UA78314C2 - Карбаматзаміщені піразолопіридини - Google Patents

Abstract

Даний винахід належить до сполук формули (І) EMBED ISISServer , (I) в якій R1 означає -NR3С(О)OR4, R2 означає водень або NH2, R3 означає водень або (С1-С4)-алкіл, R4 означає (С1-С6)-алкіл, які стимулюють розчинну гуанілатциклазу, способу їх одержання та їх застосування як лікарських засобів, зокрема як лікарських засобів для лікування серцево-судинних захворювань та/або сексуальних розладів.

Description

а також їх солі, ізомери та гідрати. Ге) 4. Сполука за п. 1, яка має таку структуру: || (М метиловий естер 4,6-діаміно-2-|1-(2-фторбензил)- сова 1Н-піразоло|3,4-б|піридин-З-іл|-5- Щ ! піримідиніл(метил)карбамінової кислоти формули в ЯКІЙ

Е В" має вказане в п. 1 значення,

ІСІ або сполуку формули (М)

МН

НА ( -

Мо -М ше / хг

Й М. М дб М (М)

М о -- Е дщт

НАМ ОМА ЄН» піддають взаємодії зі сполуками формули (МІ) щ о см о7гто ве - ї Зал з 0 Ма" сн, | (М) н с. Й й з а також її солі, ізомери та гідрати. й ; 5. Сполуки формули (І) за п. 1 для лікування за- в якій хворювань. ВЗ та 2" мають вказані в п. 1 значення, 6. Спосіб одержання сполук формули (І) за п. 1, до одержання сполук формули (ІБ) який відрізняється тим, що КЕ

ІАЇ сполуки формули (Іа) (в) ве - 0 / / в) в3-- мн, -о / нм МН чих 2 /

В ШЕ (Ів) ни М ЛИ

ШО, Мо0иИ-м ле М / 2

М. ) М

М

Е в якій

Е ВАЗ та РЕ" мають вказані в п. 1 значення. в якій ! 7. Лікарський засіб, що містить щонайменше одну сполуку формули (І) за п. 1 та щонайменше одн

В" має вказане в п. 1 значення, о уку формули (І) щ дну : що Ту допоміжну речовину. вм лКНи взаємодії зі сполуками формули ( 8. Лікарський засіб за п. 7, що додатково містить в. (1), в якій 1 щонайменше один органічний нітрат або донор х має вказане в п. 1 значення та монооксиду азоту. в бо спо галоген, поин йод, 9. Лікарський засіб за п. 7 або 8, що додатково (Віа о сполуку формули (1) містить щонайменше одну сполуку, що інгібує пе- 2 2 ретворення циклічного гуанозинмонофосфату. іх 10. Застосування сполук формули (І) за п. 1 для

Ду одержання лікарських засобів для лікування сер-

М -- цево-судинних захворювань, гіпертонії, тромбоем-

ПИ (1) болічних захворювань, ішемій або сексуальних

М М розладів, зокрема порушення ерекції та жіночих сексуальних розладів. ху 11. Застосування за п. 10 в комбінації з щонайме- нше одним органічним нітратом або донором мо-

Е ж нооксиду азоту або однією сполукою, що інгібує піддають взаємодії зі сполуками формули (ІМ) перетворення циклічного гуанозинмонофосфату.

Даний винахід стосується сполук, що стиму- жання та їх застосування як лікарські засоби, зок- люють розчинну гуанілатциклазу, способу їх одер- рема, як лікарські засоби для лікування серцево-

судинних захворювань та/або сексуальних розла- РПпагтасої. 114 (1995), 1587), а також різні заміще- дів. ні похідні піразолу (М/О 98/162231І.

Однією з найважливіших клітинних медіатор- Крім того, як стимулятори розчинної гуаніла- них систем у клітинах ссавців є циклічний гуано- тциклази в заявках (МИО 98/16507, МУ0098/23619, зинмонофосфат (сСОМР). Разом із монооксидом МО 00/06567, МО 00/06568, УМО 00/06569, МО азоту (МО), який вивільняється із ендотелію та 00/21954, УМО 02/42299, МО 02/42300, МО переносить гормональні та механічні сигнали, во- 02/42301, МО 02/42302, МО 02/092596 та МО ни утворюють МО/СОМР систему. Гуанілатциклази 03/004503| описані похідні піразолопіридину. У цих каталізують біосинтез СОМР із гуанозинтрифосфа- матеріалах поряд з іншими описані також піразо- ту (СТР). Відомі до цього часу представники цього лопіридини з піримідиновим залишком у положенні сімейства як за структурними ознаками, так і за 3. Такі сполуки проявляють дуже високу активність природою лігандів можуть бути розділені на дві їп міо щодо стимуляції розчинної гуанілатциклази. групи: специфічні гуанілатциклази, які стимулю- Хоча виявилося, що властивості іп мімо цих сполук ються натрійуретичними пептидами, та розчинні мають певні недоліки, наприклад, щодо їх впливу гуанілатциклази, які стимулюються МО. Розчинні на печінку, фармакокінетичних властивостей, спів- гуанілатциклази складаються з двох підодиниць та відношень між дозою та дією або їх метаболізму. скоріше за все містять один гем на гетеродимер, Тому задача даного винаходу полягає в одер- який є частиною регуляторного центру. Він відіграє жанні інших похідних піразолопіридину, які діють ключову роль у механізмі активації. МО може бути як стимулятори розчинної гуанілатциклази, але в приєднаний до атому заліза гема і таким чином той же час не проявляють наведених вище недолі- значно підвищувати активність ферменту. На від- ків сполук з рівня техніки. міну від цього форми ферменту, які не містять гем, Ця задача вирішується за допомогою сполук не можуть бути стимульовані МО. Центральний за п. 1 формули винаходу. Цей новий клас похід- атом заліза гема може також утворювати зв'язок із них піразолопіридинів відрізняється наявністю

СО, причому стимуляція СО значно слабша, ніж піримідинового залишку в положенні 3, який має стимуляція МО. визначений склад замісників, а саме карбаматний

Завдяки утворенню СОМР та регулюванню залишок у положенні 5 піримідинового циклу, а фосфодіестераз, іонних каналів та протеїнкіназ також аміногрупу в положенні 4 піримідинового гуанілатциклаза відіграє вирішальну роль у різних циклу. фізіологічних процесах, зокрема, у розслабленні Зокрема даний винахід стосується сполук фо- та проліферації клітин гладкої мускулатури, в агре- рмули (Її) гації та адгезії тромбоцитів та в нейрональній пе- редачі сигналів, а також у захворюваннях, які за- ву Мн, сновуються на порушенні вказаних вище процесів. --

У патофізиологічних умовах МО/сОМР-система в М може бути заблокована, що може призвести, на- хи приклад, до підвищення тиску крові, активації тро- М с мбоцитів, посилення проліферації клітин, пору- / шення функціонування ендотелію, атеросклерозу, М. й стенокардії, серцевої недостатності, тромбозів, М М нападів, до сексуальних розладів та інфаркту міо- карда.

Незалежна від МО можливість лікувального впливу на такі захворювання, яка впливає на про- Е ( ходження сигналу СОМР в організмі, є багатообі- цяючою на основі її очікуваної високої ефективно- в якій сті та незначних побічних дій. Й Й | В! означає -МАЗС(-ОЮОВУ,

Для терапевтичної стимуляції розчинної гуані- В2 означає водень або МН», латциклази до цього часу були застосовані виклю- ВЗ означає водень або (С1-С4)-алкіл, чно такі сполуки, як органічні нітрати, дія яких ба- В: означає (С1-Се)-алкіл, зується на МО. Він утворюється в результаті а також їх солей, ізомерів та гідратів. біотрансформації та активує розчинну гуанілатци- Перевагу надають сполукам формули (І), в клазу шляхом впливу на центральний атом заліза яких гема. "Поряд Кк! побічними ефектами до значних В! означає -МАЗС(-ООНВІУ, недоліків такого способу лікування належить також В2 означає водень або МН», виникнення звикання. | | | ВЗ означає (С1-С4)-алкіл,

В останні роки були описані деякі речовини, які В: означає (С1-С4)-алкіл, активують розчинну гуанілатциклазу безпосеред- а також їх солям, ізомерам та гідратам. ньо, тобто без попереднього вивільнення МО; до Особливу перевагу надають сполукам форму- них належать, наприклад, 3-(5-гідроксиметил-2'- ли (Ї), в яких фурил)-1-бензиліндазол (МС-1, УМи та ін., Віоса 84 В! З 4

І ' означає -«МАЗС(-О)ОВ", (1994), 4226; Миї5сп та ін., Вії. У. Рпагтасої. 120 В означає МН» (1997), 681), жирні кислоти ІСоїдрега та ін., 9. Віої. ВЗ означає метил або етил

Спет. 252 (1977), 1279), гексафторфосфат дифе- В? означає метил, етил або ізопропіл, нілиоДОНІЮ (Решропе та Ін. Ечт. у. Рпагтасо). 116 а також їх солям, ізомерам та гідратам. (1985), 307|, ізоліквирітигенін (Ми та ін., Вгйї. 9». Найбільшу перевагу надають сполуці метил-

4,6-діаміно-2-І1-(2-фторбензил)-1Н-піразолої|3,4- в б|Іпіридин-3-іл|-5-піримідиніл(метил)карбамату З а прикладу 8: й-о

Є Н н, мо й " м

От, Ше: о и

Дн (г),

І В.

Ле МН;

НМ фреон, Е

Ж в якій о т В" має вказане вище значення,

Сн, зі сполуками формули (Ії)

Згідно з винаходом сполуки формули (І) мо- ВХ (І, жуть також існувати у формі їх солей. Загалом до них належать солі з органічними або неорганічни- в якій ми основами або кислотами. ВЗ має вказане вище значення та

В рамках даного винаходу перевагу надають Х! означає галоген, переважно йод, фізіологічно прийнятним солям. Фізіологічно при- в разі необхідності, в органічному розчиннику йнятними солями сполуки згідно з винаходом мо- при охолодженні до одержання сполук формули жуть бути солі речовин згідно з винаходом та мі- (0, неральних, карбонових або сульфонових кислот. або

Особливу перевагу надають, наприклад, солям ІВІ шляхом взаємодії сполуки формули (ІІ) хлорводневої, бромводневої, сірчаної, фосфорної, метансульфонової, етансульфонової, п- н, н. толуолсульфонової, бензолсульфонової, на- с фтпліндисульфонової, оцтової, пропіонової, моло- Н 6 чної, винної, лимонної, фумарової, малеїнової або 2 Х р, бензойної кислоти. М пт

Фізіологічно прийнятними солями можуть бути / у також солі металів або амонію та сполуки згідно з М. "- винаходом, які мають вільну карбоксильну групу. М М ШІ

Особливу перевагу надають, наприклад, солям ПН), натрію, калію, магнію або кальцію, а також солям амонію, одержаним від аміаку, або органічних амі- нів, таких як, наприклад, етиламін, ді- або триети- Е ламін, ді- або триетаноламін, дициклогексиламін, диметиламіноетанол, аргінин, лізин або етиленді- зі сполуками формули (ІМ) амін.

Сполуки згідно з винаходом можуть бути Ге) представлені у таутомерних формах. Ці форми ре 4 (м відомі фахівцю, вони також охоплені даним вина- сов ' ходом. Що

Крім того сполуки згідно з винаходом можуть в ЯКІЙ бути представлені у формі їх можливих гідратів. А" має вказане вище значення,

Алкіл означає нерозгалужений або розгалуже- в разі необхідності, в органічному розчиннику ний алкільний залишок, який, як правило, містить до одержання сполук формули (Іа), від 1 до 6, переважно від 1 до 4, особливо пере- або . важно від 1 до 3, атомів вуглецю, та переважно ЇСЇ шляхом взаємодії сполуки формули (М) означає метил, етил, н-пропіл, ізопропіл, трет.- бутил, н-пентил та н-гексил.

Галоген в рамках даного винаходу означає фтор, хлор, бром та йод.

Сполуки формули (І) згідно з винаходом мо- жуть бути одержані:

ІАЇ шляхом взаємодії сполук формули (Іа)

Мн приклад, диметилформаміді, переважно при під- нм вищеному тиску, наприклад, від 50 до 70 бар, пе-

Ше: реважно 65 бар, та шляхом перемішування реак-

Ко у р ційного розчину протягом тривалого часу, "М М наприклад, 22 годин, при підвищеній температурі, наприклад, від 40 до 80"С, переважно від 60"С до р (М 6576.

Сполуку формули (МІ) можна одержувати згі-

Е дно з. Р. Самаїегі, у. Р. Тапкег, А. Вепаїси, 9. Ат.

Спет. бос, 1949, 71, 533). зі сполуками формули (МІ) Сполука формули (МІ) може бути одержана за такої реакційною схемою:

ХХ я. о Ж ма" і

Й (му, мо і

В о и - 3 в у г. б нм а в якій "нн, о

ВЗ та 27 мають вказані вище значення, Натриевая соль кд в разі необхідності, в органічному розчиннику при нагріванні до одержання сполук формули (ІБ) в Е

ОО 00 -о ж Ин я-мМ й С, ех ух 2 д- М чн

ХХ Сполуку формули (М) одержують способом

М двоетапного синтезу із відомої з літературних / Ше джерел натрієвої солі етилового естеру ціанопіро-

М А р виноградної кислоти (Вог5спе та Мапіеинйеї,

М М ШПебрід5. Апп. Спет. 1934, 512, 97|. Шляхом її взає- (ІБ), модії з 2-фторбензилгідразином при нагріванні в атмосфері захисного газу в інертному розчиннику, такому як діоксан, одержують етиловий естер 5-

Е аміно-1-(2-фторбензил)піразол-З-карбонової /-кис- лоти, який циклізують шляхом взаємодії з димети- в якій ламіноакролеїном у кислому середовищі в атмос-

ВЗ та 2" мають вказані вище значення. фері захисного газу при нагріванні до одержання

Сполуки формули (ІЇ) та (ІМ) є комерційно дос- відповідної похідної піридину. Цю похідну піриди- тупними або можуть бути відомими фахівцю спо- ну, етиловий естер 1-(2-фторбензил)-1 нН- собами. піразоло|3,4-б|Іпіридин-З-карбонової кислоти, шля-

Сполука формули (Ії) може бути одержана за хом багатоетапної послідовності реакцій, таких як такої реакційною схемою: перетворення естеру за допомогою аміаку у відпо- відний амід, дегідратування водовідштовхуваль- - о ним засобом, таким як ангідрид трифтороцтової

Шо кислоти, до одержання відповідної похідної нітри- в Кх Сай Ї ще Е лу, взаємодія похідної нітрилу та метилату натрію її в мк го та подальшої реакції із хлоридом амонію, перет-

З ми Р Ї М й ворюють на сполуку формули (М).

А її у; ----- ду -- у Сполуки формули (МІ) можуть бути синтезова-

ОО, нм с ні відомими фахівцю методами із відповідних кар- ме й т й баматів шляхом реагування з етиловим естером

З нм, мурашиної кислоти. Карбамати можуть бути одер- т жані згідно з ГО. Гі. Спи, Т. МУ. Оапіеєї, А. СіІаірогпе, мі) п) С 5. Соорег, С М. Гее, У. Мей. Спет. 1996, 39, 3070-3088.

Сполуку формули (І) одержують способом Взаємодія сполук формули (Іа) та (Ії) до одер- двоетапного синтезу шляхом взаємодії сполуки жання сполук формули (І) може бути здійснена при формули (М) та формули (МІЇ) до одержання спо- застосуванні реагентів у еквімолярних кількостях в луки формули (МІЇ)) згідно зі способом |СІ| та шля- органічному розчиннику, такому як, наприклад, хом подальшого гідрування сполуки формули (МІЇ!) диметилформамід, переважно в присутності 1-2 та водного розчину нікелю Ренея. Гідрування мо- еквівалентів, переважно 1,5 еквівалентів основи, же бути здійснене в органічному розчиннику, на- такої як, наприклад, гідрид натрію, переважно при нормальному тиску та при перемішуванні реакцій- Сполуки формули (І) згідно з винаходом мо- ного розчину протягом кількох годин, наприклад, 1 жуть бути використані і для лікування захворювань години, при охолодженні, наприклад від -107С до центральної нервової системи, що відзначені по- кімнатної температури, переважно при 0"С. рушеннями МО/сСОМР-системи. Зокрема, вони є

Взаємодія сполук формул (ІІ) та (ІМ) до одер- придатними для покращення сприйняття, підви- жання сполук формули (Іа) може бути здійснена щення концентрації уваги, покращення здатності при застосуванні реагентів у еквімолярних кількос- до вивчення або пом'яті після розладів пізнаваль- тях в органічному розчиннику, такому як, напри- них функцій, які виникають зокрема при таких обу- клад, органічна основа, переважно піридин, пере- мовлених ситуацією та хворобою синдромах, як важно при нормальному тиску та при легке погіршення функцій, пов'язаних зі сприйнят- перемішуванні реакційного розчину протягом бага- тям ("тій содпійме ітраіпепі"), пов'язані з віком тьох годин, наприклад, протягом 12 годин, при порушення здатності до вивчення та пам'яті, пов'- температурі від 0 "С до кімнатної температури, язані з віком провали в пам'яті, судинне слабоумс- переважно при кімнатній температурі. тво, травми черепа та мозку, інсульт, слабоумство

Взаємодія сполук формул (М) та (МІ) до одер- як наслідок інсульту ("рові зігоке детепііа"), постт- жання сполук формули (ІБ) або сполук формул (М) равматичний стан, пов'язаний із травмою черепа та (МІЇ) до одержання сполук формули (МІ!) може та мозку, загальні порушення концентрації уваги, бути здійснена при застосуванні реагентів у екві- порушення концентрації уваги у дітей, що мають молярних кількостях або при застосуванні сполуки проблеми з навчанням і запам'ятовуванням, хво- формули (МІ) у незначній надлишковій кількості в роба Альцгеймера, слабоумство, обумовлене органічному розчиннику, такому як, наприклад, тільцями Леві, слабоумство з дегенерацією лобо- вуглеводень, переважно ароматичний вуглево- вої частини, включаючи синдром Піка, хворобу день, зокрема толуол або ксилол, переважно в Паркінсона, прогресуючий ядерний параліч, сла- присутності 2-3 еквівалентів, переважно 2 еквіва- боумство з кортикобазальною дегенерацією, аміо- лентів основи, такої як, наприклад, триетиламін латеральний склероз (АГ 5), хворобу Хантінгтона, або метанолат натрію, переважно при нормаль- розсіяний склероз, таламічну дегенерацію, слабо- ному тиску та при перемішуванні реакційного роз- умство Кройтцфельда-Якоба, слабоумство при чину протягом багатьох годин, наприклад, 9 годин, Віл-інфекціях, шизофренію із слабоумством або при підвищеній температурі, наприклад, від 80 до психоз Корсакова. Вони також можуть бути засто- 160"С, переважно від 100 до 1507С, зокрема при совані для лікування таких захворювань центра- 11076. льної нервової системи, як стан страху, напруги та

Сполуки формули (І) згідно з винаходом про- депресії, пов'язані з центральною нервовою сис- являють не передбачуваний цінний фармакологіч- темою сексуальні розлади та порушення сну, а ний спектр дії. також для регуляції відхилень при вживанні харчо-

Сполуки формули (І) згідно з винаходом ви- вих продуктів, виробів смакової промисловості та кликають релаксацію судин та блокують агрегацію наркотичних речовин. тромбоцитів, вони приводять до зниження тиску Крім того сполуки формули (Ії) згідно з винахо- крові та покращення коронарного кровообігу. В дом придатні також для регуляції церебрального основі цих ефектів лежить безпосередня стимуля- кровообігу та є ефективні засоби для боротьби з ція розчинної гуанілатциклази та підвищення вміс- мігренню. ту СОМР всередині клітини. Крім того, сполуки фо- Сполуки формули (І) згідно з винаходом підхо- рмули (І) згідно з винаходом посилюють дію дять також для профілактики та лікування таких речовин, які підвищують рівень СОМР, наприклад, наслідків церебрального інфарктного процесу

ЕОКЕ (фактору релаксації із ендотелію), МО- (Ароріехіа сегебгі), як інсульт, церебральні ішемії донорів, протопорфірину ІХ, арахідонової кислоти та травми черепа та мозку. Вони також можуть або похідних фенілгідразину. бути використані для боротьби з больовими синд-

Тому вони можуть бути застосовані у медика- ромами. ментах для лікування серцево-судинних захворю- До того ж сполуки формули (І) згідно з винахо- вань, наприклад, для лікування гіпертонії та сер- дом проявляють протизапальну дію і тому вони цевої недостатності, хронічної та гострої можуть бути використані як протизапальні засоби. стенокардії захворювань периферійних та коро- Крім того даний винахід охоплює також комбі- нарних судин, аритмії, для лікування таких тро- нації щонайменше однієї сполуки формули (І) згід- мбоемболічних захворювань та ішемій, як інфаркт но з винаходом та одного або кількох органічних міокарда, інсульт, перемежувальні та ішемічні на- нітратів або МО-донорів. пади, порушення периферійного кровообігу, для В рамках даного винаходу органічні нітрати та запобігання рестенозів, наприклад, після тромбо- МО-донори загалом є речовинами, терапевтична літичних терапій, перкутанної транслюмінальної активність яких виявляється через вивільнення МО ангіопластичної операції (РТА), перкутанної тран- або видів МО. Прикладами таких речовин є нітроп- слюмінальної пластичної операції на коронарних русид натрію, нітрогліцерин, динітрат ізосорбіду, судинах (РТСА), після шунтування, а також для мононітрат ізосорбіду, молсидомін та 51ІМ-1. лікування артеріосклерозу, астматичних захворю- Крім того даний винахід охоплює комбінації вань та захворювань сечостатевої системи, на- однієї або декількох сполук, які інгібують розпад приклад, гіпертрофії передміхурової залози, пору- циклічного гуанозинмонофосфату (СОМР). Пере- шення ерекції, жіночих сексуальних розладах, важно вони є інгібіторами фосфодіестераз 1, 2 та остеопорозу, глаукоми, легеневої гіпертонії, паре- 5; за номенклатурою |Веамо та Кеїїзпудег (1990) зу шлунку та нетримання. ТіІРБ 11, стор.150-155). Особливу перевагу при цьому надають інгібіторам фосфодіестерази 5 (М- речовини, а при пероральному введення на дода- інгібітори РОЕ), зокрема, однією із сполук є силде- тково ще через 3, 4, 5 та 6 годин. Для цього тварин нафіл (Міадгатм, ЕР-А 0463756, УМО 94/28902|, вар- щораз витягають із клітки, тримають їх за шерсть денафіл (МО 99/24433| або тадалафіл (ГО на зашийку та задні лапи, повертають на спину та 95/19978). Ці інгібітори підсилюють дію сполук згі- здійснюють вимірювання. Проводять відповідні дно з винаходом та покращують бажаний фарма- контрольні дослідження з одним розчинником кологічний ефект. Ідив.: Е.Візспоїї, К.5сппеїдег, Іпі. у. ої Ітроїепсе

Біологічні дослідження Вевз. 2001, 13, 230-235; Е.Візспоїй, О.Мієжоенпег,

Дія релаксації судин іп міо Н.Напіпд, М.Е5 Зауєд, Т.5спепке, К.Н.5спІеттег,

Кроликів оглушають ударом у потилицю та Те доцгпа! ої ШОгоіоду, 2001, 165, 1316-1318; знекровлюють. Витягають аорту, вивільняють її від Е.візсноїї, Іпі. 9. Ітроїепсе Нез. 2001, 13, 146-148). зв'язаних з нею тканин, розділяють на кільця ши- Мінімальна ефективна доза сполуки із прикла- риною 1,5мм та кожне окремо переносять з попе- ду 8 при пероральному введенні становить реднім натягом у ванну об'ємом 5мл, які містять О,ОЗмг/кг (при одночасному внутрішньовенному нагрітий до 37"С насичений карбогеном розчин введенні нітропрусиду натрію ЗМР у дозі 0,2 мг/кг).

Кребса-Гензелейта такого складу (мМ): Масі: 119; Визначення фармакокінетичних показників пі-

КСІ: 4,8; СасСіох2Н2О: 1; МаоабОхх7НгО; 1,4; сля внутрішньовенного та перорального введення

КНегРО»: 1,2; МансСоз: 25; глюкоза: 10. Силу скоро- Досліджувану речовину вводять тваринам (на- чення визначають за допомогою біайат ИсС-2- приклад, мишам, пацюкам, собакам) внутрішньо- клітин, підсилюють та оцифровують його А/0О- венно у вигляді розчину, пероральне введення перетворювачем (0А5-1802 НС, Кейпіеу, здійснюють у вигляді розчину або суспензії через

Іпвігитепів, Мюнхен), а також паралельно з цим глотковий зонд. Після введення речовини у визна- реєструють його за допомогою самописа. Скоро- чені інтервали часу у тварин беруть кров, оброб- чення викликають кумулятивним додаванням у ляють її гепарином та після цього центрифугуван- ванну фенілефрину при збільшенні концентрації. ням одержують з неї плазму. Кількісне визначення

Після декількох контрольних циклів досліджувану речовини в плазмі проводять за допомогою рідин- речовину оцінюють, підвищуючи при цьому її дозу ної хроматомас-спектрометрії. На основі отрима- на кожнім наступному етапі оцінювання, та порів- них таким чином співвідношень концентрації в нюють показник скорочення з отриманим на попе- плазмі та часу розраховують фармакокінетичні редньому етапі значенням. Виходячи з цього, ви- показники за допомогою сертифікованої фармако- значають концентрацію, необхідну для зниження кінетичної обчислювальної програми. отриманого в контрольному дослідженні значення Після перорального введення 0,3 та 1,Омг/кг (у на 5095 (ІСво)- Стандартний об'єм нанесення скла- вигляді розчину в суміші солутолу, етанолу та во- дає 5мкл, вміст ОМБ5О у розчині у ванні відповідає ди в співвідношенні 1:1:8) пацюкам сполука із при- значенню 0,195. кладу 8 має наведені далі концентрації в плазмі

Значення ІСзо для сполуки із прикладу 1 дорі- (АОС): внює 670ОнНМ, відповідне значення для сполуки із АМсСпогт (0,Змг/кг)-:0,326|кг"год/л прикладу 8 дорівнює 500нМ. АИОсСпогт (1,Омг/кг)-:0,548Ікг"год/лі

Зразок дослідження на кроликах Інгібування Ферментів иитохром-р450

Дорослі самці кроликів шиншила вагою 3-5кг Потенціал інгібування Р-450 ізоферментів, що після надходження кілька днів адаптуються в од- мають велике значення для метаболізму, дослі- накових умовах. Вони мають вільний доступ до джують в автоматичному режимі у 96-ямковому води та два рази на день можуть приймати корм. форматі. При цьому використовують два різних

Тварин тримають в режимі 10/14 діб (світло вклю- зразки проведення дослідження. чають з 8.00 години), температура приміщення У дослідженні, заснованому на утворенні флу- становить 22-2426. оресціюючих метаболітів, використовують реком-

Кожна піддослідна група складається із 3-6 бінантні ферменти (наприклад, СУРТА2, 228, 209, тварин, яких зважують безпосередньо перед поча- 2С19, 206 або ЗА4) та в загальному випадку субс- тком дослідження. Для внутрішньовенного вве- трати, які включають флуоресцеїнові або кумари- дення речовини розчиняють у / транскутолі нові структури. У кожнім окремому випадку вико- (САТТЕРОБ5Е отр) та розводять у співвідношен- ристовують одну концентрацію субстрату та 8 ні 3/7 2096-ним розчином кремофору (Сгеторпог концентрації потенційного інгібітору. Після інкубу- (ВА5Е), у воді). Речовину із розрахунку 0,5мл/кг вання відповідним рекомбінантним СУР фермен- вводять у вушну вену. Для ін'єкції розчинних у воді том за допомогою флуоресцентного аналізатора речовин використовують 0,995-ний розчин хлорис- визначають кількість флуоресціюючих метаболітів, того натрію. порівнюють з контрольною групою (без інгібітору)

Для перорального введення досліджувані ре- та розраховують значення ІСво (Апа!. Віоспет. 248, човини розчиняють у суміші гліцерину, води та 188 (1997)). поліетиленгликолю в співвідношенні 6:10:9,69 та В другому дослідженні як джерело ферментів вводять через глотковий зонд у кількості Тмл/кг. використовують мікросоми печінки людини, а як

У стані спокою статевий орган кролика не вид- субстрати, селективні по відношенню до СУР- но, він повністю покритий шкірою статевого орга- ізоформ, використовують фенацетин (СУРІАЗ), на. Ерекцію оцінюють, визначаючи довжину висту- диклофенак (СУР2С5), декстрометорфан паючого статевого органа за допомогою (СУР2ОВв) та мідазолам (СУРЗА4). Утворення від- штангенциркуля. Вимірювання проводять через 5, повідних метаболітів визначають за допомогою 10, 15, 30, 45, 60 та 120 хвилин після введення рідинної хроматомас-спектрометрії. Припустивши,

що інгібування має конкурентний характер, в ре- такими індукторами, як рифампіцин (КІР, 5О0мкМ), зультаті зменшення утворення метаболітів розра- омепразол (ОМЕ, 100мкМ) та фенобарбітал (РВ, ховують Кі-значення у порівнянні з контрольними 2ММ). Кінцеві концентрації досліджуваних речовин групами (1 концентрація субстрату та З концент- становлять від 0,01 до 10мкг/мл. рації інгібітору). На 8 день у клітинних культурах визначають

Індукція ферментів иитохром-р450 м культурах індуктивний ефект досліджуваних речовин на клітин печінки людини утворення ферментів цитохром (СХУР)-Р450 1А2,

Для дослідження потенціалу побічної дії речо- 286, 2319 і ЗА4 шляхом додавання як субстратів вин згідно з винаходом по відношенні до індукції 7-етоксирезоруфину (СУР1ТАЗ), ГСІ-5- ферментів цитохром-рі450 протягом 8 днів між мефенітотну (СЖМР2Вб ота 2019) та ("СІ двома шарами колагену в 24-ямковому планшеті тестостерону (СУРЗА4). На підставі визначених для мікротитрування при 37"С у 595 СО» культиву- активностей ферментів СУР1ТА2, 286, 2319 та ЗА4 ють первинні гепатоцити людини із щільністю клі- в оброблених клітинах у порівнянні із необробле- тини 2,5х105 клітин. Середовище для культиву- ними клітинами визначають індуктивний потенціал вання клітин змінюють щодня. досліджуваних речовин. У наведеній нижче табли-

Через 48 годин культивування гепатоцити про- ці вказані результати для сполуки з прикладу 8 у тягом 5 днів двічі обробляють різними концентра- порівнянні з індукторами КІР, РВ та ОМЕ: ціями досліджуваних речовин та порівнюють їх з

Таблиця

Індуктивний вплив на активності ферментів печінки в культурах гепатоцитів людини через 8 днів інкубування (нормоване) 11111110 | оКонцентраця | СУРІА2 | СУР2ВЄ | сУР2Ст9 | сСУРЗАЯ

Конттоль/-/ | -(:( 0 юЮюЮюЮюЮ.ІЕ4 Юного голого

ВІ 0 | бБбомкмолюол.// | -нв. | 515 | 1521 | 95 25 Я

РВЕ | о 2000мкмолл. | нв. | 1469 | 400 2 | 670 2 - 77771771 | о Оймкумл// | 070 | 162 | 30 | 60 77711111 | о їпомкумл// | 090. | 185 2 | їл12 | 51 2 47-( 71111111 ломкмл/// | 738 | 254 | 197 | з47 2 ((З н.в. означає не визначено

Іншим об'єктом даного винаходу є лікарські або включаючи процес резорбції (внутрішньом'я- засоби, що містять щонайменше одну сполуку згі- зовим, підшкірним способом, у шкіру, через шкіру дно з винаходом, переважно разом із одним або або внутрішньочеревним способом). Для паренте- кількома фармакологічно прийнятними допоміж- рального введення поряд з іншими можуть бути ними речовинами або носіями, а також їх викорис- застосовані такі лікарські форми, як композиції для тання для вказаних вище цілей. ін'єкцій та вливань у вигляді розчинів, суспензій,

Активна речовина може проявляти системати- емульсій, ліофілізатів та стерильних порошків. чну та/або місцеву дія. З цією метою його застосо- Для інших способів уведення придатними є, вують відповідним способом, наприклад, перора- наприклад, лікарські форми для інгаляцій (в тому льно, парентерально, через легені, назально, числі порошкові інгалятори, аерозольні інгалято- сублінгвально, лінгвально, букально, ректально, ри), краплі або розчини в ніс, аерозолі; таблетки вводять через шкіру, через кон'юктиву, використо- або капсули на язик, під язик або за щоку, супози- вують локально або у виді імплантанту. торії, лікарські форми для введення у вуха або очі,

Для цих способів введення активна речовина вагінальні капсули, водні суспензії (цілющі баль- може бути використана у відповідних лікарських зами, мікстури, які треба струшувати), ліпофільні формах. суспензії, мазі, креми, молочко, пасти, присипки

Для перорального прийому придатними є ві- або імплантати, наприклад, стенти. домі лікарські форми, які швидко та/або в модифі- Активні речовини відомими способами можуть кованому режимі вивільняють активну речовину, бути перетворені у відповідні форми застосування. наприклад, такі як таблетки (без покриття, а також З цією метою використовують інертні нетоксичні таблетки з покриттям, наприклад, таблетки, покри- фармацевтично прийнятні допоміжні речовини. До ті стійким по відношенню до шлункового соку ша- них належать носії (наприклад, мікрокристалічна ром, або таблетки у целофановій упаковці), капсу- целюлоза), розчинники (наприклад, рідкі поліети- ли, драже, грануляти, пігулки, порошки, емульсії, ленгліколі), емульгатори (наприклад, додецилсу- суспензії, розчини та аерозолі. льфат натрію), диспергатори (наприклад, полівіні-

Парентеральне введення можна здійснювати лпіролідон), синтетичні та натуральні біополімери при виключенні процесу резорбції (внутрішньовен- (наприклад, альбумін), стабілізатори (наприклад, ним, внутрішньоартеріальним, інтракардиальним, такі антиоксиданти, як аскорбінова кислота), барв- інтраспінальним або інтралюмбальним способом) ники (наприклад, такі неорганічні пігменти, як ок-

сиди заліза) або добавки для коригування смаку АВАР-НРІ С НРІ'С зі зворотними фазами, та/або запаху. В разі необхідності, активна речо- вт кімнатна температура, вина одного або декількох вказаних вище носії ВІ час утримування (при НРІ С), може також бути представлена у мікрокапсульо- ТНЕ тетрагідрофуран. ваній формі. Розчинники для тонкошарової хроматографії

Терапевтично ефективна сполука формули (1) Т1 ЕЕ: толуол - етиловий естер оцтової повинна входити до складу названих вище фар- кислоти (1:1) мацевтичних композицій у концентрації від приб- Т1 ЕЮНІ: толуол - етанол (1:1) лизно 0,1 до 99,5ваг.9о, переважно від приблизно С1Е1: циклогексан - етиловий естер оцто- 0,5 до 95ваг.95 від усієї суміші. вої кислоти (1:1)

Приведені вище фармацевтичні композиції С1Е2: циклогексан - етиловий естер оцто- поряд зі сполукою формули (І) згідно з винаходом вої кислоти (1:2) можуть містити також інші фармацевтичні активні І СМ5- та НРІ С-методи речовини. Метод 1 (І СМ5)

У загальному випадку для досягнення бажаних Інструмент: Місготаз5 Ріаногт І С72, НРІ1100; результатів як при лікуванні людей, так і у ветери- колонна: Буттейу С18, 50ммх2,1мм, 3,5мкм; нарній медицині ефективним виявилося введення елюент А: ацетонітрил « 0,195 мурашиної кислоти, активної речовини згідно з винаходом у загальній елюент В: вода ж 0,195 мурашиної кислоти; граді- кількості від приблизно 0,001 до приблизно 50, єнт: 0,Охв. 10956А-»4,0хв. 9095А-»6,Охв. 9095А; піч: переважно від 0,001 до 1Омг на кілограм ваги тіла, 402С; потік: О0,5мл/хв.; УФ-детектор: 208-400нм. кожні 24 години, в разі необхідності, у формі кіль- Метод 2 (СМ) кох окремих доз. Окрема доза містить від прибли- Інструмент: Місготаз5 Оцчайго І С7, НРІ100; зно 0,001 до приблизно 30, зокрема від 0,001 до колонна: Буттеїйгу С18, 50ммх2,1мм, 3,5мкм;

Змг активної речовини згідно з винаходом на кіло- елюент А: ацетонітрил -- 0,195 мурашиної кислоти, грам ваги тіла. елюент В: вода ж 0,195 мурашиної кислоти; граді-

Нижче наведені переважні приклади, які більш єнт: 0,0хв. 1096А-»4,Охв. 9095А-»6,0хв. 9095А; піч: детальний ілюструють даний винахід, але в жод- 40"С; потік: О0,5мл/хв.; УФ-детектор: 208-400нм. ному разі не обмежують обсяг його охорони. Якщо Метод З (ІСМ5) не зазначено нічого іншого, всі кількісні дані сто- Інструмент: Умаїег5 АПапсе 2790 І С; колонна: суються ваг.9о. Співвідношення розчинників, про- Зуттейгу С18, 50ммх2,1ММ, 3,5мМкм; елюент А: порції розведення та дані щодо концентрацій роз- вода ж 0,195 мурашиної кислоти, елюент В: ацето- чинів рідина/рідина в кожнім окремому випадку нітрил ж 0,195 мурашиної кислоти; градієнт: 0,Охв. стосуються об'єму. 5958-У5,0хв. 10958-6,0хв. 10958; температура:

Скорочення . 50"С; потік: 1,Омл/хв.; УФ-детектор: 210нм.

АСМ ацетонітрил, Метод 4 (НРІ С)

ВАВА н-бутилацетат/н-бутанол/льодяна Інструмент: НР 1100 з цифровим діод- оцтова кислота/фосфатний буфер матричним детектором (ОАБ); колонна: Кготавії рос в онкошарова хроматогрефія АР-18, боОммх2мм, 3,5мкм; елюенті: А:х5мМл осі пряма хімічна іонізація (при М) НСІОМЛ НгО, ВААСМ; градієнт: Охв. 2908, 0,5хв. рем дихлорметан 29088, 4,5хв. 909088, б,5хв. 90908; потік: 0,75мл/хв.;

ПІЕА М М-діізопропілетиламін температура: 30"С; УФ-детектор: 210нм. рмМео диметилсульфоксид ' Препаративний метод ЕР-НІРІ С

ОМЕ М М-диметилформамід Колонна: УМОо-сеї; елюент: ацетонітрил/вода й ні ' (градієнт); потік: 5Омл/хв.; температура: 257С; УФ- від. теор. від теоретичного, 210нМ.

ЕЕ етилацетат (етиловий естер оцтової детектор 2 й

Вихідні сполуки: кислоти), й Приклад 1А

Е! іонізація при електронному ударі Етиловий естер 5-аміно-1-(2- (при М), фторбензил)піразол-З-карбонової кислоти

ЕБІ іонизація електророзпилюванням (при М5),

Т.пл. температура плавлення, Е нас. насичений, год. години,

НРІС високоефективна рідинна хроматог- рафія (при високому тиску), НА - конц. концентрований, у;

ЇС-М5 рідинна хроматомасспектроскопія,

ІОА літій-дізопропіламід, мо

МСРВА / м-хлорпероксибензойна кислота, б СН»

М5 масспектроскопія,

ММА спектроскопія ядерного магнітного 100г (0,61Змоль) натрієвої солі етилового ес- резонансу (ЯМР), теру ціанопіровиноградної кислоти |за аналогією з

ВІДСОТ. відсотковий, Вогзспе та Мапіеийеї!, Серід5 Апп. 1934, 512, 97)

В індекс утримування (при тонкошаро- при ретельному перемішуванні в атмосфері арго- вій хроматографії), ну при кімнатній температурі поміщають у 2,5л діоксану, додають 111,75г (/5мл, 0,98моль) три- Е фтороцтової кислоти та перемішують протягом 10 хвилин, причому більша частина едикту перехо- дить у розчин. Після цього додають 85,93г (0,61З3моль) 2-фторбензилгідразину та кип'ятять М, протягом ночі. Після охолодження відсмоктують й М кристали трифторацетату натрію, що випали в Х і осад, промивають діоксаном та розчин без очи- лих Х щення піддають подальшій взаємодії. х

Приклад 2А

Етиловий естер 1-(2-фторбензил)-1 Н- 3биг 00 (13Зммоль) 1-(2-фторбензил)-1 Н- піразоло|3,4-Б|піридин-З-карбонової кислоти піразоло|3,4-б|Іпіридин-З-карбоксаміду з прикладу

ЗА розчиняють в ЗЗОмл ТНЕ та додають 27г

Е (34їммоль) піридину. Після цього протягом 10 хвилин додають 47,7бмл (71 ,66г, 341ммоль) ангід- риду трифтороцтової кислоти, причому темпера- туру збільшують до 40"С. Протягом ночі перемі-

М М шують при кімнатній температурі. Потім реакційну 7 М, суміш поміщають у їл води та тричі екстрагують о, відповідно О0,5л етилового естеру оцтової кислоти.

М. ен Органічну фазу промивають насиченим розчином о з гідрокарбонату натрію та 1М соляною кислотою, висушують сульфатом магнію та випарюють на

В одержаний з прикладу ТА розчин додають роторному випарнику. 61,25мл (60,77г, 0,61З3моль) диметиламіноакролеї- Вихід: 33,7г (10095 від теор.) ну та 56,28мл (83,88г, 0,73бмоль) трифтороцтової Температура плавлення: 817 кислоти та в атмосфері аргону кип'ятять протягом В(ЗіО», ТІ Е1): 0,74

З днів. Після цього розчинник випаровують у ваку- Приклад 5А умі, залишок поміщають у 2л води та тричі екстра- Метиловий естер (2-фторбензил)-1 Н- гують відповідно Тл етилового естеру оцтової кис- піразоло|3,4-0|піридин-З-карбоксімідної кислоти лоти. Об'єднані органічні фази висушують сульфатом магнію та випарюють на роторному Е випарнику. Хроматографують на 2,5кг силікагелю та вимивають градієнтом толуол/толуол-етиловий естер оцтової кислоти - 421. Вихід: 91,6бг (49,995 від теор. на двох стадіях). М

Температура плавлення 85С М т

ВЗ», ТІ Е1): 0,83 7 М й

Приклад ЗА пох М 1-(2-фторбензил)-1Н-піразоло|3,4-б|піридин-3- т ми карбоксамід ню-о

Е 30,37г (562ммоль) метилату натрію розчиня- ють в 1,5л метанолу та додають 36,45г (144, 5ммоль) 3-ціано-1-(2-фторбензил)-1 Н- піразоло|3,4-б|піридину (з прикладу 4А). Протягом м Ж. 2 годин перемішують при кімнатній температурі та й х / одержаний розчин в такому вигляді використову- ють на наступній стадії. ше Мн, Приклад бА о 1-(2-фторбензил)1Н-піразолої|3,4-б|піридин-3- карбоксамідину 10,18г (З4ммоль) одержаного в прикладі 2А естеру поміщають в 150мл метанолу насиченого Е аміаком при 0-107С. Два дні перемішують при кім- натній температурі та концентрують у вакуумі.

АБО», Т1 Е1):0,33

Приклад 4А М

З-ціано-1-(2-фторбензил)-1Н-піразолої|3,4- й "М

БІпіридин Х й й

Ше: М х

МН н

До одержаного з прикладу 5А розчину метило- вого естеру (2-фторбензил)-1Н-піразоло-І3,4-

БІпіридин-З-карбоксімідної кислоти в метанолі до- дають в 33,76г (32,19мл, 562ммоль) крижаної оц- У бомл ОМЕ протягом 22 годин при тиску вод- тової кислоти та 9,28г (17З3ммоль) хлориду амонію ню 65бар та температурі 627С гідрують 5г та протягом ночі перемішують та кип'ятять зі зво- (11,38ммоль) 2-(11-(2-фторбензил)-1Н-піразолої3,4- ротним холодильником. Розчинник випаровують у Б|Іпіридин-3-іл|-5-КЕ)-фенілдіазеніл/|-4,6- вакуумі, залишок ретельно розтирають з ацето- піримідиндіаміну з прикладу 7А з 800мг 5095-ного ном, тверду речовину, яка випала в осад, відсмок- нікелю Ренея у воді. Відсмоктують каталізатором тують, поміщають в 2л води, при перемішуванні через кізельгур, розчин випарюють у вакуумі та додають 31,8г карбонату натрію та тричі екстрагу- перемішують з 5М соляною кислотою. Речовину ють 1л етилового естеру оцтової кислоти, органіч- жовто-коричневого кольору, що випала в осад, ну фазу висушують сульфатом магнію та випаро- відсмоктують та висушують. Одержують 3,1г вують у вакуумі. (59,395 від теор.) цільової сполуки. Вільну основу

Вихід: 27,5г (76,495 від теор. на двох стадіях) одержують струшуванням з розведеним розчином

Температура плавлення: 867 гідрокарбонату натрію та екстрагують етиловим

АБО», Т1 ЕЮНІ): 0,08 естером оцтової кислоти. Нерозчинну в обох фа-

Приклад 7А зах тверду речовину відсмоктують. Фаза етилово- 2-П1-(2-фторбензил)-1Н-піразолої3,4-б|піридин- го естеру оцтової кислоти також містить незначну

З-іл|-5-КЕ)фенілдіазеніл|-4 б-піримідиндіамін кількість вільної основи.

Приклад 9А о Метилціанометил(метил)карбам ат (в)

М М

4 "М Е ит ость с й М

Сн, іч Одержання аналогічно до: (ОО. Гі. Спи, Т. МУ. ді тпн, рапієї, А. Сіаіроге, С 5. Соорег, С. М. Г ее, У. Мед.

НА М Спет. 1996, 39, 3070-3088. / Приклад 10А

Натрій-(Е)-2-ціано-2-

Кметоксикарбоніл)(метил)аміно|етанолат

Ма о

До розчину 21,92г (71,7ммоль) -/1-(2- Ж Її исН,; фторбензил)! Н-піразоло|3,4-бІпіридин-3- о карбоксамідину з прикладу бА в М М- сна диметилформаміді при перемішуванні додають 3,87г метанолату натрію та після цього 12,2г В атмосфері аргону до тетрагідрофурану до- (71,7ммоль) фенілазомалононітрилу |. "Р. дають 0,46г (0,01ммоль) метилату натрію (розчин

Самаїїегі, 9. Р. ТапКег, А. Вепаїсп, У. Ат. Спет. А). Після цього в 1,73г (0,02ммоль) етилового ес- ос, 1949, 71, 533|. Протягом ночі перемішують теру мурашиної кислоти додають 1,00г при температурі 1107С та дають розчину охолону- (0,01ммоль) метилціанометил(метил)карбамату з ти. Тверду речовину, яка випала в осад, відсмок- прикладу 9А. До цієї суміші повільно та обережно тують та промивають етанолом після висушування по краплях додають розчин А. Протягом ночі пе- одержують 23г (7395 від теор.) цільової сполуки. ремішують при кімнатній температурі. Розчинник

Приклад ВА відганяють на роторному випарнику у вакуумі, а до

Тригідрохлорид 2-І11-(2-фторбензил)-1 Н- залишку додають діетиловий етер. Кристали, що піразоло|3,4-Б|піридин-З-ілІ-4,5,6- випадають в осад, відсмоктують та висушують у піримідинтриаміну високому вакуумі.

Вихід: 1,05г (7695 від теор.)

НРГІС (метод 4): Гч-1,35хв.

І"Н-ЯМР (200Мгц, ОМ5О-йв): 6 - 2,90 (д, 1Н),

М М 3,35 (с, ЗН), 3,47 (с, ЗН). й | М Е Приклади с й Приклад 1

Етил-4-аміно-2-І1-(2-фторбензил)-1 Н-

М М піразоло|3,4-р|піридин-З-іл|-5-піримідиніл- дин (метил)карбам ат

НМ мн,

Е

До Бмл піридину додають 107,35мг (0,31ммоль) тригідрохлориду 2-|1-(2-фторбензил)-

М 1Н-піразоло|3,4-б|Іпіридин-З-іл|-4,5,6- з піримідинтриаміну з прикладу 8А та суміш охоло- - ул джують до 0"С. Потім додають 33,25мМг (0,31ммоль) етилового естеру хлормурашиної кис-

М лоти та протягом ночі перемішують при кімнатній

М х температурі. Піридин відганяють у вакуумі на ро- век торному випарнику, а залишок очищають препара- тивним методом ЕР-НРІ С. м-н. Вихід: 56,2мг (4390 від теор.) - І С/М5 (метод 1): Р-2,66хв. о М5 (Е)): т/2-423 (МН)

Нн ій ІН-ЯМР (З00МГц, ОМ5О-йв): б - 1,17-1,33 (м,

З ЗН), 3,97-4,14 (м, 2Н), 5,80 (с, 2Н), 6,14 (ш. с, АН),

І 7,07-7,17 (м, 2Н), 7,22 (т, 1Н), 7,29-7,40 (м, 2Н),

В атмосфері аргону до 0,80г (2,61ммоль) 1-(2- 7,97 (ш. с, 1Н), 8,60 (д, 1Н), 9,07 (д, 1Н). фторбензил)1 Н-піразолої|3,4-5|-піридин-3- Приклад З карбоксамідину з прикладу бА додають 0,51г Ізопропіл-4,б-діаміно-2-(1-(2-фторбензил)-1Н- (г2ббммоль) / натрій-(Е)-2-ціано-2- піразоло!|3,4-б|Іпіридин-3-іл|-5-піримідинілкарбамат (метоксикарбоніл)(метил)аміно|їетанолат з прик- ладу 10А та 0,53г 0,7Змл (5,23ммоль) триетиламі- Е ну в 5бмл толуолу. Протягом 9 годин кип'ятять зі зворотним холодильником. Після цього знову охо- лоджують до кімнатної температури, додають ди- М хлорметан та воду та екстрагують. Органічну фазу ва висушують над сульфатом магнію, відфільтрову- | т ,; ють та випарують у вакуумі на роторному випар- нику. До залишку додають 5 мл діетилового етеру м та кристалізують. Кристали відсмоктують, вису- М х шують та очищають за допомогою препаративним ін методом КР-НРІ С. нм

Вихід: 20,2мг (295 від теор.) МН

І С/М5 (метод 2): Ч-3,01хв. ве,

М5 (ЕЇ): т/2-408 (МН) о

ІН-ЯМР (З00МГЦц, ОМ5О-ав): б - 3,09 (с, ЗН), не-Х 3,29 (с, ЗН), 5,83 (с, 2Н), 7,09-7,42 (м, 5Н), 8,20 (с, з сн, 1Н), 8,64 (дд, 1Н), 8,94 (дд, 1Н), 9,27 (ш. с, 2Н).

Приклад 2 Одержання аналогічно до прикладу 2 із дода-

Етил-4,6-діаміно-2-(1-(2-фторбензил)-1 Н- ванням 150мг трихлориду (0,4Зммоль) 2-(/1-(2- піразоло|3,4-б|піридин-3-іл|-5-піримідиніл- фторбензил)-1Н-піразолої|3,4-б|піридин-З-ілІ-4,5,6- карбамат піримідинтриаміну з прикладу 8А, 7,5мл піридину та 52,47мг (0,4Зммоль) ізопропілхлороформату.

Р Залишок поміщають у суміш з дихлорметану та метанолу, відфільтровують та висушують.

Вихід: 165мг (8895 від теор.)

М КІ І С/М5 (метод 1): -2,84хв. з М5 (Е)): т/2-437 (МН)

ДО, ІН-ЯМР (З00МГц, ОМ5О-йв): 6 - 1,26 (д, 6Н), 4,82 (квін., 1Н), 5,92 (с, 2Н), 7,07-7,20 (м, 2Н), 7,25

М (т, 1), 7,31-7,43 (м, 2Н), 7,47-7,57 (м, 1Н), 8,16 (ш.

Ох с, 1Н), 8,74 (дд, 1Н), 8,98 (дд, 1Н). ен МН Приклад 4 нм чн Неопентил-4,б-діаміно-2-(1-(2-фторбензил)- - 1Н-піразоло|3,4-б|Іпіридин-З-іл|-5-

Ге) піримідинілкарбамат

С

Е ють з З0Омл киплячого діетилового етеру. Про- дукт, що випадає, відсмоктують та висушують у вакуумі.

М Вихід: 32,6г (9295 від теор.) з І С/М5 (метод 1): Ві-2,61хв. р /Й М5 (ЕЇ): т/2-409 (МН)

ІН-ЯМР (400МГц, ОМ5О-ав): 5 - 3,61 (с, ЗН), м 5,80 (с, 2Н), 6,19 (ш. с, 4Н), 7,08-7,16 (м, 2Н), 7,22

М х (т, 1), 7,28-7,39 (м, 2Н), 7,99 (ш. с, 1Н), 8,60 (дд, ек 1Н), 9,05 (дд, 1Н). нм Приклад 6

МН Етил-4,6-діаміно-2-(1-(2-фторбензил)-1Н- он, піразоло|3,4-р|піридин-З-іл|-5-піримідиніл- не їі (метил)карбамат

Е не

Одержання аналогічно до прикладу 2 із дода- -У ванням 100мг (0,29ммоль) трихлориду 2-(11-(2- М М, фторбензил)-1Н-піразолої|З3,4-б|піридин-З-ілІ-4,5,6- | М піримідинтриаміну з прикладу 8А, 5мл піридину та де-ї 43мг (0,29ммоль) неопентилхлоридокарбонату.

Вихід: 54мг (4195 від теор.) м х

ГС/М5 (метод 1): Ч-3,10хв. ле

М5 (ЕЇ): т/2-465 (МАН)

ІН-ЯМР (400МГгц, ОМ5О-ав): 5 - 0,95 (ш. с, Нам Мов,

ОН), 3,74 (с, 2Н), 5,79 (с, 2Н), 6,10 (ш. с, 4Н), 7,08- - 7,17 (м, 2Н), 7,22 (т, 1Н), 7,29-7,39 (м, 2Н), 8,00 (ш. о а с, 1Н), 8,60 (дд, 1Н), 9.06 (дд, 1Н). С

Приклад 5 сн

Метил-4,6б-діаміно-2-(1-(2-фторбензил)-1 Н- З піразолоїЇ3,4-б|Іпіридин-3-іл|-5-піримідинілкарбамат Бамг (01Зммоль) етил-4,б-діаміно-2-11-(2-

Е фторбензил)-1Н-піразоло-І3,4-5|Іпіридин-З-іл1|-5- піримідинілкарбамату з прикладу З поміщають в 5мл ОМЕ, суміш охолоджують до 0"С та додають 7,67мг (0,19ммоль) гідриду натрію. Після цього по

М М краплях додають 18,14мг (0,1З3ммоль) йод метану р та протягом години перемішують. У суміш додають - воду та екстрагують дихлорметаном. Об'єднані м органічні фази висушують сульфатом магнію та

М х випарюють на роторному випарнику. Залишок с МН, спочатку очищують колонковим хроматогруванням нл (розчинник: дихлорметан/метанол - 10:1) та після з МН цього методом препаративної КЕР-НРІ С. да Вихід: З2мг (5895 від теор.)

Р І С/М5 (метод 2): Рі-2,91хв. не М5 (Е)): т/2-437 (МН)

ІН-ЯМР (200МГц, ОМ5О-йв): б - 1,08 (т, ЗН),

У Зомл піридину розчиняють 30,5г (87,0ммоль) 2,99 (с, ЗН), 2,93-4,11 (м, 2Н), 5,79 (с, 2Н), 6,35 (ш. тригідрохлориду 2-11-(2-фторбензил)-1н- с, АН), 7,06-7,14 (м, 2Н), 7,16-7,28 (м, 1Н), 7,28- піразоло!|3,4-б|піридин-3-іл|-4,5,6- 7,32 (м, 2Н). 8,59 (дд, 1Н), 9,06 (дд, 1Н). піримідинтриаміну з прикладу ЗА. Одержаний роз- Приклад 7 чин охолоджують до 02с. Додають 8,22Г І Ізопропіл-4,6-діаміно-2-/1 -(«2-фторбензил)-1 н- (87,0ммоль) метилового ефіру хлормурашиної піразоло|3,4-р|піридин-З-іл|-5- кислоти та перемішують ще 2 години при 02С. Піс- піримідиніл(метил)карбам ат ля цього дають нагрітися до кімнатної температу- ри та перемішують ще 12 годин. Після розпарю- вання у вакуумі промивають залишок водою та висушують. Для подальшого очищення перемішу-

Е бути одержані відповідно до вказаного нижче спо- собу синтезу:

У 275мл тетрагідрофурану розчиняють 20,0г

М М (49, Оммоль) метил-4,6-діаміно-2-(11-(2-

А фторбензил)-1Н-піразоло|3,4-б|піридин-3-іл|-5- що піримідинілкарбамату з прикладу 5 та охолоджу- ють до 0"С. Протягом 15 хвилин по краплях дода- дн ють 53,9мл (49,0ммоль 1М розчину у тетрагідро-

М Х фурані) біс-(триметил)силіламіду літію. зи МН, Перемішують 20 хвилин при 0"С та після цього

НА ; додають 6,95г (53,9ммоль) йодметану. Через 1

Я годину дають розчину нагрітися до кімнатної тем- сь ператури та зупиняють реакцію шляхом додавання насиченого водного розчину хлориду амонію. фази розділяють. Водяну фазу кілька разів екстрагують

НЄ Сен, етилацетатом та дихлорметаном. Об'єднані орга- нічні фази випарюють у вакуумі. Одержаний таким

Одержання аналогічно до прикладу 6 із дода- чином залишок суспендують у суміші дихлормета- ванням 75мг (0,17ммоль) ізопропіл-4,б-діаміно-2- ну та тетрагідрофурану (1:1). Нерозчинні кристали

П1-(2-фторбензил)-1Н-піразоло|3,4-БІпіридин-З-іл|- відсмоктують та поміщають у метанол. Протягом

Б-піримідинілкарбамату з прикладу 3, 10,31мг однієї години нагрівають зі зворотним холодильни- (0,26ммоль) гідриду натрію та 24 4мг (0,17ммоль) ком. Після охолодження осад, що випав, відфільт- йодметану. Залишок очищують методом препара- ровують. Одержану при цьому тверду речовину тивної ЕР-НРІ С. червоного кольору суспендують у 100мл суміші

Вихід: З2мг (4195 від теор.) діоксану та дихлорметану (1:1) та при температурі

ГС/М5 (метод 1): ч-2,97хв. кипіння додають 20мл метанолу до утворення

М5 (ЕЇ): т/2-5451 (МеН)» прозорого розчину. Додають активоване вугілля,

ІН-ЯМР (З00МГЦц, ОМ5О-йв): 5 - 1,09 (д, 6Н), недовго нагрівають до кипіння та фільтрують гаря- 2,98 (с, ЗН), 4,80 (квін., 1Н), 5,79 (с, 2Н), 6,31 (ш. с, чий розчин через кізельгур. Одержаний таким чи- 4Н), 7,05-7,16 (м, 2Н), 7,22 (т, 1Н), 7,28-7,40 (м, ном розчин випарюють до суха. Додають метанол 2Н), 8,59 (дд, 1Н), 9,07 (дд, 1Н). та протягом однієї години перемішують суспензію

Приклад 8 при кімнатній температурі. Кристали білого кольо-

Метил-4,6-діаміно-2-І1-(2-фторбензил)-1 Н- ру відфільтровують. піразоло|3,4-б|піридин-3-ілІ-5- Вихід: 14,9г (72 9о від теор.) піримідиніл(метил)карбам ат І.С/М5 (метод 3): ч-1,65хв.

М5 (Е)): т/2-423 (МН)

Е І"Н-ЯМР (200МГц, ОМ5О-йв): 5 - 3,01 (с, ЗН), 3,57 (с, ЗН), 5,92 (с, 2Н), 7,05-7,17 (м, 2Н), 7,18- 7,46 (м, ЗН), 7,47-7,61 (м, 2Н), 7,59-7,97 (м, 2Н),

М 8,71-8,81 (м, 1Н), 8,97 (дд, 1Н).

М ш-- х Приклад 9 ще / Ізопропіл-4 б-діаміно-2-(1-(2-фторбензил)-1 Н- піразоло|3,4-б|піридин-З-іл|-5- м піримідиніл(етил)карбамат

М зи мн, Е що го

Ж М о 9 | з М

Сну ОМ

Одержання аналогічно до прикладу 6 із дода- ав! ванням З1Омг (0,7бммоль) метил-4,6-діаміно-2-|1- М (2-фторбензил)-1Н-піразоло|3,4-б|піридин-З-іл|-5- пи МН, піримідинілкарбпмату з прикладу 5, 27,32мМг НА (1,14ммоль) гідриду натрію та 215,5мг (1,52ммоль) Мен йодметану. Для обробки у суміш додають воду, 2М ри з розчин гідроксиду калію та екстрагують дихлорме- о ре таном. Об'єднані органічні фази висушують суль- фатом магнію та випарюють на роторному випар- нс СН» нику. Залишок очищують методом препаративної

ВР-НРІ С. Одержання аналогічно до прикладу 6 із дода-

Вихід: 9Змг (2995 від теор.) ванням бомг (0,14ммоль) ізопропіл-4,6-діаміно-2-

Більші кількості сполуки з прикладу 8 можуть П1-(2-фторбензил)-1Н-піразоло|3,4-рбІпіридин-З-іл|-

Б5-піримідинілкарбамату з прикладу 3, 4,95мг

(0,21ммоль) гідриду натрію та 21,4мг (0,17ммоль) М5 (Е)): т/2-465 (МН). йодетан. Для повного перетворення ще раз дода- ІН-ЯМР (200МГц, ОМ5О-4в): 6 - 0,96-1,06 (м, ють ту саму кількість гідриду натрію та йодетану. ЗН), 1,09 (д, 6Н), 2,79-2,93 (м, 2Н), 4,82 (квін., 1Н),

Залишок очищають за допомогою препаративної 5,80 (с, 2Н), 6,25 (ш. с, 4Н), 7,01-7,14 (м, 2Н), 7,15-

АР-НРІ С. 7,50 (м, ЗН), 8,60 (дд, 1Н),9,09(дд, 1Н).

Вихід: 4Змг (6795 від теор.)

І С/М5 (метод 1): ч-2,97хв.

Комп'ютерна верстка 0. Гапоненко Підписне Тираж 26 прим.

Міністерство освіти і науки України

Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна

ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601