BRPI0621279A2 - moléculas pequenas contendo boro - Google Patents

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J. Benkovic Stephen
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R. Maples Kirk
J. Platner Jacob
Rock Fernando
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M. Stemphoski Aaron
Petros Yiannikouros George
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Zhang Youg-Kang
Zhou Huchen
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Abstract

MOLéCULAS PEQUENAS CONTENDO BORO. Esta invenção está relacionada a compostos úteis para o tratamento de infecções fúngicas, mais especificamente ao tratamento tópico de onicomicose e/ou de infecções cutâneas fúngicas. Esta invenção é dirigida aos compostos que são ativos contra fungos e que possuem propriedades que permitem que o composto, quando colocado em contato com um paciente, alcance uma parte específica da pele, unha, cabelo, garra ou casco infectado pelo fungo. Em particular, os presentes compostos possuem propriedades físico-químicas que facilitam a penetração da placa ungueal.

Description

MOLÉCULAS PEQUENAS CONTENDO BORO
REFERÊNCIA CRUZADA COM PEDIDOS RELACIONADOS
O presente pedido é uma continuação em parte do Pedido de Patente U.S. 11/357.687, depositado em 16 de fevereiro de 2006, que está relacionado ao Pedido de Patente Provisório U.S. 60/654.060, depositado em 16 de fevereiro de 2005, que é incorporado por referência em sua totalidade para todos os fins.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
Infecções das unhas e cascos, conhecidas como infecções ungueais e/ou periungueais, geram problemas sérios em dermatologia. Essas infecções ungueais e/ou periungueais podem ser causadas por fontes como fungos, vírus, leveduras, bactérias e parasitas. A onicomicose é um exemplo dessas infecções ungueais e/ou periungueais sérias, e é causada por pelo menos um fungo. 0 tratamento atual para infecções ungueais e/ou periungueais geralmente se enquadra em três categorias: administração sistêmica de medicamentos; remoção cirúrgica de toda ou parte da unha ou do casco, seguida por tratamento tópico do tecido exposto; ou aplicação tópica de cremes, loções, géis ou soluções convencionais, que freqüentemente incluem o uso de bandagens para manter essas formas de dosagem no lugar sobre a unha ou o casco. Todas essas abordagens possuem desvantagens importantes. A discussão a seguir é particularmente dirigida às desvantagens associadas ao tratamento atual de infecções fúngicas ungueais e/ou periungueais.
A administração sistêmica (oral) de longo prazo de um agente antifúngico para o tratamento de onicomicose é freqüentemente necessária para a produção de um efeito terapêutico no leito ungueal. Por exemplo, o tratamento oral com o composto antifúngico terbinafina tipicamente exige a administração de 200 a 400 mg/dia por 12 semanas, antes que seja percebido qualquer beneficio terapêutico significativo. Essa terapia sistêmica de longo prazo e alta dose pode ter efeitos adversos significativos. Por exemplo, foi relatado que a terbinafina possui efeitos de toxicidade hepática e reduz os níveis de testosterona no sangue em função dos efeitos adversos sobre os testes. A aderência do paciente ao tratamento é um problema com essas terapias de longo prazo, especialmente aquelas que envolvem efeitos adversos severos. Além disso, esse tipo de terapia oral de longo prazo é inconveniente no tratamento de um cavalo ou outros ruminantes que sofrem de infecções fúngicas do casco. Conseqüentemente, os riscos associados aos tratamentos parenterais geram desestímulos significativos contra seu uso e uma não aderência considerável do paciente ao tratamento.
A remoção cirúrgica de toda ou de parte da unha, seguida por tratamento tópico, também possui desvantagens importantes. A dor e o desconforto associados à cirurgia, e a aparência cosmética indesejável da unha ou do leito ungueal, representam problemas significativos, particularmente para pacientes mais sensíveis à aparência física. Geralmente, esse tipo de tratamento não é realista para ruminantes como, por exemplo, cavalos.
A terapia tópica também possui problemas significativos. As formas de dosagem tópica, tais como cremes, loções, géis etc., não conseguem manter o fármaco em contato íntimo com a área infectada por períodos de tempo terapeuticamente eficazes. As bandagens têm sido usadas para manter os reservatórios de fármaco no lugar, em uma tentativa de aumentar a absorção do agente farmacêutico. No entanto, as bandagens são espessas, pouco práticas, problemáticas, e geralmente levam a uma baixa aderência do paciente ao tratamento.
Também foram desenvolvidas películas hidrofílicas e hidrofóbicas que formam soluções antifúngicas tópicas. Essas formas de dosagem fornecem um maior contato entre o fármaco e a unha. Formulações tópicas para o tratamento de infecção fúngica foram tentadas amplamente para liberar o fármaco ao local-alvo (um leito ungueal infectado) por difusão pela ou através da unha.
A unha é mais semelhante ao cabelo do que ao estrato córneo com relação à composição química e permeabilidade. O nitrogênio é o componente principal da unha, que atesta sua natureza proteinácea. O teor total de lipídeos da unha madura é de 0,1-1,0%, enquanto os lipídeos do estrato córneo correspondem a cerca de 10% p/p. A unha é 100-200 vezes mais espessa do que o estrato córneo, e possuí afinidade e capacidade muito elevadas para a ligação e retenção de fármacos antifúngicos. Conseqüentemente, pouco fármaco, ou nenhum, penetra através da unha para alcançar o local-alvo. Por todas essas razões, a terapia tópica para infecções fúngicas tem sido geralmente ineficaz.
Compostos conhecidos como intensificadores da penetração ou permeação são bem conhecidos na técnica por produzirem um aumento da permeabilidade da pele ou de outras membranas do corpo a um agente farmacologicamente ativo. A permeabilidade aumentada permite um aumento da taxa na qual o fármaco penetra através da pele e entra na corrente sangüínea. Os intensificadores da penetração têm sido bem sucedidos na superação da impermeabilidade de agentes farmacêuticos através da pele. No entanto, a fina camada do estrato córneo da pele, que possui uma espessura de cerca de 10 a 15 células, e é formada naturalmente por células que migram em direção à superfície da pele da camada basal, é mais facilmente penetrada do que as unhas. Além disso, intensificadores da penetração conhecidos não se mostraram úteis na facilitação da migração de fármacos através do tecido ungueal.
As composições antimicrobianas para o controle de infecções bacterianas e fúngicas que compreendem um quelato metálico de 8-hidroxiquinolina e um ácido alquil benzeno sulfônico demonstraram que são eficazes em função da habilidade aumentada do grupo oleofílico para penetrar na camada lipóide de microcélulas. Os compostos, no entanto, não aumentam eficazmente a habilidade para transportar o antifúngico farmaceuticamente ativo através da camada cornifiçada ou do estrato córneo da pele. Patente U.S. N0 4.602.011, West e cols., 22 de julho de 1986; Patente U.S. N0 4.766.113, West e cols., 23 de agosto de 1988.
Portanto, há uma necessidade na técnica de compostos que possam penetrar eficazmente na unha. Também há necessidade na técnica de compostos que possam tratar eficazmente infecções ungueais e/ou periungueais. Essas e outras necessidades são abordadas pela presente invenção.
Aminoacil-tRNA sintetases (ARS) são uma família de enzimas essenciais que anexam aminoácidos na extremidade da adenosina terminal 3' de tRNAs; os tRNAs carregados são então usados pelo maquinário de tradução para a síntese de proteínas a partir do mRNA. Embora haja poucas exceções, por exemplo, em bactérias Gram-positivas e arqueobactérias, a maioria dos organismos possui pelo menos uma ARS para cada aminoácido. No caso de eucariotas, eles possuem duas ARS, uma localizada no citoplasma, enquanto a outra ARS é localizada na(s) organela(s). A ARS catalisa duas reações, como apresentado abaixo; a primeira reação adenila o aminoácido com ATP, seguido por sua transferência ao hidroxil 2' ou 31 da adenosina terminal de tRNA.
Aminoácido (AA) + ATP —> AA-AMP + PPi;
AA-AMP + tRNA -> tRNA-AA + AMP
A família de 20 ARS se enquadra em duas classes estruturais distintas, como determinado por sua estrutura cristal. A Classe I, que possui uma dobra do tipo Rossman, inclui a ARS para os seguintes aminoácidos: arginina, cisteína, glutamato, glutamina, isoleucina, leucina, lisina (em arqueobactérias e algumas bactérias), valina, metionina, triptofano e tirosina. As ARS da Classe II incluem as enzimas para aminoácidos alanina, asparagina, aspartato, glicina, histidina, lisina, fenilalanina, prolina, serina e treonina. A reação mediada por ARS é a principal verificação de especificidade que assegura que o aminoácido correto está carregado ao seu tRNA cognato. Na medida em que alguns aminoácidos diferem apenas em um único grupo metileno, por exemplo, valina e isoleucina, foi postulado que a especificidade da reação sintética isoladamente não consegue explicar a precisão in vivo observada da carga de tRNA. 0 sítio ativo sintético deve ser capaz de excluir aminoácidos que não sejam análogos próximos do aminoácido cognato, mas aminoácidos análogos constituem um problema maior. Portanto, para aumentar a especificidade, devem ocorrer revisão e edição. Até agora, nove ARS demonstraram ter um mecanismo de edição que reduz significativamente a freqüência de RNAs carregados inadequadamente. As enzimas para os seguintes aminoácidos demonstraram ter atividade de edição: alanina, isoleucina, leucina, metionina, lisina, fenilalanina, prolina, treonina e valina. Essas ARS podem hidrolisar os aminoácido AA-AMP adenilados incorretamente (edição pré-transferência) ou o tRNA carregado incorretamente (edição pós-transferência). Até hoje, as isoleucil, leucil e valil-tRNA sintetases possuem os mecanismos de edição mais bem caracterizados; demonstrou-se que um domínio estrutural adicional denominado polipeptídeo conectivo I (CPI) inserido no domínio sintético contém o sítio ativo de edição. Ele está localizado mais de 25A afastado do sítio ativo sintético, o que sugere que tanto o aminoácido adenilado intermediário quanto o aminoácido fixado à extremidade 3' do tRNA devem ser movidos do sítio ativo no domínio sintético para o sítio de edição para que a reação seja revisada. Foi postulado que a extremidade 3' do tRNA carregado seja translocada de forma similar àquela do mecanismo de revisão de DNA polimerases. Sabe-se bem menos sobre a translocação do aminoácido adenilado. Um domínio CPl similar também está presente nas enzimas ARS de metionina e cisteína, mas ele é bem menor do que aquele encontrado nas enzimas de valina, isoleucina e leucina. Apesar da ausência de um homólogo direto ao domínio CP1-like nas ARS da classe II, foram encontrados domínios de edição separados nas enzimas para prolina e treonina. Embora a edição seja importante para assegurar a carga correta de tRNAs, ela não é essencial para a viabilidade e não é necessária para a síntese de tRNAs carregados. Por exemplo, em Escherichia coli, na qual aminoácidos no domínio de edição de isoleucil-tRNA sintetase foram alterados para alanina, o mutante resultante ainda era viável, embora tivesse muitos efeitos pleiotrópicos, incluindo um defeito perceptível do crescimento celular.
Apesar de homologias significativas entre ARS humanas, bacterianas e fúngicas, há diversos compostos que foram desenvolvidos como antiinfecciosos. 0 exemplo mais notável de um inibidor da ARS é o antibiótico comercial mupirocina (ácido pseudomônico), que é vendido sob o nome comercial Bactroban. Mupirocina inibe especificamente isoleucil-tRNA sintetases bacterianas, enquanto sua atividade contra o homólogo humano é mais de 1.000 vezes menos ativa. Mupirocina se liga especificamente ao sítio ativo sintético, e rautantes que são resistentes a esse fármaco possuem mutações no domínio sintético de leucil-tRNA sintetase. Da mesma forma, reveromicina A inibe as isoleucil-tRNA sintetases eucarióticas: mutantes de resistência de Saccharomyces cerevisiae possuem mutações no domínio sintético. Até agora, todas as tentativas para o desenvolvimento de inibidores da ARS melhores do que mupirocina, um análogo de isoleucina-adenilato, se basearam na inibição das reações sintéticas.
Como se acreditava anteriormente que não era essencial para a síntese de tRNAs carregados, o domínio de edição de tRNA sintetases não era considerado um alvo promissor para o desenvolvimento de fármacos. Dados de análise mutacional dos domínios de edição de ARS tendem a sugerir que a inibição do mecanismo de edição causa apenas um aumento nos RNAs carregados inadequadamente e não levam à morte celular. Compostos que são ativos contra, e específicos para, o domínio de edição da tRNA sintetase dariam acesso a uma nova classe de substâncias terapêuticas antimicrobianas para aumentar o arsenal de agentes em uso atualmente.
Surpreendentemente, a presente invenção fornece esses compostos e métodos de utilização desses compostos.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Em um aspecto, a invenção fornece uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 9</formula>
em que R1 e R2 são membros selecionados independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. R1 e R2, juntos com os átomos aos quais estão anexados, podem opcionalmente ser unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. Z1 é um membro selecionado de: <formula>formula see original document page 10</formula>
R3a e R4a são membros selecionados independentemente de H, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. R5 é um membro selecionado de halogênio e OR8. R8 é um membro selecionado de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. A é um membro selecionado de CR9a e N. D é um membro selecionado de CR10a e Ν. E é um membro selecionado de CRlla e N. G é um membro selecionado de CR12a e N. R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de H, OR*, NR*R* *, SR*, -S(O)R*, -S(O)2R*, -S (O) 2NR*R**, nitro, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Cada R* e R** são membros selecionados independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. R9a e R10a, juntos com os átomos ao qual estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel. R10a e Rlla, juntos com os átomos ao qual estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel. Rlla e R12a, juntos com os átomos ao qual estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel. A combinação de nitrogênios (A + D + E + G) é um número inteiro selecionado de 0 a 3.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
A FIG. 1 é uma tabela de dados da concentração inibidora mínima (MIC) de ésteres borônicos cíclicos contra vários fungos.
A FIG. 2A exibe a concentração inibidora mínima (MIC) para CIO, ciclopirox, terbinafina, fluconazol e itraconazol (fármacos de comparação) contra 19 cepas de fungos de teste.
A FIG. 2B exibe a concentração fungicida mínima (MFC) para CIO, ciclopirox, terbinafina e itraconazol (fármacos de comparação) contra 2 cepas de fungos de teste.
A FIG. 3 exibe uma comparação de equivalentes normalizados de ClO e ciclopirox em cada parte de amostras de placa ungueal após tratamento de 14 dias.
A FIG. 4 exibe uma comparação de equivalentes de CIO e ciclopirox em bolas de algodão que apoiam amostras de leito após tratamento de 14 dias.
A FIG. 5 exibe os resultados de um placebo para CIO (50:50 propileno glicol e acetato de etila) aplicado por dia ao longo de cinco dias. Foi observado crescimento de um carpete total do organismo T. rubrum.
A FIG. 6 exibe os resultados de uma alíquota de 4 0 μl/cm2 de uma solução 10% p/v de ClO aplicada por dia ao longo de cinco dias. Foram observadas zonas de inibição (na ordem das células mostrada na figura) de 100%, 67%, 46%, 57%, 38% e 71% para o crescimento de T. rubrum. A seta verde indica a medida da zona de inibição.
A FIG. 7 exibe os resultados de uma alíquota de 4 0 μl/cm2 de uma solução 10% p/v de ClO aplicada por dia ao longo de cinco dias. Foram observadas zonas de inibição (na ordem das células mostrada na figura) de 74%, 86%, 100%, 82%, 100% e 84% para o crescimento de T. rubrum.
A FIG. 8 exibe os resultados de uma alíquota de 4 0 μl/cm2 de ciclopirox 8% em p/p esmalte comercial aplicado por dia ao longo de cinco dias. Nenhuma zona de inibição foi observada; crescimento de carpete total de T. rubrum.
A FIG. 9 exibe os resultados de uma alíquota de 40 μl/cm2 de amorolfina 5% p/v em esmalte comercial aplicado por dia ao longo de cinco dias. Nenhuma zona de inibição foi observada; crescimento de carpete total de T. rubrum.
A FIG. 10 mostra seqüências de aminoácidos para domínios de edição de leucil-tRNA sintetase e seqüências de nucleotídeos para tRNA-Leu e tRNA-Ile. (A) seqüências de aminoácidos para domínio de edição de leucil-tRNA sintetase de S. cerivisiae na forma do tipo selvagem (ID. DE SEQ. N°: 1) e na forma que superexpressa (ID. DE SEQ. N°: 2); (B) seqüências de aminoácidos para domínios de edição de leucil-tRNA sintetase de espécies indicadas; (C) seqüência de nucleotídeos genômica para tRNA-Leu e tRNA-Ile de S. cerivisiae; em uma modalidade da invenção, uma aminoacil tRNA sintetase irá se ligar aos produtos transcritos e metilados para os quais essas seqüências servem como modelo; (D) seqüências de nucleotídeos de tRNA-Leu de espécies indicadas.
A FIG. 11 exibe estruturas de ésteres borônicos cíclicos.
A FIG. 12 exibe diferentes estruturas para porções dos compostos da invenção.
A FIG. 13 mostra o efeito de ATP sobre a ligação de ClO a cdc60. O ensaio de ligação foi realizado com uma concentração inicial [CIO] de aproximadamente 72-79 μΜ (pré-equilíbrio).
A FIG. 14 mostra a curva de ligação cdc60 contra concentração de [C10] livre.
A FIG. 15 exibe dados do experimento de reação de troca de PPi para determinar a taxa de edição na presença e ausência de C10.
A FIG. 16 apresenta dados de um experimento de aminoacilação que mostra o efeito de C10 em diferentes concentrações sobre a aminoacilação de tRNAleu.
A FIG. 17 mostra os resultados de um ensaio de edição pós-transferência realizado em S. cerevisiae em diferentes concentrações de C10 ao longo de um intervalo de pontos do tempo.
A FIG. 18 exibe os nomes de compostos exemplares da invenção.
A FIG. 19 exibe compostos exemplares da invenção.
A FIG. 2 0 exibe compostos exemplares da invenção.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
I. Definições e abreviações
As abreviações aqui utilizadas possuem geralmente seu significado convencional dentro das técnicas químicas e biológicas.
O termo "composto da invenção", como aqui usado, refere-se aos compostos aqui discutidos, sais e pró- fármacos farmaceuticamente aceitáveis desses compostos.
O termo "compostos que contêm boro", como aqui usado, refere-se aos compostos da invenção que contêm boro como parte de sua fórmula química.
MIC, ou concentração inibidora mínima, é o ponto em que o composto interrompe mais de 50% do crescimento celular, preferivelmente 60% do crescimento celular, preferivelmente 70% do crescimento celular, preferivelmente 80% do crescimento celular, preferivelmente 90% do crescimento celular, em relação a um controle não tratado.
Quando grupos substituintes forem especifiçados por suas fórmulas químicas convencionais, escritas da esquerda para a direita, eles igualmente englobarão os substituintes quimicamente idênticos que resultariam da escrita da estrutura da direita para a esquerda; por exemplo, -CH2O- visa também referir -OCH2- .
O termo "poli", como aqui usado, significa pelo menos
2. Por exemplo, um íon metálico polivalente é um íon metálico que possui uma valência de pelo menos 2.
"Porção" refere-se ao radical de uma molécula que é anexada a outra porção.
O símbolo ΛΛΛΓ , seja ele usado como uma ligação ou exibido perpendicularmente a uma ligação, indica o ponto no qual a porção exibida está anexada ao restante da molécula.
O termo "alquil", por si próprio ou como parte de outro substituinte, significa, a menos que definido de forma diferente, um radical hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada, ou cíclico, ou combinação destes, que podem ser totalmente saturados, mono- ou poliinsaturados, e podem incluir radicais di- e multivalentes, que possuem o número de átomos de carbono designados (ou seja, C1-C10 significa um a dez carbonos). Exemplos de radicais hidrocarboneto saturados incluem, sem limitação, grupos como metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, t-butil, isobutil, sec-butil, ciclohexil, (ciclohexil)metil, ciclopropilmetil, homólogos e isômeros de, por exemplo, n-pentil, n-hexil, n-heptil, n- octil, e semelhantes. Um grupo alquil insaturado é aquele que possui uma ou mais ligações duplas ou ligações triplas. Exemplos de grupos alquil insaturados incluem, sem limitação, vinil, 2-propenil, crotil, 2-isopentenil, 2- (butadienil) , 2,4-pentadienil, 3-(1,4-pentadienil) , etinil, 1- e 3-propinil, 3-butinil, e os homólogos e isômeros superiores. O termo "alquil", a menos que observado de forma diferente, também visa incluir aqueles derivados de alquil definidos com mais detalhe abaixo, por exemplo, "heteroalquil". Grupos alquil que se limitam aos grupos hidrocarboneto são denominados "homoalquil".
O termo "alquileno", por si próprio ou como parte de outro substituinte, significa um radical divalente derivado de- um alcano, como exemplificado, mas sem limitação, por — CH2CH2CH2CH2-, e ainda inclui aqueles grupos descritos abaixo como "heteroalquileno". Tipicamente, um grupo alquil (ou alquileno) terá de 1 a 24 átomos de carbono, com aqueles grupos que possuem 10 ou menos átomos de carbono sendo preferidos na presente invenção. Um "alquil inferior" ou "alquileno inferior" é um grupo alquil ou alquileno de cadeia mais curta, que possui geralmente oito ou menos átomos de carbono.
Os termos "alcóxi", "alquilamino" e "alquiltio" (ou tioalcoxi) são usados em seu significado convencional, e referem-se àqueles grupos alquil anexados ao restante da molécula por meio de um átomo de oxigênio, um grupo amino ou um átomo de enxofre, respectivamente.
O termo "heteroalquil", por si próprio ou em combinação com outro termo, significa, a menos que definido de forma diferente, uma cadeia linear ou ramificada estável, ou radical hidrocarboneto cíclico, ou combinações destes, que consiste no número definido de átomos de carbono e pelo menos um heteroátomo. Em uma modalidade exemplar, os heteroátomos podem ser selecionados do grupo que consiste em Β, O, N e S, e em que os átomos de nitrogênio e enxofre podem opcionalmente ser oxidados, e o heteroátomo nitrogênio pode opcionalmente ser quaternizado. Os heteroátomos B, O, NeS podem ser colocados em qualquer posição interior do grupo heteroalquil ou na posição na qual o grupo alquil está anexado ao restante da molécula. Exemplos incluem, sem limitação, -CH2-CH2-O-CH3, -CH2-CH2- NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3, -CH2-SCH2-CH3, -CH2-CH2i-S(O)- CH3, -CH2-CH2-S(O)2-CH3, -CH-CH-O-CH3, -CH2CH=N-OCH3 e - CH=CH-N(CH3)-CH3. Até dois heteroátomos podem ser consecutivos, como, por exemplo, -CH2-NH-OCH3.
Similarmente, o termo "heteroalquileno", por si próprio ou como parte de outro substituinte, significa um radical divalente derivado de heteroalquil, como exemplificado, mas não limitado, por -CH2-CH2-S-CH2-CH2 e -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2- Para grupos heteroalquileno, os heteroátomos também podem ocupar um ou ambos os terminais da cadeia (por exemplo, alquilenooxi,alquilenodioxi,alquilenoamino, alquilenodiamino, e semelhantes). Adicionalmente, para grupos de ligação de alquileno e heteroalquileno, nenhuma orientação do grupo de ligação está implicada pela direção em que a fórmula do grupo de ligação é escrita. Por exemplo, a fórmula -C(O)2R'- representa tanto -C(O)2R'- quanto -R1C(O)2- .
Os termos "cicloalquil" e "heterocicloalquil", por eles próprios ou em combinação com outros termos, representam, a menos que definido de forma diferente, versões cíclicas de "alquil" e "heteroalquil", respectivamente. Adicionalmente, para heterocicloalquil, um heteroátomo pode ocupar a posição na qual o heterociclo está anexado ao restante da molécula. Exemplos de cicloalquil incluem, sem limitação, ciclopentil, ciclohexil, 1-ciclohexenil, 3-ciclohexenil, cicloheptil, e semelhantes. Exemplos de heterocicloalquil incluem, sem limitação, 1-(1,2,5,6-tetrahidropiridil) , 1-piperidinil, 2- piperidinil, 3 -piperidinil, 4-morfolinil, 3-morfolinil, tetrahidrofuran-2-il, tetrahidrofuran-3-il, tetrahidrotien- 2-il, tetrahidrotien-3-il, 1 piperazinil, 2-piperazinil, e semelhantes.
Os termos "halo" ou "halogênio" , por eles próprios ou como parte de outro substituinte, significam, a menos que definido de forma diferente, um átomo flúor, cloro, bromo ou iodo. Adicionalmente, termos como "haloalquil" visam incluir mono-haloalquil e poli-haloalquil. Por exemplo, o termo "halo (C1-C4) alquil" visa incluir, sem limitação, trifluormetil, 2,2,2-trifluoretil, 4-clorobutil, 3- bromopropil, e semelhantes. O termo "aril" significa, a menos que definido de forma diferente, um substituinte poliinsaturado, aromático, que pode ser um anel único ou múltiplos anéis (preferivelmente de 1 a 3 anéis), que são fundidos em conjunto ou ligados de forma covalente. O termo "heteroaril" refere-se aos grupos aril (ou anéis) que contêm de um a quatro heteroátomos. Em uma modalidade exemplar, o heteroátomo é selecionado de Β, Ν, 0 e S1 em que os átomos de nitrogênio e enxofre são opcionalmente oxidados, e os átomos de nitrogênio são opcionalmente quaternizados. Um grupo heteroaril pode ser anexado ao restante da molécula por meio de um heteroátomo. Exemplos não limitantes de grupos aril e heteroaril incluem fenil, 1-naftil, 2-naftil, 4-bifenil, 1-pirrolil, 2-pirrolil, 3- pirrolil, 3-pirazolil, 2-imidazolil, 4-imidazolil, pirazinil, 2-oxazolil, 4-oxazolil, 2-fenil-4oxazolil, 5- oxazolil, 3-isoxazolil, 4-isoxazolil, 5-isoxazolil, 2- tiazolil, 4-tiazolil, 5-tiazolil, 2-furil, 3-furil, 2- tienil, 3-tienil, 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, 2- pirimidil, 4-pirimidil, 5-benzotiazolil, purinil, 2- benzimidazolil, 5-indolil, lisoquinolil, 5-isoquinolil, 2- quinoxalinil, 5-quinoxalinil, 3-quinolil, 6-quinolil, dioxaborolano, dioxaborinano e dioxaborepano. Substituintes para cada um dos sistemas de anel aril e heteroaril observados acima são selecionados do grupo de substituintes aceitáveis descrito abaixo.
Por concisão, o termo "aril", quando usado em combinação com outros termos (por exemplo, arilóxi, ariltioxi, arilalquil) inclui anéis tanto aril quanto heteroaril, como definidos acima. Dessa forma, o termo "arilalquil" visa incluir aqueles radicais em que um grupo aril é anexado a um grupo alquil (por exemplo, benzil, fenetil, piridilmetil, e semelhantes), incluindo aqueles grupos alquil nos quais um átomo de carbono . (por exemplo, um grupo metileno) foi substituído por, por exemplo, um átomo de oxigênio (por exemplo, fenoximetil, 2- piridiloximetil, 3-(1-naftiloxi)propil, e semelhantes).
Cada um dos termos acima (por exemplo, "alquil", "heteroalquil", "aril" e "heteroaril") visa incluir formas tanto substituídas quanto não substituídas do radical indicado. Substituintes preferidos para cada tipo de radical serão fornecidos abaixo.
Substituintes para os radicais alquil e heteroalquil (incluindo aqueles grupos freqüentemente citados como alquileno, alquenil, heteroalquileno, heteroalquenil, alquinil, cicloalquil, heterocicloalquil, cicloalquenil e heterocicloalquenil) são citados genericamente como "substituintes do grupo alquil", e podem ser um ou mais dentre diversos grupos selecionados de, sem limitação: OR', =0, NR1, N-OR', -NR1R'1, -SR', - halogênio, -OC(O)R1, -C(O)R', -CO2R', -CONR1R'', -OC(O)NR1R'', -NR11C(O)R', - NRl-C(O)NR1lR111, -NR11C(O)2R', -NR-C(NRiR11R111)=NR1111, - NR-C(NR1R11)=NR''1, -S(O)R', -S(O)2R1, -S(O)2NR1R11, NRSO2R', -CN e NO2, em um número que varia de zero a (2m' + 1) , em que m' é o número total de átomos de carbono nesse radical. R', R1 1 , R1' 1 e R1111, cada um, de preferência independentemente, referem-se a hidrogênio, heteroalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído, por exemplo, aril substituído com 1-3 halogênios, alquil substituído ou não substituído, grupos alcóxi ou tioalcoxi, ou grupos arilalquil. Quando um composto da invenção inclui mais de um grupo R, por exemplo, cada um dos grupos R é selecionado independentemente como cada um dos grupos R1, R'1, R1 ' ' e R1'11 quando mais de um desses grupos está presente. Quando R1 e R1 1 estão anexados ao mesmo átomo de nitrogênio, eles podem ser combinados com o átomo de nitrogênio para formar um anel de 5, 6 ou 7 membros. Por exemplo, -NR1R1 ' visa incluir, sem limitação, 1-pirrolidinil e 4-morfolinil. A partir da discussão acima de substituintes, aqueles habilitados na técnica entenderão que o termo "alquil" visa incluir grupos que incluem átomos de carbono ligados a grupos diferentes de grupos hidrogênio como, por exemplo, haloalquil (por exemplo, -CF3 e -CH2CF3) e acil (por exemplo, -C(O)CH3, -C(O)CF3, -C(O)CH2OCH3, e semelhantes).
Similar aos substituintes descritos para o radical alquil, os substituintes para os grupos aril e heteroaril são citados genericamente como "substituintes do grupo aril". Os substituintes são selecionados de, por exemplo: halogênio, -OR', =0, =NR', =N-OR', - NR1R'1, -SR', halogênio, -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR1R'', OC(O)NR1R'', - NR''C(O)R', -NR1-C(O)NR11R''', -NRwC(O)2R', -NR-C(NRiRiiR111)=NR'''', NR-C(NR-R11)=NR1'1, -S(O)R1, S(O)2R', -S(O)2NR-R'1, -NRSO2R', -CN e NO2, -R-, -N3, - CH(Ph)2, flúor (C1-C4) alcóxi e flúor (Ci-C4) alquil, em um número que varia de zero ao número total de valências abertas no sistema de anel aromático; e em que R-, R' ', R' ' ' e R' ' ' ' são selecionados, de preferência, independentemente de hidrogênio, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Quando um composto da invenção inclui mais de um grupo R, por exemplo, cada um dos grupos R é selecionado independentemente como são cada um dos grupos R', R'', R''' e R1'''' quando mais de um desses grupos está presente.
Dois dos substituintes em átomos adjacentes do anel aril ou heteroaril podem opcionalmente ser substituídos com um substituinte da fórmula -T-C(O)-(CRR1)q-U-, em que TeU são independentemente NR-, -O-, -CRR'- ou uma ligação simples, e q é um número inteiro de 0 a 3. Alternativamente, dois dos substituintes nos átomos adjacentes do anel aril ou heteroaril podem opcionalmente ser substituídos com um substituinte da fórmula — A-(CH2)r- B-, em que AeB são independentemente -CRR'-, -O-, -NR-, - S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'- ou uma ligação simples, e r é um número inteiro de 1 a 4. Uma das ligações simples do novo anel assim formado pode opcionalmente ser substituída com uma ligação dupla. Alternativamente, dois dos substituintes nos átomos adjacentes do anel aril ou heteroaril podem opcionalmente ser substituídos com um substituinte da fórmula -(CRR1)S-X-(CR''R''')d-, em que s e d são independentemente números inteiros de0a3, e X é - 0-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2- ou -S(O)2NR'-. Os substituintes R, R', R'' e R''' são selecionados, de preferência, independentemente de hidrogênio ou (C1- C6)alquil substituído ou não substituído.
"Anel", como aqui usado, significa um cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído, ou heteroaril substituído ou não substituído. Um anel inclui porções fundidas do anel. O número de átomos em um anel é tipicamente definido pelo número de membros no anel. Por exemplo, um "anel de 5 a 7 membros" significa que há 5 a 7 átomos no arranjo circundado. O anel opcionalmente incluía um heteroátomo. Dessa forma, o termo "anel de 5 a 7 membros" inclui, por exemplo, piridinil e piperidinil. O termo "anel" ainda inclui um sistema de anel que compreende mais de um "anel" , em que cada "anel" é definido independentemente como acima.
Como aqui usado, o termo "heteroátomo" inclui átomos diferentes de carbono (C) e hidrogênio (H). Exemplos incluem oxigênio (O) , nitrogênio (N) enxofre (S), silício (Si), germânio (Ge), alumínio (Al) e boro (B).
O símbolo "R" é uma abreviação geral que representa um grupo substituinte que é selecionado de grupos alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído, heteroaril substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, e heterocicloalquil substituído ou não substituído.
O termo "derivado de" inclui seu significado da linguagem comum e também se refere a uma molécula que é 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 75%, 70%, 65% ou 60% homóloga a uma molécula de referência. As moléculas citadas nessa definição incluem cadeias de RNA ou DNA, oligonucleotídeos, polipeptídeos ou proteínas de qualquer comprimento e composição.
O termo "marcador imunológico" inclui oligonucleotídeos, proteínas, anticorpos, peptídeos, polipeptídeos, enzimas ou quaisquer outras moléculas capazes de induzir uma resposta imunológica em animais ou células apropriadas ou se ligar a anticorpos específicos.
O termo "não cognato" visa englobar tanto as formas no singular quanto no plural da palavra, ou seja, a frase "aminoácido não cognato" compreende um ou mais aminoácidos.
O termo quantidade "eficaz" de um fármaco, formulação, ou permeante significa uma quantidade suficiente de um agente ativo para fornecer o efeito local ou sistêmico desejado. Uma quantidade "topicamente eficaz", "cosmeticamente eficaz", "farmaceuticamente eficaz" ou "terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade de fármaco necessária para efetuar o resultado terapêutico desejado.
"Topicamente eficaz" refere-se a um material que, quando aplicado à pele, unha, cabelo, garra ou casco, produz um resultado farmacológico desejado, tanto localmente no local da aplicação, quanto sistemicamente em conseqüência da passagem transdérmica de um ingrediente ativo no material.
"Cosmeticamente eficaz" refere-se a um material que, quando aplicado à pele, unha, cabelo, garra ou casco, produz um resultado cosmético desejado localmente no local de aplicação de um ingrediente ativo no material.
O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" visa incluir sais dos compostos da invenção que são preparados com ácidos ou bases relativamente atóxicos, dependendo dos substituintes específicos encontrados nos compostos aqui descritos. Quando os compostos da presente invenção contiverem funcionalidades relativamente ácidas, poderão ser obtidos sais de adição básica por contato da forma neutra desses compostos com uma quantidade suficiente da base desejada, tanto pura quanto em um solvente inerte adequado. Exemplos de sais de adição básica farmaceuticamente aceitáveis incluem sal de sódio, potássio, cálcio, amônio, amino orgânico ou magnésio, ou um sal similar. Quando os compostos da presente invenção contiverem funcionalidades relativamente básicas, poderão ser obtidos sais de adição ácida por contato da forma neutra desses compostos com uma quantidade suficiente do ácido desejado, tanto puro quanto em um solvente inerte adequado. Exemplos de sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles derivados de ácidos inorgânicos como, por exemplo, ácidos clorídrico, hidrobrômico, nítrico, carbônico, monohidrogencarbônico, fosfórico, monohidrogenfosfórico, diidrogenfosfórico, sulfúrico, monohidrogensulfúrico, iodídrico ou fosforoso, e semelhantes, além dos sais derivados de ácidos orgânicos relativamente atóxicos, como ácido acético, propiônico, isobutírico, maléico, malônico, benzóico, succínico, subérico, fumárico, lático, mandélico, ftálico, benzenossulfônico, p-tolilsulfônico, cítrico, tartárico, metanossulfônico, e semelhantes. Também estão incluídos sais de aminoácidos como, por exemplo, arginato, e semelhantes, e sais de ácidos orgânicos, como ácidos glicurônicos ou galactunôricos, e semelhantes (veja, por exemplo, Berge e cols., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science 66: 1-19 (1977)). Certos compostos específicos da presente invenção contêm funcionalidades tanto básicas quanto ácidas que permitem que os compostos sejam convertidos em sais de adição básica ou ácida.
As formas neutras dos compostos são preferivelmente regeneradas por contato do sal com uma base ou um ácido e isolamento dos compostos originais na forma convencional. A forma parente do composto difere das várias formas de sal em certas propriedades físicas, por exemplo, solubilidade em solventes polares.
Além das formas de sal, a presente invenção fornece compostos que estão na forma de um pró-fármaco. Pró- fármacos dos compostos ou complexos aqui descritos são facilmente submetidos a mudanças químicas sob condições fisiológicas para fornecer os compostos da presente invenção. Adicionalmente, os pró-fármacos podem ser convertidos nos compostos da presente invenção por métodos químicos ou bioquímicos em um ambiente ex vivo.
Certos compostos da presente invenção podem existir em formas não solvatadas, além das formas solvatadas, incluindo formas hidratadas. Em geral, as formas solvatadas são equivalentes às formas não solvatadas e estão englobadas dentro do escopo da presente invenção. Certos compostos da presente invenção podem existir em múltiplas formas cristalinas ou amorfas. Em geral, todas as formas físicas são equivalentes para os usos contemplados pela presente invenção e estão incluídas no escopo da presente invenção.
Certos compostos da presente invenção possuem átomos de carbono assimétricos (centros ópticos) ou ligações duplas; os racematos, diastereoisômeros, isômeros geométricos e isômeros individuais estão englobadas dentro do escopo da presente invenção. Os compostos da presente invenção também podem conter proporções não naturais de isótopos atômicos em um ou mais dos átomos que constituem esses compostos. Por exemplo, os compostos podem ser marcados radioativamente com isótopos radioativos como, por exemplo, trítio (3H) , iodo-125 (125I) ou carbono-14 (14C). Todas as variações isotópicas dos compostos da presente invenção, sejam elas radioativas ou não, visam ser englobadas dentro do escopo da presente invenção.
O termo "transportador farmaceuticamente aceitável" ou "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a qualquer formulação ou meio de transporte que forneça a liberação apropriada de uma quantidade eficaz de um agente ativo como aqui definido, não interfira com a eficácia da atividade biológica do agente ativo, e que seja suficientemente atóxico para o hospedeiro ou paciente. Veículos representativos incluem água, óleos, tanto vegetais quanto minerais, bases de creme, bases de loção, bases de pomada, e semelhantes. Essas bases incluem agentes de suspensão, espessantes, intensificadores da penetração, e semelhantes. Sua formulação é bem conhecida por aqueles habilitados na técnica de substâncias farmacêuticas cosméticas e tópicas. Informações adicionais em relação a veículos podem ser encontradas em "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 21a Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005), que é aqui incorporado por referência.
"Veículo tópico aceitável" e termos equivalentes referem-se a veículos farmaceuticamente aceitáveis, como descritos acima, adequados à aplicação tópica. Um veículo líquido ou em creme inativo capaz de suspender ou dissolver o(s) agente(s) ativo(s), e que possui a propriedade de ser atóxico e não inflamatório quando aplicado à pele, unha, cabelo, garra ou casco, é um exemplo de um veículo tópico farmaceuticamente aceitável. Esse termo também visa englobar especificamente materiais de transporte (veículos) aprovados para uso em cosméticos tópicos.
O termo "aditivo farmaceuticamente aceitável" refere- se aos conservantes, antioxidantes, fragrâncias, emulsificantes, corantes e excipientes conhecidos ou usados no campo de formulação de fármacos e que não interferem desnecessariamente com a eficácia da atividade biológica do agente ativo, e que são suficientemente atóxicos com o hospedeiro ou paciente. Aditivos para formulações tópicas são bem conhecidos na técnica e podem ser adicionados à composição tópica, desde que sejam farmaceuticamente aceitáveis e não deletérios às células epiteliais ou sua função. Além disso, eles não devem causar a deterioração da estabilidade da composição. Por exemplo, enchimentos inertes, antiirritantes, espessantes, excipientes, fragrâncias, opacificantes, antioxidantes, agentes de gelificação, estabilizantes, tensoativo, emolientes, agentes corantes, conservantes, agentes de tamponamento, outros intensificadores da permeação, e outros componentes convencionais de formulações de liberação tópica ou transdérmica, como são conhecidos na técnica.
Os termos "aumento", "aumento da penetração" ou "aumento da permeação" estão relacionados a um aumento na permeabilidade da pele, unha, cabelo, garra ou casco a um fármaco, a fim de aumentar a taxa na qual o fármaco penetra através da pele, unha, cabelo, garra ou casco. A permeação aumentada efetuada através do uso desses intensificadores pode ser observada, por exemplo, medindo-se a taxa de difusão do fármaco através da pele, unha, cabelo, garra ou casco animal ou humano com o uso de um aparelho de célula de difusão. Uma célula de difusão é descrita por Merritt e cols. "Diffusion Apparatus for Skin Penetration", J. of Controlled Release, 1 (1984) pp. 161-162. 0 termo "intensificador da permeação" ou "intensificador de penetração" significa um agente ou uma mistura de agentes, que, isoladamente ou em combinação, age para aumentar a permeabilidade da pele, unha, cabelo ou casco a um fármaco.
O termo "excipiente" é convencionalmente conhecido por representar transportadores, diluentes e/ou veículos usados na formulação de composições de fármacos eficazes para o uso desejado.
O termo "administração tópica" refere-se à aplicação de um agente farmacêutico à superfície externa da pele, unha, cabelo, garra ou casco, a fim de que o agente atravesse a superfície externa da pele, unha, cabelo, garra ou casco e penetre nos tecidos subjacentes. A administração tópica inclui a aplicação da composição à pele, unha, cabelo, garra ou casco intactos, ou a uma ferida por quebra, cruenta ou aberta da pele, unha, cabelo, garra ou casco. A administração tópica de um agente farmacêutico pode resultar em uma distribuição limitada do agente à pele e tecidos circundantes ou, quando o agente for removido da área de tratamento pela corrente sangüínea, pode resultar na distribuição sistêmica do agente.
O termo "liberação transdérmica" refere-se à difusão de um agente através da barreira da pele, unha, cabelo, garra ou casco que resulta da administração tópica ou de outra aplicação de uma composição. 0 estrato córneo atua como uma barreira, e poucos agentes farmacêuticos são capazes de penetrar na pele intacta. Em contraste, a epiderme e a derme são permeáveis a muitos solutos e, portanto, a absorção de fármacos ocorre mais facilmente através da pele, unha, cabelo, garra ou casco que é arranhada ou de algum outro modo tem o estrato córneo removido para expor a epiderme. A liberação transdérmica inclui injeção ou outra liberação através de qualquer porção da pele, unha, cabelo, garra ou casco ou membrana mucosa, e absorção ou permeação através da porção restante. A absorção através da pele, unha, cabelo, garra ou casco intactos pode ser aumentada colocando-se o agente ativo em um veículo farmaceuticamente aceitável apropriado, antes da aplicação à pele, unha, cabelo, garra ou casco. A administração tópica passiva pode consistir na aplicação do agente ativo diretamente ao local de tratamento em combinação com emolientes ou intensificadores da penetração. Como aqui usado, o termo "liberação transdérmica" visa incluir a liberação por permeação através ou pelo tegumento, ou seja, pele, unha, cabelo, garra ou casco.
0 termo "infecção microbiana" refere-se a qualquer infecção de um tecido do hospedeiro por um agente infeccioso, incluindo, sem limitação, vírus, bactérias, micobactérias, fungos e parasitas (veja, por exemplo, "Harrison's Principies of Internai Medicine", pp. 93-98 (Wilson e cols., eds., 12a ed. 1991); Williams e cols., J. of Medicinal Chem. 42: 1.481-1.485 (1999), cada um deles aqui incorporado por referência em sua totalidade).
O termo "meio biológico", como aqui usado, refere-se a meios biológicos in vitro e in vivo. "Meios biológicos" in vitro exemplares incluem, sem limitação, cultura de células, cultura de tecidos, homogeneizados, plasma e sangue. Aplicações in vivo são geralmente realizadas em mamíferos, preferivelmente seres humanos.
Os termos "inibição" e "bloqueio" são aqui usados de forma intercambiável para se referirem ao bloqueio parcial ou completo de um domínio de edição de uma tRNA sintetase.
0 termo "centro ventral/intermediário", como aqui usado, refere-se às amostras de unha em pó retiradas do centro da superfície interna (virada para o leito ungueal), com profundidade de aproximadamente 0,3 - 0,5 mm em relação à superfície. A área está abaixo do local que recebe a administração do local da unha, mas não inclui a superfície que recebe a administração (superfície dorsal da unha).
0 termo "centro ventral/intermediário", como aqui usado, refere-se à área imediata do local que recebe a administração.
0 termo "unha restante", como aqui usado, refere-se à parte restante da unha que não recebeu a administração.
0 termo "leito de suporte", como aqui usado, refere-se à bola de algodão colocada dentro da câmara de Teflon da célula de difusão para fornecer umidade à placa ungueal e também para receber substâncias químicas que penetram através da placa ungueal.
0 termo "lavagem de superfície", como aqui usado, refere-se à lavagem com etanol (ou outros solventes orgânicos) e com sabão/água sobre a superfície do local que recebe a administração.
O termo "lavagem da célula", como aqui usado, refere- se à lavagem com etanol (ou outros solventes orgânicos) e sabão/água do interior da célula de difusão.
Uma "unidade de unha humana", como aqui definida, pode ser a placa ungueal, o leito ungueal, dobra ungueal proximal, dobra ungueal lateral, e combinações destas.
O termo "grupo abandonador" significa um grupo funcional ou átomo que pode ser deslocado por outro grupo funcional ou átomo em uma reação de substituição como, por exemplo, uma reação de substituição nucleofíIica. Como exemplo, grupos abandonadores representativos incluem grupos triflato, cloro, bromo e iodo; grupos éster sulfônico como, por exemplo, mesilato, tosilato, brosilato, nosilato, e semelhantes; e grupos acilóxi como, por exemplo, acetóxi, trifluoracetoxi, e semelhantes.
O termo "grupo de proteção de amino" significa um grupo de proteção adequado à prevenção de reações indesejadas em um nitrogênio do amino. Grupos de proteção de amino representativos incluem, sem limitação, formil; grupos acil, por exemplo, grupos alcanoil como, por exemplo, acetil, tricloroacetil ou trifluoracetil; grupos alcoxicarbonil, por exemplo, terc-butoxicarbonil (Boc); grupos arilmetoxicarbonil como, por exemplo, benziloxicarbonil (Cbz) e 9-fluorenilmetoxicarbonil (Fmoc); grupos arilmetil como, por exemplo, benzil (Bn) , tritil (Tr) e 1,1-di-(4'-metoxifenil)metil; grupos silil como, por exemplo, trimetilsilil (TMS) e terc-butildimetilsilil (TBS); e semelhantes.
O termo "grupo de proteção de hidróxi" significa um grupo de proteção adequado para a prevenção de reações indesejadas em um grupo hidróxi. Grupos de proteção de hidróxi representativos incluem, sem limitação, grupos alquil, por exemplo, metil, etil e terc-butil; grupos acil, por exemplo, grupos alcanoil como, por exemplo, acetil; grupos arilmetil como, por exemplo, benzil (Bn), p- metoxibenzil (PMB), 9-fluorenilmetil (Fm) e difenilmetil (benzidril, DPM); grupos silil como, por exemplo, trimetilsilil (TMS) e terc-butildimetilsilil (TBS); e semelhantes.
0 boro é capaz de formar ligações dativas com oxigênio, enxofre ou nitrogênio sob algumas circunstâncias nesta invenção. Ligações dativas são normalmente mais fracas do que ligações covalentes. Em situações em que um boro é ligado de forma covalente a pelo menos um oxigênio, enxofre ou nitrogênio e está, ao mesmo tempo, ligado de forma dativa a um oxigênio, enxofre ou nitrogênio, respectivamente, a ligação dativa e a ligação covalente entre o boro e os dois heteroátomos idênticos podem ser interconvertidas ou estar na forma de um híbrido de ressonância. Há uma incerteza potencial em torno da natureza e da extensão exatas do compartilhamento de elétrons nessas situações. As estruturas fornecidas não têm a intenção de incluir qualquer e todos os cenários de ligação possíveis entre o boro e o átomo ao qual está ligado. Exemplos não limitantes dessas ligações são as seguintes:
<formula>formula see original document page 32</formula> O termo "contra-íon de sal", como aqui usado, refere- se aos íons carregados positivamente que se associam a um composto da invenção quando o boro é totalmente carregado negativamente ou parcialmente carregado negativamente. Exemplos de sal contra-ions incluem H+, H3O+, amônio, potássio, cálcio, magnésio e sódio.
Os compostos que compreendem um boro ligado a um carbono e a três heteroátomos (por exemplo, três oxigênios descritos nesta seção) podem conter opcionalmente boro totalmente carregado negativamente ou boro parcialmente carregado negativamente, em função da natureza da ligação dativa entre o boro e um dos oxigênios. Por causa da carga negativa, um contra-íon carregado positivamente pode se associar a esse composto, formando, dessa forma, um sal. Exemplos de contra-íons carregados positivamente incluem H+, H3O+, cálcio, sódio, amônio, potássio. Os sais desses compostos estão implicitamente contidos nas descrições desses compostos.
A presente invenção também engloba compostos que são espécies poli- ou multivalentes, incluindo, por exemplo, espécies tais como dímeros, trímeros, tetrâmeros e homólogos superiores dos compostos de uso na invenção ou análogos reativos destes. Por exemplo, dímeros de ClO podem se formar sob as seguintes condições:
<formula>formula see original document page 34</formula>
Em outro exemplo, dímeros de C17 podem se formar sob as seguintes condições:
<formula>formula see original document page 34</formula>
A presente invenção também engloba compostos que são anidridos dos ésteres borônicos cíclicos que são sintetizados submetendo-se esses compostos a condições de desidratação. Exemplos desses anidridos são fornecidos abaixo:
Também são produzidos trímeros dos compostos da invenção. Por exemplo, trímeros de ésteres borônicos aclclicos podem ser formados da seguinte forma:
<formula>formula see original document page 35</formula>
Também são produzidos polímeros dos compostos da invenção por meio da remoção de certos grupos de proteção em ácido forte. Por exemplo, trímeros de ésteres borônicos acíclicos podem ser formados da seguinte forma:
Também são usados na presente invenção compostos que são espécies poli- ou multivalentes, incluindo, por exemplo, espécies como, por exemplo, dímeros, trímeros, tetrâmeros e homólogos superiores dos compostos de uso na invenção ou análogos reativos destes. As espécies poli- e multivalentes podem ser montadas a partir de uma única espécie ou de mais de uma espécie da invenção. Por exemplo, a construção dimérica pode ser "homodimérica" ou "heterodimérica". Além disso, construções poli- e multivalentes em que um composto da invenção ou um análogo reativo deste é anexado a uma armação oligomérica ou polimérica (por exemplo, polilisina, dextrana, amido de hidroxietil, e semelhantes) estão incluídas no escopo da presente invenção. A armação é preferivelmente polifuncional (ou seja, possui um arranjo de sítios reativos para anexação dos compostos de uso na invenção). Além disso, a armação pode ser derivatizada com uma única espécie da invenção ou mais com mais de uma espécie da invenção.
Além disso, a presente invenção inclui o uso de compostos dentro do motivo representado nas fórmulas aqui contidas, que são funcionalizados para gerarem compostos que possuem uma hidrossolubilidade que está aumentada em relação a compostos análogos que não são similarmente funcionalizados. Dessa forma, qualquer um dos substituintes aqui apresentados pode ser trocado com radicais análogos que possuem hidrossolubilidade aumentada. Por exemplo, está incluída no escopo da invenção a substituição de um grupo hidroxil com um diol ou uma amina com uma amina quaternária, uma hidróxi amina ou porção similar mais hidrossolúvel. Em uma modalidade preferida, a hidrossolubilidade adicional é gerada pela substituição em um local não essencial para a atividade contra o domínio de edição dos compostos aqui apresentados com uma porção que aumente a hidrossolubilidade dos compostos originais. Métodos de aumento da hidrossolubilidade de compostos orgânicos são conhecidos na técnica. Tais métodos incluem, sem limitação, a funcionalização de um núcleo orgânico com uma porção permanentemente carregada, por exemplo, amônio quaternário, ou um grupo que é carregado em um pH fisiologicamente relevante, por exemplo, ácido carboxílico, amina. Outros métodos incluem, anexados aos grupos que contêm núcleo orgânico hidroxil ou amina, por exemplo, alcoõis, polióis, poliéteres, e semelhantes. Exemplos representativos incluem, sem limitação, polilisina, polietilenoimina, poli(etileno glicol) e poli(propileno glicol). Químicas e estratégias de funcionalização adequada para esses compostos são conhecidas na técnica. Veja, por exemplo, Dunn, R. L., e cols., Eds. "POLYMERIC DRUGS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS", "ACS Symposium Series" Vol. 469, "American Chemical Society", Washington, D.C. 1991.
II. Introdução
A presente invenção fornece novos compostos de boro e métodos para a preparação dessas moléculas. A invenção ainda fornece compostos de boro como análogos que compreendem uma porção funcional como, por exemplo, uma porção de fármaco e métodos de uso para os referidos análogos.
III. Os compostos
III. a) Esteres borônicos cíclicos
Em um primeiro aspecto, a invenção fornece um composto que possui uma estrutura de acordo com Fórmula I:
<formula>formula see original document page 38</formula>
em que B é boro. Rla é um membro selecionado de: uma carga negativa, um contra-íon de sal, H, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. M é um membro selecionado de: oxigênio, enxofre e NR2a. R2a é um membro selecionado de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. J é um membro selecionado de: (CR3aR4a)nl e CR5a. R3a, R4a e R5a são membros selecionados independentemente de H, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. O índice nl é um número inteiro selecionado de O a 2. W é um membro selecionado de C=O (carbonil) , (CR6aR7a)mi e CR8a. R6a, R7a e R8a são membros selecionados independentemente de H, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. 0 índice ml é um número inteiro selecionado de 0 e 1. A é um membro selecionado de CR9a e N. D é um membro selecionado de CR10a e Ν. E é um membro selecionado de CRlla e N. G é um membro selecionado de CR12a e N. R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de H, OR*, NR*R* *, SR*, - S(O)R*, -S(O)2R*, -S (O) 2NR*R**, -C(O)R*, -C(O)OR*, C(O)NR*R**, nitro, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Cada R* e R** são membros selecionados independentemente de H, nitro, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. A combinação de nitrogênios (A + D + E + G) é um número inteiro selecionado de 0 a 3 . Um membro selecionado de R3a, R4a e R5a e um membro selecionado de R6a, R7a e R8a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R3a e R4a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R6a e R7a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R9a e R10a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R10a e Rlla, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. Rlla e R12a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros.
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com Fórmula (Ia):
<formula>formula see original document page 40</formula> (Ia)
Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado independentemente de H, ciano, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, e amido substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado independentemente de ciano, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, amido substituído ou não substituído.
Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado de H, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, propil substituído ou não substituído, isopropil substituído ou não substituído, butil substituído ou não substituído, t- butil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, e benzil substituído ou não substituído.
Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado de metil, etil, propil, isopropil, butil, t- butil, fenil e benzil. Em outra modalidade exemplar, R3a é H e R4a é um membro selecionado de metil, etil, propil, isopropil, butil, t-butil, fenil e benzil. Em outra modalidade exemplar, R3a é H e R4a é H
Em outra modalidade exemplar, cada R9a, R10a, Rlla e R12a é um membro selecionado independentemente de H, OR*, NR*R**, SR*, -S(O)R*, -S(O)2R*, - S(0)2NR*R**, -C(O)R*, - C(O)OR*, -C(O)NR*R* *, halogênio, ciano, nitro, metóxi substituído ou não substituído, metil substituído ou não substituído, etóxi substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, feniloxi substituído ou não substituído, fenil metóxi substituído ou não substituído, tiofeniloxi substituído ou não substituído, piridiniloxi substituído ou não substituído, pirimidiniloxi substituído ou não substituído, benzilfurano substituído ou não substituído, metiltio substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, feniltio substituído ou não substituído, tiofeniltio substituído ou não substituído, fenil metiltio substituído ou não substituído, piridiniltio substituído ou não substituído, pirimidiniltio substituído OU não substituído, benziltiofuranil substituído OU não substituído, fenilsulfonil substituído OU não substituído, benzilsulfonil substituído OU não substituído, fenilmetilsulfonil substituído OU não substituído, tiofenilsulfonil substituído OU não substituído, piridinilsulfonil substituído OU não substituído, pirimidinilsulfonil substituído OU não substituído, sulfonamidil substituído ou não substituído, fenilsulfinil substituído ou não substituído, benzilsulfinil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfinil substituído ou não substituído, tiofenilsulfinil substituído ou não substituído, piridinilsulfinil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfinil substituído ou não substituído, amino substituído ou não substituído, alquilamino substituído ou não substituído, dialquilamino substituído ou não substituído, trifluormetilamino substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, benzilamino substituído ou não substituído, fenilamino substituído ou não substituído, tiofenilamino substituído ou não substituído, piridinilamino substituído ou não substituído, pirimidinilamino substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, morfolino substituído ou não substituído, alquilamido substituído ou não substituído, arilamido substituído ou não substituído, ureido substituído ou não substituído, carbamoil substituído ou não substituído, e piperizinil substituído ou não substituído. Em uma modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são selecionados da lista prévia de substituintes, com exceção de -C(O)R*, -C(O)OR* e C(O)NR*R* *.
Em outra modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1- etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3- (butilcarbonil)fenilmetoxi, IH-tetrazol-5-il, 1- etoxicarbonilmetiloxi-, 1-etoxicarbonilmetil-, 1- etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2- iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4-fluorfeniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-((piperidin-l-il)carbonil)metil, 1- (piperidin-l-il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-2 - il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3-il)carbonil)metóxi , 1- (4 -(pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metóxi , 1- (4 - (pirimidin-2-il)piperazin-1-il)carbonil)metil, 1-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil, 1-4-(pirimidin-2- il)piperazin-l-il, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-1- il)carbonil) , 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonilmetil, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il ) carbonil ) metóxi ) , 1 -(4-(piridin-2-il)piperazin-l-il, ΙΗ-indol-l-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, morfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-lH-indol-l-il, 3-(2-cianoetiltio)-lH-indol-1- il, benzilamino, 5-metóxi-3-(feniltio)-1H-indol-1-il, 5- metóxi-3-((2-cianoetiltio)-lH-indol-1-il), 5-cloro-lH- indol-l-il, 5-cloro-3-((2-cianoetiltio)-lH-indol-l-il) , dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-lH-indol- 1-il), 4 -{IH-tetrazol-5-il)fenóxi, 4-(1H-tetrazol-5- il)fenil, 4-(lH-tetrazol-5-il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3- cianofenoxi, 4-cianofenoxi, 2-cianofeniltio, 3- cianofeniltio, 4-cianofeniltio, 2-clorofenoxi, 3- clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2-fluorfenoxi, 3-fluorfenoxi, 4-fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3-cianobenziloxi, 4- cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3-clorobenziloxi, 4- clorobenziloxi, 2 -fluorbenziloxi, 3 -fluorbenziloxi, 4- fluorbenziloxi, fenil não substituído, benzil não substituído. Em uma modalidade exemplar, R9a é H e R12a é H.
Em uma modalidade exemplar, o composto de acordo com a Fórmula (I) ou Fórmula (Ia) é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 45</formula> <formula>formula see original document page 46</formula>
estrutura de acordo com uma das Fórmulas I-Io, com seleções de substituintes para R9a, R10a,
Rlla e R12a incluindo todas
as possibilidades contidas no parágrafo 106, exceto para H. Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com uma das Fórmulas Ib-Io com seleções de substituintes para R9a, R10a, Rlla e R12a, incluindo todas as possibilidades contidas no parágrafo 107, exceto para H.
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma fórmula de acordo com as Fórmulas (Ib)-(Ie), em que R é um membro selecionado de H, uma carga negativa e um contra- ion de sal, e o grupo R restante (R9a em Ib, R10a em Ic, R11a em Id, e R12a em Ie) é um membro selecionado de: flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1- etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3- (butilcarbonil)fenilmetoxi, lH-tetrazol-5-il, 1- etoxicarbonilmetiloxi-, 1-etoxicarbonilmetil-, 1- etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2- iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4-fluorfeniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-(piperidin-l-il)carbonil)metil, 1- (piperidin-l-il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-2 - il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3-il)carbonil)metóxi, 1- (4-(pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metóxi , 1-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metil, 1-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil, 1-4-(pirimidin-2- il)piperazin-1-il, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonil), 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonilmetil, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonil)metóxi) , 1-(4 -(piridin-2-il)piperazin-1-il, IH- indol-l-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, morfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-lH-indol-l-il, 3-(2-cianoetiltio)-lH-indol-1- il, benzilamino, 5-metóxi-3-(feniltio)-IH-indol-1-il, 5- metóxi-3-((2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il), 5-cloro-lH- indol-l-il, 5-cloro-3-((2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il), dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-lH-indol- 1-il) , 4-(IH-tetrazol-5-il)fenóxi, 4-(lH-tetrazol-5- il)fenil, 4-(lH-tetrazol-5-il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3- cianofenoxi, 4-cianofenoxi, 2-cianofeniltio, 3- cianofeniltio, 4-cianofeniltio, 2-clorofenoxi, 3- clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2-fluorfenoxi, 3-fluorfenoxi, 4-fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3-cianobenziloxi, 4- cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3-clorobenziloxi, 4- clorobenziloxi, 2 -fluorbenziloxi, 3 -fluorbenziloxi e 4- fluorbenziloxi. Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma fórmula de acordo com as Fórmulas (If) - (Ik) , em que Rla é um membro selecionado de H, uma carga negativa e um contra- íon de sal, e cada um dos dois grupos R restantes (R9a e R10a em If, R9a e Rlla em Ig, R9a e R12a em Ih, R10a e Rlla em li, R10a e R12a em Ij, Rlla e R12a em Ik) é um membro selecionado independentemente de flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2- il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil,1-tetrazolil,1-etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3 -(butilcarbonil)fenilmetoxi, IH- tetrazol-5-il,1-etoxicarbonilmetiloxi-,1- etoxicarbonilmetil-, 1-etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2-iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4-fluorfeniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-((piperidin- 1-il)carbonil)metil, 1-(piperidin-1-il)carbonil)metóxi, 1- (piperidin-2-il)carbonil)metóxi,1-(piperidin-3- il)carbonil)metóxi,1-(4-(pirimidin-2-il)piperazin-1- il)carbonil)metóxi,1-(4-(pirimidin-2-il)piperazin-1- il)carbonil)metil,1-(4-(pirimidin-2-il)piperazin-1- il)carbonil, 1-4 -(pirimidin-2-il)piperazin-1-il, l-(4- (piridin-2-il)piperazin-l-il)carbonil), 1-(4-(piridin-2- il)piperazin-l-il)carbonilmetil, (1-(4-(piridin-2- il)piperazin-1-il)carbonil)metóxi),1-(4-(piridin-2- il)piperazin-l-il, 1Η-indol-1-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil,morfolinilcarbonil,fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-1H-indol-1-il, 3- (2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il, benzilamino, 5-metóxi-3- (feniltio)-ΙΗ-indol-l-il, 5-metóxi-3-((2-cianoetiltio)-IH- indol-l-il), 5-cloro-IH-indol-1-il, 5-cloro-3-((2- cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il), dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-ΙΗ-indol-l-il), 4-(lH-tetrazol-5- il)fenóxi, 4-(lH-tetrazol-5-il)fenil, 4-(lH-tetrazol-5- il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3-cianofenoxi, 4-cianofenoxi, 2-cianofeniltio, 3-cianofeniltio, 4-cianofeniltio, 2- clorofenoxi, 3-clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2 -fluorfenoxi, 3-fluorfenoxi, 4 - flúorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3- cianobenziloxi, 4-cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3- clorobenziloxi, 4-clorobenziloxi, 2-fluorbenziloxi, 3- fluorbenziloxi e 4-fluorbenziloxi.
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma fórmula de acordo com as Fórmulas (Il)-(Io), em que Rla é um membro selecionado de H, uma carga negativa e um contra- ion de sal, e cada um dos três grupos R restantes (R9a, R10a, Rlla em (II), R9a, R10a, R12a em (Im), R9a, Rlla, R12a em (In), R10a, Rlla, R12a em (Io)) é um membro selecionado independentemente de flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1-etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3 -(butilcarbonil)fenilmetoxi, IH- tetrazol-5-il, 1-etoxicarbonilmetiloxi-, 1- etoxicarbonilmetil-, 1-etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2-iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4-fluorfeniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-((piperidin- 1-il)carbonil)metil, 1-(piperidin-1-il)carbonil)metóxi, 1- (piperidin-2-il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3- il)carbonil)metóxi, 1- (4-(pirimidin-2-il)piperazin-1- il)carbonil)metóxi, 1-(4-(pirimidin-2-il)piperazin-1- il)carbonil)metil, 1-(4-(pirimidin-2-il)piperazin-1- il)carbonil, 1-4 -(pirimidin-2-il)piperazin-l-il, l-(4- (piridin-2-il)piperazin-l-il)carbonil), 1-(4-(piridin-2- il)piperazin-l-il)carbonilmetil, (1-(4-(piridin-2- il)piperazin-l-il)carbonil)-metóxi, 1-(4-(piridin-2- il)piperazin-1-il, lH-indol-l-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, raorfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-lH-indol-l-il, 3- (2-cianoetiltio)-IH-indol-1-il, benzilamino, 5-metóxi-3- (feniltio)-1H-indol-1-il, 5-metóxi-3-((2-cianoetiltio)-IH- indol-l-il), 5-cloro-IH-indol-1-il, 5-cloro-3 -((2- cianoetiltio)-1H-indol-l-il), dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-lH-indol-l-il), 4-(1H-tetrazol-5- il)fenóxi, 4-(1H-tetrazol-5-il)fenil, 4-(lH-tetrazol-5- il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3-cianofenoxi, 4-cianofenoxi , 2-cianofeniltio, 3-cianofeniltio, 4-cianofeniltio, 2- clorofenoxi, 3-clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2-fluorfenoxi, 3 -fluorfenoxi, 4 -fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3- cianobenziloxi, 4-cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3- clorobenziloxi, 4-clorobenziloxi, 2-fluorbenziloxi, 3- fluorbenziloxi e 4-fluorbenziloxi.
Em uma modalidade exemplar, há a condição de que o composto não pode ser um membro selecionado da Figura 11.
Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ser um membro selecionado de C1-C40. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com Fórmula (Ix) :
<formula>formula see original document page 51</formula>
em que R7b é um membro selecionado de H, metil, etil e fenil. Rlob é um membro selecionado de Η, OH, NH2, SH, halogênio, fenóxi substituído ou não substituído, fenilalquiloxi substituído ou não substituído, feniltio substituído ou não substituído, e fenilalquiltio substituído ou não substituído. Rllb é um membro selecionado de Η, OH, NH2, SH, metil, fenóxi substituído ou não substituído, fenilalquiloxi substituído ou não substituído, feniltio substituído ou não substituído, e fenilalquiltio substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com Fórmula (Ix) , em que Rlb é um membro selecionado de: uma carga negativa, H e um contra- íon de sal. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com Fórmula (Ix) , em que Rlob e Rllb são H. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com Fórmula (Ix) , em que um membro selecionado de Rlob e Rllb é H e o outro membro selecionado de R10b e Rllb é um membro selecionado de: halo, metil, ciano, metóxi, hidroximetil e p-cianofeniloxi. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com Fórmula (Ix), em que Rlob e Rllb são membros selecionados independentemente de flúor, cloro, metil, ciano, metóxi, hidroximetil e p- cianofenil. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com Fórmula (Ix), em que Rlb é um membro selecionado de uma carga negativa, H e um contra-íon de sal; R7b é H; Rlob é F e Rllb é H. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com Fórmula (Ix), em que Rllb e R12b, juntos com os átomos ao qual estão anexados, são unidos para formar um grupo fenil. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com Fórmula (Ix), em que Rlb é um membro selecionado de: uma carga negativa, H e um contra-íon de sal; R7b é H; Rlob é 4- cianof enoxi; e Rllb é H.
Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com Fórmula (Iy)
<formula>formula see original document page 52</formula>
em que Rlob é um membro selecionado de H, halogênio, CN e C1-4 alquil substituído ou não substituído.
Em outra modalidade exemplar, há a condição de que uma estrutura não tenha um membro selecionado das Fórmulas (I) a (Io) e pelo menos um membro selecionado de R3a, R4a, R5a, R6a, R7a, R8a, R9a, R10a Rlla e R2a é nitro, ciano ou halogênio. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que, quando M for oxigênio, W seja um membro selecionado de: (CR3aR4a)ni, em que nl é 0, J seja um membro selecionado de: (CR6aR7a)mii em que ml é 1, A é CR9a, D seja CR10a, E seja CR11a, G seja CR12a, o R9a não seja halogênio, metil, etil, ou opcionalmente unido a R10a para formar um anel fenil; R10a não seja fenóxi não substituído, C(CH3)3, halogênio, CF3, metóxi, etóxi, ou opcionalmente unido a R9a para formar um anel fenil; Rlla não seja halogênio ou opcionalmente unido a R10a para formar um anel fenil; e R12a não seja halogênio. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que, quando M for oxigênio, W seja um membro selecionado de: (CR3aR4a)ni, em que nl é 0, J seja um membro selecionado de: (CR6aR7a)mii em que ml é 1, A seja CR9a, D é CR10a, E seja CRlla, G seja CR12a, então nem R6a nem R7a sejam halofenil. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que, quando M for oxigênio, W seja um membro selecionado de: (CR3aR4a) „i, em que nl é 0, J seja um membro selecionado de: (CR6aR7a)mi, em que ml é 1, A seja CR9a, D é CR10a, E seja CRlla, G seja CR12a e R9a, R10a e Rlla sejam H, então R6a, R7a e R12a não sejam H. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que, quando M for oxigênio em que nl é 1, J seja um membro selecionado de: (CR6aR7a)mi, em que ml é 0, A é CR9a, D seja CR10a, E seja CRlla, G seja CR12a, R9a seja H, R10a seja H, Rlla seja H, R6a seja H, R7a seja H, R12a seja H, então W não seja C=O (carbonil). Em outra modalidade exemplar, há a condição de que, quando M for oxigênio, W seja CR5a, J seja CR8a, A seja CR9a, D seja CR10a, E seja CRlla, G seja CR12a R6a, R7a, R9a, R10a, Rlla e R12a sejam H, então R5a e R8a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, não formam um anel fenil. Em uma modalidade exemplar, o composto da invenção possui uma estrutura que é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 54</formula>
em que q é um número entre 0 e 1. R9 é halogênio. Ra, Rb, Rc, Rd e Re são membros selecionados independentemente de um membro selecionado de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Em uma modalidade exemplar, há a condição de que o composto não seja um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 54</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 54</formula> <formula>formula see original document page 55</formula>
Em uma modalidade exemplar, Ra, Rd e Re são, cada um, membros selecionados independentemente de:
<formula>formula see original document page 55</formula>
Em uma modalidade exemplar, R e Rc são membros selecionados independentemente de H, metil,
<formula>formula see original document page 55</formula> Em outra modalidade exemplar, Rb é H e Rc é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 56</formula>
Em outra modalidade exemplar, Rb e Rc são, juntos com o nitrogênio ao qual estão anexados, opcionalmente unidos para formar um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 56</formula>
Em uma modalidade exemplar, Ra é um membro selecionado
<formula>formula see original document page 56</formula> Em uma modalidade exemplar, Rd é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 57</formula>
Em uma modalidade exemplar, Rc é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 57</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 57</formula> <formula>formula see original document page 58</formula> <formula>formula see original document page 59</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é descrita na Figura 19. Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é descrita na Figura 20.
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com um membro selecionado das Fórmulas I(b), I (c), I (d) e I(e), em que o referido grupo R restante (R9a para I (b) , R10a para I(c), Rlla para I (d) e R12a para I(e)) é carboximetoxi.
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um membro selecionado das Fórmulas (If) — (Ik) , em que R9a ou R10a para a Fórmula (If) , R9a ou Rlla para a Fórmula (Ig) , R9a ou R12a para a Fórmula (Ih) , R10a ou Rlla para a Fórmula (li), R10a ou Rlla para a Fórmula (Ij) , Rlla ou R12a para a Fórmula (Ik) é halogênio, e o outro substituinte no pareamento (por exemplo, se R9a for F na Fórmula (If) , então R10a será selecionado da seguinte listagem de substituintes), é um membro selecionado de NH2, N(CH3)H, e N(CH3)2-
Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 60</formula>
em que R* e R** são membros selecionados de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Em uma modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 60</formula> em que Rla é um membro selecionado de: uma carga negativa, H e um contra-íon de sal.
Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 61</formula>
em que q é 1 e R9 é um membro selecionado de: flúor, cloro e bromo.
Em outra modalidade exemplar, os compostos e modalidades descritos acima nas Fórmulas (I)-(Io) podem formar um hidrato com água, um solvato com um álcool (por exemplo, metanol, etanol, propanol); um aduto com um composto amino (por exemplo, amônia, metilamina, etilamina) ; um aduto com um ácido (por exemplo, ácido fórmico, ácido acético); complexos com etanolamina, quinolina, aminoácidos, e semelhantes.
Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com Fórmula (Ip):
<formula>formula see original document page 61</formula>
em que Rx2 é um membro selecionado de C1-C5 alquil substituído ou não substituído e C1-C5 heteroalquil substituído ou não substituído. Ry2 e Rz2 são membros selecionados independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído.
Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com Fórmula (Iq):
<formula>formula see original document page 62</formula>
em que B é boro. Rx2 é um membro selecionado de Cx-C5 alquil substituído ou não substituído, e Ci-C5 heteroalquil substituído ou não substituído. Ry2 e Rz2 são membros selecionados independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, pelo menos um membro selecionado de R3a, R4a, R5a, R6a, R7a, R8a, R9a, R10a, Rlla e R12a é um membro selecionado de: nitro, ciano e halogênio.
Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um membro selecionado das seguintes Fórmulas:
<formula>formula see original document page 62</formula> <formula>formula see original document page 63</formula>
Em outra modalidade exemplar, ο composto possui uma fórmula de acordo com as Fórmulas (Ib) - (Ie), em que pelo menos um membro selecionado de R3a, R*a, Rsa, Rba, R/a, R8a, R9a, R10a, Rlla e R12a é um membro selecionado de: nitro, ciano, flúor, cloro, bromo e cianofenoxi. Em outra modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 63</formula> <formula>formula see original document page 64</formula>
Em outra modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 64</formula>
Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com Fórmula (Iaa):
<formula>formula see original document page 64</formula>
em que R6b, R9b, R10b, R11b e R12b possuem as mesmas listagens de substituintes descritas para as Fórmulas (Ix) e (Iy) acima.
Em outra modalidade exemplar, a invenção fornece espécies poli- ou multivalentes dos compostos da invenção. Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um dímero dos compostos aqui descritos. Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um dímero dos compostos aqui descritos. Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um dímero de um composto que é um membro selecionado de C1-C96. Em uma modalidade exemplar, o dímero é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 65</formula>
Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um anidrido dos compostos aqui descritos. Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um anidrido dos compostos aqui descritos. Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um anidrido de um composto que é um membro selecionado de C1-C96. Em uma modalidade exemplar, o anidrido é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 65</formula>
Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um trímero dos compostos aqui descritos. Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um trímero dos compostos aqui descritos. Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um trímero de um composto que é um membro selecionado de C1-C96. Em uma modalidade exemplar, o trímero é um membro selecionado de: <formula>formula see original document page 66</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um membro selecionado das Fórmulas (IIa), (IIb), (IIc) e (IId).
<formula>formula see original document page 66</formula>
Oxaborinas
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com Fórmula (III): <formula>formula see original document page 67</formula>
I.b.) Esteres borínicos cíclicos
Em um aspecto, a invenção fornece compostos úteis nos métodos que possuem uma estrutura de acordo com Fórmula VII:
<formula>formula see original document page 67</formula>
em que as variáveis Rla, A, D, E, G, J, W e M são aqui descritas em outra seção.
Em uma modalidade exemplar de Fórmula (VII), R1 é alquil substituído ou não substituído (C1-C4). Em uma modalidade exemplar de Fórmula (VII), R1 é alquiloxi substituído ou não substituído. Em uma modalidade exemplar de Fórmula (VII), R1 é cicloalquil substituído ou não substituído (C3-C7). Em uma modalidade exemplar de Fórmula (VII), R1 é alquenil substituído ou não substituído. Em uma modalidade adicional exemplar desta, o alquenil substituído possui a estrutura
<formula>formula see original document page 67</formula> em que R23, R24 e R25 são, cada um, membros selecionados independentemente de H, haloalquil, aralquil, aralquil substituído, (CH2)rOH (em que r = 1 a 3), CH2NR26R27 (em que R26 e R27 são selecionados independentemente de hidrogênio e alquil), CO2H, CO2 alquil, CONH2, S-alquil, S-aril, SO2 alquil, SO3H, SCF3, CN, halogênio, CF3, NO2, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído.
Em outra modalidade exemplar de Fórmula (VII), R1 é um alquinil substituído ou não substituído. Em uma modalidade adicional exemplar desta, o alquinil substituído possui a estrutura
<formula>formula see original document page 68</formula>
em que R23 é definido como anteriormente.
Em uma modalidade exemplar de Fórmula (VII), R1 é aril substituído ou não substituído. Em uma modalidade adicional exemplar desta, o aril substituído possui a estrutura
<formula>formula see original document page 68</formula> (VIIc)
em que R28, R29, R30i R31 e R32 são, cada um, membros selecionados independentemente de H, aralquil, aralquil substituído, (CH2)SOH (em que s = 1 a 3), CO2H, CO2 alquil, CONH2, CONH alquil, CON(alquil)2, 0H, alcóxi, arilóxi, SH, S-alquil, S-aril, SO2 alquil, SO3H, SCF3, CN, halogênio, CF3, NO2, (CH2)NR26R27 (em que R26 e R27 são selecionados independentemente de hidrogênio, alquil e alcanoil)(t = 0 a 2), SO2NH2, OCH2CH2NH2, OCH2CH2NH alquil, OCH2CH2N (alquil) 2, oxazolidin-2-il, oxazolidin-2-il alquil substituído, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído.
Em uma modalidade exemplar de Fórmula (VII) , R1 é um aralquil substituído ou não substituído. Em uma modalidade adicional exemplar desta, o aralquil substituído possui a estrutura
<formula>formula see original document page 69</formula>
em que R28, R29, R30, R31 e R32 são definidos como anteriormente, e nl é um número inteiro selecionado de 1 a 15.
Em uma modalidade exemplar de Fórmula (VII) , R1 é um heteroaril substituído ou não substituído. Em uma modalidade adicional exemplar desta, heteroaril possui a estrutura
<formula>formula see original document page 70</formula>
(em que R35 = H, alquil, aril ou benzil), 0 ou S. Y = CH ou N. R33 e R34 são, cada um, membros selecionados independentemente de H, haloalquil, aralquil, aralquil substituído, (CH2)uOH (em que u = 1, 2 ou 3) , (CH2)vNR26R27 (em que R26 e R27 são selecionados independentemente de hidrogênio, alquil e alcanoil)(v = 0 a 3), CO2H, CO2 alquil, CONH2, S-alquil, S-aril, SO2 alquil, SO3 H, SCF3, CN, halogênio, CF3, NO2, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído.
As estruturas da invenção também permitem interações de solventes que podem gerar estruturas (Fórmula VIIg) que incluem átomos derivados do solvente encontrados pelos compostos da invenção durante manipulações sintéticas e usos terapêuticos. A estrutura VIIg surge da formação de uma ligação dativa entre o(s) solvente(s) com o centro de boro do ácido de Lewis. Dessa forma, esses complexos de solventes poderiam ser entidades estáveis com bioatividades comparativas. Essas estruturas são expressamente contempladas pela presente invenção, em que R*** é H ou <formula>formula see original document page 71</formula>
Fórmula (VIIg)
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um membro selecionado de: 2-(3-clorofenil)- [1, 3,2]-dioxaborolano, ácido (3-clorofenil) (4'-flúor-(21 - (metoximetoxi)-metil)-fenil)-borínico, 1 - (3-clorofenil)-5- flúor-1,3-diidrobenzo[c][1,2]oxaborol, 1-(3-clorofenil)-6- flúor-1,3-diidrobenzo [c] [1,2]oxaborol, 1-(3-clorofenil)- 1,3-diidrobenzo [c] [1,2]oxaborol, 5-cloro-1-(3-fluorfenil)- 1,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol, 2-(3-fluorfenil)-[1,3,2]- dioxaborolano, 3-(Benzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)- il)benzonitrila, 2-(3-cianofenil)-[1,3,2]-dioxaborolano, ácido (3 -clorofenil) (51 - flúor-(2'-(metoximetoxi)metil)- fenil)-borinico, 1-(3-clorofenil)-1,3-diidro-3,3- dimetilbenzo[c] [1,2]oxaborol, ácido (3-clorofenil) (2-(2- (metoximetoxi)propan-2-il)fenilborinico, 1-(3-clorofenil)- 1,3-diidro-3,3-dimetilbenzo[c][1,2]oxaborol, l-(4- clorofenil)-1,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol, 2-(4- clorofenil)-[1,3,2]-dioxaborolano, 4(Benzo[c] [1,2]oxaborol- 1(3H)-il)benzonitrila, 2-(4-cianofenil)-[1,3 , 2]- dioxaborolano, 4-(5-fluorbenzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)- il)benzonitrila, 2 -(4-cianofenil)-[1,3,2]-dioxaborolano, 3- (5-fluorbenzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)il)benzonitrila, 2-(3- cianofenil)-[1,3,2]-dioxaborolano, 3-(6- fluorbenzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)benzonitrila, 2-(3- cianofenil)-[1,3,2]dioxaborolano, 1-(3-cianofenil)-5,6- dimetoxi-1,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol, 2-(3-clorofenil)- [1, 3 , 2]-dioxaborolano, (4 -(5(fluorbenzo[c] [1,2]oxaborol- 1(3H) -il)fenilmetanamina, 5-Fluoro-2- (metoximetoximetil)fenil]-[1,3,2]-dioxaborolano, 4- (5-(fluorbenzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)fenilmetanamina, (3-(5(fluorbenzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)-fenilmetanamina, (4-(5(fluorbenzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)fenil)metanol, (3-(5(fluorbenzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)fenil)metanol, 3- (6-fluorbenzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)fenol, 3-(5- fluorbenzo [c] [1,2]oxaboroll(3H)-il)piridina, (2- (Benzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)fenil)metanol, ácido 2- [(metoximetoxi)metil]fenil borônico, 2- [(metoximetoximetil)fenil[1,3,2]-dioxaborolano, ácido Bis[2-(metoximetoximetil)fenil]borínico, (2- (Benzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)fenil)metanol, (2- (Benzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)il)fenil)-N,N- dimetilmetanamina, (2-(Benzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)- 5 - clorofenil)-N,N-dimetilmetanamina, (2-(Benzo [c][1,2]oxaborol-1(3H)-il)-5clorofenil)metanol, (2- (Benzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)-5clorofenil)metanol, (5- cloro-2-(5-clorobenzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)- il)fenil)metanol, ácido Bis [4-cloro-2- (metoximetoximetil)fenil]borínico, (5-cloro-2-(5- clorobenzo[c][1,2]oxaborol-1(3H)-il)fenil)metanol, (5- cloro-2-(Bclorobenzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)fenil-N,N- dimetilmetanamina, 1-(4cloro-2-metoxifenil)-1,3- diidrobenzo[c][1,2]benzoxaborol, éster etileno glicólico de ácido 4-cloro-2-metoxifenilborônico, 1-(4-cloro-2- metoxifenil)-1,3-diidrobenzo [c] [1,2]benzoxaborol, 2- (Benzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)-5-clorofenol, 2-(3- (Benzo [e] [1.2]oxaborol-1(3H)-il)fenóxi)-5-clorofenol, 2-(3- (Benzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-il)fenóxi)-5-clorofenol, 4- ((3-(5-fluorbenzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H) - il)fenil)metil)morfolino, 3-(5-fluorbenzo[c] [1,2]oxaborol- 1(3H) -il]fenil)-metil-8-hidróxi-quinolina-2-carboxilato, 1- (3-clorofenil)-2,3-diidro-2-(metoximetil)-IH- benzotc][1,2]azaborol, ácido 3-clorofenil 2-[N,N- bis(metoximetil)aminometil]-fenilborínico, 1-(3- clorofenil)-2,3-diidro-2-(metoximetil)-IH- benzo[c] [1,2]azaborol, 1-(3-clorofenil)-1,3,4,5-tetra- hidrobenzo- [c] [1,2]oxaborepina, 1-(3-clorofenil)-1,3,4,5 - tetrahidrobenzo [c] [1,2]oxaborepina, 1-(3-clorofenil)-3,4- diidro-lH-benzo[c] [1,2]-oxaborinina, 2-(3-clorofenil)- [1,3,2]dioxaborolano, ácido (3-clorofenil) (2 1 - (2- (metoximetoxi)etil)fenil)-borínico e 1-(3-clorofenil)-3,4- diidro-lH-benzo[c][1,2]oxaborinina.
I.c.) 2'-Amino ribofuranoses
Em outro aspecto, a invenção fornece compostos úteis nos métodos que são 21-amino ribofuranoses. Em uma modalidade exemplar, a posição 1' da ribofuranose é substituída com um membro selecionado de aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, a posição I1 da ribofuranose é substituída com um membro selecionado de purina substituída ou não substituída, pirimidina substituída ou não substituída, piridina substituída ou não substituída, e imidazol substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, a posição 1' da ribofuranose é substituída com um membro selecionado de ácido nicotínico substituído ou não substituído, nicotinamida substituída ou não substituída, base de ácido nucléico substituída ou não substituída, adenina substituída ou não substituída,
<formula>formula see original document page 74</formula>
, citosina substituída ou não substituída, guanina substituída ou não substituída, timina substituída ou não substituída, uracil substituído ou não substituído, Ν,Ν-dimetil guanina substituída ou não substituída, diidro- uracil substituído ou não substituído, 4-tiouridina substituída ou não substituída, e inosina substituída ou não substituída. Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com Fórmula (VIII):
<formula>formula see original document page 74</formula>
em que L é um membro selecionado de purina substituída ou não substituída, pirimidina substituída ou não substituída, piridina substituída ou não substituída, e imidazol substituído ou não substituído. M, como aqui definido anteriormente, é um membro selecionado de O, Se NR2. R40 e R41 são, cada um, membros selecionados independentemente de H, aralquil, aralquil substituído, (CH2)SOH (em que s = 1 a 3), CO2H, CO2 alquil, C(O)NH2, C(O)NH alquil, CON (alquil) 2, C(O)R23, OH, alcóxi, arilóxi, SH, S-alquil, S-aril, SO2 alquil, SO3H, SCF3, CN, halogênio, CF3, NO2, (CH2)tNR26R27 (em que R26 e R27 são selecionados independentemente de hidrogênio, alquil e alcanoil)(t = 0 a 2), SO2NH2, OCH2CH2NH2, OCH2CH2NHalquil, OCH2CH2N (alquil) 2, oxazolidin-2-il, oxazolidin-2-il alquil substituído, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído, heteroaril substituído ou não substituído,
R43, R44 e R45 são, cada um, membros selecionados independentemente de alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil
substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído.
R43 e R44, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R43 e R45, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R44 e R45, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. A, D, EeG são todos aqui definidos em outra seção. Z é um membro selecionado de CR4s e N. As combinações de nitrogênios (A + D + E + G + Z) são um número inteiro selecionado de 0 a 4. Pelo menos dois membros selecionados de R9, R10, R11, R12 e R46, juntos com os substituído ou não substituído, heterocicloalquil átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros.
<formula>formula see original document page 76</formula>
Em uma modalidade exemplar, FT1 é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 76</formula>
Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma fórmula de acordo com as seguintes fórmulas:
<formula>formula see original document page 76</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de: <formula>formula see original document page 77</formula> <formula>formula see original document page 78</formula>
I.d.) 3'-Amino ribofuranoses
Em outro aspecto, a invenção fornece compostos úteis nos métodos que são 31-amino ribofuranoses. Em uma modalidade exemplar, a posição 1' da ribofuranose é substituída com um membro selecionado de aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, a posição I1 da ribofuranose é substituída com um membro selecionado de purina substituída ou não substituída, pirimidina substituída ou não substituída, piridina substituída ou não substituída, e imidazol substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, a posição I1 da ribofuranose é substituída com um membro selecionado de: ácido nicotínico substituído ou não substituído, nicotinamida substituída ou não substituída, base de ácido nucléico substituída ou não substituída, adenina substituída ou não substituída
<formula>formula see original document page 79</formula>
citosina substituída ou não substituída guanina substituída ou não substituída, tiraina substituída ou não substituída, uracil substituído ou não substituído, Ν,Ν-dimetil guanina substituída ou não substituída, diidro- uracil substituído ou não substituído, 4-tiouridina substituída ou não substituída, e inosina substituída ou não substituída. Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com Fórmula (VIIIc):
<formula>formula see original document page 79</formula>
em que L é um membro selecionado de purina substituída ou não substituída, pirimidina substituída ou não substituída, piridina substituída ou não substituída, e imidazol substituído ou não substituído. M, como aqui definido anteriormente, é um membro selecionado de: O, S, e NR2. R40 e R41 são, cada um, membros selecionados independentemente de H, aralquil, aralquil substituído, (CH2)sOH (em que s = 1 a 3), CO2H, CO2 alquil, C(O)NH2, C(O)NH alquil, CON (alquil) 2, C(O)R23, OH, alcóxi, arilóxi, SH, S-alquil, S-aril, SO2 alquil, SO3H, SCF3, CN, halogênio, CF3, NO2, (CH2)tNR26R27 (em que R26 e R27 são selecionados independentemente de hidrogênio, alquil e alcanoil)(t = 0 a 2), SO2NH2, OCH2CH2NH2, OCH2CH2NH alquil, OCH2CH2N (alquil) 2, oxazolidin-2-il, oxazolidin-2-il alquil substituído, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído, heteroaril substituído ou não substituído,
<formula>formula see original document page 80</formula>
R43, R44 e R45 são, cada um, membros selecionados independentemente de alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. R43 e R44, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R43 e R45, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R44 e R45, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. A, D, EeG são todos aqui definidos em outra seção. Z é um membro selecionado de CR46 e N. As combinações de nitrogênios (A + D + E + G + Z) são um número inteiro selecionado de 0 a 4. Pelo menos dois membros selecionados de R9, R10, R11, R12 e R46, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros.
Em uma modalidade exemplar, <formula>formula see original document page 81</formula> selecionado de:
<formula>formula see original document page 81</formula>
Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma fórmula de acordo com as seguintes fórmulas:
<formula>formula see original document page 81</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de: <formula>formula see original document page 82</formula> <formula>formula see original document page 83</formula>
I.e.) Ácidos e ésteres borônicos acíclicos, parte I
Ácidos e ésteres borônicos acíclicos, tais como aqueles descritos nesta seção, também podem ser utilizados na invenção. Esses compostos podem ser usados para matar ou inibir o crescimento dos microorganismos aqui descritos, bem como para tratar as doenças aqui descritas. Além disso, esses compostos podem ser usados como intermediários sintéticos na geração dos compostos aqui descritos.
Em outro aspecto, o composto possui uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 84</formula>
em que R1 e R2 são membros selecionados independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. R1 e R2, juntos com os átomos aos quais estão anexados, podem opcionalmente ser unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. Zl é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 84</formula>
em que cada R3a e R4a é um membro selecionado independentemente de H, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. R5 é um membro selecionado de halogênio e OR6. R6 é um membro selecionado de H, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. A é um membro selecionado de CR9a e N. D é um membro selecionado de CR10a e Ν. E é um membro selecionado de CRlla e N. G é um membro selecionado de CR12a e N. R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de H, OR*, NR*R* *, SR*, S(O)R*, -S(O)2R*, -S (O) 2NR*R**, -C(O)R*, -C(O)OR*, C(O)NR*R**, nitro, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Cada R* e R** é um membro selecionado independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. R9a e R10a, juntos com os átomos ao qual estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel. R10a e Rlla, juntos com os átomos ao qual estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel. Rlla e R12a, juntos com os átomos ao qual estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel. A combinação de nitrogênios (A + D + E + G) é um número inteiro selecionado de 0 a 3.
Em uma modalidade exemplar, há a condição de que o composto não seja um membro selecionado de: <formula>formula see original document page 86</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com Fórmula IXa
<formula>formula see original document page 86</formula>
Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado independentemente de H, ciano, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, e amido substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado independentemente de ciano, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, amido substituído ou não substituído.
Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado de H, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, propil substituído ou não substituído, isopropil substituído ou não substituído, butil substituído ou não substituído, t- butil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, e benzil substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, R3a e R4a são um membro selecionado de metil, etil, propil, isopropil, butil, t- butil, fenil e benzil. Em outra modalidade exemplar, R3a é He R4a é um membro selecionado de metil, etil, propil, isopropil, butil, t-butil, fenil e benzil. Em outra modalidade exemplar, R3a é H e R4a é H.
Em outra modalidade exemplar, Zl é CHO. Em outra modalidade exemplar, Zl é <formula>formula see original document page 88</formula>
em que R5 é um membro selecionado de OH, metóxi substituído ou não substituído, etóxi substituído ou não substituído, metoximetoxi substituído ou não substituído, etoxietoxi substituído ou não substituído, trialquilsialil substituído ou não substituído e tetrahidro-2H-piran-2- ilóxi substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, R5 é trialquilsialil substituído ou não substituído, em que o referido trialquilsialil é um membro selecionado de trimetilsilil substituído ou não substituído, terc-butildimetilsilil substituído ou não substituído, e tributilsilil substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, R5 é metóxi substituído ou não substituído, etóxi substituído ou não substituído, metoximetoxi substituído ou não substituído, etoxietoxi substituído ou não substituído, e tetrahidro-2H- piran-2-ilóxi substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, R5 é um membro selecionado de metóxi, etóxi, metoximetoxi, etoxietoxi e tetrahidro-2H-piran-2- ilóxi. Em outra modalidade exemplar, Zl é
Em uma modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são um membro selecionado independentemente de H, OR*, NR*R**, SR*, -S(O)R*, -S(O)2R*, - S(0)2NR*R**, -C(O)R*, -C(O)OR*, - C(0)NR*R**, halogênio, ciano, nitro, metóxi substituído ou não substituído, metil substituído ou não substituído, etóxi substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, feniloxi substituído ou não substituído, fenil metóxi substituído ou não substituído, tiofeniloxi substituído ou não substituído, piridiniloxi substituído ou não substituído, pirimidiniloxi substituído ou não substituído, benzilfurano substituído ou não substituído, metiltio substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, feniltio substituído ou não substituído, tiofeniltio substituído ou não substituído, fenil metiltio substituído ou não substituído, piridiniltio substituído ou não substituído, pirimidiniltio substituído OU não substituído, benziltiofuranil substituído OU não substituído, fenilsulfonil substituído OU não substituído, benzilsulfonil substituído OU não substituído, fenilmetilsulfonil substituído OU não substituído, tiofenilsulfonil substituído OU não substituído, piridinilsulfonil substituído OU não substituído, pirimidinilsulfonil substituído OU não substituído, sulfonamidil substituído ou não substituído, fenilsulfinil substituído ou não substituído, benzilsulfinil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfinil substituído ou não substituído, tiofenilsulfinil substituído ou não substituído, piridinilsulfinil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfinil substituído ou não substituído, amino substituído ou não substituído, alquilamino substituído ou não substituído, dialquilamino substituído ou não substituído, trifluormetilaraino substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, benzilamino substituído ou não substituído, fenilaraino substituído ou não substituído, tiofenilaraino substituído ou não substituído, piridinilamino substituído ou não substituído, pirimidinilamino substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, morfolino substituído ou não substituído, alquilamido substituído ou não substituído, arilamido substituído ou não substituído, ureido substituído ou não substituído, carbamoil substituído ou não substituído, e piperizinil substituído ou não substituído. Em uma modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são selecionados da lista prévia de substituintes, com exceção de -C(O)R*, -C(O)OR*, C(O)NR*R* *.
Em outra modalidade exemplar, R9aiR10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1- etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3- (butilcarbonil)fenilmetoxi, lH-tetrazol-5-il, 1- etoxicarbonilmetiloxi-, l-etoxicarbonilmetil-, 1- etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2- iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4-fluorfeniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil,
butilcarbonilmetil, 1-((piperidin-1-il)carbonil)metil, 1- (piperidin-l-il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-2-
il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3-il)carbonil)metóxi , 1- (4-(pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metóxi, 1-(4-
(pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metil, 1-(4-
(pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil, 1-4-(pirimidin-2- il)piperazin-l-il, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l-
il) carbonil), 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonilmetil, 1- (4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonil) metóxi, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l-il, IH- indol-l-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, morfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido,
3-(feniltio)-ΙΗ-indol-l-il, 3-(2-cianoetiltio)-lllindol-1- il, benzilamino, 5-metóxi-3-(feniltio)-IH-indol-1-il, 5- metóxi-3-((2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il), 5-cloro-lH- indol-l-il, 5-cloro-3-((2-cianoetiltio)-IH-indol-1-il) , dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-lH-indol- 1-il), 4-(IH-tetrazol-5-il)fenóxi, 4-(lH-tetrazol-5-
il)fenil, 4-(lH-tetrazol-5-il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3- cianofenoxi, 4-cianofenoxi, 2-cianofeniltio, 3- cianofeniltio, 4-cianofeniltio, 2-clorofenoxi, 3- clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2-fluorfenoxi, 3-fluorfenoxi , 4-fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3-cianobenziloxi, 4- cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3-clorobenziloxi, 4- clorobenziloxi, 2 -fluorbenziloxi, 3 -fluorbenziloxi, 4- fluorbenziloxi, fenil não substituído, benzil não substituído. Em uma modalidade exemplar, R9a é H e R12a é H. Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma combinação de substituintes para R9a, R10ai Rlla e R12a, que é um membro selecionado daqueles descritos nas Fórmulas (I) , (Ia) (Ib) , (Ic) , (Id) , (Ie) , (If) , (Ig) , (Ih) , (li), (Ij) , (Ik) , (II), (Im) , (In), (Io), (Ip) , (Iq) , (Ir), (Is) , (It) , (Iu) , (Iv) , (Iw) , (Iz) , (Iaa) , (Iab) , (Iac) , (Iad) , (Iae) , (Iaf) , (Iag) , (Iah) , (Iai) , (Iaj), (Iak) acima e/ou nos parágrafos subseqüentes que descrevem as Fórmulas (I), (Ia) (Ib) , (Ic) , (Id) , (Ie) , (If) , (Ig) , (Ih) , (li), (Ij) , (Ik) , (II), (Im) , (In), (Io), (Ip) , (Iq) , (Ir), (Is) , (It) , (Iu), (Iv), (Iw), (Iz), (Iaa), (Iab), (Iac), (Iad), (Iae), (Iaf), (Iag), (Iah), (Iai), (Iaj), (Iak).
Em uma modalidade exemplar, o composto é um ácido ou és ter borônico acíclico, em que uma porção do ácido ou éster borônico acíclico, como na Figura (IXb) abaixo
<formula>formula see original document page 92</formula>
é um membro selecionado de uma estrutura na FIG. 12.
Em outra modalidade exemplar, o composto é um dímero, anidrido ou trímero de um ácido ou éster borônico acíclico aqui descrito. Em outra modalidade exemplar, o composto é um dímero, anidrido ou trímero de um ácido ou éster borônico acíclico, em que uma porção do ácido ou éster borônico acíclico, como na Figura (IXb), é um membro selecionado de uma estrutura na FIG. 12. Em uma modalidade exemplar, R1 e R2 são, cada um, membros selecionados independentemente de H, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, propil substituído ou não substituído, isopropil substituído ou não substituído, butil substituído ou não substituído, t-butil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, e benzil substituído ou não substituído. R1 e R2, juntos com os átomos aos quais estão anexados, podem opcionalmente formar um membro selecionado de dioxaborolano substituído ou não substituído, dioxaborinano substituído ou não substituído, dioxaborepano substituído ou não substituído.
Em uma modalidade exemplar, R1 e R2 são, cada um, membros selecionados independentemente de H, metil, etil, propil, isopropil, butil, t-butil, fenil e benzil. Em uma modalidade exemplar, R1 e R2 são, cada um, membros selecionados independentemente de H, metil, isopropil, e fenil. Em uma modalidade exemplar, R1 e R2 são metil. Em uma modalidade exemplar, R1 e R2 são isopropil. Em uma modalidade exemplar, R1 e R2 são H.
Em outra modalidade exemplar, R1 e R2, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um membro selecionado de dioxaborolano substituído ou não substituído, dioxaborinano substituído ou não substituído, dioxaborepano substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, R1 e R2, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um membro selecionado de dioxaborolano, tetrametildioxaborolano substituído ou não substituído, fenildioxaborolano substituído ou não substituído, dioxaborinano, dimetildioxaborinano e dioxaborepano.
Em uma modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 94</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 94</formula> <formula>formula see original document page 95</formula> <formula>formula see original document page 96</formula> <formula>formula see original document page 97</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 97</formula> <formula>formula see original document page 98</formula> <formula>formula see original document page 99</formula> <formula>formula see original document page 100</formula>
Em outra modalidade exemplar, os compostos e modalidades aqui descritos podem formar um hidrato com água, um solvato com um álcool (por exemplo, metanol, etanol, propanol); um aduto com um composto amino (por exemplo, amônia, metilamina, etilamina); um aduto com um ácido (por exemplo, ácido fórmico, ácido acético); complexos com etanolamina, quinolina, aminoácidos, e semelhantes.
Em uma modalidade exemplar, os ésteres borônicos acíclicos aqui descritos podem ser usados como intermediários na síntese dos compostos aqui descritos. Em outra modalidade exemplar, os ésteres borônicos acíclicos aqui descritos podem ser usados como intermediários na síntese de um composto que é um membro selecionado das Fórmulas (I), (Ia) (Ib) , (Ic) , (Id) , (Ie), (If) , (Ig) , (Ih) , (li), (Ij) , (Ik) , (II), (Im) , (In), (Io), (Ip) , (Iq) , (Ir), (Is) , (It) , (Iu), (Iv), (Iw) , (Iz) , (Iaa) , (Iab), (Iac), (Tad), (Iae), (Iaf), (Iag), (Iah), (Iai), (Iaj), (Iak).
I.f.) Ácidos e ésteres borônicos acíclicos, parte II
Os ácidos e ésteres borônicos acíclicos aqui descritos também podem ser utilizados na invenção. Esses compostos podem ser usados para matar ou inibir o crescimento dos microorganismos aqui descritos, bem como para tratar as doenças aqui descritas. Além disso, esses compostos podem ser usados como intermediários sintéticos na geração de outros compostos aqui descritos. Em uma modalidade exemplar, esses outros compostos são os ésteres borônicos cíclicos e ésteres borínicos cíclicos aqui descritos.
Em outro aspecto, o composto possui uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 101</formula> (x)
em que R1 e R2 são membros selecionados independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. R1 e R2, juntos com os átomos aos quais estão anexados, podem opcionalmente ser unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. X é um membro selecionado de triflato substituído ou não substituído, halogênio, ésteres sulfônicos substituídos ou não substituídos, e grupos acilóxi substituídos ou não substituídos, e diazo substituído ou não substituído. R3a e R4a são membros selecionados independentemente de H, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. A é um membro selecionado de CR9a e N. D é um membro selecionado de CR10a e Ν. E é um membro selecionado de CRlla e N. G é um membro selecionado de CR12a e N. R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de H, OR*, NR*R* *, SR*, - S(O)R*, -S(O)2R*, -S (0) 2NR*R**, -C(O)R*, -C(O)OR*, C(O)NR*R**, nitro, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Cada R* e R** é um membro selecionado independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. R9a e R10a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel. R10a e Rlla, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel. Rlla e R12a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel. A combinação de nitrogênios (A + D + E + G) é um número inteiro selecionado de 0 a 3.
Em uma modalidade exemplar, esse aspecto tem a condição de que o composto não seja:
<formula>formula see original document page 103</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com Fórmula (Xa)
<formula>formula see original document page 103</formula> Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado independentemente de H, ciano, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, e amido substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado independentemente de ciano, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, amido substituído ou não substituído.
Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado de H, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, propil substituído ou não substituído, isopropil substituído ou não substituído, butil substituído ou não substituído, t- butil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, e benzil substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, R3a e R4a são um membro selecionado de metil, etil, propil, isopropil, butil, t- butil, fenil e benzil. Em outra modalidade exemplar, R3a é H e R4a é um membro selecionado de metil, etil, propil, isopropil, butil, t-butil, fenil e benzil. Em outra modalidade exemplar, R3a é H e R4a é H.
Em outra modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são um membro selecionado de H, OR*, NR*R**, SR*, -S(O)R*, - S(O)2R*, -S (O) 2NR*R**, -C(O)R*, -C(O)OR*, -C(0)NR*R**, halogênio, ciano, nitro, metóxi substituído ou não substituído, metil substituído ou não substituído, etóxi substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, feniloxi substituído ou não substituído, fenil metóxi substituído ou não substituído, tiofeniloxi substituído ou não substituído, piridiniloxi substituído ou não substituído, pirimidiniloxi substituído ou não substituído, benzilfurano substituído ou não substituído, metiltio substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, feniltio substituído ou não substituído, tiofeniltio substituído ou não substituído, fenil metiltio substituído ou não substituído, piridiniltio substituído ou não substituído, pirimidiniltio substituído ou não substituído, benziltiofuranil substituído ou não substituído, fenilsulfonil substituído ou não substituído, benzilsulfonil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfonil substituído ou não substituído, tiofenilsulfonil substituído ou não substituído, piridinilsulfonil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfonil substituído ou não substituído, sulfonamidil substituído ou não substituído, fenilsulfinil substituído ou não substituído, benzilsulfinil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfinil substituído ou não substituído, tiofenilsulfinil substituído ou não substituído, piridinilsulfinil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfinil substituído ou não substituído, amino substituído ou não substituído, alquilamino substituído ou não substituído, dialquilamino substituído ou não substituído, trifluormetilamino substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, benzilamino substituído ou não substituído, fenilamino substituído ou não substituído, tiofenilamino substituído ou não substituído, piridinilamino substituído ou não substituído, pirimidinilamino substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, morfolino substituído ou não substituído, alquilamido substituído ou não substituído, arilamido substituído ou não substituído, ureido substituído ou não substituído, carbamoil substituído ou não substituído, e piperizinil substituído ou não substituído. Em uma modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são selecionados da lista prévia de substituintes, com exceção de -C(O)R*, -C(O)OR*, C(O)NR*R* *.
Em outra modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla a e R12a são membros selecionados independentemente de flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1- etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3- (butilcarbonil)fenilmetoxi, lH-tetrazol-5-il, 1- etoxicarbonilmetiloxi-, 1-etoxicarbonilmetil-, 1- etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2- iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4-fluorfeniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-((piperidin-1-il)carbonil)metil, 1- (piperidin-l-il) carbonil) metóxi, 1- (piperidin-2 - il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3-il)carbonil)metóxi , 1- (4-(pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metóxi, 1- (4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metil, l-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil, 1-4-(pirimidin-2- il)piperazin-l-il, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonil), 1-(4-(piridin-2 -il)piperazin-l- il) carbonilmetil, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-1- il)carbonil)metóxi, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l-il, IH- indol-l-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, morfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-ΙΗ-indol-l-il, 3-(2-cianoetiltio)-lH-indol-1- il, benzilamino, 5-metóxi-3-(feniltio)-IH-indol-1-il, 5- metóxi-3-((2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il), 5-cloro-lH- indol-l-il, 5-cloro-3-((2-cianoetiltio)-lH-indol-l-il) , dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-lH-indol- 1-il), 4-(lH-tetrazol-5-il)fenóxi, 4-(lH-tetrazol-5- il)fenil, 4-(lH-tetrazol-5-il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3- cianofenoxi, 4-cianofenoxi, 2-cianofeniltio, 3- cianofeniltio, 4-cianofeniltio, 2-clorofenoxi, 3- clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2-fluorfenoxi, 3-fluorfenoxi, 4-fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3-cianobenziloxi, 4- cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3-clorobenziloxi, 4- clorobenziloxi, 2 -fluorbenziloxi, 3 -fluorbenziloxi, 4- fluorbenziloxi, fenil não substituído, benzil não substituído. Em uma modalidade exemplar, R9a é H e R12a é H. Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma combinação de substituintes para R9a, R10ai Rlla e R12a que é um membro selecionado daqueles descritos nas Fórmulas (!) , (Ia) , (Ib) , (Ic) , (Id) , (Ie), (If) , (Ig) , (Ih), (li), (Ij), (Ik) , (Il) , (Im), (In) , (Io), (Ip) , (Iq) , (Ir), (Is) , (It) , (Iu) , (Iv) , (Iw), (Iz) , (Iaa) , (Iab) , (Iac), (Iad), (Iae), (Iaf), , (Iag) , (Iah), (Iai), (Iaj), (Iak) , acima e/ou nos parágrafos subseqüentes que descrevem as Fórmulas (I) , (Ia) (Ib) , (Ic) , (Id), (Ie) , (If), (Ig) , (Ih), (li), (Ij), (Ik) , (II), (Im) , (In), (Io), (Ip) , (Iq) , (Ir), (Is) , (It) , (Iu) , (Iv) , (Iw), (Iz), (Iaa) , (Iab) , (Iae), (Iad) , (Iae) , (Iaf) , (Iag), (Iah), (Iai), (Iaj), (Iak).
Em uma modalidade exemplar, o composto é um ácido ou éster borônico acíclico, em que uma porção do ácido ou éster borônico acíclico é como na Figura (IXb) abaixo é um membro selecionado de uma estrutura na FIG. 12. Em outra modalidade exemplar, o composto é um dlmero, anidrido ou trímero de um ácido ou éster borônico acíclico aqui descrito. Em outra modalidade exemplar, o composto é um dímero, anidrido ou trímero de um ácido ou éster borônico acíclico, em que uma porção do ácido ou éster borônico acíclico, como na Figura (IXb), é um membro selecionado de uma estrutura na FIG. 12.
Em uma modalidade exemplar, R1 e R2 são, cada um, membros selecionados independentemente de H, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, propil substituído ou não substituído, isopropil substituído ou não substituído, butil substituído ou não substituído, t-butil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, e benzil substituído ou não substituído. R1 e R2, juntos com os átomos aos quais estão anexados, podem opcionalmente formar um membro selecionado de dioxaborolano substituído ou não substituído, dioxaborinano substituído ou não substituído, dioxaborepano substituído ou não substituído.
Em uma modalidade exemplar, X é um membro selecionado de triflato, cloro, bromo, iodo, ésteres sulfônicos substituídos ou não substituídos, grupos acilóxi substituídos ou não substituídos e diazo substituído ou não substituído. Em uma modalidade exemplar, X é um grupo éster sulfônico, que é um membro selecionado de mesilato substituído ou não substituído, tosilato substituído ou não substituído, brosilato substituído ou não substituído, e nosilato substituído ou não substituído. Em uma modalidade exemplar, X é um grupo acilóxi, que é um membro selecionado de acetóxi substituído ou não substituído e trifluoracetoxi substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, X é um membro selecionado de bromo, iodo, mesilato e diazo. Em outra modalidade exemplar, X é um membro selecionado de bromo e iodo.
Em outra modalidade exemplar, R1 e R2, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um membro selecionado de dioxaborolano, tetrametildioxaborolano substituído ou não substituído, fenildioxaborolano substituído ou não substituído, dioxaborinano, dimetildioxaborinano e dioxaborepano.
Em outra modalidade exemplar, R3a e R4a são, cada um, membros selecionados independentemente de H, metil, etil, propil, butil, fenil, benzil, ciano, halogênio e nitro.
Em uma modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 110</formula> Em uma modalidade exemplar, o composto é um membro Blecionado de:
<formula>formula see original document page 111</formula> <formula>formula see original document page 112</formula> <formula>formula see original document page 113</formula> <formula>formula see original document page 114</formula> <formula>formula see original document page 115</formula> <formula>formula see original document page 116</formula> <formula>formula see original document page 117</formula>
Em uma modalidade exemplar, os ésteres borônicos acíclicos aqui descritos podem ser usados como intermediários na síntese dos compostos aqui descritos. Em outra modalidade exemplar, os ésteres borônicos acíclicos aqui descritos podem ser usados como intermediários na síntese de um composto que é um membro selecionado das Fórmulas (I), (Ia) (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (li), (Ij), (Ik), (II), (Im), (In), (Io), (Ip), (Iq), (Ir), (Is), (It), (Iu), (Iv), (Iw), (Iz), (Iaa), (Iab), (Iac), (Iad), (Iae), (Iaf) , (Iag), (Iah), (Iai), (Iaj), (Iak).
I.e.) Compostos adicionais
Compostos como aqueles aqui descritos também podem ser utilizados na invenção. Os compostos da invenção podem se formar entre o diol 2',3' do anel de ribose de um ácido nucléico, nucleosídeo ou nucleotídeo e um éster borônico cíclico ou acíclico como, por exemplo, aqueles aqui descritos. Esses compostos podem ser usados em um ser humano ou em um animal para matar ou inibir o crescimento dos microorganismos aqui descritos, bem como para tratar as doenças aqui descritas. Esses compostos podem ser formados in vitro e in vivo. Métodos de produção desses compostos são fornecidos na seção de Exemplos.
Em outro aspecto, a invenção fornece um composto que possui uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 118</formula>
em que B é boro. L é um membro selecionado de OR7, purina substituída ou não substituída, pirimidina substituída ou não substituída, piridina substituída ou não substituída, e imidazol substituído ou não substituído. R7 é um membro selecionado de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. A é um membro selecionado de OH, monofosfato substituído ou não substituído, difosfato substituído ou não substituído, trifosfato substituído ou não substituído, <formula>formula see original document page 119</formula>
Al é uma seqüência de ácidos nucléicos que compreende entre 1 e 100 nucleotídeos. Q é um membro selecionado de heterocicloalquil substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Q compreende o referido boro e pelo menos um oxigênio.
Em uma modalidade exemplar, o aspecto tem a condição de que o composto não possa compreender um membro selecionado de C1-C40.
Em uma modalidade exemplar, o aspecto tem a condição de que o composto não possa compreender um membro que é descrito na FIG. 11. Em uma modalidade exemplar, o aspecto tem a condição de que o composto não possa envolver um composto que é descrito na Patente U.S. expirada N° 5 . 880.188.
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula (XIIa):
<formula>formula see original document page 119</formula>
em que M é um membro selecionado de: 0 e S. J é um membro selecionado de (CR3aR4a)nl e CR5a, R3a, R4a e R5a são membros selecionados independentemente de H, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído, nl é um número inteiro selecionado de 0 a 2. W é um membro selecionado de CO= (carbonil), (CR6aR7a)mi e CR8a. R6a, R7a e R8a são membros selecionados independentemente de H, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. O índice ml é um número inteiro selecionado de 0 e 1. A é um membro selecionado de CR9a e N. D é um membro selecionado de CR10a e Ν. E é um membro selecionado de CRlla e N. G é um membro selecionado de CR12a e N. R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de H, OR*, NR*R**( SR*, - S(O)R*, -S(O)2R*, -S (0) 2NR*R**, -C(O)R*, -C(O)OR*, C(O)NR*R**, nitro, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Cada R* e R** são membros selecionados independentemente de H, nitro, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. A combinação de nitrogênios (A + D + E + G) é um número inteiro selecionado de 0 a 3 . Um membro selecionado de R3a, R4a e R5a e um membro selecionado de R6a, R7a e R8a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R3a e R4a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R6a e R7a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R9a e R10a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R10a e Rlla, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. Rlla e R12a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros.
Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado independentemente de H, ciano, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, e amido substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado independentemente de ciano, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, amido substituído ou não substituído.
Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado de H, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, propil substituído ou não substituído, isopropil substituído ou não substituído, butil substituído ou não substituído, t- butil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, e benzil substituído ou não substituído.
Em outra modalidade exemplar, R3a e R4a são um membro selecionado de metil, etil, propil, isopropil, butil, t- butil, fenil e benzil. Em outra modalidade exemplar, R3a é H e R4a é um membro selecionado de metil, etil, propil, isopropil, butil, t-butil, fenil e benzil. Em outra modalidade exemplar, R3a é H e R4a é H.
Em outra modalidade exemplar, cada R9a, R10a, Rlla e R12a é um membro selecionado independentemente de H, OR*, NR*R* *, SR*, -S(O)R*, -S(O)2R*, - S(0)2NR*R**, -C(O)R*, - C(O)OR*, -C(O)NR*R**, halogênio, ciano, nitro, metóxi substituído ou não substituído, metil substituído ou não substituído, etóxi substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, feniloxi substituído ou não substituído, fenil metóxi substituído ou não substituído, tiofeniloxi substituído ou não substituído, piridiniloxi substituído ou não substituído, pirimidiniloxi substituído ou não substituído, benzilfurano substituído ou não substituído, metiltio substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, feniltio substituído ou não substituído, tiofeniltio substituído ou não substituído, fenil metiltio substituído ou não substituído, piridiniltio substituído ou não substituído, pirimidiniltio substituído ou não substituído, benziltiofuranil substituído ou não substituído, fenilsulfonil substituído ou não substituído, benzilsulfonil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfonil substituído ou não substituído, tiofenilsulfonil substituído ou não substituído, piridinilsulfonil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfonil substituído ou não substituído, sulfonamidil substituído ou não substituído, fenilsulfinil substituído ou não substituído, benzilsulfinil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfinil substituído ou não substituído, tiofenilsulfinil substituído ou não substituído, piridinilsulfinil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfinil substituído ou não substituído, amino substituído ou não substituído, alquilamino substituído ou não substituído, dialquilamino substituído ou não substituído, trifluormetilamino substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, benzilamino substituído ou não substituído, fenilamino substituído ou não substituído, tiofenilamino substituído ou não substituído, piridinilamino substituído ou não substituído, pirimidinilamino substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, morfolino substituído ou não substituído, alquilamido substituído ou não substituído, arilamido substituído ou não substituído, ureido substituído ou não substituído, carbamoil substituído ou não substituído, e piperizinil substituído ou não substituído. Em uma modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são selecionados da lista prévia de substituintes, com exceção de -C(O)R*, -C(O)OR*, C(O)NR*R* *.
Em outra modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1- etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3- (butilcarbonil)fenilmetoxi, IH-tetrazol-5-il, 1- etoxicarbonilmetiloxi-, 1-etoxicarbonilmetil-, 1- etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2- iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4-fluorfeniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil,
butilcarbonilraetil, 1-((piperidin-l-il)carbonil)metil, 1- (piperidin-l-il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-2- il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3-il)carbonil)metóxi , 1- (4-(pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metóxi, 1-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metil, 1-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil, 1-4 -(pirimidin-2- il)piperazin-l-il, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-1- il)carbonil) , 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonilmetil, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il ) carbonil ) metóxi , 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l-il, IH- indol-l-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, morfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-lH-indol-l-il, 3-(2-cianoetiltio)-lH-indol-1- il, benzilamino, 5-metóxi-3-(feniltio)-IH-indol-1-il, 5- metóxi-3-((2-cianoetiltio)-IH-indol-1-il), 5-cloro-lH- indol-l-il, 5-cloro-3-((2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il) , dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-IH-indol- 1-il) , 4-(IH-tetrazol-5-il)fenóxi, 4-(lH-tetrazol-5- il)fenil, 4 -(lH-tetrazol-5-il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3- cianofenoxi, 4-cianofenoxi, 2-cianofeniltio, 3- cianofeniltio, 4-cianofeniltio, 2-clorofenoxi, 3- clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2-fluorfenoxi, 3-fluorfenoxi, 4-fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3-cianobenziloxi, 4- cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3-clorobenziloxi, 4- clorobenziloxi, 2-fluorbenziloxi, 3-fluorbenziloxi, 4- fluorbenziloxi, fenil não substituído, benzil não substituído.
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 126</formula>
Em outra modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de H, halogênio, ciano, nitro, metóxi substituído ou não substituído, metil substituído ou não substituído, etóxi substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, feniloxi substituído ou não substituído, fenil metóxi substituído ou não substituído, tiofeniloxi substituído ou não substituído, piridiniloxi substituído ou não substituído, pirimidiniloxi substituído ou não substituído, benzilfurano substituído ou não substituído, metiltio substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, feniltio substituído ou não substituído, tiofeniltio substituído ou não substituído, fenil metiltio substituído ou não substituído, piridiniltio substituído ou não substituído, pirimidiniltio substituído ou não substituído, benziltiofuranil substituído ou não substituído, fenilsulfonil substituído ou não substituído, benzilsulfonil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfonil substituído ou não substituído, tiofenilsulfonil substituído ou não substituído, piridinilsulfonil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfonil substituído ou não substituído, sulfonamidil substituído ou não substituído, fenilsulfinil substituído ou não substituído, benzilsulfinil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfinil substituído ou não substituído, tiofenilsulfinil substituído ou não substituído, piridinilsulfinil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfinil substituído ou não substituído, amino substituído ou não substituído, alquilamino substituído ou não substituído, dialquilamino substituído ou não substituído, trifluormetilamino substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, benzilamino substituído ou não substituído, fenilamino substituído ou não substituído, tiofenilamino substituído ou não substituído, piridinilamino substituído ou não substituído, pirimidinilamino substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, morfolino substituído ou não substituído, alquilamido substituído ou não substituído, arilamido substituído ou não substituído, ureido substituído ou não substituído, carbamoil substituído ou não substituído, e piperizinil substituído ou não substituído.
Em outra modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de H, flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1- etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3- (butilcarbonil)fenilmetoxi, lH-tetrazol-5-il, 1- etoxicarbonilmetiloxi-, 1-etoxicarbonilmetil-, 1- etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2- iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4-fluorfeniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-((piperidin-1-il)carbonil)metil, 1- (piperidin-l-il)carbonil)metóxi, 1- (piperidin-2- il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3-il)carbonil)metóxi, 1- (4 -(pirimidin-2-il)piperazin-1-il)carbonil)metóxi, l-(4- (pirimidin--il)piperazin-l-il)carbonil)metil, 1-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-1-il)carbonil, 1-4-(pirimidin-2- il)piperazin-l-il, 1- (4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonil), 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-1- il)carbonilmetil, 1-(4 -(piridin-2-il)piperazin-1- il) carbonil)metóxi, 1-(4 -(piridin-2-il)piperazin-l-il, IH- indol-l-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, morfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-lH-indol-l-il, 3-(2-cianoetiltio)-lH-indol-1- il, benzilamino, 5-metóxi-3-(feniltio)-IH-indol-1-il, 5- metóxi-3-((2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il), 5-cloro-lH- indol-l-il, 5-cloro-3-((2-cianoetiltio)-1Η-indol-l-il) , dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-lH-indol- 1-il) , 4-(IH-tetrazol-5-il)fenóxi, 4 -(1H-tetrazol-5- il)fenil, 4-(lH-tetrazol-5-il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3- cianofenoxi, 4-cianofenoxi, 2-cianofeniltio, 3- cianofeniltio, 4-cianofeniltio, 2-clorofenoxi, 3- clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2 -fluorfenoxi, 3 -fluorfenoxi, 4-fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3-cianobenziloxi, 4- cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3-clorobenziloxi, 4- clorobenziloxi, 2-fluorbenziloxi, 3-fluorbenziloxi e 4- f luorbenziloxi. Em uma modalidade exemplar, R9a é H e R12a é H. Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma combinação de substituintes para R9a, R10a, Rlla e R12a que é um membro selecionado daqueles descritos nas Fórmulas (I) , (Ia) (Ib) , (Ic) , (Id) , (Ie) , (If) , (Ig) , (Ih) , (li), (Ij) , (Ik) , (II), (Im) , (In), (Io), (Ip) , (Iq) , (Ir), (Is) , (It) , (Iu) , (Iv) , (Iw) , (Iz) , (Iaa) , (Iab) , (Iac) , (Iad) , (Iae) , (Iaf) , (Iag) , (Iah) , (Iai) , (Iaj) , (Iak) acima e/ou nos parágrafos subseqüentes que descrevem as Fórmulas (I), (Ia) (Ib) , (Ic), (Id), (Ie), (If) , (Ig), (Ih), (li), (Ij) , (Ik) , (II), (Im) , (In), (Io), (Ip) , (Iq) , (Ir), (Is) , (It) , (Iu) , (Tv) , (Iw) , (Iz) , (Iaa) , (Iab), (Iac), (Iad), (Iae) , (Iaf), (Iag), (Iah), (Iai), (Iaj), (Iak).
Em uma modalidade exemplar, a porção do éster borônico cíclico como na figura abaixo
<formula>formula see original document page 129</formula>
é um membro selecionado de uma estrutura na FIG. 12. Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula: <formula>formula see original document page 130</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 130</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 130</formula>
Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um membro selecionado das Fórmulas (XII), (XIIa) , (XIIb) , (XIIc) , (XIId) e (XIIe) , em que L é um membro selecionado de adenina substituída ou não substituída, guanina substituída ou não substituída, citidina substituída ou não substituída, uracil substituído ou não substituído, e timina substituída ou não substituída. Em outra modalidade exemplar, L é 0H. Em outra modalidade exemplar, L é adenina.
Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 131</formula>
Em outra modalidade exemplar, Al é uma seqüência de ácidos nucléicos entre 72 e 90 nucleotídeos. Em outra modalidade exemplar, Al é uma seqüência de ácidos nucléicos entre 35 e 150 nucleotídeos. Em outra modalidade exemplar, Al é uma seqüência de ácidos nucléicos entre 50 e 100 nucleotídeos. Em outra modalidade exemplar, Al é uma seqüência de ácidos nucléicos entre 75 e 85 nucleotídeos.
Em outra modalidade exemplar, Al é uma seqüência de ácidos nucléicos que é um tRNA ou uma porção de um tRNA. Em outra modalidade exemplar, o referido tRNA ou a porção do referido tRNA é um membro selecionado de alanil tRNA, isoleucil tRNA, Ieucil tRNA, metionil tRNA, Iisi1 tRNA, fenilalanil tRNA, prolil tRNA, treonil tRNA e valil tRNA.
Em outra modalidade exemplar, o referido tRNA ou a porção do referido tRNA é leucil tRNA. Em outra modalidade exemplar, o referido tRNA ou a porção do referido tRNA possui uma seqüência que é um membro selecionado de IDS. DE SEQ. Nos: 18-62. Em outra modalidade exemplar, Al é uma seqüência de ácidos nucléicos em que dois nucleotídeos finais são, cada um, citidina.
Em outra modalidade exemplar, o composto ainda compreende uma tRNA sintetase ou uma porção de uma tRNA sintetase, que compreende o domínio de edição, em que o referido composto é anexado de forma não covalente ao domínio de edição da referida tRNA sintetase. Em outra modalidade exemplar, a tRNA sintetase é um membro selecionado de uma tRNA sintetase mitocondrial e uma tRNA sintetase citoplasmática. Em outra modalidade exemplar, a tRNA sintetase é um membro selecionado de alanil tRNA sintetase, isoleucil tRNA sintetase, leucil tRNA sintetase, metionil tRNA sintetase, lisil tRNA sintetase, fenilalanil tRNA sintetase, prolil tRNA sintetase, treonil tRNA sintetase e valil tRNA sintetase.
Em uma modalidade exemplar, o composto aqui descrito está presente em um microorganismo descrito neste pedido.
Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não esteja presente em um microorganismo que é um membro selecionado de: Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus niger, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Aureobasidium pullulans, Fusarium solani, Penieillium pinophilum, Scopulariopsis brevieaulis, Streptoverticillium waksmanii, Alternaria alternata, Cladosporium herbarum, Phoma violaeea, Stemphylium dentritieum, Candida albieans, Eseheriehia eoli e Glioclasium roseum. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que, quando o composto estiver presente em um fungo, o fungo não seja um membro selecionado de: Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus niger, Fusarium solani, Penieillium pinophilum, Scopulariopsis brevieaulis, Streptoverticillium waksmanii, Alternaria alternata, Cladosporium herbarum, Phoma violaeea, Stemphylium dentritieum, Candida albieans e Glioclasium roseum.
Em uma modalidade exemplar, o composto está presente em um microorganismo que é um membro selecionado de um dermatófito, Triehophytonl Mierosporum, Epidermophyton e fungos do tipo levedura. Em uma modalidade exemplar, há a condição de que, quando o composto estiver presente em um fungo do tipo levedura, o fungo do tipo levedura não seja um membro selecionado de Aspergillus niger e Candida albieans. Em outra modalidade exemplar, o microorganismo é um membro selecionado de um dermatófito, Trichophyton, Mierosporum, Epidermophyton e fungos do tipo levedura. Em uma modalidade exemplar, o microorganismo é um dermatófito.
Em outra modalidade exemplar, o microorganismo é um membro selecionado da espécie Triehophyton. Em uma modalidade exemplar, o microorganismo é um membro selecionado de T. rubrum e T. menagrophytes. Em uma modalidade exemplar, o microorganismo é um dermatófito e o referido dermatófito é um membro selecionado de T. rubrum e T. menagrophytes.
Em outra modalidade exemplar, o composto está presente em um ser humano ou um animal. Em outra modalidade exemplar, o composto está presente em um microorganismo que está dentro ou na superfície de um ser humano ou um animal.
Em outra modalidade exemplar, o composto está presente em um microorganismo que está presente em uma unidade de unha humana de um ser humano ou componente de uma unha, casco ou chifre de um animal. Em outra modalidade exemplar, o composto está presente em um microorganismo que está presente em um membro selecionado de uma placa ungueal humana, leito ungueal humano, dobra ungueal proximal, dobra ungueal lateral e combinações destes. Em outra modalidade exemplar, o composto está presente em um microorganismo que está presente em um membro selecionado de uma placa ungueal humana e um leito ungueal humano. Em outra modalidade exemplar, o composto está presente em um microorganismo que está presente em um membro selecionado de uma dobra ungueal proximal e uma dobra ungueal lateral. Em outra modalidade exemplar, o microorganismo é um membro selecionado de dermatófito, Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton e fungos do tipo levedura. Em outra modalidade exemplar, o referido composto é um dermatófito. Em outra modalidade exemplar, o dermatófito é um membro selecionado de T. rubrum e T. menagrophytes.
I.f.) Formulações com queratina
Quando um composto da invenção aqui descrito for aplicado a um componente da unha de um ser humano, o composto absorverá ou penetrará na unha. A unha humana é composta basicamente de queratina (ou seja, queratina de cabelo ou α-queratina), além de pequenas quantidades de componentes lipídicos. Portanto, no processo de tratamento de uma doença da unha ou morte ou inibição do crescimento de um microorganismo, é formada uma formulação que compreende uma unidade de unha humana e um composto da invenção. Em outro aspecto, a invenção fornece uma formulação que compreende: (a) um composto que é um membro selecionado de: um composto que contém boro, um composto que contém 2'- amino ribofuranose, um composto que contém 3'-amino ribofuranose, e combinações destes; e (b) um componente que contém queratina, que é um membro selecionado de: uma unidade de unha humana, pele e cabelo. Em uma modalidade exemplar, o composto da parte (a) entra em contato com o componente da parte (b) . Em uma modalidade exemplar, o componente que contém queratina é uma placa ungueal da unidade de unha humana. Em uma modalidade exemplar, o componente que contém queratina é um leito ungueal da unidade de unha humana. Em uma modalidade exemplar, o componente que contém queratina é uma dobra ungueal proximal da unidade de unha humana. Em uma modalidade exemplar, o componente que contém queratina é uma dobra ungueal lateral da unidade de unha humana. Em outra modalidade exemplar, a unidade de unha humana compreende um membro selecionado de: queratina e lipídeo. Em outra modalidade exemplar, a queratina é um membro selecionado de: queratina da pele e queratina da unha/cabelo. Em outra modalidade exemplar, o lipídeo é um membro selecionado de: sulfato de colesterol, cerebrosídeo, ceramida, esterol livre, ácidos graxos livres, triglicerídeos, ésteres de esterol, ésteres de cera e esqualeno.
Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na formulação em uma concentração em um valor selecionado de cerca de 0,001%, cerca de 0,01%, cerca de 0,05%, cerca de 0,1%, cerca de 0,5%, cerca de 1%, cerca de 1,5%, cerca de 2%, cerca de 2,5%, cerca de 3%. Em outra modalidade exemplar, a queratina está presente na referida formulação em uma concentração em um valor selecionado de cerca de 99,99%, cerca de 99,95%, cerca de 99,90%, cerca de 99,5%, cerca de 99,0%, cerca de 98,5%, cerca de 98,0%, cerca de 97,5% e cerca de 97%. Em outra modalidade exemplar, o composto é um composto aqui descrito. Em outra modalidade exemplar, o composto é como descrito nas Fórmulas (I), (Ia) (Ib), (Ie), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (li), (Ij), (Ik), (II), (Im), (In), (Io), (Ip), (Iq), (Ir), (Is), (It), (Iu), (Iv), (Iw), (Iz), (Iaa), (Iab), (Iac), (Iad), (Iae), (Iaf), (Iag), (Iah), (Iai), (Iaj), (Iak), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) e (III). Em outra modalidade exemplar, o composto é um éster borônico acíclico, como aqui descrito. Em outra modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de C1-C96 aqui descritos. Em outra modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de um composto que aparece na Figura 19. Em outra modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de um composto que aparece na Figura 20. Em outra modalidade exemplar, o composto é 1, 3-diidro-5-flúor-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol. Em outra modalidade exemplar, 1,3-diidro-5-flúor-l-hidróxi-2,1- benzoxaborol está presente na referida formulação em uma concentração em um valor selecionado de cerca de 0,001%, cerca de 0,01%, cerca de 0,05%, cerca de 0,1%, cerca de 0,5%, cerca de 1%, e cerca de 1,5%.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de formação dessa formulação, em que o referido método compreende a aplicação do referido composto a uma formulação que compreende queratina, formando, dessa forma, a referida formulação. Em uma modalidade exemplar, a formulação que compreende queratina é uma unidade de unha humana. Em uma modalidade exemplar, a formulação que compreende queratina é um membro selecionado de: uma placa ungueal, um leito ungueal, uma dobra ungueal proximal e uma dobra ungueal lateral. Métodos de produção dessas formulações são descritos na seção de Exemplos. I.g.) Preparação de inibidores do domínio de edição que contêm boro
Os compostos de uso na presente invenção podem ser preparados com o uso de materiais de partida disponíveis comercialmente, intermediários conhecidos, ou com a utilização dos métodos sintéticos publicados nas referências aqui descritas e incorporadas por referência.
I.h.) Esteres borônicos
Os esquemas exemplares a seguir ilustram métodos de preparação de moléculas que contêm boro da presente invenção. Esses métodos não se limitam à produção dos compostos mostrados, mas podem ser usados para a preparação de diversas moléculas como, por exemplo, os compostos e complexos aqui descritos. Os compostos da presente invenção também podem ser sintetizados por métodos não ilustrados explicitamente nos esquemas, mas que são do conhecimento daqueles habilitados na técnica. Os compostos podem ser preparados com o uso de materiais facilmente disponíveis de intermediários conhecidos.
Nos esquemas seguintes, o símbolo X representa bromo ou iodo. 0 símbolo Y é selecionado de H, alquil inferior e arilalquil. 0 símbolo Z é selecionado de H, alquil e aril. 0 símbolo PG representa grupo de proteção. Os símbolos A, D, E, G, Rx, Ry, Rz, Rla, R2a, R3a, R4a, R5a, R6a, R7a, R8a, R9a, R10a, Rlla e R12a podem ser usados para se referir aos símbolos correspondentes nos compostos aqui descritos.
Estratégia de preparação de ácido borônico #1
No Esquema 1, Etapas 1 e 2, os compostos 1 ou 2 são convertidos no álcool 3. Na etapa 1, o composto 1 é tratado com um agente redutor em um solvente apropriado. Agentes redutores adequados incluem complexos de borano, por exemplo, borano-tetrahidrofurano, borano-dimetilsulfito, combinações destes, e semelhantes. Hidreto de litio alumínio ou borohidreto de sódio também podem ser usados como agentes redutores. Os agentes redutores podem ser usados em quantidades que variam de 0,5 a 5 equivalentes em relação ao composto 1 ou 2. Solventes adequados incluem éter dietílico, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, 1,2- dimetoxietano, combinações destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de O0C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de término da reação variam de 1 a 24 horas.
Na Etapa 2, o grupo carbonil do composto 2 é tratado com um agente redutor em um solvente apropriado. Agentes redutores adequados incluem complexos de borano, por exemplo, borano-tetrahidrofurano, borano-dimetilsulfito, combinações destes, e semelhantes. Hidreto de lítio alumínio ou borohidreto de sódio também podem ser usados como agentes redutores. Os agentes redutores podem ser usados em quantidades que variam de 0,5 a 5 equivalentes em relação ao composto 2. Solventes adequados incluem álcool inferior como, por exemplo, metanol, etanol, e propanol, éter dietílico, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano e 1,2- dimetoxietano, combinações destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de O0C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de término da reação variam de 1 a 24 horas.
Na Etapa 3, o grupo hidroxil do composto 3 é protegido com um grupo de proteção que é estável sob condições neutras ou básicas. 0 grupo de proteção é selecionado tipicamente de metoximetil, etoxietil, tetrahidropiran-2- il, trimetilsilil, terc-butildimetilsilil, tributilsilil, combinações destes, e semelhantes. No caso de metoximetil, o composto 3 é tratado com 1 a 3 equivalentes de éter clorometil metilico na presença de uma base. Bases adequadas incluem hidreto de sódio, terc-butóxido de potássio, aminas terciárias, por exemplo, diisopropiletilamina, trietilamina, 1,8- diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno, e bases inorgânicas, tais como hidróxido de sódio, carbonato de sódio, hidróxido de potássio, carbonato de potássio, combinações destes, e semelhantes. As bases podem ser usadas em quantidades que variam de 1 a 3 equivalentes em relação ao composto 3. As temperaturas de reação variam de O0C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 0 e 40°C; os tempos de término da reação variam de 1 hora a 5 dias.
No caso de tetrahidropiran-2-il, o composto 3 é tratado com 1 a 3 equivalentes de 3,4-diidro-2H-piran na presença de 1 a 10 mol% de catalisador ácido. Catalisadores ácidos adequados incluem ácido piridinio p- toluenossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido canforsulfônico, ácido metanossulfônico, cloreto de hidrogênio, ácido sulfúrico, combinações destes, e semelhantes. Solventes adequados incluem diclorometano, clorofórmio, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, 1,2- dimetoxietano, tolueno, benzeno, acetonitrila, combinações destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de 0°C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 0 e 60°C, e está completa em 1 hora a 5 dias.
No caso de trialquilsilil, o composto 3 é tratado com 1 a 3 equivalentes de clorotrialquilsilano na presença de 1 a 3 equivalentes de base. Bases adequadas incluem aminas terciárias como, por exemplo, imidazol, diisopropiletilamina, trietilamina, 1,8- diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno, combinações destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de O0C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 0 e 40°C; os tempos de término da reação variam de 1 a 48 horas.
Na Etapa 4, o composto 4 é convertido em ácido borônico (5) por meio de reação de troca de metal halogênio. O Composto 4 é tratado com 1 a 3 equivalentes de reagente de alquilmetal em relação ao composto 4 como, por exemplo, n-butillítio, sec-butillítio, terc-butillítio, cloreto de isopropilmagnésio ou Mg turnings, com ou sem um iniciador como, por exemplo, hidreto de diisobutilalumínio (DiBAl) , seguido pela adição de 1 a 3 equivalentes de borato de trialquila em relação ao composto 4 como, por exemplo, borato de trimetila, borato de triisopropila ou borato de tributila. Solventes adequados incluem tetrahidrofurano, éter, 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano, tolueno, hexanos, combinações destes, e semelhantes. O reagente de alquimetal também pode ser adicionado na presença de borato de trialquila. A adição de butillítio é realizada entre -100 e 0°C preferivelmente entre -80 e - 40°C. A adição de cloreto de isopropilmagnésio é realizada entre -80 e 40°C, preferivelmente entre -20 e 30°C. A adição de Mg turnings, com ou sem a adição de DiBAl, é realizada entre -80 e 40°C preferivelmente entre -35 e 30°C. A adição do borato de trialquila é realizada entre - 100 e 20°C. Após a adição de borato de trialquila, permite- se que a reação aqueça até a temperatura ambiente, que é tipicamente entre -30 e 30°C. Quando o reagente de alquilmetal é adicionado na presença de borato de trialquila, permite-se que a mistura de reação aqueça até a temperatura ambiente após' a adição. Os tempos até o término da reação variam de 1 a 12 horas. O Composto 5 pode não ser isolado e pode ser usado na etapa seguinte sem purificação ou em um pote.
Na Etapa 5, o grupo de proteção do composto 5 é removido sob condições ácidas para gerar o composto da invenção. Ácidos adequados incluem ácido acético, ácido trifluoracético, ácido clorídrico, ácido hidrobrômico, ácido sulfúrico, ácido p-toluenossulfônico, e semelhantes.
Os ácidos podem ser usados em quantidades que variam de 0,1 a 20 equivalentes em relação ao composto 5. Quando o grupo de proteção for trialquilsilil, reagentes básicos como, por exemplo, fluoreto de tetrabutilamônio, também poderão ser usados. Solventes adequados incluem tetrahidrofurano, 1,4- dioxano, 1,2-dimetoxietano, metanol, etanol, propanol, acetonitrila, acetona, combinações destes, e semelhantes.
As temperaturas de reação variam de 0°C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 10°C e a temperatura de refluxo do solvente; os tempos de término da reação variam de 0,5 a 4 8 horas. O produto pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles habilitados na técnica.
Esquema 1
<formula>formula see original document page 142</formula>
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de produção de um éster borônico contendo tetrahidropirano, o referido éster possuindo uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula: <formula>formula see original document page 143</formula>
em que R1 e R2 são membros selecionados independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. R1 e R2, juntos com os átomos aos quais estão anexados, podem opcionalmente ser unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de H, OR*, NR*R**, SR*, S(O)R*, -S(O)2R*, -S (O) 2NR*R**, nitro, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. R* e R** é um membro selecionado de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. O método compreende: a) a submissão de um primeiro composto às condições de Grignard ou de organolítio, o referido primeiro composto possuindo uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 144</formula>
b) o contato do produto da etapa (a) com um éster de borato, formando, dessa forma, o referido éster borônico contendo tetrahidropirano. Em uma modalidade exemplar, o halogênio é um membro selecionado de iodo e bromo. Em outra modalidade exemplar, o éster de borato é um membro selecionado de B (OR1) 2 (OR2), em que R1 e R2 são, cada um, membros selecionados independentemente de H, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, propil substituído ou não substituído, isopropil substituído ou não substituído, butil substituído ou não substituído, t-butil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, e benzil substituído ou não substituído. R1 e R2, juntos com os átomos aos quais estão anexados, podem opcionalmente formar um membro selecionado de dioxaborolano substituído ou não substituído, dioxaborinano substituído ou não substituído, e dioxaborepano substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, o éster de borato é um membro selecionado de B(OR1)2(ORz), em que R1 e R2, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um membro selecionado de dioxaborolano, tetrametildioxaborolano substituído ou não substituído, fenildioxaborolano substituído ou não substituído, dioxaborinano, dimetildioxaborinano e dioxaborepano. Em outra modalidade exemplar, as condições de Grignard ou de organolítio ainda compreendem hidreto de diisobutil alumínio. Em outra modalidade exemplar, a temperatura da reação de Grignard não excede cerca de 35°C. Em outra modalidade exemplar, a temperatura da reação de Grignard não excede cerca de 40°C.
Em outra modalidade exemplar, a temperatura da reação de Grignard não excede cerca de 45°C. Em uma modalidade exemplar, a etapa (b) é realizada em uma temperatura de cerca de -30°C a cerca de -20°C. Em outra modalidade exemplar, etapa (b) é realizada em uma temperatura de cerca de -350C a cerca de -25°C. Em outra modalidade exemplar, a etapa (b) é realizada em uma temperatura de cerca de -50°C a cerca de -0°C. Em outra modalidade exemplar, etapa (b) é realizada em uma temperatura de cerca de -40°C a cerca de - 20°C. Em outra modalidade exemplar, o éster borônico contendo tetrahidropirano é
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de produção de um composto que possui uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 145</formula>
o referido método compreendendo: a) a submissão de um primeiro composto às condições de Grignard ou de organolítio, o referido primeiro composto possuindo uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 146</formula>
b) a extinção da referida reação de submissão com água e um ácido orgânico, formando, dessa forma, o referido composto. Em uma modalidade exemplar, em que o referido ácido orgânico é um membro selecionado de ácido acético. Em outra modalidade exemplar, a etapa de extinção é essencialmente sem contato com um ácido forte. Em outra modalidade exemplar, o composto é 1,3-diidro-5-flúor-1-hidróxi-2 ,1- benzoxaborol. Em outra modalidade exemplar, o composto é purificado por recristalização por um solvente de recristalização, em que o referido solvente de recristalização essencialmente não contém acetonitrila. Em uma modalidade exemplar, o solvente de recristalização contém menos de 2% de acetonitrila. Em uma modalidade exemplar, o solvente de recristalização contém menos de 1 % de acetonitrila. Em uma modalidade exemplar, o solvente de recristalização contém menos de 0,5% de acetonitrila. Em uma modalidade exemplar, o solvente de recristalização contém menos de 0,1% de acetonitrila. Em uma modalidade exemplar, o solvente de recristalização contém tolueno e um solvente de hidrocarboneto. Em uma modalidade exemplar, o solvente de recristalização contém cerca de 1:1 tolueno: solvente de hidrocarboneto. Em uma modalidade exemplar, o solvente de recristalização contém cerca de 2 : 1 tolueno: solvente de hidrocarboneto. Em uma modalidade exemplar, o solvente de recristalização contém cerca de 3 : 1 tolueno: solvente de hidrocarboneto. Em uma modalidade exemplar, o solvente de recristalização contém cerca de 4 : 1 tolueno: solvente de hidrocarboneto. Em uma modalidade exemplar, o solvente de hidrocarboneto é um membro selecionado de heptano, octano, hexano, pentano e nonano. Em uma modalidade exemplar, o solvente de recristalização é 3:1 tolueno: heptano.
Estratégia de preparação de ácido borônico #2
No Esquema 2, Etapa 6, o composto 2 é convertido em ácido borônico (6) por meio de uma reação de acoplamento cruzado catalisada por um metal de transição. 0 Composto 2 é tratado com 1 a 3 equivalentes de bis(pinacolato)diboro ou 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano na presença de catalisador de metal de transição, com o uso de um ligante e uma base apropriados, como necessário. Catalisadores de metal de transição adequados incluem acetato de paládio(II), acetoacetonato de paládio(II), tetrakis(trifenilfosfina) paládio, diclorobis (trifenilfosfina)paládio, [1,11-bis(difenilfosfino) ferroceno]dicloropaládio(II), combinações destes, e semelhantes. O catalisador pode ser usado em quantidades que variam de 1 a 5 mol% em relação ao composto 2. Ligantes adequados incluem trifenilfosfina, tri(o-tolil)fosfina, triciclohexilfosfina, combinações destes, e semelhantes. O ligante pode ser usado em quantidades que variam de 1 a 5 equivalentes em relação ao composto 2. Bases adequadas incluem carbonato de sódio, carbonato de potássio, fenóxido de potássio, trietilamina, combinações destes, e semelhantes. A base pode ser usada em quantidades que variam de 1 a 5 equivalentes em relação ao composto 2.
Solventes adequados incluem N,N-dimetilformamida, dimetilsulfóxido, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, tolueno, combinações destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de 20°C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 50 e 150°C; os tempos para o término da reação variam de 1 a 72 horas.
Ester de pinacol é então clivado de forma oxidativa para gerar o composto 6. O éster de pinacol é tratado com periodato de sódio, seguido por ácido. Periodato de sódio pode ser usado em quantidades que variam de 2 a 5 equivalentes em relação ao composto 6. Solventes adequados incluem tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetonitrila, metanol, etanol, combinações destes, e semelhantes. Ácidos adequados incluem ácido clorídrico, ácido hidrobrômico, ácido sulfúrico, combinações destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de O°C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 0 e 50°C; os tempos para o término da reação variam de 1 a 72 horas.
Na Etapa 7, o grupo carbonil do composto 6 é tratado com um agente redutor em um solvente apropriado para gerar um composto da invenção. Agentes redutores adequados incluem complexos de borano, por exemplo, borano- tetrahidrofurano, borano-dimetilsulfito, combinações destes, e semelhantes. Hidreto de litio alumínio ou borohidreto de sódio também podem ser usados como agentes redutores. Os agentes redutores podem ser usados em quantidades que variam de 0,5 a 5 equivalentes em relação ao composto 6. Solventes adequados incluem álcool inferior como, por exemplo, metanol, etanol, e propanol, éter dietilico, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano e 1,2- dimetoxietano, combinações destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de O0C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos para o término da reação variam de 1 a 24 horas.
Esquema 2
<formula>formula see original document page 149</formula>
Estratégia de preparação de ácido borônico #3
No Esquema 3, Etapa 8, compostos da invenção podem ser preparados em uma etapa a partir do composto 3. 0 Composto 3 é misturado com borato de trialquila, depois tratado com reagente de alquilmetal. Reagentes de alquilmetal adequados incluem n-butillítio, sec-butillítio, terc-butillítio combinações destes, e semelhantes. Boratos de trialquila adequados incluem borato de trimetila, borato de triisopropila, borato de tributila, combinações destes, e semelhantes. A adição de butillítio é realizada entre -100 e 0°C, preferivelmente entre -80 e -40°C. Permite-se que a mistura de reação aqueça até a temperatura ambiente após a adição. Os tempos até o término da reação variam de 1 a 12 horas. 0 borato de trialquila pode ser usado em quantidades que variam de 1 a 5 equivalentes em relação ao composto 3. O reagente de alquilmetal pode ser usado em quantidades que variam de 1 a 2 equivalentes em relação ao composto 3.
Solventes adequados incluem tetrahidrofurano, éter, 1,4- dioxano, 1,2-dimetoxietano, tolueno, hexanos, combinações destes, e semelhantes. Os tempos até o término da reação variam de 1 a 12 horas. Alternativamente, uma mistura do composto 3 e borato de trialquila pode ser refluída por 1 a 3 horas, e a molécula de álcool formada mediante a troca de éster pode ser retirada por destilação, antes da adição de reagente de alquilmetal.
Esquema 3
<formula>formula see original document page 150</formula>
Estratégia de preparação de ácido borônico #4
No Esquema 4, Etapa 10, o grupo metil do composto 7 é brominado com o uso de N-bromossuccinimida. N- bromossuccinimida pode ser usada em quantidades que variam de 0,9 a 1,2 equivalente em relação ao composto 7. Solventes adequados incluem carbono tetracloreto, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, clorobenzeno, combinações destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de 20 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 50 e 150°C; os tempos para o término da reação variam de 1 a 12 horas.
Na Etapa 11, o grupo bromometileno do composto 8 é convertido no álcool benzílico 3. 0 Composto 8 é tratado com acetato de sódio ou acetato de potássio. Esses acetatos podem ser usados em quantidades que variam de 1 a 10 equivalentes em relação ao composto 8. Solventes adequados incluem tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, N, N- dimetilformamida, N,W-dimetilacetamida, N-metilpirrolidona, dimetilsulfóxido, combinações destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de 2 O0C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 50 e 100°C; os tempos para o término da reação variam de 1 a 12 horas. 0 acetato resultante é hidrolisado no composto 3 sob condições básicas. Bases adequadas incluem hidróxido de sódio, hidróxido de lítio, hidróxido de potássio, combinações destes, e semelhantes. A base pode ser usada em quantidades que variam de 1 a 5 equivalentes em relação ao composto 8. Solventes adequados incluem metanol, etanol, tetrahidrofurano, água, combinações destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de 20°C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 50 e 100°C; os tempos para o término da reação variam de 1 a 12 horas. Alternativamente, o composto 8 pode ser convertido diretamente no composto 3 sob a condição similar acima.
As Etapas 3 a 5 convertem o composto 3 em um composto da invenção.
Esquema 4 Etapa 10
<formula>formula see original document page 152</formula>
Etapa 11
<formula>formula see original document page 152</formula>
Estratégia de preparação de ácido borônico #5
No Esquema 5, Etapa 12, composto 2 é tratado com (metoximetil) cloreto de trifenilfosfônio ou brometo de (metoximetil)trifenilfosfônio na presença de base, seguido por hidrólise ácida para gerar o composto 9. Bases adequadas incluem hidreto de sódio, terc-butóxido de potássio, diisopropilamida de litio, butillítio, hexametildisilazano de litio, combinações destes, e semelhantes. 0 sal de (metoximetil)trifenilfosfônio pode ser usado em quantidades que variam de 1 a 5 equivalentes em relação ao composto 2. A base pode ser usada em quantidades que variam de 1 a 5 equivalentes em relação ao composto 2. Solventes adequados incluem tetrahidrofurano, 1,2-dimetoxietano, 1,4-dioxano, éter, tolueno, hexano, N,N- dimetilformamida, combinações destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de 0°C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 0 e 30°C; os tempos para o término da reação variam de 1 a 12 horas. O enoléter formado é hidrolisado sob condições ácidas. Ácidos adequados incluem ácido clorídrico, ácido hidrobrômico, ácido sulfúrico, e semelhantes. Solventes adequados incluem tetrahidrofurano, 1,2-dimetoxietano, 1,4- dioxano, metanol, etanol, combinação destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de 20°C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 50 e 100°C; os tempos para o término da reação variam de 1 a 12 horas.
As Etapas 2 a 5 convertem o composto 9 em um composto da invenção.
Esquema 5
<formula>formula see original document page 153</formula>
Estratégia de preparação de ácido borônico #6
No Esquema 6, composto (I) , em que R1 é H é convertido em composto (I) , em que R1 é alquil por mistura com o álcool correspondente, R10H. Os solventes adequados incluem tetrahidrofurano, 1,2-dimetoxietano, 1,4-dioxano, tolueno, combinações destes, e semelhantes. O álcool (R1OH) também pode ser usado como solvente. As temperaturas de reação variam de 20°C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 50 e 100°C; os tempos para o término da reação variam de 1 a 12 horas.
Esquema 6 <formula>formula see original document page 154</formula>
Estratégia de preparação de ácido borônico #7
No Esquema 7, composto (Ia) é convertido em seu complexo aminoálcool (Ib) . O Composto (Ia) é tratado com HOR1NRlaRlb. O aminoálcool pode ser usado em quantidades que variam de 1 a 10 equivalentes em relação ao composto (Ia) . Solventes adequados incluem metanol, etanol, propanol, tetrahidrofurano, acetona, acetonitrila, 1,2-dimetoxietano, 1,4-dioxano, tolueno, N,N-dimetilformamida, água,
combinação destes, e semelhantes. As temperaturas de reação variam de 20°C até o ponto de ebulição do solvente usado; preferivelmente entre 50 e 100°C; os tempos para o término da reação variam de 1 a 24 horas.
Esquema 7
<formula>formula see original document page 154</formula>
Os compostos da invenção podem ser convertidos em hidratos e solvatos por métodos similares àqueles descritos acima.
I.h.) Esteres borínicos
São conhecidos na técnica métodos de produção de ésteres borinicos, e está incluída no conhecimento daqueles habilitados na técnica a utilização desses métodos a fim de produzir os ésteres borônicos aqui descritos. Exemplos incluem a Patente U.S. N0 10/868.268 e a Patente U.S. Provisória N0 (Processo N0 64507-5021PR, depositado em 2 de maior de 2006), que são aqui incorporadas por referência.
I.i.) 2'-Amino ou 3'-amino ribofuranoses
São conhecidos na técnica métodos de produção de 2 ' - amino ribofuranoses ou 31-amino ribofuranoses, e está incluída no conhecimento daqueles habilitados na técnica a utilização desses métodos a fim de produzir as 21-amino ribofuranoses aqui descritas.
Ashton e cols. (Pedido de Patente do Canadá 2.031.644 (1991)) e Durette e cols. (Pedido de Patente da GB 2.207.678 (1989)) revelam a síntese do material de partida de aminoácido para o composto D5. Hardee e cols., (Pedido Internacional PCT WO 2005020885 (2005)) revelam a síntese do material de partida de nucleosídeo para o composto D6. Sakthivel (Sakthivel e cols., Tet. Let. 46(22): 3.883-3.887 (2005)) Sartorelli e cols., (Publicação de Pedido de Patente U.S. ZUU41163b2); Roberts e cols. (Pedido Internacional PCT WO 2003093290); Liu e cols., Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 20(12): 1.975-2.000 (2001); Minakawa e cols., J. Org. Chem., 64(19): 7.158-7.172 (1999); Daelemans e cols., Molecular Pharmacology, 52(6): 1.157-1.163 (1997) revelam a síntese do material de partida de nucleosídeo para o composto D7.
Exemplos de como se preparar esses compostos são mostrados abaixo: <formula>formula see original document page 156</formula>
Os Compostos 1-14 são produzidos por uma etapa final (Lincecum, T. L. e cols. , S. Molecular Cell, 11: 951-963 (2003); Kim, B.-T. e cols., J. Buli. Korean Chem. Soc., 25: 243-248 (2004) ) :
<formula>formula see original document page 156</formula>
Os Compostos 15-18 são produzidos por uma etapa final (veja Lincecum):
<formula>formula see original document page 156</formula> Métodos para a preparação de dímeros, trímeros e homólogos superiores de pequenas moléculas orgânicas como, por exemplo, aquelas de uso na presente invenção, além de métodos de funcionalização de uma molécula estrutural polifuncional, são conhecidos por aqueles habilitados na técnica. Por exemplo, uma amina aromática da invenção é convertida no isotiocianato correspondente pela ação de tiofosgeno. 0 isotiocianato resultante é acoplado a uma amina da invenção, formando, dessa forma, espécies homo- ou heterodiméricas. Alternativamente, o isotiocianato é acoplado a uma base estrutural que contenha amina, por exemplo, polilisina, formando, dessa forma, um conjugado entre uma armação polivalente e um composto da invenção. Caso se queira preparar uma espécie polivalente hetero- funcionalizada, a polilisina é submarcada com o primeiro isotiocianato e subseqüentemente marcada com um ou mais isotiocianatos diferentes. Alternativamente, uma mistura de isotiocianatos é adicionada à base estrutural. A purificação procede por, por exemplo, cromatografia por exclusão de tamanho, diálise, nanofiltração, e semelhantes. II. Ensaios para inibidores de domínios de edição de tRNA sintase
Técnicas conhecidas de genética e de biologia molecular são usadas para a identificação de compostos que se ligam e/ou inibem o domínio de edição de uma tRNA sintetase. Além disso, essas técnicas também são utilizadas para distinguir se um composto se liga e/ou inibe o domínio sintético, o domínio de edição ou tanto o domínio de edição quanto o domínio sintético.
Em um ensaio exemplar, a atividade de um composto representativo contra o domínio de edição foi confirmada. Para identificar o alvo do novo composto antifúngico que contém boro C10, foram isolados mutantes em S. cerevisiae que exibem resistência ao composto C10. A caracterização de 11 mutantes mostrou que eles possuem um aumento de 8-64 vezes na resistência ao C10 em relação ao tipo selvagem. Os mutantes mostraram ainda que são sensíveis a vários agentes antifúngicos com modos de ação conhecidos, sugerindo que o alvo celular de C10 é distinto do alvo dos outros agentes antifúngicos. Isolamento de três plasmídeos diferentes que abrigam CDC60 de bibliotecas de plasmídeos geradas a partir de três mutantes isolados independentemente implicou CDC60, o gene para a leucil-tRNA sintetase citoplasmática, na resistência contra C10. A análise de seqüências de CDC60 dos 11 mutantes revelou que todas as mutações se localizavam no domínio de edição dessa enzima. Em uma série adicional de experimentos, foram introduzidas cópias adicionais do gene de CDC60 em S. cerevisiae, o que deu origem a um aumento de oito vezes da resistência ao C10.
Esses achados confirmam uma forte ligação entre a atividade de edição da enzima e a inibição de CIO, o que implica em um mecanismo inédito de inibição da tRNA sintetase.
Também são aqui apresentados ensaios para determinar se, e com que eficácia, um composto em particular se liga e/ou inibe o domínio de edição de uma tRNA sintetase selecionada, e ensaios adicionais são facilmente acessíveis por aqueles habilitados na técnica. Resumidamente, em um ensaio exemplar, um tRNA carregado inadequadamente e uma tRNA sintetase que é capaz de editar o tRNA carregado inadequadamente são combinados. A mistura resultante é colocada em contato com o suposto inibidor, e o grau de inibição da edição é observado.
Outro ensaio utiliza a genética para mostrar que um fármaco funciona por meio do domínio de edição. Nesse ensaio, o composto primeiro é testado contra uma cepa de células que superexpressam cópias do gene de tRNA sintetase. O efeito do composto sobre a cepa que superexpressa é comparado com uma cepa de controle para determinar se o composto é ativo contra a sintetase. Caso a concentração inibidora mínima (MIC) seja 2 vezes maior na cepa com cópias extras do gene de sintetase do que a MIC do inibidor contra uma célula do tipo selvagem, é feita uma varredura genética adicional para determinar se a resistência aumentada é causada por mutações no domínio de edição. Nessa segunda varredura, a cepa de controle é atacada contra uma concentração elevada do inibidor. As colônias que sobrevivem ao ataque são isoladas e o DNA dessas células é isolado. O domínio de edição é amplificado com o uso de uma enzima de revisão de PCR e dos iniciadores apropriados. O produto de PCR pode ser purificado com o uso de procedimentos padronizados. O DNA mutante da seqüência amplificada é comparado com o do tipo selvagem. Caso o mutante DNA abrigue mutações no domínio de edição, esses resultados sugeririam que o composto se liga ao domínio de edição e afeta a função de edição da molécula por meio desse domínio.
Os ensaios apresentados acima são úteis essencialmente em qualquer sistema microbiano, por exemplo, bacteriano, fúngico, parasítico, viral, e semelhantes.
Geralmente, os compostos a serem testados estão presentes nos ensaios em faixas de cerca de 1 pM a cerca de 100 mM, preferivelmente, de cerca de 1 pM a cerca de 1 μΜ. Outros compostos variam de cerca de 1 nM a cerca de 100 nM, preferivelmente, de cerca de 1 nM a cerca de 1 μΜ.
Os efeitos dos compostos de teste sobre a função das enzimas também podem ser medidos por qualquer mudança fisiológica adequada. Quando as conseqüências funcionais são determinadas com o uso de células ou animais intactos, pode-se também medir diversos efeitos, tais como liberação de transmissor, liberação de hormônio, mudanças da transcrição de marcadores genéticos tanto conhecidos quanto não caracterizados, mudanças no metabolismo celular como, por exemplo, crescimento celular ou mudanças do pH, e mudanças em segundos mensageiros intracelulares como, por exemplo, Ca2+ ou nucleotídeos cíclicos.
A varredura de alto rendimento (HTS) também é útil na identificação de candidatos promissores da invenção.
Com a utilização dos ensaios aqui apresentados e de outros facilmente disponíveis na técnica, aqueles habilitados na técnica serão capazes de determinar fácil e rotineiramente outros compostos e classes de compostos que operam para se ligar e/ou inibir o domínio de edição de tRNA sintetases.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método para a identificação de um composto que se liga a um domínio de edição de uma tRNA sintetase, que compreende: a) o contato do referido domínio de edição com um composto de teste, sob condições adequadas à ligação; e b) detecção da ligação do referido composto de teste ao referido domínio de edição. Em uma modalidade exemplar, a detecção da ligação do referido composto compreende o uso de pelo menos um elemento detectável, isótopo, ou marcador químico anexado ao referido composto. Em uma modalidade exemplar, o elemento, isótopo ou marcador químico é detectado por uma leitura fluorescente, luminescente, radioativa ou de absorbância. Em uma modalidade exemplar, o contato do referido composto de teste com o referido domínio de edição também inclui o contato adicional do referido composto de teste e do referido domínio de edição com um membro selecionado de: AMP e uma molécula com uma adenosina terminal. Em uma modalidade exemplar, a referida tRNA sintetase é derivada de um membro selecionado de alanil tRNA sintetase, isoleucil tRNA sintetase, leucil tRNA sintetase, metionil tRNA sintetase, lisil tRNA sintetase, fenilalanil tRNA sintetase, prolil tRNA sintetase, treonil tRNA sintetase e valil tRNA sintetase. Em uma modalidade exemplar, a tRNA sintetase é derivada de leucil tRNA sintetase. Em uma modalidade exemplar, a tRNA sintetase é derivada de uma tRNA sintetase mutada, em que a referida tRNA sintetase mutada compreende mutações de aminoácidos em um domínio de edição. Em outra modalidade exemplar, a tRNA sintetase mutada compreende mutações de aminoácidos no domínio de edição, como listado na Tabela 4. Em outra modalidade exemplar, o referido domínio de edição de uma tRNA sintetase compreende a seqüência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. Nos: 1-15.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método para a identificação de um composto que se liga a um domínio de edição de uma tRNA sintetase, o referido ensaio compreendendo: a) o contato do referido domínio de edição de uma tRNA sintetase cora o referido composto sob condições adequadas à ligação do referido composto com o referido domínio de edição de uma tRNA sintetase; b) comparação de uma atividade biológica do referido domínio de edição de uma tRNA sintetase por contato do referido composto com a referida atividade biológica quando não em contato com o referido composto; e c) identificação do referido composto como se ligando ao referido domínio de edição de uma tRNA sintetase, caso a referida atividade biológica do referido domínio de edição de uma tRNA sintetase seja reduzida quando em contato com o referido composto. Em uma modalidade exemplar, a atividade biológica é a hidrólise de aminoácido não cognato. Em outra modalidade exemplar, A hidrólise do referido aminoácido não cognato é detectada por meio do uso de ura ou mais marcadores. Em outra modalidade exemplar, os marcadores incluem um marcador radioativo, um marcador fluorescente, um anticorpo, ou uma combinação destes. Em outra modalidade exemplar, os referidos marcadores podem ser detectados com a utilização de espectroscopia. Em outra modalidade exemplar, o domínio de edição de uma tRNA sintetase é derivado de um membro selecionado de alanil tRNA sintetase, isoleucil tRNA sintetase, leucil tRNA sintetase, metionil tRNA sintetase, lisil tRNA sintetase, fenilalanil tRNA sintetase, prolil tRNA sintetase, treonil tRNA sintetase, e valil tRNA sintetase. Em outra modalidade exemplar, o referido domínio de edição de uma tRNA sintetase é derivado de leucil tRNA sintetase.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de geração de moléculas de tRNA com aminoácido não cognato, que compreende: a) a criação ou o isolamento de uma tRNA sintetase mutada com domínios de edição de aminoácidos alterados; e b) o contato de uma molécula de tRNA com a referida tRNA sintetase mutada e um aminoácido não cognato.
Em outra modalidade exemplar, a tRNA sintetase mutada contém uma ou mais mutações de aminoácidos em um domínio de edição. Em outra modalidade exemplar, a tRNA sintetase mutada é incapaz de se ligar a 1,3-diidro-5-flúor-1- hidróxi-2,1-benzoxaborol. Em outra modalidade exemplar, a tRNA sintetase mutada é capaz de se ligar a 1,3-diidro-5- flúor-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol.
Em outro aspecto, a invenção fornece uma composição que compreende uma ou mais moléculas de tRNA anexadas a aminoácidos não cognatos, em que as referidas moléculas de tRNA são sintetizadas com o uso de uma ou mais tRNA sintetases mutadas isoladas de um microorganismo ou uma linhagem de células derivada de um microorganismo. Em uma modalidade exemplar, o microorganismo é um fungo ou uma levedura. Em uma modalidade exemplar, em que a referida tRNA sintetase mutadas contém mutações de aminoácidos em seus domínios de edição. Em uma modalidade exemplar, as referidas tRNA sintetases mutadas compreendem mutações pontuais no domínio de edição, como listado na Tabela 4.
III. Seqüências de aminoácidos e nucleotídeos usadas em ensaios
Seqüências de tRNA que interagem com o complexo tRNA sintetase-ClO-AMP
RNAs de transferência (tRNAs) traduzem mRNA em uma proteína em um ribossomo. Cada RNA de transferência contém uma região anticódon que hibridiza com mRNA, e um aminoácido que pode ser anexado ao peptídeo em crescimento. 0 gene estrutural de tRNA tem comprimento de cerca de 72 a 90 nucleotídeos, e se dobra em uma estrutura em folha de trevo (Sharp S. J., Schaack J., Coolen L., Burke D.J. e Soll D., "Structure and transcription of eukaryotic tRNA genes", Crit. Rev. Biochem., 19: 107-144 (1985); Geiduschek E.O., e Tocchini-Valentini, "Transcription by RNA polimerase III", Annu. Rev. Biochem. 57: 873-914 (1988)).
Em uma modalidade, ClO entra em contato com AMP e uma tRNA sintetase, e a tRNA sintetase, por sua vez, entra em contato com uma molécula de tRNA. Em outra modalidade, ClO entra em contato com AMP das moléculas de tRNA e uma tRNA sintetase. A seqüência de nucleotídeos da molécula de tRNA pode ser determinada pela identidade da tRNA sintetase envolvida. Por exemplo, para leucil tRNA sintetase, a molécula de tRNA cognata ligada será tRNA-Leucina (ID. DE SEQ. N°: 3), mas um tRNA não cognato, por exemplo, isoleucina (ID. DE SEQ. N°: 4), pode estar ligado sob certas condições. Nessa e em outras modalidades, o termo "não cognato" visa englobar as formas tanto no singular quanto no plural da palavra, ou seja, a frase "aminoácido não cognato" compreende um ou mais aminoácidos.
0 ID. DE SEQ. N°: 3 corresponde à seqüência de nucleotídeos do gene de tRNA-Leu de Saccharomyces cerevisiae: gggagtttgg ccgagtggtt taaggcgtca gatttaggct ctgatatctt cggatgcaagggttcgaatc ccttagctct cacca.
0 ID. DE SEQ. N°: 4 corresponde à seqüência de nucleotídeos do gene de tRNA-Ile de Saccharomyees cerevisiae: gaaactataa ttcaattggt tagaatagta llltgataag gtacaaatat aggttcaatc cctgttagtt tcatcca. Polipeptídeos usados em ensaios de ligação e de inibição
Em alguns ensaios de ligação e de inibição, é mais eficaz utilizar uma porção de uma molécula de tRNA sintetase em vez da própria proteína inteira. Em alguns ensaios, polipeptídeos derivados de tRNA sintetases são usados no experimento.
Em uma modalidade preferida, são usados fragmentos de polipeptídeos que correspondem ao domínio de edição de uma molécula de tRNA sintetase em experimentos de ensaio e de ligação. Dois desses fragmentos são representados pelo ID. DE SEQ. N°: Ie pelo ID. DE SEQ. N°: 2.
ID. DE SEQ. N0 1:
TPQEY lüVKIEALEFADDAAKriDSSSDLDKSKXP YFV AATLRPFTM YGQTCCF VSPTIEYGlFDAGDSYFrrTERAFKNMSYQKLTPKRGFYICPIVTVPGICAFIGTKI HAPQSVYPELRILPMETYIATKGTGVVTCVPSNSPDDYITTKDLLHKPEYYGÍK PEWIDHEIVPIMHTEKYGDLTAKAIVEEKKJQSPKDKNLLAEAKKIAYKEDYY TGTMIYGP YKGEKV EQAKNKVKADMIA AGEAFVYNEPESQDP
ID. DE SEQ. N0 2:
MTPQEYIGVKÍEALEFADDAAKI1DSSSDLDKSKKFYFVAATLRPETMYGQTC CFVSPlIEYGIFDAGDSYTriTERAFKNMSYQKLTPKRGFYKPIVTVPGKAFIGT KIHAPQSVYPELRILPMETVIATKGTGV VTC VPSNSPDDYnTKDLLHKPEY YG IKPEWIDHEíVPlMHTEKYGDLTAKAIVEEKíaQSPKDÍ^LLAEAKKIAYKED YYTGTMIYGP YKGEKVEQ AKNTC VKADMIA AGE AF V YNEPES QDP QDP jNS S S VDKLAAALEHiniITH
IV. Métodos para inibição do domínio de edição de tRNA sintetase
De acordo com outro aspecto da invenção, é fornecido um método para ligação a e/ou inibição do domínio de edição de uma tRNA sintetase, que compreende o contato de uma tRNA sintetase com um composto que inibe o domínio de edição sob as condições em que a tRNA sintetase interage com seu substrato para formar um intermediário aminoacil adenilato e, preferivelmente, para formar um tRNA carregado. Essas condições são conhecidas por aqueles habilitados na técnica. Em uma modalidade exemplar, o composto é um dos aqui descritos. A tRNA sintetase é colocada em contato com uma quantidade de inibidor suficiente para resultar em uma quantidade detectável de inibição da tRNA sintetase. 0 método pode ser realizado em uma tRNA sintetase que esteja contida dentro de um organismo ou que esteja fora de um organismo. Em uma modalidade exemplar, o método é realizado em uma tRNA sintetase que está contida dentro de um microorganismo ou de uma célula microbiana que está dentro ou na superfície de um ser humano ou de um animal. 0 método resulta em uma diminuição na quantidade de tRNA carregado produzido pela tRNA sintetase que tem um domínio de edição inibido. Em uma modalidade exemplar, a inibição ocorre em uma célula, por exemplo, uma célula microbiana. Em outra modalidade exemplar, a célula microbiana é uma bactéria, um fungo, uma levedura ou um parasita. Em outra modalidade exemplar, a tRNA sintetase é uma tRNA sintetase mitocondrial ou uma tRNA sintetase citoplasmática.
Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um método de inibição da conversão de uma molécula de tRNA em uma molécula de tRNA carregada. 0 método envolve o contato de uma tRNA sintetase com um composto eficaz para inibir a atividade de um domínio de edição da referida tRNA sintetase, sob condições suficientes para inibir a referida atividade, inibindo, dessa forma, a referida conversão, em que o composto é um membro selecionado daqueles compostos aqui descritos. Em uma modalidade exemplar, o composto é um membro selecionado de um éster borônico cíclico, um éster borínico cíclico, uma porção de 2'-amino ribofuranose, e uma porção de 31-amino ribofuranose. Em uma modalidade exemplar, a inibição ocorre dentro de uma célula, e a célula é uma célula microbiana. Em outra modalidade exemplar, a célula microbiana é um membro selecionado de uma bactéria, um fungo, uma levedura e um parasita. Em uma modalidade exemplar, a tRNA sintetase é um membro selecionado de uma tRNA sintetase mitocondrial e uma tRNA sintetase citoplasmática. Em outra modalidade exemplar, a tRNA sintetase é um membro selecionado de alanil tRNA sintetase, isoleucil tRNA sintetase, leucil tRNA sintetase, metionil tRNA sintetase, lisil tRNA sintetase, fenilalanil tRNA sintetase, prolil tRNA sintetase, treonil tRNA sintetase e valil tRNA sintetase. Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma KDi síntese acima de 100 μΜ contra um domínio sintético da referida tRNA sintetase.
Em certas modalidades, o mecanismo de ação do composto é a inibição da conversão de uma molécula de tRNA em uma molécula de tRNA carregada por ligação e/ou inibição pelo menos do domínio de edição da sintetase. Os compostos de uso nesse método também podem inibir ou de algum outro modo interagir com o domínio sintético (por exemplo, o sítio ativo do domínio sintético). Em uma modalidade atualmente preferida, o domínio de edição é inibido seletivamente na presença do domínio sintético. Em uma modalidade preferida, o domínio sintético é essencialmente não inibido, enquanto o domínio de edição é inibido pelo menos 50%, preferivelmente pelo menos 60%, mais preferivelmente pelo menos 70%, ainda mais pref erivelmente pelo menos 80%, e ainda mais pref erivelmente pelo menos 90% da atividade da tRNA sintetase. Em outra modalidade preferida, o domínio sintético é inibido era, no máximo, 50%, preferivelmente no máximo 30%, preferivelmente no máximo 20%, 10%, preferivelmente no máximo 8%, mais preferivelmente no máximo 5%, ainda mais preferivelmente no máximo 3%, e ainda mais preferivelmente no máximo 1%. A inibição do domínio de edição produz uma diminuição na quantidade do tRNA carregado adequadamente, o que resulta no retardo ou cessação do crescimento e da divisão celulares.
Em outra modalidade exemplar, a proporção de uma concentração mínima do referido composto que inibe o referido domínio de edição em relação a uma concentração mínima do referido composto que inibe o referido domínio sintético da referida tRNA sintetase, representada como KD, edição/KD, síntese, é menor do que um. Em outra modalidade exemplar, a KDi edição/KD, síntese do composto é um valor selecionado de menos de 0,5, menos de 0,1 e menos de 0,05. V. Métodos de inibição do crescimento de microorganismo ou de morte de microorganismos
Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método para inibição do crescimento, ou para a morte, de um microorganismo, preferivelmente uma bactéria, um fungo, um vírus, uma levedura ou um parasita, que compreende o contato do microorganismo com um inibidor de uma tRNA sintetase, por exemplo, um composto descrito por uma fórmula aqui listada, sob condições que permitem a entrada do composto dentro do organismo. Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método para inibição do crescimento, ou para a morte, de um microorganismo, preferivelmente uma bactéria, um fungo, um vírus, uma levedura ou um parasita, que compreende o contato do microorganismo com um composto que é um membro selecionado das Fórmulas (I), (Ia), (Ib) , (Ic) , (Id) (Ie) , (If) , (Ig) , (Ih) (li), (Ij) , (Ik) , (Il) (Im) , (In), (Io), (Ip) (Iq) , (Ir), (Is) , (It) , (Iu) , (Iv) , (Iw) , (Ix) (Iy) , (Iz) , (Iaa) , (Iab) , (Iac) , (Iad) , (Iae) , (Iaf) , (Iag) , (Iah) , (Iai) , (Iaj) , (Iak), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (III), (VIII), (VIIIa), (VIIIb), (VIIIc) , (VIIId) , (VIIIe) , (IX) , por exemplo, um composto descrito por uma fórmula aqui listada, sob condições que permitem a entrada do composto dentro do organismo. Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método para inibição do crescimento, ou para a morte, de um microorganismo, preferivelmente uma bactéria, um fungo, um vírus, uma levedura ou um parasita, que compreende o contato do microorganismo com um composto que é descrito na Figura 19 ou Figura 20, por exemplo, um composto descrito por uma fórmula aqui listada, sob condições que permitem a entrada do composto dentro do organismo. Em uma modalidade exemplar, o composto inibe a tRNA sintetase através do domínio de edição da sintetase. Essas condições são conhecidas por aqueles habilitados na técnica, e condições específicas são apresentadas nos Exemplos em anexo. O método envolve o contato de uma célula microbiana com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor do domínio de edição para inibir tRNA sintetase in vivo ou in vitro.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de inibição do crescimento de um microorganismo, ou de morte de um microorganismo, ou ambos, que compreende o contato do microorganismo com um composto aqui descrito.
Microorganismos são membros selecionados de fungos, levedura, vírus, bactérias e parasitas. Em outra modalidade exemplar, o microorganismo está dentro, ou na superfície, de um animal. Em uma modalidade exemplar, o animal é um membro selecionado de um ser humano, gado, veado, rena, cabra, abelha européia, porco, carneiro, cavalo, vaca, touro, cachorro, porquinho-da-índia, gerbo, coelho, gato, camelo, iaque (boi tibetano), elefante, avestruz, lontra, galinha, pato, ganso, galinha-d'angola, pombo, cisne e peru. Em outra modalidade exemplar, o animal é um ser humano.
Em uma modalidade exemplar, o microorganismo é um membro selecionado de um fungo e uma levedura. Em outra modalidade exemplar, o fungo ou levedura é um membro selecionado de espécies de Candida, espécies de Trichophyton, espécies de Microsporium, espécies de Aspergillus, espécies de Cryptococcus, espécies de Blastomyees, espécies de Coeeiodiodes, espécies de Histoplasma, espécies de Paraeoeeidiodes, espécies de Phycomyeetes, espécies de Malassezia, espécies de Fusarium, espécies de Epidermophyton, espécies de Seytalidiuml espécies de Scopulariopsis, espécies de Alternaria, espécies de Penieillium, espécies de Phialophora, espécies de Rhizopus, espécies de Scedosporium e classe de Zygomyeetes. Em outra modalidade exemplar, o fungo ou levedura é um membro selecionado de Aspergillus fumigatus (A. fumigatus), Blastomyees dermatitidis, Candida albieans (C. albieans, tanto cepas sensíveis quanto resistentes ao fluconazol), Candida glabrata (C. glabrata), Candida krusei (C. krusei), Cryptoeoeeus neoformans (C. neoformans), Candida parapsilosis (C. parapsilosis), Candida tropiealis (C. tropicalis), Cocciodiodes immitis, Epidermophyton floccosum (Ε. floccosum), Fusarium solani (F. solani) , Histoplasma capsulatum, Malassezia furfur (M. furfur) , Malassezia pachydermatis (M. pachydermatis) , Malassezia sympodialis (M. sympodialis), Microsporum audouinii (M. audouinii) , Microsporum canis (M. canis) , Microsporum gypseum (Aí. gypseum) , Paracoccidiodes brasiliensis e Phyeomyeetes spp., Triehophyton mentagrophytes (T. mentagrophytes) , Trichophyton rubrum {T. rubrum) , Triehophyton tonsurans (T. tonsurans) . Em outra modalidade exemplar, o fungo ou levedura é um membro selecionado de Triehophyton eoneentrieum, T. violaeeum, T. sehoenleinii, T. verrucosum, T. soudanense, Microsporum gypseum, M. equinum, Candida guilliermondii, Malassezia globosa, M. obtuse, M. restrieta, M. slooffiae e Aspergillus flavus. Em outra modalidade exemplar, o fungo ou levedura é um membro selecionado de dermatófitos, Triehophyton, Mierosporum, Epidermophyton e fungos do tipo levedura.
Em uma modalidade exemplar, o microorganismo é uma bactéria. Em uma modalidade exemplar, a bactéria é uma bactéria gram-positiva. Em outra modalidade exemplar, a bactéria gram-positiva é um membro selecionado de espécies de Staphyloeoeeus, espécies de Streptoeoceus, espécies de Baeillus, espécies de Myeobaeterium, espécies de
Corynebaeterium (espécies de Propionibaeterium) , espécies de Clostridium, espécies de Aetinomyees, espécies de Enteroeoeeus e espécies de Streptomyees. Em outra modalidade exemplar, a bactéria é uma bactéria gram- negativa. Em outra modalidade exemplar, a bactéria gram- negativa é um membro selecionado de espécies de Acinetobacter, espécies de Neisseria, espécies de Pseudomonas, espécies de Brucellal espécies de Agrobacterium, espécies de Bordetella, espécies de Escheriehia, espécies de Shigella, espécies de Yersinia, espécies de Salmonellal espécies de Klebsiella, espécies de Enterobaeter, espécies de Haemophilus, espécies de Pasteurella, espécies de Streptobacillus, espécies de espiroquetas, espécies de Campilobaeter, espécies de Vibrio e espécies de Helieobaeter. Era outra modalidade exemplar, a bactéria é um membro selecionado de Propionibacterium aenes; Staphyloeoeeus aureus; Staphyloeoeeus epidermidis, Staphyloeoeeus saprophytieus; Streptoeoeeus pyogenes; Streptoeoeeus agalaetiae; Streptoeoeeus pneumoniae;
Enteroeoeeus faeealis; Enteroeoeeus faeeium; Baeillus anthraeia; Myeobaeterium avium - intracelular; Myeobaeterium tuberculosis, Acinetobacter baumanii; Corynebacterium diphtheria; Clostridium perfringens; Clostridium botulinum; Clostridium tetani; Clostridium difficile; Neisseria gonorrhoeae; Neisseria meningitidis ; Pseudomonas aeruginosa; Legionella pneumophila; Escheriehia coli; Yersinia pestis; Haemophilus influenzae; Helicobacter pilori; Campilobacter fetus; Campilobacter jejuni; Vibrio cholerae; Vibrio parahemolyticus; Trepomena pallidum; Actinomyees israelii; Rickettsia prowazekii; Rickettsia rickettsi; Chlamydia trachomatis; Chlamydia psittaci; Brucella abortus; Agrobacterium tumefaciens; e Francisella tularensis.
Em uma modalidade exemplar, o microorganismo é uma bactéria, que é um membro selecionado de bactéria álcool- ácido resistente, incluindo espécies de Mycobacterium; bacilos, incluindo espécies de Bacillus, espécies de Corynebacterium (também Propionibacterium) e espécies de Clostridium; bactérias filamentosas, incluindo espécies de Actinomyces e espécies de Streptomyees; bacilos, tais como espécies de Pseudomonas, espécies de Brueella, espécies de Agrobaeterium, espécies de Bordetella, espécies de Eseheriehia, espécies de Shigella, espécies de Yersinia, espécies de Salmonella, espécies de Klebsiella, espécies de Enterobaeter, espécies de Haemophilus, espécies de Pasteurella, e espécies de Streptobacillus; espécies de espiroquetas, espécies de Campilobaeter, espécies de Vibrio; e bactérias intracelulares, incluindo espécies de Riekettsiae e espécies de Chlamydia.
Em uma modalidade exemplar, o microorganismo é um vírus. Em uma modalidade exemplar, o vírus é um membro selecionado de hepatite A-B, rinovírus humano, vírus da febre amarela, coronavírus respiratório humano, síndrome respiratória aguda grave (SARS), vírus respiratório sincicial, vírus da influenza, vírus da parainfluenza 1-4, vírus da imunodeficiência humana 1 (HIV-I), vírus da imunodeficiência humana 2 (HIV-2), vírus do herpes simples 1 (HSV-I), vírus do herpes simples 2 (HSV-2), citomegalovírus humano (HCMV), vírus da varicela zoster, vírus de Epstein-Barr (EBV), poliovírus, vírus coxsackie, ecovírus, vírus da rubéola, vírus neurodermatrófico, vírus da varíola, papovírus, vírus da raiva, vírus da dengue, vírus do oeste do Nilo e vírus da SARS. Em outra modalidade exemplar, o vírus é um membro selecionado de pieornaviridae, flaviviridae, eoronaviridae, paramyxoviridae, orthomyxoviridae, retroviridae, herpesviridae e hepadnaviridae. Em outra modalidade exemplar, o vírus é um membro selecionado de um vírus incluído na seguinte tabela:
Tabela A. Vírus
<table>table see original document page 174</column></row><table> <table>table see original document page 175</column></row><table> <table>table see original document page 176</column></row><table>
Em outra modalidade exemplar, o microorganismo é um parasita. Em uma modalidade exemplar, o parasita é um membro selecionado de Plasmodium falciparum, P. vivax, P. ovale, P. malariae, P. berghei, Leishmania donovani, L. infantum, L. chagasi, L. mexicana, L. amazonensis, L. venezuelensis, L. tropics, L. major, L. minor, L. aetiopica, L. Biana braziliensis, L. (V) guyanensis, L. (V. ) panamensis, L. (V) peruviana, Trypanosoma brucei rhodesiense, T. brucei gambiense, T. cruzi, Giardia intestinalis, G. lamblia, Toxoplasma gondii, Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis, Pneumocystis carinii e Cryptosporidium parvum.
VI. Métodos de tratamento ou prevenção de infecções
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de tratamento ou prevenção de uma infecção. 0 método inclui a administração ao animal de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da invenção, suficiente para tratar ou evitar a referida infecção. Em uma modalidade exemplar, o composto é um composto aqui descrito. Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com as Fórmulas (I) a (Iak) e (II) a (XI) . Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é descrita na Figura 19. Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é descrita na Figura 20. Em outra modalidade exemplar, o animal é um membro selecionado de um ser humano, gado, veado, rena, cabra, abelha européia, porco, carneiro, cavalo, vaca, touro, cachorro, porquinho- da-índia, gerbo, coelho, gato, camelo, iaque (boi tibetano), elefante, avestruz, lontra, galinha, pato, ganso, galinha-d'angola, pombo, cisne e peru. Em outra modalidade exemplar, o animal é um ser humano. Em outra modalidade exemplar, o animal é um membro selecionado de um ser humano, gado, cabra, porco, carneiro, cavalo, vaca, touro, cachorro, porquinho-da-índia, gerbo, coelho, gato, galinha e peru. Em outra modalidade exemplar, a infecção é um membro selecionado de uma infecção sistêmica, uma infecção cutânea e uma infecção ungueal, periungueal ou subungueal.
Em outra modalidade exemplar, o tratamento de um distúrbio ou uma condição ocorre por meio da inibição de um domínio de edição de uma aminoacil tRNA sintetase.
VI.a) Métodos de tratamento ou prevenção de infecções ungueais e/ou periungueais
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de tratamento ou prevenção de uma infecção ungueal e/ou periungueal. O método inclui a administração ao animal de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou formulação farmacêutica da invenção, suficiente para tratar ou evitar a referida infecção. Em outra modalidade exemplar, o método inclui a administração do composto ou da formulação farmacêutica da invenção em um local selecionado entre a pele, unha, cabelo, casco, garra e a pele que circunda a unha, cabelo, casco e garra.
VI.a) 1) Onicomicose
Onicomicose é uma doença da unha causada por levedura, dermatófitos ou outros bolores, e representa aproximadamente 50% de todos os distúrbios da unha. A infecção da unha do pé é responsável por aproximadamente 80% da incidência de onicomicoses, enquanto as unhas das mãos são afetadas em cerca de 20% dos casos. Os dermatófitos são a causa mais freqüente de invasão da placa ungueal, particularmente na onicomicose das unhas dos pés.
A onicomicose causada por um dermatófito é denominada Tinea unguium. O Trichophyton rubrum é, de longe, o dermatófito mais freqüentemente isolado, seguido por T. mentagrophytes.
A onicomicose subungueal distai é a apresentação mais comum da tinea unguium, com o local de entrada principal através do hiponiquio (a epiderme espessada abaixo da extremidade distai livre de uma unha) , que progride com o tempo para envolver o leito ungueal e a placa ungueal. A descoloração, onicólise, e o acúmulo de restos subungueais e a distrofia da placa ungueal caracterizam a doença. A doença afeta de forma adversa a qualidade de vida de suas vitimas, com as queixas dos indivíduos variando de unhas com má aparência e desconforto com calçados, até complicações mais sérias, que incluem infecções bacterianas secundárias.
São conhecidos muitos métodos para o tratamento de infecções fúngicas, incluindo o uso oral e tópico de antibióticos (por exemplo, nistatina e anfotericina Β) , agentes antifúngicos imidazólicos como, por exemplo, miconazol, clotrimazol, fluconazol, econazol e sulconazol, e agentes antifúngicos não imidazólicos como, por exemplo, os derivados de alilamina terbinafina e naftifina e a benzilamina butenafina.
No entanto, a onicomicose mostrou ser resistente à maioria dos tratamentos. As infecções fúngicas das unhas residem em uma área de difícil acesso pelo tratamento tópico convencional, e os fármacos antifúngicos não conseguem penetrar facilmente na placa ungueal para alcançar os locais da infecção sob a unha. Portanto, a onicomicose tem sido tradicionalmente tratada pela administração oral de fármacos antifúngicos; no entanto, claramente isso é indesejável, em função do potencial de efeitos colaterais desses fármacos, em particular aqueles causados pelos fármacos antifúngicos mais potentes, tais como itraconazol e cetoconazol. Um método de tratamento alternativo de onicomicose é por remoção da unha, antes do tratamento com um agente antifúngico topicamente ativo; um método de tratamento desse tipo é igualmente indesejável. Agentes antimicóticos sistêmicos exigem uso prolongado e possuem o potencial para efeitos colaterais significativos. Os agentes tópicos normalmente têm sido pouco benéficos, principalmente por causa da penetração deficiente dos agentes antifúngicos em e através da massa da unha.
Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um método de tratamento ou prevenção de onicomicose. 0 método inclui a administração a um ser humano ou a um animal de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção, ou de uma formulação farmacêutica da invenção, suficiente para tratar ou evitar onicomicose. Em outra modalidade exemplar, o método inclui a administração da formulação farmacêutica da invenção em um local selecionado entre a pele, unha, cabelo, casco, garra e a pele que circunda a unha, cabelo, casco e garra. Em outra modalidade exemplar, a formulação farmacêutica inclui um composto aqui descrito. 0 método inclui a administração a um ser humano ou a um animal de uma quantidade terapeuticamente eficaz de 1, 3-diidro-5-flúor-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol, suficiente para tratar ou evitar onicomicose.
VI.a) 2) Outras infecções ungueais e periungueais
Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um método de tratamento ou prevenção de uma infecção ungueal ou periungueal em um ser humano ou em um animal. O método compreende a administração ao ser humano ou ao animal de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção, tratando ou evitando, dessa forma, a infecção ungueal ou periungueal. Em uma modalidade exemplar, a infecção ungueal ou periungueal é onicomicose. Em uma modalidade exemplar, a infecção ungueal ou periungueal é um membro selecionado de onicomicose, cloroníquia, paroniquias, erisipelóide, onicorrexia, gonorréia, granuloma da piscina, larva migrans, lepra, nódulo de Orf, nódulos dos ordenhadores, panarício herpético, paroniquias bacteriana aguda, paroniquias crônica, esporotricose, sífilis, cútis verrucosa da tuberculose, tularemia, tungíase, verrugas peri- e subungueais, zona, distrofia ungueal (traquioniquia) e doenças dermatológicas com um efeito sobre as unhas, por exemplo, psoríase, psoríase pustular, alopecia aerata, paraceratose pustular, dermatose de contato, síndrome de Reiter, dermatite acral psoriasiforme, líquen plano, atrofia idiopática nas unhas, lichin nitidus, liquen estriado, nevos epidérmico inflamatório linear verrucoso (ILVEN), alopecia, pênfigo, penfigóide bolhoso, epidermólise bolhosa adquirida, doença de Darier, ptiriase rubra pilar, queratoderma palmo- plantar, eczema de contato, eritema polimórfico, sarna, slndrome de Bazex, escleroderma sistêmico, lúpus eritematoso sistêmico, lúpus eritematoso crônico, dermatomiosite.
Os compostos e formulações farmacêuticas da invenção úteis para aplicações ungueais e periungueais também encontram aplicação no campo dos cosméticos, em particular para o tratamento de irregularidades das unhas, coiloníquia, linhas de Beau, sulcos longitudinais, unhas encravadas.
Em uma modalidade exemplar, a infecção é da pele, da unha, do cabelo, garra ou casco, cabelo, orelha e olhos, e é selecionada de esporotricose, ceratite micótica, oculomicose de extensão, oculomicose endógena, lobomicose, micetoma, Piedra, ptiriase versicolor, tinea corporis, tinea cruris, tinea pedis, tinea barbae, tinea capitis, tinea nigra, otomicose, tinea favosa, cromomicose e tinea imbricata. Em uma modalidade exemplar, o composto útil para o tratamento dessas infecções é 1,3-diidro-5-flúor-1- hidróxi-2,1-benzoxaborol.
VI.b) Métodos de tratamento de doenças sistêmicas
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de tratamento de uma doença sistêmica. 0 método envolve o contato de um animal com um composto da invenção. 0 método de liberação para o tratamento de doenças sistêmicas pode ser oral, intravenoso, transdérmico, por inalação, intraperitoneal e subcutâneo. Em uma modalidade exemplar, o composto administrado é 1,3-diidro-5-flúor-l-hidróxi-2,1- benzoxaborol.
Em uma modalidade exemplar, a infecção é sistêmica e é uma infecção selecionada de candidiase, aspergilose, coccidioidomicose, criptococose, histoplasmose, blastomicose, paracoccidioidomicose, zigomicose, feohifomicose e rinosporidiose.
VI.c) Métodos de tratamento de doenças que envolvem vírus
Os compostos da invenção são úteis para o tratamento de doenças, tanto de animais quanto de seres humanos, que envolvem vírus. Em uma modalidade exemplar, a doença é uma doença selecionada de hepatite A — B — C, febre amarela, sincicial respiratória, influenza, AIDS, herpes simples, catapora, varicela zoster e doença de Epstein-Barr.
VI.d) Métodos de tratamento de doenças que envolvem parasitas
Os compostos da invenção são úteis para o tratamento de doenças, tanto de animais quanto de seres humanos, que envolvem parasitas. Em uma modalidade exemplar, a doença é uma doença selecionada de malária, doença de Chagas, leishmaniose, doença do sono africana (tripanossomíase humana Africana), giardíase, toxoplasmose, amebíase e criptosporidiose.
Em qualquer um dos métodos de acordo com a presente invenção apresentados acima, prefere-se que a aminoacil tRNA sintetase seja uma aminoacil tRNA sintetase que compreende um domínio de edição. 0 domínio de edição é codificado por uma porção da aminoacil tRNA sintetase envolvida na revisão. 0 domínio de edição é codificado preferivelmente por uma porção de DNA que possui pelo menos resíduos conservados comparados após alinhamento com o sítio de edição da leucil-tRNA sintetase, valil-tRNA sintetase e isoleucil-tRNA sintetase. Mais preferivelmente, a sintetase é selecionada do grupo que consiste na valil- tRNA sintetase, isoleucil-tRNA sintetase, leucil-tRNA sintetase, alanil-tRNA sintetase, prolil-tRNA sintetase, treonil-tRNA sintetase, fenil-tRNA sintetase e lisil-tRNA sintetase que são conhecidas por terem um sítio ou domínio de edição (veja, para Ile RS Baldwin, A. N. e Berg, P. (1966) J. Biol. Chem. 241, 839-845 e Eldred, E.W. e Schimmel, P.R. (1972) J. Biol. Chem. 247, 2.961-2.964; para Val RS, Fersht, A. R. e Kaethner, M.M. (1976) Biochemistry. 15 (15), 3.342-3.346; para Leu RS, English, S. e cols. , (1986) Nucleic Acids Research. 14 (19), 7.529-7.539; para Ala RS, Tsui, W.C. e Fersht, A. R. (1981) Nucleie Aeids Research. 9, 7.529-7.539; para Pro RS, Beuning, P.J. e Musier Forsyth, K. (2000) PNAS. 97 (16), 8.916-8.920; para Thr RS, Sankaranarayanan, R. e cols., (2000) Nat. Struct. Biol. 7, 461-465 e Musier-Foryth, K. e Beuning, P.J. (2000) Na t. Struct. Biol. 7, 435-436; para Phe RS, Yarus, M. (1972) PNAS. 69, 1.915-1.919 e para Lys RS, Jakubowski, H. (1997) Biochemistry. 36, 11.077-11.085).
VII. Métodos de penetração ungueal
Acredita-se que a penetração deficiente do agente ativo através do casco ou da placa ungueal e/ou a ligação excessiva à queratina (a principal proteína nas unhas e no cabelo) são as razoes para a baixa eficácia de ciclopirox 8% p/p em esmalte comercial e outros tratamentos tópicos que não obtiveram sucesso em experimentos clínicos. Em casos leves de onicomicose, os fungos patogênicos residem somente na placa ungueal. Em casos de moderados a graves, os fungos patogênicos estabelecem uma presença na placa ungueal e no leito ungueal. Caso a infecção seja eliminada da placa ungueal, mas não do leito ungueal, o patógeno fúngico poderá re-infectar a placa ungueal. Portanto, para tratar eficazmente a onicomicose, a infecção tem que ser eliminada da placa ungueal e do leito ungueal. Para isso, o agente ativo deve penetrar e se disseminar substancialmente por toda a placa ungueal e leito ungueal.
Acredita-se que, a fim de que um agente ativo seja eficaz após disseminado por toda a área infectada, ele deva estar biodisponível ao patógeno fúngico, e não deve estar tão ligado à queratina a ponto de que o fármaco não possa inibir o crescimento ou matar os fungos infectantes.
Uma compreensão de morfologia da placa ungueal sugere certas propriedades físico-quimicas de um agente ativo que facilitariam a penetração da placa ungueal. As propriedades físico-quimicas desejadas serão descritas a seguir. Os compostos testados da presente invenção são capazes de penetrar na placa ungueal e também foram ativos contra Trichophyton rubrum e mentagrophytes e outras espécies. Além disso, os compostos testados também são ativos contra Trichophyton rubrum na presença de pó de queratina 5%.
Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um método de morte ou de inibição do crescimento de um microorganismo presente em uma unidade de unha humana, em que a referida unidade de unha humana compreende uma placa ungueal. 0 método compreende o contato de uma camada dorsal da placa ungueal com um composto capaz de penetrar na placa ungueal, atravessar a placa ungueal até um leito ungueal subjacente à referida placa ungueal, e o contato do referido microorganismo, sob condições suficientes para que o referido composto penetre na referida ungueal. Nessa modalidade, o composto possui um peso molecular entre cerca de 100 Da e cerca de 200 Da, um valor P log entre cerca de 1,0 e cerca de 2,6, uma hidrossolubilidade acima de cerca de 0,1 mg/ml de octanol/água saturada, e uma MIC de menos de 16 pg/ml contra o referido microorganismo, causando, dessa forma, a morte ou a inibição do crescimento do referido microorganismo.
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com a Fórmula (I) aqui descrita. Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com as Fórmulas (Ia)-(Iaa) aqui descritas. Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com um membro selecionado de: Fórmula (I) — (Iaa), em que R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de H, halogênio, ciano, nitro, metóxi substituído ou não substituído, metil substituído ou não substituído, etóxi substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, feniloxi substituído ou não substituído, fenil metóxi substituído ou não substituído, tiofeniloxi substituído ou não substituído, piridiniloxi substituído ou não substituído, pirimidiniloxi substituído ou não substituído, benzilfurano substituído ou não substituído, metiltio substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, feniltio substituído ou não substituído, tiofeniltio substituído ou não substituído, fenil metiltio substituído ou não substituído, piridiniltio substituído ou não substituído, pirimidiniltio substituído OU não substituído, benziltiofuranil substituído OU não substituído, fenilsulfonil substituído OU não substituído, benzilsulfonil substituído OU não substituído, fenilmetilsulfonil substituído OU não substituído, tiofenilsulfonil substituído OU não substituído, piridinilsulfonil substituído OU não substituído, pirimidinilsulfonil substituído OU não substituído, sulfonamidil substituído ou não substituído, fenilsulfinil substituído ou não substituído, benzilsulfinil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfinil substituído ou não substituído, tiofenilsulfinil substituído ou não substituído, piridinilsulfinil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfinil substituído ou não substituído, amino substituído ou não substituído, alquilamino substituído ou não substituído, dialquilamino substituído ou não substituído, trifluormetilamino substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, benzilamino substituído ou não substituído, fenilamino substituído ou não substituído, tiofenilamino substituído ou não substituído, piridinilamino substituído ou não substituído, pirimidinilamino substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, morfolino substituído ou não substituído, alquilamido substituído ou não substituído, arilamido substituído ou não substituído, ureido substituído ou não substituído, carbamoil substituído ou não substituído, e piperizinil substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de H, flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1-etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3 -(butilcarbonil)fenilmetoxi, IH- tetrazol-5-il, 1-etoxicarbonilmetiloxi-, 1- etoxicarbonilmetil-, 1-etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2-iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4 -fluorfeniItio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-((piperidin- 1-il)carbonil)metil, 1-(piperidin-1-il)carbonil)metóxi, 1- (piperidin-2-il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3 - il)carbonil)metóxi, 1-(4-(pirimidin-2 -il)piperazin-1- il)carbonil)metóxi, 1-(4-(pirimidin-2-il)piperazin-1- il)carbonil)metil, l-(4-(pirimidin-2-il)piperazin-1- il)carbonil, 1-4 -(pirimidin-2-il)piperazin-l-il, l-(4- (piridin-2-il)piperazin-l-il)carbonil), 1-(4-(piridin-2- il)piperazin-1-il)carbonilmetil, (1-(4-(piridin-2- il)piperazin-l-il)carbonil)metóxi), 1-(4-(piridin-2- il)piperazin-1-il, ΙΗ-indol-l-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, morfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-lH-indol-l-il, 3- (2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il, benzilamino, 5-metóxi-3- (feniltio)-ΙΗ-indol-l-il, 5-metóxi-3-((2-cianoetiltio)-IH- indol-l-il), 5-cloro-IH-indol-1-il, 5-cloro-3-((2- cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il), dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-ΙΗ-indol-l-il), 4-(lH-tetrazol-5- il)fenóxi, 4-(lH-tetrazol-5-il)fenil, 4-(lH-tetrazol-5- il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3-cianofenoxi, 4-cianofenoxi, 2-cianofeniltio, 3-cianofeniltio, 4-cianofeniltio, 2- clorofenoxi, 3-clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2-fluorfenoxi, 3-fluorfenoxi, 4-fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3- cianobenziloxi, 4-cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3- clorobenziloxi, 4-clorobenziloxi, 2-fluorbenziloxi, 3- fluorbenziloxi e 4 -fluorbenziloxi. Em outra modalidade exemplar, R9a é H e R12 é H. Em outra modalidade exemplar, o composto é 1,3-diidro-5-flúor-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol.
Em outra modalidade exemplar, a invenção fornece um método de tratamento de uma doença causada por um microorganismo presente em uma unidade de unha humana, em que a referida unidade de unha humana compreende uma placa ungueal, o referido método compreendendo: o contato de uma camada dorsal da placa ungueal com um composto capaz de penetrar na placa ungueal, atravessar a placa ungueal até um leito ungueal subjacente à referida placa ungueal, e o contato do referido microorganismo, sob condições suficientes para que o referido composto penetre na referida ungueal e para tratar a referida doença. Nessa modalidade, o composto possui um peso molecular entre cerca de 100 Da e cerca de 200 Da; um valor P log entre cerca de 1,0 e cerca de 2,6; uma hidrossolubilidade acima de cerca de 0,1 mg/ml de octanol/água saturada, e uma MIC de menos de 16 pg/ml contra o referido microorganismo, tratando, dessa forma, a referida doença. Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com a Fórmula (I) aqui descrita. Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um membro selecionado entre as Fórmulas (Ia)-(Iaa) aqui descritas.
Em outro aspecto, a invenção fornece um método de liberação de um composto da camada dorsal da placa ungueal ao leito ungueal. 0 método compreende o contato da célula com um composto capaz de penetrar na placa ungueal, sob condições suficientes para penetrar na unha. 0 composto possui um peso molecular entre cerca de 100 e cerca de 200 Da. O composto também possui um valor P Iog entre cerca de 1,0 e cerca de 2,6. 0 composto adicionalmente possui uma hidrossolubilidade entre cerca de 0,1 mg/ml e 1 g/ml de octanol/água saturada, liberando, dessa forma, o referido composto.
Em uma modalidade preferida, as propriedades físico- químicas do composto da invenção, descritas por quantidades previstas para migração do composto através da placa ungueal, incluindo, sem limitação, peso molecular, Iog P e hidrossolubilidade, e semelhantes, são eficazes para fornecer penetração substancial da placa ungueal.
Compostos com um peso molecular de menos de 200 Da penetram na placa ungueal de uma forma superior ao tratamento disponível comercialmente para onicomicoses. Em uma modalidade da presente invenção, o composto possui um peso molecular entre 130 e 200. Em outra modalidade desta invenção, o composto possui um peso molecular de cerca de 140 a cerca de 2 00 Da. Em outra modalidade desta invenção, o composto possui um peso molecular de cerca de 170 a cerca de 200 Da. Em outra modalidade desta invenção, o composto possui um peso molecular de cerca de 155 a cerca de 190 Da. Em outra modalidade desta invenção, o composto possui um peso molecular de cerca de 165 a cerca de 185 Da. Em outra modalidade desta invenção, o composto possui um peso molecular de cerca de 145 a cerca de 170 Da. Ainda em outra modalidade, o peso molecular é 151,93 ou 168,39 Da.
Em uma modalidade da presente invenção, o composto possui um valor P log entre cerca de -3,5 a cerca de 2,5. Em outra modalidade exemplar, o composto possui um valor P log de cerca de -1,0 a cerca de 2,5. Em outra modalidade exemplar, o composto possui um valor P Iog de cerca de -1,0 a cerca de 2,0. Em outra modalidade exemplar, o composto possui um valor P log de cerca de -0,5 a cerca de 2,5. Em outra modalidade exemplar, o composto possui um valor P Iog de cerca de -0,5 a cerca de 1,5. Em outra modalidade exemplar, o composto possui um valor P log de cerca de 0,5 a cerca de 2,5. Em outra modalidade exemplar, o composto possui um valor P Iog de cerca de 1,0 a cerca de 2,5. Ainda em outra modalidade exemplar, o composto possui um valor P log de 1,9 ou 2,3.
Também é contemplado pela presente invenção um composto com um valor P Iog menor do que 2,5, com um peso molecular de menos de 200 Da, que ainda é capaz de penetrar na placa ungueal.
Em uma modalidade da presente invenção, o composto possui uma hidrossolubilidade entre cerca de 0,1 mg/ml e 1 g/ml em octanol/água saturada. Em uma modalidade da presente invenção, o composto possui uma hidrossolubilidade entre 0,1 mg/ml e 100 mg/ml. Em outra modalidade desta invenção, o composto possui uma hidrossolubilidade de cerca de 0,1 mg/ml e 10 mg/ml. Em outra modalidade desta invenção, o composto possui uma hidrossolubilidade de cerca de 0,1 mg/ml e 1 mg/ml. Em outra modalidade desta invenção, o composto possui uma hidrossolubilidade de cerca de 5 mg/ml e 1 g/ml. Em outra modalidade desta invenção, o composto possui uma hidrossolubilidade de cerca de 10 mg/ml e 500 g/ml. Em outra modalidade desta invenção, o composto possui uma hidrossolubilidade de cerca de 80 mg/ml e 250 mg/ml.
Em uma modalidade exemplar, a presente invenção fornece um composto com um valor P Iog selecionado de uma faixa acima, com um peso molecular selecionado de uma faixa acima, que ainda é capaz de penetrar na placa ungueal.
Em uma modalidade exemplar, a presente invenção fornece compostos com um peso molecular selecionado de uma faixa acima, com uma hidrossolubilidade selecionada de uma faixa acima, que ainda são capazes de penetrar na placa ungueal.
Em uma modalidade exemplar, a presente invenção fornece compostos com um P Iog selecionado de uma faixa acima, com uma hidrossolubilidade selecionada de uma faixa acima, que ainda são capazes de penetrar na placa ungueal.
Em uma modalidade exemplar, a presente invenção fornece compostos com um peso molecular selecionado de uma faixa acima, com um P Iog selecionado de uma faixa acima e com uma hidrossolubilidade selecionada de uma faixa acima, que ainda são capazes de penetrar na placa ungueal.
A penetração da unha pelo ingrediente ativo pode ser efetuada pela polaridade da formulação. No entanto, não se espera que a polaridade da formulação tenha tanta influência sobre a penetração na unha quanto os outros fatores como, por exemplo, o peso molecular ou o P Iog do ingrediente ativo. A presença de agentes de aumento da penetração na formulação provavelmente aumenta a penetração do agente ativo, quando comparada com formulações similares que não contêm o agente de aumento da penetração.
Alguns exemplos de moléculas com propriedades físico- químicas ótimas são a presentados na tabela abaixo.
<table>table see original document page 192</column></row><table>
0 Composto 3 abaixo é um exemplo de um composto similar em peso molecular ao ciclopirox e, como o ciclopirox, penetra deficientemente na placa ungueal.
<table>table see original document page 192</column></row><table> <table>table see original document page 193</column></row><table>
Em uma modalidade preferida, as formulações tópicas que incluem um composto aqui descrito possuem um peso molecular total de menos de 200 Da, possuem um P Log de menos de 2,5, e uma concentração inibidora mínima contra Trichophyton rubrum que é substancialmente inalterada na presença de queratina 5%.
O coeficiente de eficácia (definido como fluxo sobre MIC) de um composto também informa àqueles habilitados na técnica se o composto pode ser eficaz na morte de um microorganismo, na inibição do crescimento de um microorganismo, ou no tratamento de uma doença que é causada por um microorganismo presente em uma unidade de unha humana, em que a referida unidade de unha humana compreende uma placa ungueal. 0 método compreende o contato de uma camada dorsal da placa ungueal com um composto capaz de penetrar na placa ungueal, atravessar a placa ungueal até um leito ungueal subjacente à referida placa ungueal, e o contato do referido microorganismo, sob condições suficientes para que o referido composto penetre na referida ungueal e para tratar a referida doença, em que o composto possui um coeficiente de eficácia acima de 10.
Em uma modalidade exemplar, o composto possui um coeficiente de eficácia entre cerca de 10 e cerca de 1.000. Em uma modalidade exemplar, o composto possui um coeficiente de eficácia entre cerca de 30 e cerca de 100. Em uma modalidade exemplar, o composto possui um coeficiente de eficácia entre cerca de 100 e cerca de 500. Em uma modalidade exemplar, o composto possui um coeficiente de eficácia entre cerca de 25 e cerca de 200.
Esta invenção ainda se dirige aos métodos para o tratamento de uma infecção fúngica mediada, pelo menos em parte, por dermatófitos, espécies de Trichophyton, Microsporum ou Epidermophyton, ou por fungos do tipo levedura, incluindo espécies de Candida, em um ser humano ou em um animal, cujos métodos compreendem a administração a um ser humano ou a um animal, que recebeu o diagnóstico da referida infecção fúngica ou que esteja em risco de desenvolver a referida infecção fúngica, de uma composição farmacêutica que compreende um diluente farmaceuticamente aceitável e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto aqui descrito ou misturas de um ou mais desses compostos. Em uma modalidade, a infecção é onicomicose.
Os compostos contemplados pela presente invenção podem ter uma atividade antifúngica de amplo espectro e, como tal, podem ser candidatos para uso contra outras infecções cutâneas fúngicas.
Os métodos fornecidos nesse aspecto da invenção são úteis na penetração de unhas e cascos, bem como no tratamento de condições ungueais e periungueais. VIII. Formulações farmacêuticas
Em outro' aspecto, a invenção é uma formulação farmacêutica que inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto da invenção. Em outro aspecto, a invenção é uma formulação farmacêutica que inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto que possui uma estrutura que é uma estrutura selecionada das Fórmulas (I) , (Ia) , (Ib) , (Ic) , (Id) (Ie), (Xf), (Ig), (Ih) (Ii), (Ij), (Ik), (II) (Im), (In), (Ιο), (Ip) (Iq)7 (Ir), (Is), (It), (Iu), (Iv), (Iw), (Ix) (Iy), (Iz), (Iaa), (Iab), (Iac), (Iad), (Iae), (Iaf), (lag), (Iah), (Iai), (Iaj), (Iak), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (III). Em outro aspecto, a invenção é uma formulação farmacêutica que inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto que possui uma estrutura de acordo com as Fórmulas (VIII), (VIIIa), (VIIIb), (VIIIc), (VIIId), (VIIIe). Em outro aspecto, a invenção é uma formulação farmacêutica que inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto que possui uma estrutura que é um membro selecionado de Dl- D19, E1-E19, (VIII), (VIIIa), (VIIIb), (VIIIc), (VIIId), (VIIIe). Em outro aspecto, a invenção é uma formulação farmacêutica que inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um éster borônico aciclico da invenção. Em uma modalidade exemplar, o composto é descrito na Figura 19. Em outra modalidade exemplar, o composto é descrito na Figura 20. Em outra modalidade exemplar, a invenção é uma formulação farmacêutica que inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um éster borônico aciclico da invenção.
Em outro aspecto, a invenção é uma formulação farmacêutica que compreende: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto que possui uma estrutura de acordo com a Fórmula I: <formula>formula see original document page 196</formula>
em que B é boro. Rla é um membro selecionado de uma carga negativa, um contra-íon de sal, H, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. M é um membro selecionado de oxigênio, enxofre e NR2a. R2a é um membro selecionado de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. J é um membro selecionado de (CR3aR4a)nl e CR5a. R3a, R4a e R5a são membros selecionados independentemente de H, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. O índice nl é um número inteiro selecionado de 0 a 2. W é um membro selecionado de C=O (carbonil) , (CR6aR7a)mi e CR8a. R6a, R7a e R8a são membros selecionados independentemente de H, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. O índice ml é um número inteiro selecionado de O e 1. A é um membro selecionado de CR9a e N. D é um membro selecionado de CR10a e Ν. E é um membro selecionado de CRlla e N. G é um membro selecionado de CR12a e N. R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de H, OR*, NR*R* *, SR*, -S(O)R*, -S(O)2R*, S(0)2NR*R**, -C(O)R*, -C(O)OR*, - C(O)NR*R**, nitro, halogênio, ciano, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Cada R* e R** são membros selecionados independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. A combinação de nitrogênios (A + D + E + G) é um número inteiro selecionado de 0 a 3. Um membro selecionado de R3a, R4a e R5a e um membro selecionado de R6a, R7a e R8a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R3a e R4a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R6a e R7a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R9a e R10a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. R10a e Rlla, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros. Rlla e R12a, juntos com os átomos aos quais estão anexados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros.
Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com a
Fórmula (Ix):
<formula>formula see original document page 198</formula>
em que R7b é um membro selecionado de H, metil, etil e fenil. R10b é um membro selecionado de Η, OH, NH2, SH, halogênio, fenóxi substituído ou não substituído, fenilalquiloxi substituído ou não substituído, feniltio substituído ou não substituído, e fenilalquiltio substituído ou não substituído. Rllb é um membro selecionado de Η, 0H, NH2, SH, metil, fenóxi substituído ou não substituído, fenilalquiloxi substituído ou não substituído, feniltio substituído ou não substituído, e fenilalquiltio substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com a Fórmula (Ix) , em que R1b é um membro selecionado de uma carga negativa, H e um contra-íon de sal. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com a Fórmula (Ix) , em que Rlob e Rllb são H. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com a Fórmula (Ix), em que um membro selecionado de R10b e Rllb é H e o outro membro selecionado de R10b e Rllb é um membro selecionado de halo, metil, ciano, metóxi, hidroximetil e p-cianofeniloxi. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com a Fórmula (Ix) , em que Rlob e Rllb são membros selecionados independentemente de flúor, cloro, metil, ciano, metóxi, hidroximetil e p- cianofenil. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com a Fórmula (Ix) , em que Ri:Lb é um membro selecionado de uma carga negativa, H e um contra-íon de sal; R7b é H; R10b é F e Rllb é H. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com a Fórmula (Ix) , em que Rllb e R12b, juntos com os átomos ao qual estão anexados, são unidos para formar um grupo fenil. Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com a Fórmula (Ix) , em que Rlb é um membro selecionado de uma carga negativa, H e um contra-íon de sal; R7b é H; R10b é 4- cianofenoxi; e Rllb é H.
Em outra modalidade exemplar, há a condição de que o composto não possa ter uma estrutura de acordo com a Fórmula (Iy)
<formula>formula see original document page 199</formula> (Iy)
em que R10b é um membro selecionado de H, halogênio, CN e C1-4 alquil substituído ou não substituído.
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma estrutura de acordo com a Fórmula (Ia):
<formula>formula see original document page 200</formula>
Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado independentemente de H, ciano, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, e amido substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado independentemente de ciano, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, amido substituído ou não substituído.
Em outra modalidade exemplar, cada R3a e R4a é um membro selecionado de H, metil substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, propil substituído ou não substituído, isopropil substituído ou não substituído, butil substituído ou não substituído, t- butil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, e benzil substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, R3a e R4a são um membro selecionado de metil, etil, propil, isopropil, butil, t- butil, fenil e benzil. Em outra modalidade exemplar, Rla é H e R4a é um membro selecionado de metil, etil, propil, isopropil, butil, t-butil, fenil e benzil. Em outra modalidade exemplar, R3a é H e R4a é H.
Em outra modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são um membro selecionado independentemente de H, OR*, NR*R**, SR*, -S(O)R*, -S(O)2R*, - S(0)2NR*R**, -C(O)R*, -C(O)OR*, - C(O)NR*R**, halogênio, ciano, nitro, metóxi substituído ou não substituído, metil substituído ou não substituído, etóxi substituído ou não substituído, etil substituído ou não substituído, trifluormetil, hidroximetil substituído ou não substituído, hidroxialquil substituído ou não substituído, benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, feniloxi substituído ou não substituído, fenil metóxi substituído ou não substituído, tiofeniloxi substituído ou não substituído, piridiniloxi substituído ou não substituído, pirimidiniloxi substituído ou não substituído, benzilfurano substituído ou não substituído, metiltio substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, feniltio substituído ou não substituído, tiofeniltio substituído ou não substituído, fenil metiltio substituído ou não substituído, piridiniltio substituído ou não substituído, pirimidiniltio substituído OU não substituído, benziltiofuranil substituído OU não substituído, fenilsulfonil substituído OU não substituído, benzilsulfonil substituído OU não substituído, fenilmetilsulfonil substituído OU não substituído, tiofenilsulfonil substituído OU não substituído, piridinilsulfonil substituído OU não substituído, pirimidinilsulfonil substituído OU não substituído, sulfonamidil substituído ou não substituído, fenilsulfinil substituído ou não substituído, benzilsulfinil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfinil substituído ou não substituído, tiofenilsulfinil substituído ou não substituído, piridinilsulfinil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfinil substituído ou não substituído, amino substituído ou não substituído, alquilamino substituído ou não substituído, dialquilamino substituído ou não substituído, trifluormetilamino substituído ou não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilaminometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, benzilamino substituído ou não substituído, fenilamino substituído ou não substituído, tiofenilamino substituído ou não substituído, piridinilamino substituído ou não substituído, pirimidinilamino substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, morfolino substituído ou não substituído, alquilamido substituído ou não substituído, arilamido substituído ou não substituído, ureido substituído ou não substituído, carbamoil substituído ou não substituído, e piperizinil substituído ou não substituído. Em uma modalidade exemplar, R9a, R10a, Rlla e R12a são selecionados da lista prévia de substituintes, com exceção de -C(O)R*, -C(O)OR*, C(O)NR*R* *.
Em outra modalidade exemplar, R6a, R7a, R9a, R10a, Rlla e R12a são membros selecionados independentemente de flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1- etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3- (butilcarbonil)fenilmetoxi, IH-tetrazol-5-il, 1- etoxicarbonilmetiloxi-, 1-etoxicarbonilmetil-, 1- etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2- iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4-fluorfeniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-((piperidin-l-il)carbonil)metil, 1- (piperidin-l-il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-2- il) carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3 -il)carbonil)metóxi, 1- (4-(pirimidin-2-il)piperazin-1-il)carbonil)metóxi, 1-(4 - (pirimidin-2-il)piperazin-1-il)carbonil)metil,1- (4- (pirimidin-2-il)piperazin-1-il)carbonil, 1-4-(pirimidin-2- il)piperazin-1-il,1-(4-(piridin-2-il)piperazin-1- il)carbonil),1-(4-(piridin-2-il)piperazin-1- il)carbonilmetil,(1-(4-(piridin-2-il)piperazin-1- il)carbonil)metóxi),1-(4 -(piridin-2-il)piperazin-1-il, 1H- indol-1-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, morfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-1H-indol-1-il,3-(2-cianoetiltio)-1H-indol-1- il,benzilamino,5-metóxi-3-(feniltio)-1H-indol-1-il, 5- metóxi-3-((2-cianoetiltio)-1Η-indol-1-il),5-cloro-1H- indol-1-il,5-cloro-3-((2-cianoetiltio)-1Η-indol-1-il) , dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-IH-indol- 1-il),4-(1H-tetrazol-5-il)fenóxi,4-(1H-tetrazol-5 - il)fenil, 4-(1H-tetrazol-5-il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3- cianofenoxi,4-cianofenoxi,2-cianofeniltio,3- cianofeniltio,4-cianofeniltio,2-clorofenoxi, 3- clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2-fluorfenoxi, 3-fluorfenoxi, 4-fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3-cianobenziloxi, 4- cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3-clorobenziloxi , 4- clorobenziloxi, 2 -fluorbenziloxi, 3 -fluorbenziloxi, 4- fluorbenziloxi, fenil não substituído, benzil não substituído.
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma estrutura que é um membro de acordo com as seguintes fórmulas: <formula>formula see original document page 205</formula>
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma estrutura de acordo com uma das Fórmulas I-Io com seleções de substituintes para R9a, R10a, Rlla e R12a incluindo todas as possibilidades contidas no parágrafo 106, exceto para H. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma estrutura de acordo com uma das Fórmulas Ib- Io com seleções de substituintes para R9a, R10a,Rlla e R12a incluindo todas as possibilidades contidas no parágrafo 107, exceto para H. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma fórmula de acordo com as Fórmulas (Ib)-(Ie), em que Rla é um membro selecionado de H, uma carga negativa e um contra-íon de sal e o grupo R restante (R9a em Ib, R10a em Ic, Rlla em Id e R12a em Ie) é um membro selecionado de flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1-etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3 -(butilcarbonil)fenilmetoxi , IH- tetrazol-5-il, 1-etoxicarbonilmetiloxi-, 1- etoxicarbonilmetil-, 1-etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2-iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4 - flúorfeniItio, butilcarboniIfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-(piperidin- 1-il)carbonil)metil, 1-(piperidin-l-il)carbonil)metóxi, 1- (piperidin-2-il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3 il)carbonil)metóxi, 1-(4 -(pirimidin-2-il)piperazin-1- il)carbonil)metóxi, 1-(4(pirimidin-2-il)piperazin-1- il)carbonil)metil, 1-(4-(pirimidin-2-il)piperazin-1- il)carbonil, 1-4-(pirimidin-2-il)piperazin-l-il, l-(4- (piridin-2-il)piperazin-1-il)carbonil), 1- (4-(piridin-2- il)piperazin-l-il)carbonilmetil, (1-(4-(piridin-2- il)piperazin-l-il)carbonil)-metóxi), 1-(4-(piridin-2- il)piperazin-l-il, ΙΗ-indol-l-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, morfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-lH-indol-l-il, 3- (2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il, benzilamino, 5-metóxi-3- (feniltio)-ΙΗ-indol-l-il, 5-metóxi-3-((2-cianoetiltio)-IH- indol-l-il), 5-cloro-lH-indol-l-il, 5-cloro-3-((2- cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il), dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3 -((feniltio)-ΙΗ-indol-l-il), 4-(lH-tetrazol-5- il)fenóxi, 4 -(IH-tetrazol-5-il)fenil, 4 -(IH-tetrazol-5- il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3-cianofenoxi, 4-cianofenoxi , 2-cianofeniltio, 3-cianofeniltio, 4-cianofeniltio, 2- clorofenoxi, 3-clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2-fluorfenoxi, 3 -fluorfenoxi, 4 -fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3- cianobenziloxi, 4-cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3- clorobenziloxi, 4-clorobenziloxi, 2-fluorbenziloxi, 3- fluorbenziloxi e 4-fluorbenziloxi.
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma fórmula de acordo com as Fórmulas (If) - (Ik) , em que Rla é um membro selecionado de H, uma carga negativa e um contra-ion de sal e cada um dos dois grupos R restantes (R9a e R10a em If, R9a e Rlla em Ig, R9a e R12a em Ih, R10a e Rlla em li, R10a e Rlla em Ij, Rlla e R12a em Ik) é um membro selecionado independentemente de flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1- etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3- (butilcarbonil)fenilmetoxi, lH-tetrazol-5-il, 1 etoxicarbonilmetiloxi-, 1-etoxicarbonilmetil-, 1- etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2- iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4-fluorfeniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-(piperidin-l-il)carbonil)metil, 1- (piperidin-lil)carbonil)raetóxi, 1-(piperidin-2- il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3il)carbonil)metóxi, l-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metóxi, 1-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metil, l-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil, 1-4-(pirimidin-2- il)piperazin-l-il, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonil), 1- (4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonilmetil, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-1- il)carbonil)-metóxi, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-1-il, IH- indol-l-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, morfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-IH-indol-1-il, 3-(2-cianoetiltio)-lH-indol-1- il, benzilamino, 5-metóxi-3-(feniltio)-lH-indol-l-il, 5- metóxi-3-((2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il), 5-cloro-lH- indol-l-il, 5-cloro-3-((2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il), dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-lH-indol- 1-il), 4-(IH-tetrazol-5-il)fenóxi, 4-(lH-tetrazol-5- il)fenil, 4-(lH-tetrazol-5-il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3- cianofenoxi, 4-cianofenoxi, 2-cianofeniltio, 3- cianofeniltio, 4-cianofeniltio, 2-clorofenoxi, 3- clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2-fluorfenoxi, 3-fluorfenoxi, 4-fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3-cianobenziloxi, 4- cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3-clorobenziloxi, 4- clorobenziloxi, 2-fluorbenziloxi, 3-fluorbenziloxi e 4- fluorbenziloxi.
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma fórmula de acordo com as Fórmulas (Il)-(Io), em que Rla é um membro selecionado de H, uma carga negativa e um contra-íon de sal e cada um dos três grupos R restantes (R9ai R10ai Rlla em (Il) , R9a, R10ai Rlla em (Im) , R9a, Rlla, R12a em (In), R10a, Rlla, R12a em (Io)) é um membro selecionado independentemente de flúor, cloro, bromo, nitro, ciano, amino, metil, hidroxilmetil, trifluormetil, metóxi, trifluormetoxi, etil, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidinil, piperizino, piperizinil, piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, carboxil, 1-tetrazolil, 1- etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3- (butilcarbonil) fenilmetoxi, lH-tetrazol-5-il, 1- etoxicarbonilmetiloxi-, 1-etoxicarbonilmetil-, 1- etoxicarbonil-, carboximetoxi-, tiofen-2-il, tiofen-2- iltio-, tiofen-3-il, tiofen-3-iltio, 4-fluorfeniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-((piperidin-1-il)carbonil)metil, 1- (piperidin-l-il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-2 - il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3-il)carbonil)metóxi, 1- (4-(pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metóxi, 1-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metil, 1-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil, 1-4 -(pirimidin-2- il)piperazin-l-il, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonil) ,1- (4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonilmetil,1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il )carbonil)metóxi, 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l-il, IH- indol-l-il, morfolino-, morfolinil, morfolinocarbonil, morfolinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, 3-(feniltio)-IH-indol-1-il, 3-(2-cianoetiltio)-lH-indol-1- il, benzilamino, 5-metóxi-3-(feniltio)-IH-indol-1-il, 5- metóxi-3-((2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il) , 5-cloro-lH- indol-l-il, 5-cloro-3-((2-cianoetiltio)-ΙΗ-indol-l-il) , dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-((feniltio)-1H-indol- 1-il),4-(1H-tetrazol-5-il)fenóxi, 4-(1H-tetrazol-5- il)fenil,4-(1H-tetrazol-5-il)feniltio, 2-cianofenoxi, 3- cianofenoxi,4-cianofenoxi,2-cianofeniltio,3- cianofeniltio,4-cianofeniltio,2-clorofenoxi,3- clorofenoxi, 4-clorofenoxi, 2- flúorfenoxi, 3-fluorfenoxi, 4-fluorfenoxi, 2-cianobenziloxi, 3-cianobenziloxi, 4- cianobenziloxi, 2-clorobenziloxi, 3-clorobenziloxi, 4- clorobenziloxi, 2 -fluorbenziloxi, 3 -fluorbenziloxi e 4- fluorbenziloxi.
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 210</formula> <formula>formula see original document page 211</formula> <formula>formula see original document page 212</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto da invenção possui uma estrutura que é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 212</formula>
em que q é um número entre 0 e 1. R9 é halogênio. Ra, Rb, Rc, Rd e Re são membros selecionados independentemente de um membro selecionado de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Em uma modalidade exemplar, o composto na formulação farmacêutica é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 213</formula>
Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 213</formula>
Em uma modalidade exemplar, Ra, Rd e Re são, cada um, membros selecionados independentemente de:
<formula>formula see original document page 213</formula>
Em uma modalidade exemplar, Rb e Rc selecionados independentemente de H, metil, <formula>formula see original document page 214</formula>
Em outra modalidade exemplar, Rb é H e Rc é um membro selecionado de H, metil,
<formula>formula see original document page 214</formula>
Em outra modalidade exemplar, Rb e Rc são, juntos com o nitrogênio ao qual estão anexados, opcionalmente unidos para formar um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 214</formula> <formula>formula see original document page 215</formula>
Em uma modalidade exemplar, Ra é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 215</formula>
Em uma modalidade exemplar, R é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 215</formula>
Em uma modalidade exemplar, Re é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 215</formula>
Em outra modalidade exemplar, as formulações farmacêuticas aqui descritas podem formar um hidrato com água, um solvato com um álcool (por exemplo, metanol, etanol, propanol); um aduto com um composto amino (por exemplo, amônia, metilamina, etilamina); um aduto com um ácido (por exemplo, ácido fórmico, ácido acético); complexos com etanolamina, quinolina, aminoácidos, e semelhantes.
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma estrutura de acordo com a Fórmula (Ip):
<formula>formula see original document page 216</formula>
em que Rx2 é um membro selecionado de C1-C5 alquil substituído ou não substituído e C1-C5 heteroalquil substituído ou não substituído. Ry2 e Rz2 são membros selecionados independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído.
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma estrutura de acordo com a Fórmula (Iq):
<formula>formula see original document page 216</formula>
em que B é boro. Rx2 é um membro selecionado de C1-C5 alquil substituído ou não substituído e C1-C5 heteroalquil substituído ou não substituído. Ry2 e Rz2 são membros selecionados independentemente de H, alquil substituído ou não substituído, heteroalquil substituído ou não substituído, cicloalquil substituído ou não substituído, heterocicloalquil substituído ou não substituído, aril substituído ou não substituído e heteroaril substituído ou não substituído. Em outra modalidade exemplar, pelo menos um membro selecionado de R3a, R4a, R5a, R6a, R7a, R8a, R9a, R10a, Rlla e R12a é um membro selecionado de nitro, ciano e halogênio.
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma estrutura que é um membro selecionado das seguintes Fórmulas:
<formula>formula see original document page 217</formula>
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma fórmula de acordo com as Fórmulas (Ib)-(Ie), em que pelo menos um membro selecionado de R3a, R4a, R5a, R6a, R7a, R8a, R9a, R10a, Rlla e R12a é um membro selecionado de nitro, ciano, flúor, cloro, bromo e cianofenoxi. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma estrutura que é um membro selecionado de
<formula>formula see original document page 218</formula>
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende um composto que possui uma estrutura que é um membro selecionado de:
<formula>formula see original document page 218</formula>
Em outra modalidade exemplar, há a condição de que a formulação farmacêutica não possa compreender uma estrutura de acordo com a Fórmula (Iaa): <formula>formula see original document page 219</formula>
em que R6b, R9b, Rlob, Rllb e R12b possuem as mesmas listagens de substituintes descritas para as Fórmulas (Ix) e (Iy) acima.
As formulações farmacêuticas da invenção podem assumir diversas formas adaptadas à via de administração escolhida. Aqueles habilitados na técnica irão reconhecer várias metodologias sintéticas que podem ser empregadas para a preparação de formulações farmacêuticas atóxicas que incorporam os compostos aqui descritos. Aqueles habilitados na técnica irão reconhecer diversos solventes atóxicos farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados para a preparação de solvatos dos compostos da invenção, tais como água, etanol, propileno glicol, óleo mineral, óleo vegetal e dimetilsulfóxido (DMSO).
As composições da invenção podem ser administradas por via oral, tópica, parenteral, por inalação ou spray ou por via retal em formulações de dosagem unitária que contêm transportadores, adjuvantes e veículos atóxicos convencionais farmaceuticamente aceitáveis. Entende-se ainda que o melhor método de administração pode ser uma combinação de métodos. A administração oral na forma de uma pílula, cápsula, elixir, xarope, tablete, pastilha, ou semelhante é particularmente preferida. 0 termo "parenteral", como aqui usado, inclui injeções subcutâneas, injeção intradérmica, intravascular (por exemplo, intravenosa), intramuscular, espinhal, intra-tecal ou semelhante, ou técnicas de infusão.
As formulações farmacêuticas que contêm os compostos da invenção estão preferivelmente em uma forma adequada para uso oral, por exemplo, como comprimidos, tabletes, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grânulos dispersíveis, emulsão, cápsulas duras ou macias, ou xaropes ou elixires.
Composições destinadas ao uso oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para a fabricação de formulações farmacêuticas, e essas composições podem conter um ou mais agentes selecionados do grupo que consiste em agentes adoçantes, agentes flavorizantes, agentes corantes e agentes conservantes a fim de fornecer preparações farmaceuticamente elegantes e palatáveis. Os comprimidos podem conter o ingrediente ativo misturado com excipientes atóxicos farmaceuticamente aceitáveis que são adequados à fabricação de comprimidos. Esses excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, por exemplo, carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho ou ácido algínico; agentes aglutinantes, por exemplo, amido, gelatina ou acácia; e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por técnicas conhecidas para retardar a desintegração e absorção no trato gastrintestinal e, dessa forma, permitir a ação sustentada ao longo de um período mais longo. Por exemplo, pode ser empregado um material de retardo como, por exemplo, monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila.
Formulações para uso oral também podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina dura, nas quais o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim, ou como cápsulas de gelatina macia, nas quais o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida ou azeite de oliva.
Suspensões aquosas contêm os materiais ativos misturados com excipientes adequados à fabricação de suspensões aquosas. Esses excipientes são agentes de suspensão, por exemplo, carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto e goma acácia; e agentes dispersantes ou umidificantes, que podem ser uma fosfatida de ocorrência natural, por exemplo, lecitina, ou produtos da condensação de um óxido de alquileno com ácidos graxos, por exemplo, estearato de polioxietileno, ou produtos da condensação de óxido de etileno com alcoóis alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaetilenooxicetanol, ou produtos da condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e um hexitol como, por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitol, ou produtos da condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato de polietileno sorbitano. As suspensões aquosas também podem conter um ou mais conservantes, por exemplo, etil, ou n- propil p-hidroxibenzoato, um ou mais agentes corantes, um ou mais agentes flavorizantes, e um ou mais agentes adoçantes, por exemplo, sacarose ou sacarina.
Suspensões oleosas podem ser formuladas por suspensão dos ingredientes ativos em um óleo vegetal, por exemplo, óleo de amendoim, azeite de oliva, óleo de gergelim ou óleo de coco, ou em um óleo mineral como, por exemplo, parafina líquida. As suspensões oleosas podem conter um agente espessante, por exemplo, cera de abelha, parafina sólida ou álcool cetílico. Agentes adoçantes como, por exemplo, aqueles apresentados acima, e agentes flavorizantes podem ser adicionados para permitirem preparações orais palatáveis. Essas composições podem ser preservadas pela adição de um antioxidante como, por exemplo, ácido ascórbico.
Pós e grânulos dispersíveis adequados ã preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água fornecem o ingrediente ativo misturado com um agente dispersante ou umidificante, agente de suspensão e um ou mais conservantes. Agentes dispersantes ou umidificantes e agentes de suspensão adequados são exemplificados por aqueles já mencionados acima. Excipientes adicionais, por exemplo, agentes adoçantes, flavorizantes e corantes, também podem estar presentes.
As formulações farmacêuticas da invenção também podem estar na forma de emulsões óleo-em-água e emulsões água-em- óleo. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo, azeite de oliva ou óleo de amendoim, ou um óleo mineral, por exemplo, parafina líquida ou misturas destes. Agentes emulsificantes adequados podem ser gomas de ocorrência natural, por exemplo, goma acácia ou goma tragacanto; fosfatidas de ocorrência natural, por exemplo, grão de soja, lecitina, e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e hexitol; anidridos, por exemplo, monooleato de sorbitano; e produtos da condensação dos referidos ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões também podem conter agentes adoçantes e flavorizantes.
Xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçantes, por exemplo, glicerol, propileno glicol, sorbitol ou sacarose. Essas formulações também podem conter um emoliente, um conservante, e agentes flavorizantes e corantes. As formulações farmacêuticas podem estar na forma de uma suspensão aquosa ou oleaginosa estéril injetável. Essa suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida com o uso de agentes dispersantes ou umidificantes e agentes de suspensão adequados, que foram mencionados acima. A preparação injetável estéril também pode estar em uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente atóxico parenteralmente aceitável, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Dentre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados, estão água, solução de Ringer e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos fixos estéreis são convencionalmente empregados como meio solvente ou de suspensão. Para essa finalidade, qualquer óleo fixo brando pode ser empregado, incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, ácidos graxos como, por exemplo, ácido oléico, encontram utilidade na preparação de injetáveis. A composição da invenção também pode ser administrada na forma de supositórios, por exemplo, para administração retal do fármaco. Essas composições podem ser preparadas por mistura do fármaco com um excipiente não irritante adequado que seja sólido em temperaturas normais, mas liquido na temperatura retal, e irão, portanto, derreter no reto para liberar o fármaco. Estes materiais são manteiga de cacau e polietileno glicóis.
Alternativamente, as composições podem ser administradas parenteralmente em um meio estéril. 0 fármaco, dependendo do veiculo e da concentração usados, pode ser suspenso ou dissolvido no veículo. Vantajosamente, adjuvantes como, por exemplo, anestésicos locais, conservantes e agentes de tamponamento, podem ser dissolvidos no veículo.
Para a administração a animais não humanos, a composição que contém o composto terapêutico pode ser adicionada à ração ou à água de beber do animal. Além disso, será conveniente formular produtos de ração animal e da água de beber de forma que o animal consuma uma quantidade apropriada do composto em sua dieta. Será ainda conveniente apresentar o composto em uma composição como uma pré-mistura para adição à ração ou à água de beber. A composição também pode ser adicionada como um alimento ou suplemento de bebida para humanos.
Níveis de dosagem da ordem de cerca de 5 mg a cerca de 250 mg por quilograma de peso corporal por dia e, mais preferivelmente, de cerca de 25 mg a cerca de 150 mg por quilograma de peso corporal por dia, são úteis no tratamento das condições indicadas acima. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com os materiais de transporte para produzir uma única forma de dosagem irá variar, dependendo da condição tratada e do modo de administração específico. Formas de dosagem unitária conterão geralmente entre cerca de 1 mg a cerca de 500 mg de um ingrediente ativo.
A freqüência da dosagem também pode variar, dependendo do composto usado e da doença específica tratada. No entanto, para tratamento da maioria dos distúrbios, um regime de dosagem de 4 vezes ao dia ou menos é preferido. Será compreendido, no entanto, que o nível de dose específico para um paciente em particular dependerá de diversos fatores, incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, o peso corporal, a saúde geral, o sexo, a dieta, o tempo de administração, a via de administração e a taxa de excreção, combinação de fármacos, e a gravidade da doença em particular submetida à terapia.
Compostos da invenção preferidos terão propriedades farmacológicas desejáveis que incluem, sem limitação, biodisponibilidade oral, baixa toxicidade, baixa ligação às proteínas séricas, e meias-vidas in vitro e in vivo desejáveis. A penetração da barreira hematencefálica para os compostos usados para tratar distúrbios do sistema nervoso central (SNC) é necessária, enquanto níveis cerebrais baixos de compostos usados para tratar distúrbios periféricos são freqüentemente preferidos.
Podem ser usados ensaios para prever essas propriedades farmacológicas desejáveis. Os ensaios usados para prever a biodisponibilidade incluem o transporte através de monocamadas de células intestinais humanas, incluindo monocamadas de células Caco-2. A toxicidade para os hepatócitos cultivados pode ser usada pra prever a toxicidade do composto. A penetração da barreira hematencefálica de um composto em seres humanos pode ser prevista a partir dos níveis cerebrais de animais de laboratório que recebem o composto por via intravenosa.
A ligação às proteínas séricas pode ser prevista por ensaios de ligação ã albumina. Esses ensaios são descritos em uma revisão por Oravcova e cols. {Journal of Chromatography B (1996) volume 677, páginas 1-27).
A meia-vida do composto é inversamente proporcional à freqüência de dosagem de um composto. As meias-vidas in vitro de compostos podem ser previstas por ensaios de meia- vida microssômica, como descrito por Kuhnz e Gieschen (Drug Metabolism and Dispositionl (1998) volume 26, páginas 1.120-1.127).
A quantidade da composição necessária para uso em tratamento irá variar, não somente com o composto particular selecionado, mas também com a via de administração, a natureza da condição tratada, e a idade e condição do paciente, e ficará, em última análise, a critério do médico ou clínico assistente.
Em uma modalidade exemplar, o excipiente da formulação farmacêutica compreende etanol, e o composto da formulação farmacêutica é 1,3-diidro-5-flúor-l-hidróxi-2, 1- benzoxaborol. Em outra modalidade exemplar, o excipiente da formulação farmacêutica compreende propileno glicol, e o composto da formulação farmacêutica é 1,3-diidro-5-flúor-1- hidróxi-2,1-benzoxaborol. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 1:4 de propileno glicol:etanol, com 1:10 peso/volume de 1,3- diidro-5-flúor-1-hidróxi-2,1-benzoxaborol. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 70% de etanol; cerca de 20% de poli (éter vinil metílico-alt-éster monobutílico de ácido maléico); cerca de 10% de 1,3-diidro-5-flúor-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 56% de etanol; cerca de 14% de água; cerca de 15% de poli(2-hidroxietil metacrilato) ; cerca de 5% de sebacato de dibutila; cerca de 10% de 1,3-diidro-5- flúor-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 55% de etanol; cerca de 15% de acetato de etila; cerca de 15% de poli (acetato vinila) ; cerca de 5% de sebacato de dibutila; cerca de 10% de 1,3-diidro-5-flúor-1-hidróxi-2,1- benzoxaborol. Em outra modalidade exemplar, 1,3-diidro-5 - flúor-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol está presente em uma formulação farmacêutica em uma concentração em um valor selecionado de 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10% e 15% p/v. Em outra modalidade exemplar, a formulação farmacêutica é um esmalte.
Em uma modalidade exemplar, o excipiente da formulação farmacêutica compreende etanol, e o composto da formulação farmacêutica é 5-(4-cianofenoxi)-1,3-diidro-l-hidróxi-2 ,1- benzoxaborol. Em outra modalidade exemplar, o excipiente da formulação farmacêutica compreende propileno glicol, e o composto da formulação farmacêutica é 5-(4-cianofenoxi)- 1,3-diidro-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 20% de propileno glicol; cerca de 70% de etanol; cerca de 10% de 5 -(4-cianofenoxi)-1,3-diidro-1-hidróxi-2,1- benzoxaborol. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 70% de etanol; cerca de 20% de poli(éter vinil metilico-alt-éster monobutílico de ácido maléico) ; cerca de 10% de 5-(4-cianofenoxi)-1,3- diidro-1-hidróxi-2,1-benzoxaborol. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 56% de etanol; cerca de 14% de água; cerca de 15% de poli(2-hidroxietil metacrilato); cerca de 5% de sebacato de dibutila; cerca de 10% de 5-(4-cianofenoxi)-1,3-diidro-l- hidróxi-2,1-benzoxaborol. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 55% de etanol; cerca de 15% de acetato de etila; cerca de 15% de poli(acetato vinila); cerca de 5% de sebacato de dibutila; cerca de 10% de 5-(4-cianofenoxi)-1,3-diidro-1-hidróxi-2,1- benzoxaborol. Em outra modalidade exemplar, 5-(4- cianofenoxi)-1,3-diidro-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol está presente em uma formulação farmacêutica em uma concentração em um valor selecionado de 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10% e 15% p/v. Em outra modalidade exemplar, a formulação farmacêutica é um esmalte.
Em uma modalidade exemplar, o excipiente da formulação farmacêutica compreende etanol e o composto da formulação farmacêutica é um composto aqui descrito. Em outra modalidade exemplar, o excipiente da formulação farmacêutica compreende propileno glicol e o composto da formulação farmacêutica é um composto aqui descrito. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 20% de propileno glicol; cerca de 70% de etanol; cerca de 10% de um composto aqui descrito. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 70% de etanol; cerca de 20% de poli (éter vinil metilico-alt-éster monobutilico de ácido maléico); cerca de 10% de um composto aqui descrito. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 56% de etanol; cerca de 14% de água; cerca de 15% de poli(2-hidroxietil metacrilato); cerca de 5% de sebacato de dibutila; cerca de 10% de um composto aqui descrito. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica compreende: cerca de 55% de etanol; cerca de 15% de acetato de etila; cerca de 15% de poli (acetato vinila) ; cerca de 5% de sebacato de dibutila; cerca de 10% de um composto aqui descrito. Em outra modalidade exemplar, um composto aqui descrito está presente em uma formulação farmacêutica em uma concentração em um valor selecionado de 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10% e 15% p/v. Em outra modalidade exemplar, a formulação farmacêutica é um esmalte.
VII.a) Formulações tópicas
Em uma modalidade preferida, os métodos da invenção podem ser usados por meio da aplicação tópica dos compostos aqui descritos.
As composições da presente invenção compreendem veículos líquidos ou semi-sólidos que podem incluir, sem limitação, polímeros, espessantes, tampões, neutralizantes, agentes quelantes, conservantes, tensoativos ou emulsificantes, antioxidantes, ceras ou óleos, emolientes, filtros solares, e um solvente ou sistema solvente misto. 0 solvente ou sistema solvente misto é importante para a formação, pois é primariamente responsável pela dissolução do fármaco. Os melhores solventes ou sistemas solventes mistos também são capazes de manter níveis clinicamente relevantes do fármaco em solução, apesar da adição de um solvente pobre ã formulação. As composições tópicas úteis na presente invenção podem ser feitas em diversos tipos de produtos. Esses incluem, sem limitação, loções, cremes, géis, bastões, sprays, pomadas, pastes, espumas, musses e limpadores. Esses tipos de produtos podem compreender vários tipos de sistemas transportadores, incluindo, sem limitação, partículas, nanopartículas e lipossomos. Se desejado, podem ser adicionados agentes de desintegração, tais como a polivinil pirrolidona entrecruzada, ágar ou ácido algínico ou um sal deste como, por exemplo, alginato de sódio. Técnicas para formulação e administração podem ser encontradas em "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", supra. A formulação pode ser selecionada para maximizar a liberação até um local-alvo desejado no corpo.
Loções, que são preparações que devem ser aplicadas à superfície da pele, unha, cabelo, garra ou casco, sem fricção, são preparações tipicamente líquidas ou semilíquidas em que um sólido finamente dividido, uma cera ou um líquido são dispersos. As loções tipicamente conterão agentes de suspensão para a produção de dispersões melhores, além de compostos úteis para a localização e manutenção do agente ativo em contato com a pele, unha, cabelo, garra ou casco, por exemplo, metilcelulose, carboximetilcelulose sódica, ou semelhantes.
Cremes que contêm o agente ativo para liberação de acordo com a presente invenção são emulsões viscosas líquidas ou semi-sólidas, tanto óleo-em-água quanto água- em-óleo. As bases do creme são laváveis com água, e contêm uma fase oleosa, um emulsificante e uma fase aquosa. A fase oleosa é geralmente composta por vaselina ou um álcool graxo, por exemplo, álcool cetílico ou estearílico; a fase aquosa normalmente, embora não necessariamente, excede a fase oleosa em termos de volume, e geralmente contém um umectante. O emulsificante em uma formulação de creme, como explicado em "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", supra, é geralmente um tensoativo iônico, aniônico, catiônico ou anfotérico.
Formulações em gel também podem ser usadas em conexão com a presente invenção. Como será observado por aqueles que trabalham no campo da formulação tópica de fármacos, géis são semi-sólidos. Géis de fase única contêm macromoléculas orgânicas distribuídas substancialmente de forma uniforme por todo o veículo líquido, que tipicamente é aquoso, mas também pode ser um solvente ou mistura solvente.
Pomadas, que são preparações semi-sólidas, são tipicamente com base em vaselina ou outros derivados de petróleo. Como será observado por aqueles habilitados na técnica, a base de pomada específica a ser usada é aquela que permite a liberação ótima do agente ativo escolhido para certa formulação e, preferivelmente, também oferece outras características desejadas, por exemplo, maciez ou semelhantes. Como ocorre com outros transportadores ou veículos, uma base de pomada deve ser inerte, estável, não irritante e não sensibilizante. Como explicado em "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 19a Ed. (Easton, Pa.: Mack Publishing Co., 1995), nas páginas 1.399-1.4 04, as bases de pomadas podem ser agrupadas em quatro classes: bases oleaginosas; bases emulsificáveis; bases de emulsão; e bases hidrossolúveis. Bases de pomada oleaginosas incluem, por exemplo, óleos vegetais, gorduras obtidas de animais, e hidrocarbonetos semi-sólidos obtidos do petróleo. Bases de pomada emulsificáveis, também conhecidas como bases de pomada absorventes, contêm pouca ou nenhuma água, e incluem, por exemplo, sulfato de hidroxiestearina, lanolina anidra e vaselina hidrofilica. Bases de pomada de emulsão são emulsões água-em-óleo (W/O) ou emulsões óleo-em-água (O/W), e incluem, por exemplo, álcool cetílico, monoestearato de glicerila, lanolina e ácido esteárico. Bases de pomada hidrossolúveis preferidas são preparadas a partir de polietileno glicóis de peso molecular variável; novamente, faz-se referência a "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", supra, para informações adicionais.
Formulações da invenção úteis também englobam sprays. Sprays geralmente fornecem o agente ativo em uma solução aquosa e/ou alcoólica que pode ser pulverizada sobre a pele, unha, cabelo, garra ou casco para liberação. Esses sprays incluem aqueles formulados para fornecer a concentração da solução do agente ativo no local de administração após a liberação, por exemplo, a solução em spray pode ser composta primariamente por álcool ou outro liquido volátil semelhante, no qual o fármaco ou agente ativo possa ser dissolvido. Mediante liberação à pele, unha, cabelo, garra ou casco, o veiculo evapora, deixando agente ativo concentrado no local de administração.
As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender veículos de fase sólida ou em gel adequados. Exemplos desses veículos incluem, sem limitação, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários açúcares, amidos, derivados de celulose, gelatina e polímeros como, por exemplo, polietileno glicóis.
As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender um emulsificante adequado, que se refere a um agente que aumenta ou facilita a mistura e suspensão óleo- em-água ou água-em-óleo. O agente emulsificante aqui usado pode consistir em um único agente emulsificante ou pode ser um tensoativo não iônico, aniônico, catiônico ou anfotérico, ou mistura de dois ou mais desses tensoativos; prefere-se usar na invenção emulsificantes não iônicos ou aniônicos. Esses agentes tensoativos são descritos em "McCutcheon's Detergent and Emulsifiers", "North American Edition, 1980 Annual" publicado pela McCutcheon Division, MC Publishing Company, 175 Rock Road, Glen Rock, N.J. 07452, EUA.
Prefere-se usar na invenção alcoóis de peso molecular elevado como, por exemplo, álcool cetearílico, álcool cetílico, álcool estearílico, cera emulsificante, monoestearato de glicerila. Outros exemplos são diestearato de etileno glicol, triestearato de sorbitano, monoestearato de propileno glicol, monooleato de sorbitano, monoestearato de sorbitano (SPAN 60), monolaurato de dietileno glicol, monopalmitato de sorbitano, dioleato de sacarose, estearato de sacarose (CR0DESTA F-160), polioxietileno lauril éter (BRIJ 30), éter estearílico de polioxietileno (2) (BRIJ 72) , éter estearílico de polioxietileno (21) (BRIJ 721) , monoestearato de polioxietileno (Myrj 45), monoestearato de polioxietileno sorbitano (TWEEN 60), monooleato de polioxietileno sorbitano (TWEEN 80), monolaurato de polioxietileno sorbitano (TWEEN 20) e oleato de sódio. Colesterol e derivados de colesterol também podem ser empregados em emulsões usadas externamente, e promovem emulsões w/o.
Agentes emulsificantes não iônicos especialmente adequados são aqueles com equilíbrios hidrófilo-lipófilo (HLB) de cerca de 3 a 6 para sistema w/o e 8 a 18 para sistema o/w, como determinado pelo método descrito por Paul L. Lindner em "Emulsions and Emulsion", editado por Kenneth Lissant, publicado por Dekker, Nova York, N.Y., 1974, páginas 188-190. São mais preferidos para uso na invenção um ou mais tensoativos não iônicos que produzem um sistema que possui um HLB de cerca de 8 a cerca de 18.
Exemplos desses emulsificantes não iônicos incluem, sem limitação, "BRIJ 72", o nome comercial para um éter estearílico de polioxietileno (2) que possui um HLB de 4,9; "BRIJ 721", o nome comercial para um éter estearílico de polioxietileno (21) que possui um HLB de 15,5, "BRIJ 30", o nome comercial para polioxietileno lauril éter que possui um HLB de 9,7,- "Polawax", o nome comercial para cera emulsificante que possui um HLB de 8,0; "Span 60", o nome comercial para monoestearato de sorbitano que possui um HLB de 4,7; "Crodesta F-160", o nome comercial para estearato de sacarose que possui um HLB de 14,5. Todos esses materiais são disponíveis por Ruger Chemicals Inc.; Croda; ICI Américas, Inc.; Spectrum Chemicals; e BASF. Quando as formulações tópicas da presente invenção contiverem pelo menos um agente emulsificante, cada agente emulsificante estará presente em um quantidade de cerca de 0,5 a cerca de 2,5 p%, pref erivelmente 0,5 a 2,0%, mais pref erivelmente 1,0% ou 1,8%. Preferivelmente, o agente emulsificante compreende uma mistura de steareth 21 (a cerca de 1,8%) e steareth 2 (a cerca de 1,0%).
As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender emolientes adequados. Emolientes são materiais usados para a prevenção ou alívio da secura, bem como para a proteção da pele, unha, cabelo, garra ou casco. Emolientes úteis incluem, sem limitação, álcool cetílico, miristato de isopropila, álcool estearílico, e semelhantes. Uma ampla variedade de emolientes adequados é disponível e pode ser aqui usada. Veja, por exemplo, Sagarin, "Cosmetics, Science and Technology", 2a Edição, Vol. 1, pp. 32-43 (1972), e a Patente U.S. N0 4.919.934, para Deckner e cols., emitida em 24 de abril de 1990, ambas aqui incorporadas por referência em sua totalidade. Esses materiais são disponíveis por Ruger Chemical Co, (Irvington, NJ).
Quando as formulações tópicas da presente invenção contiverem pelo menos uma emoliente, cada emoliente estará presente em uma quantidade de cerca de 0,1 a 15%, preferivelmente 0,1 a cerca de 3,0%, mais preferivelmente 0,5, 1,0 ou 2,5 p%. Preferivelmente o emoliente é uma mistura de álcool cetílico, miristato de isopropila e álcool estearílico em uma proporção de 1/5/2. O emoliente também pode ser uma mistura de álcool cetílico e álcool estearílico em uma proporção de 1/2.
As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender antioxidantes adequados, substâncias conhecidas por inibirem a oxidação. Antioxidantes adequados para uso de acordo com a presente invenção incluem, sem limitação, hidroxitolueno butilado, ácido ascórbico, ascorbato de sódio, ascorbato de cálcio, palmitato ascórbico, hidroxianisol butilado, 2,4,5-trihidroxibutirofenona, 4- hidroximetil-2,6-di-terc-butilfenol, ácido eritórbico, goma guáiaco, gaiato de propila, ácido tiodipropiônico, tiodipropionato de dilaurila, terc-butilhidroquinona e tocoferóis, tais como vitamina E, e semelhantes, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e ésteres desses compostos. Preferivelmente, o antioxidante é hidroxitolueno butilado, hidroxianisol butilado, gaiato de propila, ácido ascórbico, sais farmaceuticamente aceitáveis ou ésteres destes, ou misturas destes. Mais preferivelmente, o antioxidante é hidroxitolueno butilado. Esses materiais são disponíveis por Ruger Chemical Co, (Irvington, NJ).
Quando as formulações tópicas da presente invenção contiverem pelo menos um antioxidante, a quantidade total de antioxidante presente será de cerca de 0,001 a 0,5 p%, preferivelmente 0,05 a cerca de 0,5 p%, mais preferivelmente 0,1%.
As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender conservantes adequados. Conservantes são compostos adicionados a uma formulação farmacêutica para atuarem como um agente antimicrobiano. Dentre os conservantes conhecidos na técnica como sendo eficazes e aceitáveis em formulações parenterais, estão cloreto de benzalcônio, benzetônio, clorexidina, fenol, m-cresol, álcool benzílico, metilparabeno, propilparabeno, clorobutanol, o-cresol, p-cresol, clorocresol, nitrato fenilmercúrico, timerosal, ácido benzóico, e várias misturas destes. Veja, por exemplo, Wallhausser, K.-H., Develop. Biol. Standard, 24: 9-28 (1974) (S. Krager, Basel). Preferivelmente, o conservante é selecionado de metilparabeno, propilparabeno e misturas destes. Esses materiais são disponíveis por Inolex Chemical Co (Philadelphia, PA) ou Spectrum Chemicals.
Quando as formulações tópicas da presente invenção contiverem pelo menos um conservante, a quantidade total de conservante presente será de cerca de 0,01 a cerca de 0,5 p%, pref erivelmente de cerca de 0,1 a 0,5%, mais pref erivelmente de cerca de 0,03 a cerca de 0,15. Preferivelmente, o conservante é uma mistura de metilparabeno e propilparabeno em uma proporção de 5/1. Quando álcool for usado como conservante, a quantidade será normalmente de 15 a 20%.
As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender agentes quelantes adequados para a formação de complexos com cátions metálicos que não atravessam uma bicamada lipidica. Exemplos de agentes quelantes adequados incluem ácido etileno diamina tetracético (EDTA), ácido etileno glicol-bis(éter beta-aminoetílico) -Ν,Ν,Ν',N'- tetracético (EGTA) e ácido 8-Amino-2-[(2-amino-5- metilfenoxi)metil]-6-metoxiquinolina-N,Ν,N1,N1-tetracético, sal tetrapotássico (QUIN-2). Preferivelmente, os agentes quelantes são EDTA e ácido cítrico. Esses materiais são disponíveis por Spectrum Chemicals.
Quando as formulações tópicas da presente invenção contiverem pelo menos um agente quelante, a quantidade total de agente quelante presente será de cerca de 0,005% a 2,0% por peso, preferivelmente de cerca de 0,05% a cerca de 0,5 p%, mais preferivelmente cerca de 0,1% por peso.
As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender agentes neutralizantes adequados usados para ajustar o pH da formulação até uma faixa farmaceuticamente aceitável. Exemplos de agentes neutralizantes incluem, sem limitação, trolamina, trometamina, hidróxido de sódio, ácido clorídrico, ácido cítrico e ácido acético. Esses materiais são disponíveis por Spectrum Chemicals (Gardena, CA).
Quando as formulações tópicas da presente invenção contiverem pelo menos um agente neutralizante, a quantidade total de agente neutralizante presente será de cerca de 0,1 p% a cerca de 10 p%, preferivelmente 0,1 p% a cerca de 5,0 p% e, mais pref erivelmente, cerca de 1,0 p%. O agente neutralizante é geralmente adicionado qualquer que seja a quantidade necessária para levar a formulação até o pH desejado.
As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender agentes de aumento da viscosidade adequados. Esses componentes são compostos difusíveis capazes de aumentar a viscosidade de uma solução que contém polímero por meio da interação do agente com o polímero. CARBOPOL ULTREZ 10 pode ser usado como um agente de aumento da viscosidade. Esses materiais são disponíveis por Noveon Chemicals, Cleveland, OH.
Quando as formulações tópicas da presente invenção contiverem pelo menos um agente de aumento da viscosidade, a quantidade total de agente de aumento da viscosidade presente será de cerca de 0,25% a cerca de 5,0% por peso, preferivelmente, de cerca de 0,25% a cerca de 1,0 p%, e mais preferivelmente, de cerca de 0,4% a cerca de 0,6% por peso.
As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender intensificadores da penetração ungueal adequados. Exemplos de intensificadores da penetração ungueal incluem compostos de mercaptano, sulfitos e bissulfitos, agentes ceratoliticos e tensoativos. Intensificadores da penetração ungueal adequados para uso na invenção são descritos com mais detalhes em Malhotra e cols., J. Pharm. Sci., 91:2, 312-323 (2002), que é aqui incorporado por referência em sua totalidade.
As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender um ou mais solventes adequados. A habilidade de qualquer substância sólida (soluto) para se dissolver em qualquer substância liquida (solvente) depende das propriedades físicas do soluto e do solvente. Quando solutos e solventes possuem propriedades físicas similares, a solubilidade do soluto no solvente será a maior possível. Isso dá origem ao entendimento tradicional de que "semelhante dissolve semelhante". Solventes podem ser caracterizados em um extremo como não polares, óleos lipofílicos, enquanto no outro extremo estão os solventes hidrofílicos polares. Solventes oleosos dissolvem outras substâncias não polares por interações de Van der Wals, enquanto a água e outros solventes hidrofílicos dissolvem substâncias polares por interações iônicas, de dipolo ou pó ligação de hidrogênio. Todos os solventes podem ser listados de forma contínua a partir do menos polar, ou seja, hidrocarbonetos como, por exemplo, decano, até o solvente mais polar sendo a água. Um soluto terá sua maior solubilidade em solventes que possuam polaridade equivalente. Dessa forma, para fármacos que possuem hidrossolubilidade mínima, solventes menos polares fornecerão uma maior solubilidade, com o solvente que possui polaridade quase equivalente ao soluto fornecendo a solubilidade máxima. A maioria dos fármacos possui polaridade intermediária e, dessa forma, apresenta solubilidade máxima em solventes como, por exemplo, propileno glicol ou etanol, que são significativamente menos polares do que a água. Caso o fármaco possua uma solubilidade maior em propileno glicol (por exemplo, 8% (p/p)) do que na água (por exemplo, 0,1 % (p/p)), então a adição de água ao propileno glicol deve diminuir a quantidade máxima da solubilidade do fármaco para a mistura solvente, comparada com propileno glicol puro. A adição de um solvente fraco a um solvente excelente irá diminuir a solubilidade máxima para a mistura, comparada com a solubilidade máxima no solvente excelente.
Quando os compostos são incorporados em formulações tópicas, a concentração de ingrediente ativo na formulação pode ser limitada pela solubilidade do ingrediente ativo no solvente e/ou veículo escolhido. Fármacos não lipofílicos tipicamente exibem solubilidade muito baixa em solventes e/ou veículos farmaceuticamente aceitáveis. Por exemplo, a solubilidade de alguns compostos na invenção na água é de menos de 0,00025% p/p. A solubilidade dos mesmos compostos na invenção pode ser de menos de cerca de 2% p/p em propileno glicol ou miristato de isopropila. Em uma modalidade da presente invenção, éter monoetílico de dietileno glicol (DGME) é o solvente usado para dissolver os compostos da invenção. Acredita-se que os compostos na invenção úteis na presente formulação tenham uma solubilidade de cerca de 10% p/p a cerca de 25% p/p em DGME. Em outra modalidade, é usado um sistema co-solvente de DGME/água para dissolver os compostos da invenção. A capacidade solvente DOME cai quando é adicionada água; no entanto, o sistema co-solvente de DGME/água pode ser projetado para manter a concentração desejada de cerca de 0,1 % a cerca de 5% p/p de ingrediente ativo.
Preferivelmente, o ingrediente ativo está presente de cerca de 0,5 % a cerca de 3% p/p e, mais preferivelmente, a cerca de 1% p/p, nas formulações tópicas da forma aplicada. Como o DGME é menos volátil do que a água, à medida que a formulação tópica evapora após a aplicação, o agente ativo se torna mais solúvel na formulação de creme. Essa solubilidade aumentada reduz a probabilidade de biodisponibilidade reduzida causada pela precipitação do fármaco na superfície da pele, unha, cabelo, garra ou casco.
Formas líquidas, tais como loções adequadas à administração tópica ou adequadas à aplicação cosmética, podem incluir um veículo aquoso ou não aquoso adequado com tampões, agentes de suspensão e dispersão, espessantes, intensificadores da penetração, e semelhantes. Formas sólidas, tais como cremes ou pastas ou semelhantes, podem incluir, por exemplo, qualquer um dos seguintes ingredientes: água, óleo, álcool ou gordura como substrato com tensoativo, polímeros como, por exemplo, polietileno glicol, espessantes, sólidos, e semelhantes. Formulações líquidas ou sólidas podem incluir tecnologias de aumento da liberação, tais como lipossomos, microssomos, microesponjas, e semelhantes.
Adicionalmente, os compostos podem ser liberados com a utilização de um sistema de liberação sustentada como, por exemplo, matrizes semipermeáveis de polímeros sólidos hidrofóbicos que contêm o agente terapêutico. Foram estabelecidos vários materiais de liberação sustentada que são bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica.
Regimes de tratamento tópico de acordo com a prática desta invenção compreendem a aplicação da composição diretamente à pele, unha, cabelo, garra ou casco no local de aplicação, de uma a várias vezes ao dia.
As formulações da presente invenção podem ser usadas para tratar, atenuar ou evitar condições ou sintomas associados a infecções bacterianas, acne, inflamação, e semelhantes.
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica inclui uma solução simples. Em uma modalidade exemplar, a solução simples inclui um álcool. Em uma modalidade exemplar, a solução simples inclui álcool e água. Em uma modalidade exemplar, o álcool é etanol, etileno glicol, propanol, polipropileno glicol, isopropanol ou butanol. Em outra modalidade exemplar, a solução simples é um membro selecionado de cerca de 10% de polipropileno glicol e cerca de 90% de etanol; cerca de 20% de polipropileno glicol e cerca de 80% de etanol; cerca de 30% de polipropileno glicol e cerca de 70% de etanol; cerca de 40% de polipropileno glicol e cerca de 60% de etanol; cerca de 50% de polipropileno glicol e cerca de 50% de etanol; cerca de 60% de polipropileno glicol e cerca de 40% de etanol; cerca de 70% de polipropileno glicol e cerca de 30% de etanol; cerca de 80% de polipropileno glicol e cerca de 20% de etanol; cerca de 90% de polipropileno glicol e cerca de 10% de etanol.
Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica é um esmalte. Por favor, consulte a referência de Remington, supra para mais informações sobre a produção de esmaltes.
Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na referida formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 0,5% a cerca de 15%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na referida formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 0,1% a cerca de 12,5%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na referida formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 1% a cerca de 10%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na referida formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 1% a cerca de 5%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na referida formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 0,5% a cerca de 5%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na referida formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 0,5% a cerca de 7,5%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na referida formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 5% a cerca de 7,5%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na referida formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 2% a cerca de 8%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na referida formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 4% a cerca de 9%.
VII.b) Agentes ativos adicionais
A seguir, serão apresentados exemplos dos agentes cosméticos e farmacêuticos que podem ser adicionados às formulações farmacêuticas tópicas da presente invenção. Os agentes a seguir são compostos conhecidos e facilmente disponíveis comercialmente.
Agentes antiinflamatórios incluem, sem limitação, bisabolol, mentolato, dapsona, aloe, hidrocortisona, e semelhantes.
Vitaminas incluem, sem limitação, Vitamina B, Vitamina E, Vitamina A, Vitamina D, e semelhantes, e derivados de vitaminas, tais como tazaroteno, calcipotrieno, tretinoina, adapaleno, e semelhantes.
Agentes antienvelhecimento incluem, sem limitação, niacinamida, retinol e derivados de retinóide, AHA, ácido ascórbico, ácido lipóico, coenzima Q 10, ácidos beta hidróxi, ácido salicílico, peptídeos de ligação de cobre, dimetilaminoetil (DAEA), e semelhantes.
Filtros solares e/ou agentes para alívio de queimaduras solares incluem, sem limitação, PABA, jojoba, aloe, padimato-0, metoxicinnamatos, HCl de proxamina, lidocaína, e semelhantes. Agentes de bronzeamento artificial incluem, sem limitação, diidroxiacetona (DHA).
Agentes para o tratamento de psoríase e/ou agentes para o tratamento de acne incluem, sem limitação, ácido salicílico, peróxido de benzoila, alcatrão de carvão, sulfito de selênio, óxido de zinco, piritiona (zinco e/ou sódio), tazaroteno, calcipotrieno, tretinoina, adapaleno, e semelhantes. Agentes que são eficazes para controlar ou modificar a queratinização incluem, sem limitação, tretinoina, tazaroteno e adapaleno.
As composições que compreendem um composto/agente ativo da invenção e, opcionalmente, pelo menos um desses agentes adicionais, devem ser administradas topicamente. Em uma aplicação primária, isso faz com que os compostos da invenção e qualquer outro agente ativo trabalhem sobre e no tratamento da pele, unha, cabelo, garra ou casco. Alternativamente, qualquer um dos agentes ativos aplicados topicamente também pode ser liberado sistemicamente por vias transdérmicas.
Nessas composições, um agente adicional cosmética ou farmaceuticamente eficaz, por exemplo, um agente antiinflamatório, vitamina, agente antienvelhecimento, filtro solar e/ou agente de tratamento de acne, por exemplo, é normalmente um componente menor (de cerca de 0,001% a cerca de 20% por peso ou, pref erivelmente, de cerca de 0,01 % a cerca de 10% por peso), com o restante sendo vários transportadores ou veículos e auxiliares do processamento úteis para a formação da forma de dosagem desej ada.
VII.c) Testes
Compostos preferidos para uso nas presentes- formulações tópicas terão certas propriedades farmacológicas. Essas propriedades incluem, sem limitação, baixa toxicidade, baixa ligação às proteínas séricas e meias-vidas in vitro e in vivo desejáveis. Podem ser usados ensaios para prever essas propriedades farmacológicas desejáveis. Os ensaios usados para prever a biodisponibilidade incluem o transporte através de monocamadas de células intestinais humanas, incluindo monocamadas de células Caco-2. A ligação às proteínas séricas pode ser prevista por meio de ensaios de ligação à albumina. Esses ensaios são descritos em uma revisão por Oravcova e cols. (1996, J Chromat. B677: 1-27). A meia-vida do composto é inversamente proporcional à freqüência de dosagem de um composto. As meias-vidas in vitro de compostos podem ser previstas por ensaios de meia-vida microssômica, como descrito por Kuhnz e Gleschen (Drug Metabolism and Dispositionl (1998) volume 26, páginas 1.120-1.127) .
A toxicidade e a eficácia terapêutica desses compostos podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padronizados em culturas de células ou animais experimentais, por exemplo, para determinação da LD50 (a dose letal para 50% da população) e da ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50% da população). A proporção de dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico, e ele pode ser expresso como a proporção entre a LD só e a ED50. Os compostos que exibem altos índices terapêuticos são preferidos. Os dados obtidos desses ensaios de cultura de células e de estudos animais podem ser usados na formulação de um intervalo de dosagem para uso em seres humanos. A dosagem desses compostos se situa preferivelmente dentro de uma faixa de concentrações circulantes que inclui a ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro dessa faixa, dependendo da forma de dosagem empregada e da via de administração utilizada. A formulação, a via de administração e a dosagem exatas podem ser escolhidas pelo médico do indivíduo à luz da condição do paciente (veja, por exemplo, Fingi e cols., 1975, em "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Cap. 1, ρ. 1).
VII.d) Administração
Para qualquer composto usado no método da invenção, a dose terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente a partir de ensaios de cultura de células, como aqui revelado. Por exemplo, uma dose pode ser formulada em modelos animais para se obter uma faixa de concentração circulante que inclui a EC50 (dose eficaz para 50% de aumento), como determinado em cultura de células, ou seja, a concentração do composto de teste que alcança metade da inibição máxima de crescimento celular bacteriano. Essa informação pode ser usada para determinar mais precisamente doses úteis em seres humanos.
Em geral, os compostos preparados pelos métodos, e a partir dos intermediários, aqui descritos serão administrados em uma quantidade terapêutica ou cosmeticamente eficaz por qualquer um dos modos de administração aceitos para agentes que apresentem utilidades similares. Será entendido, no entanto, que o nível de dose específico para qualquer paciente em particular dependerá de diversos fatores, incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, o peso corporal, a saúde geral, o sexo, a dieta, o tempo de administração, a via de administração e a taxa de excreção, combinação de fármacos, a gravidade da doença em particular submetida à terapia, e a avaliação do médico assistente. O fármaco pode ser administrado de uma vez ou duas vezes ao dia, ou até 3 ou 4 vezes a dia.
A quantidade e o intervalo da dosagem podem ser ajustados individualmente para fornecer níveis plasmáticos da porção ativa que sejam suficientes para manter efeitos inibidores sobre o crescimento celular bacteriano. Dosagens normais para o paciente para administração sistêmica variam de 0,1 a 1.000 mg/dia, preferivelmente, 1-500 mg/dia, mais preferivelmente 10-200 mg/dia, ainda mais preferivelmente 100-200 mg/dia. Definidas em termos de áreas de superfície corporal do paciente, as dosagens normais variam de 50-91 mg/m2/dia.
A quantidade do composto em uma formulação pode variar dentro da faixa total empregada por aqueles habilitados na técnica. Tipicamente, a formulação irá conter, com base no percentual do peso (p%) , de cerca de 0,01-10 p% do fármaco com base na formulação total, com o restante sendo formado por um ou mais excipientes farmacêuticos adequados. Preferivelmente, o composto está presente em um nível de cerca de 0,1-3,0 p%, mais preferivelmente, cerca de 1,0 p%.
A invenção é ainda ilustrada pelos Exemplos que serão apresentados a seguir. Os Exemplos não têm a intenção de definir ou limitar o escopo da invenção.
EXEMPLOS
Os dados de RMN de prótons são registrados em um espectrômetro Varian AS 300, e as mudanças químicas são registradas como δ (ppm) decrescente de tetrametilsilano. Os espectros de massa são determinados em Micromass Quattro IL
EXEMPLO 1
Preparação de 3 a partir de 1 1.1 Redução de ácido carboxílico
A uma solução de 1 (23,3 ramol) em THF anidra (70 ml) sob nitrogênio, foi adicionada gota a gota uma solução de BHa/THF (1,0 M, 55 ml, 55 mmol) a 0°C, e a mistura de reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A seguir, a mistura foi resfriada novamente com banho de gelo, e MeOH (20 ml) foi adicionado gota a gota para decompor BH3 em excesso. A mistura resultante foi agitada até que não fossem liberadas mais bolhas e, a seguir, NaOH 10% (10 ml) foi adicionado. A mistura foi concentrada e o resíduo foi misturado com água (200 ml) e extraído com EtOAc. 0 resíduo da evaporação rotatória foi purificado por cromatografia instantânea em coluna (flash) sobre sílica gel para gerar 20,7 mmol de 3.
1.2 Resultados
Compostos exemplares de estrutura 3 preparados pelo método acima são apresentados abaixo.
1.2.a Álcool 2-bromo-5-clorobenzílico
1H RMN (300 MHz, DMSO-CZe): δ 7,57 (d, J = 8, 7 Hz, 1H) , 7,50-7,49 (m, 1H), 7,28-7,24 (m, 1H), 5,59 (t, J = 6,0 Hz, 1H) e 4,46 (d, J = 6,0 Hz, 2H) ppm.
1.2.b Álcool 2-bromo-5-metoxibenzílico
1H RMN (300 MHz, DMS0-de): δ 7,42 (d, J = 8, 7 Hz, 1H) , 7,09 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 6,77 (dd, J1 = 3 Hz, J2 = 3 Hz, 1H) , 5,43 (t, J 5,7 Hz, 1H) , 4,44(d, J = 5,1 Hz, 2H) , 3,76(s, 3H).
EXEMPLO 2
Preparação de 3 a partir de 2
2.1. Redução de aldeído
A uma solução de 2 (Ζ = H, 10,7 mmol) em metanol (30 ml), foi adicionado borohidreto de sódio (5,40 mol) , e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. Foi adicionada água, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida para gerar 9,9 mmol de 3.
2.2 Resultados
Compostos exemplares de estrutura 3 preparados pelo método acima são apresentados abaixo.
2.2.a Álcool 2-bromo-5-(4-cianofenoxi)benzílico
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ (ppm) 2.00 (br s, 1H) , 4,75 (s, 2H) , 6,88 (dd, J = 8,5, 2,9 Hz, 1H) , 7,02 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 7,26 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 7,56 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7, 62 (d, J = 8, 8 Hz, 2H) .
2.2.b Álcool 2-bromo-4-(4-cianofenoxi)benzílico
1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 7,83 (d, 2H) , 7,58 (d, 1H) , 7,39 (d, 1H) , 7,18 (dd, 1H) , 7, IF (d, 2H) , 5,48 (t, 1H) e 4,50 (d, 2H) ppm.
2.2.c 5- (4-Cianofenoxi)-1-indanol
P.f. 50-53°C. MS (ESI + ): m/z = 252 (M+1) . HPLC: 99,7% de pureza a 254 nm e 99,0% a 220 nm 1H RMN (300 MHz, DMSO- d6) : δ 7,80 (d, 2H) , 7,37 (d, 1H) , 7,04 (d, 2H) , 6,98-6,93 (m, 2H) , 5,27 (d, 1H) , 5,03 (q, 1H) , 2,95-2,85 (m, 1H) , 2,75-2,64 (m, 1H) , 2,39-2,29 (m, 1H) e 1,85-1,74 (m, 1H) ppm.
2.2. d Álcool 2-bromo-5-(terc-butildimetilsiloxi) benzílico
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ (ppm) 0,20 (s, 6H) , 0,98 (s, 9H), 4,67 (br s,l Η), 6,65 (dd, J = 8,2, 2,6 Hz, 1H), 6,98 (d, J= 2,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J" = 8,8 Hz, 1H). Exemplos adicionais de compostos que podem ser produzidos por esse método incluem álcool 2-bromo-4-(3 - cianofenoxi)benziIico; álcool 2-bromo-4-(4 -
clorofenoxi)benzilico; álcool 2-bromo-4-fenoxibenzílico; álcool 2-bromo-5-(3,4-dicianofenoxi)benzilico; álcool 2-(2- bromo-5-fluorfenil)etilico;álcool 2-bromo-5- fluorbenzilico; e 1-bromo-2-naftalenometanol.
EXEMPLO 3
Preparação de 4 a partir de 3
3.1 Alquilação protetora
0 Composto 3 (207 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (150 ml) e resfriado até 0°C com banho de gelo. A essa solução sob nitrogênio, foram adicionados, em seqüência, N,N- diisopropil etil amina (5,4 ml, 31,02 mmol, 1,5 eq) e éter clorometil metilico (2 ml, 25,85 mmol, 1,25 eq) . A mistura de reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, e lavada com NaHCO3-água saturada e, a seguir, NaCl-água saturada. Após evaporação rotatória, o resíduo foi purificado por cromatografia instantânea em coluna sobre sílica gel para gerar 17,6 mmol de 4.
3.2 Resultados
Compostos exemplares de estrutura 4 preparados pelo método acima são apresentados abaixo.
3 . 2.a 2-Bromo-5-cloro-1- (metoximetoximetil)benzeno 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 7,63 (d, J = 8, 7 Hz, 1H) , 7,50 (dd, J = 2,4 & 0,6 Hz, 1H) , 7,32 (dd, J = 8,4 & 2,4 Hz, 1H), 4,71 (s, 2H), 4,53 (s, 2H) e 3,30 (s, 3H) ppm.
3.2.b 2-Bromo-5-flúor-1 - [1- (metoximetoxi)etil]benzeno 1H RMN (300,058 MHz, CDCl3) δ ppm 1,43 (d, J = 6, 5 Hz, 3H) , 3,38 (s, 3H) , 4,55 (d, J = 6,5 Hz, 1H) , 4,63 (d, J = 6,5 Hz, 1Η) , 5,07 (q, J = 6,5 Hz, 1Η) , 6,85 (m, 1H) , 7,25 (dd, J = 9,7, 2,6 Hz, 1H) , 7,46 (dd, J = 8,8, 5,3 Hz, 1H) . 3 . 2 . c 2-Bromo-5-flúor-1- [2- (metoximetoxi)etil]benzeno 1H RMN (300,058 MHz, CDCl3) δ ppm 3,04 (t, J = 6, 7 Hz, 2H) , 3,31 (s, 3H) , 3,77 (t, J" = 6,7 Hz, 2H) , 4,62 (s, 2H) , 6,82 (td, J = 8,2, 3,2 Hz, 1H), 7,04 (dd, J = 9,4, 2,9 Hz, 1H) , 7,48 (dd, J = 8,8, 5,3 Hz, 1H) .
3.2.d 2-Bromo-4,5-flúor-1-(metoximetoximetil) benzeno 1H RMN (300,058 MHz, CDCl3) δ ppm 3.42 (s, 3H) , 4,57 (d, J = 1,2 Hz, 2H), 4,76 (s, 2H), 7,3-7,5 (m, 2H).
3 . 2 . e 2-Bromo-5-ciano-1 -(metoximetoximetil)benzeno 1H RMN (300,058 MHz, CDCl3) δ ppm 3,43 (s, 3H) , 4,65 (s, 2H) , 4,80 (s, 2H) , 7,43 (dd, J = 8,2, 4,1 Hz, 1H) , 7,66 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 4,1 Hz, 1H).
3.2.f 2-Bromo-5-metôxi-1-(metoximetoximetil)benzeno 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 7,48 (dd, J1 = 1,2 Hz, J2 = 1,2 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,83 (dd, J1 = 3 Hz, J2 = 3 Hz, 1H), 4,69 (d, J = 1,2 Hz, 2H), 4,5 (s, 2H), 3,74 (d, J = 1,5 Hz, 3H), 3,32 (d, J = 2,1 Hz, 3H) ppm.
3.2.g 1-Benzil-l- (2-bromofenil)-1- (metoximetoxi)etano 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 7,70-7,67 (m, 1H) , 7,25- 7,09 (m, 6H) , 6,96-6,93 (m, 2H) , 4,61 (d, 1H) , 4,48 (d, 1H), 3,36-3,26 (m, 2H), 3,22 (s, 3H) e 1,63 (s, 3H) ppm. 3.2.h 2-Bromo-6-flúor-1- (metoximetoximetil)benzeno
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ (ppm) 3,43 (s, 3H) , 4,74 (s, 2H) , 4,76 (d, J = 2,1 Hz, 2H) , 7,05 (t, J = 9,1 Hz, 1H) , 7,18 (td, J = 8,2, 5,9 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,2 Hz, 1H).
3.2.i 2-bromo-4- (4 -cia.no fenoxi) -1- (metoximetoximetil) benzeno
1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 7,84 (d, 2H) , 7,56 (d, 1Η) , 7,44 (d, 1Η) , 7,19-7,12 (m, 3H) , 4,69 (s, 2H) , 4,56 (s, 2H) e 3,31 (s, 3H) ppm.
3 . 2 . j 2-Bromo-5-(terc-butildimetilsiloxi)- 1-(metoximetoximetil)benzeno
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ (ppm) 0,19 (s, 6H) , 0,98 (s, 9H) , 3,43 (s, 3H) , 4,59 (s, 2H) , 4,75 (s, 2H) , 6,64 (dd, J = 8,5, 2,9 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 8,5 Hz, 1H).
3 . 2 .k 2-Bromo-5- (2-cianofenoxi)-1-(metoximetoximetil) benzeno
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ (ppm) 3,41 (s, 3H) , 4,64 (s, 2H), 4,76 (s, 2H), 6,8-6,9 (m, 2H), 7,16 (td, J = 7,6, 0,9 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 7,49 (ddd, J = 8,8, 7,6, 1,8 Hz, 1H) , 7,56 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,67 (dd, J = 7,9, 1,8 Hz, 1H).
3.2.1 2-Bromo-5-fenóxi-l-(metoximetoximetil)benzeno
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ (ppm) 3,40 (s, 3H) , 4,62 (s, 2H) , 4,74 (s, 2H) , 6,80 (dd, J = 8,8, 2,9 hz, IH)., 7,01 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,12 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 2,9 hz, 1H) , 7,35 (1, J = 7,6 Hz, 2H) , 7,48 (d, J = 8,5 Hz, 1H) .
Exemplos adicionais de compostos que podem ser produzidos por esse método incluem 2-bromo-l- (metoximetoximetil)benzeno; 2-bromo-5-metil-l- (metoximetoximetil)benzeno; 2-bromo-5-(metoximetoximetil)- 1-(metoximetoximetil)benzeno; 2-bromo-5-flúor-1- (metoximetoximetil)benzeno; l-bromo-2- (metoximetoximetil)naftaleno; 2-bromo-4-flúor-1- (metoximetoximetil)benzeno; 2-fenil-l-(2-bromofenil)-1- (metoximetoxi)etano; 2-bromo-5-(4-cianofenoxi)-1- (metoximetoxi metil)benzeno; 2-bromo-4-(3-cianofenoxi)-1- (metoximetoximetil)benzeno; 2-bromo-4-(4-clorofenoxi)-1- (metoximetoximetil)benzeno;2-bromo-4-fenóxi-l- (metoximetoximetil)benzeno; 2-bromo-5-(3,4-dicianofenoxi) - 1-(metoximetoximetil)benzeno.
EXEMPLO 4
Preparação de I a partir de 4 por meio de 5
4.1 Metalação e boronilação
A uma solução de 4 (17,3 mmol) em THF anidra (80 ml) a -78°C sob nitrogênio, foi adicionado gota a gota terc-BuLi ou n-BuLi (11,7 ml), e a solução adquiriu uma cor marrom. A seguir, B(OMe)3 (1,93 ml, 17,3 mmol) foi injetado em uma porção, e o banho de resfriamento foi removido. A mistura foi aquecida gradualmente com agitação por 3 0 minutos e, a seguir, agitada com um banho-maria por 2 horas. Após adição de 6 N de HCl (6 ml), a mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente e cerca de 50% de hidrólise ocorreu, como demonstrado por análise TLC. A solução foi evaporada por rotação, e o resíduo foi dissolvido em MeOH (50 ml) e 6 N de HCl (4 ml) . A solução foi refluída por 1 hora, e a hidrólise foi completada, como indicado por Análise TLC. A evaporação rotatória gerou um resíduo que foi dissolvido em EtOAc, lavado com água, seco e, a seguir, evaporado. 0 produto bruto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna sobre sílica gel para gerar um sólido com 80% de pureza. 0 sólido foi ainda purificado por lavagem com hexano para gerar 7,2 mmol de I.
4.2 Resultados
Os dados analíticos para compostos exemplares de estrutura I são fornecidos abaixo. 4. 2.a 5-Cloro-l,3-diidro-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol 5-Clorobenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (Cl) P.f. 14 2-150°C. MS (ESI): m/z = 169 (M+l, positivo) e 167 (Μ-1, negativo) . HPLC (220 nm) . 99% de pureza. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,30 (s, 1H) , 7,71 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,49 (s, 1H) , 7,38 (d, J = 7,8 Hz, 1H) e 4,96 (s, 2H) ppm.
4. 2.b 1, 3-Diidro-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol Benzo [c] [1,2] oxaborol-1 (3H) -ol (C2)
P.f. 83 - 8 6 ° C. MS (ESI): m/z =135 (M+l, positivo) e 133 (M-l, negativo). HPLC (220 nm) . 95,4% de pureza. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,14 (s, 1H) , 7,71 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 7,45 (t, J = 7,5 Hz, 1H) , 7,38 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 7,32 (t, J = 7,1 Hz, 1H) e 4,97 (s, 2H) ppm.
4. 2. c5-Cloro-3 -metilbenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C3)
1H RMN (300 MHz, DMS0-dff) δ ppm 1,37 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 5,17 (q, J = 6,4 Hz, 1 Η), 7,14 (m, 1H), 7,25 (dd, J = 9,7, 2,3 Hz, 1H), 7,70 (dd, J = 8,2, 5,9 Hz, 1H), 9,14 (s, 1H).
4 .2 .d 6 - Flúor -1-hidróxi-1,2,3,4-tetrahidro-2,1-
benzoxaborina
6-Flúor-3,4-diidrobenzo [c] [1,2]oxaborinin-l-ol (C4) 1H RMN (300 MHz, DMSO-d5) δ ppm 2,86 (t, J = 5, 9 Hz, 25 2H) , 4,04 (t, J = 5,9 Hz, 2H) , 7,0-7,1 (m, 2H) , 7,69 (dd, J = 8,2, 7,2 Hz, 1H), 8,47 (s, 1H).
4 . 2. e 5, 6-Diflúor-l,3-diidro-l-hidrôxi-2,1- benzoxaborol
5, 6-Dif luorbenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C5)
1H RMN (300 MHz, DMS0-d&) δ ppm 4,94 (s, 2H) , 7,50 (dd, J=IO,7, 6,8 Hz, 1Η) , 7,62 (dd, J = 9,7, 8,2 Hz, 1Η) , 9,34 (S, 1Η) .
4 . 2 . f 5-Ciano-l,3-diidro-1-hidróxi-2,1-benzoxaborol 1-Hidróxi-l,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol-5- carbonitrila (C6)
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ ppm 5,03 (s, 2H) , 7,76 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,89 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,90 (s, 1H) , 9, 53 (s, 1H) .
4 .2 .g 1, 3-Diidro-1-hidrôxi-5-metóxi-2,1-benzoxaborol
5-Metoxibenzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol (C7) P.f. 102 -104 0C. MS ESI: m/z = 165,3 (M+l) e 162,9 (Μ- Ι). 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) : δ 8,95 (s, 1H) , 7,60 (d, J =
8.1 Hz, 1H) , 6,94 (s, 1H) , 6,88 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 4,91 (s, 2H), 3,77 (s,3 H) ppm.
4.2.h 1, 3-Diidro-l-hidróxi-5-metil-2,1-benzoxaborol 5-Metilbenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C8) P.f. 124 -12 8 ° C. MS ESI: m/z = 148,9 (M+l) e 146,9 (Μ- Ι). 1H RMN (300 MHz, DMSO-d&): δ 9,05 (s, 1H) , 7,58 (d, J =
7.2 Hz, 1H) , 7,18 (s, 1H) , 7,13 (d, J = 7,2 Hz, 2H) , 4,91 (s, 2H), 2,33 (s, 3H) ppm.
4 .2 . i 1, 3-Diidro-l-hidróxi-5-hidroximetil-2,1- benzoxaborol
5- (Hidroximetil) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C9) MS: m/z = 163 (M-l, ESI-). 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,08 (s, 1H) , 7,64 (d, 1H) , 7,33 (s, 1H) , 7,27 (d, 1H) , 5,23 (t, 1H), 4,96 (s, 2H), 4,53 (d, 2H) ppm.
4 .2. j 1, 3-Diidro-5 - flúor-1-hidróxi-2,1-benzoxaborol 5-Fluorbenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (CIO) P.f. 110-114°C. MS ESI: m/z = 150,9 (M-l). 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,20 (s, 1H) , 7,73 (dd, J1 = 6 Hz, J2 = 6 Hz, 1Η), 7,21 (m, 1Η), 7,14 (m, 1Η), 4,95 (s, 2Η) ppm.
4. 2. k 1, 3 -Diidro-2-oxa-1 -ciclopenta. [α]naftaleno
Nafto [1, 2-c] [1,2] oxaborol -1, (3Η) -ol (Cll)
P.f. 13 9-14 3 ° C. MS ESI: m/z = 184,9 (M+l). 1H RMN (300 MHz, DMSO - d6) : δ 9,21 (s, 1H), 8,28 (dd, J1 = 6,9 Hz, J2 = 0,6 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,59-7,47 (m, 3H), 5,09 (s, 2H) ppm.
4.2.m 1,3-Diidro-6-flúor-1-hidróxi-2,1-benzoxaborol
6-Fluorbenzo [c] [1, 2] oxaborol-1- (3H) -ol (C13)
P.f. 110-117,5°C. MS (ESI): m/z = 151 (M-l, negativo). HPLC (220 nm) : 100% de pureza. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d*) : δ 9,29 (s, 1H) , 7,46-7,41 (m, 2H) , 7,29 (td, 1H) e 4,95 (s, 2H) ppm.
4.2.η 3-Benzil-1,3-diidro-l-hidróxi-3-metil-2, 1 - benzoxaborol
3-Benzil-3-metilbenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C14)
MS (ESI): m/z = 239 (M+l, positivo). HPLC: 99,5% de
pureza a 220 nm e 95,9% a 254 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO- d6) : δ 8,89 (s, 1H), 7,49-7,40 (m, 3H), 7,25-7,19 (m, 1H), 20 7,09-7,05 (m, 3H), 6,96-6,94 (m, 2H), 3,10 (d, 1H), 3,00 (d, 1H) e 1,44 (s, 3H) ppm.
4.2.o 3-Benzil-l,3-diidro-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol
3-Benzilbenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C15)
MS (ESI + ): m/z = 225 (M+l). HPLC: 93,4% de pureza a 220 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,08 (s, 1H), 7,63 (dd, 1H), 7,43 (t, 1H), 7,35-7,14 (m, 7H), 5,38 (dd, 1H), 3,21 (dd, 1H) e 2,77 (dd, 1H) ppm.
4.2.ρ 1, 3-Diidro-4-flúor-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol
4-Fluorbenzo [c] [1, 2] oxaborol-1- (3H) -ol (C16)
1H RMN (300 MHz, DMS0-d5) δ (ppm) 5,06 (s, 2H), 7,26 (ddd, J = 9,7, 7,9, 0,6 Hz, 1Η), 7,40 (td, J = 8,2, 4,7 Hz, 1Η) , 7,55 (d, J = 7,0 Hz, 1Η) , 9,41 (s, 1Η) .
4 . 2 .q 5-(4-Cianofenoxi)-1,3-diidro-l-hidroxi-2,1- benzoxaborol
4-(1-Hidróxi-l,3-diidrobenzo[c][1,2]oxaborol-5- ilóxi)benzonitrila (C17)
1H RMN (300 MHz, DMSO-ds) δ ppm 4,95 (s, 2H) , 7,08 (dd, J = 7,9, 2,1 Hz, 1H) , 7,14 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 7,15 (d, J = 2,1 Hz, IH), 7,78 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 9,22 (s, 1H).
4 . 2 . r 6-(4 -Cianofenoxi)-1,3-diidro-l-hidrôxi-2,1- benzoxaborol
4-(1-Hidróxi-1,3-diidrobenzo [c] [1,2]oxaborol-6- ilôxi)benzonitrila (C18)
P.f. 14 8 -1510 C. MS: m/z = 252 (M+l) (ESI + ) e m/z = 250 (M-I) (ESI-) . HPLC: 100% de pureza a 254 nm e 98,7% a 220 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO-CZ6) : δ 9,26 (s, 1H) , 7,82 (d, 2H) , 7,50 (d, 1H) , 7,39 (d, 1H) , 7,26 (dd, 1H) , 7,08 (d, 2H) e 4,99 (s, 2H) ppm.
4.2.s 6-(3-Cianofenoxi)-1,3-diidro-1-hidróxi-2,1- benzoxaborol
3-(1-Hidróxi-l,3-diidrobenzo[c][1,2]oxaborol-6- ilóxi)benzonitrila (C19)
P.f. 14 6-149°C. MS: m/z = 252 (M+l) (ESI + ) e m/z = 250 (M-I) (ESI-) . HPLC: 100% de pureza a 254 nm e 97,9% a 220 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,21 (s, 1H) , 7,60-7,54 (m, 2H) , 7,50-7,45 (m, 2H) , 7,34-7,30 (m, 2H) , 7,23 (dd, 1H) e 4 , 98 (s, 2H) ppm.
4.2. t 6-(4-clorofenoxi)-1,3-diidro-l-hidróxi-2,1- benzoxaborol 6- (4 -Clorof enoxi) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C20) P.f. 119-130°C. MS: m/z = 261 (M+l) (ESI+) e m/z = 259 (M-I) (ESI-). HPLC: 100% de pureza a 254 nm e 98,9% a 220 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,18 (s, 1H) , 7,45-7,41 (m, 3H),7,29 (d, 1H) , 7,19 (dd, 1H) , 7,01 (d, 2H) e 4,96 (s, 2H) ppm.
4 . 2 . u 6-Fenóxi-l,3-diidro-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol 6-Fenoxibenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C21) P.f. 95 - 9 9 ° C. MS: m/z = 227 (M+l) (ESI + ) e m/z = 225 (M-I) (ESI-) . HPLC: 100% de pureza a 254 nm e 98,4% a 220 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,17 (s, 1H) , 7,43-7,35 (m, 3H) , 7,28 (s, 1H) , 7,19-7,09 (m, 2H) , 6,99 (d, 2H) e 4,96 (s, 2H) ppm.
4 . 2. ν 5-(4 - CianobenziIoxi)-1,3 -diidro-1 -hidróxi-2,1 - benzoxaborol
4-((1-Hidróxi-l,3-diidrobenzo[c][1,2]oxaborol-5- ilóxi)metil)benzonitrila (C22)
1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) 4,90 (s, 2H) , 5,25 (s, 2H) , 6,98 (dd, J = 7,9, 2,1 Hz, 1H) , 7,03 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,62 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 7,64 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,86 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 9,01 (s, 1H).
4 .2 .w 5-(2 - Cianofenoxi)-1,3-diidro-1-hidróxi-2,1- benzoxaborol
2-(1-Hidróxi-l,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol-5- ilóxi)benzonitrila (C23)
1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) 4,95 (s, 2H) , 7,0- 7,2 (m, 3H), 7,32 (td, J = 7,6, 1,2 Hz, 1H), 7,68 (ddd, J = 9,1, 7,6, 1,8 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,91 (dd, J=I1S1 1,8 Hz, 1H).
4.2.x 5-Fenóxi-1,3-diidro-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol 5-Fenoxibenzo [c] [1,2] oxaborol -1 (3H) -ol (C24) 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 4,91 (s, 2H) , 6,94 (s, 1H) , 6,96 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 7,05 (d, J = 7,6 Hz, 2H) , 7,17 (t, J = 7,3 Hz, 1H) , 7,41 (t, J = 7,3 Hz, 2H) , 7,7 0 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 9,11 (s, 1H).
4 .2 .y 5-[4-(N,N-Dietilcarbamoil)fenóxi]-1,3-diidro-l- hidróxi-2,1-benzoxaborol
N,N-dietil-4- (1-hidróxi-l, 3-diidrobenzo [c] [1, 2] oxaborol-5-ilóxi)benzamida (C25)
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 1,08 (br s, 6H) , 3,1-3,5 (m, 4H), 4,93 (s, 2H), 7,0-7,1 (ra, 4H), 7,37 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,73 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 9,15 (s, 1H).
4. 2. z 1,3-Diidro-l-hidróxi-5-[4-(morfolinocarbonil) fenóxi]-2,1-benzoxaborol
(4-(1-Hidróxi-1,3 -diidrobenzo [c] [1, 2] oxaborol-5- ilóxi)fenil) (morfolino)metanona (C26)
1H RMN (300 MHz, DMSO-d5) δ (ppm) 3,3-3,7 (m, 8H) , 4,93 (s, 2H) , 7:0-7,1 (m, 4H) , 7,44 (d, J = 8,8 Hz, 2H) , 7, 73 (d, J= 7,9 Hz, 1H) , 9,16 (s, 1H) .
4.2.aa 5-(3,4-Dicianofenoxi)-l,3-diidro-l-hidrõxi-2,l- benzoxaborol
4-(1-Hidróxi-l,3-diidrobenzo [c] [1,2]oxaborol-5- ilóxi)ftalonitrila (C27)
1H RMN (3 00 MHz, DMS0-d6) δ (ppm) 4,97 (s, 2H) , 7,13 (dd, J = 7,9, 2,1 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,43 (dd, J = 8,8, 2,6 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 9,26 (s, 1H).
4.2.ab 6-Feniltio-l,3-diidro-l-hidróxi-2,1- benzoxaborol 6- (Feniltio) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C28) P.f. 121-124 ° C. MS: m/z = 243 (M+l) (ESI + ) e m/z = 241 (M-I) (ESI-) . HPLC: 99,6% de pureza a 254 nm e 99,6% a 220 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO-dff) : δ 9,25 (s, 1H) , 7,72 (dd, 1H) , 7,48 (dd, 1H) , 7,43 (dd, 1H) , 7,37-7,31 (m, 2H) , 7,29- 7,23 (m, 3H) e 4,98 (s, 2H) ppm.
4.2.ac 6-(4-trifluormetoxifenoxi)-1,3-diidro-l- hidróxi-2,1-benzoxaborol
6-(4-(Trifluormetoxi)fenóxi)benzo[c][1, 2] oxaborol- l(3H)-ol (C29)
P.f. 97 - IOl0C. MS: m/z = 311 (M+l) (ESI + ) e m/z = 309 (M-I) (ESI-) . HPLC: 100% de pureza a 254 nm e 100% a 220 nm. 1H (300 MHz, DMSO-d5) : δ 9,20 (s, 1H) , 7,45 (d, 1H) , 7,37 (d, 2H) , 7,33 (d, 1H) , 7,21 (dd, 1H) , 7,08 (d, 2H) e 4,97 (s, 2H) ppm.
4.2.ad 5- (N-Metil-N- feniIsulfonilamino)-1, 3-diidro-1 - hidroxi-2,1-benzoxaborol
N-(1-Hidróxi-l,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol-5-il) -N- metilbenzenossulfonamida (C30)
P.f. 85 - 95 0C. MS: m/z = 304 (M+l) (ESI + ) e m/z = 302 (M-I) (ESI-). HPLC: 96,6% de pureza a 254 nm e 89,8% a 220 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,23 (s, 1H) , 7,72-7,63 (m, 2H), 7,56 (t, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,16 (s, 1H), 7,03 (d, 1H), 4,91 (s, 2H) e 3,14 (s, 3H) ppm.
4.2.ae 6 -(4-Metoxifenoxi)-1,3-diidro-l-hidróxi-2,1- benzoxaborol
6- (4 -Metoxi fenoxi) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C31) P.f. 12 6-129°C. MS: m/z = 257 (M+l) (ESI+) e m/z = 255 (M-I) (ESI-). HPLC: 98,4% de pureza a 254 nm e 98,4% a 220 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,14 (s, IH), 7,36 (d, 1Η) , 7,19 (S, 1Η) , 7,12 (d, 1Η) , 6,98 (d, 2Η) , 6,95 (d, 2Η), 4,93 (s, 2Η) e 3,73 (s, 3Η) ppm.
4.2.af 6-(4-Metoxifeniltio)-1,3-diidro-l-hidróxi-2,1- benzoxaborol
6- (4 -Metoxi feniltio) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C32)
P.f. 95-100°C. MS: m/z = 272 (Μ+), 273 (M+l) (ESI+) e m/z = 271 (M-I) (ESI-). HPLC: 100% de pureza a 254 nm e 99,2% a 220 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO-dg) : δ 9,20 (s, 1H) , 7,51 (d, 1H), 7,39-7,28 (m, 4H), 6,98 (d, 2H), 4,93 (s, 2H) e 3,7 6 (s, 3H) ppm.
4.2.ag 6-(4-Metoxifenilsulfonil)-1,3-diidro-l-hidrõxi- 2,1-benzoxaborol
6- (4 -Metoxi fenilsulfonil) benzo [c] [1,2] oxaborol-1 (3H) - ol (C33)
P.f. 180-192°C. MS: m/z = 305 (M+l) (ESI+) e m/z = 303 (M-I) (ESI-). HPLC: 96,8% de pureza a 254 nm e 95,5% a 220 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,46 (s, 1H), 8,28 (s, 1H) , 7,99 (d, 1H) , 7,85 (d, 2H) , 7,61 (d, 1H) , 7,11 (d, 2H), 5,02 (s, 2H) e 3,80 (s, 3H) ppm.
4.2.ah 6-(4-Metoxifenilsulfinil)-1,3-diidro-l-hidróxi- 2,1-benzoxaborol
6-(4 -Metoxifenilsulfinil)benzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)- ol (C34)
1H RMN (300 MHz, DMSO-Ciff): δ 9,37 (s, 1H) , 8,02 (d, 1H) , 7,71 (dd, 1H) , 7,59 (d, 2H) , 7,53 (d, 1H) , 7,07 (d, 2H), 5,00 (s, 2H) e 3,76 (s, 3H) ppm.
4 .2.ai 5-Trifluormetil-l,3-diidro-l-hidróxi-2,1- benzoxaborol
5-(Trifluormetil) benzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol (C35) P.f. 113-118°C. MS: m/z = 203 (M+l) (ESI+) e m/z = 201 (M-I) (ESI-) . HPLC: 100% de pureza a 254 nm e 100% a 220 nm. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : δ 9,48 (s, 1H) , 7,92 (d, 1H) , 7,78 (s, 1H) , 7,67 (d, 1H) e 5,06 (s, 2H) ppm.
4.2.aj 4-(4-Cianofenoxi)-1,3-diidro-l-hidróxi-2,1- benzoxaborol
4 -(1-Hidróxi-1,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol-4- ilóxi)benzonitrila (C3 6)
Para a reação de acoplamento entre 4 -fluorbenzonitrila e fenol substituído para gerar o material de partida 2, veja Igarashi, S.; e cols. Chemical & Pharmaceutical Bulletin (2000), 48(11), 1.689-1.697.
1H RMN (300 MHz, DMS0-de) (ppm) 4,84 (s, 2H) , 7,08 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,18 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 7,3 Hz, 1H) , 7,63 (d, J = 7,3 Hz, 1H) , 7,82 (d, J = 8,5 Hz, 2H) .
4.2.ak 5-(3 - Cianofenoxi)-1,3-diidro-l-hidróxi-2, 1- benzoxaborol
3-(1-Hidróxi-1,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol-5-ilóxi) benzonitrila (C37)
Para acoplamento entre 3-fluorbenzonitrila e fenol substituído para gerar material de partida 2: Li, F. e cols., Organic Letters (2003), 5(12), 2.169-2.171.
1H RMN (3 00 MHz, DMSO-d6) (ppm) 4,93 (s, 2H) , 7,0-7,1 (m, 2H), 7,3-7,4 (m, 1H), 7,5-7,7 (m, 3H), 7,75 (d, J = 8,2 Hz, 1H).
4.2.al 5-(4-Carboxifenoxi)-1,3-diidro-l-hidróxi-2,1- benzoxaborol
Ácido 4 -(1-hidróxi-1,3-diidrobenzo [c] [1,2]oxaborol-5- ilóxi)benzóico (C38) A uma solução de 5 -(4-cianofenoxi)-l-hidróxi-2,1- benzoxaborol obtido em C17 (430 mg, 1,71 mmol) em etanol (10 ml), foram adicionados 6 mol/1 de hidróxido de sódio (2 ml), e a mistura foi refluída por 3 horas. Ácido clorídrico (6 mol/1, 3 ml) foi adicionado, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila), seguido por trituração com éter diisopropíIico para gerar o composto-alvo (37 mg, 8%) .
1H RMN (300 MHz, DMS0-d6) δ (ppm) 4,94 (s, 2H) , 7,0- 7,1 (m, 4H), 7,76 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 9,19 (s, 1H), 12,8 (br s, 1H).
4.2.am 1-Hidróxi-l,3-diidro-5-[4 -(tetrazol-1-il) fenóxi]-2,1-benzoxaborol
5-(4-(1H-tetrazol-5-il)fenóxi)benzo[c] [1,2]oxaborol- 1(3H)-ol (C39)
Uma mistura de 5-(4-cianofenoxi)-l-hidróxi-2,1- benzoxaborol (200 mg, 0,797 mmol), azida de sódio (103 mg, 1,5 9 mmol) e cloreto de amônio (85 mg, 1,6 mmol) em N,N- dimetilformamida (5 ml) foi agitada a 80°C por dois dias. Foi adicionada água, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, e seca sobre sulfato de sódio anidro. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila), seguido por trituração com acetato de etila para gerar o composto-alvo (55 mg, 23%).
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 4,95 (s, 2H) , 7,0- 7,1 (m, 2Η) , 7,23 (d, J = 8,8 Hz, 2Η) , 7,76 (d, Jr = 7,9 Hz, 1Η), 8,05 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 9,18 (br s, 1H).
EXEMPLO 5
Preparação de I a partir de 2 por meio de 6
5.1 Boronilação catalítica, redução e ciclização
Uraa mistura de 2 (10,0 mmol), bis(pinacolato)diboro (2,79 g, 11,0 mmol), PdCl2 (dppf) (250 mg, 3 mol%) e acetato de potássio (2,94 g, 30,0 mmol) em 1,4-dioxano (40 ml) foi agitada a 8 0°C de um dia para o outro. Foi adicionada água e a mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi dissolvido em tetrahidrofurano (80 ml) e, a seguir, periodato de sódio (5,56 g, 26,0 Mmol) foi adicionado. Após agitação em temperatura ambiente por 3 0 minutos, HCl 2 N (10 ml) foi adicionado, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. Foi adicionada água e a mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi tratado com éter para gerar 6,3 mmol do ácido borônico correspondente. À solução do ácido borônico obtido (0,595 mmol) em metanol (5 ml) , foi adicionado borohidreto de sódio (11 mg, 0,30 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. Foi adicionada água, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel para gerar 0,217 mmol de I.
5.2 Resultados
Os dados analíticos para compostos exemplares de estrutura I são fornecidos abaixo.
5.2.a 1, 3-Diidro-5-£lúor-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol (CIO)
Os dados analíticos para esse composto estão listados em 4.2 . j .
EXEMPLO 6
Preparação de I a partir de 3
6.1 Boronilação e ciclização em um pote
A uma solução de 3 (4,88 mmol) e borato de triisopropila (1,35 ml, 5,86 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml), foi adicionado n-butillítio (1,6 mol/1 em hexanos; 6,7 ml, 10,7 mmol) gota a gota ao longo de 15 minutos a -78°C sob atmosfera de nitrogênio, e a mistura foi agitada por 2 horas, permitindo-se que aquecesse até a temperatura ambiente. A reação foi extinta com HCl 2 N, e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio anidro. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel e tratado com pentano para gerar 0,41 mmol de I.
6.2 Resultados
Os dados analíticos para compostos exemplares de estrutura I são fornecidos abaixo.
6. 2 . a 1,3-Diidro-5-flúor-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol (CIO)
Os dados analíticos para esse composto estão listados em 4 . 2.j. EXEMPLO 7
Preparação de I a partir de 3
7.1 Boronilação e ciclização em um pote com destilação
A uma solução de 3 (4,88 mmol) em tolueno (20 ml), foi adicionado borato de triisopropila (2,2 ml, 9,8 mmol), e a mistura foi aquecida no refluxo por 1 hora. 0 solvente, o álcool isopropilico gerado e o excesso de borato de triisopropila foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em tetrahidrofurano (10 ml) e resfriado até -78°C. n-Butillítio (3,2 ml, 5,1 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 10 minutos, e a mistura foi agitada por 1 hora, permitindo-se que aquecesse até a temperatura ambiente. A reação foi extinta com HCl 2 N, e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio anidro. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel para gerar 1,54 mmol de I.
7.2 Resultados
Os dados analíticos para compostos exemplares de estrutura I são fornecidos abaixo.
7. 2. a 1, 3-Diidro-5-flúor-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol
(CIO)
Os dados analíticos para esse composto estão listados em 4 . 2 . j .
EXEMPLO 8
Preparação de 8 a partir de 7
8.1 Brominação
A uma solução de 7 (49,5 mmol) em tetracloreto de carbono (200 ml) , foram adicionados N-bromossuccinimida (8,81 g, 49,5 ramol) e Ν,N- azoisobutilonitrila (414 mg, 5 mol%), e a mistura foi aquecida no refluxo por 3 horas. Foi adicionada água, e a mistura foi extraída com clorofórmio.
A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio anidro. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida para gerar o intermediário bruto metil- brominado 8.
EXEMPLO 9
Preparação de 3 a partir de 8
9.1 Hidroxilação
Ao Composto 8 bruto (49,5 mmol), foram adicionados dimetilformamida (150 ml) e acetato de sódio (20,5 g, 250 mmol) , e a mistura foi agitada a 80°C de um dia para o outro. Foi adicionada água, e a mistura foi extraída com éter. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, e seca sobre sulfato de sódio anidro. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida. Ao resíduo, foram adicionados metanol (150 ml) e 1 N de hidróxido de sódio (50 ml) , e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura de reação foi concentrada a cerca de um terço do volume sob pressão reduzida. Água e ácido clorídrico foram adicionados, e a mistura foi extraída com acetato de etila.
A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, e seca sobre sulfato de sódio anidro. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel seguido por trituração com diclorometano para gerar 21,8 mmol de 3.
9.2 Resultados
Compostos exemplares de estrutura 3 preparados pelo método acima são apresentados abaixo. 9.2.a. Álcool 2-bromo-5-cianobenzílico
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ ppm 4,51 (d, J= 5,9 Hzi 2H) , 5,67 (t, J = 5,6 Hz, 1H) , 7,67 (dd, J = 8,2, 2,0 Hz, 1H) , 7, 8 0 (s, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,83 (d, J = 2,0 Hz, 1H) .
Exemplos adicionais de compostos que podem ser produzidos por esse método incluem álcool 2-bromo-5-(4- cianofenoxi)benziIico.
EXEMPLO 10
Preparação de 9 a partir de 2
10.1 Reação
Uma mistura de 2 (20,0 mmol), cloreto de (metoximetil)trifenilfosfônio (8,49 g, 24,0 Mmol) e terc- butóxido de potássio (2,83 g, 24,0 mol) em N,N- dimetilformamida (50 ml) foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A reação foi extinta com HCl 6 N, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água (x 2) e salmoura, e seca sobre sulfato de sódio anidro. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida. Ao resíduo foram adicionados tetrahidrofurano (60 ml) e HCl 6 N, e a mistura foi aquecida no refluxo por 8 horas. Foi adicionada água, e a mistura foi extraída com éter. A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio anidro. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida para gerar 16,6 mmol de 9.
EXEMPLO 11
Método de preparação da Etapa 13
11.1 Reação
Uma solução de I em um solvente de álcool apropriado (R1-OH) foi refluída sob atmosfera de nitrogênio e, a seguir, destilada para a remoção do álcool, para gerar o éster correspondente.
EXEMPLO 12
Preparação de Ib a partir de Ia
12.1 Reação
A uma solução de Ia em tolueno, foi adicionado amino álcool, e o sólido precipitado foi coletado para gerar Ib.
12.2 Resultados
la (500 mg, 3 3 mmol) foi dissolvido em tolueno (37 10 ml) a 8 0 ° C, e foi adicionada etanolamina (0,20 ml, 3,3 mmol) . A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, a seguir, banho de gelo, e filtrada para gerar C4 0 como um pó branco (6 00,5 mg, 94%) .
12.2a. Aduto de etanolamina de 1, 3-Diidro-5-flúor-1- hidróxi-2,1-benzoxaborol (C40)
1H RMN (300 MHz, DMS0-d5) δ (ppm) 2,88 (t, J=6,2 Hz, 2H) , 3,75 (t, J=6, 3 Hz, 2H) , 4,66 (s, 2H) , 5,77 (br, 2H) , 6,85-6,91 (m, 2H), 7,31 (td, J=7,2, 1,2 Hz, 1H).
EXEMPLO 13
Formulações
Os compostos da presente invenção podem ser administrados a um paciente com a utilização de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto aqui descrito em qualquer uma das três formulações de esmalte seguintes e uma formulação de solvente. A formulação de esmalte fornece boa durabilidade, enquanto a formulação de solvente fornece boa facilidade de uso. Esses compostos também podem ser aplicados com o uso de uma formulação em spray, esmalte paint-on, gotas, ou outras.
1. 1:4 de propileno glicol:etanol; 1:10 p/vol de composto da invenção;
2. 1:4 de poli(éter vinil metxlico-alt-éster monobutílico de ácido maléico: etanol; 1:10 p/vol de composto da invenção;
3. 56% de etanol; 14% de água; 15% de poli(2- hidroxietil metacrilato); 5% de sebacato de dibutila; 10% de composto da invenção;
4. 55% de etanol; 15% de acetato de etila; 15% de poli (acetato vinila) ; 5% de sebacato de dibutila; 10% de composto da invenção.
A preparação dessas formulações é bem conhecida na técnica, e é encontrada em referências como, por exemplo, "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", supra.
EXEMPLO 14
Teste de MIC antifúngica
Todos os testes de MIC seguiram as diretrizes do "National Committee for Clinicai Laboratory Standards" (NCCLS) para testes antimicrobianos de leveduras (M27-A2 NCCLS) e fungos filamentosos (Pfaller e cols., publicação NCCLS M3 8-A — "Reference Method for Broth Dilution
Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi; Approved Standard". Wayne, PA: NCCLS; 2002 (Vol. 22, N0 16), exceto as espécies de Malassezia, que foram incubadas em um caldo de uréia (Nakamura e cols., Antimicrobial
Agents And Chemoterapia, 2000, 44(8) p. 2.185-2.186). Os resultados dos testes de MIC são apresentados na FIG.l.
EXEMPLO 15
Ensaio de queratina
Muitos agentes antifúngicos se ligam fortemente à queratina, o que não apenas reduz sua potência antifúngica, mas também restringe sua penetração na unha. As afinidades dos compostos ao pó de queratina foram determinadas por um método descrito em Tatsumi, Antimicrobial Agents and Chemoterapia, 46(12): 3.797-3.801 (2002).
Uma comparação dos dados de MIC para vários compostos da invenção contra T. rubrum, com e sem a presença de queratina 5%, é apresentada na FIG. 1.
EXEMPLO 16
(C10) Espectro de atividade antifúngica
(C10) é um composto inédito em desenvolvimento para uso como um tratamento antifúngico tópico. A finalidade desse estudo foi determinar a concentração inibidora mínima (MIC) para (C10) contra 19 cepas de fungos de teste, incluindo: Aspergillus fumigatus (A. fumigatus) , Candida albicans (C. albicans, tanto cepas sensíveis quanto resistentes ao fluconazol) , Candida glabrata (C. glabrata) , Candida krusei (C. krusei) , Cryptococcus neoformans (C. neoformans) , Candida parapsilosis (C. parapsilosis) , Candida tropicalis (C. tropicalis), Epidermophyton floccosum {E. floccosum), Fusarium solani (F. solani), Malassezia furfur (M. furfur), Malassezia pachydermatis (M. pachydermatis), Malassezia sympodialis (M. sympodialis) , Microsporum audouinii (M. audouinii) , Microsporum canis (M. canis), Microsporum gypseum {M. gypseum), Triehophyton mentagrophytes (T. mentagrophytes) , Triehophyton rubrum (Γ. rubrum), Triehophyton tonsurans (T. tonsurans). O crescimento fúngico foi avaliado após exposição a diferentes concentrações de (C10). Além disso, a MIC para (C10) contra T. rubrum na presença de pó de queratina 5% e a concentração fungicida mínima (MFC) para (C10) contra T. rubrum e Τ. mentagrophytes também foram determinadas. Ciclopirox e/ou terbinafina e/ou fluconazol e/ou itraconazol foram usados como comparadores e testados de forma similar. Esses estudos foram feitos em NAEJA Pharmaceutical, Inc.
Materiais e métodos
(CIO) foi obtido de Anacor Pharmaceutieals, Inc. (Paio Alto, CA, USA) . As cepas ATCC foram obtidas de ATCC (Manassas, VA, EUA). Ciclopiroxolamina foi obtida de Sigma- Aldrich Co. (St. Louis, MO, EUA). Terbinafina, fluconazol e itraconazol foram sintetizados em NAEJA Pharmaceutical Inc. (Edmonton, AB, Canadá). Os procedimentos experimentais e os dados analíticos para esses padrões estão armazenados nos arquivos do NAEJA.
Todos os testes de MIC seguiram as diretrizes do "National Committee for Clinicai Laboratory Standards" (NCCLS) para testes antimicrobianos de leveduras e fungos filamentosos (Pfaller e cols., 2002), exceto as espécies de Malassezia, que foram incubadas em um caldo de uréia (Nakamura e cols. , 2000) . 0 método de diluição de microcaldo foi usado para testar a atividade in vitro de (CIO) contra 19 cepas de fungos de teste. Resumidamente, os compostos foram dissolvidos em DMSO, e diluídos em água estéril para gerar um estoque de trabalho. Diluições seriais de duas vezes do estoque de trabalho foram preparadas em placas de 96 poços e foi adicionado meio. 0 meio foi RPMI, RPMI + MOPS, RPMI modificado ou caldo de uréia modificado. As placas foram inoculadas com as suspensões fúngicas para gerar um tamanho de inóculo final de 0,5-2,5 χ IO3 células/ml para leveduras ou 0,4-5 χ IO4 CFU/ml para fungos filamentosos e, a seguir, incubadas por 24-168 horas a 35°C. A concentração final de DMSO não ultrapassou 5%. A MIC foi definida como a menor concentração que produzisse uma redução de mais de 90% do crescimento, quando comparada com um controle sem fármaco. A MFC foi definida como a menor concentração que matasse mais de 90% dos fungos, quando comparada com um controle sem fármaco.
Resultados e conclusões
Os resultados para a MIC de (CIO) e para compostos de referência contra 19 cepas de fungos são mostrados na FIG. 2. Os resultados para a MFC de ClO contra 2 cepas de fungos são mostrados na Tabela 2. (CIO) teve valores de MIC variando de 0,25-2 pg/ml contra todos os fungos testados. A adição de pó de queratina 5% ao meio não afetou a MIC contra T. rubrum. (CIO) teve atividade fungicida contra T. rubrum e T. mentagrophytes, com valores de MFC de 8 e 16 pg/ml, respectivamente. Os compostos de referência tiveram valores de MIC na faixa definida por NCCLS.
EXEMPLO 17
A solubilidade, estabilidade e determinação de P Log de compostos da presente invenção por LC/MS/MS
A solubilidade, estabilidade em temperatura ambiente e o P Log de C10 foram determinados pela metodologia seguinte.
Reagentes e padrões:
Etanol. "200 proof ACS Grade" (EM Science, Gibbstown, NJ, EUA); Octanol: Álcool octílico (EM Science, Gibbstown, NJ, EUA) ; Acetonitrila: grau de HPLC (Burdick & Jackson, 30 Muskegon, MI, EUA) ; Acetato de amônio: lote 3272X49621 (Mallinckrodt, Phillipsburg, NJ, EUA); CIO: lote A032-103 (Anacor Pharmaceuticals, Palo Alto, CA, EUA) ; p-Nitrofenol (PNP) : lote OGNOl (TCI America, Portland, OR, EUA) ; Água: Água deionizada (from Millipore systems, Billerica, MA, EUA)
Solubilidade
N-Oetanol e água foram pré-saturados mutuamente por agitação vigorosamente de uma mistura de ambos os solventes por até 12 horas, e permitiu-se que mistura se separasse. A solubilidade em cada solvente foi determinada por adição de 10 μl de 20, 40, 200, 1.000 e 5.000 pg/ml de ClO em DMSO ao n-octanol ou água pré-saturado. Após a amostra ser turbilhonada por 10 segundos, a amostra foi centrifugada por 10 minutos a aproximadamente 3.000 rpm. Foi feita uma inspeção visual para determinar se a amostra estava transparente ou se havia se formado um pélete no fundo do tubo.
Log P
ClO (10 μl de 5.000 μ/ml) a 2X a concentração final foi adicionado a 0,5 ml de n-octanol pré-saturado e misturado. Um volume igual (0,5 ml) de pré-água saturada foi adicionado, misturado por turbilhonamento e, a seguir, misturado em um agitador rotatório por uma hora e 24 horas em triplicata a aproximadamente 25°C. As camadas orgânica e aquosa foram separadas por centrifugação por 5 minutos a aproximadamente 2.000 rpm. Vinte e cinco μl da camada de octanol (superior) foram removidos e colocados em um tubo pré- rotulado. Vinte e cinco μΐ da camada aquosa (inferior) foram removidos, tendo-se o cuidado de evitar a contaminação com octanol, e colocados em um tubo pré- rotulado.
Estabilidade em temperatura ambiente
ClO (10 μl de 5.000 pg/ml) foi adicionado tanto a 0,5 ml de n-octanol quanto a 0,5 ml de água em triplicata. As amostras foram misturadas. Amostras de 0 hora e 24 horas foram estocadas a aproximadamente -20°C. Vinte e cinco μl de amostra foram usados para análise.
Procedimento de extração C10
Para a amostra de octanol, 25 μl de etanol, 25 μl de água e 300 μl de acetonitrila contendo o padrão interno foram adicionados. Para a amostra de água, 25 μl de etanol, 25 μΐ de octanol e 300 μΐ de acetonitrila contendo o padrão interno [60 ml de acetonitrila adicionam 6 μl de PNP (1.000 μg/ml)] foram adicionados. Para os calibradores, 25 μl de octanol, 25 μl de água e 300 μl de acetonitrila contendo o padrão interno foram adicionados. A amostra foi turbilhonada por 10 segundos. Duzentos μl da camada orgânica foram transferidos para um frasco limpo desativado do autosampler.
Cálculos
Uma regressão linear ponderada de l/concentração foi usada para a quantificação de C10. Toda a integração foi realizada com áreas de pico com o uso do programa Analyst versão 1.3, Applied Biosystems. Para C10, foram usadas proporções da área de pico para o analisado para o padrão interno PNP em todas as quantificações.
O coeficiente de partição (P) foi calculado de acordo com a equação detalhada abaixo:
P = [concentração da amostra] octanol / [concentração da amostra] água P Log = logio (coeficiente de partição) Resultados:
Como mostrado na Tabela 17A, a solubilidade de ClO tanto em octanol quanto em água é muito boa ao longo do intervalo de concentrações testado.
Tabela 17A. Solubilidade de ClO em água e octanol
<table>table see original document page 277</column></row><table>
A Tabela 17B mostra os resultados da determinação de Iog P após 1 hora e 24 horas para ClO. 0 Iog P médio após 1 hora foi de 1,97 (n = 3) . Após 24 horas, as concentrações tanto na camada octanol quanto na camada de água permaneceram as mesmas. 0 Iog P médio após 24 horas foi de 1, 93 (n = 3) .
Tabela 17B. P Log de ClO
<table>table see original document page 277</column></row><table>
Foi iniciado um estudo da estabilidade para ClO em temperatura ambiente ao longo de 24 horas, sem mistura contínua. A Tabela 17C mostra que ClO em água pura e em octanol é estável ao longo de 24 horas.
Tabela 17C. Estabilidade de água e octanol para ClO em temperatura ambiente após 24 horas.
<table>table see original document page 278</column></row><table>
EXEMPLO 18
Determinação da penetração de C10 na unha humana
Foram feitos dois estudos de penetração na unha com base no protocolo em Hui e cols., Journal of Pharmaceutical Sciences, 91(1): 189-195 (2002) ("protocolo de Hui"). A finalidade desse estudo foi determinar e comparar a penetração e distribuição de ClO em veículo na placa ungueal humana in vitro em relação a ciclopirox 8% p/p em esmalte comercial (Penlac®).
MATERIAIS E MÉTODOS
Artigo de teste e formulação de dosagem
Ciclopirox 8% p/p em esmalte comercial foi fabricado por Dermick (Berwyn, PA). A pureza radioquímica e a atividade específica da substância química foram determinadas como >95% e 12,5 mCi/mmol, respectivamente.
O estudo era composto de dois grupos. As composições (peso %) das formulações de dosagem são as seguintes:
Composto ativo radiomarcado em quatro grupos.
<table>table see original document page 278</column></row><table> <table>table see original document page 279</column></row><table>
* A = grupo de CIO, C = grupo de Ciclopirox
Unhas humanas
Placas ungueais saudáveis de dedos humanos foram coletadas de cadáveres humanos adultos e armazenadas em um recipiente fechado a O - 4°C. Antes do experimento, as placas ungueais foram gentilmente lavadas com soro fisiológico normal para remover qualquer contaminação, e, a seguir, reidratadas colocando-as por três horas em um tecido umedecido com soro fisiológico normal. As amostras de unha foram selecionadas aleatoriamente em quatro grupos.
Procedimentos de dosagem e lavagem de superfície
Preparação da dose:
A radioatividade de cada grupo é de aproximadamente 0,19 ± 0,01 e 0,22 ± 0,03 pCi/10 μl das soluções respectivamente, para 14C-C10 (grupo A) e 14C-ciclopirox (grupo C).
Procedimento do experimento:
<table>table see original document page 279</column></row><table> <table>table see original document page 280</column></row><table>
W = uma vez ao dia, antes da dosagem (9 — 10 da manhã).
D = uma vez ao dia (9 — 10 da manhã).
C = mudança/coleta de amostra de bola de algodão após lavagem de superfície, antes da dosagem tópica.
N = coleta de amostra da unha.
Procedimento de lavagem
A lavagem de superfície foi iniciada na manhã, 10 minutos antes da dosagem seguinte, a superfície da unha era lavada com cotonetes de algodão em um ciclo, da seguinte forma:
um cotonete umedecido com etanol absoluto, a seguir, um cotonete umedecido com etanol absoluto, a seguir, um cotonete umedecido com sabonete líquido 50% IVORY, a seguir,
um cotonete umedecido com água destilada, a seguir, um cotonete umedecido final com água destilada. As amostras de lavagem para cada ciclo de cada unha foram reunidas em pool quebrando-se o cotonete de algodão em frascos de cintilação de vidro. Alíquotas de 3,0 ml de metanol foram adicionadas em cada frasco para extrair o material de teste. A radioatividade de cada amostra foi medida em um contador de cintilação líquida. Sistema de incubação
Uma célula de difusão de uma câmara de Teflon (PermeGear, Inc., Hellertown, PA) foi usada para conter cada unha. Em condições fisiológicas aproximadas, uma pequena bola de algodão umedecida com 0,1 ml de soro fisiológico normal foi colocada na câmara para servir como um leito ungueal e fornecer umidade para a placa ungueal. A cada 3 dias, 0,1 ml de soro fisiológico normal foi injetado através da entrada dentro da câmara para manter a bola de algodão úmida. A placa ungueal foi colocada em uma saliência dentro do receptor (1,0 cm de diâmetro e 0,5 cm de altura). A superfície ventral (interna) da unha foi colocada virada para baixo e repousada na bola de algodão úmida. As células foram colocadas em uma plataforma em um grande tanque de contenção de vidro preenchido com solução saturada de fosfato de sódio para manter as células em uma umidade constante de 4 0%.
Instrumento de coleta de amostras
O instrumento de coleta de amostras de unha tinha duas partes, uma plataforma de coleta de amostra de unha e uma furadeira. A plataforma de coleta de amostra de unha consiste em um suporte de unha de cobre, três ajustes e uma captura de pó de unha. Três ajustes permitem o movimento em direção vertical. O primeiro ajuste grosseiro (no topo) era para trocar a célula cobre e retirar amostras de pó da captura. Os outros dois ajustes (inferior) eram para o processo de coleta de amostras. 0 segundo ajuste grosseiro permitia o movimento de 25 mm, e o ajuste fino fornece movimento de 0,2 0 mm. A captura do pó de unha era localizada entre a célula de cobre e o cortador. 0 formato interno da captura era de um funil invertido, e a extremidade do funil se conecta a um vácuo. Colocando-se um círculo de papel de filtro dentro do funil, as amostras de pó de unha foram capturadas no papel de filtro durante o processo de coleta de amostras.
Procedimento de coleta de amostras
Após término da fase de incubação, a placa ungueal foi transferida da célula de difusão para um suporte de unha de cobre limpo para o processo de coleta de amostras. A placa ungueal era invertida a fim de que a superfície ventral (leito ungueal) ficasse agora virada para cima, e a superfície dorsal (externa) dosada virada para baixo. O suporte de unha de cobre tem uma abertura quando se situa no topo da plataforma. Quando o processo de coleta de amostras se iniciava, o ajuste grosseiro era ajustado para mover a posição da plataforma até que a placa ungueal tocasse a ponta do cortador. A seguir, a furadeira era acionada e o ajuste fino era acionado para empurrar a plataforma para perto da furadeira, removendo uma amostra central da unha. Após o processo acima, eram coletadas amostras de unha pulverizada aproximadamente com 0,40 - 0,5 0 mm de comprimento e 7,9 mm de diâmetro do centro da superfície ventral (leito ungueal) da unha.
As amostras de unha em pó foram coletadas em um frasco de cintilação de vidro e pesadas. Alíquotas de 5,0 ml de "Packard soluene-350" (Packard Instrument Company, Meriden, CT) foram adicionadas ao frasco de cintilação para dissolver o pó. A parte superior, a camada intermediária e dorsal do centro da unha, incluindo a área de aplicação da dose, foi cortada no mesmo diâmetro que a área da amostra e foi, a seguir, colocada em ura frasco de cintilação de vidro com 5,0 ml de "packard soluene-350". O resto da unha também foi colocado em um frasco de cintilação de vidro com 5,0 ml de "packard soluene-350".
A quantidade de amostra de unha removida era medida pela diferença de peso da placa ungueal, antes e depois da perfuração e coleta do núcleo de pó.
Medida da radioatividade
Todas as medidas de radioatividade foram efetuadas em um contador de cintilação líquida Modelo 1500 (Packard Instrument Company, Downer Grove, IL) . 0 contador teve a sua precisão verificada com o uso de amostras lacradas de padrões extintos e não extintos, como detalhado pelo manual do instrumento. A eficiência da contagem de 14C é igual ou maior do que 95%. Todas as amostras de unha pré-tratada cora "packard soluene-3 5 0" forara incubadas a 4O0C por 4 8 horas, seguida pela adição de 10 ml de coquetel de cintilação (HIONIC-FLUOR, Packard Instrument Company, Meriden, CT) . Outras amostras (dose-padrão, lavagem de superfície e material de suporte) foram misturadas diretamente com coquetel de cintilação Universal ES (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA) . Amostras de controle de fundo e de teste foram contadas por 3 minutos cada quanto à radioatividade.
Análise de dados
Todas as contagens da amostra (expressas como dpm) foram transcritas manualmente para uma planilha computadorizada (Microsoft Excel). A quantidade individual e média (+ D.P.) de equivalente de substância química de teste em amostras de unha, de material de suporte e de lavagem são apresentadas como dpm, pCi, percentual da dose administrada e equivalente em mg em cada ponto do tempo. A concentração de substâncias químicas de teste marcadas com 14C foi calculada a partir do valor com base na atividade específica de cada substância química de teste marcada com 14C. A informação da concentração de substância química de teste não marcada na formulação tópica foi obtida dos fabricantes. A concentração total de equivalente de substância química de teste é a soma da concentração de substância química de teste marcada com 14C com a concentração de substância química de teste não marcada. 0 valor da quantidade total de equivalente de substância química de teste em cada amostra de unha foi calculado a partir daqueles valores com base na radioatividade da amostra e na proporção de equivalente total em mg da substância química de teste e na radioatividade da substância química de teste. Os dados foram ainda normalizados dividindo-se pelo peso da amostra. A significância estatística das amostras de unha de cada um dos dois grupos foi analisada por teste t de Student.
RESULTADOS
Características das amostras de unha
Para ambos os grupos (Grupo A, Grupo B e Grupo C), a espessura da placa ungueal inteira, a profundidade da amostra central da superfície ventral removida pelo cortador, a percentagem da espessura da unha inteira, e o peso real da amostra de unha em pó foram coletados. Nenhuma diferença estatística é encontrada entre os dois grupos (P > 0,05).
Equivalentes de ClO normalizados para o peso e de ciclopirox na unha A FIG. 3 mostra o resumo dos equivalentes normalizados de fármaco em cada parte (camada) de amostras de unha. Após normalização pelo peso, a concentração de equivalente de ClO em amostras de unha centro dorsal/intermediário, centro ventral/intermediário e amostras restantes foi significativamente maior do que a de equivalente de ciclopirox (p ≤ 0,002).
Equivalentes de ClO e ciclopirox em leito de suporte de unha de bola de algodão
A FIG. 4 mostra o resumo de equivalentes de C10 e ciclopirox em amostras de leito de suporte de bola de algodão. Similar ao equivalente de C10 normalizado para o peso nas amostras de placa ungueal, a quantidade absoluta de equivalente C10 por amostra de bola de algodão no grupo A (após 14° dia de dosagem) foi significativamente maior do que aquela de ciclopirox no grupo C (p ≤ 0,004) . A diferença dessas duas substâncias químicas de teste foi de 250 vezes.
Equilíbrio de massa de radioatividade de [14C] -C10 e [14C] -Ciclopirox após tratamento por 14 dias
A Tabela 5 mostra a recuperação radioativa resumida de lavagem, amostras de unha e amostras de leito de suporte de bola de algodão. As recuperações cumulativas de radioatividade de carbono-14 foram de 88 ± 9,21 e 89 ± 1,56 por cento da dose aplicada no grupo A e grupo C, respectivamente. 88% do material radiomarcado foram responsáveis.
CONCLUSÃO
Nesse estudo, foi estudada a taxa de penetração de [14C] -C10 na formulação tópica Anacor e em [14C] -ciclopirox (8% p/p em esmalte comercial) na unha humana com quatro diferentes métodos de dosagem e de lavagem.
Os resultados mostram que uma quantidade bem maior de [14C] -C10 penetra nas partes mais profundas da unha, quando comparada com [14C] -ciclopirox. As Tabelas 3 e 4 mostram que a quantidade de equivalente de [14C] -C10 na camada do centro ventral/intermediário da unha e do leito de suporte de bola de algodão no grupo A foi estatisticamente maior (p <0,002) do que o grupo C após um período de dosagem de 14 dias.
EXEMPLO 19
Determinação da penetração de CIO na unha humana
O objetivo do presente estudo foi avaliar e comparar a absorção perungueal de CIO em um veículo simples usando o modelo TurChub® de MedPharm (veja http://www.medpharm.co.uk; especificamente, http://www.medpharm.co.uk/downloads/Skin%20and%20nail%20dec %202003.pdf; visualizadas em 14 de fevereiro de 2006), em um experimento e escala completa. Foram efetuadas seis réplicas que envolvem C10, e Formulações Y (ciclopirox 8% p/p em esmalte comercial) e Z (Loceryl, amorolfina 5% p/v em esmalte comercial) foram usadas como formulações de referência.
Os materiais seguintes foram usados nesses experimentos. Esses materiais foram usados sem quaisquer modificações.
Uma dose de 4 0 μl/cm2 do composto de teste C10 em 50:50 de propileno glicol:acetato de etila foi aplicada a uma amostra de unha de espessura total em cada dia, ao longo de uma duração total de cinco dias. Ambas as formulações de referência também foram aplicadas na mesma dose.
Experimento sobre a zona de inibição de TurChub®
Placebo, item de teste C10 em veículo e as formulações de referência YeZ foram testados quanto à sua inibição do crescimento de Trichophyton rubrum (T. rubrum) após penetração através da unha humana de espessura total com o uso de uma medida da zona de inibição.
Teste da eficácia da formulação
As FIGs. 5-9 mostram os resultados obtidos pelos ensaios de zona de inibição TurChub. Pode-se observar que ClO é um agente antifúngico potente, que pode penetrar através de uma unha de espessura total para despertar seu efeito contra o organismo-alvo T. rubrum. Nenhuma zona de inibição foi observada com as formulações de referência Y e Z ou com o placebo para C10. O experimento que utiliza C10 foi repetido uma segunda vez para confirmar o resultado, e pode ser observado nas FIGs. 6 e 7 que C10 apresenta zonas de inibição de 100%, 67%, 46%, 57%, 38% e 71% no primeiro experimento e de 74%, 86%, 100%, 82%, 100% e 84% no segundo experimento. A medida foi feita da unha até o primeiro ponto de crescimento observado.
A partir dos resultados obtidos com o uso do ensaio de zona de inibição TurChub de MedPharm como sistema de teste, verificou-se que o item de teste C10 é um agente antifúngico poderoso e demonstrou resultados superiores vs. as formulações comerciais de referência Y e Ζ. A partir desses experimentos, parece que o composto penetra através da barreira de uma unha de espessura total para exibir a atividade antifúngica. EXEMPLO 20
Determinação da penetração de ClO na unha humana: dose-resposta
A faixa de dose-resposta ótima para a penetração na unha humana foi determinada como sendo entre 1% e 15%. Os experimentos para determinar a dose-resposta ótima foram realizados da seguinte forma.
Foram feitos testes em diferentes concentrações do composto de teste em unhas derivadas do mesmo cadáver. As unhas de cadáver foram hidratadas de um dia para o outro, cortadas em 4 quadrados de tamanhos iguais e colocadas sobre suportes individuais de poloxômero. Os artigos de teste foram formulados em uma esmalte a 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10% e 15% p/v. Uma dose de 40 μl/cm2 é aplicada ao centro do pedaço de unha, e as unhas são deixadas por 24 horas. As unhas são removidas do suporte de poloxômero. 0 suporte de poloxômero é analisado quanto à quantidade de composto com o uso de LC/MS/MS.
EXEMPLO 21
Preparação de piridiniloxaboróis
21a. Metalação e boronilação
A uma solução de 3-bromo-4-hidroximetilpiridina (10 7 mmol) e B(OMe)3 (2,73 ml, 11,9 mmol) em THF anidra (20 ml) a -78°C sob nitrogênio, foi adicionado gota a gota n-BuLi (13,6 ml, 21,8 mmol). A seguir, o banho de resfriamento foi removido. A mistura foi aquecida gradualmente com agitação por 30 minutos e, a seguir, agitada com um banho-maria por 2 horas. A seguir, foi adicionada salmoura e o pH ajustado até 7 com o uso de 6 N de HCl. A mistura foi lavada com THF (x2), e a camada aquosa (que contém produto) foi evaporada até seca. O resíduo foi lavado com THF e o produto foi extraído em etanol (x2) . 0 etanol foi removido in vácuo, foi adicionada água ao resíduo, e removida in vácuo. Tolueno foi adicionado e removido in vácuo. O resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e o produto foi coletado por filtração para gerar C12.
21b. 7-Hidróxi-2,1-oxaborolano[5, 4-c]piridina[[1, 2] oxaborolo [3, 4-cJpiridin-1 (3H) -ol] (C12)
1H RMN (300 MHz, DMSO-dJ : δ ppm 5,00 (s, 2H) , 7,45 (d, J = 5,0 Hz, 1H) , 8,57 (d, J = 5,3 Hz, 1H) , 8,91 (s, 1H) , 9,57 (s, 1H) . ESI-MS m/z 134 (M-H)", C6H6BNO2 = 135.
EXEMPLO 22
Esteres borínicos cíclicos
Compostos adicionais podem ser produzidos pelos métodos aqui descritos. Pela escolha do material de partida apropriado como, por exemplo, 1 ou 3, os Exemplos 1-7 podem ser usados para formular os compostos seguintes. Quando disponível, a caracterização do ponto de fusão (p.f.) é fornecida para esses compostos.
22. Resultados
Os dados analíticos para compostos exemplares de estrutura I são fornecidos abaixo.
22a Etil 2-(1-hidróxi-1,3-diidrobenzo[c][1,2]oxaborol- 5-ilóxi)acetato (C41)
<formula>formula see original document page 289</formula>
P.f. 134-1370C. Material de partida exemplar: etil 2- (4-bromo-3-(hidroximetil)fenóxi)acetato. 22b 2-(1-hidrôxi-l,3-diidrobenzo[c] [1, 2] oxaborol-5- ilóxi)acético ácido (C42)
<formula>formula see original document page 290</formula>
P.f. 163-166°C. Material de partida exemplar: etil 2- (4-bromo-3-(hidroximetil)fenóxi) acetato. O composto do título é obtido após saponificação do éster correspondente. 22c 6- (tiofen-2-iltio) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol
<formula>formula see original document page 290</formula>
P.f. 99-104°C. Material de partida exemplar: (2-bromo- 4-(tiofen-2-iltio)fenil)metanol.
22d 6- (4 -f luorf eniltio) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 [3H) -ol (C44)
<formula>formula see original document page 290</formula>
P.f. 135-13 8°C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-(4 - flúorfeniltio)fenil)metanol.
22e 1-(3-((1-hidróxi-l,3-diidrobenzo[c][1,2]oxaborol- 5-ilóxi)metil)fenil)pentan-l-ona (C45)
<formula>formula see original document page 290</formula>
P.f. 96-98°C. Material de partida exemplar: l-(3-((4- bromo-3-(hidroximetil)fenóxi)metil)fenil)pentan-l-ona.
22f 2-(1-hidróxi-l,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol-5- ilóxi)-1- (piperidin-l-il)etanona (C46)
<formula>formula see original document page 291</formula>
P.f. 158-163°C. Material de partida exemplar: 2-(4- bromo-3-(hidroximetil)fenóxi)-1-(piperidin-l-il)etanona.
22g 2-(1-hidróxi-l,3-diidrobenzo [c] [1,2]oxaborol-5- ilóxi)-1-(4 (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)etanona (C47)
<formula>formula see original document page 291</formula>
P.f. 190-195°C. Material de partida exemplar: 2-(4- bromo-3-(hidroximetil)fenóxi)-1-(4-(pirimidin-2- il)piperazin-l-il)etanona.
22h 6- (4- (piridin-2-il) piperazin-l-il) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1(3H)-ol (C48)
<formula>formula see original document page 291</formula>
P.f. 13 5 -13 8 ° C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-(4-(piridin-2-il)piperazin-l-il)fenil)metanol.
22i 6-nitrobenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H)-ol (C49)
<formula>formula see original document page 291</formula>
P.f. 163-171°C. Material de partida exemplar: benzo[c] [1,2] oxaborol-1(3Η)-ol. Veja JACS 82, 2.172, 1960 para preparação.
22j 6-aminobenzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol (C50)
<formula>formula see original document page 292</formula>
P.f. 145-148°C. Material de partida exemplar: 6- nitrobenzo[c][1,2]oxaborol-1(3H)-ol.
22k 6-(dimeti lamino)benzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol (C51)
<formula>formula see original document page 292</formula>
P.f. 120-123°C. Material de partida exemplar: 6-aminobenzo[c][1,2]oxaborol-1(3H)-ol.
221 N-(1-hidróxi-l,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol-6 il)benzamida (C52)
<formula>formula see original document page 292</formula>
P.f. 186 -193°C. Material de partida exemplar: 6- aminobenzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol.
22m 6-(4-fenilpiperazin-l-il)benzo[c] [1,2]oxaborol- l(3H)-ol (C53)
<formula>formula see original document page 292</formula>
P.f. 159-161°C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-(4-fenilpiperazin-l-il)fenil)metanol.
22o 6- (lH-indol-l-il) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C55)
<formula>formula see original document page 293</formula>
P.f. 135-140°C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-(IH-indol-1-il)fenil)metanol.
22p 6-morfolinobenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C56)
<formula>formula see original document page 293</formula>
P.f. 128-13 2°C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-morfolinofenil)metanol.
22q 6-(1-hidróxi-l,3-diidrobenzo[c][1,2]oxaborol-5- ilôxi)nicotinonitrila (C57)
<formula>formula see original document page 293</formula>
P.f. 193-198°C. Material de partida exemplar: 6 - (4 - bromo-3 -(hidroximetil)fenóxi)nicotinonitrila.
22r 5-flúor-6-nitrobenzo[c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol
<formula>formula see original document page 293</formula>
P.f. 162-167°C. Material de partida exemplar: 5- fluorbenzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol.
22 s 5-bromo-6- (hidroximetil) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C59) <formula>formula see original document page 294</formula>
P.f. >257°C. Material de partida exemplar: (2,5- dibromo-4-(metoximetil)fenil)metanol.
22t 3, 7-diidro-l,5-diidroxi-lH,3H-benzo [1, 2- c:4, 5-c']bis[1,2]oxaborol (C60)
<formula>formula see original document page 294</formula>
P.f. > 250°C. Material de partida exemplar: (2,5- dibromo-1,4 -fenileno)dimetanol.
22u 1-(1-hidróxi-l,3-diidrobenzo[c][1,2]oxaborol-6 il)-3 feniluréia (C61)
P.f. 213-2150C. Material de partida exemplar: 6- aminobenzo[c][1,2]oxaborol-1(3H)-ol.
22v N-(1-hidróxi-l,3-diidrobenzo[c][1,2]oxaborol-6- il)benzenossulfonamida (C62)
<formula>formula see original document page 294</formula>
P.f. 175-184°C. Material de partida exemplar: 6-aminobenzo [c] [1, 2] oxaborol-1(3H)-ol.
22w N-(1-hidróxi-l,3-diidrobenzo [c] [1,2]oxaborol-6-il· acetamida (C63) <formula>formula see original document page 295</formula>
P.f. 176-185°C. Material de partida exemplar: 6- aminobenzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol.
22x 7- (hidroximetil) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol
<formula>formula see original document page 295</formula>
P.f. 241-250°C. Material de partida exemplar·. (2· bromo-1,3 -fenileno)dimetanol.
22y 7-metilbenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H)-ol (C65)
<formula>formula see original document page 295</formula>
P.f. 107-111°C. Material de partida exemplar: (2- bromo-3-metilfenil)metanol.
22z S- (3-(feniltio)-lH-indol-l-il)benzo[c] [1, 2] oxaborol-1(3H)-ol (C66)
<formula>formula see original document page 295</formula>
P.f. 159 -163 °C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-(3-(feniltio)-ΙΗ-indol-l-il)fenil)metanol.
22aa 3 -(1-(1-hidrôxi-1,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol- 6-il)-lH-indol-3-iltio)propanonitrila (C67) <formula>formula see original document page 296</formula>
P.f. 135-14I0C. Material de partida exemplar: 3-(l-(3- bromo-4-(hidroximetil)fenil)-lH-indol-3-iltio) propanonitrila.
22bb 6- (5-metóxi-IH-indol-1-il)benzo[c][1,2] oxaborol- 1(3H) -Ol (C68)
<formula>formula see original document page 296</formula>
P.f. 12 0 -1240 C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-(5-metóxi-IH-indol-1-il)fenil)metanol.
22cc 5, 6-metilenodioxibenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C69)
<formula>formula see original document page 296</formula>
P.f. 185-189°C. Material de partida exemplar: (6-bromobenzo[d] [1,3]dioxol-5-il)metanol.
22dd 6-amino-5 fluorbenzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol (C70)
<formula>formula see original document page 296</formula>
P.f. 14 2-1450C. Material de partida exemplar: 6-nitro- 5-fluorbenzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol.
22ee 6-(benzilamino)-5-fluorbenzo[c][1,2]oxaborol- 1(3H)-ol (C71) <formula>formula see original document page 297</formula>
P.f. 159-164°C. Material de partida exemplar: 6-amino- 5-fluorbenzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol.
22ff 6-(5-metôxi-3- (feniltio)-IH-indol-l-il)benzo[c] [1, 2] oxaborol-1 (3H)-ol (C72)
<formula>formula see original document page 297</formula>
P.f. 135-14I0C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-(5-metóxi-3-(feniltio)-lH-indol-1-il)fenil)metanol.
22gg 3 -(1-(1-hidrôxi-1,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol-6 il) -5-metóxi-lH-indol-3-iltio)propanonitrila (C73)
<formula>formula see original document page 297</formula>
P.f. 14 9-154°C. Material de partida exemplar: 3-(l-(3- bromo-4-(hidroximetil)fenil)-5-metóxi-lH-indol-3-iltio) propanonitrila.
22hh 4-(1-hldróxi-1,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol-7 - ilóxi)benzonitrila (C74)
<formula>formula see original document page 297</formula>
P.f. 14 8-153°C. Material de partida exemplar: 4-(2- bromo-3-(hidroximetil)fenóxi)benzonitrila .
22ii 6- (5 - cloro-IH-indol-1 -il)benzo[c] [1,2]oxaborol 1 (3H) -ol (C75)
<formula>formula see original document page 298</formula>
P.f. 149-154°C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-(5-cloro-IH-indol-1-il)fenil)metanol.
22jj 3- (5-cloro-l - (1-hidróxi-l, 3 -diidrobenzo [c] [1,2] oxaborol-6-il)-IH-indol-3-iltio)propanonitrila (C76)
<formula>formula see original document page 298</formula>
P.f. > 225°C. Material de partida exemplar: 3-(1-(3- bromo-4-(hidroximetil)fenil)-5-cloro-lH-indol-3-iltio) propanonitrila.
22kk 6- (benzilamino) benzo [c][1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C77)
<formula>formula see original document page 298</formula>
P.f. 126-133°C. Material de partida exemplar: 6-aminobenzo [c] [1, 2] oxaborol-1(3H)-ol.
2211 6- (dibenzilamino) benzo[c][1,2] oxaborol-1(3H)-ol (C78)
<formula>formula see original document page 298</formula> P.f. 115-123°C. Material de partida exemplar: 6- aminobenzo[c][1,2]oxaborol-1(3H)-ol.
22mm 7- (4- (lH-tetrazol-5-il) fenóxi) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1(3H)-ol (C79)
<formula>formula see original document page 299</formula>
P.f. decomposição a 215°C. Material de partida exemplar: 4 -(1-hidróxi-1,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol-7- ilóxi)benzonitrila.
22nn 6- (5-cloro-3- (feniltio)-lH-indol-l-il)benzo[c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C80)
<formula>formula see original document page 299</formula>
P.f. 145-151°C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-(5-cloro-3 -(feniltio)-IH-indol-1-il)fenil)metanol.
22pp 6- (4- (pirimidin-2-il) piperazin-1-il) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1(3H)-ol (C82)
<formula>formula see original document page 299</formula>
P.f. NA°C. Material de partida exemplar: (2-bromo-4- (4-(pirimidin-2-il)piperazin-1-il)fenil)metanol.
22qq 7- (benzilóxi) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 [3H) -ol (C83) <formula>formula see original document page 300</formula>
P.f. NA°C. Material de partida exemplar: (3- (benzilóxi)-2-bromofenil)metanol.
22rr Cloreto de 4-(1-hidróxi-l,3-diidrobenzo[c] [1, 2] oxaborol-6-iltio)piridínio (C84)
<formula>formula see original document page 300</formula>
P.f. NA°C. Material de partida exemplar: (2-bromo-4- (piridin-4-iltio)fenil)metanol.
22ss 6- (piridin-2-iltio) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C85)
<formula>formula see original document page 300</formula>
P.f. NA0C. Material de partida exemplar: (2-bromo-4 (piridin-2-iltio)fenil)metanol.
22tt 7-fluorbenzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H)-ol (C86)
<formula>formula see original document page 300</formula>
P.f. 120 -1240 C. Material de partida exemplar: (2- bromo-3-fluorfenil)metanol.
22uu 6-(4-(trifluormetil)fenóxi)benzo[c] [1,2]oxaborol l (3H) -ol (C87) <formula>formula see original document page 301</formula>
P.f. 98-105°C. Material de partida exemplar: (2-bromo- 4-(4-(trifluormetil)fenóxi)fenil)metanol.
22VV 6-(4-clorofeniltio)benzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol (C88)
<formula>formula see original document page 301</formula>
P.f. 157-161°C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-(4-clorofeniltio)fenil)metanol.
22ww 6- (4 -clorofenilsulfinil) benzo [c] [1, 2] oxaborol - 1(3H) -ol (C89)
<formula>formula see original document page 301</formula>
P.f. 154 -161° C. Material de partida exemplar: 6-(4 - clorofeniltio)benzo[c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol.
22xx 6-(4-clorofenilsulfonil)benzo[c][1,2]oxaborol 1(3H)-ol(C90)
<formula>formula see original document page 301</formula>
P.f. 157-163 0C. Material de partida exemplar: 6-(4- clorofeniltio)benzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol. 22yy N-(1-hidróxi-l,3-diidrobenzo[c][1,2]oxaborol-5 il) -N(fenilsulfonil)benzenossulfonamida (C91) <formula>formula see original document page 302</formula>
P.f. 14 2-152°C. Material de partida exemplar: N-(4- bromo-3-(hidroximetil)fenil)-N-(fenilsulfonil) benzenossulfonamida.
22zz 6- (4- (trif luorme til) feniltio) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1(3H)-ol (C92)
<formula>formula see original document page 302</formula>
P.f. 111-1130 C. Material de partida exemplar: bromo-4-(4-(trifluormetil)feniltio)fenil)metanol .
22aaa 6- (4- (trif luormetil) f enilsulf inil) benzo [c] [1,2] oxaborol-1(3H)-ol (C93)
<formula>formula see original document page 302</formula>
P.f. 7 9 - 8 80 C. Material de partida exemplar: 6· (4-(trifluormetil)feniltio)benzo [c] [1,2]oxaborol-1(3H)-ol.
22bbb 6- (4- (metiltio) feniltio) benzo [c] [1, 2] oxaborol 1 (3H) -ol (C94)
<formula>formula see original document page 302</formula>
P.f. 117-12 00 C. Material de partida exemplar: bromo-4-(4 -(metiltio)feniltio)fenil)metanol.
22ccc 6- (p-toliltio) benzo [c] [1, 2] oxaborol-1 (3H) -ol (C95)
<formula>formula see original document page 303</formula>
P.f. 139-144°C. Material de partida exemplar: (2- bromo-4-(p-toliltio)fenil)metanol.
22ddd 3-((1-hidróxi-l,3-diidrobenzo[c] [1,2]oxaborol-5- ilóxi)metil)benzonitrila (C96)
<formula>formula see original document page 303</formula>
P.f. 147-150°C. Material de partida exemplar: 3 - ( (4 - bromo-3-(hidroximetil)fenóxi)metil)benzonitrila.
EXEMPLO 23
Preparação alternativa de 4 a partir de 3
Um frasco de 3 gargalos de 22,0 litros foi equipado com um motor de agitação, entrada de N2, funil de adição, manto de aquecimento, e condensador. O frasco foi carregado com 3.500 g (17,1 mol) de álcool 2-bromo-5-fluorbenzílico, seguido pela adição de 3.556 g de tetrahidrofurano e 16,4 g (0,17 mol) de ácido metanossulf ônico. A seguir, 400 g (4,7 mol) de 3,4-diidro-2H-pirano foram adicionados a 10°C. Essa etapa é exotérmica e, portanto, não deve ser feita nenhuma carga adicional até que a exotermia termine. A temperatura foi aumentada até 27°C, agitada por 15 minutos e, a seguir, carregada com 400 g (4,7 mol) de 3,4-diidro-2H-pirano a 24°C. Novamente a temperatura foi aumentada (240C para 38°C). A mistura foi agitada por 15 minutos. Após o término da exotermia, o frasco era novamente carregado com 400 g (4,7 mol) de 3,4-diidro-2H-pirano a 35°C. A temperatura foi novamente aumentada até 470C ao longo de um período de 2 0 minutos. Após o término da exotermia, a mistura foi agitada por 15 minutos. Finalmente, os 400 g (4,7 mol) restantes de 3,4-diidro-2H-pirano foram adicionados a 44°C. A temperatura foi aumentada até 51°C. Após agitação por uma hora, a amostra foi removida para verificar a remoção de material de partida. Com o término da reação, o conteúdo foi resfriado até 20 ± 5°C.
EXEMPLO 24
<formula>formula see original document page 304</formula>
Preparação alternativa de 5 a partir de 4
A um frasco de 3 gargalos de 22,0 litros equipado com um motor de agitação, uma entrada de N2, um funil de adição, banho de resfriamento e condensador, foram carregados 436 g (17,96 mol) de magnésio turnings. A seguir, foram adicionados 5.334 g de tetrahidrofurano, seguidos por 291 g (0,51 mol) de hidreto de diisobutilalumínio (DIBAL) (25 p%t) em tolueno. A mistura foi agitada por 6 0 minutos a 2 0 ± 5°C. Foi observada alguma evolução de gás. A seguir, 260-430 g -3-5% (por peso, caso a solução de 4 fosse despejada em tambores) de 4 em THF foram adicionados. A mistura foi agitada por 15-30 minutos e, nesse tempo, foi observada uma ligeira exotermia (AT = 1.015°C) . Após a observação da exotermia, a mistura de reação foi resfriada até 5 ± 5°C. A essa mistura, os 8,22- 8,3 9 kg restantes de 4 em THF foram adicionados em uma taxa tal que a temperatura fosse mantida abaixo de 300C (t = 3 horas) . A reação foi agitada a 20-25°C por 30 minutos e, nesse tempo, uma alíquota foi removida, extinta com HCl 3 N (10 ml) e analisada.
Com o término, o conteúdo foi resfriado até -25 ± 5°C. Foi preparada uma solução de trimetilborato em THF por mistura de 2.665 g (25,7 mol) de borato de trimetila e 6.666 g de tetrahidrofuran. Essa solução pode ser preparada em um tambor com agitação.
A seguir, os 9.331 g de borato de trimetila em THF foram adicionados em uma taxa tal que a temperatura fosse mantida entre -35 e -20°C (t = 2,5 horas) . A mistura ficou muito espessa e, portanto, foi adicionada THF. Após agitação a -25 ± 5°C por 10 minutos, uma alíquota de 50 ml foi removida, extinta com 25 ml de 3 N de HCl e submetida a CoR. A agitação continuou a -25 ± 5°C por 1 hora e, a seguir, permitiu-se que a mistura aquecesse até a temperatura ambiente, quando foi agitada por pelo menos 12 horas. Foram retiradas duas amostras (uma em 6 horas e a outra em 12 horas).
Resultados:
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 1,45-1,75 (m, 6H) , 3,53 (s, 6H) , 3,45 (m, 1H) , 3,75 (m, 1H) , 4,69 (t, J = 3 Hz, 1H) , 4,97 (d, J = 14,1 Hz, 1H) , 5,14 (d, J = 14,1 Hz, 1H) , 7,03 ((td, J = 8,4, 2,7 Hz, 1H) , 7,24 (dd, J = 10,8, 2,1 Hz, 1H), 7,89 (t, J" = 7,8 Hz, 1H), 8,76 (s, 1H). EXEMPLO 2 5
Preparação alternativa de I a partir de 5
<formula>formula see original document page 306</formula>
À mistura de reação acima, foram adicionados 5,3 kg de água USP. Após agitação por 30 minutos, a mistura foi carregada com 5,3 kg de ácido acético. Foi observada evolução de gás. Após agitação por 30 minutos, uma alíquota foi removida para análise. A seguir, a mistura foi aquecida até o refluxo por 36-48 horas. Durante o período de refluxo, 12-13 litros de THF foram removidos.
Quando a reação estava completa, o conteúdo foi resfriado pelo reator até < 40°C tampando-se e carregando- se 10,5 kg de água USP. A THF foi removida até que não houvesse mais destilado. 0 conteúdo do reator foi transferido para uma secadora de filtro de Rosenmund, e permitiu-se que resfriasse até 20 ± 5°C. 0 reator foi enxaguado com água, filtrado e, a seguir, lavado novamente com 10,5 kg de água USP. 0 frasco foi carregado com 10,5 kg de ACN 10% em água (v/v) e agitado por 1 hora. Após filtração, o bolo foi lavado com 10,5 kg de ACN 10% em água (v/v) e, a seguir, carregado com 10,5 kg de ACN 10% em água (v/v) . O conteúdo foi agitado por 1 hora. 0 conteúdo foi subseqüentemente lavado com 10,5 kg de água USP, carregado com 7,0 litros de éter metil t-butílico 5% (MTBE)/Heptano (v/v), agitado por 1 hora, filtrado, carregado com 7,0 litros de MTBE 5%/Heptanos (v/v) e, novamente agitado por 1 hora. Após filtração, o conteúdo foi carregado novamente com 7,0 litros de heptano e filtrado. Os sólidos foram secos a < 45°C até um peso constante. Os sólidos foram re- cristalizados por tolueno:heptano 75:25.
EXEMPLO 26
Preparação alternativa de intermediário de C10
<formula>formula see original document page 307</formula>
Ácido [[4-flúor-2-[(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi]metil] fenil]borônico
Álcool 2-bromo-5-fluorbenzíIico (5 g, 24,4 mmol) foi dissolvido em diclorometano (100 ml). A essa solução, foram adicionados 3,4-diidro-2H-pirano (3,2 ml, 36,6 mmol) e ácido (1S) -( + )-10-canforsulfônico (117 mg, 0,5 mmol), e ela foi agitada em temperatura ambiente sob nitrogênio por 4 horas. Bicarbonato de sódio saturado foi adicionado para extinguir a reação. Ela foi extraída com o uso de diclorometano, e a camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio, e, a seguir, concentrada in vácuo para gerar [1-bromo-4-flúor-6-[(tetrahidro-2H-piran- 2-il)óxi]metil] benzeno como um óleo incolor (7 g, 100%). [1-bromo-4-flúor-6-[(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi] metil] benzeno (1,8 g, 6,2 mmol) foi dissolvido em THF e resfriado até -78°C sob nitrogênio. A essa solução, foi adicionado n-butillítio (1,6 M em hexano) (6,2 ml, 9,3 mmol) gota a gota, e, a seguir, foi adicionado borato de triisopropila (2,2 ml, 9,3 mmol). A mistura foi lentamente aquecida até a temperatura ambiente e agitada por 3 horas. Foi adicionada água para extinguir a reação. A seguir, ela foi extraída com o uso de acetato de etila, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio, e concentrada in vácuo. Após purificação em cromatografia em coluna (sílica gel; hexano:acetato de etila = 4:1 a 2:1), foi obtido ácido [[4 - flúor-2 -[(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi]metil]fenil] borônico como um sólido branco (1,1 g, 7 0%).
Resultados:
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 1,45-1,74 (m, 6H) , 3,44 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 4,58(d, J = 13,2 Hz, 1H), 4,64 (t, J= 3 Hz, 1H) , 4, 7 9 (d, J = 13,2 Hz, 1H) , 7,03 (td, J = 8,4, 2,7 Hz, 1H), 7,13 (dd, J = 10,8, 2,7 Hz, 1H), 7,50 (t, J = 6,9 Hz, 1H).
EXEMPLO 27
Preparação alternativa de intermediário de ClO
<formula>formula see original document page 308</formula>
Ester dimetílico de ácido[[4-Flúor-2-[(tetrahidro-2H-piran- 2-il)óxi]metil]fenil]borônico
Ácido [ [4-Flúor-6- [ (tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi] metil]fenil]borônico (100 mg) foi dissolvido em metanol seco, e a solução foi destilada repetidamente para a remoção de água. O resíduo resultante foi imediatamente caracterizado por RMN, e constatou-se que é uma mistura contendo éster dimetílico e éster monometíIico.
Ester dimetílico de ácido [ [4-flúor-2-[(tetrahidro-2H- piran-2-il)óxi]metil]fenil]borônico. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d*) δ (ppm) 1,45-1,75 (m, 6H) , 3,43 (s, 6H) , 3,45 (m, 1H) , 3,75 (m, 1H) , 4,69 (t, J = 3 Hz, 1H) , 4,97 (d, J = 14,1 Hz, 1H) , 5,14 (d, J = 14,1 Hz, 1H) , 7,03 ((td, J = 8,4, 2,7 Hz, 1H) , 7,24 (dd, J = 10,8, 2,1 Hz, 1H), 7,89 (t, J = 7,8 Hz, 1H).
Ester monometílico de ácido [[4-Flúor-6-[(tetrahidro- 2H-piran-2-ilóxi]metil]fenil]borônico
1H RMN (300 MHz, DMSO-d&) δ (ppm) 1,45-1,75 (m, 6H) , 3,53 (s, 6H) , 3,45 (m, 1H) , 3,75 (m, 1H) , 4,69 (t, J = 3 10 Hz, 1H) , 4,97 (d, J = 14,1 Hz, 1H) , 5,14 (d, J = 14,1 Hz, 1H) , 7,03 ((td, J = 8,4, 2,7 Hz, 1H) , 7,24 (dd, J = 10,8, 2,1 Hz, 1H), 7,8 9 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 8,7 6 (s, 1H).
EXEMPLO 28
Preparação alternativa de intermediário C10
<formula>formula see original document page 309</formula>
Ácido [(4-Flúor-2-metoximetoximetil)fenil]borônico [1-bromo-4-flúor-6-metoximetoximetil]benzeno (525 mg, 2 mmol) foi dissolvido em THF e resfriado até -78°C sob nitrogênio. A essa solução, foi adicionado n-butillítio (1,6 M em hexano) (1,5 ml, 2,4 mmol) gota a gota, e, a seguir, foi adicionado borato de triisopropila (0,7 ml, 2,4 mmol) . A mistura foi lentamente aquecida até a temperatura ambiente e agitada por 3 horas. Foi adicionada água para extinguir a reação. A seguir, ela foi extraída com o uso de acetato de etila, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio, e concentrada in vácuo. Após recristalização por hexano:acetato de etila-4:l, ácido [(4-flúor-2- metoximetoximetil)fenil]borônico foi obtido como um sólido branco (340 mg, 75%).
1H RMN (300 MHz, DMSO-Ci6) δ (ppm) 3,28 (s, 3H) , 4,70 (s, 2H) , 5,02 (s, 2H) , 7,04 (td, J = 9,0, 3,0 Hz, 1H) , 7,23 (dd, J = 11,1, 2,4 Hz, 1H), 7,90 (t, J = 7,8 Hz, 1H).
EXEMPLO 2 9
Preparação alternativa de intermediário de C17
<formula>formula see original document page 310</formula>
Ácido [[4 -[4-cianofenoxi]-2 -[(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi] metil]fenil]borônico
Álcool 2-bromo-5-(4-cianofenoxi)benzílico (10,4 g, 34,2 mmol) foi dissolvido em diclorometano (110 ml). A essa solução, foram adicionados 3,4-diidro-2H-pirano (9,2 ml, 101 mmol) e ácido (IS) -( + )-10-canforsulfônico (156 mg, 0,67 mmol), e ela foi agitada em temperatura ambiente sob nitrogênio por 3 horas. A seguir, foi adicionado ácido metanossulfônico (50 μΐ, 0,77 mmol), e a reação foi agitada de um dia para o outro. Bicarbonato de sódio saturado foi adicionado para extinguir a reação. Ela foi extraída com o uso de acetato de etila, e a camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio, e, a seguir, concentrada in vácuo para gerar [l-bromo-4-(4-cianofenoxi)- 6-[(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi]metil]benzeno como um óleo incolor (13,3 g quant.).
[1-bromo-4-(4-cianofenoxi)-6-[(tetrahidro-2H-piran-2- il)óxi]metil]benzeno (13,3 g, 34,2 mmol) foi dissolvido em THF (100 ml), borato de triisopropila (8,5 ml, 37 mmol) foi adicionado, e a reação foi resfriada até -78°C sob nitrogênio. A essa solução, foi adicionado n-butillítio (1,6 M em hexano) (22 ml, 35,2 mmol) gota a gota. A mistura foi lentamente aquecida até a temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. THF foi removida in vácuo, e o resíduo foi dissolvido em acetato de etila. A seguir, ela foi lavada com água, salmoura, seca sobre sulfato de sódio, e concentrada in vácuo. Após purificação em cromatografia em coluna (sílica gel; hexano:acetato de etila 2:1) de uma porção do bruto, foi obtido ácido [[4-(4- cianofenoxi)-6-[(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi]metil]fenil] borônico como um óleo transparente (500 mg, 4%).
1H RMN (300 MHz, DMS0-d6 + D2O) δ (ppm) 1,35-1,75 (m, 6H) , 3,40 (m, 1H) , 3,73 (m, 1H) , 4,58 (d, J = 13,2 Hz, 1H) , 4,59 (s, 1H), 4,77 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 6,99 (dd, J = 8,1, 2,2 Hz, 1H) , 7,05 (m, 3H) , 7,54 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 7,81 (d, J = 8,8 Hz, 2H).
<formula>formula see original document page 311</formula>
Também foi isolado ácido [ [4- (4-pentanoilfenoxi)-6- [(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi]metil]fenil]borônico como um óleo transparente (500 mg, 4%). 1H RMN (300 MHz, DMSO-de + D2O) δ (ppm), 0,85 (t, J = 7,5 Hz, 3H) , 1,20-1,75 (m, 10H) , 2,93 (t, J = 7,0 Hz, 2H) , 3,42 (m, 1H) , 3,70 (m, 1H) , 4,58 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,78 (d, J = 13,2 Hz, 1H) , 6,94 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7,03 (d, J = 8,4 Hz, 2H) , 7,04 (s, 1Η) , 7,54 (d, J = 8,4 Hz, 1Η) , 7,96 (d, J = 8,4 Hz, 2Η).
EXEMPLO 30
Preparação alternativa de intermediário de C17
<formula>formula see original document page 312</formula>
Ester dimetíIico e de ácido [ [4-[4-cianofenoxi]-2- [tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi]metil]fenil]borônico
Com a utilização do mesmo método que o Exemplo de ClO IIE, uma mistura de ésteres mono- e dimetílicos de ácido [[4-(4-cianofenoxi)-2-[(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi]metil] fenil]borônico foi sintetizada.
1H RMN (300 MHz, DMS0-ds) δ (ppm) 1,35-1,80 (m, 6H) , 3,40-3,50 (m, 7H), 3,60-3,70 (m, 1H), 4,43 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 4,60-4,80 (m, 2H), 6,95-7,15 (m, 4H), 7,38 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,80-7,90 (m, 2H).
Ester monometílico de ácido [ [4-[4-cianofenoxi]-6- [(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi]metil]fenil]borônico
<formula>formula see original document page 312</formula>
1H RMN (300 MHz, DMSO-dff) δ (ppm) 1,35-1,80 (m, 6H) , 3,40-3,50 (m, 1H) , 3,55 (s, 3H) , 3,60-3,70 (m, 1H) , 4,55 (d, J = 12,8 Hz, 1H) , 4,60-4,80 (m, 2H) , 6,95-7,15 (m, 4H) , 7,53(d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,80-7,90 (m, 2H), 8,77 (s, 1H).
Com a utilização do mesmo método acima, uma mistura de ésteres mono- e dimetílicos de ácido [[4-(4- pentanoilfenoxi)-2-[(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi] metil] fenil]borônico foi sintetizada.
Ester dimetílico de ácido[[4-(4-pentanoilfenoxi)-2- [(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi]metil]fenil]borônico
1H RMN (300 MHz, DMSO-C15) δ (ppm) 0,87 (t, J = 7, 3 Hz, 3H) , 1,25-1,80 (m, 10H) , 2,94 (t, J = 7,3 Hz, 2H) , 3,40- 3,50 (m, 7H), 3,60-3,70 (m, 1H), 4,43 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 4,60-4,80 (m, 2H) , 6,90-7,10 (m, 4H) , 7,36 (d, J = 7,9 Hz, 1H),7,95-8,05 (m, 2H) .
Ester monometílico de ácido[[4 -(4-pentanoilfenoxi)- 6 - [(tetrahidro-2H-piran-2-il)óxi]metil]fenil]borônico
1H RMN (3 00 MHz, DMSO-d5) δ (ppm) 0,87 (t, J = 7,3 Hz, 3H) , 1,25-1,80 (m, 10H) , 2,94 (t, J = 7,3 Hz, 2H) , 3,40- 3,50 (m, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,60-3,70 (m, 1H), 4,55 (d, J= 12,8 Hz, 1H), 4,60-4,80 (m, 2H), 6,95-7,15 (m, 4H), 7,52(d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,95-8,05 (m, 2H), 8,75 (s, 1H).
EXEMPLO 31
Preparação alternativa de intermediário de ClO
<formula>formula see original document page 313</formula>
A um tubo de RMN pré-registrado contendo uma solução de álcool 2-bromo-5-fluorbenzíIico (16 mg, 0,078 mmol) em CDCl3 (0,75 ml), foi injetado borato de triisopropila (0,036 ml, 2 eq, 0,156 mmol), e a solução foi sonificada brevemente por 3 0 segundos em temperatura ambiente. A determinação de 1H RMN indicou que havia 74,3 mol% do intermediário álcool-borato desejado, 19,3 mol% de um intermediário desconhecido, e 6,3 mol% de álcool não reagido.
Resultados:
1H RMN (CDCl3, 300 MHz) de (2-bromo-5-f luorbenzil) diisopropil borato: δ = 7,45 (dd, J = 8,7 Hz, J = 5,1 Hz, 1H) , 7,20 (dd, J = 9,6 Hz, J = 2,7 Hz, 1H) , 6,84 (td, Jt = 8,1 Hz, Jd = 3,3 Hz, 1H), 4,84 (s, 2H), 4,44 (septeto, J = 6,0 Hz, 2H) , 1,18 (d, J = 6,0 Hz, 12H) ppm. 1H RMN (CDCl3, 3 00 MHz) de um intermediário desconhecido: δ = 7,47-7,42 (1H sobreposto com picos de produto), 7,16 (dd, 1H, parcialmente sobreposto com pico de produto), 6,91-6,81 (1H, sobreposto com pico de produto), 4,94 (s, 2H) e outros picos desconhecidos em função de sobreposição. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) de álcool 2-bromo-5-fluorbenzíIico pré- registrado antes da mistura: δ = 7,48 (dd, J - 9,0 Hz, J - 5,4 Hz, 1H, sobreposto com picos de produto após mistura com borato de triisopropila), 7,26 (dd, J = 9,3 Hz, J = 3,3 Hz, 1H, intensidade diminuída, mas resolvido após mistura), 6,88 (td, Jt = 8,3 Hz, Jd = 3,0 Hz, 1H, sobreposto com picos de produto após mistura), 4,71 (s, 2H, CH2 intensidade diminuída, mas resolvido após mistura), 2,04 (s, 1H, OH desapareceu após mistura com tiisopropil borato) ppm.
EXEMPLO 32
Preparação alternativa de intermediário de C17
<formula>formula see original document page 314</formula> O procedimento descrito no Exemplo III foi seguido para caracterização por 1H RMN do intermediário álcool- borato atual. A determinação por 1H RMN indicou que havia 72,7 mol% do intermediário álcool-borato desejado [2-bromo- 5-(4-cianofenoxi)benzil]diisopropil borato, 20,7 mol% de um intermediário desconhecido e 6,5 mol% de álcool não reagido. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) de [2-bromo-5-(4 - cianofenoxi)benzil]diisopropil borato: δ = 7,61 (d, J = 9,0 Hz7 2H) , 7,52 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7,15 (d, J = 3,0 Hz, 1H) , 7,03 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 6,84 (dd, J = 8,7 Hz, J = 3,0 Hz, 1H) , 4,85 (s, 2H) , 4,35 (septeto, J = 6,1 Hz, 2H) , 1,11 (d, J = 6,1 Hz, 12H) ppm.
EXEMPLO 33
Preparação alternativa
<formula>formula see original document page 315</formula>
O procedimento descrito no Exemplo III foi seguido para caracterização por 1H RMN do álcool-borato intermediário atual. A determinação por 1H RMN indicou que havia 73,5 mol% do intermediário álcool-borato desejado [2- bromo-4-(4-clorofeniltio)benzil]diisopropil borato, 20,2 mol% de um intermediário desconhecido, e 6,2 mol% de álcool não reagido. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) de [2-bromo-4-(4 - clorofeniltio)benzil]diisopropil borato: δ = 7,48 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,40 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,27 (s, 4H) , 7,25 (dd, J = 8,3 Hz, J = 1,8 Hz, 1H) , 4,86 (s, 2H) , 4,42 (septeto, J = 6,3 Hz, 2H), 1,16 (d, J = 6,3 Hz, 12H) ppm.
EXEMPLO 34 Complexo ClO-adenosina
<formula>formula see original document page 316</formula>
Uma mistura de 1,3-diidro-5-flúor-l-hidróxi-2, 1- benzoxaborol (CIO, 0,76 g, 5 mmol), adenosina (1,34 g, 5 mmol) e acetato de sódio (0,41 g, 5 mmol) em DMF seca (100 ml) foi agitada a IOO0C por 3 horas sob atmosfera de nitrogênio. A solução homogênea foi evaporada por rotação, a 50°C sob alto vácuo. O resíduo foi misturado com cloreto de metileno, sonifiçado e filtrado sob atmosfera de nitrogênio para gerar o complexo desejado como um sólido branco que foi bombeado de um dia para o outro (2,2 g, rendimento de 100%). 1H RMN indicou que havia 5,7 mol% de adenosina não reagida, 5,5 mol% de ClO não reagido, e a conversão da reação foi de mais de 94%. 1H RMN (DMSO-de, 300 MHz): δ = 8,33 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,35-7,14 (amplo m, 1H) , 7,29 (s, 2H) , 6,80 (amplo m, 1H) , 6,73 (d, J = 9,9 Hz, 1H) , 5,99 (amplo d, J = 2,1 Hz, 1H) , 5,10 (muito amplo s, 1H) , 4,71 (dd, J = 5,7 Hz, J = 3,9 Hz, 1H) , 4,51 (s, 2H), 4,42 (dd, J = 6,3 Hz, J = 3,9 Hz, 1H), 4,07 (amplo s, 1H) , 3,64 (dd, J = 12 Hz, J = 3,6 Hz, 1H) e 3,52 (dd, J = 12 Hz, J = 5,1 Hz, 1H) ppm; P.f.: começa a amolecer a 115°C por causa dos solventes do resíduo, permaneceu como sólido amolecido, e começou a se decompor a 230°C; HPLC: 91,8% a 220 nm (adenosina foi de 5,3%); MS: m/z = 423 (M-, ESI-), 392 (Μ - CH2OH, ESI+).
EXEMPLO 35
Complexo C17-adenosina
<formula>formula see original document page 317</formula>
O procedimento descrito acima foi adaptado para a preparação do complexo do título por substituição de (C10) com 5-(4-cianofenoxi)-1,3-diidro-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol (C17, 1,25 g, 5 mmol). O produto sólido branco (2,7 g, rendimento de 100%) foi obtido após bombeamento de um dia para o outro. 1H RMN indicou que havia 3,5 mol% de adenosina não reagida, 3,5 mol% de C17 não reagido, e a conversão da reação foi de mais de 96%. 1H RMN (DMS0-d6, 300 MHz): δ = 8,35 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,76 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 7,45-7,36 (amplo m, 1H) , 7,29 (s, 2H) , 7,00 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 6,81 (amplo m, 1H) , 6,73 (s, 1H) , 6,01 (amplo s, 1H) , 5,10 (muito amplo s, 1H), 4,73 (dd, J = 6, 0 Hz, J = 3,9 Hz, 1H), 4,54 (s, 2H), 4,45 (dd, J = 6,0 Hz, J =3,9 Hz, 1H), 4,09 (amplo s, 1H), 3,65 (dd, J = 12 Hz, J = 3,3 Hz, 1H) e 3,54 (dd, J= 12 Hz, J = 4, 8 Hz, 1H) ppm; P.f.: começa a amolecer a 120°C por causa dos solventes do resíduo, permaneceu como sólido amolecido, e começou a se decompor a 230°C; HPLC: 92,1% a 220 nm (adenosina foi de 3,8%).
EXEMPLO 36
Complexo C28-adenosina <formula>formula see original document page 318</formula>
O procedimento para a síntese de complexo ClO- adenosina foi adaptado para a preparação do complexo do título por substituição de (CIO) com 6-feniltio-1,3-diidro- l-hidróxi-2,1-benzoxaborol (C28, 1,21 g, 5 mraol). O produto sólido branco (2,8 g, rendimento de 100%) foi obtido após bombeamento de um dia para o outro. 1H RMN indicou que havia 5 mol% de C28 não reagido, e a conversão da reação foi de 95%. 1H RMN (DMSO-de, 300 MHz) : δ = 8,29 (s, 1H) , 8,13 (s, 1H) , 7,53 (amplo s, 1H) , 7,29 (s, 2H) , 7,32-7,04 (m, 7H), 6,05-5,96 (amplo m, 1H), 5,15 (muito amplo s, 1H), 4,73-4,70 (m, 1H), 4,58 (s, 2H), 4,46 (amplo s, 1H), 4,12- 4,03 (amplo m, 1H), 3,63 (dd, J = 11,7 Hz, J = 3,3 Hz, 1H) e 3,52 (dd, J = 11,7 Hz, J = 4,8 Hz, 1H) ppm; P.f.: começa a amolecer a IlO0C por causa dos solventes do resíduo, permaneceu como sólido amolecido, e começou a se decompor a 238°C. HPLC: 91,3% a 220 nm (adenosina foi de 3,8%).
EXEMPLO 37
Complexo C2-adenosina <formula>formula see original document page 319</formula>
O procedimento para a síntese do complexo C10- adenosina foi adaptado para a preparação do complexo do título por substituição de (C10) com 1,3-diidro-l-hidróxi- 2, 1-benzoxaborol (C2, 0,67 g, 5 mmol) . 0 produto sólido creme (2,18 g, rendimento de 100%) foi obtido após bombeamento de um dia para o outro. 1H RMN indicou que havia 4,5 mol% de C2 não reagido, e a conversão da reação foi de mais de 94%. 1H RMN (DMS0-d5, 300 MHz) : δ = 8,33 (s, 1H) , 8,13 (s, 1H) , 7,42-7,20 (amplo m, 1H) , 7,30 (s, 2H) , 7,03-6,94 (m, 3H) , 6,02 (d, J = 3,6 Hz, 1H) , 5,25 (muito amplo s, 1H) , 4,73 (dd, J = 5,7 Hz, J = 4,2 Hz, 1H) , 4,56 (s, 2H), 4,46 (dd, J = 6,0 Hz, J = 3,9 Hz, 1H), 4,10 (amplo q, J = 3,3 Hz, 1H) , 3,66 (dd, J" = 12 Hz, J = 2,7 Hz, 1H) e 3,52 (dd, J = 11,7 Hz, J = 4, 8 Hz, 1H) ppm; P.f.: começa a amolecer a 115°C por causa dos solventes do resíduo, permaneceu como sólido amolecido, e começou a se decompor a 233 ° C. HPLC: 91,6% a 220 nm (adenosina foi de 5,9%).
EXEMPLO 38
Síntese de Metil β-D-ribofuranosídeo
<formula>formula see original document page 319</formula> Cinco g de D-Ribose foram dissolvidos em 100 ml de metanol e resfriados até 0°C. Meio ml de ácido sulfúrico concentrado foi adicionado, e a solução foi estocada a - 20°C por 48 horas. A solução foi neutralizada por passagem através de um leito de carbonato de sódio, e evaporada sob vácuo até um óleo viscoso. 0 material bruto foi purificado em uma coluna de sílica eluindo com metanol 10% em acetato de etila para render 2,1 gramas de metil β- D-ribofuranosídeo.
1H RMN 300 MHz (DMS0-d6) δ 4,97-4,99 (d, J = 4, 8 Hz, 1H), 4,76-4,79 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,57-4,62 (m, 2H), 3,76-3,80 (m, 1H), 3,72-3,74 (m, 1H), 3,66-3,71 (m, 1H), 3,44-3,50 (m, 1H), 3,26-3,34 (m, 1H), 3,19 (s, 3H)
EXEMPLO 39
Procedimento geral para formação de complexo
<formula>formula see original document page 320</formula>
Trezentos mg de metil β-D-ribofuranosídeo foram dissolvidos em 20 ml de dimetilf ormamida. A essa solução, foram adicionados 1 equivalente de éster borônico e 0,5 equivalente de um pó fino de carbonato de sódio. A mistura de reação foi aquecida até 100°C e agitada por 3 horas. A seguir, o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi co-evaporado 2 vezes com acetato de etila, depois sonificado em diclorometano e filtrado para gerar um sólido esbranquiçado. Complexo ClO-Metilribose:
<formula>formula see original document page 321</formula>
1H RMN 300 MHz (DMSO-Ci6) δ 7,28 (bs, 1H) , 6,68-6,77 (m, 2H), 4,71 (s, 1H), 4,52-4,55 (m, 3H), 4,26-4,28 (d, J= 5,1 Hz, 1H), 4,17-4,19 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 3,95-4,00 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 3,31-3,36 (m, 2H), 3,19 (s, 3H). Complexo C17-Metilribose
<formula>formula see original document page 321</formula>
1H RMN 300 MHz (DMS0-d5) δ 7,73-7,76 (d, J = 6, 9 Hz, 2H), 7,38-7,41 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,96-6,99 (d, J = 6,9 Hz, 2H) , 6,72-6,75 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 6,68 (s, 1H) , 4,70 (s, 1H) , 4,49-4,51 (m, 3H) , 4,23-4,25 (d, J = 5,4 Hz, 1H) , 4,14-4,16 (d, J = 5,4 Hz, 1H) , 3,95-3,98 (m, 1H) , 3,22-3,26 (t, J = 6,0, 1H) , 3,19 (s, 3H) , 3,13-3,14 (d, J = 2,1, 1H) . Complexo C2-Metilribose <formula>formula see original document page 322</formula>
1H RMN 300 MHz (DMSO-Cie) δ 7,31 (bs, 1Η) , 6,87-6,95 (m, 3Η), 4,70 (s, 1Η), 4,46-4,50 (m, 3Η), 4,20-4,22 (d, J= 5,7, 1Η) , 4,12-4,14 (d, J = 6,0 Hz, 1Η) , 3,94-3,99 (t, J = 7,8 Hz, 1Η), 3,30-3,34 (m, 2Η), 3,19 (s, 3Η). Complexo C28-Metilribose
<formula>formula see original document page 322</formula>
1H RMN 300 MHz (DMSO-de) δ 7,48 (bs, 1H) , 7,21-7,26 (m, 2H) , 7,05-7,12 (m, 4H) , 6,98-7,01 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 4,65 (s, 1H), 4,47-4,58 (m, 3H), 4,22-4,24 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,13-4,15 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 3,89-3,93 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 3,28-3,32 (t, J = 6,5, 1H), 3,13-3,16 (m, 4H).
EXEMPLO 40
Mecanismo de ação
A finalidade desse estudo foi determinar o mecanismo de ação (MOA) de ClO nos fungos modelos Saccharomyces cerevisiae.
40.1 Métodos
A cepa haplóide de Saccharomyces cerevisiae ATCC 201388 foi usada na seleção de mutantes resistentes ao CIO. Mutantes resistentes espontâneos e induzidos por EMS foram isolados de placas de ágar YPD contendo 4x, 8x, 16x MIC de C10. Todas as concentrações inibidoras mínimas (MIC) foram determinadas com o uso do protocolo M27 do NCCLS, com exceção da utilização dos meios YPD ou sintéticos definidos. Todas as manipulações de levedura e de genética molecular foram realizadas essencialmente, como descrito por Guthrie C., e cols., "Metods in Enzymology", 350: Parte B, (2002).
40.2 Resultados e conclusões
Um total de 11 mutantes resistentes ao ClO foi isolado de S. cerevisiae; todos os mutantes eram dominantes e mostravam um aumento de 8 a 64 vezes na MIC para CIO. A caracterização adicional desses mutantes mostrou que não eram resistentes a vários antifúngicos conhecidos, incluindo anfotericina B, cerulenina, itraconazol, aculeacina A, terbinafina, tunicamicina, ciclopirox, ciclohexamida e nicomicina Z. Todas as 11 mutações nos mutantes resistentes ao ClO foram mapeadas em 9 resíduos de aminoácidos no domínio de edição de CDC60, a leucil-tRNA sintetase citoplasmática essencial, uma das 40 aminoacil- tRNA sintetases em S. cerevisiae. Além disso, cepas de S. cerevisiae que abrigam múltiplas cópias de CDC60 em um plasmídeo de 2 μΜ foram oito vezes mais resistentes ao ClO. A combinação dos dados de mutantes e de superexpressão prevê que CDC60 é o alvo para CIO. O fato de que todas as mutações estavam presentes no domínio de edição de CDC60 indica que ClO inibe CDC60 por meio de um mecanismo inédito. A ausência de uma seqüência genômica ou quaisquer ferramentas genéticas para Trichophyton spp. torna difícil estudar o mecanismo de ação de ClO em uma das espécies de Trichophyton e, portanto, foi utilizado o modelo de fungos Saccharomyces cerevisiae.
40.3 Materiais e métodos
40.3a Substâncias químicas, cepas e plasmídeos C10 (5-flúor-1,3-diidro-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol) foi obtido de Anacor Pharmaceuticals, Inc. (Paio Alto, CA, EUA). Todas as cepas de S. cerevisiae e os plasmídeos foram obtidos de ATCC (Manassas, VA, EUA) . A cepa haplóide de Saccharomyees cerevisiae ATCC 2 013 8 8 (MATa his3Al leu2A0 met5dA ura3dA) foi usada para a geração de mutantes, enquanto ATCC 200901 (MATa leu24A lys2dA ura3dA) foi usada para combinar com mutantes resistentes ao ClO para determinar a dominância genética da mutação. O plasmídeo shuttle de levedura-E. coli pRS315 (Sikorski RS e cols. , Genetics 122: 19-27, (1989)), que possui os genes CEN6, leu2, ampR, e é um plasmídeo de baixa cópia em levedura, foi usado na construção da biblioteca genômica. No experimento de superexpressão, o vetor shuttle pRS425 (Christianson T.W. e cols., Gene 110(1): 119-22 (1992)), que possui os genes leu2 e ampR e é um plasmídeo de cópia elevada em levedura, foi usado.
4 0.3b Isolamento de mutantes resistentes espontâneos A cepa haplóide de S. cerevisiae ATCC 201388 cresceu de um dia para o outro em caldo YPD (BD, NJ. EUA) a 30°C, e 1 ml de células foi plaqueado sobre placas de ágar YPD (caldo YPD + Bacto-ágar 1,5%, BD, NJ, EUA), contendo 1,6, 3,2 ou 6,4 pg/ml de ClO (equivalente a 4x, 8x, 16x MIC de CIO) . Os mutantes resistentes apareceram após incubação de 2 dias a 30°C. A freqüência de resistência foi determinada dividindo-se o número de mutantes resistentes pelo número total de células plaqueadas, como determinado pelo plaqueamento de diluições da cultura de um dia para o outro em placas YPD.
40.3c Mutagênese de EMS (sulfonato de etilmetano) Uma alíquota de 2,5 ml da cultura de um dia para o outro, que cresceu em meio YPD, foi centrifugada a 700 X g por 5 minutos. O pélete de células foi re-suspenso em 10 ml de tampão de 50 mM de fosfato de potássio, pH 7,0. A suspensão células foi centrifugada novamente, e o pélete de células foi re-suspenso em tampão de fosfato para obter uma densidade celular de 5 χ IO7 células/ml, como determinado por contagens das células com o uso de uma Câmara de Contagem Petroff Hausser (Horsham, PA, EUA). A suspensão de células foi agitada com 3 00 μΐ de EMS (Alfa Aesar, Ward Hill, MA, EUA) por 30 minutos a 30°C. A mutagênese foi interrompida por adição de tiossulfato de sódio 10% (p/v) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA), e as células foram peletizadas por centrifugação a 700 X g por 5 minutos, e re-suspensas em 1 ml de H2O estéril. Isso foi repetido mais uma vez, antes de as células serem plaqueadas em placas de ágar YPD contendo 1,6 pg/ml de CIO.
40.3d Determinação de MICs
A concentração inibidora mínima (MIC) foi realizada essencialmente seguindo as diretrizes do NCCLS definidas no protocolo M27, com exceção da utilização de meio YPD ou meio sintético definido (SDM).
40.3e Experimento de combinação de leveduras Os mutantes haplóides derivados de S. cerevisiae ATCC 201388 foram misturados com S. cerevisiae ATCC 200901, e incubados em placas de ágar YPD a 3 0°C por 4 horas. A mistura de célula foi raspada em meio ágar sintético definido (BD, NJ, EUA), sem os aminoácidos lisina e metionina, que são seletivos para diplóides.
40.3f Construção de biblioteca de DNA genômico de plasmídeo
O DNA genômico de cepas mutantes foi isolado com o uso do kit de tecido DNeasy de Qiagen (Valencia, CA, EUA) . Fragmentos de DNA genômico de 4-10 kb foram gerados por digestão parcial com Mbo I de Fermantas (Hanover, MD, EUA), seguido por purificação com a utilização do gel Wizard®SV e do sistema "PCR Clean-Up" (Promega, Madison WI, EUA) . Os fragmentos de DNA purificados foram ligados em pRS315 digerido com BamH I (Fermantas, Hanover MD, EUA) usando T4 DNA ligase (Fermantas, Hanover MD, EUA) . A mistura de ligação foi dialisada contra água com o uso dos filtros VSWP 0025 (Millipore, Billerica, MA, EUA), antes de ser submetida à eletroporação em células de Escherichia coli E. cloni SUPREME (Lucigen, Middleton, WI, EUA) de acordo com o protocolo do fabricante. Os transformantes foram plaqueados em placas LB com 200 pg/ml de carbenicilina e incubados de um dia para o outro a 37°C. Os transformantes foram reunidos em pool, e o DNA de plasmídeo foi isolado com o uso do kit "Qiagen miniprep" (Valencia, CA, EUA). A biblioteca de plasmídeos foi transformada em S. cerevisiae (Gietz, R. D. e cols. , Methods in Enzymology 305: 87-96 (2002)).
40.3g Seqüenciamento Todo o seqüenciamento foi realizado por Sequetech Corporation (Mountain View, CA, EUA). 40.3g(l) Mapeamento de mutações
Para mapear ainda mais as mutações em domínios específicos em CDC60, os três pares de iniciadores seguintes foram usados:
5' gcgaaaagaaacctaacgcatattc 3' e
5' ctatcgtgatccatacaagcttgac 3',
5' cgatagacaatccggtgaaggtgttac 3' e 5' catcccaaggcaatctggtacctaacc 3', e
5' gaaaaatacttagttgagtctttatca 3' e 5' caccatgaggcatcttgaaatattctc 31.
40.3h Clonagem e superexpressão de CDC60 do tipo selvagem em S. cerevisiae
Um fragmento de DNA de 4,0 kb BamH I-Sal I contendo o quadro de leitura aberta (ORF) de CDC60 inteiro e 700 bp da seqüência acima foi amplificado usando DNA polimerase KOD, DNA genômico de S. cerevisiae (Novagen, Madison, WI, EUA) e os iniciadores GAG GGA TCC GGT TAG TTT TAG TTC GCG AGT GAC CTG e GAG GTC GAC GAT TTC TGG TTG CTG TTT ATT GAT CTT (Operon, Alameda, CA, EUA). Esse fragmento de DNA foi então clonado em 2 μΜ do plasmídeo multicópias pRS425, e transformado em S. cerevisiae ATCC 201388 (Gietz, RD e cols., Methods in Enzymology 305: 87-96 (2002)).
40.4 Resultados e discussões
40.4a Isolamento de mutantes resistentes De 5 χ 10^9 células, foram isolados 600 mutantes resistentes ao CIO espontâneos, o que torna a freqüência de resistência 1,2 χ 10^7 a 4 χ MIC. Freqüências de resistência similares foram obtidas para MIC 8x e 16x. Nós também usamos EMS para isolar mutantes de resistência ao CIO. O uso de EMS aumentou a freqüência mutagênica em 4.000 vezes. Foram testadas as MICs de 8 mutantes espontâneos e 3 mutantes gerados por EMS. Todos os mutantes mostraram um aumento de 8 a 64 vezes da resistência ao ClO (Tabela 1).
Tabela 1. MICs de mutantes de ClO espontâneos e induzidos por EMS
<table>table see original document page 328</column></row><table>
40.4b Mutações resistentes ao ClO não conferem resistência a outros antifúngicos
Para caracterizar ainda mais esses mutantes resistentes, três mutantes resistentes ao ClO foram testados contra vários agentes antifúngicos com mecanismos de ação conhecidos. Os mutantes resistentes ao ClO não mostraram nenhuma resistência a esses compostos (Tabela 2), o que sugere que ClO atua de forma bem diferente desses agentes antifúngicos.
Tabela 2. Mutantes de ClO não são resistentes a outros antifúngicos
<table>table see original document page 329</column></row><table>
40.4c Resistência a ClO é dominante
A fim de identificar o gene que dá origem à resistência ao CIO, primeiro foi determinado se a mutação era dominante ou recessiva. A cepa parente de S. cerevisiae e três mutantes foram selecionados e combinados com S. cerevisiae ATCC 200901. Verificou-se que a MIC dos diplóides gerados pelos mutantes de ClO era 64 vezes maior do que a do diplóide gerado pela cepa parente (Tabela 3), o que sugere que as mutações são dominantes e, portanto, foram construídas bibliotecas de plasmídeos a partir desses três mutantes haplóides resistentes ao CIO.
Tabela 3. Mutantes de ClO são dominantes
<table>table see original document page 329</column></row><table> <table>table see original document page 330</column></row><table>
40.4d O gene de CDC60 confere resistência ao C10
Bibliotecas de plasmídeo dos três mutantes foram transformadas em S. cerevisiae ATCC 2 013 8 8 e selecionadas em ágar SDM menos leucina com 1 µg/ml de C10. O DNA de plasmídeo foi isolado de transformantes resistentes ao C10 e eletroporado em células de E. coli 10G. Os DNAs de plasmídeo dos transformantes de E. coli resistentes a carbenicilina resultantes foram então transformados em S. cerevisiae ATCC 201388 para confirmar que os plasmídeos abrigam o gene para resistência ao C10. Um plasmídeo de cada biblioteca que conferia resistência ao C10 foi seqüenciado e analisado usando uma pesquisa BLASTN contra a base de dados do genoma de S. cerevisiae (http://sed.leveduragenome.org/cgi-bin/nphblast2sgd). O gene de CDC60 foi o único quadro de leitura aberta identificado nas inserções clonadas de dois plasmídeos derivados de duas das bibliotecas de plasmídeos. Foram revelados dois genes, CDC60 e PET20, na inserção clonada da biblioteca de plasmídeos restante. Isso sugere que essas mutações resistentes ao C10 estão localizadas no gene de CDC60, que codifica leucil-tRNA sintetase citoplasmática. CDC60 (leucil tRNA sintetase) é uma das 20 aminoacil-tRNAa sintetases (ARS) essenciais que anexam aminoácidos à extremidade 2 ou 31 de tRNAs.
40.4e Mutações de resistência ao C10 residem no domínio de edição de CDC60 A análise da seqüência de DNA dos plasmídeos derivados dos três mutantes mostrou que havia uma única substituição de aminoácido em CDC60 de cada um dos três mutantes (Tabela 4). Mais oito mutantes foram analisados por amplificação de CDC60 por PCR de colônia e transformação do produto resultante em S. cerevisiae ATCC 201388. Todos os transformantes eram resistentes ao CIO, e a análise de seqüência subseqüente mostrou que todos eles continham uma única mudança de aminoácido dentro do domínio de edição de CDC6 0 (Tabela 4). A função da ARS é carregar o tRNA correto com o aminoácido correto. Em leucil-tRNA sintetases, o sítio ativo para o mecanismo de edição está localizado em um domínio separado, que é denominado o polipeptídeo conectivo 1 (CPI), do sítio ativo sintético (Schmidt E. e cols., Biochemistry 34(35): 11.204-10 (1995)). Todas as substituições de aminoácidos de 11 mutantes estavam localizadas nesse domínio CPI, demonstrando uma ligação entre a função de edição da enzima e atividade inibidora de CIO .
40.4f Superexpressão de CDC60 do tipo selvagem em S. cerevisiae
Uma vez que todos os 11 mutantes resistentes ao CIO possuem substituições de aminoácidos únicas no domínio de edição de leucil-tRNA sintetase (Tabela 4), isso sugere fortemente que CDC60 seja o alvo para CIO. Caso leucil-tRNA sintetase fosse o alvo, o aumento das cópias de CDC60 deveria aumentar a resistência ao CIO. Para testar essa hipótese, o gene de CDC60 do tipo selvagem foi clonado em um plasmídeo multicópias pRS425, e transformado em S. cerevisiae ATCC 201388. Como mostrado na Tabela 5, a MIC para essa cepa é oito vezes maior do que para a mesma cepa que abriga pRS425.
Tabela 4 Substituições de aminoácidos (AA) em mutantes resistentes ao C10
<table>table see original document page 332</column></row><table>
Tabela 5. A superexpressão de CDC60 aumenta a resistência ao C10
<table>table see original document page 332</column></row><table>
EXEMPLO 41
Experimentos para isolar moléculas mutantes de leucil tRNA transferase que também são resistentes ao C10.
A cepa haplóide de Saccharomyces cerevisiae do tipo selvagem ATCC 201388 (MATa his3Al leu2µ 0 met5A 0 ura3A 0) foi usada para a seleção de clones que apresentam resistência ao CIO.
As mutações na leucil tRNA transferase foram isoladas de duas formas. Em um conjunto de experimentos, EMS foi usado como agente mutagênico químico. 2,5 ml de uma cultura de um dia para o outro foram lavadas 2χ com tampão de 5 0 mM de fosfato de potássio, pH 7,0, e re-suspensos em 10 ml do tampão até alcançar aproximadamente 5 χ IO7 células/ml. Trezentos μl de EMS (Alfa Aesar, Ward Hill, MA) foram adicionados às células, que foram então incubadas por 3 0 minutos a 30°C com agitação. O processo de mutagênese foi interrompido com a adição de tiossulfato de sódio 10% (p/v) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) . No final do ciclo de mutagênese, as células foram lavadas 2x com água, e, a seguir, plaqueadas em placas de ágar YPD contendo CIO.
No segundo método, clones mutantes espontâneos foram isolados de placas YPD contendo grandes concentrações de CIO. A cepa haplóide de S. cerevisiae do tipo selvagem ATCC 201388 (MATa his3Al leu2A 0 met5A 0 ura3A 0) cresceu de um dia para o outro em caldo YPD Difco (extrato de levedura 1%, Peptona Bacto 2%, 2% de glicose) a 30°C até alcançar 1,0 χ IO8 células/ml. As células foram concentradas IOx em caldo YPD, e 10 0 μl foram plaqueados em cada uma das 3 0 placas de ágar YPD (caldo YPD Difco ± 1,5% ágar Bacto) contendo 1,6, 3,2, 6,4 pg/ml de ClO (equivalente a 4x, 8x e 16x a concentração inibidora mínima de CIO) . Os mutantes resistentes apareceram após 2 dias de incubação a 30°C. A freqüência de resistência foi determinada por contagem do número dos mutantes e do número total de células.
O teste da concentração inibidora mínima (MIC) foi realizado usando o protocolo do NCCLS. 0 experimento de combinação de levedura foi realizado de acordo com o procedimento de "Methods in Enzymology" por Guthrie, C. etc .
A biblioteca genômica de plasmídeos para cada clone foi construída com o uso do vetor shuttle de levedura-E. coli pRS315 e transformada em S. cerevisiae ATCC 201388. Os transformantes foram selecionados em meio sintético definido com 0,2 pg/ml de ClO menos leucina. Todo o trabalho de seqüenciamento foi feito por Sequeteq. A pesquisa Blast foi realizada com o uso da base de dados do genoma de Saccharomyces. A transformação de levedura foi feita com a utilização do método LiAc/PEG. A superexpressão da construção de CDC6 0 foi feita com o uso do DNA genômico de S. cerevisiae, e dois iniciadores: 5'GAGGGATCCGGTTAGT TTTAGTTCGCGAGTGACC TG 3', 5* GAGGTCGACGATTTCTGGTTGCT GTTTATTGATCTT 3'.
Um total de 23 mutantes resistentes ao CIO foi isolads de S. cerevisiae. Todos os mutantes eram dominantes e tinham a resistência aumentada ao ClO em 8-64 vezes em relação ao tipo selvagem no teste da concentração inibidora mínima. A caracterização adicional desses mutantes mostrou que eles não apresentavam resistência cruzada com quaisquer agentes antifúngicos com mecanismo de ação conhecidos.
Determinação de dominância/recessividade
A fim de identificar o gene resistente na cepa mutante, primeiro determinamos se a mutação é dominante ou recessiva. O mutante foi combinado com uma cepa do tipo selvagem com tipo de combinação oposta para tornar o mutante diplóide. Havia dois conjuntos de genes nas células diplóides mutantes resultantes, um do mutante resistente e o outro do tipo selvagem sensível ao ClO. Caso o diplóide mutante fosse resistente ao CIO, o gene mutado seria dominante. Para mapear a mutação, construímos uma biblioteca de plasmídeos da cepa mutante, e transformamos a biblioteca na cepa do tipo selvagem sensível ao ClO para selecionar o fenótipo resistente. Caso o diplóide mutante fosse sensível ao CIO, o gene mutado seria identificado como recessivo. A12, F4, H4 foram combinados com uma cepa do tipo selvagem, respectivamente, como controle; a cepa parente também foi combinada com a mesma cepa. As concentrações inibidoras mínimas tanto do diplóide do tipo selvagem quanto de 3 diplóides mutantes são mostradas na Tabela 3. Comparado com o diplóide do tipo selvagem, todos os 3 diplóides mutantes foram resistentes ao CIO, indicando que a mutação resistente nesses 3 mutantes é dominante.
Mapeamento genético da mutação
Todas as mutações nos 23 mutantes resistentes ao ClO isolados foram mapeadas nos 11 resíduos no domínio de edição de CDC60, a leucil-tRNA sintetase citoplasmática.
Para identificar a mutação no mutante resistente, construímos 3 bibliotecas de plasmídeo genômicas dos mutantes A12, F4 e H4, respectivamente. Plasmídeos com inserção aleatória de fragmento de DNA genômico, com tamanho de 4-10 kb, foram transformados de volta na cepa parente do tipo selvagem. Os transformantes com plasmídeos que carregam os genes resistentes foram selecionados em placas de ágar SDM-Ieu com adição de CIO. A seguir, os plasmídeos foram isolados e enviados para seqüenciamento. A seqüência de nucleotídeos da inserção foi pesquisada por BLAST contra a base de dados do genoma de S. cerevisiae, e os resultados revelaram que havia um único ORF presente na inserção de ambos os plasmídeos isolados da biblioteca de plasmídeos de F4 e H4. Esse ORF foi identificado como CDC60, a leucil tRNA sintetase citoplasmática, uma das 20 aminoacil-tRNA sintetases citoplasmáticas essenciais em S. cerevisiae (houve mais 20 mitocondriais). Além de CDC60, havia um segundo ORF pet 20 presente no plasmideo isolado da biblioteca de plasmídeos de A12, que codificava a proteína necessária para o crescimento respiratório e estabilidade do genoma mitocondrial. Para confirmar que o CDC60 desses 3 mutantes conferia resistência ao C10, nós re-transformamos os 3 plasmídeos de volta à cepa parente do tipo selvagem. Comparada com a transformação de controle do plasmideo sem CDC6 0, aqueles com CDC6 0 de A12, F4, H4 geraram colônias > 1.000 mais resistentes em ágar YPD contendo C10, confirmando que CDC60 das 3 cepas mutantes contribuiu para a resistência ao C10. A seqüência em CDC60 de cada um dos mutantes contém substituição de aminoácido única.
A fim de identificar se havia alguma substituição de aminoácido, todo o ORF de CDC60 de plasmídeos resistentes A, 2, F4 e H4 foi seqüenciado. A comparação da seqüência com CDC60 do tipo selvagem mostrou que havia uma substituição de aminoácido única em cada um dos 3 CDC60 (Tabela 4). Além disso, a análise de seqüência de CDC60 do resto dos 20 mutantes resistentes mostrou que cada um contém uma mudança de aminoácido única dentro de CDC60. Fragmentos de PCR de DNA contendo cada mutação foram transformados de volta na cepa do tipo selvagem. Essas transformações conferiram resistência, indicando que a resistência de todos os mutantes era causada pela substituição de aminoácido única em CDC6 0.
CDC60 (leucil tRNA sintetase) é uma das aminoaci1-1RNA sintetases (ARS) que pertencem a uma família de enzimas essenciais que anexam aminoácidos à extremidade 2' ou 3' de tRNAs; os tRNAs carregados são, a seguir, usados na síntese de proteínas. A aminoacilação de tRNA é uma reação em duas etapas: a) ativação de aminoácidos com ATP por formação de aminoacil adenilatos, e b) transferência do resíduo aminoacil do aminoacil adenilato para o substrato de tRNA cognato. A precisão da aminoacilação depende tanto do reconhecimento específico de aminoácidos durante suas ativações (peneira grosseira) quanto da edição pré- ou pós- transferência (peneira fina). Algumas das ARS desenvolveram um mecanismo de edição que hidrolisa especificamente aminoácidos ativados inadequadamente estruturalmente próximos. A leucil tRNA sintetase é uma dessas enzimas que podem discriminar leucina de isoleucina e valina. A região que efetua essa função de edição é denominada polipeptídeo conectivo 1 (CP 1) , que é uma grande inserção que interrompe o sítio ativo entre o terceiro e o quarto filamentos b da dobra de Rossman. Todas as 11 substituições de aminoácidos de 23 mutantes estavam localizadas nessa região CPI, sugerindo que talvez haja uma ligação entre a função de edição da enzima e a atividade de inibição de CIO.
EXEMPLO 42
Ensaio para determinar que ClO inibe o domínio de edição de tRNA sintetase em uma bactéria
Este exemplo apresenta um ensaio representativo para determinar se um composto em particular inibe o domínio de edição de uma ARS em uma bactéria.
A tRNAleu carregada inadequadamente com [3H] - isoleucina foi sintetizada por incubação de 1 μΜ de Cdc60p (C3 2 6F) de Saccharomyces cerevisiae com edição defeituosa em 500 μl de 50 mM de Tris-HCl (pH 8,0), 60 mM de MgCl2, 4 mM de ATP, 1 mM de DTT, BSA 0,02% (p/v), 4 mg/ml de tRNA bruto de tRNA de E. coli (Roche) , 0,1 mM de isoleucina e 5 mCi de L-[4,53H] isoleucina (100 Ci/mmol, GE Healthcare) e DMSO 20% (v/v) por 1 hora a 30°C. A reação foi interrompida por adição de 10 μΐ de ácido acético 10% (v/v), seguida por duas extrações ácidas de fenol (Sigma). O tRNA carregado inadequadamente na fase aquosa superior foi removido e precipitado por adição de dois volumes de etanol 96% (v/v) e incubação a -20°C por 30 minutos. 0 precipitado foi peletizado por centrifugação a 13.200 xg por 30 minutos, e o pélete de tRNA carregado inadequadamente foi lavado duas vezes com etanol 70% (v/v) , e, a seguir, re-suspenso em tampão de 50 mM de fosfato de potássio pH 5,2.
A reação foi terminada após incubação de 2 horas a 30°C pela adição de ácido acético até 0,17% (v/v). A tRNALeu bruta com isoleucina foi purificada por extração duas vezes com extrações ácidas de fenol-clorofórmio (pH 4,3), seguido por precipitação de etanol. O pélete de tRNA foi lavado duas vezes com etanol 70%, seco, e, a seguir, re-suspenso em 50 mM de fosfato de potássio (pH 5,0) e estocado -20°C. Uma alíquota foi precipitada com TCA 10% (p/v) para quantificar ile-tRNALeu.
Foram realizados ensaios de hidrólise de edição pós- transferência a 30°C em 50 mM de Hepes (pH 8) , 10 mM de MgCl2, 30 mM de KCl, com 3H-isoleucina-tRNA bruto (-0,3 pCi/ml). Cada reação foi iniciada por adição dos 150 nM de enzima. Em cada ponto do tempo, três alíquotas de 20 μl da mistura de reação foram adicionadas a 200 μΐ de TCA 10% (p/v) em uma placa de filtro de Millipore, e precipitadas por 20 minutos a 4°C. O precipitado foi filtrado e lavado três vezes com 200 μl de TCA 5% (p/v) , e depois seco, e 20 μΐ de coquetel de cintilação Supermix foram adicionados. As placas de filtro de Millipore foram contadas no MicroBeta Trilux. A IC50 foi determinada pela quantidade de inibidor que inibia 50% da atividade, e 100% da edição pós- transferência foi calculada tomando-se a atividade do controle sem enzima da atividade da enzima do tipo selvagem.
Comparar a concentração inibidora mínima (MIC) de uma cepa de Escherichia coli tolC que abriga um plasmídeo derivado de pUC, com e sem uma inserção do gene IeuS.
Caso a MIC da cepa que abriga as cópias extras de IeuS seja maior do que 2 vezes mais do que a cepa de controle, então despejar nas placas de ágar LB quatro vezes a concentração da MIC do composto.
Plaquear 1 χ 10^10 Ε. coli em dez placas contendo 4 χ a MIC do composto. Incubar por 1-2 dias a 37°C e retirar 10 colônias e re-plaquear em placas de ágar LB com 4 χ MIC para confirmar a resistência.
Pegar uma colônia grande dos 10 mutantes de E. coli resistentes, e re-suspender em 50 μl de tampão de PCR.
Amplificar o domínio de edição de CDC60 usando uma enzima de revisão de PCR e os seguintes iniciadores: ggcaccgtggacgtacgacaacatcgc e gggaaacaccccagtcgcgcaggcgg.
Purificar o produto de PCR de 980 bp usando kits de limpeza de PCR Qiagen ou Promega.
Amplificar a seqüência de DNA do mutante e compará-la com a do tipo selvagem. Caso o DNA do mutante abrigue mutações no domínio de edição, o inibidor afeta a leucil- tRNA sintetase por meio do domínio de edição.
EXEMPLO 43
Ensaio para determinar se ClO inibe o domínio de edição de tRNA sintetase em vim fungo
Este exemplo detalha um ensaio exemplar para determinar se um composto selecionado inibe o domínio de edição de uma ARS em um fungo.
A tRNAleu carregada inadequadamente [3H]-isoleucina foi sintetizada por incubação de 1 μΜ de Cdc60p (C326F) de Saccharomyces cerevisiae com edição defeituosa em 500 μl de 50 mM de Tris-HCl (pH 8,0), 60 mM de MgCl2, 4 mM de ATP, 1 mM de DTT, BSA 0,02% (p/v), 16 μΜ de tRNA de levedura de cerveja (Roche) , 0,1 mM de isoleucina e 5 mCi de L-[4,5- 3H]isoleucina (100 Ci/mmole, GE Healthcare), e DMSO 20% (v/v) por 1 hora a 3 0°C. A reação foi interrompida por adição de 10 μΐ de ácido acético 10% (v/v) , seguida por duas extrações ácidas de fenol (Sigma). O tRNA carregado inadequadamente na fase aquosa superior foi removido e precipitado por adição de dois volumes de etanol 96% (v/v) e incubação a -20°C por 30 minutos. O precipitado foi peletizado por centrifugação a 13.200 xg por 30 minutos, e o pélete de tRNA carregado inadequadamente foi lavado duas vezes com etanol 70% (v/v) , e, a seguir, re-suspenso em tampão de 50 mM de fosfato de potássio pH 5,2.
A reação foi terminada após incubação de 2 horas a 30°C pela adição de ácido acético até 0,17% (v/v). A tRNALeu bruta com isoleucina foi purificada por extração duas vezes com extrações ácidas de fenol-clorofórmio (pH 4,3), seguidas por precipitação de etanol. O pélete de tRNA foi lavado duas vezes com etanol 70%, seco, e, a seguir, re- suspenso em 50 mM de fosfato de potássio (pH 5,0) e estocado -20°C. Uma alíquota foi precipitada com TCA 10% (p/v) para quantificar ile-tRNALeu.
Foram realizados ensaios de hidrólise de edição pós- transferência a 25°C em 50 mM de Hepes (pH 7,5), 10 mM de MgCl2, 30 mM de KCl, com 3H-isoleucina-tRNA bruto (-0,3 pCi/ml). Cada reação foi iniciada por adição dos 150 nM de enzima. Em cada ponto do tempo, três alíquotas de 20 μl da mistura de reação foram adicionadas a 200 μl de TCA 10% (p/v) em uma placa de filtro de Millipore, e precipitadas por 20 minutos a 4°C. O precipitado foi filtrado e lavado três vezes com 200 μl de TCA 5% (p/v) , e depois seco, e 20 μl do coquetel de cintilação Supermix foram adicionados. As placas de filtro de Millipore foram contadas no MicroBeta Trilux. A IC50 foi determinada pela quantidade de inibidor que inibia 50% da atividade, e 100% de atividade foi calculada tomando-se a atividade do controle sem enzima da atividade de edição pós-transferência da enzima do tipo selvagem.
EXEMPLO 44
Diálise de equilíbrio
Foram feitos experimentos de diálise de equilíbrio em 1x tampão AARS contendo 50 mM de Hepes-KOH (pH 8,0), 30 mM de MgCl2 e 30 mM de KCl. Os experimentos foram realizados usando o aparelho "MWCO DispoEquilibrium Dialyzer" de 5k (Harvard Apparatus, Holliston, MA). Em um lado da membrana de diálise (lado A), [metileno-14C] CIO, 2,04 GBq/mmol (Amershara) foi adicionado em concentrações que variam de 1 a 200 μΜ em 2 0 μl. No lado oposto da membrana (lado Β), 30 μΜ de Cdc60p recombinante (LeuRS citoplasmática de Saccharomyces cerevisiae) e 10 mM de AMP (adenosina 5'- monofosfato, Sigma) foram adicionados em 20 μl. As amostras foram incubadas em temperatura ambiente (21°C) durante agitação, por 4,5 horas, para estabelecer o equilíbrio de CIO através da membrana. No equilíbrio, CIO em cada lado da membrana de diálise foi quantificado por contagem de cintilação com o uso de um contador de cintilação líquida Wallac MicroBeta Trilux modelo 1450. A quantidade de CIO ligada a Cdc60p foi determinada subtraindo-se [C10]A de [C10]B.
Ensaio de troca de PPi
O ensaio de troca de PPi foi realizado em 1x tampão AARS contendo 50 mM de Hepes-KOH (pH 8,0), 30 mM de MgCl2 e 30 mM de KCl suplementado com 2 mM de ATP e [32P] PPi (10^5 cpm/μmol) , 2 mM de leucina e 7 nM de Cdc60p recombinante. Também foram feitos experimentos na presença ou ausência de ClO (15 μΜ) e tRNA (16 μΜ). Após uma incubação de 20 minutos a 30°C, as reações foram iniciadas pela adição de ATP. Em vários intervalos de tempo, 45 μl de mistura de reação foram adicionados a 100 μl de ácido perclórico 2% e 0, 1 M de Na4P2O7 para extinguir a reação. ATP radioativo foi então absorvido ao carvão ativado pela adição de 30 μl de uma suspensão 5% de Norit A lavado com ácido. Essa mistura foi filtrada através de filtros de vidro GF/C e lavada 2x com 200 μl de água destilada, depois 1x com 200 μl de etanol 95%. Os filtros foram secos e a cintilação foi contada com o uso de um contador de cintilação líquida Wallac MicroBeta Trilux modelo 1450.
Síntese de tRNAleu tritiada carregada inadequadamente
A tRNAleu carregada inadequadamente com [3H] - isoleucina foi sintetizada por incubação de 1 μΜ de Cdc60p de Saccharomyces cerevisiae com edição defeituosa (C326F) em 500 μΐ de 50 mM de Tris-HCl (pH 8,0), 60 mM de MgCl2, 4 mM de ATP, 1 mM de DTT, BSA 0,02% (p/v), 16 μΜ de tRNA de levedura de cerveja (Roche) , 0,1 mM de isoleucina e 5 mCi de L-[4,5-3H]isoleucina (100 Ci/mmol, GE Healthcare) e DMSO 20% (v/v) por 1 hora a 30°C. A reação foi interrompida por adição de 10 μΐ de ácido acético 10% (v/v) , seguida por duas extrações ácidas de fenol (Sigma). O tRNA carregado inadequadamente na fase aquosa superior foi removido e precipitado por adição de dois volumes de etanol 96% (v/v) e incubação a -20°C por 30 minutos. O precipitado foi peletizado por centrifugação a 13.200 xg por 30 minutos, e o pélete de tRNA carregado inadequadamente foi lavado duas vezes com etanol 70% (v/v) e, a seguir, re-suspenso em tampão de 50 mM de fosfato de potássio pH 5,2.
Ensaio de edição pós-transferência
O substrato de tRNAleu carregado inadequadamente com [3H]-isoleucina, 40 nM, foi adicionado a 50 mM de Hepes-KOH pH 8,0, 30 mM de KCl, 30 mM de MgCl2, BSA 0,02% (p/v), 1 mM de DTT, 2,4 nM de Cdc60p de S. cerevisiae a 30°C para iniciar a reação, e alíquotas de 2 0 μl, tomadas em pontos do tempo estabelecidos, foram adicionadas a 200 μΐ de ácido tricloroacético 10% (p/v) (TCA) gelado. Os precipitados de TCA foram lavados duas vezes com 200 μl de TCA 5% (p/v) gelado, e filtrados através de um filtro Multiscreen HTS HA (Millipore). O coquetel de cintilação Optiphase (Perkin Elmer) foi adicionado aos filtros, e o precipitado de TCA foi contado em um contador de cintilação liquida Wallac MicroBeta Trilux modelo 1450.
EXEMPLO 45
Ensaio para determinar se os compostos inibem a atividade de síntese de ARS.
Foram feitos ensaios de aminoacilação para determinar a taxa de síntese final de leucina/tRNALeu por leucil tRNA sintetase. Foram feitos experimentos em misturas de reação de 500 μl contendo Ix tampão AARS (50 mM de Hepes-KOH (pH 8,0), 30 mM de MgCl2 e 30 mM de KCl) suplementado com 20 μΜ de [14C]-leucina (Perkin-Elmer, 11,32 GBq/mmol) , 16 μΜ de tRNA de levedura bruto, BSA 0,02%, 1 mM de ditiotreitol, 2 nM de LeuRS de levedura recombinante (CDC6 0) , e 2 mM de ATP. As reações foram realizadas a 30 graus Celsius. No momento zero, as reações foram iniciadas pela adição de ATP. Em vários intervalos de tempo, alíquotas de 2 0 μl foram adicionadas a 150 μΐ de ácido tricloroacético 10% (TCA) dentro de um único poço de uma placa de filtro de membrana de nitrocelulose de 96 poços (Millipore Multiscreen HTS, MSHAN4B50). A seguir, cada poço foi lavado 3x com 100 μl de TCA 5%. As placas de filtro foram então secas sob uma lâmpada de aquecimento, e os complexos precipitados de [14C] - leucina/ tRNALeu foram quantificados por contagem de cintilação líquida usando um contador de cintilação líquida Wallac MicroBeta Trilux modelo 1450. Os efeitos inibidores de compostos que contêm boro foram determinados por adição de até 100 μΜ do composto na mistura de reação por 20 minutos, antes da adição de ATP. EXEMPLO 46 Artigo de teste e formulação de dosagem
ClO (5-flúor-l,3-diidro-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol) , 5-flúor-l,3-diidro-l-fenil-2,1-benzoxaborol, Cl (5-cloro- 1,3-diidro-l-hidróxi-2,1-benzoxaborol) e 5-flúor-l,3- diidro-1-(3-hidroximetilfenil)-2,1-benzoxaborol foram obtidos de Anacor Pharmaceuticals, Inc. (Paio Alto, CA). [14C] -ClO foi sintetizado por Amersham Bioscienees UK Limited (Buekinghamshire HP& 9NA, UK) de pureza radioquímica e atividade específica de > 99,3% e 55 mCi/mmol, respectivamente.
O esmalte de unha Penlac™ (solução tópica de ciclopirox 8%) foi fabricado por Dermik (Berwyn, PA) . [14C] -Ciclop irox (piridinona-6- (14C) -ciclopirox) foi sintetizado por PerkinElmer Life e Analytical Sciences (Boston, MA) . A pureza radioquímica e a atividade específica das substâncias químicas foram de > 95% e 12,5 mCi/mmol, respectivamente.
Experimento 1: Testes de quatro compostos de oxaborol
C10, 5-flúor-l,3-diidro-l- fenil-2,1-benzoxaborol, Cl e 5-flúor-l,3-diidro-l-(3-hidroximetilfenil)-2,1- benzoxaborol, formulados a 10% p/v em etanol, foram testados. Uma única alíquota (10 μΐ) de cada formulação foi dosada no topo de placas ungueais humanas com o uso do procedimento de penetração na unha descrito abaixo, e permaneceu por 3 dias. A área dosada foi lavada e, a seguir, o leito de bola de algodão que apóia a unha e as amostras de unha foi coletado ao final do período de incubação, estocado a 4°C, e analisado quanto ao fármaco com o uso de LC/MS/MS. Experimento 2: Efeito do veículo sobre a penetração de ClO na unha
As formulações seguintes, todas contendo ClO 10%, foram testadas. Formulação A: etanol 70%, poli (éter vinil metílico alt éster monobutílico de ácido maléico (v/v) 20%; Formulação B: etanol 6%, água 14%, poli (2-hidroxietil metacrilato) 15%, sebacato de dibutila (v/v) 5%; Formulação C: etanol 55%, acetato de etila 15%, poli (acetato vinila) 15%, sebacato de dibutila (v/v) 5%; Formulação D: propileno glicol 20%, etanol 70% (v/v). Utilizando-se o procedimento de penetração na unha descrito abaixo, alíquotas (10 μΐ) das formulações da dose foram aplicadas às placas ungueais humanas uma vez ao dia por 14 dias, com uma lavagem diária antes da dosagem. O leito de bola de algodão que apóia a unha foi coletado de cada câmara da célula e substituído com um novo, 5, 10 e 15 dias após a primeira dose. As amostras de unha foram coletadas ao final do período de dose de 14 dias, estocadas a 4 °C, e analisadas quanto ao fármaco por LC/MS/MS.
Experimento 3: Penetração de CIO após um tratamento de doses múltiplas de 14 dias
Dois artigos de teste, CIO, 10% em propileno glicol e etanol (1:4, v/v) e ciclopirox, 8% em esmalte de unha Penlac™, foram comparados quanto à sua taxa de penetração na e através da placa ungueal humana. Quantidades residuais de CIO e ciclopirox radiomarcados com carbono-14 foram adicionadas às suas respectivas formulações no dia anterior à primeira dose. Utilizando-se o procedimento de penetração na unha descrito abaixo, alíquotas (10 μΐ) das formulações da dose foram aplicadas às placas ungueais humanas uma vez ao dia por 14 dias com uma lavagem antes de cada dose. 0 leito de bola de algodão que apóia a unha foi coletado de cada câmara da célula e substituído por um novo a cada 72 horas após a primeira dose (dias 3, 6, 9, 12 e 15) . As amostras de unha foram coletadas no período de dose de 14 dias. A radioatividade de todas as amostras foi analisada e comparada.
Procedimento de penetração da unha
Os detalhes sobre a incubação da unha foram descritos previamente 9,10. Resumidamente, uma placa ungueal saudável do dedo da mão foi montada em uma célula de difusão de uma câmara (Figura 1, Permegear, Inc., Hellertown, PA) com a superfície da unha (centro superior) exposta ao ar e a superfície interna em contato com uma pequena bola de algodão que atua como um leito ungueal de suporte. A bola de algodão de suporte sob a unha foi umedecida com soro fisiológico normal fornecendo umidade para a placa ungueal, e o grau de hidratação foi monitorado e controlado durante o experimento. O período de incubação começava 24 horas antes da primeira dose, e terminava 24 horas depois da dose final. Foram aplicadas alíquotas (10 μl) à superfície da placa ungueal uma vez ao dia.
A lavagem da área de superfície dosada foi realizada ao final do período de incubação (para o estudo de dose única) , ou a cada manhã antes do início da dosagem no segundo dia (estudos de doses múltiplas). A superfície da área da unha que recebe a administração foi lavada com cotonetes de algodão em um ciclo, da seguinte forma: duas vezes com etanol, a seguir, com sabonete líquido Ivory® 50% (Procter & Gamble, Cincinnati, Ohio), a seguir, duas vezes com água destilada. As amostras da lavagem de cada ciclo foram reunidas em pool e a radioatividade foi medida. Após o término da fase de dosagem e da fase de incubação, a placa ungueal foi transferida para um suporte de corte para a coleta de amostras. Sob controle da umidade e da temperatura, não observamos nenhuma situação anormal como, por exemplo, a mudança da cor da placa ungueal, mudanças de hidratação, ou crescimento fúngico durante o período de dosagem de 14 dias. A placa ungueal foi fixada em posição a fim de que a superfície dorsal externa que recebe a administração ficasse virada para o suporte. O suporte de corte era movido para trazer a superfície da placa em contato com a ponta do cortador. A furadeira era então ligada e um ajuste fino movia a plataforma em direção à ponta do cortador, removendo uma amostra de pó da unha.
Dessa forma, um orifício de aproximadamente 0,3-0,4 mm de profundidade e 7,9 mm de diâmetro era perfurado em cada unha, permitindo a coleta de amostra de pó do centro da superfície ventral de cada unha. Essas amostras são citadas como amostras retiradas do "centro ventral/intermediário da placa ungueal". A seguir, a unha fora da área de dosagem (e também da área de coleta de amostras) era removida por corte e guardada como a "placa ungueal restante". A camada acima da área de coleta de pó também era guardada como "o centro dorsal/intermediário". Todas as amostras de placa ungueal foram coletadas individualmente em um frasco de cintilação de vidro e pesadas.
Análise quantitativa de oxaborõis
LC/MS/MS (API3000, Applied Biosystems, Foster City, CA) foi usada para quantificar as quantidades de oxaboróis não radiomarcados, C10, 5-flúor-1,3-diidro-1-fenil-2,1- benzoxaborol, Cl e 5-flúor-1,3-diidro-l-(3- hidroximetilfenil)-2,1-benzoxaborol em amostras dos estudos de penetração na unha. Para análise da bola de algodão, foram preparados onze padrões de calibração frescos em soro fisiológico normal. Um volume de 100 μΐ de cada padrão foi salpicado em uma bola de algodão fresca com concentrações finais do padrão de calibração de 0, 2,5, 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320, 640, 1.280 e 2.560 pg/ml. Acetonitrila (Burdick & Jackson, Muskegon, MI) contendo o padrão interno p-nitrofenol (PNP) foi adicionada a todas as bolas de algodão. As amostras de bola de algodão e qualquer solvente residual foram transferidas para tubos de filtro de centrífuga. Após centrifugação, o filtrado das amostras de bola de algodão foi transferido para frascos de autosampler e analisado por LC/MS/MS. Para as amostras de ciclopirox, o filtrado era primeiro derivatizado com dimetilsulfato, de acordo com um método descrito previamente, antes da análise por LC/MS/MS (Myoung e Choi, 2003). As amostras com as concentrações calculadas acima do maior padrão de calibração eram diluídas 10 ou 20 vezes com acetonitrila contendo padrão interno p-Nitrofenol (TCI America, Portland, OR). Para análise da unha, foram preparadas duas curvas de calibração separadas, uma para análise do pó de unha e uma para análise do topo da unha. Cada curva continha onze padrões de calibração. Primeiro, foram preparados padrões em dimetilsulfóxido. Um volume de 10 μl de cada padrão foi salpicado em pó de queratina (6,5 mg para a curva de pó de unha e 17 mg para a curva do topo da unha). As amostras de unha foram digeridas com 1 N de NaOH de um dia para o outro a 45°C. Na manhã seguinte, antes da extração com cloreto de metileno, o pH das amostras era ajustado até o pH 3. Após extração, a camada orgânica era transferida e evaporada. As amostras eram reconstituídas em acetonitrila e analisadas por LC/MS/MS com o uso de uma coluna Eclipse XDB-C18 de 5 µm, 2,1 χ 50 mm (Agilent, Wilmington, DE) e uma fase móvel de gradiente de 5 mM de acetato de amônio e acetonitrila.
Medida da radioatividade
Todas as medidas de radioatividade foram feitas com um
contador de cintilação líquida Modelo 1500 (Packard Instrument Company, Downer Grove, IL). O contador teve a sua precisão verificada com o uso de amostras lacradas de padrões extintos e não extintos, como detalhado pelo manual do instrumento. A eficiência da contagem de 14C é igual ou maior do que 95%. Todas as amostras de unha pré-tratada com "Packard soluene-350" foram incubadas a 40°C por 48 horas, seguido pela adição de 10 ml de coquetel de cintilação (HI0NIC-FLUOR, Packard Instrument Company, Meriden, CT). Outras amostras (dose-padrão, lavagem de superfície e material de suporte) foram misturadas diretamente com coquetel de cintilação Universal ES (ICN Biomedicàls, Costa Mesa, CA). As amostras de controle de fundo e de teste foram contadas por radioatividade por 3 minutos cada. Cálculos e análise de dados
A quantificação de compostos não radioativos foi baseada nas proporções da área de pico de composto em relação ao padrão interno. 0 método de regressão para as curvas de calibração foi selecionado com base no melhor ajuste. A regressão linear e quadrática foi usada com 1/x ou l/x de ponderação quadrática. Todas as integrações foram realizadas com o uso do programa Analyst versão 1.3 (Applied Biosystems, Foster City, CA). As concentrações do composto nas bolas de algodão foram convertidas em quantidades absolutas levando-se em conta o volume de amostra de 100 μΐ. As quantidades do composto no pó de unha e no topo da unha foram ajustadas para seus respectivos pesos e registradas em pg/mg.
A quantidade individual e média (± D.P.) de equivalente de substância química de teste nas amostras de unha, material de suporte e lavagem são apresentadas como dpm, pCi, percentual da dose administrada, e equivalente em mg em cada ponto do tempo. A concentração de substâncias químicas de teste marcadas com 14C foi calculada a partir do valor com base na atividade específica de cada substância química de teste marcada com 14C. As informações sobre a concentração de substância química de teste não marcada na formulação tópica foram obtidas dos fabricantes. A concentração total de equivalente de substância química de teste é a soma da concentração de substância química de teste marcada com 14C com a concentração de substância química de teste não marcada. 0 valor da quantidade total de equivalente de substância química de teste em cada amostra de unha foi calculado a partir daqueles valores com base na radioatividade da amostra e na proporção de equivalente total em mg da substância química de teste e radioatividade da substância química de teste. Os dados foram ainda normalizados dividindo-se pelo peso da amostra. A significância estatística das amostras de unha de cada um dos dois grupos foi analisada por teste t de Student. Entende-se que os exemplos e as modalidades aqui descritos têm apenas fins ilustrativos, e que várias modificações ou mudanças à luz destes serão sugeridas por aqueles habilitados na técnica, e devem ser incluídas dentro do espírito e escopo deste pedido e do escopo das reivindicações em anexo. Todas as publicações, patentes e pedidos de patentes aqui citadas são aqui incorporadas por referência em sua totalidade para todos os fins.

Claims (29)

1. Composto caracterizado por-possuir uma estrutura a qual é um membro selecionado dentre as , seguintes fórmulas: <formula>formula see original document page 353</formula> R1 a é um membro selecionado de, uma carga negativa, um contra-íon de sal e H; R9a, R10a,R11a ou R12 sao membros selecionado de benzil substituído ou não substituído, fenil substituído ou não substituído, fenil metóxi substituído ou não substituído, tiofeniloxi substrtuído ou não substituído, piridiniloxi substituído ou não substituído, pirimidiniloxi substituído ou não substituído, benzilfurano substituído ou não substituído, metiltio substituído ou não substituído, mercaptometil substituído ou não substituído, mercaptoalquil substituído ou não substituído, tiofeniltio substituído ou não substituído, fenil metidtio substituído ou não substituído, piridiniltio substituído ou não substituído, pirimidiniltio substituído ou não substituído, benziltiofuranil substituído ou não substrtuído, fenilsulfonil substituído ou não substituído, benzilsulf onil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfonil substituído ou não substituído, tiofenilsulfonil substituído ou não substituído, piridixiilsulf onil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfoniL substituído ou não substituído, sulfonamidil substituído ou não substituído, fenilsulfinil substituído ou não substituído, benzilsulfinil substituído ou não substituído, fenilmetilsulfinil substituído ou não substituído, tiofenilsulfinil substituído ou não substituído, piridinilsulfinil substituído ou não substituído, pirimidinilsulfinil substituído ou não substituído, alquilamino não substituído, dialquilamino substituído ou não substituído, trifluormetilamino substituído oü não substituído, aminometil substituído ou não substituído, alquilanjinometil substituído ou não substituído, dialquilaminometil substituído ou não substituído, arilaminometil substituído ou não substituído, benzilamino substituído ou não substituído, fenilamino substituído ou não substituído, tiofenilámino substituído ou não substituído, piridinilamino substituído ou não substituído, pirimidinilamino substituído ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, morfolino substituído ou não substituído, alquilamido àubstitúído ou não substituído, arilamido substituído õu não substituído, urèido substituído ou não substituído, carbamoil substituído oú não substituído e piperizinil substituído ou não substituído, desde que R10a e R11a, juntos com os átomos aos quais eles estão ligados, são opcionalmente unidos para formar um anel de 4 a 7 membros .
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizádo. pelo fató de possuir uma estrutura a qual é um membro selecionado dentre as seguintes fórmulas:
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R9a, R10a, Rlla ou R12a é um membros selecionados de sulfohamidil substituído ou não substituído, piridiniltio substituído ou não substituído, fenilsulfinil não substituído, fenilsulfonil não substituído piperizinil substituído ou não. substituído, morfolino substituído .Ou não substituído, indolil substituído ou não substituído, dialquilamino substituído ou não . substituído e benzilamino substituídp ou .não substituído.
4.Composto caracterizado por ser um membro selecionado dentre: <formula>formula see original document page 355</formula> em que: Rla é um membro selecionado "de uma carga negativa, um contra-íon de sal e H; 1 R9a,R10a, Rlla e ;R12a são membros selecionados dentre trifluormetóxi, dietilcarbamoil, piridin-2-il, piridin-3- il, piri'din-4-il, pirimidinil , piperizino, piperizinil. piperizinocarbonil, piperizinilcarbonil, earboxil, 1- tetrazolil, 1-etoxicarbonilmetoxi, carboximetoxi, tiofenil, 3- (butilcarbonil) fenilmetoxi, lH-tetrazol-5-il, 1- etoxicarbonilmetiloxi-, 1-etoxicarbonilmetil-, · 1- etoxicárbonil, carboximetoxi-, tioferi-2-il, tiofen-2-iltio- tiofen-3-il, ' tiofen-3-iltio, - 4-fluorf.eniltio, butilcarbonilfenilmetoxi, butilcarbonilfenilmetil, butilcarbonilmetil, 1-(piperidin-l-il)carbonil)metil, 1- (piperidin-l-il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-2- il)carbonil)metóxi, 1-(piperidin-3-il)carbonil) raetóxi, 1- (4-(pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metóxi, 1- (4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil)metil, 1-(4- (pirimidin-2-il)piperazin-l-il)carbonil, 1-4-(pirimidin-2- il)piperazin-l-il, 1-(4 -(piridin-2-il)piperazin-1- il)carbonil), 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il) carbonilmetii, (1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l- il)carbonil)-metóxi), 1-(4-(piridin-2-il)piperazin-l-il, lH-indol-l-il, morfolinò-, morfolinil, morfolinocarbonil, mor folinilcarbonil, fenilureido, fenilcarbamoil, acetamido, -3-(feniltio)-lH-indol-l-il, 3- (2-cianoetiltio)-lH-indol-1- il, benzilamino, 5-metóxi-3-(feniltio)-lH-indol-l-il,· 5- metóx,i-3- (2-cianoetil'tio) -IH-indol-l-il) , 5-cloro-IH-indol- 1-il, 5-cloro-3-(2-cianoetiltio)-IH-indol-l-il) , dibenzilamino, benzilamino, 5-cloro-3-(feniltio)-lH-indol- 1-il), 4-(lH-tetrazol-5-il)fenil, 4-(lH-tetrazol-5- il)feniltio, 2-cianofeniltio, 3-cianofeniltio, 4- cianofeniltio, 2-clorofenoxi, 3-clorofenoxi, 2-fIuorfenoxi,' -3 -íluorf enoxi, 4-f luorf enoxi., 2-cianobenziloxi, 3- -2-clorobenziloxi, 3-clorobenziloxi, 4- -2-fluorbenziIoxi, 3-fluorbenziIoxi; 4- fenil não substituído, benzil não cianobenziloxi, clorobenziloxi, fluorbenz iIoxi, substituído.
5. Composto, de acordo' com a\ reivindicação 4, caracterizado pelo fato de possuir uma fórmula a qual é um membro selecionado dentre: <formula>formula see original document page 356</formula>
6. Composto caracterizado pelo fato de possuir uma estrutura a qual é.um membro selecionado dentre: <formula>formula see original document page 357</formula> <formula>formula see original document page 358</formula> <formula>formula see original document page 359</formula>
7. Composto, dé acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que é um membro selecionado dentre: <formula>formula see original document page 360</formula> <formula>formula see original document page 361</formula>
8. Composto, de acordo com a reivindicação 6„ caracterizado pelo fato de ser um membro selecionado dentre: <formula>formula see original document page 361</formula>
9. Formulação farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável, e (b) um composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, ou um sal deste.
10. Método, para a inibição do crescimento de um microorganismo, ou para a morte de um microorganismo, ou ambos, caracterizado pelo fato de compreender o contato do microorganismo com um composto, conforme definido nas reivindicações 1, 2,- 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou 9.
11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o referido microorganismo é um membro selecionado dentre fungo ou levedura.
12. Método, de acordo còní a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o referido fungo é um membro selecionado de espécies de Candida, espécies de Trichophyton, espécies de Microsporium, espécies de Aspergillus, espécies de Cryptococcus, espécies de Blastomyeesespécies de Coeeiodiodesr; espécies de Histoplasma, espécies de Paraçoeeidiodes, espécies de Phyeomyeetes, espécies de Malassezia, espécies de Fusariuml espécies de Epidermophyton, espécies de Seytalidium, espécies de Scopulariopsis, eápécies de Alternaria, espécies de Penieillium, espécies de Phialophora, espécies de Rhizopus, espécies de Seed.osporium, e classe de Zygomyeetes.
13. Método., de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato dé que o microorganismo é um membro selecionado dentre Aspergilus fumigatus (A. fumigatus) , Blastomyees dermatitidis, Candida Albieans (.C. albieans, ambos sensíveis a f.Iuconazol e cepas resistentes), Candida glabrata (C. glabrata), Candida krusei (C. krusei) , Cryptococcus neofórmans (C. neoformans) , Candida parapsilosis (C. parapsilosis) , Candida trópicalis (C. tropiealis), Coeeiodiodes immitis, Epidermophyton floeeosum (E. floeeosum), Fusarium solani (F. solani), Histoplasma capsulatum, Malassezia furfur (M. furfur) , Malassezia paehydermatis (M. paehydermatis) , Malassezia sympodialis (M. sympodialis), Microsporum âudouinii (M. audouinii) , Microsporum canis (M. canis) , Microsporum gypseum (M.' gypseum), Paracoccidiodes brasiliensis and Phycomycetes spp, Trichophyton mentagrophytes (T. mentagrophytes) , Triçhophyton rubrum (T. rubrum) , Trichophyton tonsurans (T. tonsurans) , Trichophyton concentricum, T. violaceum, ' T. schoenleinii, T. verrucosum, T. soudanense, Microsporum gypseum', M% equinum, Candida guilliermondii, Malassezia globosa, M. obtuse, M. restricta, M. slooffiae, and Aspergillus flavus.
14. Método, de acordo com a reivindicação 10; caracterizado pelo fato de que o microorganismo é um membro selecipnado dentre dermatófitos, Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton e fungos do tipo levedura.
15. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o microorganismo é uma bactéria.
16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o microorganismo é uma bactéria gram-positiva.
17. Método., de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a bactéria gram-positiva é um membro selecionado dentre espécies' dé Staphylocpccus, espécies de Streptococcus, espécies de Bacillus, espécies de Myeobacterium, espécies de Corynebaeterium (espécies de Propionibaeterium), espécies de Clostridium, eãpécies de Actinomyees, espécies de Enterococcus e espécies de Streptomyees.
18. Método, de acordo com a reivindicação "15, caracterizado pelo fato de que a bactéria é gram-negativa.
19. Método, de acordo com a. reivindicação 1-8, caracterizado pelo fato de que a bactéria gram-negativa é um membro selecionado dentre espécies de Aeinetobaeter, espécies de Neisseria, espécies de Pseudomonas, espécies de Brueella, espécies de Agrobaeteriuml espécies de Bordetella, espécies de Eseheriehial espécies de Shigellal espécies de Yersinial espécies de Salmonella, espécies de Klebsiella, espécies, de Enterobaeter, espécies de Haemophilus, espécies de Pasteurella, espécies de Streptobacillus,· espécies de espiroquetas, espécies de Campylobacter, espécies de Vibrio e espécies de Helieobaeter.
20. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que a bactéria é um membro selecionado dentre Propionibacterium acnes Staphylococcus aureus; Staphyloeoecus epidermidis, Staphylococcus saprophytiçus; Streptoeòeeus pyogenes; Streptoeoeeus agalactiae; Streptoeoeeus pneumoniae; Enteroeoeeus faeealis; Enteròcoeeus faeeium; Baeillus anthracis ; Myeobaeterium auium-intracellulkre; Mycobacterium tubereulosis, Aeinetobaeter baumanii; Corynebaeterium diphtheria; Clostridium perfringens; Clostridium botulinum Clostridium tetani; Clostridium diffieile; Neisseria gonorrhoeaè; Neisseria meningitidis; Pseuclomonas aeruginosa; Legionella pneumophila; Escherichia coli; Yersinia . pestis; Haemophilus influenzae; Helicohacter pylori; Campylpbaeter fetus; Campylobaeter jejuni; Vibrio eholerae; Vibrio parahemolyticus; Trepomena pallidum; Aetinomyces israelii; Riekettsia prowazekii; Rickettsia riekettsii; Chlamydia trachomatis; Chlamydia psittaei ; Brueella abortus; Agrobaeterium tumefaeiens e Franeisella tularensis.
21. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o microorganismo é uma bactéria, a qual é um membro selecionado dentre bactérias ácido resistente, incluindo espécies de Mycobacterium; bacilos,, incluindo, espécies de Baeillus, espécies de Corynebaeterium (e também Propionibaeterium) e espécies de Clostridium; bactérias filamentosas, incluindo .espécies de Aetinomyees. e espécies de Streptomye-es; ba^ilo^s, tais - como espécies de Pseudomonas, espécies de Brucella, espécies de Agrobaeteriuml espécies" de Bordetella, espécies çle Eseheriçhia espécies de Shigella, espécies de Yersinia, espécies de Salmonella, espécies de Klebsiella, espécies de Enterobaeter espécies de Haemophilus, espécies ° de Pasteurella, e espécies de Streptobacillus; espécies de. espiroqpetas, espécies de tCampylobacter, espécies de Vibrio; e bactérias r intracelulares incluindo espécies de Riekettsiae e espécies de Chlamydia.
22. Méto.do, de. acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelò fato-de que o microorganismo é um vírus.
23. Método, de acordo coma reivindicação 22, caracterizado pelo fato de) que o vírus é um membro selecionado dentre hepatite A-B, rinovírus humano, vírus da febre amarela, cororiavírus respiratório humano,1 síndrome respiratória aguda grave (SARS), vírus respiratório sinc.icial, vírus da influenza, vírus da parainfluenza 1-4, vírus da imunodeficiência humana 1 (HIV-I), vírus da imunodeficiência humana 2 (HIV-2), vírus do herpes simples 1(HSV-I) , vírus do herpes simples. 2 (HSV-2) , citomegalovírus humano (HCMV), vírus da varicela zoster, vírus de Epstein-Barr (EBV), poliovírus, vírus coxsackie, ecovírus, vírus da rubéola, vírus neurodermatrófico, vírus da varíola, papovírus, vírus da raiva, vírus da dengue, vírus do oeste do Nilo e'vírus da SARS.
24. Método, de acordo com' a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que õ vírus é um membro selecionado dentre de picornaviridae, flaviviridae, coronaviridae, paramyxoviridae, ' orthomyxoviridae, retroviridae, herpesviridae e hepadnaviridae.
25. Método, de acordo . com a reivindicação 15, caracterizado pelo. fato de que o microorganismo é um parasita.
26. Método, de acordo com á reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o parasita, é um membro selecionado dentre . Plasmodium falciparum, P. vivax, P. ovale, P. malariae, P. berghei, Leishmania donovani, L. infantum, L. chagasi, L. mexicana, L. amazonensis, L. venezuelensis, L. tropics, L. major, L. minar, ' L. aethiopiça, L. Biana braziliehsis, L,. (V) guyanensis, L. (V.) panamensis, L. (V) peruviana, Trypanosoma brucei rhodesiense, T. brucei gambiense, T. cruzi, Giardia intestinalis, G. lamblia, Toxoplasma gondii,- Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis, Pneumocystis "carinii e Cryptosporidium parvum.
27. Uso de um composto; conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, -12, 13,. 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 OU -26, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para tratar ou prevenir uma infecção era um animal.
28. Uso, de acordo com a - reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a infecção é um membro selecionado dentre uma infecção sistêmica, cutânea, ungueal, periungueal e. subunguèal.
29. Uso, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que o animal é um humano.
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