BRPI0309855B1

BRPI0309855B1 - pirazolpiridinas substituídas com carbamato, seus usos e seu processo de preparação, e medicamentos

Info

Publication number: BRPI0309855B1
Application number: BRPI0309855-9A
Authority: BR
Inventors: Cristina Alonso-Alija; Erwin Bischoff; Klaus Muenter; Johannes-Peter Stasch; Elke Stahl; Stefan Weigand; Achim Feurer
Original assignee: Adverio Pharma Gmbh
Priority date: 2002-05-08
Filing date: 2003-04-25
Publication date: 2018-10-16
Also published as: LU92419I2; EP1506193B1; HRP20041166B1; IL164958A; PT1506193E; LTPA2014018I1; AR039789A1; NL300659I2; JP2005531553A; CU23453B7; SI1506193T1; FR14C0032I2; NZ536417A; BR0309855A; MY136841A; ATE330957T1; ES2268363T3; RU2339638C2; CY2014018I2; UA78314C2

Abstract

"pirazolpiridinas substituídas com carbamato". a presente invenção refere-se a compostos que estimulam a guanilato ciclase solúvel, à preparação dos mesmos e ao uso dos mesmos como medicamentos, em particular como medicamentos para o tratamento de distúrbios cardiovasculares e/ou disfunção sexual.

Description

(54) Título: PIRAZOLPIRIDINAS SUBSTITUÍDAS COM CARBAMATO, SEUS USOS E SEU PROCESSO DE PREPARAÇÃO, E MEDICAMENTOS (51) lnt.CI.: C07D 471/04; A61K 31/506; A61P 9/02 (30) Prioridade Unionista: 08/05/2002 DE 102 20 570.1 (73) Titular(es): ADVERIO PHARMA GMBH (72) Inventor(es): CRISTINA ALONSO-ALIJA; ERWIN BISCHOFF; KLAUS MUENTER; JOHANNES PETER STASCH; ELKE STAHL; STEFAN WEIGAND; ACHIM FEURER (85) Data do Início da Fase Nacional: 08/11/2004

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Relatório Descritivo da Patente de Invenção para PIRAZOLPIRIDINAS SUBSTITUÍDAS COM CARBAMATO, SEUS USOS E SEU PROCESSO DE PREPARAÇÃO, E MEDICAMENTOS.

[001] A presente invenção se refere a compostos que estimulam a guanilato ciclase solúvel, à preparação dos mesmos e ao uso dos mesmos como medicamento, em particular como medicamento para o tratamento de distúrbios cardiovasculares e/ou disfunção sexual.

[002] Um dos mais importantes sistemas celulares de transmissão nas células de mamíferos é o monofosfato de guanosina cíclica (cGMP). Junto com óxido nítrico (NO), que é liberado do endotélio e transmite sinais hormonais e mecânicos, ele forma o sistema NO/cGMP. Guanilato ciclases catalisam a biossíntese do cGMP a partir do trifosfato de guanosina (GTP). Os representativos desta família descritos até o presente podem ser divididos de acordo com os aspectos estruturais e de acordo com o tipo de ligandos em dois grupos: as guanilato ciclases particuladas que podem ser estimuladas por peptídios natriuréticos, e as guanilato ciclases solúveis que podem ser estimuladas por NO. As guanilato ciclases solúveis consistem em duas subunidades e muito provavelmente contêm um heme por heterodímero, que faz parte do sítio regulador. Este último é de fundamental importância para o mecanismo de ativação. NO é capaz de se ligar ao átomo de ferro da heme e portanto aumentar acentuadamente a atividade da enzima. Preparações livres de heme, ao contrário, não podem ser estimuladas por NO. CO também é capaz de se ligar ao átomo de ferro central da heme, mas a estimulação por CO é nitidamente menor que a estimulação por NO.

[003] Através da produção de cGMP e da regulação de fosfodiesterases, canais de íon e cinases protéicas resultante dessa produção, a guanilato ciclase desempenha um papel crucial em vários processos fisiológicos, em particular no relaxamento e na proliferação de células

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2/38 do músculo liso, na agregação e adesão plaquetária e na transmissão de sinais neuronais, e em distúrbios causados por um prejuízo dos processos acima mencionados. Em condições patofisiológicas, o sistema NO/cGMP pode ser suprimido, o que pode levar por exemplo à pressão sangüínea alta, ativação plaquetária, proliferação celular aumentada, disfunção endotelial, aterosclerose, angina do peito, insuficiência cardíaca, trombose, acidente vascular cerebral, disfunção sexual e/ou infarto do miocárdio.

[004] Uma possível maneira de tratar tais distúrbios que é independente do NO e visa influenciar a via de sinal do cGMP nos organismos é uma abordagem promissora por causa da alta eficácia e poucos efeitos colaterais esperados.

[005] Os compostos, tais como nitratos orgânicos, cujo efeito baseia-se em NO são até o momento usados exclusivamente para a estimulação terapêutica de guanilato ciclase solúvel. NO é produzido por bioconversão e ativa a guanilato ciclase solúvel ligando-se ao átomo de ferro central da heme. Além dos efeitos colaterais, o desenvolvimento de tolerância é uma das principais desvantagens deste modo de tratamento.

[006] Algumas substâncias que estimulam diretamente a guanilato ciclase, isto é, sem liberação prévia de NO, foram descritas nos últimos anos, tais como, por exemplo, 3-(5'-hidroximetil-2'-furil)-1benzilindazol (YC-1, Wu et al., Blood 84 (1994), 4226; Mülsch et al., Brit. J. Pharmacol. 120 (1997), 681), ácidos graxos (Goldberg et al., J. Biol. Chem. 252 (1977), 1279), hexafluorfosfato de difeniliodônio (Pettibone et al., Eur. J. Pharmacol. 116 (1985), 307), isoliquiritigenina (Yu et al., Brit. J. Pharmacol. 114 (1995), 1587) e vários derivados de pirazol substituído (WO 98/16223).

[007] Além disso, as publicações WO 98/16507, WO 98/23619, WO 00/06567, WO 00/06568, WO 00/06569, WO 00/21954, WO

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02/42299, WO 02/42300, WO 02/42301, WO 02/42302, WO 02/092569 e WO 03/004503 descrevem derivados de pirazolpiridina como estimuladores da guanilato ciclase solúvel. Também estão descritas nessas publicações, entre outras, pirazolpiridinas com um resíduo pirimidina na posição 3. Compostos deste tipo têm uma atividade in vitro muito alta em relação à estimulação da guanilato ciclase solúvel. No entanto, acontece que esses compostos têm desvantagens em relação as suas propriedades in vivo, tais como, por exemplo, seu comportamento no fígado, seu comportamento farmacocinético, sua relação dose-resposta em relação a sua via metabólica.

[008] Constituiu portanto o objetivo da presente invenção oferecer outros derivados de pirazolpiridina que agem como estimuladores da guanilato ciclase solúvel mas não apresentam as desvantagens detalhadas acima dos compostos da técnica anterior.

[009] Este objetivo foi atingido pelos compostos de acordo com 1 da invenção. Esta nova classe de derivados de pirazolpiridina distingue-se por ter na posição 3 um resíduo pirimidina que tem um padrão de substituição específico, a saber, um resíduo carbamato na posição 5 do anel pirimidina e um grupo amino na posição 4 do anel pirimidina. [0010] A presente invenção se refere especificamente a compostos da fórmula (I)

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4/38 [0011] onde [0012] R1 é -NR3C(=O)OR4, [0013] R2 é hidrogênio ou NH2, [0014] R3 é hidrogênio ou (C1 - C4)-alquila, [0015] R4 é (C1 - C6)-alquila, [0016] e sais, isômeros e hidratos do mesmo.

[0017] Dá-se preferência aos compostos da fórmula (I) onde [0018] R1 é -NR3C(=O)OR4, [0019] R2 é hidrogênio ou NH2, [0020] R3 é (C1 - C4)-alquila, [0021] R4 é (C1 - C4)-alquila, [0022] e sais, isômeros e hidratos do mesmo.

[0023] Dá-se preferência particular aos compostos da fórmula (I) onde [0024] R1 é -NR3C(=O)OR4, [0025] R2 é NH2, [0026] R3 é metila ou etila, [0027] R4 é metila, etila ou isopropila, [0028] e sais, isômeros e hidratos do mesmo.

[0029] Dá-se preferência especial ao composto metil-4,6-diamino2-[1 -(2-flúor-benzil)-1 H-pirazolo[3,4]-piridiη-3-il]-5-pirimidiniI(metiI) carbamato do exemplo 8.

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[0030] Os compostos de acordo com a invenção da fórmula (I) também podem estar na forma de seus sais. Pode-se mencionar aqui de um modo geral sais com bases ou ácidos orgânicos ou inorgânicos. [0031] Sais fisiologicamente aceitáveis são preferidos para os propósitos da presente invenção. Sais fisiologicamente aceitáveis dos compostos de acordo com a invenção podem ser sais das substâncias de acordo com a invenção com ácidos minerais, ácidos carboxílicos ou ácidos sulfônicos. Exemplos particularmente preferidos são sais com ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido naftalinadissulfônico, ácido acético, ácido propiônico, ácido lático, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido maléico ou ácido benzóico.

[0032] Sais fisiologicamente aceitáveis também podem ser sais metálicos ou sais de amônio dos compostos de acordo com a invenção tendo um grupo carboxila livre. Exemplos particularmente preferidos são sais de sódio, potássio, magnésio ou cálcio, e sais de amônio derivados de amônia ou aminas orgânicas tais como, por exemplo, etilamina, dietilamina ou trietilamina, dietanolamina ou trietanolamina, diciPctição 870180061808, de 18/07/2018, pág. 11/56

6/38 clohexilamina, dimetilaminoetanol, arginina, lisina ou etilenodiamina. [0033] Os compostos de acordo com a invenção podem existir em formas tautoméricas. Estas são conhecidas pelo versado na técnica, e a invenção também abrange essas formas.

[0034] Os compostos de acordo com a invenção podem ainda estar na forma de seus hidratos possíveis.

[0035] Alquila significa um radical alquila linear ou ramificado tendo, via de regra, 1 a 6, de preferência 1 a 4, particularmente de preferência 1 a 3, átomos de carbono, por exemplo e de preferência metila, etila, n-propila, isopropila, terc-butila, n-pentila e n-hexila.

[0036] Halogênio para os propósitos da invenção significa flúor, cloro, bromo e iodo.

[0037] A presente invenção também se refere a um processo para preparar os compostos de acordo com a invenção da fórmula (I). Estes podem ser preparados [A] por reação de compostos da fórmula (Ia) /

HN

NH.

[0038] [0039] [0040] onde

R4 é como definido acima, com compostos da fórmula (II)

R3-X1 (II) [0041] onde

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7/38 [0042] R3 é como definido acima, e [0043] X1 é um grupo deslocável tal como, por exemplo, halogênio, de preferência iodo, ou mesilato, [0044] onde apropriado em um solvente orgânico com resfriamento para dar compostos da fórmula (I), ou [B] por reação do composto da fórmula (III)

(ΙΠ), [0045] com compostos da fórmula (IV)

O

[0046] onde [0047] R4 é como definido acima, [0048] onde apropriado em um solvente orgânico para dar compostos da fórmula (Ia), ou [C] por reação do composto da fórmula (V)

NH (V) [0049] com compostos da fórmula (VI)

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Ο

CN

+

R' (VI), [0050] onde [0051] R3 e R4 são como definidos acima, [0052] onde apropriado em um solvente orgânico com resfriamento para dar compostos da fórmula (Ib) o

>°

[0053] onde [0054] R3 e R4 são como definidos acima.

[0055] Os compostos da fórmula (II) e (IV) encontram-se comercialmente disponíveis ou são conhecidos da literatura ou podem ser preparados de maneira conhecida pelo versado na técnica.

[0056] O composto da fórmula (III) pode ser preparado da maneira mostrada no esquema reacional a seguir.

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[0057] O composto (III) é obtenível de uma síntese de dois estágios por reação do composto (V) com o composto (VII) para dar o composto (VIII) de acordo com a etapa [C] do processo e subseqüentemente hidrogenação do composto (VIII) com níquel de Raney aquoso. A hidrogenação pode ser realizada em um solvente orgânico, por exemplo dimetilformamida, de preferência à pressão elevada, por exemplo 50 a 70 bar, de preferência a 65 bar, agitando a solução reacional por várias horas, por exemplo por 22 horas, à temperatura elevada, por exemplo 40 a 80°C, de preferência 60^üC a 65°C.

[0058] O composto (VII) pode ser preparado de acordo com L. F. Cavalieri, J. F. Tanker, A. Bendich, J. Am. Chem. Soc., 1949, 533. [0059] O composto (V) pode ser preparado da maneira mostrada no esquema reacional a seguir.

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[0060] O composto (V) é obtenível por um síntese de vários estágios a partir do sal de sódio de cianopiruvato de etila, que é conhecido da literatura (Borsche e Manteuffel, Liebigs. Ann. Chem. 1934, 512, 97). Sua reação com 2-flúor-benzilhidrazina com aquecimento em uma atmosfera de gás protetor em um solvente inerte tal como dioxano resulta em 5-amino-1-(2-flúor-benzil)pirazol-3-carboxilato de etila, que pode ser ciclizado por reação com dimetilaminoacroleína em meio ácido em uma atmosfera de gás protetor e aquecimento para dar o derivado de piridina correspondente. Este derivado de piridina, 1-(2-flúorbenzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboxilato de etila, é convertido por uma seqüência de vários estágios consistindo na conversão do éster com amônia na amina correspondente, desidratação com um agente desidratante tal como anidrido trifluoracético para dar o derivado de nitrila correspondente, reação do derivado de nitrila com etóxido de sódio e finalmente reação com cloreto de amônio no composto (V). [0061] Os compostos da fórmula (VI) podem ser sintetizados por métodos conhecidos pelo versado na técnica a partir dos carbamatos correspondentes por reação com formiato de etila. Os carbamatos podem ser preparados de acordo com Q. Li, D. T. Chu, A. Claiborne, C.

S. Cooper, C. M. Lee, J. Med. Chem. 39 (1996) 3070-3088.

[0062] A reação dos compostos das fórmulas (la) e (II) para dar os compostos da fórmula (I) pode ser realizada usando-se os reagentes em quantidades equimolares em um solvente orgânico, por exemplo

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11/38 dimetilformamida ou tetrahidrofurano, de preferência na presença de 1 a 2 equivalentes, de preferência 1,1 a 1,5 equivalente, de uma base tal como, por exemplo, hidreto de sódio, ou Ν,Ν-bistrimetilsililamida sódica, de preferência à pressão atmosférica e com agitação da solução reacional por algumas horas, por exemplo por 1 hora, com resfriamento, por exemplo a uma temperatura de -10°C à temperatura ambiente, de preferência a 0°C.

[0063] A reação dos compostos das fórmulas (III) e (IV) para dar os compostos da fórmula (Ia) pode ser realizada usando-se os reagentes em quantidades equimolares em um solvente orgânico, por exemplo uma base orgânica, de preferência piridina, de preferência à pressão atmosférica e com agitação da solução reacional por várias horas, por exemplo por 12 horas, a uma temperatura de 0°C à temperatura ambiente, de preferência à temperatura ambiente.

[0064] A reação dos compostos das fórmulas (V) e (VI) para dar os compostos da fórmula (lb) ou dos compostos das fórmulas (V) e (VII) para dar os compostos da fórmula (VIII) pode ser realizada usando-se os reagentes em quantidades equimolares ou com o uso do composto da fórmula (VI) em ligeiro excesso em um solvente orgânico tal como, por exemplo, em um hidrocarboneto tal como tolueno ou xileno ou em Ν,Ν-dimetilformamida, de preferência na presença de 2 - 3 equivalentes, de preferência 2 equivalentes, de uma base tal como, por exemplo, trietilamina ou metanolato de sódio, de preferência à pressão atmosférica e com agitação da solução reacional por várias horas, por exemplo por 9 horas, à temperatura elevada, por exemplo a 80 - 160°C, de preferência a 100 - 150°C, em particular a 110°C.

[0065] Os compostos de acordo com a invenção da fórmula (I) apresentam uma gama valiosa de efeitos farmacológicos que não podiam ser previstos.

[0066] Os compostos de acordo com a invenção da fórmula (I)

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12/38 causam vasorrelaxamento e uma inibição da agregação plaquetária e levam a uma redução da pressão sangüínea e a um aumento do fluxo sangüíneo coronário. Estes efeitos são mediados pela estimulação direta da guanilato ciclase solúvel e um aumento intracelular de cGMP. Além disso, os compostos de acordo com a invenção de fórmula (I) intensificam o efeito de substâncias que aumenta o nível de cGMP, tal como, por exemplo, EDRF (fator de relaxamento derivado do endotélio), doadores de NO, protoporfirinas IX, derivados de ácido araquidônico ou de fenilhidrazina.

[0067] Eles podem portanto ser empregados em medicamentos para o tratamento de distúrbios cardiovasculares tal como, por exemplo, para o tratamento de pressão sangüínea alta e insuficiência cardíaca, angina do peito estável e instável, distúrbios vasculares periféricos e cardíacos, arritmias, para o tratamento de distúrbios tromboembólicos e isquemias tal como infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, ataques isquêmicos transitórios, distúrbios do fluxo sangüíneo periférico, prevenção de restenoses como terapias pós trombólise, angioplastias transluminais percutâneas (PTAs), angioplastias coronárias transluminais percutâneas (PTCAs), desvios, e para o tratamento de arteriosclerose, distúrbios asmáticos e doenças do sistema urogenital tais como, por exemplo, hipertrofia da próstata, disfunção erétil, disfunção sexual da mulher, osteoporose, glaucoma, hipertensão pulmonar, gastroparesia e incontinência.

[0068] Os compostos de acordo com a invenção da fórmula (I) também são adequados para controlar doenças do sistema nervoso central caracterizadas por distúrbios do sistema NO/cGMP. Eles são adequados em particular para melhorar a percepção, a concentração, o aprendizado ou a memória depois de enfraquecimentos cognitivos como aqueles que ocorrem em particular em associação com situações/doenças/síndromes tal como enfraquecimento cognitivo moderaPetição 870180061808, de 18/07/2018, pág. 18/56

13/38 do, enfraquecimento de aprendizagem e da memória associado à idade, perda de memória associada à idade, demência vascular, traumatismo craniocerebral, acidente vascular cerebral, demência após acidente vascular cerebral (demência pós acidente vascular cerebral), síndrome cerebral pós-traumática, enfraquecimentos de concentração em geral, enfraquecimentos de concentração em crianças com problemas de aprendizagem e memória, mal de Alzheimer, demência do corpo de Lewis, demência com degeneração dos lobos frontais incluindo síndrome de Pick, mal de Parkinson, paralisia nuclear progressiva, demência com degeneração corticobasal, esclerose lateral amiotrófica (ALS), mal de Huntington, esclerose múltipla, degeneração talâmica, demência de Creutzfeld-Jakob, demência de HIV, esquizofrenia com demência ou psicose de Korsakoff. Eles também são adequados para o tratamento de distúrbios do sistema nervoso central tais como estados de ansiedade, tensão e depressão, disfunções sexuais relacionadas com o SNC e distúrbios do sono, e para o controle de distúrbios patológicos da ingestão de alimentos, estimulantes e substâncias que causam dependência.

[0069] Os compostos de acordo com a invenção da fórmula (I) são ainda adequados para controlar o fluxo sangüíneo cerebral e portanto representam agentes eficazes para controlar a enxaqueca.

[0070] Os compostos de acordo com a invenção da fórmula (I) também são adequados para a profilaxia e o controle de seqüelas de infartos cerebrais tais como acidente vascular cerebral, isquemias cerebrais e traumatismo craniocerebral. Eles podem ser igualmente empregados para controlar estados de dor.

[0071] Além disso, os compostos de acordo com a invenção da fórmula (I) possuem um efeito antiinflamatório e portanto podem ser empregados como agentes antiinflamatórios.

[0072] Além disso, a presente invenção também abrange a combiPetição 870180061808, de 18/07/2018, pág. 19/56

14/38 nação de pelo menos um composto de acordo com a invenção da fórmula (I) com um ou mais nitratos orgânicos ou doadores de NO.

[0073] Nitratos orgânicos e doadores de NO para os propósitos da invenção geralmente são substâncias que apresentam seu efeito terapêutico pela liberação de NO ou de espécies de NO. Pode-se mencionar a título de exemplo e de preferência: nitroprussida de sódio, nitroglicerina, dinitrato de isosorbida, mononitrato de isosorbida, molsidomina e SIN-1.

[0074] Ademais, a presente invenção também abrange a combinação com um ou mais compostos que inibem o desdobramento do monofosfato de guanosina cíclica (cGMP). Estes são de preferência inibidores de fosfodiesterases 1, 2 e 5; nomenclatura de Beavo e Reifsnyder (1990), TiPS 11 pp. 150 a 155. Particularmente preferidos neste contexto são os inibidores de fosfodiesterase 5 (inibidores de PDE V), especialmente um dos compostos sildenafil (Viagra®, EP-A 0 463 756, WO 94/28902), vardenafil (WO 92/24433) ou tadalafil (WO 95/19978). Estes inibidores potencializam o efeito dos compostos de acordo com a invenção, e o efeito farmacológico desejado é aumentado.

INVESTIGAÇÕES BIOLÓGICAS

EFEITO VASORRELAXANTE IN VITRO [0075] Coelhos são atordoados com um golpe na nuca e são exsanguinados. A aorta é removida, o tecido aderente retirado e dividido em anéis com 1,5 mm de largura, que são individualmente colocados sob tensão em 5 ml de banhos de órgão contendo a solução de KrebsHenseleit gaseificada com carbogênio a 37°C com a seguinte composição (mM): NaCI: 119, KCI: 4,8; CaCI2 x 2 H2O: 1, MgSO4 x 7 H2O: 1,4; KH2PO4: 1,2, NaHCO3: 25, glicose: 10. A força de contração é detectada com células Statham UC2, ampliada e digitalizada via conversores A/D (DAS-1802 HC, Keithley Instruments Munich) e paralelaPetição 870180061808, de 18/07/2018, pág. 20/56

15/38 mente registrada em registradores de gráficos. Uma contração é gerada pela adição de fenilefrina ao banho cumulativamente em concentração crescente. Depois de vários ciclos de controle, a substância a ser investigada é investigada em cada corrida seguinte em dosagem crescente em cada caso, e a altura da contração é comparada com a altura da contração atingida na corrida precedente. A concentração necessária para reduzir a altura do valor de controle em 50% (IC50) é calculada a partir disso. O volume de aplicação padrão é 5 μΙ, e o teor de DMSO na solução de banho corresponde a 0,1%.

[0076] O IC50 para o composto do exemplo 1 é 670 nM, e o valor correspondente para o composto do exemplo 8 é 500 nM.

MODELO DE COELHO [0077] Coelhos chinchila machos adultos pesando 3 - 5 kg são adaptados para serem mantidos isolados por vários dias depois do parto. Eles têm livre acesso à água e podem comer por duas horas ao dia. Os animais são mantidos em um ritmo dia/noite de 10/14 horas (luz acesa a partir das 8:00 h), e a temperatura ambiente é 22 - 224°C. [0078] São usados três a seis animais em cada grupo de tratamento e eles são pesados imediatamente antes do início do teste. Para administração i.v., as substâncias são dissolvidas em transcutol (GATTEFOSSE GmbH) e diluídas na proporção de 3/7 com uma solução de cremophor a 20% (cremophor (Basf), água). Um volume de 0,5 ml/kg é injetado na veia da orelha. Substâncias solúveis em água são injetadas em solução de cloreto de sódio a 0,9%.

[0079] Para administração oral, as substâncias de teste são dissolvidas em uma mistura de glicerol:água:polietileno glicol 6:10:9,69 e administradas por gavagem em um volume de 1 ml/kg.

[0080] Em condições de repouso, o pênis do coelho fica invisível na região púbica e completamente coberto pela pele do pênis. A ereção é avaliada medindo-se o comprimento do pênis estendido com um

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16/38 paquímetro. A medição é feita 5, 10, 15, 30, 45, 60 e 120 minutos depois da administração da substância e, depois de administração oral, também depois de 3, 4, 5 e 6 horas. Para tal os animais são retirados da gaiola, segurados firmemente pela pele do pescoço e pelas patas traseiras, colocados de costas e medidos. São feitos controles correspondentes com solvente (referência para comparação: E. Bischoff, K. Schneider, Int. J. of Impotence Res. 2001, 13, 230-235; E. Bischoff, U. Niewoehner, H. Haning, M. Es Sayed, T. Schenke, K. H. Schemmer, The Journal of Urology, 2001, 165, 1316-1318; E. Bischoff, Int. J. Impotence Res. 2001, 13, 146-148).

[0081] A dose eficaz mínima do composto do exemplo 8 por administração oral é 0,03 mg/kg (com administração simultânea de 0,2 mg/kg i.v. de nitroprussida de sódio SNP).

DETERMINAÇÃO DE PARÂMETROS FARMACOCINÉTICOS DEPOIS DE ADMINISTRAÇÃO INTRAVENOSA E ORAL [0082] A substância a ser investigada é administrada aos animais (por exemplo camundongos, ratos, cães) por via intravenosa como solução, e a administração oral ocorre como solução ou suspensão por gavagem. Depois da administração da substância, sangue é colhido dos animais a intervalos fixos e é heparinizado, e em seguida o plasma é obtido por centrifugação. A substância é analiticamente quantificada no plasma por LC/MS/MS. Os valores da concentração plasmática/tempo encontrados desta maneira são usados para calcular os parâmetros farmacocinéticos por meio de um programa de computador de parâmetros farmacocinéticos válido.

[0083] Depois da administração oral de 0,3 e 1,0 mg/kg (como solução em solutol:EtOH:água 1:1:8) a ratos, o composto do exemplo 8 apresenta as seguintes concentrações plasmáticas (AUC):

ponto AUC (0,3 mg/kg) = 0,326 [kg*h/l] ponto AUC (1,0 mg/kg) = 0,548 [kg*h/l]

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INIBIÇÃO DAS ENZIMAS CITOCROMO P450 [0084] O potencial para inibição das isoenzimas P-450 que são importantes para o metabolismo é investigado automaticamente em um formato de 96 cavidades. Para isto são usados dois ensaios diferentes.

[0085] No ensaio baseado na formação de metabólitos fluorescentes, são empregadas enzimas recombinantes (por exemplo CYP1A2, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6 ou 3A4) e em geral substratos contendo estruturas parciais de fluoresceína ou cumarina. Em todos os casos são usados uma concentração de substrato e 8 concentrações do inibidor em potencial. Depois de incubação com a enzima CYP recombinante particular, usa-se uma leitora de fluorescência para medir a extensão de metabólitos fluorescentes comparada com o controle (sem inibidor), e calcula-se um IC50 [Anal. Biochem. 248, 188 (1997)].

[0086] No segundo ensaio, microssomas de fígado humano são usados como a fonte de enzimas, e os substratos seletivos para a isoforma CYP usados são fenacetina (CYP1A2), diclofenac (CYP2C9), dextromethorphan (CYP2D6) e midazolam (CYP3A4). A formação do metabólito particular é medida usando-se LC-MS/MS. Supondo que a inibição é competitiva, os valores de Ki são calculados a partir da redução na formação de metabólitos comparada com o controle (1 concentração de substrato e 3 concentrações de inibidor).

INDUÇÃO DAS ENZIMAS CITOCROMO P450 EM CULTURAS DE

CÉLULAS DE FÍGADO HUMANO [0087] Para investigar o potencial para efeitos colaterais das substâncias de acordo com a invenção em relação à indução de enzimas citocromo P450, hepatócitos humanos primários são cultivados com uma densidade celular de 2,5 x 105 células entre duas camadas de colágeno em placas de microtitulação de 24 cavidades a 37°C com 5% de CO2 por 8 dias. O meio da cultura de células é trocado diariamente.

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18/38 [0088] Depois de 48 horas em cultura, os hepatócitos são tratados com diferentes concentrações das substâncias de teste, comparando com os indutores rifampicina (RIF, 50 μΜ), omeprazol (OME, 100 μΜ) e fenobarbital (PB, 2 mM), em duas determinações por 5 dias. As concentrações finais das substâncias de teste são 0,01 -10 pg/ml.

[0089] O efeito indutivo das substâncias de teste sobre as enzimas citocromo (CYP) P450 1A2, 2B6, 2C19 e 3A4 é determinado adicionando-se os substratos 7-etoxiressorufina (CYP1A2), [14C]-Smefenitoína (CYP2B6 e 2C19) e [14C]-testosterona (CYP3A4) às culturas de células no 8° dia. O potencial indutivo das substâncias de teste é verificado a partir das atividades, medidas desta maneira, das enzimas CYP1A2, 2B6, 2C19 e 3A4 de células tratadas comparadas com células não tratadas. A Tabela 1 abaixo mostra os resultados do composto do exemplo 8 comparado com os indutores RIF, PB e OME.

TABELA 1: Efeito indutor sobre as atividades enzimáticas do fígado em culturas de hepatócitos humanos depois de incubação por 8 dias (padronizado)

	Concentração	CYP1A2	CYP2B6	CYP2C19	CYP3A4
Controle	0	1,0	1,0	1,0	1,0
RIF	50 μΜ	n.d.	5,15	15,21	9,15
PB	2000 μΜ	n.d.	14,69	4,00	6,70
OME	100 μΜ	28,57	1,54	1,61	1,45
Exemplo 8	0,01 μg/ml	0,76	1,92	1,30	1,37
	0,1 μg/ml	0,70	1,62	1,30	1,60
	1,0 μg/ml	0,90	1,85	1,12	1,51
	10 μg/ml	1,38	2,54	1,97	3,47

n.d. = não determinado.

[0090] A presente invenção se refere ainda a medicamentos que compreendem pelo menos um composto de acordo com a invenção, de preferência junto com ou mais excipientes ou veículos farmacologicaPetição 870180061808, de 18/07/2018, pág. 24/56

19/38 mente aceitáveis, e ao uso dos mesmos com as finalidades acima mencionadas.

[0091] O ingrediente ativo pode ter efeitos sistêmicos e/ou locais. Para tal, ele pode ser administrado de maneira adequada tal como, por exemplo, oral, parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, bucal, retal, transdérmica, conjuntiva, tópica ou como implante.

[0092] O ingrediente ativo pode ser administrados em formas de administração adequadas para essas vias de administração.

[0093] Adequadas para administração oral são formas de administração conhecidas que distribuem o ingrediente ativo rapidamente e/ou de maneira modificada tal como, por exemplo, comprimidos (comprimidos não revestidos e revestidos, por exemplo comprimidos providos com revestimentos entéricos ou comprimidos revestidos com películas), cápsulas, comprimidos revestidos com açúcar, grânulos, péletes, pós, emulsões, suspensões, soluções e aerosóis.

[0094] A administração parenteral pode ocorrer com exclusão de uma etapa de absorção (intravenosa, intra-arterial, intracardíaca, intraespinhal ou intralombar) ou com inclusão de uma etapa de absorção (intramuscular, subcutânea, intracutânea, percutânea ou intraperitoneal). Formas de administração adequadas para administração parenteral são, entre outras, preparações para injeção e infusão na forma de soluções, suspensões, emulsões, liofilizados e pós estéreis.

[0095] Adequadas para as outras vias de administração são, por exemplo, formas farmacêuticas para inalação (entre outros, inaladores de pó, nebulizadores), gotas/soluções nasais, sprays, comprimidos ou cápsulas para administração lingual, sublingual ou bucal, supositórios, preparações para os ouvidos e olhos, cápsulas vaginais, suspensões aquosas (loções, misturas para agitar), suspensões lipofílicas, pomadas, cremes, leite, pastas, polvilhos ou implantes tais como, por exemplo, stents.

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20/38 [0096] Os ingredientes ativos podem ser convertidos de maneira conhecida per se nas formas de administração mencionadas. Isto ocorre com o uso de excipientes farmaceuticamente aceitáveis, inertes e não-tóxicos. Estes incluem, entre outros, veículos (por exemplo celulose microcristalina), solventes (por exemplo polietileno glicóis líquidos), emulsificantes (por exemplo dodecil sulfato de sódio), dispersantes (por exemplo polivinilpirrolidona), biopolímeros sintéticos e naturais (por exemplo albumina), estabilizadores (por exemplo antioxidantes tais como ácido ascórbico), colorantes (por exemplo pigmentos inorgânicos tais como óxidos de ferro) ou aromas e/ou odores de mascaramento). O ingrediente ativo também pode, quando apropriado, estar presente na forma microencapsulada em um ou mais dos veículos indicados acima.

[0097] O composto terapeuticamente eficaz da fórmula (I) deve estar presente nas preparações farmacêuticas detalhadas acima em uma concentração de cerca de 0,1 a 99,5, de preferência de cerca de 0,5 a 95, % em peso da mistura completa.

[0098] As preparações farmacêuticas detalhadas acima também podem conter, além do composto de acordo com a invenção da fórmula (I), outros ingredientes farmacêuticos ativos.

[0099] Foi geralmente comprovado ser vantajoso, tanto na medicina humana quanto na medicina veterinária, administrar o ingrediente ativo de acordo com a invenção em quantidades totais de cerca de 0,001 a cerca de 50, de preferência 0,001 a 10, mg/kg de peso corporal a cada 24 horas, quando apropriado na forma de diversas doses individuais, para obter os resultados desejados. Uma dose individual contém o ingrediente ativo de acordo com a invenção de preferência em quantidades de cerca de 0,001 a cerca de 30, em particular de 0,001 a 3, mg/kg de peso corporal.

[00100] A presente invenção está explicada mais detalhadamente

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21/38 por meio de exemplos preferidos não-limitativos. A menos que de outra forma indicado, todos os dados quantitativos referem-se a percentagens em peso. As proporções de solventes, as proporções de diluição e os dados de concentração para soluções líquido/líquido em todos os casos referem-se ao volume.

ABREVIAÇÕES

ACN acetonitrila

BABA tampão de acetato n-butila /n-butanol/ácido acético glacial/fosfato pH 6 (50:9:25,15, fase orgânica) conc. concentrado

DCI ionização química direta (em MS)

DCM diclorometano

DIEA Ν,Ν-diisopropiletilamina

DMSO dimetil sulfóxido

DMF N,N-dimetilformamida

EA acetato de etila

El ionização de impacto de elétrons (em MS)

ESI ionização de eletroaspersão (em MS) h hora

HPLC cromatografia líquida de alto desempenho e de alta pressão LC-MS cromatografia líquida /espectroscopia de massa acopladas

LDA diisopropilamida de lítio

MCPBA ácido m-cloroperoxibenzóico

p.f. ponto de fusão

MS espectroscopia de massa

NMR espectroscopia por ressonância magnética nuclear

Rf índice de retenção (em TLC)

RP-HPLC HPLC de fase reversa RT temperatura ambiente

Rt tempo de retenção (em HPLC)

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22/38 sat. saturado

THF tetrahidrofurano

TLC cromatografia em camada fina

FASES MÓVEIS PARA CROMATOGRAFIA EM CAMADA FINA

T1 E1: tolueno/ acetato de etila (1:1)

T1 EtOH1:tolueno/etanol (1:1)

C1 E1: ciclohexano/ acetato de etila (1:1)

C1 E2: ciclohexano/ acetato de etila (1:2)

MÉTODOS DE LCMS E HPLC

MÉTODO 1 (LCMS) [00101] Instrumento: Micromass Platform LCZ, HP1100; coluna: Symmetry C18, 50 mm x 2,1 mm, 3,5 μηι; eluente A: acetonitrila + ácido fórmico a 0,1%, eluente B: água + ácido fórmico a 0,1%; gradiente: 0,0 min 10% A 4,0 min 90% A 6,0 min 90% A; forno: 40°C; taxa de fluxo: 0,5 ml/min; detecção de UV: 208 - 400 nm.

MÉTODO 2 (LCMS) [00102] Instrumento: Micromass Quattro LCZ, HP1100; coluna: Symmetry C18, 50 mm x 2,1 mm, 3,5 μηι; eluente A: acetonitrila + ácido fórmico a 0,1%, eluente B: água + ácido fórmico a 0,1%; gradiente: 0,0 min 10% A 4,0 min 90% A 6,0 min 90% A; forno: 40°C; taxa de fluxo: 0,5 ml/min; detecção de UV: 208 - 400 nm.

MÉTODO 3 (LCMS) [00103] Instrumento: Waters Alliance 2790 LC; coluna: Symmetry C18, 50 mm x 2,1 mm, 3,5 μηι; eluente A: água + ácido fórmico a 0,1%, eluente B: acetonitrila + ácido fórmico a 0,1%; gradiente: 0,0 min 5% B -> 5,0 min 10% B -> 6,0 min 10% B; temperatura: 50°C; taxa de fluxo: 1,0 ml/min; detecção de UV: 210 nm.

MÉTODO 4 (HPLC) [00104] Instrumento: HP 1100 com DAD; coluna: Kromasil RP-18, 60 mm x 2 mm, 3,5 μηι; eluente: A = 5 ml de HCIO4/I de H2O, B =

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ACN; gradiente: 0 min 2% B, 0,5 min 2% B, 4,5 min 90% B, 6,5 min 90% B; taxa de fluxo: 0,75 ml/min; temperatura: 30°C; detecção de UV 210 nm.

RP-HPLC PREPARATÓRIA [00105] Coluna: YMC gel; eluente: acetonitrila/água (gradiente); taxa de fluxo: 50 ml/min; temperatura: 25°C; detecção de UV 210 nm. COMPOSTOS DE PARTIDA

EXEMPLO 1A

5-amino-1-(2-flúor-benzil)pirazol-3-carboxilato de etila

N [00106] 111,75 g (75 ml, 0,98 mol) de ácido trifluoracético são adicionados a 100 g (0,613 mol) de sal de sódio de cianopiruvato de etila (preparado de acordo com Borsche e Manteuffel, Liebigs Ann. 1934, 512, 97) em 2,5 I de dioxano em uma atmosfera de argônio com agitação eficiente à temperatura ambiente, e a mistura é agitada por 10 minutos durante os quais a maior parte do precursor se dissolve. Em seguida são adicionados 85,93 g (0,613 mol) de 2-flúor-benzil hidrazina, e a mistura é aquecida ao refluxo por uma noite. Depois de resfriamento, os cristais de trifluoracetato de sódio que se separaram são removidos por filtração com sucção e lavados com dioxano, e a solução é ainda reagida como tal.

EXEMPLO 2A

-(2-flúor-benzil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina-3-carboxilato de etila

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[00107] A solução obtida no exemplo 1A é misturada com 61,25 ml (60,77 g, 0,613 mol) de dimetilaminoacroleína e 56,28 ml (83,88 g, 0,736 mol) de ácido trifluoracético e fervida em uma atmosfera de argônio por 3 dias. O solvente é então evaporado a vácuo, e o resíduo é adicionado a 2 I de água e extraído três vezes com 1 I de acetato de etila de cada vez. As fases orgânicas combinadas são secas com sulfato de magnésio e concentradas em um evaporador giratório. Cromatografia é realizada sobre 2,5 kg de sílica-gel, eluindo com um gradiente de tolueno/tolueno- acetato de etila = 4:1. Rendimento: 91,6 g (49,9% da teoria em dois estágios).

[00108] Ponto de fusão 85°C [00109] Rf(SiO2, Τ1 E1): 0,83

EXEMPLO 3A

-(2-flúor-benzil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina-3-carboxamida

[00110] 10,18 g (34 mmoles) do éster obtido no exemplo 2A são introduzidos em 150 ml de metanol que fora saturado com amônia a 0 Petição 870180061808, de 18/07/2018, pág. 30/56

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10°C. A mistura é agitada à temperatura ambiente por dois dias e em seguida concentrada a vácuo.

[00111] Rf(SiO2,T1 E1): 0,33 EXEMPLO 4A

3-ciano-1 -(2-flúor-benzil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina

[00112] 36,1 g (133 mmoles) de 1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4b]piridina-3-carboxamida do exemplo 3A são dissolvidos em 330 ml de THF, e 27 g (341 mmoles) de piridina são adicionados. Em seguida, no decorrer de 10 minutos, 47,76 ml (71,66 g, 341 mmoles) de anidrido trifluoracético são adicionados, durante o que a temperatura aumenta até 40°C. A mistura é agitada à temperatura ambiente por uma noite. Em seguida ela é adicionada a 1 I de água e extraída três vezes com 0,5 I de acetato de etila de cada vez. A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio e com ácido clorídrico 1 N, seca com sulfato de magnésio e concentrada em um evaporador giratório.

[00113] Rendimento: 33,7 g (100% da teoria) [00114] Ponto de fusão: 81 °C [00115] Rf (SiO2, Τ1 E1): 0,74

EXEMPLO 5A

-(2-flúor-benzil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina-3-carboximidato de metila

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[00116] 30,37 g (562 mmoles) de metóxido de sódio são dissolvidos em 1,5 I de metanol, e 36,45 g (144,5 mmoles) de 3-ciano-1-(2-flúorbenzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridina (do exemplo 4A) são adicionados. A mistura é agitada à temperatura ambiente por 2 horas e a solução resultante é empregada diretamente no estágio seguinte.

EXEMPLO 6A

-(2-flúor-benzil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina-3-carboxamidina

[00117] A solução de 1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridina-3carboximidato de metila em metanol obtida no exemplo 5A é mistura com 33,76 g (32,19 ml, 562 mmoles) de ácido acético glacial e 9,28 g (173 mmoles) de cloreto de amônio e agitada ao refluxo por uma noite. O solvente é evaporado a vácuo, o resíduo é totalmente triturado com acetona, e o sólido precipitado é removido por filtração com sucção. Ele é adicionado a 2 I de água, 31,8 g de carbonato de sódio são adicionados com agitação, a mistura é extraída três vezes com um total

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27/38 de 1 I de acetato de etila, e a fase orgânica é seca com sulfato de magnésio e evaporada a vácuo.

[00118] Rendimento: 27,5 g (76,4% da teoria em dois estágios) [00119] p.f.:86°C [00120] Rf (SiO2, T1 EtOH1): 0,08

EXEMPLO 7A

2-[1 -(2-flúor-benzil)-1 H-pi razolo[3,4-b] pi rid i η-3-i l]-5-[(E)fenildiazenil]-4,6-pirimidinadiamina

[00121] 3,87 g de metanolato de sódio e em seguida 12,2 g (71,7 mmoles) de fenilazomalononitrila (L. F. Cavalieri, J. F. Tanker, A. Bendich, J. Am. Chem. Soc., 1949, 71, 533) são adicionados a uma solução agitada de 21,92 g (71,7 mmoles) de 1-(2-flúor-benzil)-1Hpirazolo[3,4-b]piridina-3-carboxamidina em Ν,Ν-dimetilformamida do exemplo 6A. A mistura é agitada a 110°C por uma noite e deixada esfriar. O sólido precipitado é removido porfiltração com sucção e lavado com etanol. Secagem resulta em 23 g (73% da teoria) do composto alvo.

EXEMPLO 8A

Tricloridrato de 2-[1 -(2-flúor-benzil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]Pctição 870180061808, de 18/07/2018, pág. 33/56

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4,5,6-pirimidinatriamina

NH [00122] 5 g (11,38 mmoles) de 2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4b]piridin-3-il]-5-[(E)-fenildiazenil]-4,6-pirimidinadiamina do exemplo 7A são hidrogenados com 800 mg de níquel de Raney a 50% em água em 60 ml de DMF a uma pressão de 65 bar de hidrogênio a 62°C por 22 horas. O catalisador é removido por filtração com sucção através de kieselguhr, e a solução é evaporada a vácuo e agitada com ácido clorídrico 5 N. O precipitado castanho amarelado que se separa é removido por filtração com sucção e seco. São obtidos 3,1 g (59,3% da teoria) do composto alvo. A base livre é obtida por agitação com uma solução diluída de bicarbonato de sódio e extraída com acetato de etila. O sólido insolúvel nas duas fases é removido por filtração com sucção. A fase de acetato de etila contém pequenas quantidades da base livre. EXEMPLO 9A

Cianometil(metil)carbamato de metila

CH '3

CH.

'3 [00123] preparado de acordo com Q. Li, D. T. Chu, A. Claiborne, C.

S. Cooper, C. M. Lee, J. Med. Chem. 1996, 39, 3070-3088.

EXEMPLO 10A

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29/38 (E)-2-ciano-2-[(metoxicarbonil)(metil)amino]etenolato de sódio

Na

CH.

[00124] 0,46 g (0,01 mmol) de metóxido de sódio é adicionado em uma atmosfera de argônio a tetrahidrofurano (solução A). Em seguida, 1,00 g (0,01 mmol) de cianometil(metil)carbamato de metila do exemplo 9A é adicionado a 1,73 g (0,02 mmol) de formiato de etila. A solução A é lentamente adicionada em gotas a esta mistura. A mistura é agitada à temperatura ambiente por uma noite. O solvente é concentrado a vácuo em um evaporador giratório, e éter dietílico é adicionado ao resíduo. Os cristais que se separaram são removidos por filtração com sucção e secos a alto vácuo.

[00125] Rendimento: 1,05 g (76% da teoria) [00126] HPLC (método 4): Rt = 1,35 min.

[00127] 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ = 2,90 (d, 1H), 3,35 (s, 3H), 3,47 (s, 3H).

EXEMPLOS

EXEMPLO 1

4-amino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5pirimidinil(metil)carbamato de metila

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30/38 [00128] Em uma atmosfera de argônio, 0,80 g (2,61 mmoles) de 1(2-flúor-benzil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina-3-carboxamidina do exemplo 6A, 0,51 g (2,86 mmoles) de (E)-2-ciano-2[(metoxicarbonil)(metil)amino]etenolato de sódio do exemplo 10A e 0,53 g (0,73 ml, 5,23 mmoles) de trietilamina são adicionados a 50 ml de tolueno. A mistura é aquecida ao refluxo por 9 horas. Em seguida ela é seguida novamente resfriada para a temperatura ambiente e é misturada e extraída com diclorometano e água. A fase orgânica é seca com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada a vácuo em um evaporador giratório. O resíduo é misturado com 5 ml de éter dietílico e cristaliza com o mesmo. Os cristais são removidos por filtração com sucção, secos e purificados por RP-HPLC preparatória.

[00129] Rendimento: 20,2 mg (2% da teoria) [00130] LC/MS (método 2): Rt = 3,01 min [00131] MS (El): m/z = 408 (M+H)+ [00132] ¹H-RMN (300 MHz, DMSO-de): δ = 3,09 (s, 3H), 3,29 (s, 3H), 5,83 (s, 2H), 7,09-7,42 (m, 5H), 8,20 (s, 1H), 8,64 (dd, 1H), 8,94 (dd, 1H), 9,27 (br. s, 2H).

EXEMPLO 2

4,6-diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5pirimidinilcarbamato de etila

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31/38 [00133] 107,35 mg (0,31 mmol) de tricloridrato de 2-[1 -(2-flúorbenzil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-4,5,6-pirimidinatriamina do exemplo 8A são adicionados a 5 ml de piridina, e a mistura é resfriada para 0°C. 33,25 mg (0,31 mmol) de cloroformiato de etila são adicionados, e a reação é deixada agitar à temperatura ambiente por uma noite. A piridina é evaporada a vácuo em um evaporador giratório, e o resíduo é purificado por RP-HPLC preparatória.

[00134] Rendimento: 56,2 mg (43% da teoria) [00135] LC/MS (método 1): Rt = 2,66 min [00136] MS (El): m/z = 423 (M+H)+ [00137] ¹H-RMN (300 MHz, DMSO-de): δ = 1,17-1,13 (m, 3H), 3,974,14 (m, 2H), 5,80 (s, 2H), 6,14 (br. s, 4H), 7,07-7,17 (m, 2H), 7,22 (t, 1H), 7,29 7,40 (m, 2H), 7,97 (br. s, 1H), 8,60 (d, 1H), 9,07 (d, 1H). EXEMPLO 3

4,6-diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5pirimidinilcarbamato de isopropila

[00138] Preparado por analogia com exemplo 2 com 150 mg (0,43

Petição 870180061808, dc 18/07/2018, pág. 37/56

32/38 mmol) de tricloridrato de 2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin3-il]-4,5,6-pirimidinatriamina do exemplo 8A, 7,5 ml de piridina e 52,47 mg (0,43 mmol) de cloroformiato de isopropila. O resíduo é recuperado em uma mistura de diclorometano/metanol, filtrado e seco.

[00139] Rendimento: 165 mg (88% da teoria) [00140] LC/MS (método 1): Rt = 2,84 min [00141] MS (El): m/z = 437 (M+H)+ [00142] ¹H-RMN (300 MHz, DMSO-de): δ = 1,26 (d, 6H), 4,82 (quin., 1H), 5,92 (s, 2H), 7,07-7,20 (m, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,31-7,43 (m, 2H), 7,47-7,57 (m, 1H), 8,16 (br. s, 1H), 8,74 (dd, 1H), 8,98 (dd, 1H). EXEMPLO 4

4,6-diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5pirimidinilcarbamato de neopentila

[00143] Preparado por analogia com o exemplo 2 com 100 mg (0,29 mmol) de tricloridrato de 2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin3-il]-4,5,6-pirimidinatriamina do exemplo 8A, 5 ml de piridina e 43 mg (0,29 mmol) de clorocarbonato de neopentila.

[00144] Rendimento: 54 mg (41% da teoria) [00145] LC/MS (método 1): Rt = 3,10 min [00146] MS (El): m/z = 465 (M+H)+

Petição 870180061808, de 18/07/2018, pág. 38/56

33/38 [00147] ¹H-RMN (400 MHz, DMSO-de): δ = 0,95 (br. s, 9H), 3,74 (s, 2H), 5,79 (s, 2H), 6,10 (br. s, 4H), 7,08-7,17 (m, 2H), 7,22 (t, 1H), 7,297,39 (m, 2H), 8,00 (br. s, 1H), 8,60 (dd, 1H), 9,06 (dd, 1H).

EXEMPLO 5

4,6-diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5pirimidinilcarbamato de metila

[00148] 30,5 g (87,0 mmoles) de tricloridrato de 2-[1-(2-flúor-benzil)1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-4,5,6-pirimidinatriamina do exemplo 8A são dissolvidos em 30 ml de piridina. A solução resultante é resfriada para 0°C. 8,22 g (87,0 mmoles) de cloroformiato de metila são adicionados, e a mistura é agitada a 0°C por mais 2 horas. Ela é em seguida deixada esquentar até a temperatura ambiente e é agitada por mais 12 horas. Depois de concentração a vácuo, o resíduo é lavado com água e seco. Purificação posterior é efetuada por agitação em 300 ml de éter dietílico fervente. O produto precipitado é removido por filtração com sucção e seco a vácuo.

[00149] Rendimento: 32,6 g (92% da teoria) [00150] LC/MS (método 1): Rt = 2,61 min [00151] MS (El): m/z = 409 (M+H)+ [00152] ¹H-RMN (400 MHz, DMSO-de): δ = 3,61 (s, 3H), 5,80 (s, 2H), 6,19 (br. s, 4H), 7,08-7,16 (m, 2H), 7,22 (t, 1H), 7,28-7,39 (m, 2H),

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34/38

7,99 (br. s, 1H), 8,60 (dd, 1H), 9,05 (d, 1H).

EXEMPLO 6

4,6-diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5pirimidinil(metil)carbamato de etila

[00153] 54 mg (0,13 mmol) de 4,6-diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1Hpirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5-pirimidinilcarbamato de etila do exemplo 2 são adicionados a 5 ml de DMF, a mistura é resfriada para 0°C e 7,67 mg (0,19 mmol) de hidreto de sódio são adicionados. Em seguida 18,14 mg (0,13 mmol) de iodometano são adicionados em gotas, e a mistura é agitada por uma hora. A mistura é misturada com água e extraída com diclorometano. As fases orgânicas combinadas são secas com sulfato de magnésio e concentradas em um evaporador giratório. O resíduo é purificado primeiro por cromatografia de coluna (fase móvel: diclorometano/metanol = 10:1) e em seguida por RP-HPLC preparatória.

[00154] Rendimento: 32 mg (58% da teoria) [00155] LC/MS (método 2): Rt = 2,91 min [00156] MS (El): m/z = 437 (M+H)+

Petição 870180061808, de 18/07/2018, pág. 40/56

35/38 [00157] ¹H-RMN (200 MHz, DMSO-de): δ = 1,08 (t, 3H), 2,99 (s, 3H), 2,93-4,11 (m, 2H), 5,79 (s, 2H), 6,35 (br. s, 4H), 7,06-7,14 (m, 2H), 7,16-7,28 (m, 1H), 7,28-7,32 (m, 2H), 8,59 (dd, 1H), 9,06 (dd, 1H). EXEMPLO 7

4,6-diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5pirimidinil(metil)carbamato de isopropila

[00158] Preparado por analogia com o exemplo 6 com 75 mg (0,17 mmol) de isopropil-4,6-diamino-2-[1 -(2-flúor-benzil)-1 H-pirazolo[3,4b]piridin-3-il]-5-pirimidinilcarbamato do exemplo 3, 10,31 mg (0,26 mmol) de hidreto de sódio e 24,4 mg (0,17 mmol) de iodometano. O resíduo é purificado por RP-HPLC preparatória.

[00159] Rendimento: 32 mg (41% da teoria) [00160] LC/MS (método 1): Rt = 2,97 min [00161] MS (El): m/z = 451 (M+H)+ [00162] ¹H-RMN (300 MHz, DMSO-de): δ = 1,09 (d, 6H), 2,98 (s, 3H), 4,80 (quin, 1H), 5,79 (s, 2H), 6,31 (br. s, 4H), 7,05-7,16 (m, 2H), 7,22 (t, 1H), 7,28-7,40 (m, 2H), 8,59 (dd, 1H), 9,07 (dd, 1H).

EXEMPLO 8

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4,6-diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5pirimidinil(metil)carbamato de metila

CH.

'3 [00163] Preparado por analogia com o exemplo 6 com 310 mg (0,76 mmol) de metil-4,6-diamino-2-[1 -(2-flúor-benzil)-1 H-pirazolo[3,4b]piridin-3-il]-5-pirimidinilcarbamato do exemplo 5, 27,32 mg (1,14 mmol) de hidreto de sódio e 215,5 mg (1,52 mmol) de iodometano. A mistura é trabalhada por adição de água e uma solução 2 molar de hidróxido de potássio e extração com diclorometano. As fases orgânicas combinadas são secas com sulfato de magnésio e concentradas em um evaporador giratório. O resíduo é purificado por RP-HPLC preparatória.

[00164] Rendimento: 93 mg (29% da teoria).

[00165] Quantidades maiores do composto do exemplo 8 podem ser preparadas pelo método de síntese a seguir.

[00166] 20,0 g (49,0 mmoles) de 4,6-diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5-pirimidinilcarbamato de metila do exemplo 5 são dissolvidos em 257 ml de tetrahidrofurano e a mistura é resfriada para 0°C. 53,9 ml (49,0 mmoles de uma solução 1 M em tetrahidrofurano) de bis(trimetilsilil)amida de lítio são adicionados em goPctição 870180061808, de 18/07/2018, pág. 42/56

37/38 tas durante um período de 15 minutos. Depois de agitar a 0°C por 20 min, 6,95 g (53,9 mmoles) de iodometano são adicionados. Depois de uma hora a mistura é deixada esquentar até a temperatura ambiente, e a reação é interrompida pela adição de uma solução aquosa saturada de cloreto de amônio. As fases são separadas. A fase aquosa é extraída várias vezes com acetato de etila e diclorometano. As fases orgânicas combinadas são concentradas a vácuo. O resíduo obtido dessa maneira é suspendido em uma mistura de diclorometano e tetrahidrofurano (1:1). Os cristais insolúveis são removidos por filtração com sucção e recuperados em metanol. A mistura é refluxada por uma hora. Depois de resfriamento, o precipitado que se separou é removido por filtração. O sólido vermelho obtido desta maneira é suspendido em 100 ml de uma mistura de dioxano e diclorometano (1:1) e, enquanto ferve, 20 ml de metanol são adicionados até se formar uma solução límpida. Carvão ativado é adicionado e a mistura é fervida brevemente e filtrada quente por kieselguhr. A solução obtida desta maneira é evaporada até a secura. A suspensão, depois de recuperada em metanol, é agitada à temperatura ambiente por uma hora. Os cristais brancos são removidos por filtração com sucção.

[00167] Rendimento: 14,9 g (72% da teoria) [00168] LC/MS (método 3): Rt = 1,85 min [00169] MS (El): m/z = 423 (M+H)+ [00170] ¹H-RMN (200 MHz, DMSO-de): δ = 3,01 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 5,92 (s, 2H), 7,05, 7,17 (m, 2H), 7,18-7,46 (m, 3H), 7,47-7,61 (m, 2H), 7,59-7,97 (m, 2H), 8,71-8,81 (m, 1H), 8,97 (dd, 1H).

EXEMPLO 9

4,6-diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5pirimidinil(etil)carbamato de isopropila

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38/38

[00171] Preparado por analogia com o exemplo 6 com 60 mg (0,14 mmol) de 4,6-diamino-2-[1 -(2-flúor-benzil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-3il]-5-pirimidinilcarbamato de isopropila do exemplo 3, 4,95 mg (0,21 mmol) de hidreto de sódio e 21,4 mg (0,17 mmol) de iodoetano. Para completar a reação, as mesmas quantidades de hidreto de sódio e iodoetano são adicionadas mais uma vez. O resíduo é purificado por RPHPLC preparatória.

[00172] Rendimento: 43 mg (67% da teoria) [00173] LC/MS (método 1): Rt = 2,97 min [00174] MS (El): m/z = 465 (M+H)+ [00175] ¹H-RMN (200 MHz, DMSO-de): δ = 0,96-1,06 (m, 3H), 1,09 (d, 6H), 2,79-2,93 (m, 2H), 4,82 (quin., 1H), 5,80 (s, 2H), 6,25 (br. s, 4H), 7,01-7,14 (m, 2H), 7,15-7,50 (m, 3H), 8,60 (dd, 1H), 9,09 (dd, 1H).

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1/6

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Compostos, caracterizados pelo fato de que apresentam a Fórmula (I) na qual

R¹ é -NR³C(=O)OR⁴,

R² é hidrogênio ou NH2,

R³ é hidrogênio ou (Ci-C4)-alquila,

R⁴ é (Ci-C6)-alquila, e sais dos mesmos.
2. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de que:

R¹ é -NR³C(=O)OR⁴,

R² é hidrogênio ou NH2,

R³ é (Ci-C4)-alquila,

R⁴ é (Ci-C4)-alquila, e sais dos mesmos.
3. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de que:

R¹ é -NR³C(=O)OR⁴,

R² é NH_2j

R³ é metila ou etila,

R⁴ é metila, etila ou isopropila,

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2/6 e sais dos mesmos.
4. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de que apresentam a seguinte estrutura:

4.6- diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]-piridin-3il]-5-pirimidinil(metil)carbamato de metila, e, e sais do mesmo.
5. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de que apresentam a seguinte estrutura:

4.6- diamino-2-[1-(2-flúor-benzil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3il]-5-pirimidinilcarbamato de metila, e sais do mesmo.
6. Processo para preparação de compostos da Fórmula (I), como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que:

[A] compostos da Fórmula (la)

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3/6 na qual

R⁴ é como definido na reivindicação 1, são reagidos com compostos da Fórmula (II)

R³-X¹ (II) na qual

R³ é como definido na reivindicação 1, e X1 é um grupo de saída, ou [B] o composto da Fórmula (III) é reagido com compostos da Fórmula (IV)

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4/6

Ο

Jl cr OF (IV), na qual

R⁴ é como definido na reivindicação 1, ou [C] o composto da Fórmula (V) é reagido com compostos da Fórmula (VI) O CN * A.

Ό Na⁺

O N >3

R³ (VI), na qual

R³ e R⁴ são como definidos na reivindicação 1, para gerar compostos da Fórmula (Ib)

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5/6 na qual

R³ e R⁴ são como definidos na reivindicação 1.
7. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de que são para o tratamento de distúrbios.
8. Medicamento, caracterizado pelo fato de que compreende um composto da Fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, e um outro excipiente.
9. Medicamento, caracterizado pelo fato de que compreende um composto da Fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em combinação com um nitrato orgânico ou um doador de NO.
10. Medicamento, caracterizado pelo fato de que compreende um composto da Fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em combinação com um composto que inibe o desdobramento do monofosfato de guanosina cíclica (cGMP).
11. Uso dos compostos da Fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que é para produzir medicamentos para tratamento de distúrbios cardiovasculares.

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12. Uso dos compostos da Fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que é para produzir medicamentos para tratamento da hipertensão.
13. Uso dos compostos da Fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que é para produzir medicamentos para tratamento de distúrbios tromboembólicos e isquemias.
14. Uso dos compostos da Fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que é para produzir medicamentos para tratamento de disfunção sexual, especialmente da disfunção erétil e da disfunção sexual da mulher.
15. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 14, caracterizado pelo fato de que compostos da Fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, são empregados em combinação com um nitrato orgânico ou um doador de NO ou em combinação com um composto que inibe o desdobramento do monofosfato de guanosina cíclica (cGMP).

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