BRPI0312419B1 - Pharmaceutical composition for prevention and / or treatment of an allergic disease and food composition, cosmetic - Google Patents

Abstract

"derivados de c-glicosídeo de flavona e composições contendo os derivados". a presente invenção refere-se a novos derivados de c-glicosídeo de flavona ou sais dos mesmos, especialmente aqueles mostrando um efeito antialérgico e composições contendo os mesmos. recentemente, casos de doenças alérgicas, especialmente polenose e dermatite atópica, têm aumentado a um ponto tal que eles se tornaram um problema social. foi reportado que flavonas e seus glicosídeos têm o efeito de inibição da liberação de histamina a partir de mastócitos ou têm um efeito imunossupressor e espera-se que sejam usados como terapias contra alergia. contudo, a maioria das flavonas exibe seus efeitos apenas em altas doses, de modo que compostos eficazes em doses menores são altamente desejados. a presente invenção proporciona novos componentes capazes de tratamento de doenças alérgicas em baixas doses e composições contendo os mesmos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA A PREVENÇÃO E/OU TRATAMENTO DE UMA DOENÇA ALÉRGICA E COMPOSIÇÃO ALIMENTÍCIA, COSMÉTICO". CAMPO TÉCNICO A presente invenção refere-se a novos derivados de C-glicosídeo de flavona ou sais dos mesmos, especialmente aqueles tendo efeitos antialérgicos e composições contendo os mesmos.

TÉCNICA ANTERIOR

Recentemente, várias inspeções epidemiológicas têm mostrado um aumento em doenças alérgicas. Casos de polenose e dermatite atópica, em particular, estão crescendo a um ponto tal que eles se tornaram um problema social. Acredita-se que alérgenos aumentados e mudanças em nosso ambiente, tal como poluição do ar, aditivos alimentícios e mudanças nos hábitos alimentares causem um aumento nos casos de doenças alérgicas (Itoh, Sõgõ rinsyõ 41: 3099 (1992)). Terapias atuais para doenças alérgicas envolvem basicamente a remoção ou rejeição de alérgenos causais em combinação com terapia com droga, baseado na gravidade dos sintomas ou no mecanismo patogênico de cada doença. Reações alérgicas são classificadas em quatro tipos, do tipo I ao IV, baseado sobre a imunoglobulina causai e as células imunes envolvidas. Alergias do tipo I a III, as quais são denominadas alergias imediatas devido à reação alérgica imediata do paciente, são imu-norreações nas quais anticorpos humorais estão envolvidos, enquanto que a alergia do tipo IV, a qual é denominada alergia retardada, é uma reação imune célula-mediada na qual linfócitos sensibilizados, mas não anticorpos, estão envolvidos (Tomioka, Sõgõ rinsyõ 41: 3103 (1992)).

Dentre essas reações alérgicas, acredita-se que reações alérgicas do tipo I e do tipo IV estejam envolvidas em polenose e dermatite atópica, as quais são tratadas com anti-histaminas, agentes antialérgicos básicos ou esteróides.

Por outro lado, pedidos de patente os quais se referem a agentes antialérgicos usando-se extratos de chá preto chinês ou gaiato de epiga-lotequina em chá verde foram depositados (JPA HE110-077231, JPAHEI 10-175874, Patente Japonesa No. 3023962, etc.). Foi reportado que flavo-nas e seus glicosídeos têm o efeito de inibição da liberação de histamina a partir de mastócitos ou têm um efeito imunossupressor e espera-se que sejam usados como terapias contra alergia (Kubo, M. e outros, Chem. Pharm. Bull. 32: 5051 (1984)). Contudo, a maioria das flavonas exibe seus efeitos apenas em altas doses, de modo que compostos eficazes em doses menores são altamente desejados.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Um objetivo da presente invenção é isolar/identificar compostos tendo um efeito antialérgico e proporcionar novos componentes capazes de tratamento de doenças alérgicas em baixas doses e composições contendo tais componentes.

De forma a resolver os problemas acima, focalizou-se sobre o efeito antialérgico do chá preto chinês e examinou-se intimamente seus componentes antialérgicos e foi descoberto que novos derivados de C-glicosídeo de flavona ou sais dos mesmos têm o efeito de inibição da formação de edema na orelha induzido por 2,4-dinitrofluorobenzeno (DNFB) e o efeito de inibição da liberação de histamina de mastócitos peritoneais. foi também descoberto que eles podem ser aplicados como ingredientes ativos em composições farmacêuticas, composições alimentícias ou cosméticos. Assim, obteve-se a presente invenção.

BREVE EXPLICAÇÃO DOS DESENHOS A FIGURA 1 é um gráfico mostrando os resultados do Exemplo Experimental 1. Os efeitos inibitórios do composto (1) da presente invenção em três concentrações correspondendo a doses orais de 0,2, 1,0 e 5,0 pg/kg sobre dermatite de contato em orelha de camundongo, quando comparado a um grupo de controle tratado com 0,5% de carboximetilcelulose de só-dio/ácido clorídrico a 0,01 N são mostrados. A FIGURA 2 é um gráfico mostrando os resultados do Exemplo Experimental 2. Os efeitos inibitórios do composto (2) da presente invenção em três concentrações correspondendo a doses orais de 1,0,10 e 100 pg/kg sobre dermatite de contato em orelha de camundongo, quando comparado a um grupo de controle tratado com 0,5% de carboximetilcelulose de só-dio/ácido clorídrico a 0,01 N são mostrados. A FIGURA 3 mostra as estruturas dos flavonóides.

AS CONCRETIZAÇÕES MAIS PREFERIDAS DA INVENÇÃO

Conforme descrito acima, centrou-se a atenção sobre o efeito antialérgico do chá preto chinês e examinou-se intimamente os componentes antialérgicos no chá preto chinês de forma a resolver os problemas acima e foi descoberto que novos derivados de C-glicosídeo de flavona ou sais dos mesmos têm o efeito de inibição da formação de edema na orelha induzido por 2,4-dinitrofluorobenzeno (DNFB) e o efeito de inibição da liberação de histamina de mastócitos peritoneais. Foi também descoberto que eles podem ser aplicados como ingredientes ativos em composições farmacêuticas, composições alimentícias ou cosméticos. Assim, obteve-se a presente invenção.

Conseqüentemente, a presente invenção se refere a um derivado de C-glicosídeo de flavona da fórmula (1): ou um sal do mesmo. A presente invenção também se refere a um derivado de C-glicosídeo de flavona da fórmula (2): ou um sal do mesmo. A presente invenção se refere a uma composição farmacêutica para a prevenção e/ou tratamento de uma doença alérgica contendo pelo menos um dos referidos derivados de C-glicosídeo de flavona ou um sal dos mesmos. Ela também se refere à referida composição farmacêutica em que a referida doença alérgica é pelo menos uma dentre dermatite atópica, der-matite de contato ou polenose. A presente invenção se refere a uma composição alimentícia contendo pelo menos um dos referidos derivados de C-glicosídeo de flavona (1) ou (2) ou um sal dos mesmos. A presente invenção também se refere à referida composição alimentícia na forma de qualquer um de suplementos dietéticos ou outras bebidas nutrientes, bebidas saudáveis, chás saudáveis ou outras bebidas. Ela também se refere à referida composição alimentícia na forma de qualquer um de produtos de confeitaria, pães, macarrão, produtos processados de soja, produtos lácteos, produtos processados de ovos, bolos de peixe, gorduras e óleos ou temperos. A presente invenção também se refere a um cosmético contendo pelo menos um dos referidos derivados de C-glicosídeo de flavona (1) ou (2) ou um sal dos mesmos. A presente invenção também se refere ao referido cosmético na forma de qualquer um de produtos para cuidados com a pele, produtos de maquiagem, cosméticos para os cabelos ou produtos para o banho.

Os derivados de C-glicosídeo de flavona da fórmula (1) e da fórmula (2) ou sais dos mesmos de acordo com a presente invenção podem ser obtidos de folhas de chá, por exemplo, através de extração com um solvente sob aquecimento, concentração e purificação usando-se meios de se-paração/purificação química convencionais (por exemplo, fracionamento ou cromatografia).

As folhas que podem ser usadas para a preparação incluem folhas de Camellia sinensis e/ou folhas processadas do mesmo. Especialmente preferido é chá preto chinês. O chá preto chinês é um chá semi-fermentado produzido primariamente na província de Fujian ou de Guangdong da China ou Taiwan. O solvente usado para eluição pode ser um solvente aquoso e/ou um solvente orgânico, mas, de preferência, um solvente aquoso. O solvente aquoso é, desejavelmente, água, etanol ou metanol. Ele também pode ser água apenas ou qualquer solução misturada de água e um álcool inferior, tal como metanol ou etanol. A proporção de folhas de chá preto chinês para o solvente no processo de extração não é especificamente limitada, mas, de preferência, a proporção em peso de folhas de chá preto chinês para o solvente é de 2-1000, mais preferivelmente 5-100, em termos de operação de extração e rendimento. A temperatura no processo de eluição não é especificamente limitada, na medida em que ela seja maior do que o ponto de fusão do solvente e menor do que seu ponto de ebulição, mas é, desejavelmente, 10 °C a 100 °C para água ou 10 °C a 40 °C para etanol e metanol. O período de extração oscila, de preferência, de 10 segundos a 24 horas.

Meios de separação/purificação química convencionais podem ser usados, tais como distribuição líquido-líquido, cromatografia em camada fina, cromatografia em coluna de adsorção, cromatografia em coluna de divisão, cromatografia em coluna de filtração em gel, cromatografia em coluna de troca de íons, eletroforese e cromatografia de líquido em alta velocidade. Se desejado, esses meios de separação/purificação podem ser combinados para purificar os derivados de C-glicosídeo de flavona da fórmula (1) e da fórmula (2) ou sais dos mesmos em elevada pureza.

Os derivados de C-glicosídeo de flavona da fórmula (1) e da fórmula (2) ou sais dos mesmos de acordo com a presente invenção mostram um efeito antialérgico, de modo que eles podem ser usados para várias aplicações, tais como produtos farmacêuticos, alimentos e cosméticos. Para produtos farmacêuticos, os compostos da fórmula (1) e da fórmula (2) ou sais dos mesmos podem ser usados como agentes antialérgicos, especialmente para fins de alívio ou prevenção dos sintomas de dermatite atópica, dermatite de contato e polenose devido ao fato de eles mostrarem o efeito de inibição da formação de edema da orelha DNFB-induzido e o efeito de inibição da liberação de histamina. Para alimentos, eles podem ser adicionados como aditivos alimentícios em suplementos dietéticos ou alimentos saudáveis para fins de alívio ou prevenção dos sintomas de dermatite atópica, dermatite de contato e polenose. Eles podem ser adicionados a vários alimentos. Para bebidas, eles podem ser adicionados em suplementos dietéticos ou outras bebidas nutrientes, bebidas saudáveis, chás saudáveis ou outras bebidas. Eles também podem ser adicionados em outros alimentos, tais como produtos de confeitaria, pães, macarrão, produtos processados de soja, produtos lácteos, produtos processados de ovos, bolos de peixe, gorduras e óleos ou temperos. Para cosméticos, os compostos da fórmula (a) e/ou da fórmula (2) ou sais dos mesmos podem ser adicionados em produtos para cuidados com a pele, base ou produtos de maquiagem para fins de alívio ou prevenção dos sintomas de dermatite atópica, dermatite de contato e polenose.

Conforme para produtos farmacêuticos, os compostos da fórmula (1) e/ou da fórmula (2) ou sais dos mesmos podem ser oralmente administrados diretamente ou após diluição em água ou semelhante. Altemati-vamente, eles podem ser formulados com veículos farmacêuticos conhecidos. Por exemplo, os compostos da fórmula (1) e/ou da fórmula (2) ou sais dos mesmos podem ser administrados como formulações líquidas orais, tais como xaropes ou formulações sólidas orais, tais como comprimidos, cápsulas, grânulos e pós contendo seus extratos ou pós em combinação com veículos farmaceuticamente aceitáveis. Veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem vários materiais veículo orgânicos ou inorgânicos farmacêuticos convencionais e são adicionados como excipientes, lubrificantes, aglutinan-tes ou desintegrantes em formulações sólidas ou solventes, excipientes, agentes de suspensão ou aglutinantes em formulações líquidas. Se desejado, aditivos farmacêuticos, tais como conservantes, antioxidantes, colorantes e adoçantes podem também ser adicionados.

Exemplos preferidos de excipientes incluem lactose, sacarose, D-manitol, amido, celulose cristalina e anidrido silícico leve. Exemplos prefe- ridos de lubrificantes incluem estearato de magnésio, estearato de cálcio, talco e sílica coloidal. Exemplos preferidos de aglutinantes incluem celulose combinada, sacarose, D-manitol, dextrina, hidroxipropilcelulose, hidróxipro-pilmetilcelulose e polivinilpirrolidona. Exemplos preferidos de desintegrantes incluem polietileno glicol, propileno glicol, D-manitol, benzoato de benzila, etanol, tri-aminometano, colesterol, trietanolamina, carbonato de sódio e ci-trato de sódio. Exemplos preferidos de solventes incluem água purificada, álcoois e propileno glicol. Exemplos preferidos de agentes de suspensão incluem tensoativos, tais como estearato de etanolamina, lauril sulfato de sódio, ácido lauril aminopropiônico, lecitina, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio e monoestearato de glicerina; e polímeros hidrofílicos, tais como álcool polivinílico, polivinilpirrolidona, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroximetilcelulose, hidroxietilcelulose e hidroxipropilcelulose. Exemplos preferidos de conservantes incluem ésteres de ácido paraoxiben-zóico, clorobutanol, álcool benzílico, álcool fenetílico, ácido dehidroacético e ácido sórbico. Exemplos preferidos de antioxidantes incluem sulfitos e ácido ascórbico.

Formas de dosagem são aquelas adequadas para administração oral, parenteral ou nasal, tais como comprimidos ou comprimidos revestidos com açúcar, comprimidos sublinguais, cápsulas de gelatina, trociscos, supo-sitórios, cremes, pomadas e géis para a pele, dependendo do tipo ou gravidade da doença. A dose eficaz depende da idade e peso corporal do paciente, do tipo ou gravidade da doença e da via de administração. A dose unitária está, geralmente, na faixa de 0,0001 a 100 mg/kg, a qual é administrada uma a três vezes em 24 horas.

Conforme para alimentos, os compostos da fórmula (1) e/ou da fórmula (2) ou sais dos mesmos podem ser administrados como tal ou na forma de alimentos ou bebidas contendo seus extratos ou pós. Eles também podem ser proporcionados como bebidas, produtos de confeitaria, pães, macarrão, produtos processados de soja, produtos processados de ovos, bolos de peixe, gorduras e óleos ou temperos em combinação com materiais convencionais para alimentos e bebidas e veículos aceitáveis para ingredi- entes de alimentos e bebidas.

Conforme usado aqui, bebidas incluem bebidas de chá preto chinês, bebidas de chá misturadas com outras bebidas de chá, bebidas car-bonadas, bebidas de frutas, bebidas bacterianas de ácido láctico, bebidas isotônicas, leite de soja, licores, tais como vinho, bebidas alcoólicas destiladas, whisky e saquê misturados com bebidas de chá preto chinês ou outras bebidas de chá.

Conforme usado aqui, produtos de confeitaria incluem biscoitos, chocolates, balas, gomas de mascar, salgadinhos, bolos fritos, bolos Western frescos, bolos Japoneses tradicionais, sorvetes e geléias.

Produtos processados de soja incluem coalhada de sementes e produtos lácteos incluem iogurte e manteiga. Produtos processados de ovos incluem omelete e ragu cozido em potes e bolos de peixe incluem salsichas de peixe. Temperos incluem molhos, condimentos, maionese e vários flocos de peixe e vegetais. Esses podem ser preparados por meio de processos convencionais.

Veículos aceitáveis para ingredientes de alimentos e bebidas incluem adoçantes, tais como açúcar, glicose, frutose, açúcar líquido isome-rizado, frutooligossacarídeos, aspartame, sorbitol e estévia; colorantes, tais como corante vermelho de repolho, corante de pele de uva, corante de sa-bugo, caramelo, corante gardênia, corante de milho, corante de açafrão e caroteno; conservantes, tais como hidrolisato de pectina, ácido benzóico, ácido sórbico, ésteres de ácido paraoxibenzóico e sorbato de potássio; agentes de gelificação, tais como alginato de sódio, éster de alginato de pro-pileno glicol, glicolato de celulose de cálcio e glicolato de celulose de sódio; antioxidantes, tais como ácido L-ascórbico, tocoferol, ácido eritórbico e ruti-na; agentes para a fixação de cor, tais como sulfato ferroso, nitrito de sódio e nitrato de potássio; agentes de branqueamento, tais como bissulfito de sódio e metabissulfito de potássio; agentes para manutenção da qualidade, tal como propileno glicol; aperfeiçoadores de qualidade, tais como cloridrato de L-cisteína e lactato de estearila de cálcio; agentes de fermentação, tais como cloreto de amônio, hidrogeno d-tartato de potássio, carbonato de amônio, carbonato de potássio, bicarbonato de sódio e alume; emulsificantes, tais como lecitina, esfingolipídios, esterol vegetal, saponina de soja, alginato de sódio, éster de alginato de propileno glicol, caseinato de sódio, éster de ácido graxo de glicerina, éster de ácido graxo de sacarose e éster de ácido gra-xo de sorbitano; estabilizador de emulsão, tal como sulfato sódico de con-droitina; flavorizantes, tais como óleo de limão, óleo de eucalipto, óleo de hortelã-pimenta, extrato de baunilha, óleo de laranja, óleo de cebola, acetoa-cetato de etila, anisaldeído, etil vanilina, ácido cinâmico, acetato de citrone-lila, citral, vanilina, butirato de butila e ésteres; promotores de saúde, tais como ácido L-ascórbico, L-asparagina, L-alanina, inositol, L-glutamina, ca-roteno, tocoferol, vitamina A, ácido fólico, citrato de ferro, heme ferro e cálcio não-calcinado; aperfeiçoadores de farinha, tais como peróxido de benzoíla, perssulfato de amônio e dióxido de cloro; bactericidas, tais como pó de branqueamento, peróxido de hidrogênio e ácido hipocloroso; bases para goma de mascar, tais como ricinoleato de metil acetila, goma de éster, resina de acetato de vinila, poliisobutileno e polibuteno; agentes antiformação de grumos, tal como D-manitol; aglutinantes, tais como pirofosfato de sódio ácido, pirofosfato de potássio e pirofosfato de sódio; acidificantes, tais como ácido adípico, ácido cítrico, ácido glucônico, ácido succínico, ácido d-tartárico, ácido láctico e ácido dl-málico; e temperos, tais como extratos de frutos do mar, extratos de levedo, extratos de algas marinhas, suco de soja, purê de tomate, extratos de carne, vinho de arroz produtos de confeitaria Japonês para cozimento, purês de frutas, bonito fresco seco e cozido, L-aspartato de sódio, DL-alanina, L-arginina, L-glutamatos, 5-inosinato dissó-dico, citrato trissódico, ácido L-glutâmico, L-glutamato de sódio, ácido succínico, ácido L-tartárico e lactato de sódio.

Os compostos da fórmula (1) e/ou da fórmula (2) ou sais dos mesmos de acordo com a presente invenção podem ser proporcionados diretamente ou após diluição em água ou semelhante ou após concentração ou desintegração ou granulação em combinação com veículos conhecidos, na forma de aerossóis, soluções, extratos, suspensões, emulsões, pomadas, cataplasmas, ungüentos e loções. Alternativamente, eles são preparados através de seleção apropriada de componentes aquosos, tensoativos, componentes oleosos, solubilizantes, umectantes, componentes em pó, álcoois, modificadores de pH, conservantes, antioxidantes, espessantes, corantes, pigmentos e perfumes usados em cosméticos, quasi drogas e drogas. Eles também podem ser proporcionados em formas de dosagem para aplicação tópica à pele, tais como loções, géis, emulsões e pomadas.

Conforme usado aqui, produtos para cuidados com a pele incluem loções para a pele, tais como loção emoliente e loção adstringente; cremes, tais como creme emoliente, creme umidificante e creme de massagem; e emulsões, tais como emulsão emoliente, emulsão nutriente e emulsão de limpeza.

Cosméticos para maquiagem incluem lavagens faciais, limpadores de pele, bases, sombras, rímel e batons.

Cosméticos para os cabelos incluem xampus, cremes rinses, agentes para tratamento capilar, cremes para os cabelos, restauradores capilares, tônicos capilares, agentes para o crescimento dos cabelos e promotores para o crescimento dos cabelos. Produtos para o banho incluem óleos para o banho, sais de banho e espumas de banho. A concentração em alimentos e cosméticos não está especificamente limitada, mas é, de preferência, 0,0001-100% em peso, especialmente 0,001-50% em peso, expressa como sólidos secos.

Os exemplos experimentais a seguir e exemplos de processamento ilustram adicionalmente a presente invenção sem, contudo, limitar o escopo da presente invenção exclusivamente aos mesmos.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Exemplo de Preparação Folhas de chá preto chinês em uma quantidade de 5,0 kg produzidas na província de Fujian da China foram extraídas com 100 L de água quente e os extratos foram deixados esfriar e, então, aplicados sobre uma coluna acondicionada com 30 L de um adsorvente sintético (DIAION HP-21, Mitsubishi Chemical). As frações não-adsorvidas foram aplicadas sobre uma coluna acondicionada com 30 L de um adsorvente sintético (DIAION HP-21, Mitsubishi Chemical) e eluídas com concentrações serialmente crescentes de etanol em água (cada uma 60 L) a fim de proporcionar 4 frações [concentrações de etanol = 0% (OHF3N), 20% (OHD4N), 40% (OHF5N), 99,5% (OHF6N)].

Dentre essas 4 frações, a fração OHF3N mostrou o efeito inibitó-rio mais forte sobre o edema da orelha DNFB-induzido. A formação foi concentrada e congelada seca (517 g) e submetida à distribuição contra-corrente em um sistema de água-n-butanol (n = 7) e a fração após 7 transferências foi concentrada sob pressão reduzida (2,1 g). Então, o resultante foi aplicado sobre uma coluna acondicionada com Sephadex LH-20 (Pharmacia Biotech) e eluída com metanol e as frações na faixa de 1,9-2,2 Kd foram coletadas. As frações foram concentradas sob pressão reduzida e separadas através de HPLC sobre uma coluna SENSHU PAK DIOL-1251 (SENSHU Scientific, 4,6 x 250 mm) usando-se um solvente de hexano : metanol : te-trahidrofurano = 50:35:15 como uma fase móvel em uma taxa de fluxo de 1 ml/min (30 °C) e um pico (detectado através de UV a 280 nm) eluído em um tempo de retenção de 5,8 minutos foi coletado. Após concentração sob pressão reduzida, a fração foi purificada através de HPLC usando-se YMC-Pack ODS-A (YMC, 4,6 x 150 mm). O produto purificado foi coletado e, então, concentrado sob pressão reduzida a fim de proporcionar 980 pg de um pó amarelo-claro.

Como um resultado de análise estrutural através de técnicas es-pectrométricas, tais como RMN e EM, e análises por raios X (veja Tabela 1 e Tabela 2), o presente composto foi identificado como um composto da fórmula (1) [composto (1)] produzido através de condensação por desidratação intramolecular entre o 7-OH da Isovitexina (veja FIGURA 3) e o 1-OH sobre a cadeia de açúcar.

Tabela 1. Determinação estrutural do composto (2) através de 1H-RMN e 13C-RMN

Determinação estrutural do composto 1 através de 1H-RMN e 13C-RMN (pp. Em CD3OD) Tabela 2. Determinação estrutural do composto (1) através de análise por raios X

Durante o processo de purificação do composto (1), a fração OHF3N (517 g) foi submetida à distribuição contra-corrente em um sistema de água-n-butanol (n = 7) e a fração após 7 transferências foi concentrada sob pressão reduzida (2,1 g). Então, o resultante foi aplicado sobre uma coluna acondicionada com Sephadex LH-20 (Pharmacia Biotech) e eluída com metanol e as frações na faixa de 1,6-1,9 Kd foram coletadas. As frações fo- ram concentradas sob pressão reduzida e separadas através de HPLC sobre uma coluna SENSHU PAK DIOL-1251 (SENSHU Scientific, 4,6 x 250 mm) usando-se um solvente de hexano : metanol : tetrahidrofurano = 50:35:15 como uma fase móvel em uma taxa de fluxo de 1 ml/min (30 °C) e um pico (detectado através de UV a 280 nm) eluído em um tempo de retenção de 5,8 minutos foi coletado. Após concentração sob pressão reduzida, a fração foi purificada através de HPLC usando-se YMC-Pack ODS-A (YMC, 4,6 x 150 mm). O produto purificado foi coletado e, então, concentrado sob pressão reduzida a fim de proporcionar 147 μς de um pó amarelo-claro.

Como um resultado de análise estrutural através de técnicas es-pectrométricas, tais como RMN e EM, e análises por raios X (veja Tabela 3 e Tabela 4), o presente composto foi identificado como um composto da fórmula (2) [composto (2)] produzido através de condensação por desidratação intramolecular entre o 7-OH da Vitexina (veja FIGURA 3) e o 1-OH sobre a cadeia de açúcar.

Tabela 3. Determinação estrutural do composto (2) através de 1H~RMN e 13C-RMN

Determinação estrutural do composto 2 através de 1H-RMN e 13C-RMN (pp. Em CD3OD) Tabela 4. Determinação estrutural do composto (2) através de análise por raios X

Exemplo Experimental 1: Efeito inibitório sobre a dermatite de contato em orelha de camundonqo Camundongos do gênero ICR com 7 semanas de idade foram adquiridos da CLEA Japan e usados para os experimentos após pré-condicionamento durante 1 semana. O pó amarelo obtido no Exemplo 1 [composto (1)] foi suspenso em carboximetilcelulose de sódio a 0,5%/ácido clorídrico a 0,01 N a fim de preparar formulações de amostra em três concentrações correspondendo a doses de 0,2, 1,0 e 5,0 pg/kg em um volume de dose de 10 ml/kg. Infecção em seis camundongos por grupo foi estabelecida em 5 dias através de injeção subcutânea de 100 μΙ de uma solução de 2,4-dinitrofluorobenzeno (DNFB) a 1% em etanol no dorso. No dia 6, uma solução de DNFB a 1% em óleo de oliva foi aplicada sobre a orelha direita a fim de induzir a dermatite de contato. Após 24 horas, ambas as orelhas foram perfuradas em um diâmetro de 8 mm e pesadas. O composto (1) foi administrado de modo contínuo oralmente durante 7 dias a partir do dia antes do estímulo primário até o dia no qual o edema foi induzido. Um grupo de controle foi tratado com carboximetilcelulose de sódio a 0,5%/ácido clorídrico a 0,01 N. Os resultados experimentais foram expressos como o percentual médio de edema na orelha direita com relação à esquerda com desvio padrão usando t-teste de Student para avaliação da signíficância entre os grupos. Os resultados são mostrados na FIGURA 1. Conforme mostrado na Figura 1, o edema DNFB-induzido foi significativamente inibido no grupo tratado com 1,0 e 5,0 pg/ml de composto (1), quando comparado com o grupo de controle tratado com carboximetilcelulose de sódio a 0,5%/ácido clorídrico a 0,01 N.

Exemplo Experimental 2: Efeito inibitório sobre a dermatite de contato em orelha de camundongo Camundongos da cepa ICR com 7 semanas de idade foram adquiridos da CLEA Japan e usados para os experimentos após pré-condicionamento durante 1 semana. O pó amarelo obtido no Exemplo 1 [composto (2)] foi suspenso em carboximetilcelulose de sódio a 0,5%/ácido clorídrico a 0,01 N a fim de preparar formulações de amostra em três concentrações correspondendo a doses de 1,0, 10 e 100 μρ/kg em um volume de dose de 10 ml/kg. Infecção em seis camundongos por grupo foi estabelecida em 5 dias através de injeção subcutânea de 100 μΙ de uma solução de 2,4-dinitrofluorobenzeno (DNFB) a 1% em etanol no dorso. No dia 6, uma solução de DNFB a 1% em óleo de oliva foi aplicada sobre a orelha direita a fim de induzir a dermatite de contato na orelha. Após 24 horas, ambas as orelhas foram perfuradas em um diâmetro de 8 mm e pesadas. O composto (2) foi administrado de modo contínuo oralmente durante 7 dias a partir do dia antes do estímulo primário até o dia no qual o edema foi induzido. Um grupo de controle foi tratado com carboximetilcelulose de sódio a 0,5%/ácido clorídrico a 0,01 N. Os resultados experimentais foram expressos como o percentual médio de edema na orelha direita com relação à esquerda com desvio padrão usando t-teste de Student para avaliação da significância entre os grupos. Os resultados são mostrados na FIGURA 2. Conforme mostrado na Figura 2, o edema DNFB-induzido foi significativamente inibido no grupo tratado com 100 μο/ηιΙ de composto (2), quando comparado com o grupo de controle tratado com carboximetilcelulose de sódio a 0,5%/ácido clorídrico a 0,01 N.

Exemplo Experimental 3: Efeito inibitório sobre a liberação de histamina a partir de mastócitos peritoneal Ratos da cepa Wistar com 7 semanas de idade foram adquiridos da CLEA Japan e usados para os experimentos após pré-condicionamento durante 1 semana. Após os ratos da cepa Wistar terem sido decapitados sob anestesia com éter, solução Tyrode foi intraperitonealmente injetada. Mastó-citos foram rotineiramente isolados e suspensos a 1-3 x 108 células/ml em solução Tyrode contendo 0,1% de albumina de soro bovino (BSA) a fim de preparar uma suspensão de mastócitos. A suspensão de mastócitos foi incubada com composto (1) ou composto (2) dissolvido em metanol a 50% a 37 °C durante 5 minutos. Então, a suspensão foi ainda incubada com Composto 48/80 a 37 °C durante 10 minutos e esfriada sobre gelo e, então, centrifugada. Então, o teor de histamina livre no sobrenadante resultante foi medido através de cromatografia de líquido em alta velocidade por meio do método pós-coluna usando-se orto-ftalaldeído (OPA) de acordo com o método de Onda e outros [J. Med. Sei. 27, 93-97 (1978)]. Os resultados experimentais foram expressos como o percentual de liberação de histamina inibido através do tratamento com as amostras quando comparado ao tratamento com o solvente apenas. Os resultados são mostrados na Tabela 5. Tabela 5. Resultados do teste de inibição da liberação de histamina Exemplo 2: Comparação com os efeitos de um esteróide e outros flavonói-des Os mesmos procedimentos conforme nos Exemplos Experimentais 1 e 2 foram usados para comparar os efeitos inibitórios de um corti-costeróide e vários flavonóides (FIGURA 3) sobre a formação de edema da orelha DNFB-induzido com aqueles do composto (1) e do composto (2). Os resultados experimentais foram expressos como a dose que produz uma inibição de 50% do edema da orelha DNFB-induzido. Os resultados são mostrados na Tabela 6. A administração de composto (1) e composto (2) mostrou um efeito inibitório sobre a formação de edema da orelha em doses muito menores do que o corticosteróide ou outros flavonóides.

Tabela 6. Resultados de avaliação do efeito inibitório sobre a formação de edema da orelha Exemplo 3: Exemplo de Preparação de comprimidos Comprimidos tendo, cada um, um diâmetro de 10 mm e um peso de 300 mg foram preparados através de mistura de 150 g de composto (1) obtido no Exemplo 1 com a mesma quantidade de lactose e 5 g de estearato de magnésio e comprimindo-se essa mistura usando-se uma prensa para comprimidos com recalque único.

Exemplo 4: Exemplo de Preparação de grânulos Os comprimidos obtidos no Exemplo 3 foram triturados, granulados e peneirados a fim de proporcionar grânulos de 20-50 mesh.

Exemplo 5: Exemplo de Preparação de balas Os seguintes materiais foram usados para preparar balas de acordo com um processo convencional. Pó de sorbitol 99,7 g Perfume 0,2 g Composto (1) 0,05 g Semente de sorbitol 0,05 g Total 100 g Exemplo 6: Exemplo de Preparação de ooma de mascar Os seguintes materiais foram usados para preparar goma de mascar de acordo com um processo convencional.

Base para goma 20 g Carbonato de cálcio 2 g Esteviosídeo 0,1 g Composto (1) 0,05 g Lactose 76,85 g Perfume 1 g Total 100 g Exemplo 7: Exemplo de Preparação de suco de tangerina Os seguintes materiais foram usados para preparar suco de tangerina de acordo com um processo convencional.

Suco de tangerina concentrado congelado 5 g Xarope de frutose-glicose 10 g Ácido cítrico 0,2 g Ácido L-ascórbico 0,02 g Composto (1) 0,05 g Perfume 0,2 g Corante 0,1 g Água equilíbrio Total 100g Exemplo 8: Exemplo de Preparação de produtos de doces de qeléia Os seguintes materiais foram usados para preparar doces de geléia. Açúcar 500 g Xarope de amido 500 g Pectina 13 g Ácido cítrico 4 g Citrato de sódio 1,5 g Perfume 1 g Corante alimentício 0,2 g Composto (1) 0,5 g Uma mistura de 13 g de pectina e 20 g de açúcar foi homogene-amente dissolvida em 330 ml de água. A solução misturada foi combinada com ácido cítrico e citrato de sódio e fervida. A solução misturada foi combinada com xarope de amido e aquecida para 100 °C e, então, combinada com o restante do açúcar e aquecida para 109 °C. Após descansar durante vários minutos, a mistura foi agitada com o composto (1), perfume e corante e carregada em moldes de amido e seca a 50 °C ou menos durante 10 horas ou mais a fim de proporcionar doces de geléia.

Exemplo 9: Exemplo de Preparação de tempero de peixe Os seguintes materiais foram usados para preparar tempero de peixe.

Bacalhau fresco picado 100 g Sal 20 g Condimento 2 g Clara de ovo 10 g Composto (1) 0,5 g Bacalhau fresco picado foi amassado com sal, condimento e composto (1) e envelhecido. Então, a pasta foi formatada e cozida no vapor pré-aquecido em torno de 90-95 °C e, então, deixada esfriar para proporcionar um tempero de peixe.

Exemplo 10: Exemplo de Preparação de creme emoliente Os seguintes materiais foram usados para preparar creme emoliente de acordo com um processo convencional.

Cera de abelhas 2,0 g Álcool estearílico 5,0 g Ácido esteárico 8,0 g Esqualeno 10,0 g Monoestearato de propileno glicol de auto-emulsificação 3,0 g Polioxietileno cetil éter 1,0 g Perfume 0,5 g Conservante q.l.

Antioxidante q.l.

Propileno glicol 7,8 g Glicerina 4,0 g Hialuronato de sódio 0,15 g Composto (1) 0,05 g Trietanolamina 1,0 g Água purificada 57,5 g Exemplo 11: Exemplo de Preparação de xampu Os seguintes materiais foram usados para preparar xampu de acordo com um processo convencional.

Alquil éter sulfato de sódio 16,0 g Laurato de dietanolamida 4,0 g Propileno glicol 1,95 g Conservante, corante, perfume q.l.

Antioxidante q.l.

Composto (1) 0,05 g Água purificada 78,0 g APLICABILIDADE INDUSTRIAL

De acordo com a presente invenção, descobriu-se que novos derivados de C-glicosídeo de flavona contidos em folhas do chá preto chinês ou sais dos mesmos têm um efeito antialérgico acentuado e composições farmacêuticas, composições alimentícias ou cosméticos contendo os mesmos como ingredientes ativos podem ser proporcionados, conforme descrito acima.

REIVINDICAÇÕES

Claims (6)

1. Composição farmacêutica para a prevenção e/ou tratamento de uma doença alérgica, caracterizada pelo fato de que contém pelo menos um dos compostos da fórmula (1) ou fórmula (2): ou um sal do mesmo, bem como um conservante, em que a concentração dos compostos na composição farmacêutica é 0,001 a 50% em peso expressa como sólidos secos.

2. Composição alimentícia, caracterizada pelo fato de que contém pelo menos um dos compostos da fórmula (1) ou fórmula (2): ou um sal do mesmo como um componente antialérgico, bem como um conservante, em que a concentração dos compostos na composição alimentícia é 0,001 a 50% em peso expressa como sólidos secos.

3. Composição alimentícia de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de estar na forma de qualquer um de suplementos dietéticos ou outras bebidas nutrientes, bebidas saudáveis, chás saudáveis ou outras bebidas.

4. Composição alimentícia de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de estar na forma de qualquer um de produtos de confeitaria, pães, macarrão, produtos processados de soja, produtos lácteos, produtos processados de ovos, bolos de peixe, gorduras e óleos ou temperos.

5. Cosmético, caracterizado pelo fato de que contém pelo menos um dos compostos da fórmula (1) ou fórmula (2): ou um sal do mesmo como um componentes antialérgico, bem como um conservante, em que a concentração dos compostos na composição alimentícia é 0,001 a 50% em peso expressa como sólidos secos.

6. Cosmético de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de estar na forma de qualquer um de produtos para cuidados com a pele, produtos de maquiagem, cosméticos para os cabelos ou produtos para banho.