BRPI0607840B1 - Uso de uma composição imunogênica, e, kit - Google Patents

Abstract

usos de uma composição imunogênica, e de um antígeno de vzv, vacina ou composição imunogênica, e, kit. uso de uma composição imunogênica compreendendo vzv ge, ou um fragmento imunogênico do mesmo, e um adjuvante th- 1 na preparação de um medicamento para a prevenção ou a melhoria de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética. composições compreendendo um antígeno vzv ge truncado e um adjuvante contendo qs21, colesterol e mipl 3d também são descritos.

Description

[01] Esta invenção refere-se às composições capazes de induzir uma resposta imune contra o Vírus Varicela-Zoster.

[02] O Vírus Varicela-Zoster (VZV) é um vírus de herpes de humano que é o agente etiológico de catapora (varicela) e herpes-zoster (zoster). Varicela resulta de uma infecção inicial, ou primária, normalmente contraída durante a infância que é relativamente benigna. Contudo, para adultos que não foram expostos à varicela durante a infância, e ocasionalmente para indivíduos que estão imunocomprometidos, VZV pode ser ameaçador da vida. Similarmente, uma infecção por VZV pode ser ameaçadora da vida de recém-nascidos, porque o vírus é capaz de cruzar a placenta. Com contato direto, varicela é conhecidamente uma doença elevadamente transmissível.

[03] Similarmente à maioria dos Vírus do Herpes, VZV possui uma tendência para infectar algumas células nas quais seu desenvolvimento é reprimido. Após um período latente variável, o Vírus de Varicela-Zoster (VZ) pode ser liberado para iniciar a infecção em outras células. Esta reativação do vírus de VZ causa uma estimativa de 5 milhões de casos de zoster anualmente (Plotkin et al., Postgrad. Med. J. 61: 155-63 (1985)). Zoster é caracterizado por inflamação dos gânglios cerebrais e dos nervos periféricos, e está associado com dor aguda.

[04] Tem sido mostrado que humanos vacinados com cepas atenuadas de VZV têm recebido imunidade protetora contra infecções por VZV (Arbeter et al., J. Pediatr. 100 88693 (1982) e Brunell et al., Lancet ii: 1069- 72 (1982)). Em particular a cepa OKA de VZV tem sido usada em testes para a prevenção de herpes-zoster e de neuralgia pós-herpética potente. A cepa OKA também tem sido usada na preparação de vacinas de catapora por muitos anos e está bem caracterizada - por exemplo veja EP651789 e as referências da mesma.

[05] Um teste clínico grande usando a cepa OKA para indicação de zoster tem sido publicado em The New England Journal of Medicine 2005, número 22, Volume 352:2271-2284 (M.N. Oxman et al).

[06] Ainda há uma necessidade de vacinas melhoradas contra herpes-zoster e distúrbios relacionados tal como neuralgia pós-herpética (PHN).

Enunciado da Invenção Primeiro Aspecto

[07] A presente invenção proporciona em um primeiro aspecto uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de VZV ou um derivado imunogênico do mesmo em combinação com um VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro.

[08] A invenção refere-se em adição a uma composição de vacina compreendendo um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo em combinação com um VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro.

[09] A invenção refere-se em adição a um método de prevenção e/ou de diminuição da severidade de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós- herpética (PHN) compreendendo liberar a um indivíduo uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo em combinação com um VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro.

[010] Em uma outra modalidade a invenção refere-se a um método de prevenção e/ou de diminuição da severidade de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética, to método compreendendo liberação seqüencial ou concomitante a um indivíduo de um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo e o VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro.

[011] Em ainda outra modalidade a invenção refere-se a um kit compreendendo um VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro e, separadamente, um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo, os componentes adequados para liberação seqüencial ou concomitante, ou para misturação como uma composição única antes da liberação.

[012] A invenção também se refere a um método para a manufatura de uma composição imunogênica, o método compreendendo combinar um VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro com um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo.

[013] A invenção refere-se em adição ao uso de uma cepa de VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro e um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo na preparação de uma composição imunogênica para prevenir e/ou diminuir a severidade de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós- herpética.

Segundo aspecto

[014] Em um segundo a invenção refere-se a uma composição imunogênica e/ou vacina compreendendo gE ou um derivado imunogênico do mesmo ou fragmento imunogênico em combinação com um adjuvante-TH1.

[015] A invenção também se refere ao uso de uma composição compreendendo gE ou um derivado imunogênico do mesmo ou fragmento imunogênico em combinação com um adjuvante-TH1, na preparação de um medicamento para a prevenção ou melhoria de reativação de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética.

[016] A invenção também se refere a um método para a prevenção ou melhoria de reativação de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética, o método compreendendo liberar a um indivíduo em necessidade da mesma de uma composição imunogênica ou vacina compreendendo gE ou um derivado imunogênico do mesmo ou fragmento imunogênico em combinação com um adjuvante-TH1.

Figuras

[017] Figura 1 descreve a sequência de um VZV gE truncado (SEQ ID NO: 1).

[018] Figuras 2 - 4 descrevem respostas humorais obtidas em testes clínicos em humanos usando composições da invenção.

[019] Figuras 5 e 6 descrevem imunidade mediada por célula obtida em testes clínicos em humanos usando composições da invenção.

Descrição detalhada

[020] Em seu aspecto mais amplo a presente invenção refere-se às composições e aos regimes como aqui descritos para provocar uma resposta imune ao VZV. Em um aspecto a resposta imune gerada pela exposição a tais composições é adequadamente reprodutivamente mais alta e estatisticamente significativa quando comparada com aquelas obtidas em indivíduos que têm recebido nenhuma exposição às composições da invenção. A resposta imune pode ser avaliada por análise de qualquer um ou mais aspectos de resposta de CMI e/ou respostas de anticorpo usando qualquer uma das técnicas descritas abaixo.

[021] Em outro aspecto a invenção refere-se às abordagens para prevenir e/ou diminuir a severidade de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós- herpética (PHN). Para a evitação de dúvida, a invenção refere-se em um aspecto ao uso na prevenção da incidência de zoster. Onde zoster ocorre então a severidade da reativação de zoster é adequadamente reduzida comparada com um controle não vacinado (melhoria de zoster). Em um outro aspecto, onde zoster ocorre, a invenção refere-se ao uso na prevenção da incidência de PHN. Em um outro aspecto onde PHN ocorre então a severidade da PHN é adequadamente reduzida comparada com um controle não vacinado adequadamente (melhoria de PHN). Redução em severidade pode ser adequadamente avaliada por uma redução na dor causada por zoster ou PHN, por exemplo, usando medições conhecidas de carga de dor (e.g. Coplan et al J. Pain 2004; 5 (6) 344-56). Redução em severidade também pode ser avaliada por outros critérios tais como duração de zoster ou PHN, proporção de área corporal afetada por zoster ou PHN; ou o sítio de zoster/PHN.

[022] Os enunciados acima referem-se a todos os aspectos da invenção.

[023] Onde uma cepa atenuada viva é usada no primeiro aspecto da invenção, então em um aspecto a cepa de VZV atenuada viva é a cepa OKA, uma cepa bem conhecida na arte, por exemplo como descrito em Arbeter et al. (Journal of Pediatrics, vol 100, No 6, p886 ff), WO9402596, e referências da mesma, tal como US 3985615, todas aqui incorporadas como referência. Qualquer outra atenuada viva adequada também pode ser usada na invenção. Por exemplo, as cepas VarilrixTM e VarivaxTM são ambas apropriadas e estão comercialmente disponíveis e podem ser empregadas na invenção.

[024] Cepas de VZV inativadas inteiras, tal como VZV OKA inativada também são adequadas para uso na presente invenção.

[025] O antígeno de VZV para uso na invenção pode ser qualquer antígeno de VZV adequado ou derivado imunogênico do mesmo, adequadamente sendo um antígeno de VZV purificado.

[026] Em um aspecto o antígeno ou derivado é um que é capaz de gerar, quando liberado em combinação, concomitante ou seqüencialmente com uma cepa de VZV atenuada viva ou de VZV inativada inteira, uma resposta imune que é melhorada sobre aquela gerada pela cepa atenuada viva/cepa inativada inteira sozinha ou pelo antígeno de VZV sozinho. Uma tal resposta pode ser, por exemplo, melhorada em termos de uma ou mais de magnitude de resposta imune, duração de resposta imune, número ou % ou respondedores, ou a amplitude da resposta (e.g. a variedade de respostas de célula T ou anticorpo detectada), ou pode proporcionar uma melhoria em nível clínico em termos de incidência, redução de dor ou de sintomas. Melhorias na resposta imune podem ser avaliadas, por exemplo, por níveis d anticorpo ou por atividade de imunidade mediada por célula (CMI) usando técnicas padrão na arte; melhorias em nível clínico também podem ser avaliadas usando critérios clínicos conhecidos.

[027] Em particular, em um aspecto a resposta imune gerada pela composição ou vacina da presente invenção mostra um ou mais de:

[028] um aumento estatisticamente significativo em CMI e/ou resposta de anticorpo, em comparação com níveis de pré-vacinação, quando comparado com antígeno de VZV ou cepa atenuada viva/cepa inativada inteira sozinha;

[029] uma resposta de CMI multivalente melhorada, em comparação com níveis de pré-vacinação, quando comparada com Antígeno de VZV ou cepa atenuada viva/cepa inativada inteira sozinha. Uma resposta de CMI multivalente considera uma variedade de marcadores para CMI tais como (mas não limitados a) MN gama, IL2, TNF alfa e CD40L e uma resposta multivalente melhorada induz uma resposta de CMI através de uma variedade mais ampla de tais marcadores ou uma resposta mais alta em um ou mais dos marcadores quando comparada com um antígeno de VZV ou cepa atenuada viva/cepa inativada inteira sozinha;

[030] resposta de anticorpo ou CMI persistente melhor, em comparação com níveis de pré-vacinação, quando comparada com antígeno de VZV ou cepa atenuada viva/cepa inativada inteira sozinha. Em um aspecto persistência é medida após 1 mês, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 12 meses, 24 meses, 36 meses ou 48 meses.

[031] Em um aspecto melhorias na resposta imune são avaliadas na população de idosos, adequadamente em populações acima de 50 anos de idade, para as quais o risco de zoster ou PHN é aumentada com respeito à população abaixo de 50 anos de idade. Respostas imunes melhoradas também podem ser examinadas em populações imunocomprometidas. Em um aspecto tais populações são populações alvo para qualquer modalidade da presente invenção.

[032] Em um aspecto a população está acima de 50 anos, adequadamente acima de 60 anos, acima de 70 anos, ou até mesmo acima 80 anos e acima. Em um aspecto a população é de 50-70 anos de idade.

[033] Assim em um aspecto a invenção refere-se ao uso das composições e abordagens da invenção na prevenção e/ou diminuição da severidade de zoster ou PHN em humanos acima de 50 anos de idade.

[034] Em um aspecto a invenção refere-se ao uso das composições e abordagens da invenção na prevenção e/ou diminuição da severidade de zoster ou PHN em indivíduos imunocomprometidos, tais como pacientes de transplante ou aqueles que são positivos para HIV.

[035] O termo ‘derivado imunogênico’ inclui qualquer molécula que retém a capacidade para induzir uma resposta imune ao VZV após administração ao homem. Compostos imunogênicos aqui são adequadamente capazes de reagirem detectavelmente dentro de um imunoensaio (tal como um ensaio ELISA ou de estimulação de célula-T) com anti-soros e/ou células-T de um paciente com VZV. Seleção de atividade imunogênica pode ser realizada usando técnicas bem conhecidas pelo técnico experiente. Por exemplo, tais seleções podem ser realizadas usando métodos tais como aqueles descritos em Harlow e Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988.

[036] Métodos adequados para a geração de derivados são bem conhecidos na arte e incluem técnicas de biologia molecular padrão como descritas, por exemplo, em Sambrook et al [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, terceira edição, 2000, Cold Spring Harbor Laboratory Press], tais como técnicas para a adição, deleção, substituição ou rearranjo de aminoácidos ou suas modificações químicas. Em um aspecto os derivados incluem, por exemplo, truncações ou outros fragmentos.

[037] Em um aspecto derivados no contexto desta invenção são seqüências de aminoácidos compreendendo epítopos, i.e., determinantes antigênicos substancialmente responsáveis pelas propriedades imunogênicas de um polipeptídeo e sendo capazes de gerarem uma resposta imune, em um aspecto sendo epítopos de célula-T.

[038] Em um aspecto, o nível de atividade imunogênica do derivado imunogênico é pelo menos cerca de 50%, em um aspecto pelo menos cerca de 70% e em um aspecto pelo menos ou maior do que cerca de 90% da imunogenicidade para o polipeptídeo do qual ele é derivado, adequadamente como avaliado por técnicas de imunoensaio descritas acima. Em alguns aspectos da invenção podem ser identificadas porções imunogênicas que possuem um nível de atividade imunogênica maior do que aquele do polipeptídeo de comprimento total correspondente, e.g., possuindo mais do que cerca de 100% ou 150% ou mais atividade imunogênica.

[039] Em um aspecto o antígeno de VZV é uma glicoproteína, em um aspecto o antígeno gE (também conhecido como gp1), ou derivado imunogênico do mesmo.

[040] O antígeno gE, seus derivados sem âncora (que também são derivados imunogênicos) e sua produção são descritos em EP0405867 e referências da mesma [veja também Vafai A. “Antibody binding sites on truncated forms of varicalla-zoster virus gpI (gE) glycoprotein” Vaccine 1994 12:1265-9]. EP192902 também descreve gE e sua produção.

[041] A descrição de todos os documentos citados é aqui totalmente incorporada como referência.

[042] Em um aspecto gE é um gE truncado possuindo a sequência da Figura 1 (SEQ ID NO: 1) aqui, e como descrita em Virus Research, vol 40, 1996 p199 ff, aqui incorporado totalmente como referência. Referência à gE daqui em diante inclui referência à gE truncada, a não ser que seja de outro modo evidente do contexto.

[043] Outros antígenos adequados incluem, por meio de exemplo, gB, gH, gC, gI, IE63 (eg veja, Huang et al. J. Virol. 1992, 66: 2664, Sharp et al. J. Inf. Dis. 1992, 165:852, Debrus, J Virol. 1995 maio; 69(5):3240-5 e referências na mesma), 1E62 (eg veja Arvin et al. J. Immunol. 1991 146:257, Sabella J Virol. 1993 Dezembro; 67(12):7673-6 e referência na mesma) ORF4 ou ORF 10 ( Arvin et al. Viral Immunol. 2002 15: 507.)

[044] A presente invenção aqui também contempla que as combinações de antígenos podem ser usadas com o VZV atenuado vivo ou morto, e em um aspecto gE pode ser incluída em qualquer tal combinação. Em um aspecto a invenção refere-se às combinações de gE com 1E63 e gE com 1E62, por exemplo.

[045] Antígenos de VZV e derivados de antígenos de VZV podem ser testados para atividade imunogênica adequada pelo uso nos sistemas modelo como descrito nos Exemplos do presente pedido, ou por testes clínicos em humanos. Um ou mais dos seguintes indicadores de atividade são adequados para consideração em avaliação da atividade imunogênica:

[046] Respostas de célula T CD8 ou CD4 aumentadas ao VZV ou aos derivados de antígeno.

[047] Elevação em anticorpos específicos para derivado de antígenos ou VZV.

[048] Produção intensificada de citocinas tais como interferon Y ou IL-2 ou TNF α

[049] Expressão intensificada de CD40L sobre células T CD4 e CD8.

[050] Redução na incidência de zoster abaixo da incidência verificada na população geral de indivíduos similarmente sob risco, e igualmente severidade de doença e/ou dos associada reduzidas abaixo da incidência encontrada na população geral de indivíduos similarmente sob risco.

[051] Aumentos ou reduções, como descrito acima, são adequadamente estatisticamente significativos com respeito aos controles apropriados, tal como um grupo de idade igual não-vacinado. Em um aspecto o VZV atenuado vivo ou VZV morto e o antígeno de VZV ou derivados de antígeno de VZV não interferem significativamente um com os outros, de tal modo que quando usados em combinação os 2 componentes ainda são capazes de proporcionar uma resposta imunogênica ao VZV. Em um aspecto a resposta será uma resposta imunogênica, se os 2 componentes forem usados como uma composição ou usados em administração ou co-administração seqüencial. Será reconhecido que alguma interferência é tolerada, contudo, desde que a resposta imune protetora total seja melhorada de alguma maneira (aumentada em magnitude, respondedores % aumentados ou respostas antigênicas ampliadas, por exemplo) sobre aquela de qualquer um dos componentes individuais individualmente usados.

[052] Em um aspecto a invenção refere-se à combinação de antígeno gE e a cepa OKA, usada para administração concomitante ou seqüencial, em qualquer ordem. Se liberação é concomitante então os 2 componentes são liberados em sítios de injeção diferentes mas durante o mesmo dia, por exemplo. Em um aspecto rotas de liberação diferentes são usadas para os 2 componentes, em particular liberação subcutânea para a cepa de vírus tal como OKA e liberação intramuscular para o antígeno tal como gE.

[053] A presente invenção também se estende para cobrir, em todas as modalidades descritas, o uso de combinações de antígenos de VZV ou derivados com uma cepa de VZV atenuada viva ou VZV morto. Combinações adequadas de antígenos incluem em um aspecto gE ou derivado imunogênico do mesmo.

[054] A composição combinada, ou qualquer um dos ou ambos os componentes individuais pode(m) compreender adicionalmente um adjuvante ou imunoestimulante tal como mas não limitado a lipídeo A destoxificado de qualquer fonte e derivados não-tóxicos de lipídeo A, saponinas e outros reagentes, adequadamente capazes de estimularem uma resposta de tipo TH1.

[055] Em um aspecto a composição compreende um adjuvante capaz de estimular uma resposta de tipo TH1.

[056] Níveis altos de citocinas de tipo TH1 tendem a favorecer a indução de respostas imunes mediadas por célula a um dado antígeno, enquanto que níveis altos de citocinas de tipo Th2 tendem a favorecer a indução de respostas imunes humorais ao antígeno.

[057] A distinção de resposta imune de tipos Th1 e Th2 não é absoluta. Na realidade um indivíduo suportará uma resposta imune que é descrita como sendo predominantemente Th1 ou predominantemente Th2. Contudo, é muitas vezes conveniente considerar que famílias de citocinas em termos daquela descrita em clones de célula-T CD4 +ve de murino por Mosmann e Coffman (Mosmann, T.R. e Coffinan, R.L. (1989) “TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties”, Annual Review of Immunology, 7, p145-173). Tradicionalmente, resposta de tipo Th1 estão associadas com a produção de citocinas INF-y e IL-2 por linfócitos-T. Outras citocinas muitas vezes diretamente associadas com a indução de respostas imunes de tipo Th1 não são produzidas por células-T, tal como IL-12. Em contraste, respostas de tipo Th2 estão associadas com a secreção de IL-4, IL-5, IL-6, IL-10.

[058] Sistemas adjuvantes adequados que promovem uma resposta predominantemente Th1 incluem, monofosforil-lipídeo A ou um seu derivado, particularmente monofosforil-lipídeo 3-de-O-acilado. Há muito tempo tem sido sabido que lipopolissacarídeo (LPS) enterobacteriano é um estimulante potente do sistema imune, embora seu uso em adjuvantes tenha sido restringido por seus efeitos tóxicos. Um derivado não-tóxico de LPS, monofosforil-lipídeo A (MPL), produzido por remoção do grupo carboidrato núcleo e o fosfato da glicosamina de extremidade redutora, tem sido descrito por Ribi et al (1986, “Immunology e Immunopharmacology of bacterial endotoxins”, Plenum Publ. Corp., NY, p407-419) e possui a seguinte estrutura:

[059] Uma outra versão destoxificada de MPL resulta da remoção da cadeia acila da posição-3 da estrutura dorsal de dissacarídeo, e é chamado de monofosforil-lipídeo A 3-O-desacilado (MPL 3D). Pode ser purificado por métodos ensinados em GB 2122204B, cuja referência também descreve a preparação de difosforil-lipídeo A, e de suas variantes 3-O-desaciladas.

[060] Em um aspecto MPL 3D está na forma de uma emulsão possuindo um tamanho de partícula pequeno menor do que 0,2 μm em diâmetro, e seu método de manufatura é descrito em WO 94/21292. Formulações aquosas compreendendo monofosforil-lipídeo A e um tensoativo tem sido descritas em WO9843670A2.

[061] Os adjuvantes derivados de lipopolissacarídeo bacteriano a serem formulados nas composições da presente invenção podem ser purificados e processados de fontes bacterianas, ou alternativamente podem ser sintéticos. Por exemplo, monofosforil-lipídeo A purificado é descrito em Ribi et al 1986 (supra), e monofosforil-lipídeo A 3-O-desacilado ou derivado de Salmonella sp. é descrito em GB 2220211 e US 4912094. Outros lipopolissacarídeos sintéticos e purificados têm sido descritos (Hilgers et al., 1986, Int. Arch. Allergy. Immunol., 79(4):392-6; Hilgers et al., 1987, Immunology, 60(1):141-6; e EP 0 549 074 B1). Em um aspecto to adjuvante lipopolissacarídeo bacteriano é MPL 3D.

[062] Conseqüentemente, os derivados de LPS que podem ser usados na presente invenção são aqueles imunoestimulantes que são estruturalmente similares à estrutura de LPS ou MPL ou MPL 3D. Em outra modalidade da presente invenção os derivados de LPS podem ser monossacarídeo acilado, que é uma sub-porção da estrutura acima de MPL.

[063] Saponinas são ensinadas em: Lacaille-Dubois, M e Wagner H. (1996. “A review of the biological and pharmacological activities of saponins”, Phytomedicine vol 2 pp 363386). Saponinas são glicosídeos de triterpeno ou esteroidais amplamente distribuídos nos reinos marinho, animal e vegetal. Saponinas notadamente formam soluções coloidais em água que espumam quando agitadas, e precipitam colesterol. Quando saponinas estão próximas de membranas celulares elas formam estruturas semelhantes a poro na membrana que causam o rompimento da membrana. Hemólise de eritrócitos é um exemplo deste fenômeno, que é uma propriedade de certas, mas de nem todas, as saponinas.

[064] Saponinas são conhecidas como adjuvantes em vacinas para administração sistêmica. A atividade adjuvante e hemolítica de saponinas individuais tem sido extensivamente estudada na arte (Lacaille-Dubois e Wagner, supra). Por exemplo, Quil A (derivado de casca da árvore sul americana Quillaja Saponaria Molina), e suas frações, são descritos em US 5.057.540 e "Saponins as vaccine adjuvants", Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2):1-55; e EP 0 362 279 B1. Estruturas particuladas, chamadas de Complexos Estimulantes Imunes (ISCOMS), compreendendo frações de Quil A são hemolíticas e têm sido usadas na manufatura de vacinas (Morein, B., EP 0 109 942 B1; WO 96/11711; WO 96/33739). As saponinas hemolíticas QS21 e QS17 (frações de Quil A purificadas por HPLC) têm sido descritas como adjuvantes sistêmicos potentes, e o método de sua produção é descrito em Patente U.S. de No. 5.057.540 e EP 0.362.279 B1. Outras saponinas que têm sido usadas em estudos de vacinação sistêmica incluem aquelas derivadas de outras espécies de planta tais como Gypsophila e Saponaria (Bomford et al., Vaccine, l0(9):572-577, 1992).

[065] Um sistema intensificado envolve a combinação de um derivado de lipídeo A não-tóxico e um derivado de saponina particularmente a combinação de QS21 e MPL 3D como descrito em WO 94/00153, ou uma composição menos reatogênica na qual a QS21 está extinta com colesterol como descrito em WO 96/33739. Em um aspecto a combinação de QS21 com MPL 3D é usada na presente invenção.

[066] Em um aspecto o adjuvante para uso na invenção compreende QS21 e uma formulação lipossômica compreendendo colesterol e MPL 3D.

[067] Uma formulação adjuvante particularmente potente envolvendo QS21 e MPL 3D em uma emulsão de óleo em água é descrita em WO 95/17210 e é também adequada para uso na presente invenção.

[068] Conseqüentemente em uma modalidade da presente invenção é proporcionada uma composição compreendendo um derivado ou antígeno de VZV da presente invenção adjuvantada com lipídeo A destoxificado ou um derivado não-tóxico de lipídeo A. Em um aspecto a composição é adjuvantada com um monofosforil-lipídeo A ou seu derivado.

[069] Em um aspecto a composição adicionalmente compreende uma saponina, que em um aspecto é QS21, e em outro aspecto é QS21 extinta com colesterol como descrito em WO 96/33739.

[070] A composição imunogênica da invenção opcionalmente compreende uma emulsão de óleo em água, que pode ser usada em combinação com outros adjuvantes tais como QS21 e/ou MPL 3D como descritos acima. Formulações de adjuvante compreendendo uma emulsão de óleo em água são descritas em WO9911241 e WO9912565, aqui incorporadas como referência.

[071] Uma escolha de adjuvante alternativa é dinucleotídeos CpG não metilados ("CpG"). CpG é uma abreviação para motivos de dinucleotídeo citosina-guanosina presentes em ácido nucleico. Oligonucleotídeos CpG são descritos em WO 96/02555 e EP 468520.

[072] Em um aspecto uma combinação de quaisquer dos adjuvantes da invenção aqui descritos (QS21 ou QS21 extinto com colesterol + 3DMPL, opcionalmente com uma emulsão de óleo em água) é usada com gE, ou derivado imunogênico do mesmo, usada em administração concomitante ou seqüencial com um VZV atenuado vivo ou VZV inteiro inativado.

[073] A presente invenção também proporciona um método para produzir um kit utilizável para indução de uma resposta imune contra zoster, o método compreendendo misturar uma preparação de antígeno de VZV da presente invenção juntamente com um adjuvante ou combinação de adjuvantes, e combinar um kit com um VZV atenuado vivo.

[074] A quantidade de antígeno de VZV é selecionada como uma quantidade que induz uma resposta imunoprotetora sem efeitos colaterais adversos em vacinas típicas. Tal quantidade variará dependendo de qual imunogene específico é empregado e como ele é apresentado. Geralmente, é esperado que cada dose compreenda 1-1.000 μg de proteína, tal como 2-100 μg, ou 5-60 μg. Se gE for usado então em um aspecto 25-100 μg de gE pode ser usado em humanos, tal como 40-100 μg de gE para uso humano, em um aspecto cerca de 25 μg, cerca de 50 μg ou cerca de 100 μg de gE, adequadamente 25 μg, 50 μg ou 100 μg de gE. Para a cepa OKA, por exemplo, uma dose adequada e 500-50.000 pfu/0,5 ml, tal como 2.000-6000 pfu/0,5 ml, com uma dose adequada de cepa GSK Varilrix Oka por exemplo sendo 6.000-25.000 por dose, por exemplo 10.000 pfu/dose. Doses maiores tais como 30.000 pfu, 40.000 pfu, 50.000 pfu 60.000 pfu, 70.000 pfu, 80000 pfu, 90000 pfu ou até mesmo 100.000 pfu podem ser empregadas.

[075] Uma quantidade opcional para uma vacina particular pode ser determinada para por estudos padrão envolvendo observação de respostas imunes apropriadas em indivíduos. Após uma vacinação inicial, indivíduos podem receber uma ou várias imunizações de reforço adequadamente espaçadas.

[076] A(s) composição(ões) da presente invenção pode(m) ser formulada(s) para qualquer maneira apropriada de administração, incluindo, por exemplo, administração tópica, oral, nasal, mucosal, intravenosa, intradermal, intraperitoneal, subcutânea e intramuscular. Liberação da cepa OKA é, em um aspecto, por liberação subcutânea.

[077] A composição imunogênica da presente invenção pode ser usada em uma composição de vacina, opcionalmente em combinação com um adjuvante e/ou (outro) carreador adequado.

[078] O antígeno de VZV e o VZV atenuado da presente invenção podem ser usados juntos em uma composição para provocarem uma resposta imune ao VZV, ou separadamente - quer concomitantemente quer seqüencialmente em um regime de reforço de vacinação inicial. Para liberação concomitante ou seqüencial os componentes da vacina podem ser usados em qualquer ordem. Em uma modalidade, liberação de um VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro é seguida por um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo. Em outra modalidade liberação de um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo é seguida por liberação de VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro.

[079] A invenção refere-se em adição a um método de prevenção e/ou de diminuição da severidade de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós- herpética compreendendo liberar a um indivíduo sob risco de zoster uma composição imunogênica compreendendo um VZV atenuado vivo e um antígeno de VZV.

[080] Em uma outra modalidade a invenção refere-se a um método de prevenção e/ou de diminuição da severidade de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética compreendendo liberação seqüencial ou concomitante em um indivíduo sob risco de zoster de um VZV atenuado vivo e um antígeno de VZV.

[081] Em um aspecto a invenção refere-se um regime de reforço primário no qual um antígeno de VZV, em um aspecto um antígeno adjuvantado, é liberado primeiro, após o qual o sistema imune é reforçado com liberação de um VZV atenuado.

[082] Um regime de reforço de vacinação inicial em humanos compreende, em um aspecto, vacinação inicial com 25-100 μg de gE, em um aspecto 40 -100 μg de gE, tal como 50 μg ou cerca de 50 μg de gE, ou um derivado imunogênico do mesmo, adjuvantado com QS21 (por exemplo QS21 extinto com colesterol como descrito acima) e MPL 3D, e reforço com a cepa OKA e VZV.

[083] Se forem usado regimes de reforço de vacinação inicial, ou se regimes de vacinação múltipla forem usados, então 2, 3, 4 ou mais imunizações podem ser empregadas. Regimes adequados para reforço de vacinação inicial incluem 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 meses entre as imunizações individuais.

[084] Um horário de reforço de vacinação inicial compreende, em um aspecto, liberação de um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo, adequadamente um derivado antígeno de VZV adjuvantado, a 0 meses e reforço com um VZV atenuado vivo a 2M.

[085] Em um horário de liberação alternativo há a liberação concomitante de ambos os dois componentes individuais (derivado ou antígeno de VZV e VZV atenuado vivo) em ambos 0 e 2 meses.

[086] Em ainda outra modalidade a invenção refere-se a um kit compreendendo um VZV atenuado vivo ou VZV atenuado inteiro e um antígeno de VZV.

[087] A invenção também se refere a um método para a manufatura de uma composição imunogênica, o método compreendendo combinar um VZV atenuado vivo/inteiro atenuado e um antígeno de VZV.

[088] A invenção refere-se em adição ao uso de uma cepa de VZV atenuada viva na preparação de uma vacina de combinação com um antígeno de VZV para a prevenção de herpes-zoster, e ao uso de um antígeno de VZV na preparação de uma vacina de combinação com uma cepa de VZV atenuado vivo para a prevenção de herpes-zoster.

[089] Em um segundo aspecto da invenção um antígeno gE, ou derivado imunogênico do mesmo ou fragmento imunogênico, pode ser usado com um adjuvante para proporcionar uma composição imunogênica ou vacina. Isto é, o antígeno gE ou derivado imunogênico do mesmo ou fragmento imunogênico pode ser usado em um horário de vacinação na ausência de uma cepa atenuada viva ou de uma cepa atenuada inteira.

[090] Assim o segundo aspecto da invenção refere-se a uma composição imunogênica ou vacina compreendendo gE ou derivado imunogênico do mesmo ou fragmento imunogênico em combinação com um adjuvante-TH1.

[091] A invenção particularmente também se refere ao uso de uma composição compreendendo gE ou um derivado imunogênico do mesmo ou fragmento imunogênico em combinação com um adjuvante TH1, na preparação de um medicamento para a prevenção ou melhoria de reativação de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética.

[092] O termo "derivado imunogênico" com respeito ao gE é como descrito acima, juntamente com métodos para obter tais derivados tais como fragmentos de gE. Fragmentos imunogênicos como aqui descritos são derivados imunogênicos que retêm a capacidade para induzir uma resposta imune ao VZV após administração ao homem.

[093] Em um aspecto a invenção um truncado de gE é usado no qual gE possui uma truncação C-terminal.

[094] Em um aspecto a truncação remove de 4 a 20 por cento dos resíduos de aminoácidos totais na extremidade carbóxi-terminal.

[095] Em um aspecto o gE é faltante da região de âncora carbóxi- terminal (adequadamente aproximadamente aminoácidos 547- 623 da seqüência de tipo selvagem).

[096] Em um aspecto gE é um gE truncado possuindo a sequência da Figura 1 (SEQ ID NO: 1) aqui, e como descrito em Virus Research, (Haumont et al Vol 40, 1996 p199- 204), aqui totalmente incorporado como referência.

[097] Referência à gE daqui em diante inclui referência à gE truncada, ou outros fragmentos ou derivados de gE, a não ser que seja evidente de outro modo a partir do contexto.

[098] Em outro aspecto da invenção a composição compreende gE de comprimento total.

[099] Em outro aspecto o gE ou seu derivado ou fragmento está liofilizado. Em outro aspecto o gE ou seu fragmento ou derivado é reconstituído em uma solução contendo um adjuvante (tal como um adjuvante contendo QS21, colesterol e MPL 3D) antes da liberação.

[0100] Em uma modalidade a composição ou vacina compreende gE e um adjuvante TH-1 e não compreende um antígeno 1E63 ou sua porção. Em uma modalidade a composição ou vacina compreende gE e um adjuvante TH- 1 e não compreende qualquer outro antígeno viral.

[0101] Em um aspecto o gE ou fragmento imunogênico do mesmo não está na forma de uma proteína de fusão.

[0102] Em um aspecto a composição ou vacina consiste essencialmente de QS21, um antígeno VZV gE truncado e lipossomas compreendendo colesterol e MPL 3D.

[0103] Em um aspecto a composição ou vacina consiste de MPL 3D, QS21, um antígeno VZV gE truncado, lipossomas compreendendo colesterol e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0104] A composição pode ser usada na preparação de um medicamento para a prevenção ou melhoria de reativação de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética.

[0105] A composição ou vacina é adequadamente usada na população de pessoas de 50 anos ou mais velhas do que 50 anos. Adequadamente a população é a população daquelas pessoas mais velhas do que 55, 60, 65, 70, 75, 80, ou mais velhas do que 80 anos. Adequadamente a população é de 5070 anos.

[0106] Em um aspecto a população de indivíduos é daqueles que têm tido varicela ou que têm tomado uma vacina de varicela viva.

[0107] Assim a invenção refere-se ao uso de uma composição como descrita acima na preparação de um medicamento para a prevenção ou melhoria de reativação de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética em uma população de pessoas de 50 anos ou acima.

[0108] A invenção assim também se refere a um método para a prevenção ou melhoria de reativação de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós- herpética, o método compreendendo liberar a um indivíduo em necessidade da mesma de uma composição da invenção.

[0109] Em um aspecto a composição dos primeiro e segundo aspectos da invenção é usada naqueles indivíduos nos quais o vírus de varicela zoster não tem sido reativado.

[0110] A composição pode ser usada em doses e rotas de liberação como descritas acima para o primeiro aspecto da invenção. Especificamente a quantidade de antígeno gE é selecionado como uma quantidade que induz uma resposta imunoprotetora sem efeitos colaterais adversos, significativos em vacinas típicas. Tal quantidade variará dependendo de qual imunogene específico é empregado e como ele é apresentado. Geralmente, é esperado que cada dose compreenda 1-1.000 μg de proteína, ta como 2-100 μg, ou 5-60 μg. Se gE for usado então adequadamente 25-100 μg de gE será usado, em um aspecto 40-100 μg de gE, tal como cerca de 25 μg, 50 μg ou cerca de 100 μg de gE, adequadamente 25 μg, 50 μg ou 100μg de gE. Uma quantidade ótima para uma vacina particular pode ser determinada por estudos padrão envolvendo observação de respostas imunes apropriadas em indivíduos. Após uma vacinação inicial, indivíduos podem receber uma ou mais imunizações de reforço adequadamente espaçadas.

[0111] Em um aspecto a vacina ou composição de gE e adjuvante é usada em um regime de liberação de dose. Em um aspecto a vacina ou composição de gE e adjuvante é usada em um regime de liberação de duas doses.

[0112] Em um aspecto a composição ou vacina da invenção é usada em um regime de 2 doses com um espaçamento de 2 meses entre as doses.

[0113] Em um aspecto o adjuvante TH-1 é qualquer adjuvante identificado acima para o primeiro aspecto da invenção. Em particular, uma combinação de MPL 3D e QS21 pode ser usada, por exemplo como descrito em WO94/00153, ou uma composição menos reatogênica onde o QS21 está extinto com colesterol como descrito em WO 96/33739 e US6846489. Um adjuvante alternativo compreendes QS21 e MPL 3D em uma emulsão de óleo em água como descrito em WO 95/17210.

[0114] Em um aspecto uma formulação compreende uma truncação C-terminal do antígeno VZV gE, por exemplo como dado na Figura 1 e na SEQ ID NO: 1, em combinação com MPL 3D e QS21.

[0115] Em outro aspecto a invenção refere-se a um kit compreendendo, como componentes separados, um adjuvante TH-1 e um antígeno gE ou fragmento imunogênico do mesmo, como descrito acima, adequado para preparação extemporânea de uma composição de vacina. Em um aspecto ambos os componentes são líquidos. Em um aspecto um componente está liofilizado e é adequado para reconstituição com o outro componente. Em um aspecto o kit compreende um antígeno gE possuindo a sequência da Figura 1 (SEQ ID NO: 1) e um adjuvante compreendendo QS21 e lipossomas compreendendo colesterol e MPL 3D.

[0116] Preparação de vacina é geralmente descrita em “New Trends and Developments in Vaccines”, Voller et al. (eds), University Park Press, Baltimore, Maryland, 1978.

[0117] Aspectos da presente invenção incluem:

[0118] A Uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo em combinação com um VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro.

[0119] B Um método de prevenção e/ou de diminuição da severidade de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética (PHN) compreendendo liberar a um indivíduo uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo em combinação com um VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro.

[0120] C Um método de prevenção e/ou de diminuição da severidade de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética, o método compreendendo liberação seqüencial ou concomitante a um indivíduo de um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo e um VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro.

[0121] D Um método de acordo com o parágrafo C no qual um antígeno de VZV é liberado antes do VZV atenuado vivo.

[0122] E Um método de acordo com o parágrafo C no qual um antígeno de VZV é liberado depois do VZV atenuado vivo.

[0123] F Um método de acordo com o parágrafo C no qual um antígeno de VZV é liberado concomitantemente com VZV atenuado vivo, preferivelmente com cada componente em um braço diferente de um paciente.

[0124] G Um kit compreendendo um VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro e, separadamente, um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo, os componentes adequados para liberação seqüencial ou concomitante, ou para misturação como uma composição única antes da liberação.

[0125] H Método para a manufatura de uma composição imunogênica, o método compreendendo combinar um VZV atenuado vivo ou VZV inativado inteiro com um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo.

[0126] I Uso de uma cepa de VZV atenuado vivo na preparação de uma composição imunogênica para prevenir e/ou diminuir a severidade de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética, no qual a cepa de VZV atenuada viva é usada em combinação com um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo.

[0127] J Uso de uma cepa de VZV atenuado inteiro na preparação de uma composição imunogênica para prevenir e/ou diminuir a severidade de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética, no qual a cepa de VZV atenuado inteiro é usada em combinação com um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo.

[0128] K Uso de um antígeno de VZV ou derivado imunogênico do mesmo na preparação de uma composição imunogênica para prevenir e/ou diminuir a severidade de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética, no qual o antígeno de VZV é usado em combinação com uma cepa de VZV atenuada viva ou cepa de VZV inativada inteira.

[0129] L Uso de acordo com qualquer um dos parágrafos I-K no qual o antígeno ou seu derivado é liberado em uma abordagem de reforço de vacinação inicial antes da cepa de VZV.

[0130] M Uso de acordo com qualquer um dos parágrafos I-K no qual no qual o antígeno ou seu derivado é liberado em uma abordagem de reforço de vacinação inicial depois da cepa de VZV.

[0131] N Uso de acordo com qualquer um dos parágrafos I-K no qual o antígeno ou seu derivado é liberado concomitantemente com a cepa de VZV.

[0132] O Uso de acordo com qualquer um dos parágrafos I-K no qual o antígeno ou seu derivado é liberado misturado com a cepa de VZV.

[0133] P Um uso, método, kit, ou composição de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes no qual a cepa de VZV atenuada viva é a cepa OKA.

[0134] Q Um uso, método, kit, ou composição de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes no qual o antígeno de VZV é o antígeno gE ou derivado imunogênico do mesmo.

[0135] R Um uso, método, kit, ou composição de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes no qual o antígeno de VZV é liberado com um adjuvante capaz de estimular uma resposta de tipo TH1.

[0136] A presente invenção é ilustrada pelos seguintes Exemplos não limitantes. Exemplo 1

[0137] Os grupos experimentais podem ser configurados para estudar ambos os aspectos da invenção: Regime 1 50 μg de gE + adjuvante AS1 (MPL® QS21) 0, 2 meses 2 cepa OKA (VarilrixTM) - 10.000 pfu/dose 0, 2 meses 3 Administração concomitante de 50 μg de gE + 0, 2 meses grupo AS1 (como em 1) com VarilrixTM (como MPL® = MPL 3D

[0138] O gE usado pode ser gE truncado, como descrito na Figura 1 e na SEQ ID NO: 1. VarilrixTM é uma cepa OKA comercialmente disponível.

[0139] Voluntários humanos (por exemplo, 50 por grupo - saudáveis, idade de 50-70 anos) podem ser selecionados para serem vacinados de acordo com o protocolo acima, e os resultados podem ser avaliados por medição de ambas a imunidade mediada por célula e as respostas de anticorpo, por exemplo por técnicas de coloração intracelular (ICS, Roederer et al. 2004 Clin. Immunol. 110: 199) ou de ELISA respectivamente, estas sendo bem conhecidas na arte.

[0140] Imunidade medida por célula específica pode ser avaliada por, por exemplo, incubação in vitro de PBMC de paciente com extratos de vírus de varicela-zoster bem como antígenos específicos de VZV ou peptídeos gE, 1E63 e 1E62. Análise pode ser feita em nível de, por exemplo:

[0141] a Linfoproliferação (dados expressados como Índice de Estimulação [SI]): GM, aumento de vezes em GM e % de respondedores

[0142] b Análise de expressão de IFNY ou IL2 ou TNFα, ou CD 40L por células CD4 e CD8 por ICS (coloração de citocina intracelular): GM, aumento de vezes em GM e % de respondedores

[0143] Eficácia pode ser avaliada pela procura de um aumento significativo em CMI e/ou resposta de anticorpo em comparação com níveis de pré-vacinação.

[0144] Eficácia de outros antígenos ou abordagens pode ser avaliada usando estas técnicas ou técnicas similares, e comparando os níveis de pré- vacinação com níveis de pós-vacinação. Exemplo 2

[0145] O experimento do Exemplo 1 foi realizado em voluntários humanos de idades diferentes, como segue: Grupo A gE AS1 em adultos de 18-30 anos Grupo B gE liberado concomitantemente com a cepa Varilrix OKA, em adultos de 18 -30 anos Grupo C cepa Varilrix OKA apenas em adultos de 50-70 anos Grupo D gE AS1 em adultos de 50-70 anos Grupo E gE liberado concomitantemente com a cepa Varilrix OKA, em adultos de 50-70 anos O horário de vacinação foi como segue: Grupo Idade (anos) N Vacina 1 (Mês 0) Vacina 2 (Mês 2) A 18-30 10 gE-AS1 gE-AS1 B 18-30 10 gE-AS1 + VarilrixTM gE AS1+VarilrixTM C 50-70 45 VarilrixTM VarilrixTM D 50-70 45 gE-AS1 gE-AS1 E 50-70 45 gE-AS1 + VarilrixTM gE-AS1+VarilrixTM

[0146] O adjuvante AS1 compreende MPL 3D e QS21 em uma forma extinta com colesterol, e foi preparado como descrito em WO9633739, aqui incorporada como referência. Em particular o adjuvante AS1 foi preparado essencialmente como no Exemplo 1.1 de WO9633739. O adjuvante compreende: lipossomas, que por sua vez compreendem fosfatidilcolina (DOPC), colesterol e MPL 3D [em uma quantidade de 1000 μg de DOPC, 250 μg de colesterol e 50 μg de MPL 3D, cada valor dado aproximadamente por dose de vacina], QS21 [50 μg/dose], PBS e água para um volume de 0,5 ml.

[0147] No processo de produção de lipossomas contendo MPL o DOPC (Dioleil fosfatidilcolina), colesterol e MPL são dissolvidos em etanol. Um filme de lipídeo é formado por evaporação de solvente sob vácuo. Solução Salina de Tampão Fosfato ou PBS (Na2HPO4 9 mM, KH2PO4 41 mM, NaCl 100 mM) em pH 6,1 é adicionado e a mistura é submetida à pré-homogeneização seguida por microfluidização a 103,42 MPa (20 ciclos). Isto leva à produção de lipossomas que são esterilmente filtrados através de uma membrana de 0,22 μm em uma área asséptica (classe 100). O produto estéril é então distribuído em recipientes de vidro estéreis e armazenado em ambiente frio (+2oC a +8oC). Neste modo os lipossomas produzidos contêm MPL na membrana (o "MPL em" modalidade de WO9633739).

[0148] O gE truncado da Figura 1 (SEQ ID NO: 1) foi expressado em células CHO K1 usando técnicas padrão e purificado usando, em ordem, cromatografia de troca aniônica, cromatografia de interação hidrofóbica, cromatografia de troca iônica, diafiltração, e nanofiltração seguidas por esterilização através de um filtro de 0,22 μm.

[0149] Em particular, as seguintes etapas foram usadas na purificação de gE Primeiro estágio: cromatografia de troca aniônica

[0150] O sobrenadante da cultura contendo o gE (aproximadamente 30 mg/L) é purificado, quer diretamente após clarificação da suspensão celular quer após descongelamento a 4oC. Após transferência para garrafão de 20 litros, o pH do sobrenadante é ajustado para 6.

[0151] O estágio de captura ocorre na temperatura ambiente em uma coluna de cromatografia contendo uma resina Q Sepharose XL.

[0152] Após sanitização com hidróxido de sódio, a coluna é condicionada no tampão de captura (piperazina 20 mM pH 6). O sobrenadante é então carregado na coluna e a coluna é lavada com tampão de equilibração e uma solução de piperazina 20 mM + NaCl 150 mM de pH 6.

[0153] A fração contendo o gE é então eluída com uma solução de piperazina 20 mM + NaCl 250 mM de pH 6. Segundo estágio: cromatografia de interação hidrofóbica

[0154] Este estágio de cromatografia ocorre em temperatura ambiente em uma resina Toyopearl butyl-650 M (Tosoh Biosep).

[0155] A fração eluída com piperazina 20 mM + NaCl 250 mM no estágio de Q Sepharose XL é composta para sulfato de amônio 1 M e ajustada para pH 7,5.

[0156] Após sanitização com hidróxido de sódio e antes do carregamento desta fração, a coluna é condicionada no tampão de captura (KH2PO4 50 mM + sulfato de amônio 1M pH 7,5). Após carregamento, a coluna é lavada com tampão KH2PO4 50 mM + (NH4)2SO4 100 mM de pH 7,5. O gE é eluído com tampão KH2PO4 50 mM + (NH4)2SO4 25 mM de pH 7,5. Terceiro estágio: cromatografia de afinidade sobre íon de metal imobilizado

[0157] Este estágio de cromatografia ocorre em temperatura ambiente em uma resina Chelating Sepharose Fast Flow. A resina é saturada em íon de metal (Ni) por aplicação de uma solução de sulfato de níquel (1%) e os íons (Ni) não ligados em excesso, são removidos por lavagem. A fração de gE eluída por KH2PO4 50 mM + (NH4)2SO4 25 mM de pH 7,5 na fase hidrofóbica é composta para NaCl 0,5 M e ajustada para pH 7,5.

[0158] Após sanitização, a coluna é equilibrada com tampão de captura (KH2PO4 50 mM + NaCl 0,5 M de pH 7,5). A solução de gE é carregada na coluna, que é então lavada com uma solução de KH2PO4 50 mM + NaCl 0,5 M de pH 5,6. O gE é então eluído com um tampão de acetato de sódio 50 mM + NaCl 0,5 M de pH 5, e neutralizado com uma solução de Tris 1 M de pH 9,5. Quarto estágio: diafiltração

[0159] A troca de tampão e a eliminação de sais da fração de gE eluída em pH 5 no estágio anterior são realizadas por ultrafiltração tangencial. Este estágio é realizado inteiramente a +4oC.

[0160] A ultrafiltração é corrida pelo sistema Millipore Proflux M12, equipado com uma membrana Pellicon2 Mini de 10 kDa de celulose regenerada (cat: P2C010C01) de peso molecular nominal limite e uma área superficial de 0,1 m2 posicionada dentro de um invólucro de mini-cassete Pellicon2 (cat.XX42PMINI).

[0161] Após enxágüe com água e sanitização com hidróxido de sódio, o sistema inteiro com membrana é enxaguado com 2 litros de tampão PBS modificado ( = Na2HPO4.2H2O 8,1 mM, KH2PO4 1,47 mM, NaCl 137 mM, KCl 2,68 mM de pH 7,2) e então equilibrado com 2 litros de mesmo tampão até ser alcançado no permeado um valor de pG de 7,2.

[0162] A medição da permeabilidade da membrana é verificada. O teste de integridade sobre a membrana é realizado ao se colocar o sistema sob pressão de até 100 kPa antes do final do estágio de diafiltração. Se esta membrana for usada duas vezes com um intervalo de uma semana, a integridade será testada 3 vezes (uma vez antes de cada ultrafiltração e uma vez após a segunda filtração). A membrana é considerada intacta se a perda de pressão registrada durante 5 minutos for menor do que 10 kPa.

[0163] A concentração da fração de gE eluída em pG 5 no estágio de afinidade é avaliada pela medição da densidade óptica a 280 nm. A correlação entre a absorbância a 280 nm e a concentração de proteína de gE por microBCA é fixada em 1 OD280 = 1,75 mg/ml.

[0164] A solução contendo o gE é diafiltrada contra 10 volumes de tampão PBS modificado ( = Na2HPO4.2H2O 8,1 mM, KH2PO4 1,47 mM, NaCl 137 mM, KCl 2,68 mM de pH 7,2). As condições de pressão são ajustadas de tal modo que o período de diafiltração seja de cerca de 1 ^ - 2 horas (fluxo de permeado de aproximadamente 60 ml/min). O resíduo de diafiltração é então recuperado e baseando-se em OD280 de linha base a membrana é enxaguada com PBS modificado para dar uma concentração final aproximada de 0,4 mg/ml. Quinto estágio: nanofiltração

[0165] Este estágio seguinte torna possível a eliminação de vírus com um diâmetro maior do que 15 nm por retenção. O estágio é realizado inteiramente a +4oC.

[0166] A nanofiltração é realizada em um filtro PLANOVA 15N (tamanho de poro médio de 15 nm; área superficial de filtração de 0,12 m2 (ASAHI cat: 15NZ-120)). Sob uma pressão constante de 45 kPa, a solução de gE é filtrada sobre a membrana e recuperada no outro lado com vírus removidos.

[0167] Os tubos e o invólucro (coluna XK50) são sanitizados por 2 horas com uma solução de NaOH 0,5 M. O todo é então enxaguado e neutralizado com o tampão PBS modificado (mesmo tampão para a diafiltração) até ser alcançado um valor de pH de 7,2.

[0168] Após fixação do nanofiltro PLANOVA 15N (lado de alimentação) sob a caixa, p filtro é enxaguado e equilibrado com uma solução PBS modificada.

[0169] O resíduo de diafiltração contendo a solução de gE é primeiro pré-filtrado através de 0,22 μm (mini kleenpak OU Acropak20, dependendo do volume a ser filtrado) antes de ser nanofiltrado em uma pressão constante de 45 kPa no PLANOVA 15N.

[0170] No final da nanofiltração, o filtro é enxaguado com um volume suficiente de PBS modificada para dar uma concentração final do volume de aproximadamente 0,3 mg/ml.

[0171] No final a membrana é lavada com 50 ml de PBS modificada. A solução é recuperada através da saída de resíduo.

[0172] Os testes de integridade sobre a membrana PLANOVA 15N são então realizados como segue: - o primeiro teste consiste de por a membrana sob pressão (98 kPa) e observar a formação de bolhas de ar. - o segundo teste: eliminação de partículas de ouro (PARTICORPLANOVA-QCVAl4) verifica a estrutura da membrana (distribuição boa de poros e capilares grandes). Composição de vacina

[0173] O componente gE da vacina compreende 50 μg de gE e os excipientes cloreto de sódio, cloreto de potássio, fosfato de monopotássio, fosfato de dipotássio e água para injeção bem como o adjuvante AS1. A função dos sais inorgânicos é garantir a isotonicidade e o pH fisiológico.

[0174] Em um recipiente de vidro estéril, água para injeção, solução salina tamponada com fosfato concentrada e antígeno gE foram misturados em ordem para alcançar a concentração de ingrediente como abaixo:

[0175] A solução é misturada por 30 a 40 minutos. O pH é checado e ajustado em 7,2 ± 0,1 com HCl ou NaCl ou apropriado e agitada por 10 minutos adicionais.

[0176] O volume final foi armazenado em garrafas de polipropileno a -20oC e transferido para GSK Bio para enchimento. Frascos de vidro siliconizado estéreis, de 3 ml, são cheios com a vacina (0,25 ml/frasco), os quais são fechados com tampas cinzas de borracha de cloro-butila e vedados com tampa de alumínio de rasgo central. Os frascos inspecionados, aprovados são então armazenados a -20oC. Liberação de vacina

[0177] A vacina de gE-AS1 para administração foi obtida por misturação da preparação líquida de antígeno com o adjuvante AS1 líquido imediatamente antes da injeção (um máximo de uma hora antes da injeção). A OKA (VarilrixTM ) foi um lote comercialmente disponível preparado de acordo com as instruções do fabricante.

[0178] As formulações de vacina foram como segue: Vacina gE Formulação 50 μg de antígeno (gE) de VZV em volume de 0,2 ml AS1 em volume de 0,5 ml Apresentação Frasco de vidro contendo antígeno gE Volume de Dose Total* 0,7 ml (após reconstituição) Vacina Varilrix com diluente Formulação Aproximadamente 104,0 pfu/dose volume de 0,5 ml Apresentação Frasco de vidro contendo vacina liofilizada para reconstituição Volume de Dose Total* 0,5 ml

[0179] O componente gE AS1 foi administrado por injeção intramuscular. O componente Varilrix foi administrado por injeção subcutânea. Análise dos resultados

[0180] O protocolo de teste clínico, depositado em preparação para o teste clínico, delineou os tipos de estudos que eram para serem realizados no teste, como segue:

[0181] a Linfoproliferação (dados expressados como Índice de Estimulação [SI]): GM, aumento de vezes em GM e % de respondedores após estimulação por lisado de VZV.

[0182] b Resposta de IFN gama e/ou IL2, TNF alfa, CD40L, CD4 e CD8 por ICS (coloração intracelular): GM, - aumento de vezes em GM e % de respondedores após estimulação por lisado de VZV e peptídeos gE, 1E62 e 1E63. Linfoproliferação

[0183] Linfócitos específicos para antígeno de sangue periférico podem ser reestimulados in vitro para proliferarem se incubados com seu antígeno correspondente. Conseqüentemente, a quantidade de linfócitos específicos para antígeno pode ser estimada por ensaio de incorporação de contagem de timidina tritiada. No estudo presente, antígeno de VZV ou peptídeo derivado de proteínas de VZV serão usados como antígeno para reestimular os linfócitos específicos para VZV. Resultados serão expressados como um índice de estimulação (SI) que corresponde à razão entre linfoproliferação específica para antígeno e linfoproliferação de fundo. Citometria de fluxo de citocina (CFC)

[0184] Células T CD4 e CD8 específicas para antígeno de sangue periférico podem ser reestimuladas in vitro para expressarem CD40L, IL-2, TNF alfa e IFN gama se incubadas com seu antígeno correspondente. Conseqüentemente, células T CD4 e CD8 específicas para antígeno podem ser enumeradas por citometria de fluxo após marcação com imunofluorescência convencional de fenótipo celular bem como produção de citocinas intracelulares. No estudo presente, antígeno de VZV ou peptídeo derivado de proteínas de VZV serão usados como antígenos para reestimular células T específicas para VZV. Resultados serão expressados como uma freqüência de células T CD4 e CD8 positivas para citocina(s) dentro da subpopulação de células TCD4 ou CD8. Anticorpo específico (anti-VZV e anti-gE)

[0185] Níveis de anticorpo contra VZV e gE serão medidos usando os ensaios clássicos ELISA.

[0186] Resultados do experimento são mostrados em forma tabular. Figuras 2-6 apresentam resultados em uma forma gráfica para anticorpo (Figuras 2-4, veja tabelas 1.1a - c) e respostas de CMI (Figuras 5 e 6 veja tabela C1/teste de "CD4 todos duplos" com antígeno gE ou Varilrix, valores médios). RESPOSTA IMUNE HUMORAL Tabela I.1a Taxas de soropositividade e GMTs para anticorpos VZV IGG (coorte de ATP para imunogenicidade) Tabela I.1b Taxas de soropositividade e GMTs para anticorpos VZV.GE (coorte de ATP para imunogenicidade) Tabela I.1c Taxas de soropositividade e GMTs para anticorpos IFA (coorte de ATP para imunogenicidade) Tabela I.2b Taxas de soroconversão para título de anticorpo gE em cada instante de tempo de pós-vacinação(coorte de ATP para imunogenicidade) Resposta de vacina para título de anticorpo VZV em cada instante de tempo de pós-vacinação (coorte de ATP para imunogenicidade) Resposta de vacina para título de anticorpo gE em cada instante de tempo de pós-vacinação (coorte de ATP para imunogenicidade) Resposta de vacina para título de anticorpo IFA em cada instante de tempo de pós-vacinação (coorte de ATP para imunogenicidade) Tabela 1.1a Taxas de soropositividade e GMTs para anticorpos VZV IGG (coorte de ATP para imunogenicidade)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E gE-AS1+Varilrix/50-70 anos GMC = concentração média geométrica de anticorpo calculada sobre todos os indivíduos N = número de indivíduos com resultados disponíveis n/% = número/percentagem de indivíduos com concentração dentro da faixa especificada 95% CI = intervalo de confiança de 95%; LL = Limite inferior, UL = Limite superior MIN/MAX = Mínimo/Máximo PRE = dose 1 de pré-vacinação PI(M1) = dose 1 de pós-vacinação (Mês 1) PI(M2) = dose 1 de pós-vacinação (Mês 2) PII(M3) = dose 2 de pós-vacinação (Mês 3) Tabela 1.1b Taxas de soropositividade e GMTs para anticorpos VZV.GE (coorte de ATP para imunogenicidade)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos GMC = concentração média geométrica de anticorpo calculada sobre todos os indivíduos N = número de indivíduos com resultados disponíveis n/% = número/percentagem de indivíduos com concentração dentro da faixa especificada 95% CI = intervalo de confiança de 95%; LL = Limite inferior, UL = Limite superior MIN/MAX = Mínimo/Máximo PRE = dose 1 de pré-vacinação PI(M1) = dose 1 de pós-vacinação (Mês 1) PI(M2) = dose 1 de pós-vacinação (Mês 2) PII(M3) =dose 2 de pós-vacinação (Mês 3) Tabela 1.1c Taxas de soropositividade e GMTs para anticorpos IFA (coorte de ATP para imunogenicidade)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos GMT = título médio geométrico de anticorpo calculado sobre todos os indivíduos N = número de indivíduos com resultados disponíveis n/% = número/percentagem de indivíduos com título dentro da faixa especificada 95% CI = intervalo de confiança de 95%; LL = Limite inferior, UL = Limite superior MIN/MAX = Mínimo/Máximo PRE = dose 1 de pré-vacinação PI(M1) = dose 1 de pós-vacinação (Mês 1) PI(M2) = dose 1 de pós-vacinação (Mês 2) PII(M3) = dose 2 de pós-vacinação (Mês 3) Tabela I.2b Taxas de soroconversão para título de anticorpo gE em cada instante de tempo de pós-vacinação (coorte de ATP para imunogenicidade)

gE/Y gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos N = número de indivíduos soronegativos no dia 0 n/% = número/percentagem de indivíduos inicialmente soronegativos que se tornaram soropositivos no instante de tempo de pós-vacinação especificado 95% CI = intervalo de confiança de 95%; LL = Limite inferior, UL = Limite superior Tabela I.3a Resposta de vacina para título de anticorpo VZV em cada instante de tempo de pós-vacinação (coorte de ATP para imunogenicidade)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos N = número de indivíduos soropositivos no dia 0 n/% = número/percentagem de indivíduos inicialmente soropositivos com um aumento de quatro vezes no instante de tempo de pós-vacinação especificado 95% CI = intervalo de confiança de 95%; LL = Limite inferior, UL = Limite superior Tabela I.3b Resposta de vacina para título de anticorpo gE em cada instante de tempo de pós-vacinação (coorte de ATP para imunogenicidade)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos N = número de indivíduos soropositivos no dia 0 n/% = número/percentagem de indivíduos inicialmente soropositivos com um aumento de quatro vezes no instante de tempo de pós-vacinação especificado 95% CI = intervalo de confiança de 95%; LL = Limite inferior, UL = Limite superior Tabela I.3c Resposta de vacina para título de anticorpo IFA em cada instante de tempo de pós-vacinação (coorte imunogenicidade)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos N = número de indivíduos soropositivos no dia 0 n/% número/percentagem de indivíduos inicialmente soropositivos com um aumento de quatro vezes no instante de tempo de pós-vacinação especificado 95% CI = intervalo de confiança de 95%; LL = Limite inferior, UL = Limite superior Análise de respostas de CMI é dada abaixo. LISTA DE TABELAS Tabela C.1 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística descritiva sobre Células T CD4 em cada instante de tempo (Coorte vacinada total) Suplementar Tabela C.1 coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística descritiva sobre células T CD8 em cada instante de tempo (Coorte vacinada total) Tabela C.2 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística inferencial: Valores-P de Teste de Kruskal-Wallis para células T CD4 T em cada instante de tempo (Coorte vacinada total) Suplementar Tabela C.2 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística inferencial: Valores-P de Teste de Kruskal-Wallis para células T CD8 em cada instante de tempo (Coorte vacinada total) Tabela C.3 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística descritiva sobre células T CD4 em PÓS-PRÉ (Coorte vacinada total) Suplementar Tabela C.3 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística descritiva sobre célula T CD8 T em PÓS-PRÉ (Coorte vacinada total) Tabela C.4 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística inferencial: Valores-P de Teste de Kruskal-Wallis para células T CD4 em PÓS-PRÉ (Coorte vacinada total) Suplementar Tabela C.4 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística inferencial: Valores-P de Teste de Kruskal-Wallis para células T CD8 T em PÓS-PRÉ (Coorte vacinada total) Tabela C.1 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística descritiva sobre células T CD4 em cada instante de tempo (Coorte vacinada total)

Illl Mês 3 I 45 I 0 |1634,80 11160,30| 73,00 | 854,00 |1450,00 12097,00| 4405,00 | gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos N = número de indivíduos com resultados disponíveis N miss,= número de indivíduos com resultados faltantes SD = Desvio padrão Min, Max = Mínimo, Máximo Q1,Q3 = Primeiro, Terceiro quartil Tabela Suplementar C.1 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística descritiva sobre células T CD8 em cada instante de tempo (Corte vacinada total)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos N = número de indivíduos com resultados disponíveis N miss= número de indivíduos com resultados faltantes SD = Desvio padrão Min, Max = Mínimo, Máximo Q1,Q3 = Primeiro, Terceiro quartil Tabela C.2 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística inferencial: Valores-P de Teste de Kruskal-Wallis para células T CD4 em cada instante de tempo (Coorte vacinada total)

VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos Tabela Suplementar C.2 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística inferencial: Valores-P de Teste de Kruskal-Wallis para células T CD8 em cada instante de tempo (Coorte vacinada total) Células T Grupos comparados Antígeno Teste Valor P no Dia O Valor P no Mês 1 Valor P no Mês 2 Valor P no Mês 3

VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos Tabela C.3Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística descritiva sobre células T CD4 em PÓS-PRÉ (Coorte vacinada total)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos N = número de indivíduos com resultados disponíveis N miss = número de indivíduos com resultados faltantes SD = Desvio padrão Min, Max = Mínimo, Máximo Q1,Q3 = Primeiro, Terceiro quartil Tabela Suplementar C.3 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística descritiva sobre células T CD8 em PÓS-PRÉ (Coorte vacinada total)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos; gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos; gE/E = gE-AS1/50-70 anos; gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos N = número de indivíduos com resultados disponíveis; N miss,= número de indivíduos com resultados faltantes SD = Desvio padrão Min, Max = Mínimo, Máximo Q1,Q3 = Primeiro, Terceiro quartil Tabela C.4 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística inferencial: Valores-P de Teste de Kruskal-Wallis para células T CD4 em PÓS-PRÉ (Coorte vacinada total)

VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos Tabela Suplementar C.4 Coloração de citocina intracelular (ICS): Estatística inferencial: Valores-P de Teste de Kruskal-Wallis para células T CD8 em PÓS-PRÉ (Coorte vacinada total)

VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E gE-AS1+Varilrix/50-70 anos LISTA DE TABELAS Tabela L.1 Estatística descritiva sobre Índice de Estimulação para linfoproliferação (coorte de ATP para imunogenicidade) Tabela L.2 Linfoproliferação: Média geométrica (coorte de ATP para imunogenicidade) Tabela L.3 Linfoproliferação: Estatística inferencial sobre Índice de Estimulação (coorte de ATP para imunogenicidade) Tabela L.4 Linfoproliferação: aumento de vezes em média geométrica (GMR) (coorte de ATP para imunogenicidade) Tabela L.1 Estatística descritiva sobre Índice de Estimulação para linfoproliferação (coorte de ATP para imunogenicidade)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos N = número de indivíduos com resultados disponíveis N miss,= número de indivíduos com resultados faltantes SD = Desvio padrão Min, Max = Mínimo, Máximo Q1,Q3 = Primeiro, Terceiro quartil 1. Tabela L.2 Linfoproliferação: Média geométrica de índice de estimulação (coorte de ATP para imunogenicidade)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos N = número de indivíduos com resultados disponíveis N miss,= número de indivíduos com resultados faltantes GMT= Título de média geométrica LL,UL= Limite inferior, superior de intervalo de confiança de 95% Min, Max = Mínimo, Máximo Tabela L3Linfoproliferação: Estatística inferencial sobre índice de Estimulação (Coorte de ATP para imunogenicidade)

ggE/Y= gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos Tabela L.4 Linfoproliferação: aumento de vezes em média geométrica (GMR) (coorte de ATP para imunogenicidade)

gE/Y = gE-AS1/18-30 anos gEVAR/Y = gE-AS1+Varilrix/18-30 anos VAR/E = Varilrix/50-70 anos gE/E = gE-AS1/50-70 anos gEVAR/E = gE-AS1+Varilrix/50-70 anos N = número de indivíduos com resultados disponíveis N miss.= número de indivíduos com resultados faltantes GMR= Razão de média geométrica LL,UL= Limite inferior, superior de intervalo de confiança de 95% para GMR Min, Max = Mínimo, Máximo Conclusões Tanto a vacina de gE AS1 quanto a liberação concomitante de gE AS1 com a cepa OKA provocam uma resposta imune boa em comparação com a resposta obtida pela cepa OKA sozinha.

Claims (4)

1. Uso de uma composição imunogênica compreendendo VZV gE, em que gE é truncada para remover a região de âncora carboxi-terminal e em que a truncagem VZV gE não é na forma de uma proteína de fusão, como definida na SEQ ID NO: 1, e um adjuvante TH-1 que compreende lipossomas, em que os lipossomas compreendem fosfatidilcolina (DOPC), colesterol e MPL 3D, QS21, PBS e água, e em que o MPL está compreendido dentro do lipossoma caracterizado pelo fato de ser na preparação de um medicamento para a prevenção ou melhora de herpes-zoster e/ou de neuralgia pós-herpética em uma população de indivíduos acima de 50 anos ou uma população de indivíduos imunocomprometida.

2. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser para uso em uma população de indivíduos mais velhos do que 60 anos.

3. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser para uso em uma população de indivíduos imunocomprometidos.

4. Kit, caracterizado pelo fato de compreender como componentes separados, um adjuvante TH-1 que compreende lipossomas, em que os lipossomas compreendem fosfatidilcolina (DOPC), colesterol e MPL 3D, QS21, PBS e água, e em que o MPL está compreendido dentro do lipossoma; e um antígeno VZV gE, em que gE é truncada para remover a região de âncora carboxi-terminal e em que a truncagem VZV gE não é na forma de uma proteína de fusão, como definida na SEQ ID NO: 1, adequados para preparação extemporânea de uma composição de vacina para a prevenção ou melhoria de herpes-zoster e/ou neuralgia pós-herpética em uma população de indivíduos acima de 50 anos ou uma população de indivíduos imunocomprometida.

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