Tarifnamenin bazi yönlerinde karsilik gelen tam uzunlukta polipeptitinkinden daha yüksek iminünojenik aktivite düzeyine sahip, örn. yaklasik %100 veya %150'den yüksek veya daha fazla immünojenik aktiviteye sahip immünojenik kisimlar tanimlanabilir. Bir yönde VZV antijeni, bir glikoproteindir, bir yönde gE antijeni (ayrica gpl olarak bilinir) veya bunun immünojenik türevidir. gE anti jeni, bunun ankrajsiz türevleri (bunlar da immünojenik türevlerdir) ve bunlarin üretimi, EP0405867'de ve buradaki referanslarda tarif edilir [bakiniz ayrica Vafai A. Antibody binding sites on truncated forms of varicalla-zoster Virus gpl(gE) glycoprotein açiklar. Bir yönde gE, buradaki sekil 1'in sekansina sahip ve Virus research, cilt 40, 1996 p199 ff'de açiklanan kesik gE'dir. Asagida gE'ye yapilan referans, içerikten aksi anlasilmadikça kesik gE'ye yapilan referansi Diger uygun antijenler arasinda 'Örnek olarak gB, gH, gC, gl, IE63 (ArVin ve arkadaslari, Viral Iminunol. 2002 15: 507) bulunur. Açiklama, anti jen kombinasyonlarinin canli attenüe veya öldürülmüs VZV ile kullanilabilecegini 'Öngörür ve bir yönde, böyle bir kombinasyon içine gE dahil edilebilir. gE'nin IE63 ile ve gE'nin IE62 ile kombinasyonlari da diger örneklerdir. VZV anti jenleri ve VZV anti jenlerinin türevleri, uygun irnmünojenik aktivite açisindan, mevcut basvurunun Orneklerinde tarif edilen model sistemlerde veya insanlarda klinik deneylerle test edilebilir. Asagidaki aktivite göstergelerinden biri veya daha fazlasi, immünojenik aktivitenin degerlendirilmesinde ele alinmak üzere uygundur: . VZV'ye veya anti jen türevlerine karsi artmis CD4 veya CD8 T hücresi tepkileri. o VZV'ye veya anti jen türevine spesifik antikorlarda yükselme. o Interferon 7 veya IL-2 veya TNFoi gibi sitokinlerin daha fazla üretilmesi o CD40L'nin CD4 ve CD8 T hücreleri üzerinde artan ekspresyonu. Zoster insidansinin, benzer risk tasiyan kisilerin genel popülasyonunda bulunan insidansin altina inmesi ve benzer sekilde hastalik siddetinin ve/veya baglantili agrinin benzer risk tasiyan kisilerin genel popülasyonuiida bulunan insidansin altina inmesi. Yukarida tarif edildigi gibi artislar ve azalinalar uygun sekilde yas eslesineli asilaninainis bir grup gibi uygun kontrollere göre istatistiksel açidan anlamlidir. Bir yönde canli attenüe VZV veya öldürülmüs VZV ve VZV anti jeni veya anti jen türevleri, birbirlerine anlamli düzeyde inüdahale etmez, böylelikle kombinasyon halinde kullanildiginda 2 bilesen hala VZV'ye karsi bir iinmünojenik tepki verebilir. Bir yönde 2 bilesen isterse bir kompozisyon halinde kullanilsin, isterse sirali uygulamada veya birlikte uygulamada kullanilsin tepki, bir koruyucu immünojenik tepkidir. Bir miktar müdahalenin tolere edildigi takdir edilecektir, bununla birlikte genel koruyucu tepki, tek tek kullanilan orijinal bilesenlerin herhangi birine göre bir sekilde gelismistir (ömegin büyüklügü artmis, tepki verenlerin %'si artinis veya antijenik tepkiler gelismistir). Bir yönde açiklama, herhangi bir sirada es zainanli veya sirali uygulama için kullaiiilaii gE anti jeiii ve OKA susu kombinasyonu ile ilgilidir. Verme islemi es zainanli oldugunda 2 bilesen, farkli enjeksiyon sahalarina örnegin ayni gün içinde verilir. Bir yönde 2 bilesen içiii farkli verme yollari kullanilir, özellikle OKA gibi virüs susu için subkütan verme ve gE gibi anti jen için intramüsküler verme kullanilir. Açiklama ayrica tarif edilen tüm yönlerde VZV antijenlerinin veya türevlerinin canli bir atteiiüe VZV susu veya öldürülmüs VZV ile kombinasyonlarinin kullanilmasini kapsayacak sekilde genisletilir. Antijenlerin uygun kombinasyonlari bir yönde gE veya bunun immünojenik türevini içerir. Kombine kompozisyon veya tek tek bilesenlerin her biri veya her ikisi ek olarak bunlarla sinirli olmamakla birlikte herhangi bir kaynaktan detoksifiye edilmis lipit A ve lipit A'nin toksik olmayan türevleri, saponinler ve uygun sekilde bir THl tipi tepkiyi uyarabilen baska reaktifler gibi bir ad juvan veya immüno-uyarici içerebilir. Bir yönde kompozisyon, bir THl tipi tepkiyi uyarabilen bir adjuvan Yüksek düzeylerde Thl tipi sitokinler, belirli bir anti jene karsi hücre aracili iinmün tepkileriiiin indüklenmesine yardimci olma egilimi gösterirken yüksek düzeylerde Th2 tipi sitokinler, anti jene karsi huinoral immün tepkilerinin indüklenmesine yardimci olma egiliini gösterir. Thl ve Th2 tipi immün tepkisi arasindaki ayrim mutlak degildir. Gerçekte bir kisi, asil olarak Thl veya asil olarak Th2 seklinde tarif edilmis bir iinmün tepkisini destekleyecektir. Bununla birlikte siklikla sitokin familyalarini, murin CD4 +ve T hücresi klonlarinda Mosmann ve Coffman tarafindan tarif edilenler (Mosmann, T.R. ve Coffman, R.L. (1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Review of Geleneksel olarak Thl tipi tepkiler, T lenfositleri tarafindan INF-y ve Thl tipi immün tepkilerinin uyarilmasi ile baglantili diger sitokinler, tepkiler, IL-4, IL-5, IL-6, IL-lO salgisi ile baglantilidir. Baskin sekilde bir Thl tepkisini tesvik eden uygun adjuvan sistemleri arasinda Monofosforil lipit A veya bunun bir türevi, özellikle 3-de-O- asile edilmis inonofosforil lipit A bulunur. Enterobakteriyel lipopolisakaritin (LPS), iminün sistemin güçlü bir uyaricisi oldugu uzuii zamandir bilinmesine ragmen bunun adjuvanlarda kullanimi, toksik etkilerinden dolayi kesintiye ugramistir. Nüve karbohidrat grubunun ve fosfatin indirgeme ucundaki glukozaminden çikarilmasiyla üretilen toksik olinayaii bir LPS türevi olan monofosforil lipit A (MPL), Ribi ve arkadaslari (1986, Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Publ. Corp., NY, sayfa 407-419) tarafindan tarif edilmistir ve asagidaki yapiya sahiptir: l 0'° C*** :Im-on imi 1 to (CHiho I cu; <':i-i - I &Basa J 4 cm 4 i MPL"nin baska bir detoksifiye edilmis versiyonu, disakarit omurgasinin 3. pozisyonundan asil zincirinin çikarilmasindan kaynaklanir ve 3-O-Deasile edilmis monofosforil lipit A (3D-MPL) olarak anilir. Bu, GB2122204B"de 'Ögretilen yöntemlerle saflastirilabilir ve hazirlanabilir, bu referans ayni zamanda difosforil lipit A ve bunun 3-0 ile deasile edilmis varyantlarinin preparasyonunu da açiklar. Bir yönde 3D-MPL, çap olarak O.2um"nin altinda küçük bir partikül ebadina sahip bir emülsiyon formundadir ve bunun üretim yöntemi, WO 94/21292°de açiklanir. Monofosforil lipit A ve bir surfektan içeren sulu formülasyonlar, WO9843670A29de tarif edilmistir. Mevcut bulusa ait kompozisyonlarda formüle edilecek, bakteriyel tipopolisakaritten türetilmis ad juvanlar, bakteriyel kaynaklardan saflastirilabilir ve islenebilir veya alteniatif olarak sentetik olabilir. Örnegin saflastirilmis monofosforil lipit A, Ribi ve arkadaslari, 1986 (yukarida)"da tarif edilmistir ve 3-O-Deasile edilmis monofosforil veya Salmonella spfden türetilmis difosforil lipit A, GB 2220211 ve US 4912094"te tarif edilmistir. Baska saflastirilmis ve sentetik lipopolisakaritler tarif edilmistir (Hilgers ve arkadaslari, 1986, baglaminda bakteriyel lipopolisakarit ad juvani, 3D-MPL,dir. Buna göre mevcut bulusta kullanilabilen LPS türevleri, LPS veya MPL veya 3D-MPL'nin yapisina benzer immüno-uyaricilardir. Bir baska yönde LPS türevleri, MPL°nin yukarida yapisina göre bir alt kisim olan asile edilmis bir monosakarit olabilir. Saponinler, Lacaille-Dubois, M ve Wagner H. (1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine cilt 2 sayfa 363-386),da ögretilir. Saponiiiler, bitki ve deniz hayvani alemlerinde yaygin sekilde yer alan steroid veya triterpen glikosidlerdir. Saponinlerin, çalkalanmasi üzerine köpüren su içinde koloidal çözeltiler olusturduklari ve kolesterolü çökelttikleri kaydedilir. Saponinler, hücre ineinbranlarina yaklastiklarinda membranda, ineinbranin patlainasina neden olan gözenek benzeri yapilar yaratir. Eritrositlerin hemolizi, tamami olmamakla birlikte belirli saponiiilerin bir Özelligi olan bu olayin bir örnegidir. Saponinler, sistemik uygulamaya yönelik asilarda adjuvanlar olarak bilinir. Ayri ayri saponinlerin ad juvan ve hemolitik aktivitesi üzerinde teknolojide yogun sekilde çalisilmistir (Lacaille-Dubois ve Wagiier, yukarida). Omegin Quil A (Güney Amerika agaci Quillaja Saponaria Molina"nin kabugundan türetilmistir) ve bunun fraksiyonlari, US ,057,540 ve "Saponins as vaccine ad juvants", Kensil, C. R., Crit Rev tarif edilir. Quil A fraksiyonlari içeren, Immün Uyarici Kompleksler (ISCOMlar) olarak adlandirilan partikülat yapilari, heinolitiktir ve asilarin üretiminde kullanilmaktadir (Morein, B., EP 0 109 942 Bl; (Quil A°nin HPLC ile saflastirilinis fraksiyonlari), potansiyel sistemik adjuvanlar olarak tarif edilmislerdir ve bunlariii üretiin yöntemi, ABD Sistemik asilama çalismalarinda kullanilmakta olan diger saponinler arasiiida Gypsophila ve Saponaria gibi diger bitki türlerindeii türetilmis olanlar yer alir (Bomford ve arkadaslari, Vaccine, Güçlendirilmis bir sistem, toksik olmayan bir lipit A türevi ve bir saponin türevinin kombinasyonunu, özellikle WO 94/00153'te açiklanan QSZl ve 3D-MPL kombinasyonunu veya QSZl'in kolesterol ile söndürüldügü, WO96/33739'da açiklandigi gibi daha az reaktojenik bir kompozisyonu içerir. QSZl'in 3D MPL ile kombinasyonu mevcut bulus baglaminda kullanilir. Bir yönde, bulusta kullanilmaya yönelik ad juvan, Q821 ve kolesterol ve 3D MPL içeren bir lipozom formülasyonu içerir. Bir su içinde yag emülsiyonu içinde QSZl ve 3D-MPL içeren özellikle güçlü bir ad juvan formülasyonu, WC 95/ 17210'da tarif edilmistir ve mevcut bulusta kullanilmaya da uygundur. Buna göre bir yönde detoksifiye edilmis lipit A veya lipit Aanin toksik olmayan bir türevi ile ad juvanlanmis tarifnameye ait bir VZV anti jeni veya türev içeren bir kompozisyon sunulur. Bir yönde kompozisyon, bir monofosforil lipit A veya bunun türevi ile ad juvanlanir. Bir yönde kompozisyon ek olarak bir saponin içerir, bu da bir yönde QSZl'dir ve bir baska yönde WO 96/33739'da açiklandigi gibi kolesterol ile söndürülmüs QSZl'dir. Immünojenik kompozisyon istege bagli olarak bir su içinde yag emülsiyonu içerir, bu da yukarida açiklandigi gibi QSZI ve/ veya 3D MPL gibi baska adjuvaiilar ile kombinasyon halinde kullanilabilir. Bir su içinde yag emülsiyonu içeren ad juvan formülasyonlari, Alternatif bir ad juvan seçimi, metile edilmemis CpG dinükleotitleridir ("CpG"). CpG, nükleik asit içinde bulunan sitosin-guanosin dinükleotit motiflerine ait bir kisaltmadir. CpG oligonükleotitleri, WO Bir yönde burada tarif edilen adjuvanlarin bir kombinasyonu (QSZl veya kolesterol + 3DMPL ile söndürülmüs QS21, istege bagli olarak bir su içinde yag emülsiyonu ile birlikte), gE veya bunun immünojenik türevi ile birlikte kullanilir, bir canli attenüe VZV veya eylemsizlestirilmis bütün VZV ile es zamanli veya sirali uygulamada kullanilir. Ayrica zostere karsi bir immün tepkisinin indüklenmesi için uygun bir kitin üretilmesine yönelik bir yöntem açiklanir; yöntein, mevcut tarifnameye ait bir VZV anti jeni preparasyonunun bir adjuvan veya adjuvan kombinasyonu karistirilmasini ve bir kit içinde canli attenüe bir VZV ile birlestirilmesini içerir. VZV anti jeni miktari, tipik asilarda anlamli ve olumsuz yan etkiler olmadan bir immüno-koruyucu tepki indükleyen bir miktar olarak seçilir. Bu miktar, kullaiiilaii spesifik immünojene ve nasil sunulduguna bagli olarak degisiklik gösterecektir. Genel olarak her beklenir. gE kullanildiginda bir yönde insanlarda 25 - 100ug gE kullanilabilir, öriiegin insan kullanimi için 40-100ug gE, bir yönde yaklasik 25ug, yaklasik SOug veya yaklasik lOOug gE, uygun sekilde 25ug, 50ug veya lOOug gE kullanilabilir. OKA susu için örnegin nil'dir ve uygun bir GSK Varilrix Oka susu dozu Örnegin doz basina 100000 pfu gibi daha yüksek dozlar kullanilabilir. Belirli bir asi için Optimum miktar, süjelerde uygun immün tepkilerinin gözleninesini içeren standart çalismalar ile tespit edilebilir. Ilk asilamanin ardindaii süjeler, bir veya yeterli aralik verilmis birkaç booster immünizasyon alabilir. K0mpozisyon(lar) örnegin topik, oral, nazal, mukozal, intravenöz, intradernial, intraperitoiial, subkütan ve intramüsküler yoldan uygulama dahil herhangi bir uygun uygulama tarzi için formüle edilebilir. OKA susunun verilmesi bir yönde subkûtan vermedir. Immünojenik kompozisyon, bir asi kompozisyonu içinde, istege bagli olarak bir adjuvan ve/veya (baska) uygun tasiyici ile kombinasyon halinde kullanilabilir. VZV antijeni ve attenüe VZV, bir kompozisyonda birlikte VZV'ye karsi bir immün tepkisini tahrik etmek için veya ayri ayri - bir prime boost re jiminde es zamanli veya sirayla kullanilabilir. Es zamanli veya sirali verme için asi bileseiileri herhangi bir sirada kullanilabilir. Bir yönde canli attenüe bir VZV'nin veya bütün eylemsizlestirilmis VZV'nin verilmesini bir VZV anti jeni veya bunun immünojenik türevi takip eder. Bir baska yönde bir VZV antijeniiiin veya bunun immünojenik türevinin verilmesini, canli attenüe VZV'nin veya bütün eylemsizlestirilmis VZV'nin verilmesi takip eder. Ayrica herpes zoster ve/veya post herpetik nöraljinin önlenmesine ve/veya siddetinin azaltilmasina yönelik, zoster riski tasiyan bir süjeye, canli attenüe bir VZV ve bir VZV antijeni içeren bir immünojenik kompozisyonun verilmesini içeren bir yöntem açiklanir. Bir diger yönde herpes zoster ve/Veya post herpetik nöraljinin önleiimesine ve/veya siddetinin azaltilmasina yönelik, zoster riski tasiyan bir süjeye, canli attenüe bir VZV ile bir VZV anti jeninin sirali veya es zamanli verilmesini içeren bir yöntein açiklanir. Bir yönde bir prime boost rejimi açiklanir, burada bir VZV anti jeni, bir yönde adjuvanlanmis bir antijen ilk önce verilir, bundan sonra immün sistem, attenüe bir VZV verilerek boost edilir. Insanlarda bir prime boost rejimi bir yönde QSZ] (örnegin yukarida tarif edildigi gibi kolesterol ile söndürülmüs QSZl) ve 3D-MPL ile veya yaklasik 50 ug gE veya bunun immünojenik bir türevi ile prime etmeyi ve VZV'nin OKA susu ile boost etmeyi içerir. Prime boost rejimleri kullanildiginda veya çoklu asilama rejimleri kullanildiginda 2, 3, 4 veya daha fazla immünizasyon kullanilabilir. Prime boost için uygun rejimler arasinda tek tek immünizasyonlar arasinda 1 , 2, 3, 4, 5 veya 6 ay içerir. Bir prime boost plani bir yönde bir VZV antijeninin veya bunun immünojenik türevinin, uygun sekilde ad jvanlanmis bir VZV antijeninin veya türevinin 0. ayda verilmesini ve canli attenüe bir VZV ile 2. ayda boost etineyi içerir. Alternatif bir verme planinda her iki tekli bilesen (VZV anti jeni veya türevi ve canli attenüe VZV) hem 0 hem 2. aylarda es zamaiili olarak Yine bir baska yönde canli attenüe bir VZV veya eyleinsizlestirilmis bütün VZV ve bir VZV aiitijeni içeren bir kit açiklanir. Ayrica bir immünojenik kompozisyon üretmeye yönelik bir yöntem açiklanir; yöntein, canli attenüe bir VZV/bütün eylemsizlestirilmis ile bir VZV anti jeninin birlestirilmesini içerir. Ayrica canli attenüe bir VZV susunun, herpes zoster'in önlenmesine yönelik bir VZV anti jeni ile bir kombinasyon asisinin hazirlanmasinda kullanilmasi ve bir VZV antijeninin, herpes zoster'in önlenmesine yönelik canli attenüe bir VZV susu ile bir kombinasyon asisinin hazirlanmasinda kullanilmasi açiklanir. Açiklamanin bir ikinci yönünde bir gE antijeni veya immünojenik türev veya bunlarin immünojenik fragmani, bir immünojenik kompozisyon veya asi saglamak amaciyla bir adjuvan ile birlikte kullanilabilir. Yani gE anti jeni veya immünojenik türev veya bunlarin irmnünojenik fragmani, bir canli attenüe sus veya bütün eylemsizlestirilmis sus olmadan bir asilama planinda kullanilabilir. Böylelikle açiklamanin ikinci yönü, gE veya immünojenik türevi veya bunlarin immünojenik fragmani ile kombinasyon halinde bir THl ad juvani içeren immünojenik bir kompozisyon veya asi ile ilgilidir. Ozellikle gE veya bir immünojenik türev veya bunlarin inimünojenik fragmanini bir TH-'l adjuvan] ile kombinasyon halinde içeren bir kompozisyonun, herpes zoster yeniden aktiflesmesinin ve/Veya post herpetik nöraljinin önlenmesine veya iyilestirilmesine yönelik bir ilacin hazirlanmasinda kullanilmasi açiklanir. gE ile ilgili olarak "immünojenik türev" terimi, gE fragmanlari gibi bu türevleri elde etme yöntemleri ile birlikte yukarida tarif edildigi gibidir. Burada tarif edilen immünojenik fragmanlar, insanlara uygulama sonrasinda VZV'ye karsi bir immün tepkisi ind'ukleme yeterliligini muhafaza eden immünojenik türevlerdir. Tarifnameye ait bir yönde bir gE kesigi kullanilir, buradaki gE, bir C terminal kesigine sahiptir. Bulus baglaminda kesme ile karboksi terminal ucundaki bütün ainino asit tortularinin yüzde 4 ila 20'si çikarilir. Bir yönde gE, karboksi terminal ankraj bölgesini tasimaz (uygun sekilde vahsi tip sekansin 547-623 ainiiio asidi). Bir yönde gE, buradaki sekil l'in sekansina sahip ve Virus research'te kesik gE'dir. Asagida gE'ye yapilan referans, içerikten aksi anlasilmadikça kesik gE'ye veya gE'nin diger fragmanlarina veya türevine yapilan referansi Bir baska düzenekte kompozisyon, tam uzunlukta gE içerir. Bir baska yönde gE veya türev veya bunlarin fraginani liyofilize edilir. Bir baska yönde gE veya türev veya bunlarin fragmani, verilme öncesinde bir adjuvan (örnegin QSZl, kolesterol ve 3D MPL ihtiva eden bir ad juvan) ihtiva eden bir çözelti içinde yeiiiden olusturulur. Tarifnameye ait bir yönde kompozisyon veya asi gE ve TH-l adjuvanini içerir ve bir IE63 anti jeni veya bunun bir kisinini içerinez. Tarifnameye ait bir düzenekte kompozisyon veya asi gE ve TH-'l adjuvanmi içerir ve baska bir VZV anti jeni içermez. Tarifnameye ait bir yönde kompozisyon veya asi gE ve TH-l adjuvanmi içerir ve baska bir Viral anti jen içermez. Bir yönde, gE veya bunun immünojenik fragmani, bir füzyon proteini formunda degildir. Bir yönde kompozisyon veya asi esasen QSZl, kesik bir VZV gE anti jeni ve kolesterol ve 3D-MPL içeren lipozomlardan olusur. Bir yönde kompozisyon veya asi, 3D-MPL, QSZl, kesik bir VZV gE antijeni, kolesterol içeren lipozomlar ve farmasötik açidan kabul edilebilir bir tasiyicidan olusur. Kompozisyon, herpes zoster yeniden aktivasyonunun ve/veya post herpetik nöraljinin önlenmesine veya iyilestirilmesine yönelik bir ilacin hazirlanmasinda kullanilabilir. Kompozisyon veya asi uygun sekilde 50 yas veya 50'yasin üzerindeki insanlarin olusturdugu popülasyonda kullanilir. Uygun sekilde üzerindekilerin p0p'1'ilasyonudur. Uygun sekilde p0pülasyon, 50-70 yasindadir. Bir yönde kisi popülasyonu, varicella'ya sahip olmus veya canli bir varicella asisi yapilmis kisilerdir. Böylelikle tarifname, yukarida tarif edildigi gibi bir kompozisyonun, herpes zoster yeniden aktivasyonunun ve/Veya post herpetik nöraljinin 50 yas ve üzerindeki insaiilarin olusturdugu bir popülasyonda önleninesine veya iyilestirilmesine yönelik bir ilacin hazirlanmasinda kullanilmasi ile ilgilidir. Böylelikle açiklama ayrica herpes zoster yeniden aktiflesmesinin ve/Veya post herpetik nöraljiniii öiilenmesine veya iyilestirilmesiiie yönelik bir yöntem ile ilgilidir; yöntem, buna ihtiyaç duyan bir kisiye tarifnameye ait bir kompozisyonun verilmesini içerir. Bir yönde tarifnameye ait kompozisyon, varicella zoster virüsünün yeniden aktiflesmedigi kisilerde kullanilir. Kompozisyon, açiklamanin birinci yönü için yukarida belirtilen dozlarda ve verme yollarinda kullanilabilir. Spesifik olarak gE anti jeni miktari, tipik asilarda anlamli ve oluinsuz yan etkiler olmadan bir iminüno-koruyucu tepki indükleyen bir miktar olarak seçilir. Bu miktar, kullanilan Spesifik iinmünojene ve iiasil sunulduguna bagli olarak degisiklik gösterecektir. Genel olarak her dozun l-lOOOug protein, örnegin 2-100 ug veya 5-60 ug içermesi beklenir. gE kullanildiginda uygun sekilde 25 - IOOug gE kullanilir, bir yönde 40- lOOug gE, örnegin yaklasik 25ug, SOug veya yaklasik IOOug gE, uygun sekilde 25ug, SOug veya lOOug gE kullanilir. Belirli bir asi için optimuin miktar, süjelerde uygun iminün tepkilerinin gözlenmesini içeren standart çalismalar ile tespit edilebilir. Ilk asilamanin ardindan sü jeler, bir veya yeterli aralik verilmis birkaç booster iinmünizasyon Bir yönde gE ve adjuvan kompozisyonu veya asisi, bir dozluk bir verme rejiminde kullanilir. Bir yönde gE ve adjuvan kompozisyonu veya asisi, iki dozluk bir verme re jiminde kullanilir. Bir yönde kompozisyon veya asi, doz aralarinda 2 ay aralik ile 2 dozlu bir re jiinde kullanilir. Bir yönde TH-l adjuvani, yukarida açiklainanin birinci yönü için tanimlanan bir adjuvandir. Ozellikle 3D MPL ve QSZl kombinasyonu, örnegin WO94/00153'te açiklanan veya QSZl'in WO Söndürüldügü daha az reaktojenik bir kompozisyon kullanilabilir. Alternatif bir adjuvan, WO95/ l7210'da tarif edildigi gibi bir su içinde yag emülsiyonu içinde QSZI ve 3D-MPL içerir. Bir yönde bir formülasyon, VZV gE antijeninin, 'Örnegin Sekil 1'de verilenin bir C terminal kesigi ile kombinasyon halinde 3D MPL ve QSZl içerir. Bir baska yön, ayri bilesenler halinde yukarida tarif edildigi gibi bir TH-l ad juvani ve bir gE anti jeiii veya bunun immünojenik fragmanini içeren ve bir asi kompozisyonunun ekstremporane hazirlanmasi için uygun bir kit açiklanmistir. Bir yönde her iki bilesen de sividir. Bir yönde bir bilesen liyofilize edilir ve baska bir bilesen ile yeniden olusturulmaya uygundur. Bir yönde kit, sekil '1 'in sekansina sahip bir gE antijeni ve QSZl ve kolesterol ve 3D MPL içeren lipozomlar içeren bir adjuvan içerir. Asi preparasyonu genellikle New Trends ve Developments in Vaccines, Voller ve arkadaslari, (eds), University Park Press, Baltimore, Maryland, 1978'de tarif edilir. Açiklamanin yönleri sunlari içerir: A. Canli atteni'ie bir VZV veya bütün eyleinsizlestirilmis VZV ile kombinasyon halinde bir VZV anti jeni veya bunun immünojenik türeVini içeren immünojenik bir kompozisyon. B. Herpes zoster ve/veya post herpetik nöraljinin (PHN) önlenmesine ve/veya siddetinin azaltilmasina yönelik, bir kisiye, canli attenüe bir VZV veya bütün eylemsizlestirilmis VZV ile kombinasyon halinde bir VZV antijeni veya bunun immünojenik türeVini içeren immünojenik bir kompozisyonun verilmesini içeren bir yöntem. C. Herpes zoster ve/veya post herpetik nöraljinin önlenmesine ve/Veya siddetinin azaltilmasina yönelik, bir kisiye, bir VZV anti jeninin veya bunun immünojenik türevinin ve canli attenüe bir VZV'nin veya bütün eyleinsizlestirilmis VZV'nin sirali veya es zamanli verilmesini içeren bir yöntem. .Paragraf C'ye göre bir yöntem, burada bir VZV antijeni, canli attenüe VZV'den önce verilir. . Paragraf C'ye göre bir yöntem, burada bir VZV antijeni, canli . Paragraf C'ye göre bir yöntem, burada bir VZV antijeni, canli attenüe VZV ile es zainanli olarak, tercihen her bilesen hastanin farkli bir koluna olinak üzere verilir. .Canli attenüe bir VZV veya bütün eylemsizlestirilmis VZV ve ayrica bir VZV anti jeni veya bunun immünojenik türevini içeren bir kit; bilesenler, es zamanli veya sirali verme veya verilme .Bir immünojenik kompozisyon üretmeye yönelik bir yöntem; yöntem, canli attenüe bir VZV veya bütün eyleinsizlestirilmis VZV ile bir VZV aiitijeninin veya bunun immünojenik türevinin birlestirilmesini içerir. Canli attenüe bir VZV susunun, herpes zoster ve/veya post herpetik nöraljinin önlenmesine ve/Veya siddetinin azaltilmasina yönelik immünojenik bir kompozisyonun hazirlanmasinda kullanilmasi, burada canli attenüe VZV susu, bir VZV antijeni veya bunun immünojenik türevi ile kombinasyon halinde kullanilir. . Bütün eylemsizlestirilinis bir VZV susunun, herpes zoster ve/veya post herpetik nöraljinin önlenmesine ve/veya siddetinin azaltilmasina yönelik immünojenik bir kompozisyoiiun hazirlanmasinda kullanilmasi, burada bütün eylemsizlestirilmis VZV susu, bir VZV anti jeni veya bunun immünojenik türevi ile kombinasyon halinde kullanilir. K. Bir VZV aiitijeninin veya bunun immünojenik türevinin, herpes zoster ve/veya post herpetik nöraljinin önlenmesine ve/veya siddetinin azaltilmasina yönelik immünojenik bir kompozisyonun hazirlanmasinda kullanilmasi, burada VZV anti jeni, canli attenüe bir VZV susu veya bütün eylemsizlestirilmis VZV susu ile koinbinasyon halinde kullanilir. L. Paragraf I-K'den herhangi birine göre kullanim, burada anti jen veya bunun türevi, bir priine boost yaklasiminda VZV susundan önce verilir. M. Paragraf I-K'den herhangi birine göre kullanim, burada antijen veya bunun türevi, bir prime boost yaklasiminda VZV susundan sonra verilir. N. Paragraf I-K'den herhangi birine göre kullanim, burada antijen veya bunun türevi, VZV susu ile es zamanli olarak verilir. 0. Paragraf I-K'den herhangi birine göre kullanim, burada anti jen veya bunun türevi, VZV susu ile karisim halinde verilir. P. Onceki paragraflardan herhangi birine göre bir kullanim, yöntem, kit veya kompozisyon, buradaki canli attenüe VZV susu, OKA Q. Onceki paragraflardan herhangi birine göre bir kullanim, yöntem, kit, kompozisyon, buradaki VZV anti jeni, gE anti jeni veya bunun immünojenik türevidir. R. Onceki paragraflardan herhangi birine göre bir kullanim, yöntem, kit, kompozisyon veya asi, buradaki VZV antijeni, bir THl tipi tepki uyarabileii bir ad juvan ile birlikte verilir. Mevcut bulus asagidaki sinirlayici olmayan Orneklerle açiklanir. Ornek l Bulusu çalismak için üç deney grubu olusturulabilir: 50 ug gE + adjuvan ASI (MPL®/ QSZl) 0, 2 ay OKA sus (Varilrixm) -10,000 pfu/doz 0,2 ay 50 ug gE + ASI grubunun (1 'deki gibi) Varilrix'M (2'deki gibi) ile es 0, 2 ay zamanli uygulanmasi Kullanilan gE, Sekil 1'de açiklandigi gibi kesik gE olabilir. Varilrix'M ticari olarak temin edilebilen bir OKA susudur. Insan gönüllüler (örnegin grup basina 50 - saglikli, 50- 70 yaslarinda), yukaridaki protokole göre seçilebilir ve sonuçlar, hem hücre aracill immünitenin hem antikor tepkilerinin ölçülmesi suretiyle, örnegin sirasiyla hücre içi boyama (ICS, Roederer ve arkadaslari, 2004 Clin. bunlar bu konuda iyi bilinmektedir. Spesifik hücre aracili immünite, 'Örnegin hasta PBMC'sinin varicella- zoster virüs özütleri ile ve ayrica spesifik VZV anti jenleri veya gE, degerlendirilebilir. Analiz örnegin su düzeylerde yapilabilir: a. Lenfo-proliferasyon (veriler, Uyarma Endeksi [SI] olarak ifade edilir): GM, GM'deki artis kati ve tepki verenler %'si b. CD4 ve CDS hücreleri tarafindan IFNy veya IL2 veya TNFoi veya CD 40L ekspresyonunun ICS (hücre içi sitokin boyama) yoluyla analizi: GM, GM'deki artis kati ve tepki verenler %'si Verimlilik, asilama `Öncesi düzeylere kiyasla CMI ve/Veya antikor tepkisinde anlamli bir artis aranarak degerlendirilebilir. Baska anti jenlerin veya yaklasimlarin etkinligi, bu veya benzer teknikler kullanilarak ve asilama öncesi düzeylerin asilama sonrasi düzeyler ile karsilastirilmasi suretiyle degerlendirilebilir. Örnek 1'in deneyi, farkli yaslardaki insan gönüllülerde su sekilde yapildi: A Grubu 18-30 yaslari arasi yetiskinlerde gE ASl B Grubu Varilrix OKA susu ile es zamanli verilen gE, 18 -30 yas C Grubu 50-70 yaslari arasi yetiskinlerde tek basina Varilrix OKA D Grubu 50-70 yaslari arasi yetiskinlerde gE ASI E Grubu Varilrix OKA susu ile es zamanli verilen gE, 50 -70 yas Asilama plani asagidaki sekildeydi: Grup Yas (Y) N Asi 1 (0. Ay) Asi 2 (2. Ay) A 18-30 10 gE-ASI gE-ASl B 18-30 10 gE-ASI + Varilrixm gE ASI+Vari1rixm D 50-70 45 gE-ASl gE-ASI E 50-70 45 gE-ASI + Varilrixm gE-ASHVarilrixm ASl adjuvani, 3D MPL ve kolesterol ile söndürülmüs formda QSZl içerir ve WO9633739°da tarif edildigi gibi yapildi. Ozellikle ASI adjuvani esasen WO9633739°daki Ornek 1.1 gibi hazirlandi. Ad juvan sunlari içerir: lipozomlar, bu da dioleoil fosfatidilkolin (DOPC), kolesterol ve 3D MPL [lOOOug DOPC, 250 ug kolesterol ve 50 ug 3D MPL miktarinda, her deger, asi dozu basina yaklasik olarak verilir], QSZ] [50ug/doz], PBS ve 0.5ml hacme kadar su. MPL ihtiva eden lipozomlarin `uretimi prosesinde DOPC (Dioleil fosfatidilkolin), kolesterol ve MPL, etanol içinde çözülür. Bir lipit film, vakuin altinda solvent buharlastirilarak olusturulur. Fosfat Tamponlu Tuz veya PES (9 mM NazHPO4, 41 mM KH2P04, lOOmM NaCI), pH 6.1"de ilave edilir ve karisim, ön homojenlestirmeye, ardindan 15,000 psi°de (20 döngü) mikro-akiskanlastirinaya tabi tutulur. Bu, lipozomlarin üretilmesine yol açar, bunlar da 0.22 um°lik bir meinbrandan aseptik (sinif 100) bir alanda steril filtre edilir. Daha sonra steril ürün, steril cain kaplara dagitilir ve soguk bir odada (+2 ila +8°C) saklanir. Bu sekilde üretilen lipozomlar, membran içinde MPL ihtiva eder Sekil l'e ait kesik gE, CHO K1 hücreleri içinde standart teknikler kullanilarak eksprese edildi ve sirasiyla anyon degistirme kromatografisi, hidrofobik etkilesim kromatografisi, iyon degistirme kroinatografisi, diya-filtreleme ve nano-filtreleme, ardindan 0.22 um'lik bir filtre üzerinden sterilizasyon kullanilarak saflastirildi. Ozellikle gE'nin saHastirilinasinda asagidaki adimlar kullanildi Birinci asama: anyon degistirme kroinatografisi gE ihtiva eden kültür süpernatani (yaklasik 30 ing/l) ya hücre süspansiyonunun berraklastirilmasindan sonra direkt olarak ya da 4°C'de defrost edildikten sonra saflastirilir. 20 litrelik bir damacanaya aktarildiktan sonra süpernatan pH'i 6'ya ayarlanir. Yakalama asamasi, ortain sicakliginda bir Q Sepharose XL resini ihtiva eden bir kromatografi kolonu üzerinde gerçeklesir. Sodyum hidroksid ile sihhi hale getirildikten sonra kolon, yakalama tainponu (piperazin 20 mM pH 6) içinde kosullandirilir. Daha sonra kolona süpernataii yüklenir ve kolon, dengeleme tainponu ve bir piperazin 20 mM + NaCl 150 mM pH 6 çözeltisi ile yikanir. gE'yi ihtiva eden fraksiyon daha sonra bir piperazin 20 mM + NaCl 250 mM çözeltisi ile pH 6'da elüte edilir. Ikinci asama: hidrofobik etkilesim kromatografisi Bu kromatografi asamasi, ortam sicakliginda bir Toyopearl butil-650 M resini (Tosoh Biosep) 'üzerinde gerçeklesir. mM piperazin + 250 mM NaCl ile Q Sepharose XL asamasinda elüte edilen fraksiyon, amonyum sülfat içinde 1 M'ye tamamlanir ve pH 7.5'e ayarlanir. Sodyum hidroksid ile sihhi hale getirildikten sonra ve bu fraksiyon yüklenmeden önce kolon, yakalama tamponu (50 mM KH2PO4 + IM amonyum sülfat pH 7.5) içinde kosullandirilir. Yüklemeden sonra kolon, tampon 50 mM KHZPO4 + 2SO4 pH 7.5 ile elüte edilir. Uçüncü asama: immobilize edilmis metal iyonu üzerinde afinite kromatografisi Bu kromatografi asamasi, ortam sicakliginda bir Chelating Sepharose Fast Flow resini üzerinde gerçeklesir. Bu resin, bir nikel sülfat çözeltisi (%1) uygulanarak metal iyonu (Ni) açisindan doyurulur ve fazla baglanmamis iyonlar (Ni), yikanarak çikarilir. 50 mM KH2P04 + mM (NH4)ZSO4 pH 7.5'te hidrofobik fazda elüte edilmis gE fraksiyonu, 0.5 M NaCl'ye tamamlanir ve pH 7.5'e ayarlaiiir. Sihhi hale getirildikten sonra kolon, yakalama tamponu (50 mM KH2P04 + 0.5 M NaCl pH 7.5) içinde dengelenir. gE çözeltisi kolona yüklenir, bu da daha sonra bir 50 mM KH2P04 + 0.5 M NaCl pH 5.6 çözeltisi ile yikanir. gE daha sonra 50 mM sodyum asetat + 0.5 M NaCl pH 5 tamponu ile elüte edilir ve bir Tris lM çözeltisi pH 9.5 ile nötralize edilir. Dördüncü asama: diya-filtreleme Tampon degistirme ve tuzlarin önceki asamada pH 5'te elüte edilmis gE fraksiyonundan temizlenmesi, tegetsel ultra-filtreleme yoluyla yapilir. Bu asama tamamen +4°C'de gerçeklestirilir. Ultra-filtreleme, limit nominal moleküler agirliga ve 0.1 m2 yüzey alanina sahip, bir Pellicon2 mini kaset yuvasi (kat. XX42PM1N1) içine konulmus 10 kDa Pellicon2 Mini membran rejenere selüloz (kat: P2C010C01) takilmis Millipore Proflux M12 sistemi ile çalistirilir. Su ile durulandiktan ve sodyum hidroksid ile sihhilestirildikten sonra menibranli bütün sistem, 2 litre modifiye PBS tamponu (: 8.1 mM 7.2) ile durulanir ve sonra 2 litre ayni tampon ile permeatta 7.2 pH degerine ulasilaiia kadar dengelenir. Membran geçirgenliginin ölçümü teyit edilir. Membran üzerinde bütünlük testi, sistemin diyafiltreleme asamasindan önce ve sonunda 1 bara kadar olan basinca konulmasi ile yapilir. Bu membran, bir hafta arayla iki kez kullanilirsa bütünlük 3 kez test edilecektir (her ultrafiltreleme 'Öncesinde bir kez ve ikinci filtrelemeden sonra bir kez). dakika boyunca kaydedilen basinç kaybi 0.1 barin altinda ise membran bozulmamis kabul edilir. Afinite asamasinda pH 5'te elüte edilen gE fraksiyonunun konsantrasyonu, 280 nm'de optik yogunlugun ölçülmesi suretiyle degerlendirilir. 280 nm'de absorbans ile microBCA'ya göre gE'nin protein konsantrasyonu arasindaki iliski, 'l OD280 : 1.75 mg/ml'de sabitlenir. gE ihtiva eden çözelti, 10 hacim modifiye PBS tainponuna (= 8.1 mM 7.2) karsi diya-filtre edilir. Diyafiltreleme süresi yaklasik 11/2 -2 saat (perineat akisi yaklasik 60 ml/dak) olacak sekilde basinç kosullari ayarlanir. Diyafiltreleme tortusu daha sonra geri kazanilir ve taban çizgisi OngO bazinda membran, modifiye edilmis PBS ile yikanarak 0.4 mg/ml'lik yaklasik nihai konsantrasyon elde edilir. Besinci asama: nanofiltreleme Bu bir sonraki asama, çapi 15 nm'den büyük olan virüslerin tutulma yoluyla temizlenmesini mümkün kilar. Asama tamamen +4°C'de gerçeklestirilir. Nanofiltreleme, bir PLANOVA 15N filtre üzerinde yapilir (ortalaina gözenek ebadi 15 nm; filtreleme yüzey alani 0.12 m2 (ASAHI kat: 15NZ-120)). 0.45 bar sabit basinç altinda gE çözeltisi membran Borular ve yuva (kolon XKSO), 2 saat süreyle bir NaOH 0.5M çözeltisi ile sihhilestirilir. Tamami daha sonra durulamr ve modifiye edilmis PBS tamponu (diyafiltreleme için kullanilan ile ayni tampon) ile 7.2 pH degerine ulasilana kadar nötralize edilir. Nanofiltre PLANOVA 15N (besleme tarafi) muhafazanin altina sabitlendikten sonra filtre durulanir ve modifiye edilmis PBS çözeltisi ile dengelenir. gE çözeltisini ihtiva eden diyafiltreleme tortusu ilk olarak 0.22 um üzerinden ön filtre edilir (mini kleenpak OU Acropak20, filtre edilecek hacme bagli olarak), ardindan 0.45 bar sabit basinçta PLANOVA 15N üzerinde nano-filtre edilir. Nanofiltreleinenin sonunda filtre, yeterli hacimde modifiye edilmis PBS ile durulanarak yaklasik 0.3 mg/ml'lik dökme nihai konsantrasyonu saglanir. Bitirinek için membran, 50 ml modifiye edilmis PBS ile yikanir. Çözelti, çikistan geri kazanilir. PLANOVA 15N membrani üzerinde bütünlük testleri su sekilde yapilir: - birinci test, membranin basinç altina (1.0 kg/cmz) sokulmasindan ve hava kabarciklarinin olusuinunun gözlenmesinden olusur. Bu test, büyük ayrilmalari saptar. - ikinci test: altin partiküllerinin teinizleninesi (PARTICORPLANOVA-QCVAL4), membran yapisini teyit eder (büyük gözeneklerin ve kilcallarin iyi bir dagilimi). Asi kompozisyonu Asinin gE bileseni, 50 tig gE ve eksipiyanlar sodyum klorid, potasyum klorid, monopotasyum fosfat, disodyum fosfat ve en jeksiyonluk suyun yani sira ASl ad juvani içerir. Inorganik tuzlarin fonksiyonu, izotonikligi ve fizyolojik pH'i saglamaktir. Steril bir cain kap içinde enjeksiyonluk su, konsantre fosfat tainponlu tuz ve gE anti jeni, asagidaki gibi muhteviyat konsantrasyonuna ulasmak üzere karistirilir: Muhteviyatlar Niceliksel (doz basina) gE 50 aa Sodyum klorid (NaCl) 1603 ug Disodyuin fosfat (NaH2P04) 288 ug Monopotasyum fosfat (KH2P04) 40 ug Potasyum klorid (KCl) 40 ug En jeksiyonluk su 0.2 mL'ye kadar yeterli miktar Çözelti 30 ila 40 dakika süreyle karistirilir. pH kontrol edilir ve 7.2 ± 0.1'de HCl veya NaCl ile ayarlanir veya uygunsa ve ilave 10 dakika süreyle karistirilir. Nihai dökme, polipropilen siseler içinde -20°C`de saklanir ve dolum için GSK Bio'ya transfer edilir. Asi, 3 m1, steril, silikonize cam siseler (0.25 ml/sise) içine doldurulur, gri klorobutil kauçuk stoper ile kapatilir ve ortasi yirtilinalik alüminyum baslik ile kapatilir. Incelenen onayli siseler daha sonra - 20°C'de saklanir. Asinin verilmesi Uygulama için gE-AS] asisi, sivi antijen preparasyonunun sivi AS] ad juvani ile enjeksiyondan hemen önce (en jeksiyondan maksimum bir saat önce) karistirilmasi suretiyle elde edildi. OKA (Varilrixm), üreticinin talimatlarina göre hazirlanmis, ticari olarak temin edilebilen bir partiydi. Asi formülasyonlari su sekildeydi: Formülasyon antijeni, 0.5 ml hacimde AS] Sunum Sivi gE ihtiva eden cam sise Toplam Doz Hacmi* 0.7ml (yeniden olusturulduktaii sonra) Asi Seyrelticili Varilrix Formülasyon Yaklasik 104'0 pfu/doz 0/5ml hacim Sunum Yeniden olusturulmak üzere liyofilize edilmis asi ihtiva eden cain sise Toplam Doz Hacmi* 0.5 ml gE ASl bileseni, intramüsk'üler enjeksiyon yoluyla uygulandi. Varilrix bileseni, subkütan enjeksiyon yoluyla uygulandi. Sonuçlarin analizi Klinik deneye hazirlik sirasinda dosyalanan klinik deney protokolü, deneyde gerçeklestirilecek çalisma tiplerini su sekilde belirledi: a. Lenfo-proliferasyon (veriler, Uyarma Endeksi [SI] olarak ifade edilir): VZV lizati ile uyarma sonrasinda GM, GM'deki artis kati ve tepki verenler %'si b. ICS'ye (hücre içi boyama) göre IFN gamma ve/veya IL2, TNF alfa, peptitleri ile uyarma sonrasinda GM, GM'deki artis kati ve tepki verenler %'si. Lenfoproliferasyon Periferal kan anti jene spesifik lenfositler, karsilik gelen anti jeiileri ile inkübe edilirse prolifere olmak üzere in vitro yeniden uyarilabilir. Sonuç olarak antijene Spesifik lenfositlerin miktari, tritiye edilmis timidin dahil etme deneyi ile tahmin edilebilir. Mevcut çalismada VZV antijeni veya VZV proteinlerinden türetilinis peptit, VZV'ye spesifik lenfositleri yeniden uyarmak için antijen olarak kullanilacaktir. Sonuçlar, antijene spesifik ve arka plan lenfoproliferasyon arasindaki orana karsilik gelen bir uyarma endeksi (SI) seklinde ifade edilecektir. Periferal kan antijenine spesifik CD4 ve CD8 T hücreleri, in vitro yeniden uyarilarak karsilik gelen antijenleri ile inkübe edildigi takdirde CD4OL, IL-2, TNF alphaD ve IFN gamma eksprese edebilir. Sonuç olarak antijene spesifik CD4 ve CD8 T hücreleri, hücre içi sitokin üretiminin yani sira hücre fenotipinin geleneksel immüno- floresan etiketlemesiiii takiben akis sitometresi ile sayilabilir. Mevcut çalismada VZV antijeni veya VZV proteinlerinden türetilmis peptit, VZV'ye spesifik T hücrelerini yeniden uyarmak için antijen olarak kullanilacaktir. Sonuçlar, CD4 veya CD8 T hücresi alt popülasyonu içinde sitokin-pozitif CD4 veya CD8 T hücresi frekansi olarak ifade edilecektir. Spesifik antikor (anti-VZV ve anti-gE) VZV ve gE'ye karsi antikor düzeyleri, klasik ELlSA deneyleri kullanilarak Ölçülecektir. Deneyin sonuçlari, tablo formunda gösterilir. Sekil 2-6, antikor (Sekil 2-4, bakiniz tablolar 1.1 a - c) ve CM] tepkileri (Sekil 5 ve 6 - bakiniz tablo Cl / "CD4 tüm ikililer" testi, gE antijen veya Varilirix ile, medyan degerler) için sonuçlari grafik formunda sunar. TR TR TR