкохол	15,0	мг/мл
pH е ::-..глассис на. 6,2

Пример б се повтаря с изключение на това, че се пропуска

Zw/Ac/o, НрО и суспенсията. е със следната формула:

чРХ-крИЕтали дФ-!₂Р3₄ ... 2Н₂0 . Глицерол

1,3	мг/мл
3,0	мг/мл
15,0	мг/мл
15,0	мг/мл

Рензилов алкохол pH е нагласено на 6,2 ^PWEP 8 .

Кристалите се третират пс същия начин както в пример 6 и слсд ващата суспенсия се формулира така:

чРХ- кристали 1,3 мг/мл

Д4.Н₂Р0₄,2Н₂С · 2,5 мг/мл //оС! 5,7 '^ЛГ/Л'^/Л

Beнзилов алкохол·. ., .·.?; .15,0 мг.Сл ^; pH е нагласено на 6,2. '7.· 77707 9 ’ ис лите са третирани по същия начин, както в пример 6 у.

е пр. готвен следния разхвор: ·· чХР- кристали. . ..··// > . 9- ·;9;1,3 мг/мл //δΗ^ΡΟ^,^Η^Ο '··'' 2,14мг/мл tf&CI .9 ·' 99_; ^:·/:.; .7'09.· ,7.. .·_; 9,0 мг/мл pH е нагласено на 6,1. '<··;ч9'9'9,СО.о·

Тибия тест;· <'52а^

- . получените

За да се оцени биологичната активност ин виво на пря^арниасо кристали от чРХ съгласно изобретението, се извършва тибиа тест върху хигюфизектомирани плъхове. Тестът се извършва стгласно метода--описан в Европейската фармакопеа.. · . г/ва препарата ст кристали.-на' чРХ произведени съгласно при мер 1 и формулирани като препарати съгласно пример 9 / 5-7 и 59/ всеки ст държащ облизителнч определено количество, еквивалент но на < 99, се..тестува с разтворим чРХ стандартен препарат.

Получени са сл дните резултати:

'р'' 70 71·.;

Активност на препаратите Ф-7. и 5-6

Тест пре-	АКТИВНОСТ ' Ч	^: ИВд/ампула	95г4 достоверни гра-
карани	от станд	7 . ^: ,' Ο ι	ници/όί стд.
	дарта
7 . о“’ (	7 90,1'7 ' Λ	G G	67,6- 11.4,1
1 i ι . 9* 1 1 co 1 - 1 ' 1 1	103,6	9 .4,5	90,6- 110,4
Стд. чРХ	^100,0 ;' ··	“.4,4	_

A Г\г,·

1VOO

От извършения тест може да се направи заключение, чс криедалите .ia чРХ, съгласно изобретението имат еднаква оиоло-гична 'активност с разтворимия чРХстандарт и следователно боилогичяа годност еднаква с тази на обикновения разтворим чРХ. •Г^-ПРЖЕР 11 <'.''

Кристалите на чРХ израстват както описаните в пример 5. Непосредствено преди употреба ,се приготвя суспенсия чрез центрофугиране на кристалите, следва премахване на образувания ,’.луид и отново образуванена.суспенсия от кристалите в стерилен 10и/ j/aH-PO^,pH 6,2, даваща накрая концентрация от 0,16 мг чРХ/мл сусп пенсия.

Суспенсията се използва, за -да- се определи активността на препарата от кристали.на^: чРХ в опит -за на пълня се.но. Тестът co изг.ршва съгласно'метода описан ъ.. Е· у One искат а .рармакспеа, с изх.-лечение на това, че времето за дозиране е удължено на Юдни, за да се оптимизира.биологичния отговор.

. Използват се два препарата от кристали на чРХ, всеки от които съдържа еднакво количество протеин на чРХ, с това на препарат ¹.тс със. стандартен растежен хормон,·използвани за гостуване. Стандартът-се съддава-чрезсухс .замразяване на чРХ. /Активността на препарата оъ кристали на чРХ е 92,6/ от тази на стандарта. .95% достоверни граници са 79,1-126,4* от стандарта.

Ррепартът от кристали на чРХ, както бе показано, пя а биологична активност еднаква с тази’· на разтворимия чРХ стандарт.

' ПРИИЕР 12 ; - λ.· · :д · ./ ^: / .

'Стабилност на кристали от.-чРХ' съхранявани в суспенсия за 6 месеце пра 22 - 24°С. '

Кристалите са формирани както описаните в пример 1, с това изключение, че е добавен .7,5% / V/V / ацетон, вместо 1С’б.

Допуска , се - кристалите да останат в.суспенсия в обргиуг-ания .флуид за 6 месеца при 22 - 24%· гроба от ••„ристалито на чРХ

-12се '.взема чрез центрофугиране, еднократно се промива е кристализационен буфер без ацтон и се разтваря чрез повишавано на pH ДО;£,О.

Разтворените кристали·на чРХ се подлагаш на йонообмен HPI С ^: 7ΐ или

и. GPC за разлагане надезамидни и отцепващи се форми, респективно димери и.полимери. ·.. ,

Рогато данните се сравняват с тези на лиофилизирания препарат на чРХ, съхраняван при 25°С за 32 дни, площта на основния пик на чРХ··.в.образуваните кристали на чРХ е по-гиляма от лиофилизирана чРХ, съхраняван при'Сравняеми условия /виж чаблица 2/.

Т А Е Л И- Ц А ^; 2

	Образуван чРХ	Кристали
Съхранение	' 25°С	‘)С> < /0/1 у ч/ а ι^с j.
	32 дни	6 месеца
Основен пик
.при IE-HPL С /%/	71,2 '	ΩΟ О Jl, , ..j
Димер /:'/ Л - j	-77' 77	1 о -L
Полимер /// ..	^: 0,3	Г ')
Дезамидо /К/	'25,9 ' ι	ь,0
Дидезамидо Λ7	·.' 2,9	1,0
Сплит /отцепили се/ форми-	/7/ 7 7 -	-

/ . Π Α Ί' Ξ.Η ΤΙΓΉζ.ΠΖ'λΕ/Τ Ε Η И И Π

Claims

/ . Π Α Ί' Ξ.Η ΤΙΓΉζ.ΠΖ'λΕ/Τ Ε Η И И Π

А.Процес за.производство-на катйонни кристали аа РХ или ш деривати на РХ,. включващ следните етапи:

а. добавяне.:на.катйони·ст неорганичен ири органичен произход към разтвор на РХ или на негови деривати, при ρί{ ле·.,у <5 : ' •й 8, '6'·/ -/6.69/::/:6:/

6с. нарастване, яа^крисд^ите/при; температура от сксло 0 до около 30°С, и 6 б7

в. изолиране на катйо.нните кристали чрез познати средства.
2. Процес, съгласно претенция' 1,при който ρΠ η етап а. е от 6 ' ’ до 7,5, за предпочитане от 5,0 до 6,8.
3.Процес, при който, съгласно претенция 1, органичният разтвори. тел и· избран.от група:съдържаща късоверижни алидат ш, циклич; дни. или' ароматни /алкохоли или кетони.

3. Процес, съгласно претенция 1, при който рЧ в етап а. е под 7.
4. Процес, съгласно претенция .1, при който рИ l етап а. е; от
5.Процес, прикойто, съгласно претенция 4, органичният разтво- •рител е етанол или ацетон.

5 и-най- за предпочитане от около .0,5 до 2,0.

22.Фармацевтични препарати, които съгласно.някои от претенции у 16. -20, ...съдържат кристали.

2d.използване на кристализационен. процес, съгласно претенции 1У 15, като пречистващ· и/или изолиращ ..стаи в производен него лаГХ.

обобщаващи новостите, творческите етапи /изобретенията/ ; индустриалното приложение .Нито'една от предшестващите ;методики включва процес за про> > Г‘ ду;· ..· ’ д - .QQ't ;.у ауизводство'на катйонни кристалй‘на РХ, включващ етапи от а, до

- съгласно настоящата- претенция 1. ’

У Освен.това катййнните кристали на човешкия РХ не са предвидени'в· наличните предшестващи'Методики.

Съдържанието на претенции 1’ - 1? представлява сбор ст изисквания на статия 33 /2/ РСТ.

Относно твррческите етапи

160, 439-495, 198? /01/ смята да представи завършенцт© пред>шестваща методика.

^'лУ'{фистализацко.йният/йроцес, /съгласно настоящото приложение, се отличава само по това, че в етап а. е добавен органичен разтворител или смес от органични разтворители.

к-ур^ази .техническа''особеност.·., позволява производството на помолени'-'кристали на Р$/ Пример 3, второто изречение: ако се пропусне ацетона, -.поучените кристали- са много по-малки, отколкокото ако ь етап а. се добави ацетон./

Съгласно страница 494 на D 1/ дясна колона, последния параграф/' ...цо- нататъшната, работа е необходимо да усъвършенства кристализацията на говежди РХ.'Възпроизводителни резултати трябва да бъдат търсени с увеличаване размерите и броят на кристалите. ../ цитат' от 0 1/.

'пр И така, Процесът, съгласно настоящотох приложение, включва етап на. изобретението.

°чРХ получен чрез споменатия процес , се явява изобретение.

В действителност, както’ е показано на таблица 2, чРХ -кристалите, получени съгласно/настоящото приложение, където съхранението в суспенсия за 6 месеца при температура 22 - 24°С , са ' ’ ‘-_ό. - ι, $8*# ¹ ,2 >' '. ' 7··.. '·'''* ’''•Д-ч&У. '' ’.'1‘1·51··7;·'Ρ'ν< '·/';';<

' по-·'стабилни' отколкото получения чрез лиофилизация чРХ-препаV—/ . ?Л’ Ш- ф ^J .' -·^г рат. ,

-И:така, съдържанието на-настоящите претенции 1-17 включ- *· · , . f ' < 1%# *т - ; ·, ^: ва.изискванията на статия..33 /3/ РСТ.

<* ' -ζ“, > ‘ \ · ·--·/.

ip - Някои .недостатъци ъ международното приложение 'Описанието трябва да бтде въведено в съответствие с новите претенции изпълнени с вашите данни от 03/06/92.

’ КОРИГИРАНИ ПРЙЙДЖ /1.Процес- за пройзводствбчна/датйснни кристали яа РХ или на деривати на РХ * включващ следните етапи:

а. кш разтвор отРХ или негови деривати се добавят кшйони от . тели

•..органичен илиНеорганичен цроизход и органични разтвори или ф смодот·органични разтворители ί при: рИ между 5,0 и 6,8 ,

б.'израстване ма кристалите при температура от около 0 до око. ( ; t / ло 30^сС, и ·. ' 'изолиране.на;; споменатите//кристални.катйони чрез известни = средства.·.. · ..’·’/ '2.Процес,' който съгласно претенция 1, има рП в етап а. от 5,8 до б, 5, за предпочитане ;от 6,0 до 5,5.

-5. Процес, при който,съгласно някоя от предшестващите претенц ции, органичен разтворител или смес от органични разторители се добавят в етап а. /

5,8 до 6,5, за предпочитане от 6,0 0,5.
'6.Процесът, при който съгласно някоя от претенциите 1-5, ор- ганичният разтворител се добавя в концентрация от около 0,1 до около 50% V/V.

67.Процес, при който •/'•съгласно претенция .6, органичният разтво//рител се добавя в. концентрация от 0,1 до 30%, за предпочитане . .от^: 0,.1 до 20%,' по- за_;предпочитане от 5 до 15Х й най- за пред/ почитане- от би до 12%.

6 4.Процес,:бпри.· който, съгласно .претенция 3, оргяшчният разтвоУ рител е избран от групата·'съдържаща'.ацетон, метанол, оюнол и Г-пропачсл. .

6. Процес, при който, съгласно.‘претенция 5, органичния разтвор Зрител.се избира от:групата съдържаща късоверижни али^атни, циклични.или ароматни алкохоли или кетони.
7. Процес, при който,'съгласно претенция· 6, органичния разтворител е подбран,,от групата съставена от ацетон, метанол, станел и 2-пр.спанол./6
.8.Процес, при който, дъгласно една от-предшестващите претенции .61 - 7, катйонът.о двувалентен.

8. Процес,?при:който, съгласно претенция 7, органи-чия разтворител е етанол или ацетон.
9.Процес, при който, съгласно, претенция 8, двувалентпият катйон ш θόι·

9. Процес, при който, съгласно една от.претенциите 5 - /, орга- ничния разтворител се добавя в концентрация от около 0/ около 50/ V/V. . 6~.
..· 10.Процес, при който, съгласно претенция 9,се добавя в концентрация под границата на .неспецифична прецвпитация на амор^чфеншаюриал^ ' 11.Процес, при който, съгласно претенция 10, iw се _(Цоба.вя в концентрацкя от 0,5 до 10'молЗ?%ол РХ.

10. Процес, при който, съгласно претенция 9, органичния разтво- рител се добавя в .концентрация от 0,1 до ЗОХ, за’предпочитане ΟΙ 0.1 ДО ΠΑ-Οδ·Γ·Ίβ-:ΠΛτττ»ΦΛί!Λ / т предпочитане от 6 до 12%.
11.Процес', при който, /съгласно претенции 1 - 10, катйоча е двувалентен

12_л Процес ;упри който./'съгласно. .претенция И, дв.у ва летния катйон е —у
.12. Процес, при който съгласно претенция 11, концентрацията на ' Ъп ^ге ст 1,0 до 3,0 мол Z-n?·мол РХ.

т131Процесу дри^: който ·, съгласно някои от предшестващите претен'' ции, расежният хормон,_?е чРХ или негови деривати.

д14.Процес, при който,.съгласно- някои от предшестващите претенЮеции, 'температуратасв етап б. е от. около 4 ,н,о ксколо 25°С.

··... '-'атйояни
13. Процес, при който, съгласно претенция 12,с^.се добавя в кон- цетрация.под границата на неслецефичната преципитация иа аморфния материал..
14. Процес, при който , съгласно претенция 13, Ии*се дзбавя в концентрация ст 0,5 дотохмолЗ^/мол РХ.
15 - 17, съдържат кристали. ;

15. 5фкй®илик кристали от чРХ/или деривати .на чРХ.

15'.Процес, при. който, съгласно претенция 14, концетрацията на

Ζ» е от 1,0 до 3,0 мол ЛюлРХ, по- за предпочитане от 1,1 _Ao 2,2 мол^щ/мол РХ и.най- за предпочитане от 1,2 _до 2,0

Я/ МОлЙ*%1ОЛ РХ. : у ' %
^?16.Кристалидв които, според претенция 15, катйонът е

16.Процес, при който, според.някоя от предшестващите претенции, растежния хормон е чРХ или.негови деривати.
17.Кристали, при' които, съгласно претенция 16, моларното стотно. 'шение между и РХ е от около 0,2 до около 10, за предпочитане

- от около :0,5 до 5 и най- за предпочитане от около 0,5 до 2,0.
18.фармацевтични препарати, които съгласно някои от претенциите

17.Процес, при които, според някоя от предшсствтците претенции, ’•'температурата ъ етап б. е от . около 4 до около 25^υ0. 1&.Катйонни кристали от. РХ или деривати на ГХ.

19. Кристалите, съгласно .претенция 17, са на чРХ илина ·;ι;γοβκ

.. деривати. .

20. Кристали, при които, .съгласно претенция 17 или 1с, катиоча . Z»,r 1

21.Кристали, при които, съгласно претенция ношение между и.РХ е от около 0,2 _Ао

19, моларното съотGicojiC/ 10, за предпочитане ст около 0,5 до
19.Използване· на . кристализ ационен- процес,'съгласно претенции 1-14, като, пречистващ и/или.’изолиращ етап в производството па РХ.