BRPI0612492A2

BRPI0612492A2 - derivados de ácidos bifenila e naftil-fenila hidroxámicos

Info

Publication number: BRPI0612492A2
Application number: BRPI0612492-5A
Authority: BR
Inventors: Claudio Pisano; Loredana Vesci; Sabrina Dallavalle; Lucio Merlini; Sergio Penco; Giuseppe Giannini; Franco Zunino
Original assignee: Sigma Tau Ind Famaceutiche Riu
Priority date: 2005-06-28
Filing date: 2006-05-31
Publication date: 2010-11-23
Also published as: ES2356129T3; JP2008546822A; RS51576B; AR057407A1; JP5080462B2; US7728039B2; EP1896399B1; EP1896399A1; CN102993051A; PT1896399E; DK1896399T3; CN101198586A; EA012729B1; WO2007000383A1; AU2006263915A1; KR101288376B1; CY1111451T1; DE602006018298D1; SI1896399T1; CA2607207A1

Abstract

DERIVADOS DE áCIDOS BIFENILA E NAFTILFENILA HIDROXáMICOS. A presente invenção refere-se a compostos de bifenila e fenilnaftiía contendo um grupo hidroxâmico, que são dotados de atividade antitumor e antiangiogênica. Estes compostos são assim particularmente utilizáveis para o tratamento de tumores resistentes a fármacos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOSDE ÁCIDOS BIFENILA E NAFTIL-FENILA HIDROXÂMICOS".

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se aos compostos bifenila e fenil-naftila contendo um grupo hidroxâmico, que são dotados com atividade anti-tumor e antiangiogênica.

ANTECEDENTE DA INVENÇÃO

A atividade antiproliferativa e antiangiogênica de alguns poucoscompostos estruturalmente relacionados com a classe dos compostos des-critos na presente invenção foi descrita.

Ácido (6-[3'-(1-adamantil)-4'-hidroxifenil]-2-naftalenocarboxílico(AHPN) também chamado de CD437) (Câncer Research, 2002; 62(8), 2430-6; Blood, 2000; 95, 2672 - 82; Leukemia, 1999, 13, 739 - 49; Câncer Letters11999, 137, 217-2) é descrito como sendo seletivo para o receptor-gamaRAR-γ de ácido retinóico, para inibir o crescimento de células e induzir a a-poptose em linhagens de células de carcinoma de mama, melanoma e decarcinoma cervical, incluindo os todos resistentes a ácido trans-retinóico (A-TRA-), com um mecanismo independente de ligação de receptor(W09703682; J. Med. Chem. 1995, 38, 4993 - 5006).

Além disso, alguns compostos relacionados com esta classe decompostos, como TAC-101 (Clin. Câncer Res. 1999, 5,2304-10) ou deriva-dos como RE-80, AM-580 ou Am-80 (Eur. J. Pharmacol. 1993, 249, 113-6)tem demonstrado propriedades antiangiogênicas.

Os compostos novos, que são derivados de bifenila de ácidoacrílico, foram recentemente descritos (Cincinelli R. et al., J. Med. Chem.2003, 46: 909 - 912 e WO 03/11808). Em particular, o composto chamado deST1926 (ácido E-3-(4'-hidróxi-3'-adamantilbifenil-4-il) acrílico) foi mostradocomo tendo uma atividade antiproliferativa potente em um painel grande decélulas de tumor humano.

Um dos últimos análogos desenvolvidos de CD437, compostode ácido (E)-4-[3'-(1-adamantil)-4'-hidroxifenil]-3-clorocinâmico (3-CI-AHPC)(Dawson1 Μ. I. et al. J. Med. Chem. 2004, 47(14), 3518 - 3536; WO0348101) é descrito como inibindo a proliferação e induzindo a apoptose decélulas cancerosas em ambos in vitro e in vivo.

Patente JP10182583 descreve alguns derivados de ácido fenil-cinamo hidroxâmico tendo uma ação de diferenciação- indução em célulascancerosas e utilizáveis como um medicamento para o tratamento de tumo-res malignos, doenças autoimunes e doenças da pele.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Os compostos da presente invenção são caracterizados pelapresença de um grupo hidroxâmico, que surpreendentemente confere aoscompostos uma atividade antitumor surpreendente. Em particular, os com-postos da invenção são inesperadamente ativos em linhagens de célula detumor, que se tornam resistentes a outros compostos antitumores conheci-dos, que pertencem a classes químicas relacionadas, mas não contém umgrupo hidroxâmico.

Assim o objetivo principal da presente invenção é prover com-postos de bifenila e fenil-naftila de fórmula (I)

<formula>formula see original document page 3</formula>

onde:

R1 é selecionado dentre o grupo consistindo em H, adamantila, Cl;

R2 é selecionado dentre o grupo consistindo em OMe, Cl, CN, e(CH2)nOH onde η é selecionado dentre 0, 1 e 2; ou

R2, tomado junto com o anel ao qual é ligado, forma um deriva-do de metileno- ou etileno-dióxi;

R3 é selecionado entre H e Cl;

A é um dos seguintes grupos divalentes: [CH=CH] (trans),[C=C], ou, tomado junto com o anel ao qual ele é ligado, forma um gruponaftila.

Como já dito, os compostos da presente invenção mostram umaatividade antitumor inesperada em linhagens de célula de tumor, que se tor-nam resistentes a outros compostos antitumores conhecidos.

Preferivelmente, eles têm um índice de resistência menor doque 5, mais preferivelmente próximo a 1. O índice de resistência é a relaçãoentre o IC50 medido em linhagens de célula de tumor resistentes e o IC50medido em linhagens de célula de tumor sensível [(IC50 em linhagem decélula de tumor resistente/IC50 linhagem de célula de tumor sensível)]; paraa determinação desta referência de valor é apresentada a seção correspon-dente intitulada "Estudos Biológicos".

Os seguintes são alguns dos compostos mais preferidos de acordo com ainvenção:

E-3-(4'-hidróxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida (ST2782);

E-3-[3'-(1-adamantil)-4'-hidróxi-bifenil-4-il]-N-hidróxi-acrilamida (ST2992);

N-hidroxiamida de ácido 6-[3-1-(adamantil)-4-hidroxifenil]-naftaleno-2-carboxílico (ST2142);

N-hidroxiamida de ácido 6-[3-1-(adamantil)-4-metoxifenil]-naftaleno-2-carboxílico (ST3259);

3-[4-(8-adamahtan-1-il-2,3-dihidrobenzo[1,4]dioxin-6-il)-fenil]-N-hidróxi-acrilamida (ST3081);

E-S-ÍS^adamantan-l-il^-cloro^^hidróxi-bifenil^-iO-N-hidróxi-acrilamida(ST3088);

E-3-(3'-adamantan-1 -il-4'-metóxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida (ST3056);E-3-(4'-hidroximetil-bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida (ST3258);E-3-(3'-cloro-4'-hidróxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida (ST3192);E-3-[4'-metóxi-bifenil-4-il]-N-hidróxi-acrilamida (ST3595);E-3-[4'-ciano-bifenil-4-il]-N-hidróxi-acrilamida (ST3604); eE-3-[4'-clorobifenil-4-il]-N-hidróxi-acrilamida (ST3483).

Os resultados experimentais obtidos (descritos na seção intitulada "exem-plos") mostram que os compostos de fórmula (I), tanto sozinhos como emcombinação com outros fármacos antitumores conhecidos, são agentes utili-záveis para o tratamento de tumores.

Um outro objeto da invenção descrita aqui são os compostos com a fórmulageral (I) e seu uso no campo medicinal.

Um outro objeto da invenção descrita aqui é uma composição farmacêuticacontendo como ingrediente ativo um composto de fórmula (I) e pelo menosum excipiente farmaceuticamente aceitável e/ou diluente.

Um outro objeto da invenção descrita aqui são os compostoscom a fórmula geral (I) e um processo para sua preparação.

Um outro objeto da invenção descrita aqui é uma composiçãofarmacêutica contendo como ingrediente ativo um composto de fórmula (I),para o tratamento de um tumor patológico, em que o tumor é selecionadodentre o grupo consistindo em sarcoma, carcinoma, carcinóide, tumor ósseo,tumor neuroendócrino, leucemia linfóide, leucemia promielocítica aguda, Ieu-cernia mielóide, leucemia monocítica, Ieucemina megacarioblástica e doençade Hodgkin.

Um outro objeto da invenção descrita aqui é uma composiçãofarmacêutica contendo como ingrediente ativo um composto Formula (I), pa-ra o tratamento de um tumor de patológico, em que o tumor demonstra resis-tência do fármaco aos outros agentes antitumores usados para o mesmotratamento.

Um outro objeto da invenção descrita aqui é uma composiçãofarmacêutica contendo como ingrediente ativo um composto de fórmula (I),em combinação com um ou mais agentes antitumores conhecidos, em que ocomposto antitumor é selecionado dentre o grupo consistindo em agentesalquilantes, inibidores de topoisomerase, agentes antitubulina, compostosintercalantes, anti metabólitos, produtos naturais como alcalóides de vinca,epipodofilotoxinas, antibióticos, enzimas, taxanos, e compostos de cito-diferenciação.

Dentre os agentes antitumores de cito-diferenciação, um prefe-rido é ácido todo-trans retinóico (ATRA).

Um outro objeto da invenção descrita aqui é o uso de um com-posto de fórmula (I) para a preparação de um medicamento para o tratamen-to de um tumor patológico.

Um outro objeto da invenção descrita aqui é o uso de um com-posto de fórmula (I) para a preparação de um medicamento para o tratamen-to de um tumor patológico em que o tumor tem mostrado resistência ao fár-maco para os outros fármacos antitumores usados para o mesmo tratamento.

Um outro objeto da invenção descrita aqui é o uso de um com-posto de fórmula (I), em combinação com um ou mais agentes antitumoresconhecidos, para a preparação de um medicamento para o tratamento detumores patológicos.

Um outro objeto da invenção descrita aqui é o uso de um com-posto de fórmula (I) em combinação com ácido todo-trans retinóico para apreparação de um medicamento para o tratamento de leucemia promielocíti-ca aguda.

Ainda outro objeto da presente invenção é um processo parapreparar as composições farmacêuticas da invenção compreendendo mistu-rar o ingrediente ativo com pelo menos um excipiente farmaceuticamenteaceitável e/ou diluente.

Um outro objeto da presente invenção é um método de tratar ummamífero sofrendo de um tumor patológico, como descrito acima, compre-endendo a administração uma quantidade terapeuticamente eficaz do com-posto (s) de fórmula (I).

"Quantidade terapeuticamente eficaz" é uma quantidade eficazpara alcançar o resultado medicalmente desejável no indivíduo tratado. Ascomposições farmacêuticas podem conter veículos farmaceuticamente acei-táveis apropriados, veículos biologicamente compatíveis apropriados paraadministração a um animal (por exemplo, solução salina fisiológica) e even-tualmente compreendendo auxiliares (como excipientes, estabilizadores oudiluentes) que facilitam o processamento dos compostos ativos nas prepara-ções que podem ser usados farmacêuticos.

As composições farmacêuticas podem ser formuladas em qualquer modoaceitável para atender às necessidades do modo de administração. O usode biomateriais e outros polímeros para a distribuição do fármaco, assimcomo técnicas e modelos diferentes para validar um modo especifico de ad-ministração, são descritos na literatura.

As modificações dos compostos da invenção para melhorar a penetração dabarreira sangue-cérebro são também utilizáveis.

Qualquer modo de administração aceito pode ser usado e de-terminado pelo versado na técnica. Por exemplo, a administração pode serpor várias vias parenterais, como vias subcutânea, intravenosa, intradérmi-ca, intramuscular, intraperitoneal, intranasal, transdérmica, oral, ou bucal.

A administração parenteral pode ser por injeção de bolus ou porperfusão gradual com o passar do tempo. As preparações para administra-ção parenteral incluem soluções aquosa estéril ou não aquosa, suspensões,e emulsões, que podem conter agentes auxiliares ou excipientes conhecidosna técnica, e podem ser preparadas de acordo com os métodos rotineiros.Além disso, a suspensão dos compostos ativos como suspensões de inje-ções oleosas apropriadas pode ser administrada. Os solventes lipofílicosapropriados ou veículos incluem óleos graxos, por exemplo, óleo de gerge-lim, ou ésteres de ácido graxo sintético, por exemplo, óleo de gergelim, ouésteres de ácido graxo sintéticos, por exemplo, etiloleato ou triglicerídeos.

As suspensões de injeção aquosa que podem conter substân-cias que aumentam a viscosidade da suspensão incluem, por exemplo, car-boximetil celulose de sódio, sorbitol, e/ou dextrano. Opcionalmente, a sus-pensão também pode conter estabilizadores.

As composições farmacêuticas incluem soluções apropriadaspara a administração por injeção, e contém de cerca de 0,01 a 99 por cento,preferivelmente de cerca de 20 a 75 por cento de composto ativo junto como excipiente. As composições que podem ser administradas retalmente in-cluem supositórios.

Deve-se entender que a dosagem administrada será dependen-te da idade, sexo, saúde e peso do recipiente, tipo de tratamento concorren-te, se presente, freqüência de tratamento, e a natureza do efeito desejado. Adosagem será adequada ao indivíduo, como é entendido e determinável porum versado na técnica. A dose total requerida para cada tratamento podeser administrada por doses múltiplas ou em uma dose única. A composiçãofarmacêutica da presente invenção pode ser administrada sozinha ou emconjunto com outros terapêuticos dirigidos na condição, ou dirigido para ou-tros sintomas da condição. Geralmente, uma dose diária de ingrediente ativoestá compreendida entre 0,01 a 100 miligramas por quilograma de peso docorpo.

Os compostos da presente invenção podem ser administradosao paciente intravenosamente em um veículo farmacêutico aceitável comosolução salina fisiológica.

Métodos-padrão para a distribuição intracelular de peptídeospodem ser usados, por exemplo, distribuição via lipossomas. Tais métodossão bem-conhecidos dos versado na técnica. As formulações desta invençãosão utilizáveis para administração parenteral, como intravenosa, subcutânea,intramuscular, e intraperitoneal.

Como bem-conhecido nas técnicas médicas, as dosagens paraqualquer um paciente depende de muitos fatores, incluindo o tamanho dopaciente, a área de superfície do corpo, o composto particular a ser adminis-trado, sexo, tempo, e via de administração, saúde geral, e outras fármacossendo administradas concorrentemente.

Todas as referências citadas aqui são apenas incorporadas porreferência aqui, incluindo todos os dados, tabelas, figuras e texto apresenta-do nas referências citadas.

Além disso, os conteúdos completos das referências citadasdentro das referências aqui citadas são também incorporados por referência.

A referência a etapas de métodos conhecidos, etapas de método convencio-nal, métodos conhecidos ou métodos convencionais não é, de nenhum mo-do, uma admissão de que qualquer aspecto, descrição ou modalidade dapresente invenção é descrita, ensinada ou sugerida na técnica relevante.

Uma vez entendidos os aspectos dos métodos e produtos des-critos no presente pedido, a necessidade e tipo de etapas adicionais podemser facilmente deduzidos por estudo da técnica anterior, assim como figurasseguintes não Iimitativas e exemplos descrevendo os detalhes básicos e al-gumas aplicações da invenção.

Os compostos da presente invenção podem ser facilmente pre-parados de acordo com um processo, que usa como material de partida oácido carboxílico correspondente. Tais ácidos carboxílicos correspondentespodem ser preparados de acordo com os procedimentos descritos em WO-9703682, JP 10182583, W003/11808, e em publicações relacionadas, ou deacordo com o procedimento-padrão de síntese orgânica.

Como uma referência fácil, os diagramas mostrados na seção"exemplos" podem sem usados e a síntese de um composto particular defórmula (I) pode ser facilmente designado.

Os seguintes exemplos ainda ilustram a invenção, que fazemreferência na figura citada.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Figura 1 - Mostra as estruturas químicas dos compostos cujasíntese e teste biológico foram descritos no presente pedido. Os compostoscontendo um grupo hidroxâmico são descritos com seu número de identifi-cação como indicado nos exemplos ou exemplos de referência e, entre pa-rênteses, o número de identificação do composto de ácido carboxílico cor-respondente é descrito. Os compostos identificados por números em parên-teses e seus dados de atividades biológicas correspondentes são descritospara fins comparativos apenas.

Figura 2 - Mostra as estruturas químicas dos compostos cujoteste biológico foi descrito no presente pedido, mas que estão foro escopoda presente invenção. Os compostos contendo um grupo hidroxâmico sãodescritos com seu número de identificação como indicado nos exemplos ouexemplos de referência e, entre parêntese, o número de identificação docomposto de ácido carboxílico correspondente é descrito. Os compostosidentificados por números em parêntese e seus dados de atividades biológi-cos correspondentes são descritos para fins comparativos apenas.

EXEMPLOSExemplo 1

Preparação de £-3-(4'-hidróxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida (ST2782)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 1 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 1

<formula>formula see original document page 10</formula>

250 mg (1,04 mmol) de ácido E-4-(4-hidroxifenil) cinâmico foramdissolvidos sob nitrogênio em 10 ml de DMF1 então 169 mg (1,25 mmol) dehidrato hidroxibenzotriazol e 259 mg (1,35 mmol) de cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida foram adicionados e a solução assimobtida foi mantida sob agitação em temperatura ambiente durante 3 horas.

Após adição de cloridrato de hidroxilamina (361 mg, 5,2 mmols),seguido por 0,72 ml (5,2 mmols) de TEA, a mistura foi agitada em tempera-tura ambiente durante a noite. DMF foi removido sob pressão reduzida e oresíduo foi lavado com água para obter 263 mg de um produto bruto. Purifi-cação por cromatografia instantânea em sílica-gel de fase reversa (LiChro-prep RP-18, Merck) usando metanol: água 50/50 como eluente deu 34 mg(13%) do composto do título como um sólido branco.

P.if. > 300°C Rf = 0,2 (sílica-gel Merck 60F254, CH2CI2:/MeOH90:10 ) Rf = 0,34 (Merck LiChroprep RP-18, Me0H/H20 60:40)1H RMN (DMSOd6) δ 1,74 (6H, s, 6Ad.); 2,04 (3H, s, 3Ad.); 2,12(6H, s, 6Ad.); 6,44 (1H, d, -CH=, J = 16,00 Hz); 6,82 (2H, d, 2Ar, J = 8,19Hz); 7,43 (1H, d, -CH=, J = 16,00 Hz); 7,48 - 7,69 (5H, m, 5Ar); 9,00 (1H, brs,-CONHOH).9,62 (1H, s, -OH); 10,73 (1H, brs, -CONHOH).

Exemplo 2

Preparação de E-3-[3'-(1 -adamantil)-4'-hidróxi-bifenil-4-in-N-hidróxi-acrilamida (ST2992)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 2 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 2<formula>formula see original document page 11</formula>

A uma solução de ácido E-4-(3-(1-adamantil)-4-hidroxifenil) ci-nâmico (2 g, 5,34 mmols) em 80 ml de DMF foram adicionados hidrato dehidroxibenzotriazol (866 mg, 5,34 mmols) e cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida (1130 mg, 6,94 mmols). A mistura foiagitada em temperatura ambiente durante 4h. Após adição de cloridrato dehidroxilamina (1856 mg, 26,7 mmols), seguido por 3,7 ml (26,7 mmols) deTEA, a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. DMF foiremovido sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com água para obter 5g de um produto bruto. Purificação por cromatografia instantânea em sílica-gel (tamponado com fosfato) usando como eluente diclorometano/metanol95:5 deu 950 mg do composto do título como um sólido branco.

P.f. 210-212°C dec. Rf= 0,19 (sílica-gel Merck 6OF254, hexano/EtOAc 4:6)

1H RMN (DMSO-Cl6) δ: 1,73 (6H, s, 6Ad.); 2,04 (3H, s, 3Ad.);2,13 (6H, s, 6Ad.); 6,46 (1H, d, -CH=, J = 16,00 Hz); 6,86 (1H, d, 1Ar, J =8,19 Hz); 7,29 - 7,40 (2H, m, 2Ar); 7,47 (1H, d, -CH=, J = 16,00 Hz); 7,52 -7,65 (4H, m, 4Ar); 9,03 (1H, brs, -CONHOH); 9,54 (1H, s, -OH); 10,75 (1H,brs, -CONHOH).

Exemplo 3

Preparação de N-hidroxiamida de ácido 6-[3-1-(adamantil)-4-hidroxifenin-naftaleno-2-carboxílico (ST2142)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 3 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 3

<formula>formula see original document page 11</formula>212 mg (0,53 mmol) de ácido 6-[3-1-(adamantil)-4-hidroxifenil]-naftaleno-2-carboxílico foram dissolvidos sob nitrogênio em 8 ml de DMF,então 79 mg (0,58 mmol) de hidrato de hidroxibenzotriazol 132 mg (0,67mmol) de cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida foram adi-cionados e a solução assim obtida foi mantida sob agitação em temperaturaambiente durante 2 horas. Após adição de cloridrato de hidroxilamina (184mg, 2,65 mmols), seguido por 0,36 ml (2,65 mmols) de TEA, a mistura foiagitada em temperatura ambiente durante a noite. DMF foi removido sobpressão reduzida e o resíduo foi lavado com água para obter 150 mg de umproduto bruto. Purificação por cromatografia instantânea em sílica-gel defase reversa (LiChroprep RP-18, MERCK) usando metanol: água 85: 15 co-mo eluente deu 80 mg (41%) do composto do título como um sólido branco.

P.f. 217-219°Cdec.

1H RMN (DMSOd6) δ: 1,76 (6H, s, 6Ad.); 2,05 (3H, s, 3Ad.);2,17 (6H, s, 6Ad.); 6,90 (1H, d, 1Ar, J = 8,19 Hz); 7,41 - 7,54 (2H, m, 2Ar);7,77 - 7,88 (2H, m, 2Ar); 8,02 (2H, dd, 2Ar, J = 2,23, 8,93 Hz); 8,33 (1H, s,1 Ar); 9,57 (1H, brs, -CONHOH); 11,35 (1H, brs, -CONHOH).

Exemplo 4

Preparação de 3-[4-(8-adamantan-1-il-2,3-dihidro-benzon ,41dioxin-6-il)-fenin-N-hidróxi-acrilamida (ST3081)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 4 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 4

<formula>formula see original document page 12</formula>

60 mg (0,144 mmol) de ácido 3-[4-(8-(1-adamantil)-2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxin-6il)-fenil[]-acrílico, 55 mg (0,144 mmol) de N-óxido de hexa-fluorofosfato de N-[(dimetilamino)-1 H-1,2,3-triazolo-[4,5-b]piridin-1 -il-metileno]N-metilmetanamínio (HATU) e 50 μΙ_ (0,288 mmol) de DIPEA foramdissolvidos sob nitrogênio em 1 mL de DMF. A mistura resultante foi agitadadurante 2 min (tempo de pré-ativação), então cloridrato de hidroxilamina (40mg, 0,576 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada em temperatura ambi-ente durante a noite. Após evaporação do solvente, o resíduo foi resfriadocom gelo, adicionado com água e agitado durante 1h em temperatura ambi-ente. A suspensão resultante foi filtrada e o filtrado foi lavado com água eéter dietílico para dar 40,5 mg (65%) de um sólido branco.

P.f. 211-213°C dec. Rf = 0,6 (sílica-gel Merck 60F254,CH2CI2/MeOH 9:1))

1H RMN (DMSOd6) δ: 1,74 (6H, s, 6Ad.); 2,04 (3H, s, 3Ad.);2,12 (6H, s, 6Ad.); 4,27 (4H, s, CH2-O-); 6,47 (1H, d, -CH=, J = 16,00 Hz);7,00 (1H, s, 1 Ar); 7,03 (1H, s, 1Ar); 7,47 (1H, d, -CH=, J = 16,00 Hz); 7,52 -7,68 (4H, m, 4Ar); 9,04 (1H, brs, -CONHOH); 10,75 (1H, brs, -CONHOH).

Exemplo 5

Preparação de E-3-(3'-adamantan-1 -il-2-cloro-4'-hidróxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida (ST3088)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 5 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 5

<formula>formula see original document page 13</formula>

5 mg (0,134 mmol) de ácido E-3-[3'-(1-adamantil)-2-cloro-4'-hidroxibifenil-4-il] -acrílico, 51 mg (0,134 mmol) de N-óxido de hexafluorofos-fato de N-[(dimetilamino)-1 H-1,2,3-triazolo-[4,5-b]piridin-1 -il-metileno]N-metilmetanamínio (HATU) e 47μΙ_ (0,288 mmol) de DIPEA foram dissolvidossob nitrogênio em 1 mL de DMF. A mistura resultante foi agitada durante 2min. (tempo de pré-ativação). Cloridrato de hidroxilamina (37 mg, 0,536mmol) foi adicionado e a reação foi agitada durante adicional de 90 min. A-pós evaporação do solvente, o resíduo foi resfriado com gelo, adicionadocom água e agitado durante 1h em temperatura ambiente. A suspensão re-sultante foi filtrada e o filtrado foi lavado com água e éter dietílico. O bruto foipurificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (tamponado com fos-fato) usando como eluente diclorometano/metanol 9:1 para obter 15 mg deum sólido branco.

P.f. 160°C dec. R,= 0,27 (sílica-gel Merck 60F254, CH2CI2/MeOH 95:5)

1H RMN (DMSOd6) δ: 1,72 (6H, s, 6Ad.); 2,02 (3H, s, 3Ad.);2,09 (6H, s, 6Ad.); 6,51 (1H, d, -CH=, J = 16,00 Hz); 6,84 (1H, d, 1Ar, J =8,19 Hz); 7,13 (1H, d, 1 Ar, J = 8,93 Hz); 7,16 (1H, s, 1 Ar); 7,36 - 7,51 (2H, m,2Ar); 7,56 (1H, d, 1Ar, J = 8,19 Hz); 7,71 (1H, s ,1Ar); 9,10 (1H, brs, -CONHOH); 9,58 (1H, s, -OH); 10,77 (1H, brs, -CONHOH).

Exemplo 6

Preparação de E-3-(3'-adamantan-1 -il-4'-metóxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida (ST3056)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 6 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 6

450 mg (1,159 mmol) de ácido E-3-[3'-(1-adamantil)-2-cloro-4'-metoxibifenil-4-il] -acrílico, 529,2 mg (1,392 mmol) de N-óxido de hexafluoro-fosfato de N-[(dimetilamino)-1H-1,2,3-triazolo-[4,5-b]piridin-1-il-metileno]N-metilmetanamínio (HATU) e 404 μΐ_ (2,32 mmols) de DIPEA foram dissolvi-dos sob nitrogênio em 13,5 mL de DMF. A mistura resultante foi agitada du-rante 30 min (tempo de pré-ativação). Uma solução de cloridrato de hidroxi-lamina (161,19 mg, 2,320 mmols) e DIEA (404 μΙ_, 2,320 mmols) em 4,5 mLde DMF, foi adicionado e a reação foi agitada durante adicional de 2,2h.

Trabalho: a mistura de reação foi então acidificada com HCI a-quoso (pH 3-4); a suspensão resultante foi filtrada e o precipitado foi lavadocom HCI aquoso (pH 3-4) e água. Ela foi então colocada em suspensão emMeOH quente, deixada para resfriar em temperatura ambiente e mantida sobagitação durante a noite.

Filtração de suspensão resultante e lavagem com acetona de-ram 350 mg de sólido branco (0,867; rendimento: 75%).

Rf = 0,27 (sílica-gel Merck 60F254, CH2CI2/MeOH 90:10)1H RMN (DMSO-de) δ: 1,73 (6H, s, 6Ad.); 2,04 (3H, s, 3Ad.);2,08 (6H, s, 6Ad.); 6,46 (1H, d, -CH=, J = 16,11 Hz); 7,05 (1H, d, 1Ar, J =9,07 Hz); 7,35 - 7,80 (6H, m, Ar); 9,10 (1H, brs, -CONHOH); 9,60 (1H, s, -OH); 10,78 (1H, brs, -CONHOH).

ES-MS: 402,48 [M-H]" e 426,38 [M-Na]+.

Exemplo 7

Preparação de E-3-(4'-Hidróxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-propiolamida

O composto do título foi preparado seguindo diagrama de sínte-se 7 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 7

40 mg (0,17 mmol) de ácido (4'-hidroxibifenil-4-il)-propinóico fo-ram dissolvidos sob nitrogênio em 13 μΙ de DMF1 então 1,2 ml de CH2CI2foram adicionados e a solução foi resfriada a O0C. Após adição lenta de 33μΙ_ (0,38 mmol) de cloreto de oxalila, a solução foi mantida sob agitação a0°C durante 40 min. Uma solução de mg (0,68 mmol) de cloridrato de hidro-xilamina e 148 μί (1,06 mmol) de TEA em 0,7 ml de THF/H20 6:1 foi goteja-da a 0°C, então a mistura foi agitada a 0°C durante 1,5h. Após adição deCH2CI2 a camada orgânica foi lavada com HCIa2N, secada com Na2SO4,filtrada e evaporada para obter 30 mg de um sólido amarelo.

Purificação por cromatografia instantânea em fase reversa ((Li-Chroprep RP-18, MERCK) usando como eluente água/metanol 1:1 deu 15mg (35%) do composto do título como um sólido branco.

Rf = 0,3 (sílica-gel Merck 60F254, CH2CI2:/MeOH 90:10)1H RMN (DMSO-de) δ: 6,85 (2H, d, 2Ar, J = 8,93 Hz); 7,50 (2H,d, 2Ar, J = 8,93 Hz); 7,65 - 7,85(4H, m, 4Ar); 9,75 (1H, brs, -CONHOH);10,50 (1H, brs,-CONHOH).

Exemplo 8

Preparação de E-3-r4'-hidroximetilbifenil-4-il1-N-hidróxi-acrilamida (ST 3258)

O composto do título foi preparado seguindo diagrama de sínte-se 8 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 8

<formula>formula see original document page 16</formula>

70 mg (0,28 mmol) de ácido Ε-4-hidroximetilfenilcinâmico foramdissolvidos sob nitrogênio em 3 ml de DMF, então 107 mg (0,28 mmol) deHATU e 97 μΙ_ (0,56 mmol) de DIPEA foram adicionados e a solução assimobtida foi mantida sob agitação em temperatura ambiente durante 5 min.

Após adição de cloridrato de hidroxilamina (22 mg , 0,31 mmol), a mistura foiagitada em temperatura ambiente durante 3h. DMF foi removido sob pressãoreduzida e o resíduo fõi lavado com água para obter, após filtração, 48 mgde um sólido branco. P.f. 220-223°C dec. Rf = 0,6 (sílica-gel Merck 60F254,CH2CI2:/MeOH 90:10 ). 1H RMN (DMSO-de) δ: 4,51 (2H, d, -CH2-, J = 5,58Hz); 5,20 (1H, t, -OH, J = 5,58 Hz); 6,47 (1H, d, -CH=, J = 16,00 Hz); 7,38(2H, d, 2Ar, J = 7,82 Hz); 7,47 (1H, d, -CH=, J = 16,00 Hz); 7,54 - 7,77 (6H,m, 6Ar); 9,03 (1H, brs, -CONHOH); 10,75 (1H, brs, -CONHOH).

Exemplo 9

Preparação de E-3-[3'-cloro-4'-hidroxibifenil-4-in-N-hidróxi-acrilamida (ST 3192)

O composto do título foi preparado seguindo diagrama de sínte-se 9 descrito como a seguir.Diagrama de síntese 9

<formula>formula see original document page 17</formula>

205 mg (0,75 mmol) de ácido E-3-cloro-4-hidroxifenilcinâmicoforam dissolvidos sob nitrogênio em 7,5 ml de DMF, então 285 mg (0,75mmol) de HATU e 97 μΙ_ (0,56 mmol) de DIPEA foram adicionados e a solu-ção assim obtida foi mantida sob agitação em temperatura ambiente durante2 min. Após adição de cloridrato de hidroxilamina (261 mg, 3,75 mmols), amistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias. DMF foi remo-vido sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com água para obter, apósfiltração, 140 mg de um produto bruto. Purificação por cromatografia instan-tânea em fase reversa ((LiChroprep RP-18, MERCK) usando como eluenteágua/metanol 1:1 e cristalização de éter dietílico deu 21 mg do composto dotítulo como um sólido branco. P.f. 172 - 175°C. Rf = 0,16 (RP18 MERCK,H2CVMeOH 1:1).

1H RMN (DMSO-de)ô: 6,48 (1H, d, -CH=, J = 15,63 Hz); 7,05(1H, d, 1 Ar, J = 8,93 Hz); 7,40 - 7,74 (7H, m, 7Ar); 9,03 (1H, brs, -CONHOH);10,50 (1H, brs, -CONHOH).

Exemplo 10

Preparação de ácido 6-[3-1-(adamantil)-4-metoxifenil1-naftaleno-2-carboxílicoN-hidroxiamida (ST3259)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 10 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 10

<formula>formula see original document page 17</formula>

6-(3-adamantil-4-hidroxifenil)naftoato de metila (506 mg, 1,23mmol) foi adicionado em uma suspensão resfriada com gelo de NaH (80 mg,60%) em DMF seco, a mistura agitada 1 h a 0°C, então adicionado com 245(sílica-gel, hexano/EtOAc 9/1) deu 300 mg de 6-(3-adamantil-4-metoxifenil)naftoato de metila. Este composto (235 mg) foi colocado em sus-pensão em uma solução NaOHa 1M em MeOH e a mistura foi refluxada 8 h.Evaporação, absorção com água, adição de HCI e filtração deram 227 mg deácido 6-(3-adamantil-4-metoxifenil) naftóico, p.f. >300°C.

Este composto (100 mg, 0,24 mmol) foi dissolvido sob nitrogênioem 2,4 ml de DMF, então 92 mg (0,24 mmol) de HATU e 0,2 ml (1,21 mmol)de DIPEA foram adicionados e a solução assim obtida foi mantida sob agita-ção em temperatura ambiente durante 2 min. Após adição de cloridrato dehidroxilamina (84 mg, 1,21 mmol), a mistura foi agitada 2 h em temperaturaambiente. DMF foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi lavadocom água para obter, após filtração, 111 mg de produto bruto, que foi purifi-cado por cromatografia instantânea (sílica-gel, Me0H/H20 85:15), p.f. 222°C, 1H RMN: (DMSO-d6) δ: 1,76 (s, 6H, adam.), 2,03 (s, 3H, Adam), 2,14 (s,6H, Adam), 3,86 (s, 3H, OCH3), 7,12 (d, 1H, 1Ar, J = 8,56), 7,57 (d, 1H, 1Ar,J = 1,86), 7,65 (dd, 1H, 1Ar, J = 1,86, 8,93), 7,83 (dd, 1H, 1Ar, J = 8,56,1,86), 7,88 (dd, 1H, 1Ar, J = 8,56, 1,86), 8,00-8,10 (m, 2H, 2Ar), 8,19 (s, 1H,1 Ar), 8,35 (s, 1H, 1 Ar), 9,40 (s, 1H), 11,35 (s, 1H).

Exemplo 11

Preparação de E-3-r4'-clorobifenil-4-ill-N-hidróxi-acrilamida (ST3483)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 11 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 11

A uma mistura de 61 mg (0,22 mmol) de ácido 3-(4-clorobifenilil)acrílico e 26 mg (0,22 mmol) de O-tetrahidropiranilhidroxilamina em 3 ml deTHF, foi adicionado 0,45 ml (0,46 mmol) de hexadimetilsilazano de lítio, amistura foi agitada 10 min sob nitrogênio, então a reação foi resfriada brus-camente com uma solução de NH4CI. Uma vez em temperatura ambiente, amistura foi extraída com EtOAc1 e o extrato evaporado para dar 79 mg de 2-tetrahidropiraniloxiamida de ácido 3-(4-clorobifenilil) acrílico. Este composto(79 mg, 0,22 mmol) foi dissolvido em 3 ml de MeOH1 adicionado com 12 mg(0,066 mmol) de monoidratado de ácido p-toluenossulfônico, e a mistura foiagitada 2 dias em temperatura ambiente. Filtração e lavagem com MeOHderam a hidroxiamida de ácido 3-(4-clorobifenilil) acrílico, p.f. 200-202°C, Rf= 0,6 (TLC sílica-gel Merck, CH2CI2/MeOH 95/5), 1H RMN (DMSO-d6) δ: 6,50(s, 1H, -CH=, J = 16,00 Hz), 7,49 (s, 1H, -CH=, J = 16,00 Hz), 7,50 - 7,75 (m,8H, 8Ar), 9,10 (s, 1H), 10,50 (s, 1H).

Exemplo 12

Preparação de E-3-r4'-metóxi-bifenil-4-ill-N-hidróxi-acrilamida (ST3595)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 12 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 12

<formula>formula see original document page 19</formula>

200 mg (0,83 mmol) de 4-bromocinamato de metila foram dis-solvidos em tolueno seco, adicionados com 29 mg (0,025 mmol) dePd(PPh3)4, uma solução de 152 mg (0,91 mmol) de ácido 4-metoxibenzenoborônico em 0,5 ml de EtOH, 1,66 ml de Na2CO3 em águaa2M, e refluxados 2 h. Adição de EtOAc, lavagem com água, então comsalmoura, filtração e cromatografia instantânea (sílica-gel Merck) com mistu-ras de hexano/EtOAc de 95/5 a 8/2 deram 112 mg de 3-(4-metoxibifenilil)

Uma solução do composto acima (110 mg, 0,41 mmol) e de 2-tetrahidropiranil-O-hidroxilamina (48 mg, 0,41 mmol) em 6 ml de THF foi res-friada a -78°C, adicionada com 0,81 ml de hexametildisilazano de sódio,agitada 2 horas, então aquecida a -20°C, resfriada novamente a -78°C, res-friada bruscamente com NH4CI, extraída com AcOEt, o extrato evaporadopara dar 145 mg de 2-tetrahidropiraniloxiamida de ácido 3-(4-metoxibifenilil)acrilato de metila, p.f. 175- 177 0C.acrílico, como um sólido amarelo.

Uma solução do composto acima (145 mg, 0,41 mmol) em 5 mlde MeOH foi tratada com 23 mg (0,12 mmol) de ácido p-toluenossulfônico,agitada 24 h em temperatura ambiente, filtrada e lavada com MeOH1 paradar 50 mg de hidroxiamida de ácido 3-(4-metoxibifenilil) acrílico, p.f. 199°C(dec), Rf 0,2 (CH2CI2/MeOH 95/5), 1H RMN: (DMSO-d6): 3,80 (s, 3H, OMe),6,47 (d, 1H, -CH=, J = 15,6 Hz), 7,03 (d, 2H, 2Ar, J = 8,9 Hz), 7,48 (d, 1H,CH=, J = 15,6 Hz), 7,56 - 7,73 (m, 6H, 6Ar), 9,05 (s, 1H), 10,76 (s,1H).

Exemplo 13

Preparação de E-3-í4'-ciano-bifenil-4-in-N-hidróxi-acrilamida (ST3604)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 13 descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 13

<formula>formula see original document page 20</formula>

820 mg (3,4 mmol) de 4-bromocinamato de metila foram dissol-vidos em 7 ml de tolueno seco, adicionados com 116 mg (0,1 mmol) dePd(PPh3)4, uma solução de 374 mg (1,1 mmol) de ácido 4-cianobenzenoborônico em 2 ml de MeOH, 6,8 ml de Na2CO3 em água a2M,e refluxado 9 h. Adição de EtOAc, lavagem com água, então com salmoura,filtração e cromatografia instantânea (sílica-gel Merck) com misturas de he-xano/EtOAc 9/1 deram 273 mg de 3-(4-cianobifenilil) acrilato de metila, p.f.150-152°C.

Uma solução do composto acima (270 mg, 1,02 mmol) e de 2-tetrahidropiranil-O-hidroxilamina (117 mg, 1,02 mmol) em 14 ml de THF foiresfriada a -78°C, adicionada com 1,07 ml de hexametildisilazano de sódio,agitada 2 horas, então aquecida a -20°C, resfriada novamente a -78°C, res-friada bruscamente com NH4CI, extraída com AcOEt, o extrato evaporado ecromatografado (sílica-gel Merck) com hexano/EtOAc 6/4 para dar 189 mgde 2-tetrahidropiraniloxiamida de ácido 3-(4-cianobifenilil) acrílico, como umsólido branco, p.f. 211 - 213°C.Uma solução do composto acima (187 mg, 0,54 mmol) em 5 mlde MeOH foi tratada com 30 mg (0,16 mmol) de ácido p-toluenossulfônico,agitada 24 h em temperatura ambiente, filtrada e lavada com MeOH, paradar 96 mg de hidroxiamida de ácido 3-(4-cianobifenilil) acrílico, p.f. 212-214°C, Rf 0,3 (CH2Ci2ZMeOH 95/5), 1H RMN: (DMSO-d6): 6,54 (d, 1H, -CH=,J = 15,3 Hz), 7,51 (d, 1H, CH=, J = 15,3 Hz), 7,69 (d, 2H, 2Ar, J = 8,2 Hz),7,82 (d, 2H, 2Ar, J = 8,2 Hz), 7,8 - 8,0 (m, 4H, 6Ar), 9,05 (s, 1H, NH), 10,80(S.1H.OH).

EXEMPLOS DE REFERÊNCIA

Nesta seção, descreve-se a síntese de alguns compostos queforam sintetizados e testados para fins comparativos, a fim de mostrar a su-perioridade e as vantagens dos compostos reivindicados com relação a seushomólogos mais próximos.

Exemplo de referência 1

Preparação de N-hidróxi-3-(4'-hidroxibifenil-4-il)-propionamida (ST 3208)

O composto do título foi preparado seguindo o diagrama de sín-tese 1R descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 1R

<formula>formula see original document page 21</formula>

368 mg (1,5 mmol) de ácido 3-(4'-hidroxibifenil-4-il)-propiônicoforam dissolvidos sob nitrogênio em 15 ml de DMF, então 568 mg (1,5 mmol)de HBTU e 1,23 ml (7,5 mmols) de DIPEA foram adicionados e a soluçãoassim obtida foi mantida sob agitação em temperatura ambiente durante 10min. Após adição de cloridrato de hidroxilamina (521 mg, 7,5 mmols), a mis-tura foi agitada em temperatura ambiente durante 3,5 h. DMF foi removidosob pressão reduzida, o resíduo adicionado com água e agitado a 0°C du-rante 15 min. para obter, após filtração, 354 mg de um sólido branco (92%).P.f. 180 - 182°C. R, = 0,1 (sílica-gel Merck 60F254, CH2CI2:/MeOH 95:5 )1H RMN (DMSO-de)ô: 2,27 (2H, d, -CH2-, J = 7,82 Hz); 2,81 (2H,d, -CH2-, J = 7,82 Hz); 6,82 (2H, d, 2Ar, J = 8,93 Hz); 7,22 (2H, d, 2Ar, J =8,19 Hz); 7,40 - 7,55 (4H, m, 4Ar); 8,75 (1H, brs, -CONHOH); 9,55 (1H, brs, -CONHOH); 10,45 (1H, brs, -OH).

Exemplo de referência 2

Preparação de £-3-(bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida (ST3256)

O composto do título foi preparado seguindo o diagrama de sín-tese 2R descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 2R

<formula>formula see original document page 22</formula>

200 mg (0,89 mmol) de ácido Ε-4-fenilcinâmico foram dissolvi-dos sob nitrogênio em 9 ml de DMF, então 338 mg (0,89 mmol) de HATU e308 μι (1,78 mmol) de DIPEA foram adicionados e a solução assim obtidafoi mantida sob agitação em temperatura ambiente durante 2 min. Após adi-ção de cloridrato de hidroxilamina (68 mg, 0,98 mmol), a mistura foi agitadaem temperatura ambiente durante 4h. DMF foi removido sob pressão reduzi-da e o resíduo foi lavado com água para obter, após filtração, 220 mg de umsólido branco.

P.f. > 168 - 170°C. Rf = 0,6 (sílica-gel Merck 60F254,CH2CI2VMeOH 90:10) 1H RMN (DMSO-d6) δ 6,48 (1H, d, -CH=, J = 16,00Hz); 6,30 - 7,75 (10H, m, 9Ar + -CH=); 9,05 (1H, brs, -CONHOH). 10,50 (1H,brs, -CONHOH).

Exemplo de referência 3

Preparação de E-3-f4'-hidroxibifenil-3-in-N-hidroxiacrilamida (ST3284)

O composto do título foi preparado seguindo o diagrama de sín-tese 3R descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 3R<formula>formula see original document page 23</formula>

70 mg (0,29 mmol) de ácido E-3-(4'-hidroxibifenil-3-il)-acrílicoforam dissolvidos sob nitrogênio em 3 ml de DMF1 então 109 mg (0,29 mmol)de HBTU e 100 μί (0,57 mmol) de DIPEA foram adicionados a 0°C. Após 5min, cloridrato de hidroxilamina (20 mg, 0,29 mmol) foi adicionado e a mistu-ra foi agitada a 0°C durante 10 min, então em temperatura ambiente durante4h. DMF foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com águapara obter, após filtração, 73 mg de um produto bruto. Purificação por cro-matografia instantânea em KH2PO4 tamponado com sílica-gel, usando comoeluente CH2CI2ZMeOH 95:5, deu 24 mg do composto do título como um sóli-do branco. P.f. 127-128°C. Rf = 0,26 (sílica-gel Merck 60F254, CH2CI2:/MeOH 90:10)

1H RMN (DMSO-de) δ: 6,51 (1H, d, -CH=, J = 16Hz); 6,85 (2H, d,2Ar, J = 8,93 Hz); 7,35 - 7,80 (7H, m, 6Ar + -CH=); 9,03 (1H, brs, -CONHOH); 9,60 (1H, brs, -OH); 10,50 (1H, brs, -CONHOH).

Exemplo de referência 4

Preparação de N-hidroxiamida de ácido Ε,Ε-5-bifenilil-pentadienóico(ST3400)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 4R descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 4R

168 mg (0,7 mmol) de ácido Ε,Ε-5-bifenilil-pentadienóico (prepa-rado de acordo com o L. M. Werbel et al. J. Med. Chem. 10, 366 (1967) fo-ram dissolvidos sob nitrogênio em 7 ml de DMF1 então 267 mg (0,7 mmol) deHBTU e 245 μΙ_ (0,56 mmol) de DIPEA foram adicionados e a solução assimobtida foi mantida sob agitação em temperatura ambiente durante 10 min.Após adição de cloridrato de hidroxilamina (54 mg, 0,77 mmol), a mistura foiagitada em temperatura ambiente durante a noite. DMF foi removido sobpressão reduzida e o resíduo foi lavado com água para obter, após filtração,53 mg de produto. 1H RMN: (DMSO-de) δ: 6,02 (s, 1H, -CH=, J = 14,89 Hz),6,90 - 7,40 (m, 3H), 7,40 (m, 1H, 1Ar), 7,45 - 7,50 (m, 2H, 2Ar), 7,60 - 7,75(m, 6H, 6Ar), 9,00 (s, 1H), 10,75 (s,1H).

Exemplo de referência 5

Preparação de E-3-f4'-dimetilaminobifenil-4-il1-N-hidróxi-acrilamida (ST3444)

O composto do título foi preparado de acordo com o diagramade síntese 5R descrito como a seguir.

Diagrama de síntese 5R

<formula>formula see original document page 24</formula>

35 mg (0,13 mmol) de ácido E-4-(4-dimetilaminofenil) cinâmico(preparado por reação de Suzuki de 4-dimetilamino-bromobenzeno com 4-bromocinamato de metila seguido por hidrólise do éster) foram dissolvidossob nitrogênio em 1,3 ml de DMF, então 55 mg (0,14 mmol) de HBTU e 43μl (0,26 mmol) de DIPEA foram adicionados e a solução assim obtida foimantida sob agitação em temperatura ambiente durante 10 min. Após adiçãode cloridrato de hidroxilamina (10 mg, 0,14 mmol), a mistura foi agitada emtemperatura ambiente durante a noite. DMF foi removido sob pressão redu-zida e o resíduo foi lavado com água para obter, após filtração, secagem eabsorção com éter, 25 mg de produto, p.f. 260 - 263°C (dec). 1H RMN: (DM-SO-d6) δ: 2,95 (s, 6H, N(CH3)2), 6,44 (s, 1H, -CH=, J = 16,38 Hz), 6,80 (d,2H, 2Ar, J = 8,93 Hz), 7,46 (d, 1H, CH=, J = 16 Hz), 7,52 - 7,70 (m, 6H, 6Ar),9,00 (s, 1H), 10,75 (s,1 H).ESTUDOS BIOLÓGICOS

Resultados de citotoxicidade

O efeito citotóxico de alguns compostos de bifenila e fenilnaftilacontendo um grupo de ácido hidroxâmico é descrito aqui. Estas moléculaspossuem aspectos farmacológicos distintivos a partir dos compostos corres-pondentes contendo um grupo de ácido carboxílico. As estruturas químicasdos compostos testados da invenção e dos compostos correspondentes con-tendo um grupo de ácido carboxílico são apresentadas na figura 1. Para tes-tar os efeitos dos compostos sobre o crescimento das células, leucemiapromielocítica humana NB4, células de carcinoma de célula não pequenaNCI-H460, H460/(R9A) (resistentes a compostos contendo ácido carboxílico:ST1898, ST1926, ST1964), células de carcinoma de cólon humano HCT-116, , IGROV-1 e IGROV-1/Pt (células de carcinoma ovariano sensível ecarcinoma ovariano resistente à platina, respectivamente) foram usados. Ascélulas de tumor NB4 e NCI-H460 foram cultivadas em meio RPMI 1640contendo de soro bovino fetal a 10% (GIBCO), HCT-116 células de tumorforam cultivadas em McCoy's 5A contendo soro bovino fetal a 10% (GIBCO),IGROV-1 e IGROV-1/Pt foram cultivados em DMEM (GIBCO), contendo sorobovino fetal a 10% (GIBCO).

As células de tumor foram semeadas em placas de cultura detecido de 96 cavidades em aproximadamente 10% de confluência e foramdeixadas fixar e recuperar durante pelo menos 24 h. As concentrações vari-adas dos fármacos foram então adicionadas a cada cavidade para calcularseu valor IC50 (a concentração que inibe 50% de sobrevivência celular). Asplacas foram incubadas durante 24 h a 37 0C. No final do tratamento, paracélulas de tumor NB4 em suspensão, o procedimento foi realizado como aseguir: cultura de meio foi removida por centrifugação das placas a 1600 χ gdurante 10 min e o sobrenadante foi removido. 250 μΙ PBS foram adiciona-dos, então as placas foram centrifugadas a 1600 χ g durante 10 min, o so-brenadante foi removido. 200 μΙ/cavidade de cultura de meio RPMI 1640contendo FCS a 10% foram adicionados e as placas foram incubadas a 370C por mais 48 h. As placas foram centrifugadas novamente a 1600 χ g du-rante 10 min, a cultura de meio foi removida e 200 μΙ PBS e 50 μΙ de 80%TCA frio foram adicionados. As placas foram incubadas em gelo durante pe-lo menos 1 h. TCA foi removido, as placas foram lavadas 3 vezes para imer-são em água destilada e secada em papel e a 40 0C durante 5 min. Então,200 μl de 0,4% sulforodamina B em 1% de ácido acético foram adicionados.As placas foram incubadas em temperatura ambiente durante mais 30 min.A sulforodamina B foi removida, as placas foram lavadas por imersão em 1%ácido acético por 3 vezes, então elas foram secadas em papel e a 40 0C du-rante 5 min. Então 200 μΙ Tris 10 mM foram adicionados, as placas forammantidas sob agitação durante 20 min. A célula sobrevivente foi determinadacomo densidade óptica por um espectrofluorímetro Multiskan a 540 nm. Paraas células de tumor em adesão (NCI-H460 e HCT-116), o procedimento foicomo acima mencionado, exceto que no final do tratamento, as placas foramlavadas por remoção do sobrenadante e adição de PBS 3 vezes sem centri-fugação. Também no último dia do teste, o sobrenadante foi removido semcentrifugação.

A quantidade de células mortas foi calculada como a diminuiçãopercentual em ligação de sulforodamina B comparado com as culturas decontrole. Os valores de IC50 (a concentração que inibe os 50% de sobrevi-vência de células) foram calculados com o programa "ALLFIT".

Aiinhagem de células de tumor resistentes NCI H460 R9A foium clone selecionado para a resistência a ST1926 (tabela 3). Para obter alinhagem de células de tumor resistentes, as células de tumor NCI-H460sensíveis foram tratadas com 2 μΜ ST1926 durante 24 h e mantidas emmeio isento de fármacos para um tempo de recuperação de 7 dias. Então, ascélulas sobreviventes foram cultivadas aplicando-se uma pressão seletivacontínua de 2 μΜ (10x IC50) ST1926. AS células NCI-H460 resistentes foramsubcultivadas durante 3-4 vezes antes de aumentar a concentração deST1926 a 4 μΜ (20x IC50). As células sobreviventes foram semeadas emplacas de 96 cavidades para isolar os clones de células resistentes e manti-das em meio completo com 4 μΜ de ST1926. A linhagem de células de tu-mor foi mantida pelo menos durante uma semana, antes de semear para oteste de cito toxicidade de SRB1 em meio isento de fármaco.

Surpreendentemente, os derivados hidroxâmicos ST27892 eST3054 mostraram, com relação aos compostos correspondentes contendoum grupo de ácido carboxílico (ST2188 e ST1989, respectivamente), umaatividade antiproiiferativa melhorada em diferentes linhagem de células detumor (tabela 1). A diferença na atividade se torna impressionante paraST2782 quando comparada com ST2188.

Tabela 1: Citotoxicidade de compostos diferentes em células de tumorNB4, IGROV-1 e IGROV-1/Pt

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Além disso, os derivados hidroxâmicos, ST2782, ST2992,ST3081, ST3088, ST3056, ST2142 revelaram uma atividade antiproiiferativasignificante em diferentes células de tumor. (Tabela 2).

Tabela 2: Citotoxicidade de compostos diferentes em células de tumorNCI-H460, HCT-116. IGROV-1 e IGROV-1/Pt

<formula>formula see original document page 27</formula><table>table see original document page 28</column></row><table>

Surpreendentemente, estes compostos também foram eficazescomo agentes citotóxicos em uma linhagem de células de carcinoma depulmão H460/(R9A) selecionada por sua resistência a compostos contendoum grupo de ácido carboxílico (ST1898, ST1926, ST1964).

Para avaliar o efeito do composto em células sobreviventes, oteste com sulforodamina B foi usado. A quantidade de células mortas foi cal-culada como a diminuição percentual em composto de ligação de sulforoda-mina B com culturas de controle. Os valores IC5o (a concentração que inibe50% de sobrevivência de células ) foram calculados com o programa "ALL-FITn.

Como mostrado na Tabela 3, apesar dos compostos correspon-dentes contendo grupos de ácido carboxílico, por exemplo ST1926, ST1964(CD437), ST1898 foram 34-78 vezes menos eficazes em H460/R9A, os deri-vados hidroxâmicos por exemplo ST2142, ST2992, ST3056, completamentesuperaram a resistência, assim confirmando que os compostos selecionadostinha diferenças farmacológicas específicas a partir dos compostos carboxíli-cos correspondentes. De modo interessante, as mesmas características fo-ram retidas por ST2782, ST3081 e ST3088.

Tabela 3: Citotoxicidade de compostos diferentes em células de tumorNCI-H460, NCI-H460 R9A

<table>table see original document page 28</column></row><table><formula>formula see original document page 29</formula>

R1LJRI= índice de resistência (IC50 em linhagem de células de tumor resis-tentes/IC50 em linhagem de células de tumor sensíveis)]

Atividade de citodiferenciacão

Resultados

A leucemia promielocítica aguda (APL) é uma forma de leuce-mia mielogenosa aguda com translocações cromossômicas típicas levando àexpressão de proteínas de fusão anormais envolvendo o receptor de ácidoretinóico nuclear (RAR) a. Estas proteínas de fusão atuam como oncogenese são responsáveis pelo bloco de diferenciação e expansão do clone leucê-mico. Na maior parte dos pacientes com APL, a translocação envolve cro-mossomos 15 e 17 e leva à síntese de leucemia promielocítica (PML)-RARk..APL é o objeto de estudo intenso, porque ele representa o único exemplo dedoença neoplásica que pode ser tratado com uma abordagem de citodife-renciação. Os pacientes com APL são induzidos em remissão clínica comácido todo-trans retinóico (ATRA), que forma o blasto leucêmico a adquirirmuitas das características dos neutrófilos terminalmente diferenciados. Estesincluem um ciclo de vida curto e a propensão a sofrer um processo naturalde morte de células programada ou apoptose.

Apesar do sucesso obtido com os pacientes com APL ter eleva-do o entusiasmo para o uso clínico de ATRA no tratamento de leucemia eoutras doenças neoplásicas, a eficácia terapêutica deste composto é aindasobrecarregada por problemas como resistência e toxicidade. Uma estraté-gia possível para aumentar o índice terapêutico de ATRA é o desenvolvi-mento de combinações farmacológicas com base em ATRA que são maispoderosas e facilmente toleradas do que os componentes individuais.

Os aspectos relevantes do programa de diferenciação dado emmovimento por ATRA em células APL podem ser reproduzidos em culturasprimarias de blastos leucêmicos e em linhagem de células NBD derivadas,que é um modelo singular para o estudo da atividade farmacológica de A-TRA e derivados. As concentrações farmacológicas de ATRA param o cres-cimento de Blastos NB4 e diferenciam os mesmos em células que se pare-cem com neutrófilos maduros. Isto é seguido por um lento processo de a-poptose. Como na tabela 3, as requerentes usaram células NB4 para de-monstrar que estes compostos diferentes potenciam a atividade farmacoló-gica de ATRA. Particularmente, a diferenciação de células de tumor NB4induzida pelos compostos foi determinada por redução de nitroazul tetrazólio(NBT). As células leucêmicas promielocíticas NB4 foram semeadas a umadensidade de 150.000 células /ml em meio RPMI 1640 contendo 10% FCS.Para medir o efeito de cito-diferenciação das moléculas, as células de tumorforam tratadas com os compostos em concentrações diferentes partindo depelo menos 0,4 μΜ a 0,01 μΜ, enquanto para medir a ação melhoradora dasmoléculas de atividade ATRA, as células NB4 foram tratadas com concen-trações crescentes de moléculas na presença ou ausência de ATRA a umaconcentração subótima (5 nM).

As células de tumor foram incubadas durante 3 dias a 37 0Csem substituição da cultura do meio. Para medir o efeito pro-diferenciativo,500.000 células foram coletadas, centrifugadas e recolocadas em suspensãoem 1 ml de meio RPMI 1640 contendo 10% FCS, 1 mg/ml de nitroazul tetra-zólio (NBT) e 100 ng de PMA (4-forbol-12-miristato-13-acetato). As célulasde tumor recolocadas em suspensão foram incubadas a 37 0C durante 60min. No final da incubação, as células de tumor foram centrifugadas e o pé-Iete foi recolocado em suspensão em 1 ml de PBS contendo Triton χ 100 a10%. As amostras foram sonicadas e a absorbância foi determinada a 540nm com um espectrofotômetro. A diferenciação de células de tumor comoAC50 (concentração ativante) foi avaliada como a concentração do compos-to dando 50% da indução máxima de atividade de redução de NBT com ousem ATRA. Como mostrado na tabela 4, os compostos sozinhos não foramcapazes de induzir a diferenciação de células de tumor NB4, enquantoquando eles foram combinados com uma concentração subótima de ATRA(5 nM), algumas moléculas aumentaram a diferenciação induzida por ATRA.Os compostos os mais potentes foram ST2992 com um valor AC50 de 0,19μΜ comparável a ST2142 (AC50 = 0,31 μΜ) seguido por ST2782 com valo-res AC50 na faixa de 2,47 μΜ.

De modo surpreendente, nenhum dos análogos mais próximos(ST1926, ST1964, ST3444, ST3256, ST3400 ) mostrou resultados similares.

Tabela 4: Efeito melhorador de derivados hidroxâmicos na atividade decitodiferenciacão de ATRA em células de tumor NB4

<table>table see original document page 31</column></row><table><table>table see original document page 32</column></row><table>

Claims

1. Composto de Fórmula (I),<formula>formula see original document page 33</formula>onde:Cl;R1 é selecionado dentre o grupo consistindo em H, adamantila,R2 é selecionado dentre o grupo consistindo em OMe, Cl, CN, e(CH2)nOH onde η é selecionado dentre O, 1 e 2; ouR2, tomado junto com o anel ao qual é ligado, forma um deriva-do de metileno- ou etileno-dióxi;R3 é selecionado entre H e Cl;A é um dos seguintes grupos divalentes: [CH=CH] (trans),[C^C], ou, tomado junto com o anel ao qual ele é ligado, forma um gruponaftila.

2. Composto de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1,que é selecionado dentre o grupo consistindo emE-3-(4'-hidróxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida ;E-3-[3'-(1-adamantil)-4'-hidróxi-bifenil-4-il]-N-hidróxi-acrilamida;N-hidroxiamida de ácido 6-[3-1-(adamantil)-4-hidroxifenil]-naftaleno-2-carboxílico;N-hidroxiamida de ácido 6-[3-1-(adamantil)-4-metoxifenil]-naftaleno-2-carboxílico ;- 3-[4-(8-adamantan-1 -il-2,3-dihidrobenzo[1,4]dioxin-6-il)-fenil]-N-hidróxi-acrilamida;E-3-(3'-adamantan-1-il-2-cloro-4'-hidróxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida;E-3-(3'-adamantan-1-il-4'-metóxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida;E-3-(4'-Hidróxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-propiolamida;E-3-(4'-hidroximetil-bifenil-4-il)-N- hidróxi-acrilamida;E- 3-(3'-cloro-4'-hidroxi-bifenil-4-il)-N-hidróxi-acrilamida;E-3-[4'-metóxi-bifenil-4-il]N-hidróxi-acrilamida;E-S-^-ciano-bifenil^-iO-N-hidróxi-acrilamida ;eE-3-[4'-clorobifenil-4-il]N-hidróxi-acrilamida.

3. Processo para a preparação de compostos como definidos nareivindicação 1 ou 2, compreendendo reagir os ácidos carboxílicos corres-pondentes com cloridrato de hidroxilamida.

4. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, como ummedicamento.

5. Composição farmacêutica contendo como ingrediente ativoum composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 2, epelo menos um excipiente e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.

6. Composição de acordo com a reivindicação 5, para o trata-mento de patologias de tumor.

7. Composição de acordo com a reivindicação 5, para o trata-mento de uma patologia de tumor, em que o tumor demonstrou resistênciado fármaco a outros fármacos antitumor usados para o mesmo tratamento.

8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações-5 a 7, em que a patologia do tumor é selecionada dentre o grupo consistindoem sarcoma, carcinoma, carcinóide, tumor do osso, tumor neuroendócrino,leucemia linfóide, leucemia promielocítica aguda, leucemia mielóide, Ieuce-mia monocítica, leucemia megacarioblástica e doença de Hodgkin.

9. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações-5 a 8, em que o ingrediente ativo é combinado com um ou mais agentes anti-tumor conhecidos.

10. Composição de acordo com a reivindicação 9, em que o a-gente antitumor conhecido é selecionado dentre o grupo consistindo em a-gentes alquilantes, inibidores de topoisomease, agentes antitubulina, com-postos intercalantes, antimetabólitos, produtos naturais como alcalóides devinca, epipodofilotoxinas, antibióticos, enzimas, taxanos, e compostos decitodiferenciação.

11. Composição de acordo com a reivindicação 10, em que ocomposto antitumor de citodiferenciação é ácido todo-trans retinóico.

12. Processo para preparar a composição como definida emqualquer uma das reivindicações 5 a 11, compreendendo misturar o ingredi-ente ativo com pelo menos um excipiente e/ou diluente farmaceuticamenteaceitável.

13. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 2, para a preparação de um remédio com atividade anti-tumor.

14. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 2, para a preparação de um remédio para o tratamento deuma patologia de tumor, em que o tumor mostrou resistência do fármaco aoutros fármacos antitumor usados para o mesmo tratamento.

15. Uso de acordo com a reivindicação 13 ou 14, em que o tu-mor é selecionado dentre o grupo consistindo em sarcoma, carcinoma, car-cinóide, tumor ósseo, tumor neuroendócrino, leucemia linfóide, leucemiapromielócitica aguda, leucemia mielóide, leucemia monocítica, Ieuceminamegacarioblástica e doença de Hodgkin.

16. Uso de acordo com a reivindicação 15, em que o tumor éleucemia promielocítica aguda.

17. Uso de acordo com a reivindicação 13 ou 14, em que ocomposto é combinado com um ou mais agentes antitumor conhecidos.

18. Uso de acordo com a reivindicação 17, em que o agenteantitumor conhecido é ácido todo-trans retinóico.

19. Método de tratamento de um mamífero sofrendo de umadoença como definido em qualquer uma das reivindicações 13 a 16, com-preendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz docomposto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2.