BRPI0613746A2 - polipeptìdeo extraìdo de plantas do gênero lupinus ou produzido de forma recombinante, seqüência de nucleotìdeos que o codifica e sua utilização em nutrição animal, como promotor do crescimento de plantas e na luta contra fungos patogênicos - Google Patents
polipeptìdeo extraìdo de plantas do gênero lupinus ou produzido de forma recombinante, seqüência de nucleotìdeos que o codifica e sua utilização em nutrição animal, como promotor do crescimento de plantas e na luta contra fungos patogênicos Download PDFInfo
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Abstract
POLIPEPTIDEO EXTRAIDO DE PLANTAS DO GENERO LUPINUS OU PRODUZIDO DE FORMA RECOMBINANTE, SEQUENCIA DE NUCLEOTIDEOS QUE O CODIFICA E SUA UTILIZAçAO EM NUTRIçAO ANIMAL, COMO PROMOTOR DO CRESCIMENTO DE PLANTAS E NA LUTA CONTRA FUNGOS PATOGENI COS Esta invenção está relacionada com a extração de uma proteína das sementes, cotilédones ou plântulas do gênero Lupinus, bem como com o modo de produzi-la de forma recombinante e de expressá-la em plantas geneticamente modificadas. Devido as características excepcionais exibidas por esta proteína no que se refere: a sua potente atividade antifúngica e anti-Oomicetes, que confere a proteína grande potencialidade como fungicida, (2) a sua forte atividade promotora do crescimento de plantas, particularmente notória em plantas doentes ou naturalmente enfraquecidas, (3) a sua resistência extrema à desnaturação, que permite a utilização da proteína em condições de campo, (4) a sua grande susceptibilidade aoataque proteolítico, que a torna inócua para o ambiente e não tóxica para o homem e (5) a sua composição de aminoácidos bem equilibrada. E reivindicada a sua utilização, ou de qualquer modificação da proteína que mantenha as suas propriedades biológicas, como suplemento em nutrição humana ou animal e como fungicida, insecticida, promotor do crescimento, fertilizante ou na preparação de organismos geneticamente modificados.
Description
POLIPEPTÍDEO EXTRAÍDO DE PLANTAS DO GÊNERO LUPINÜS OUPRODUZIDO DE FORMA RECOMBINANTE, SEQÜÊNCIA DE NUCLEOTÍDEOSQUE O CODIFICA E SUA UTILIZAÇÃO EM NUTRIÇÃO ANIMAL, COMOPROMOTOR DO CRESCIMENTO DE PLANTAS E NA LUTA CONTRA FUNGOSPATOGÊNICOS
ÁREA DA INVENÇÃO
Esta invenção está incluída na área da Biologia, comsua aplicabilidade prática como fungicida, inseticida,promotor do crescimento ou fertilizante pertence aos camposdas Ciências Agrônomas e Agricultura, e em que a suaaplicabilidade como suplemento na dieta de animais pertenceao campo da Nutrição Humana e Animal.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
Esta invenção refere-se a um polipeptídeo compropriedades antifúngicas, anti-Oomicetes e propriedadespromotoras do crescimento de plantas, extraído de sementes,cotilédones ou plântulas do gênero Lupinus e sua aplicaçãono controle de agentes patogênicos que atacam plantas ecomo bioestimulante de plantas. Este polipeptídeo pode seraplicado diretamente em plantas, ou as plantas podem sergeneticámente modificadas para expressarem o polipeptídeonos seus tecidos. Adicionalmente, devido às suascaracterísticas inerentes incomuns, o polipeptídeo pode serutilizado na preparação de concentrados protéicos úteiscomo suplementos na dieta do homem e outros animais.
A presente invenção também descreve a seqüência denucleotídeos do DNA correspondente ao fragmento genéticoque codifica o polipeptídeo de Lupinus, bem como a suaseqüência de resíduos de aminoácidos, microorganismostransformados com o fragmento genético que codifica opolipeptídeo de Lupinus e métodos para a sua aplicação comofungicida, inseticida, promotor do crescimento de plantasou fertilizante ou como suplemento em nutrição humana ouanimal.
Também é um objetivo desta invenção o polipeptídeocaracterizado pela seqüência de resíduos de aminoácidosreferida acima na qual um ou mais resíduos de aminoácidosestão ausentes, foram substituídos ou adicionados, ou quemantém as suas atividades biológicas depois de sofrermodificação química, tal como, por exemplo, glicosilação.
0 controle de agentes patogênicos constitui umproblema grave em todo o mundo no que se refere àscolheitas mais importantes. Os fungos patogênicos sãoparticularmente importantes no que diz respeito aoarmazenamento de produtos agrícolas. Atualmente, o controledo crescimento de fungos é geralmente feito por aplicaçõesmaciças de fungicidas químicos. No entanto, os produtosfitofarmacêuticos atualmente disponíveis no mercado têmvárias desvantagens graves. Por um lado, têm custoseconômicos e ambientais elevados; por outro lado, muitasespécies de fungos têm desenvolvido mecanismos deresistência a alguns dos melhores fungicidas, muitas vezestornando-os obsoletos em alguns anos após a sua introduçãono mercado.
Apesar das plantas não possuírem um sistemaimunológico semelhante ao dos animais, desenvolveram umaresistência inerente ao ataque de fungos patogênicos.
Contudo, as técnicas empregadas para o crescimento,colheita e armazenamento de plantas na agricultura modernafreqüentemente promovem condições boas ou ótimas para odesenvolvimento de patógenos.
Adicionalmente, o número de patógenos microbianos quepodem afetar e danificar colheitas é bastante elevado. Comoexemplo podem referir-se os seguintes gêneros: Alternaria,Ascochyta, Botrytis, Cercospora, Colletotrichum, Diplodia,Erysiphe, Fusarium, Gaeumanomyces, Macrophomina, Nectria,Phoma, Phomopsis, Phymatotrichum, Phytophthora, Plasmopara,Puccinia, Pythium, Rhizoctoniaf Uncinula e Verticillium. Aaplicação dos fungicidas atualmente disponíveis no mercadoestá limitada a alguns destes gêneros e não é uma soluçãoeficaz no controle de infecções de plantas.
Uma estratégia alternativa na luta contra patógenosmicrobianos é a identificação e purificação de substânciasde origem biológica com atividade antifúngica potente. Aidentificação desses compostos envolve pesquisar umavariedade de organismos, como plantas e microorganismos,quanto a substâncias que são subseqüentemente testadas emensaios antifúngicos e, por fim, são isoladas ecaracterizadas.
Deste modo já foram isoladas muitas classes deproteínas antifúngicas, incluindo quitinases, proteínasricas em cisteína que se ligam fortemente à quitina, β-1,3-glucanases, permeatinas, tioninas e proteínas detransferência de lípidos. Pensa-se que estas proteínasdesempenham um papel fundamental nas defesas naturais deplantas contra o ataque de patógenos.
Na literatura disponível são descritas váriasmetodologias relativas à utilização de proteínasantifúngicas, extraídas de plantas ou microorganismos, querpara aplicação direta nos agentes patogênicos quer emplantas transgênicas que expressam essas proteínas. Asproteínas antifúngicas mais freqüentemente utilizadasnestas metodologias incluem quitinases, glucanases,proteínas do tipo osmotina e lisozimas. Vários estudosdemonstraram que plantas geneticamente modificadas quesuper-expressam estas proteínas exibem resistênciaacrescida a muitos patógenos (EP 0392 225).
Técnicas modernas da Biologia Molecular permitiram odesenvolvimento de tecnologia de DNA recombinante e,conseqüentemente, transformação de plantas com genes quecodificam proteínas antifúngicas. Este procedimentoenvolve, habitualmente, a inserção do gene que codifica aproteína de interesse num tecido de uma planta, seguida deregeneração de uma planta completa a partir do tecido deplanta geneticamente modificado.
Todavia, a atividade de algumas destas proteínas éreduzida pela presença de íons, em particular potássio,sódio ou cálcio. Por este motivo, apesar das proteínaspoderem exibir uma atividade antifúngica potente em ensaiosin vitro, podem ser ineficazes in vivo devido às elevadasconcentrações fisiológicas dos íons que podem ocorrernaturalmente nos tecidos das plantas transformadas.
O documento "Ramos, Paula Cristina Rodrigues, et al. -"Accumulation of a lectin-like breakdown product of beta-conglutin catabolism in cotyledons of germinating Lupinusalbus L. seeds" Planta (Heidelberga) , volume 203, n° 1,1997, páginas 26-34" descreve o isolamento e purificação deum polipeptídeo de 20 kDa que é um produto de degradaçãointermediário do catabolismo da beta-conglutina, a proteínade reserva semelhante à vicilina, que interage com umavariedade de glicoproteínas e possui atividade do tipolectina. Na Tabela 1 deste documento são descritas váriasseqüências de aminoácidos N-terminais, incluindo a dopolipeptídeo de 2 0 kDa isolado de sementes de L. albus. Noentanto, a seqüência N-terminal apresentada na Tabela 1deste documento inclui exclusivamente a identidade dosresíduos n° 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18,20 e 23. Isto corresponde a um total de 15 resíduos dos 173resíduos de aminoácidos que compõem a seqüência (B) dapresente invenção. De fato, a seqüência N-terminal destedocumento não é a responsável pelas propriedades biológicasrelacionadas com o polipeptídeo da presente invenção. Alémdisso, a seqüência N-terminal descrita no documentoreferido é destinada a ser utilizada para construir"primers" adequados, que então podem ser utilizados embiologia molecular como primeiro passo do processo longo eincerto de sequenciação de genes e proteínas, ao passo queo objetivo principal da presente invenção é revelar umpolipeptídeo que exibe várias atividades biológicas.
O documento "Database UniProt [Online] 16 de Agosto de2004 (2004-08-16) - "Beta-conglutin"" revela uma proteínaobtida de Lupinus albus, especialmente beta-conglutina.Esta proteína é a principal proteína de reserva de sementespresente em sementes de Lupinus. Apesar de ser a precursorado polipeptídeo com a seqüência (B) , de acordo com apresente invenção, estes dois polímeros correspondem amoléculas distintas por alguns motivos, especialmente a) abeta-conglutina é considerada uma proteína, com umaestrutura quaternária típica, ao passo que a molécula com aseqüência B não deve ser considerada uma proteína mas simum polipeptídeo; b) a beta-conglutina, tal como a grandemaioria das proteínas, é facilmente destruída por condiçõesseveras. Em oposição, o polipeptídeo da presente invenção éextremamente resistente à desnaturação, suportando ebuliçãoprolongada, tratamento com ácidos ou bases fortes,detergentes e solventes orgânicos. Adicionalmente, éresistente à radiação ultravioleta solar; c) estas duasmoléculas desempenham papéis completamente diferentes nanatureza - enquanto a beta-conglutina é uma proteína dereserva de sementes, o polipeptídeo da presente invençãotem um papel protector na planta, exibindo uma potenteatividade antifúngica e uma atividade promotora docrescimento. Por outro lado, enquanto a beta-conglutinapossui atividades catalíticas fortes de quitosanase equitinase, o polipeptídeo da presente invenção exibeatividade catalítica de beta-W-acetil-D-glucosaminidase eum nível baixo de atividade de quitosanase.
O documento "Database UniProt [Online] 24 de Maio de2005 (2005-05-24) - wVicilin-Iike protein (fragment)""revela um fragmento (comprimento: 531 resíduos deaminoácidos; massa molecular: 62 032 Da) da mesma proteína(isto é, beta-conglutina) descrita no documento anterior(comprimento: 533 resíduos de aminoácidos; massa molecular:62 13 0 Da). Em conseqüência, todos os comentários feitosacima relativamente a este documento aplicam-se igualmenteao documento em análise.
Em conclusão, torna-se imperativo a identificação epurificação de novos compostos de origem biológica queexibem propriedades antipatogênicas na luta contra ospatógenos que afetam plantas. Deve ser dada importânciaparticular aos compostos que são eficazes numa gama largade patógenos e que mantêm a atividade biológica emcondições in vivo.
As práticas agrícolas têm sido otimizadas, durante umlongo período de tempo, para promover o crescimento edesenvolvimento de plantas e para aumentar a produção dascolheitas. Por outro lado, é previsível que, a médio atélongo prazo, possa haver escassez de alimentos em muitasáreas do globo. As técnicas correntes para controlar ocrescimento de plantas em condições ambientalmentecontroladas são dispendiosas e requerem equipamentoscomplexos. Por estes motivos, muitos investigadores têmpesquisado e relatado substâncias fisiologicamente ativas,naturais ou sintéticas, que exibem um efeito de reforço nocrescimento e desenvolvimento de colheitas. No entanto,apenas algumas destas substâncias tiveram aplicação práticaem condições agrícolas reais. Em conseqüência, também écada vez mais importante descobrir ou desenvolverpromotores do crescimento de plantas ecologicamentecorretas e sem toxicidade para o homem, animais e meioambiente.
As vagens de leguminosas ou, mais especificamente, assuas sementes são consideradas em todo o mundo a principalfonte de proteínas para nutrição animal e humana. A esterespeito, a soja tem um papel predominante, não só peloelevado teor protéico e qualidade das suas sementes mastambém pela sua riqueza em óleo. Todavia, do ponto de vistaagrícola, a soja requer solos férteis e um fornecimento deágua abundante. As plantas pertencentes ao gênero Lupinusconquistaram, ao longo das últimas décadas, uma posiçãorelevante, forte e de grandes potencialidades em comparaçãocom a soja. Se, por um lado, as suas sementes possuemníveis de proteínas e óleo comparáveis aos da soja, poroutro lado, as suas espécies estão bem adaptadas a solospobres e a condições de baixa disponibilidade de água. Porestes motivos, os tremoceiros têm sido considerados, porvezes, os "parentes pobres" da soja.
O nível elevado de alcalóides que são tóxicos paraanimais e que estão naturalmente presentes em tremoçostradicionais do tipo selvagem tem atrasado, desde há muito,a cultura generalizada de espécies de Lupinus e autilização das suas sementes para consumo animal e humano.Este é o principal motivo por que a cultura do tremoço temficado muito aquém da cultura da soja. Em Portugal, porexemplo, o consumo tradicional de tremoços tem estadoassociado, desde há muito tempo, à ingestão de cerveja.Estas sementes são primeiramente fervidas em água (oaquecimento a 100°C destrói a capacidade de germinação dassementes mas não bloqueia o processo de imbibição) e depoissão imersas em água corrente durante alguns dias, pararemover os alcalóides tóxicos. No entanto, a aplicaçãorecente de técnicas de cultura permitiu o desenvolvimentodas denominadas variedades de tremoceiros doces,caracterizadas por conterem um baixo teor de alcalóides nassementes (< 0,004% p/p), em oposição às culturas amargastradicionais (teor de alcalóides > 0,004% p/p). Por estemotivo, os tremoços de variedades de tremoceiros docespodem ser utilizados com segurança na alimentação humana eanimal.
Em conseqüência, é previsível um desenvolvimentocrescente de produtos alimentícios derivados de tremoceirospara nutrição humana e animal, como aconteceu algumasdécadas atrás com a soja. Isto é particularmente importanteno caso de proteínas dos tremoços, albuminas ou globulinas.
RESUMO DA INVENÇÃO
Espera-se que a presente invenção resolva o problematécnico associado ã identificação e purificação decompostos de origem biológica que sejam capazes decontrolar uma larga gama de agentes patogênicos que afetamcolheitas e que atuem como promotores do crescimento deplantas mantendo as suas atividades biológicas em condiçõesin vivo.
A solução baseia-se na caracterização e identificaçãode um polipeptídeo presente em plantas pertencentes aogênero Lupinus que exibe as seguintes característicasincomuns: (i) uma atividade antifúngica e anti-Oomicetespotente, que confere grande potencialidade como fungicida;(ii) uma forte atividade promotora do crescimento deplantas, particularmente notória em plantas doentes ounaturalmente enfraquecidas; (iii) uma resistência extrema àdesnaturação, que permite a sua utilização em condições decampo; (iv) uma susceptibilidade muito elevada àproteólise, que o torna inócuo para o ambiente e não tóxicopara o homem e animais, e (v) uma composição de aminoácidos
bem equilibrada.
Em conseqüência, o primeiro aspecto da presenteinvenção refere-se ao polipeptídeo com a seqüência B(5'kirvler fdqrtnrlen lqnyrivefq skpntlilpk hsdadyvlwlngratitiv npdrrqaynl eygdalripa gstsyilnpd dnqklrwklaipinnpgyf ydfypsstkd qqsyfsgfsr ntleatfntr yeeiqriilg ned3' ).
Um segundo aspecto da presente invenção diz respeito aum fragmento de DNA que codifica esse polipeptídeo. Ainvenção também se refere à utilização do polipeptídeo, oude qualquer preparação que o contenha, como fungicida,inseticida, promotor do crescimento ou fertilizante, querpor aplicação direta em forma recombinante quer porexpressão em organismos geneticamente modificados. Por fim,a invenção considera a utilização do polipeptídeo, ou dequalquer preparação que o contenha, como um suplemento emnutrição humana ou animal.
DESCRIÇÃO BREVE DAS FIGURAS
Figura 1 - Folhas de videira altamente infectadas comoídio foram pulverizadas com água (folha da direita) ou coma proteína nativa que contém o polipeptídeo extraído deLupinus (folha da esquerda) . (A) 24 horas após apulverização; (B) 2 meses após a pulverização.
Figura 2 - Observações por microscopia óptica dagerminação de esporos do fungo responsável pelo oídio emvideiras. Os esporos fúngicos foram cuidadosamenteremovidos da superfície de folhas jovens de videirainfectadas e foram inoculados em agar água 0,6% (p/v). (A),(B) e (C) - Controles; (D) e (E) - adição de 200 μg dafração protéica total de uvas maduras que contém proteínasrelacionadas com a patogênese (PR) ; (F) e (G) - adição de200 μg da proteína nativa que contém o polipeptídeoextraído de Lupinus. Cada ensaio foi observado após 24 e 48horas. Empregou-se microscopia por contraste de fase e aampliação utilizada foi 125X.
Figura 3 - Observações em microscópio metalúrgico defolhas de videira. (A) Folhas saudáveis; (B) folhasinfectadas com oídio; (C) folhas infectadas com oídio 12horas após pulverização com a proteína nativa que contém opolipeptídeo extraído de Lupinus. A ampliação utilizadaestá especificada em cada fotografia.
Figura 4 - Efeito do polipeptídeo de Lupinus,produzido de forma recombinante em Escherichia coli, nagerminação e desenvolvimento de esporos de Uncinulanecator, o agente causador do oídio.
Figura 5 - Roseiras na mesma fase de desenvolvimentoforam pulverizadas com água (roseira da direita) ou com umasolução que continha o polipeptídeo extraído de Lupinus(200 μg de proteína nativa que contém o polipeptídeo/mL;roseira da esquerda). A fotografia mostra a fase dedesenvolvimento de ambas as plantas três semanas após apulverização.
Figura 6 - Plantas de melancia criadas num viveiro.Seis semanas após o início da germinação, as plantas forampulverizadas com água (controle; A) , um extrato bruto deLupinus que continha 100 μg de proteína nativa que contém opolipeptídeo/mL (B), um promotor do crescimento de plantascomercialmente disponível no mercado (concentraçãorecomendada pelo fabricante) (C) , e um extrato em bruto deLupinus que continha 200 μg de proteína nativa que contém opolipeptídeo/mL (D) . Monitorizou-se a experiência duranteduas semanas e fotografou-se as plantas.
Figura 7 - Perfil típico da insolubilidade dasglobulinas de plantas do gênero Lupinus em função dasconcentrações de cálcio e magnésio. Este perfil éexemplificado para o efeito destes cátions na auto-agregação da proteína nativa que contém o polipeptídeoextraído de Lupinus (■) e de β-conglutina de Lupinus (o).β-Conglutina (0,5 mg.mL"1; o) e a proteína nativa quecontém o polipeptídeo extraído de Lupinus (0,5 mg.mL"1; ■)foram purificadas de sementes secas ou de cotilédonesseparados de plântulas que germinaram e cresceram duranteoito dias, respectivamente.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se a um novo polipeptídeocom propriedades antifúngicas potentes, que exibe umaatividade poderosa na germinação e desenvolvimento deesporos de patógenos fúngicos e de Oomicetes em plantas, ecom atividade promotora do crescimento de plantas,particularmente notória em plantas doentes ou naturalmenteenfraquecidas. A invenção também considera a utilização dopolipeptídeo, ou de qualquer preparação que o contenha,como suplemento em nutrição humana ou animal. A seqüênciade nucleotídeos do DNA do fragmento genético que codifica opolipeptídeo de Lupinus não partilha nenhuma homologiasignificativa com nenhuma outra proteína/polipeptídeoantifúngico que tenha sido isolado de plantas. 0polipeptídeo de Lupinus constitui um novo tipo depolipeptídeo entre as proteínas antifúngicas descritas emplantas.
0 polipeptídeo referido na presente invenção épurificado de cotilédones extraídos de plântulas germinadasdo gênero Lupinus. A presente invenção inclui a descriçãoda metodologia empregada para isolar o polipeptídeo detecidos da planta, a seqüência de nucleotídeos do DNA dofragmento genético (A) que o codifica e a seqüênciacorrespondente de resíduos de aminoácidos (B).
(A)
5' CGTAGACAAAGGAACCCTTATCACTTCAGCTCTCAAAGATTCCAAACTCTTTACAAAAATAGGAATGGCAAAATCCGTGTGCTCGAGAGGTTTGACCAAAGAACCAATAGACTTGAGAATCTCCAAAACTACCGCATTGTTGAGTTCCAATCAAAACCTAACACTCTCATTCTCCCTAAACACTCTGATGCTGACTACGTCCTCGTTGTACTCAATGGTAGAGCCACAATCACGATAGTAAACCCTGATAGAAGACAAGCATATAACCTTGAGTATGGCGATGCTCTCAGAATCCCAGCTGGCTCAACTTCATATATCCTTAACCCGGATGACAACCAGAAGCTTAGAGTAGTCAAGCTCGCAATACCCATCAACAATCCTGGCTACTTTTATGATTTCTATCCATCGAGTACTAAAGACCAACAATCCTACTTCAGTGGCTTCAGCAGGAACACTTTAGAGGCCACCTTCAATACTCGTTATGAAGAGATACAAAGGATTATTTTAGGGAATGAGGAT3'
(B)
5'kirvler fdqrtnrlen lqnyrivefq skpntlilpk hsdadyvlw
LNGRATITIV NPDRRQAYNL EYGDALRIPA GSTSYILNPD DNQKLRWKLAIPINNPGYF YDFYPSSTKD QQSYFSGFSR NTLEATFNTR YEEIQRIILG NED
3'
Este polipeptídeo parece ocorrer naturalmente apenasdurante um período de tempo muito curto do tempo de vida deplântulas do gênero Lupinus. Os presentes inventoresdemonstraram que a β conglutina, a principal proteína dereserva das sementes do gênero Lupinus, é o precursorbiossintético do polipeptídeo de Lupinus. De fato, opolipeptídeo de Lupinus é um polímero altamente processadoque sofreu vários níveis de modificação química. Este fatoaumentou tremendamente a dificuldade do seu estudo,incluindo a sequenciação de resíduos de aminoácidos e dosnucleotídeos correspondentes. Durante a formação dassementes, o gene que codifica a β conglutina é transcritono mRNA correspondente, cuja tradução resulta na síntese doprecursor biossintético da β conglutina. Em seguida, esteprecursor é extensamente processado, incluindo
glicosilação, de onde são produzidas as várias dezenas dediferentes tipos de subunidades que compõem a β conglutina.No ciclo seguinte de crescimento vegetativo, vários diasapós o início da germinação, os etapas iniciais docatabolismo da β conglutina envolvem clivagem proteolíticade todas ou da maior parte das suas subunidadesconstituintes, resultando na acumulação de uma proteínanativa, como subunidade principal, correspondente aopolipeptídeo descrito nesta invenção. Devido às suaspropriedades antifúngicas intrínsecas, que são naturalmenteexploradas pela planta-hospedeiro, este polipeptídeo émantido em concentrações muito elevadas nos cotilédones dasplantas em desenvolvimento, durante uma fase da vida em quea planta é mais sensível a ataques de fungos e insetos.Passados alguns dias, o polipeptídeo é degradado e os seusaminoácidos são utilizados no crescimento da planta jovem.
O polipeptídeo de Lupinus descrito na presenteinvenção exibe algumas propriedades que o distinguem dasoutras proteínas antifúngicas descritas na literatura. Istotorna-o num alvo promissor, com grandes potencialidadespara o desenvolvimento de um método eficiente paracontrolar os fungos que afetam plantas e/ou animais:
(1) Atividade antifúngica e anti-Oomicetes potente,que confere ao polipeptídeo grande potencialidade comofungicida,
(2) Forte atividade promotora do crescimento deplantas, particularmente notória em plantas doentes ounaturalmente enfraquecidas,
(3) Resistência extrema à desnaturação, que permite autilização do polipeptídeo em condições de campo,
(4) Grande susceptibilidade ao ataque proteolítico,que o torna inócuo para o ambiente e não tóxico para ohomem, e
(5) Composição de aminoácidos bem equilibrada.
0 polipeptídeo também pode ser utilizado comoinseticida, promotor do crescimento ou fertilizante, e comosuplemento alimentício em nutrição humana ou animal.
Dois problemas práticos da agricultura contemporâneasão a redução ou inibição do crescimento observada emplantas doentes ou naturalmente enfraquecidas e atoxicidade normalmente associada aos bioestimulanteesdisponíveis. O polipeptídeo extraído de tecidos de plantasLupinus exibe uma forte atividade promotora do crescimentono crescimento e desenvolvimento de plantas. De fato,preparações ou extratos de Lupinus que contêm opolipeptídeo possuem uma forte atividade bioestimulante emtodas as plantas testadas, incluindo, por exemplo, videira,roseira, planta da melancia e tomateiro. Este efeito énotório para concentrações da proteína nativa que contém opolipeptídeo iguais ou superiores a 200 μg/mL. Os outroscomponentes presentes em extratos não puros do polipeptídeode Lupinus valorizam as preparações, pois atuam comofertilizante foliar. A ausência de toxicidade dopolipeptídeo de Lupinus para o homem, animais e meioambiente indica que as suas aplicações em agricultura nãoexercem nenhum efeito prejudicial no meio ambiente.
Outro aspecto da presente invenção diz respeito àmetodologia utilizada para a produção recombinante dopolipeptídeo de Lupinus em bactérias, com a finalidade deexpressá-lo de forma constitutiva em plantas geneticamentemodificadas. Estas plantas acabarão por exibir um nívelelevado de resistência a fungos patogênicos, especialmenteno que se refere aos fungos difíceis de controlar (como é ocaso dos fungos responsáveis pelas denominadas doenças dolenho), contra os quais os fungicidas tradicionais deaplicação exógena são completamente ineficazes.
O polipeptídeo foi extraído de plântulas de Lupinusalbus cv. LeBlanc com oito dias de idade. As sementes foramcolocadas numa sala com temperatura constante (250C de dia,20 °C de noite) com um fotoperíodo de 16 horas de luz/8horas de escuridão.
Após a colheita, os cotilédones foram congelados emnitrogênio líquido. Extraiu-se o polipeptídeo em tampãoTris-HCl 100 mM, pH 7,5, que continha NaCl 10% (p/v), EDTA(ácido etilenodiaminotetracético) 10 mM e EGTA (ácidoetileno-glicol-bis(β-aminoetiléter)-Ν,Ν,Ν',N'-tetracético)10 mM. Após um período de incubação de 3 0 minutos a 4°C, oextrato foi centrifugado a 30.000 g, durante 1 hora a 4°C.
O sobrenadante foi dessalinizado e a proteína nativa quecontém o polipeptídeo extraído de Lupinus foisubseqüentemente purificada por FPLC (Cromatografia LíquidaRápida de Proteínas e Péptidos) - cromatografia de trocaaniônica.
A sequenciação N-terminal do polipeptídeo extraído deLupinus foi feita por degradação de Edman. A seqüênciaobtida de resíduos de aminoácidos foi utilizada paraconceber "primers" degenerados. Extraiu-se mRNA total desementes de Lupinus albus em desenvolvimento numa fase emque ocorre a síntese máxima do precursor β conglutina.Extraiu-se o mRNA utilizando protocolos/kits para apurificação de mRNA de material de plantas. 0 cDNAcorrespondente ao fragmento genético que codifica opolipeptídeo extraído de Lupinus foi amplificado por PCR(reação em cadeia de polimerase) utilizando os "primers"degenerados previamente concebidos. Utilizando como modeloa seqüência de nucleotídeos obtida conceberam-se novos"primers", e obteve-se a seqüência de nucleotídeos completado fragmento genético que codifica o polipeptídeo extraídode Lupinus pela técnica de 3' e 5' RACE (amplif icaçãorápida das extremidades do cDNA).
O polipeptídeo de Lupinus foi produzido de formarecombinante na bactéria Escherichia coli. 0 fragmentogenético que codifica o polipeptídeo de Lupinus foi clonadonum vetor adequado, permitindo a associação do gene deinteresse ao promotor T71ac. Este promotor é indutivo; emconseqüência, a expressão dos genes a ele associados ocorreexclusivamente na presença do açúcar isopropiltio-β-galactósido. Por fim, as células competentes de Escherichiacoli foram transformadas.
Como descrito acima, o polipeptídeo de Lupinus foiobtido de bactérias numa forma recombinante. No entanto,para ser testado quanto à sua atividade antifúngica, opolipeptídeo recombinante de Lupinus teve de ser isolado detodas as outras proteínas/polipeptídeos bacterianos. Paraesta finalidade, o polipeptídeo de Lupinus foi previamenteproduzido numa forma recombinante com um cauda de resíduoshistidina (Cauda de His) . A metodologia empregada para asua purificação baseou-se na afinidade elevada dos íonsníquel para a Cauda de His. Deste modo, com íons de níquelligados a uma matriz de agarose, purificou-se opolipeptídeo recombinante sabendo que, de entre todas asproteínas/polipeptídeos presentes no extrato bacterianototal, apenas o polipeptídeo de Lupinus se liga à matriz deagarose. Subseqüentemente recuperou-se o polipeptídeo deLupinus, após um conjunto adequado de lavagens e eluições,e removeu-se a Cauda de His após tratamento com uma enzimaproteolítica apropriada.
A escolha cuidadosa de um promotor adequado é um pré-requisito para a modificação genética de plantas. Estãodescritos na literatura vários tipos de promotores quepermitem a expressão dos genes associados. Para expressar ofragmento genético que codifica o polipeptídeo descrito napresente invenção, o promotor selecionado pode ser indutivoou constitutivo, dependendo do tipo de expressão requerida.
A escolha do promotor também é importante para dirigir opolipeptídeo sintetizado para o tecido ou compartimentocelular selecionado (modificações pós-transcrição).
A transformação de plantas pode ser realizada pordiferentes metodologias, tais como, por exemplo,transformação de plantas via Agrobacterium, transformaçãode protoplastos, transferência genética para grãos depólen, injeção direta em órgãos reprodutores ou embriõesimaturos e bombardeamento de partículas. Cada um destesmétodos tem vantagens e desvantagens específicas. Aindaassim, todos foram já utilizados em diferentes tipos deplantas.
Para transformar plantas com o fragmento genético quecodifica o polipeptídeo de Lupinus, o método selecionadofoi transformação via Agrobacterium (Fraley et al., 1983),utilizando um vetor de expressão adequado que contém umaregião codificadora para o gene de interesse associada a umgene marcador apropriado. A regeneração de plantas,desenvolvimento de plantas e transferência de plantas parao meio de cultura a partir de um único protoplasto podemser realizadas seguindo várias metodologias disponíveis naliteratura. Este processo inclui várias etapas relativas àseleção de células transformadas e à cultura subsequentedestas células pelos métodos habituais empregadas nodesenvolvimento de culturas embriogênicas. Por fim, asplântulas regeneradas crescem num meio de cultura adequado,habitualmente solo.
Também é um objetivo da presente invenção qualquerformulação agrícola que inclua, como ingrediente ativo, opolipeptídeo com a seqüência B, glicosilado, fosforilado,alquilado e/ou prenilado, ou uma forma recombinante dopolipeptídeo obtido por transformação de célulascaracterizada por ser utilizada na prevenção, controle eluta contra fungos patogênicos ou Oomicetes ou pragascausadas por insetos, ou como promotor do crescimento oufertilizante.
Outro aspecto da presente invenção está relacionadocom os níveis freqüentemente reduzidos deproteínas/polipeptídeos de plantas das dietas humana eanimal e, alguns casos, com a baixa digestibilidade dasproteínas e uma composição de aminoácidos desequilibrada.De fato, preparações em bruto que contêm o polipeptídeo deLupinus possuem não só uma globulina importante (a proteínanativa de Lupinus que contém o polipeptídeo objetivo dapresente invenção) mas também uma variedade de albuminasque estão naturalmente presentes no material da plantautilizado na extração da proteína. Em conseqüência, estaspreparações brutas do polipeptídeo de Lupinus sãoparticularmente ricas em proteínas e podem ser utilizadascomo suplemento protéico em nutrição animal ou humana, naforma de tofu (após precipitação de globulinas com cálcio emagnésio) ou na forma de requeijão (após precipitação dasalbuminas pelo calor).
A análise da composição de aminoácidos do polipeptídeode Lupinus e a sua grande susceptibilidade a todas asproteases testadas (incluindo tripsina, quimotripsina,subtilisina, proteinase K e pronase) indicam que estepolipeptídeo tem elevado valor nutritivo para animais. Noentanto, o polipeptídeo considerado na presente invenção éuma globulina. Por este motivo, o polipeptídeo de Lupinusou a proteína nativa que o contém é insolúvel em água e emsoluções salinas diluídas, mas é rapidamente solúvel emsoluções de elevada força iônica. Ainda assim, asglobulinas de vagens de leguminosas só são insolúveis napresença de cálcio, magnésio e outros cátions alcalino-terrosos (Ferreira et ai., 1999). Estes cátions divalentes,com carga positiva a valores de pH neutro, atuam comopontes eletrostáticas entre moléculas de globulinas com" carga negativa, promovendo ou induzindo a sua auto-agregação em complexos que são tão grandes que sãoinsolúveis (Ferreira et ai., 1999; Ferreira et al., 2003).
0 tofu, por exemplo, é uma coalhada semelhante a queijo ourequeijão preparado por adição de íons cálcio e magnésio aum extrato aquecido de soja. Os dois cátions sãohabitualmente utilizados na preparação de tofu e estãocomercialmente disponíveis na forma de Nigari®. Deste modo,uma preparação em bruto do polipeptídeo de Lupinus,contendo globulinas e albuminas, pode ser utilizada napreparação de concentrados de globulinas de Lupinus após asua precipitação com cálcio e/ou magnésio. A Figura 7, porexemplo, mostra o padrão de precipitação da proteína nativade Lupinus que contém o polipeptídeo (■) como uma função deconcentrações de cálcio e magnésio adicionados. Para finscomparativos também se apresenta o perfil de precipitaçãoda sua proteína precursora, β-conglutina (a principalproteína de reserva presente em sementes de Lupinus; o). Asalbuminas que permanecem no soro resultante também podemser recuperadas, por exemplo, por precipitação pelo calor,num processo semelhante ao utilizado na preparação derequeijão (precipitação pelo calor das albuminas do leiteque permanecem no soro após a remoção de caseína durante ofabrico do queijo). Deste modo, preparações que contêm opolipeptídeo de Lupinus podem ser utilizadas comosuplemento protéico na dieta humana ou animal.
Para se entender o potencial da presente invençãoseguem-se vários exemplos práticos. No entanto, estesexemplos não são limitadores, no sentido de que poderão serempregadas metodologias alternativas na utilização dopolipeptídeo de Lupinus como agente de controle antifúngicoe de Oomicetes, como inseticida, como promotor docrescimento, como fertilizante ou como suplemento protéicona dieta humana ou animal.
EXEMPLOS PRÁTICOS
Exemplos 1 e 2 - Efeito da pulverização da proteínanativa que contém o polipeptídeo de Lupinus na superfíciede folhas de videira infectadas com o fungo Uncinulanecator (o agente causador do oídio na videira).
Avaliou-se a atividade antifúngica do polipeptídeo deLupinus após pulverização da superfície de uma folha devideira com uma solução que continha 200 μg da proteínanativa pura que contém o polipeptídeo/mL. Como controle,uma folha semelhante foi pulverizada com água em condiçõesidênticas. Os resultados obtidos estão apresentados naFigura 1 e mostram que a folha de videira permanecesaudável dois meses após a pulverização das folhas com aproteína nativa que contém o polipeptídeo, sem vestígios dapresença do fungo, apesar das folhas pulverizadas teremsido mantidas, sempre e permanentemente, em contactopróximo com folhas altamente infectadas.
Realizou-se outro ensaio seguindo uma metodologiaidêntica, mas as observações das superfícies das folhas devideira tratadas foram feitas utilizando um microscópiometalúrgico (Figura 3).
Exemplo 3 - Efeito da proteína nativa que contém opolipeptídeo de Lupinus na germinação e desenvolvimento deesporos de Uncinula necator.
Removeram-se esporos do fungo Uncinula necator dasuperfície de folhas de videira infectadas, tendo sidoinoculados em agar água 0,6% (p/v) que continha 200 μg daproteína nativa pura que contém o polipeptídeo de Lupinuspor mL ou 200 μg da fração protéica total de uvas maduras(que continha proteínas PR) por mL. A germinação dosesporos e desenvolvimento dos tubos germinativos forammonitorizados por microscopia óptica, utilizando o sistemade lente de fase de contraste, durante 24 e 48 horas. Osresultados obtidos, apresentados na Figura 2, mostram queocorreu uma redução acentuada na presença do meio quecontinha o polipeptídeo de Lupinus, não só do número deesporos germinados mas também do comprimento dos tubosgerminativos. Este efeito é notório quando comparado com oresultado observado na presença das proteínas PR.
Exemplo 4 - Efeito da proteína nativa que contém opolipeptídeo de Lupinus na germinação e desenvolvimento deesporos do fungo Phomopsis viticola (o agente causador deexcoriose na videira).
Esporos do fungo Phomopsis viticola. foram inoculadosem meio PDA (agar dextrose de batata). Passados 15 minutos,os esporos foram removidos e misturados com uma solução quecontinha a proteína nativa que contém o polipeptídeo deLupinus num volume final de 25 μ]^. Estas gotículas foramcolocadas em placas de Petri e recobertas com lâminas devidro que foram subseqüentemente seladas, criando umacâmara húmida. Monitorizou-se o desenvolvimento dos esporospor observações de microscopia óptica. Foi evidente umainibição clara da germinação dos esporos. Após 24 horas, ashifas em desenvolvimento sofreram Iise.
Exemplo 5 - Efeito do polipeptídeo recombinante deLupinus na germinação de esporos do fungo Uncinula necator.
Purificou-se o polipeptídeo recombinante de Lupinuslexpresso em bactérias, e testou-se a sua atividadeantifúngica. Estes ensaios foram realizados comopreviamente descrito nos exemplos 2 e 3. Os resultadosobtidos, apresentados na Figura 4, mostram que opolipeptídeo recombinante exibiu propriedades antifúngicasidênticas as observadas para o polipeptídeo extraído deplantas Lupinus. Após um período de incubação de 4 8 horasna presença do polipeptídeo recombinante de Lupinusobservou-se destruição das paredes celulares dos esporos.
Exemplo 6 - Efeito do polipeptídeo recombinante deLupinus na germinação de esporos do Oomicete Plasmoparaviticola (o agente causador do míldio).
Removeram-se esporos do Oomicete Plasmopara viticolada superfície de folhas de videira infectadas, tendo sidocolocados em agar água 0,6% (p/v) que continha 200 μg dopolipeptídeo puro recombinante de Lupinus por mL.Monitorizou-se a germinação dos esporos durante 48 horaspor observações de microscopia óptica. Utilizou-se comocontrole germinação de esporos em agar água. Após 24 horas,as paredes celulares dos esporos foram destruídas, comlibertação concomitante do conteúdo celular.
Exemplo 7 - Efeito da pulverização da proteína nativaque contém o polipeptídeo extraído de Lupinus em roseiras.
Avaliou-se a atividade bioestimulante da proteínanativa de Lupinus que contém o polipeptídeo apóspulverização das superfícies foliares de uma roseira com umextrato em bruto de Lupinus que continha 2 00 μg de proteínanativa que contém o polipeptídeo/mL. Como controle, umaroseira numa fase de desenvolvimento idêntica e incubadanas mesmas condições ambientais foi pulverizada com água. 0resultado obtido, fotografado três semanas após apulverização, está apresentado na figura 5 e mostra umcrescimento superior da planta pulverizada com opolipeptídeo de Lupinus, evidenciando um aparecimentoprematuro dos primeiros botões florais.
Exemplo 8 - Efeito da pulverização da proteína nativaque contém o polipeptídeo extraído de Lupinus em plantas demelancia de viveiro.
Avaliou-se a atividade bioestimulantea do polipeptídeode Lupinus após pulverização das superfícies foliares deplantas de melancia de viveiro com seis semanas de idadecom um extrato em bruto de Lupinus que continha 200 μ9 deproteína nativa que contém o polipeptídeo/mL. O ensaio foirealizado em condições de estufa e as plantas forampulverizadas com água (controle; A); um extrato em bruto deLupinus que continha 100 de proteína nativa que contém opolipeptídeo/mL (B); um promotor do crescimento de plantascomercialmente disponível no mercado (concentraçãorecomendada pelo fabricante) (C), e um extrato em bruto deLupinus que continha 200 de proteína nativa que contém opolipeptídeo/mL (D). Em cada ensaio utilizaram-se vinte equatro plantas. O ensaio foi monitorizado durante as duassemanas subseqüentes, e os resultados obtidos estãoapresentados na figura 6. As plantas pulverizadas com aconcentração mais elevada do polipeptídeo de Lupinus (200μg de proteína nativa que contém o polipeptídeo/mL; D)exibiram o maior desenvolvimento e um crescimento foliarsuperior em comparação com plantas tratadas com água ou como promotor do crescimento de plantas comercialmentedisponível no mercado. As plantas pulverizadas com aconcentração mais baixa do polipeptídeo de Lupinus (100 μgde proteína nativa que contém o polipeptídeo/mL; B)exibiram um nível menor de desenvolvimento mas que aindafoi mais elevado do que o observado para as plantaspulverizadas apenas com água. Em conseqüência, o nível deaplicação recomendado consiste em pulverizar as plantas comuma preparação bruta do polipeptídeo de Lupinus quecontenha 2 00 de proteína nativa que contém opolipeptídeo/mL.
Exemplo 9 - Efeito da pulverização da proteína nativaque contém o polipeptídeo extraído de Lupinus em plantas devideira infectadas com Uncinula necator (o agente fúngicocausador do oídio, economicamente a doença mais importanteda videira em todo o mundo).
Preparou-se um extrato bruto de Lupinus que continha200 μg da proteína nativa de Lupinus que contém opolipeptídeo por mL. Plantas de videira infectadas comUncinula necator e mantidas em condições de estufa forampulverizadas com o extrato ou com água (controle) . Vinte equatro horas após a aplicação observaram-se as plantaspulverizadas - relativamente ao controle, as plantaspulverizadas com o polipeptídeo de Lupinus exibiram maisvigor e revelaram o aparecimento de novos gérmens. Estasituação manteve-se durante pelo menos uma semana, após oque as plantas, previamente enfraquecidas pela presença dofungo, se tornaram exuberantes e com muitas folhas novassem nenhum sintoma da doença.
Exemplo 10 - Determinação das concentrações ótimas decálcio e magnésio necessárias para a preparação de umconcentrado de proteína nativa de Lupinus que contém opolipeptídeo do tipo tofu.
A composição de aminoácidos bem equilibrada daproteína nativa de Lupinus que contém o polipeptídeo, bemcomo a sua excelente digestibilidade (o polipeptídeo éfacilmente hidrolisado nos seus aminoácidos componentes poração das proteases do trato digestivo humano), salientam ogrande potencial nutritivo do concentrado do polipeptídeode Lupinus preparado após precipitação, com cálcio +magnésio 5 mM, das globulinas presentes numa preparaçãobruta da proteína nativa de Lupinus que contém opolipeptídeo (ver figura 7).
REFERÊNCIAS
Fraley, R. T., Rogers, S. G., Horsch, R. B., Sanders,P. R., Flick, J. S., Adamsi S. P., Bittner, M. L., Brand,L. A., Fink, C. L., Fryi J. S., Galluppif G. R., Goldberg,S. B., Hoffman, N. L., & Woo,. S. C. (1983). "Expression ofbacterial genes in plant cells". Proceedings of theNational Academy of Sciences U.S.A., 80, 4801-4807.
Ferreira, R. B., Franco, E., & Teixeira, A. R. (1999)."Calcium- and magnesium-dependent aggregation of legumeseed storage proteins". Journal of Agricultural and FoodChemistry, 47, 3009-3015.
Ferreira, R. B., Freitas, R. L., & Teixeira, A. R.(2003). "Self-aggregation of legume seed storage proteinsinside the protein storage vacuoles is eletrostatic innature, rather than lectin-mediated". FEBS Lettersf 534,106-110.LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA
<110> INSTITUTO SUPERIOR DE AGRONOMIA
DE SEIXAS BOAVIDA FERREIRA, Ricardo ManuelVALADAS DA SILVA MONTEIRO, Sara AlexandraNASCIMENTO TEIXEIRA, Artur RicardoBORGES LOUREIRO, Virgílio
<120> POLIPEPTÍDEO EXTRAÍDO DE PLANTAS DO GÊNERO LUPINUSOU PRODUZIDO DE FORMA RECOMBINANTE, SEQÜÊNCIA DENUCLEOTÍDEOS QUE O CODIFICA E SUA UTILIZAÇÃO EM NUTRIÇÃOANIMAL, COMO PROMOTOR DO CRESCIMENTO DE PLANTAS E NA LUTACONTRA FUNGOS PATOGÊNICOS
<130> PPI 34874/06
<150> PT 103322<151> 2005-07-21
<150> PT 103511<151> 2006-06-28
<160> 2
<170> PatentIn versão 3.3
<210> 1
<211> 519
<212> DNA
<213> Lupinus
<400> 1
cgtagacaaa ggaaccctta tcacttcagc tctcaaagat tccaaactctttacaaaaat 60
aggaatggca aaatccgtgt gctcgagagg tttgaccaaa gaaccaatagacttgagaat 120
ctccaaaact accgcattgt tgagttccaa tcaaaaccta acactctcattctccctaaa 180
cactctgatg ctgactacgt cctcgttgta ctcaatggta gagccacaatcacgatagta 24 0
aaccctgata gaagacaagc atataacctt gagtatggcg atgctctcagaatcccagct 300
ggctcaactt catatatcct taacccggat gacaaccaga agcttagagtagtcaagctc 360gcaataccca tcaacaatcc tggctacttt tatgatttct atccatcgagtactaaagac 420
caacaatcct acttcagtgg cttcagcagg aacactttag aggccaccttcaatactcgt 480
tatgaagaga tacaaaggat tattttaggg aatgaggat 519
<210> 2
<211> 173
<212> PRT
<213> Lupinus
<400> 2
Arg Arg Gln Arg Asn Pro Tyr His Phe Ser Ser Gln Arg Phe GlnThr
1 5 10 15
Leu Tyr Lys Asn Arg Asn Gly Lys Ile Arg Val Leu Glu Arg PheAsp
20 25 30
Gln Arg Thr Asn Arg Leu Glu Asn Leu Gln Asn Tyr Arg Ile ValGlu
35 40 45
Phe Gln Ser Lys Pro Asn Thr Leu Ile Leu Pro Lys His Ser AspAla
50 55 60
Asp Tyr Val Leu Val Val Leu Asn Gly Arg Ala Thr Ile Thr IleVal
65 70 75
80
Asn Pro Asp Arg Arg Gln Ala Tyr Asn Leu Glu Tyr Gly Asp AlaLeu
85 90 95
Arg Ile Pro Ala Gly Ser Thr Ser Tyr Ile Leu Asn Pro Asp AspAsn
100 105 110Gln Lys Leu Arg Val Val Lys Leu Ala Ile Pro Ile Asn Asn ProGly
115 120 125
Tyr Phe Tyr Asp Phe Tyr Pro Ser Ser Thr Lys Asp Gln Gln SerTyr
130 135 140
Phe Ser Gly Phe Ser Arg Asn Thr Leu Glu Ala Thr Phe Asn ThrArg
145 150 155
160
Tyr Glu Glu Ile Gln Arg Ile Ile Leu Gly Asn Glu Asp
165 170
Claims (15)
1. Polipeptídeo extraído de plantas do gêneroLupinus, com uma seqüência N-terminal [ 5'RRQRNPYHFSSQRFQTLYKN RNG 3'], caracterizado pelo fato de:(a) a seqüência de resíduos de aminoácidos apresentadaem (B) ;(B)5-kirvler fdqrtnrlen lqnyrivefq skpntlilpk hsdadyvlwLNGRATITIV NPDRRQAYNL EYGDALRIPA GSTSYILNPD DNQKLRWKLAIPINNPGYF YDFYPSSTKD QQSYFSGFSR NTLEATFNTR YEEIQRIILGNED3-e(b) A seqüência de resíduos de aminoácidos apresentadaem (B) em que um ou mais resíduos de aminoácidos estãoausentes, foram substituídos, adicionados ou modificados, eo polipeptídeo exibe atividade antifúngica e anti-Oomicetes, atividade promotora do crescimento de plantase/ou manter as suas propriedades biológicas.
2. Polipeptídeo extraído de plantas do gêneroLupinus, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de ser glicosilado, fosforilado, alquilado e/ouprenilado.
3. Fragmento de DNA que codifica o polipeptídeo dareivindicação 1 caracterizado pelo fato de:(a) a seqüência de nucleótidos apresentada em (A);(A)s- CGTAGACAAAGGAACCCTTATCACTTCAGCTCTCAAAGATTCCAAACTCTTTACAAAAATAGGAATGGCAAAATCCGTGTGCTCGAGAGGTTTGACCAAAGAACCAATAGACTTGAGAATCTCCAAAACTACCGCATTGTTGAGTTCCAATCAAAACCTAACACTCTCATTCTCCCTAAACACTCTGATGCTGACTACGTCCTCGTTGTACTCAATGGTAGAGCCACAATCACGATAGTAAACCCTGATAGAAGACAAGCATATAACCTTGAGTATGGCGATGCTCTCAGAATCCCAGCTGGCTCAACTTCATATATCCTTAACCCGGATGACAACCAGAAGCTTAGAGTAGTCAAGCTCGCAATACCCATCAACAATCCTGGCTACTTTTATGATTTCTATCCATCGAGTACTAAAGACCAACAATCCTACTTCAGTGGCTTCAGCAGGAACACTTTAGAGGCCACCTTCAATACTCGTTATGAAGAGATACAAAGGATTATTTTAGGGAATGAGGAT3 (b) a seqüência de nucleótidos apresentada em (A) emque um ou mais nucleótidos estão ausentes, foramsubstituídos, adicionados ou modificados, e codifica umpolipeptideo com atividade antifúngica e anti-Oomicetes,atividade promotora do crescimento de plantas e/ou quemantém as suas propriedades biológicas.
4. Vetor recombinante caracterizado pelo fato deconter o fragmento de DNA da reivindicação 3.
5. Célula transformada caracterizada pelo fato deser transformada com o vetor recombinante da reivindicação 4.
6. Célula transformada, de acordo com areivindicação 5, caracterizada pelo fato de ser derivada daEscherichia coli.
7. Célula transformada, de acordo com areivindicação 5, caracterizada pelo fato de ser derivada deuma planta, animal ou microorganismo.
8. Planta transgênica caracterizada pelo fato deconter uma célula transformada da reivindicação 5 e pelofato de exibir resistência a fungos patogênicos, Oomicetesou pragas causadas por insetos, que é por regeneração dareferida célula transformada.
9. Método para produzir o polipeptideo dareivindicação 1, caracterizado pelo fato de incluir umacultura de células transformadas das reivindicações 5, 6 ou- 7 e a recuperação do polipeptídeo com atividade antifúngicaa partir de uma cultura de células ou de um extratocelular.
10. Formulação ou preparação bruta do polipeptídeocaracterizada pelo fato de incluir, como ingrediente ativo,o polipeptídeo das reivindicações 1 ou 2, ou sua formarecombinante obtida da reivindicação 9.
11. Formulação ou preparação bruta do polipeptídeo,de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fatode ser utilizada na prevenção, controle ou luta contrafungos e Oomicetes, patogênicos ou não, pragas causadas porinsetos, como promotor do crescimento de plantas efertilizante.
12. Utilização do polipeptídeo das reivindicações 1ou 2, ou sua forma recombinante obtida da reivindicação 9,na preparação de uma formulação caracterizada pelo fato dese destinar à prevenção, controle ou luta contra fungos eOomicetes, patogênicos ou não, insetos, como promotor docrescimento de plantas e fertilizante.
13. Utilização do polipeptídeo das reivindicações 1ou 2, ou sua forma recombinante obtida da reivindicação 9,na prevenção, controle ou luta contra fungos e Oomicetes,patogênicos ou não, pragas causadas por insetos, comopromotor do crescimento de plantas e fertilizantecaracterizada pelo fato de se aplicar na planta um extractototal ou parcial de Lupinus que contém o polipeptídeo dasreivindicações 1 ou 2, ou sua forma recombinante obtida dareivindicação 9.
14. Utilização do polipeptídeo das reivindicações 1ou 2, ou sua forma recombinante obtida da reivindicação 9,ou de uma preparação bruta que o contenha caracterizadapelo fato de ser aplicada como bioestimulante ou comopromotor do crescimento e desenvolvimento de plantas, emque a atividade bioestimulante é particularmente observávelapós pulverização da folhagem de plantas naturalmenteenfraquecidas ou infectadas com agentes patogênicos.
15. Utilização do polipeptídeo das reivindicações 1ou 2, ou sua forma recombinante obtida da reivindicação 9,ou de uma preparação bruta que o contenha caracterizadapelo fato de ser aplicada na preparação de concentradosprotéicos para nutrição humana ou animal com elevado valornutritivo, quer após precipitação de globulinas com sais decálcio e magnésio quer com e sem tratamento físico, comoaquecimento para a precipitação de albuminas.
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