BRPI0709448A2 - concentrado de imunoglobulinas especìficas de chikungunya como um produto medicinal - Google Patents

Abstract

<B>Concentrado de imunoglobulinas específicas de chikungunya como um produto medicinal <D>A invenção refere-se a um produto medicinal novo para o tratamento de chikungunya, isto é, um concentrado de imunoglobulinas específicas de chikungunya, assim com a seu processo de preparação.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "Concentrado de imunoglobulinas específicas de chikungunya como um produto medicinal"

A invenção refere-se a um novo produto medicinal para o tratamento de chikungunya, isto é, um concentrado de imunoglobulinas específicas de chikungunya, assim como seu processo de preparação.

Introdução

Chikungunya (abreviada como CHIK) é uma doença infecciosa tropical causada por um arbovírus (um alfavírus da família Togaviridae), transmitida por mosquitos do gênero Aedes. O nome tem origem na língua Bantu, e significa: aquele que dobra, que enrola, ou doença do homem encurvado, porque ela causa dor de junta muito severa combinada com rigidez, a qual dá aos pacientes infectados uma aparência de encurvamento muito característica.

Os vírus que usam vetores artrópodes em seu ciclo estão agrupados sob o termo geral arbovírus. Os arbovírus são definidos pela OMS como vírus que subsistem na natureza essencialmente ou principalmente através de transmissão biológica entre hóspedes vertebrados susceptíveis por artrópodes hematófagos; eles se multiplicam e provocam viremia no vertebrado, proliferam nos tecidos do artrópode e são transmitidos para outro vertebrado pelo inseto que pica, após um período de incubação extrínseco.

A transmissão do vírus de um hóspede virêmico para uma fêmea adulta demosquito ocorre através do sangue que é sugado quando ocorre a picada. O vírus se multiplica dentro do mosquito, atravessa a barreira estomacal do animal e é encontrado nas glândulas salivares. A contaminação de um humano saudável são, é adquirida pela saliva anticoagulante do mosquito, liberada imediatamente antes da picada em um vaso sangüíneo. A janela durante a qual a pessoa é um hóspede virêmico antes de se tornar doente é de apenas alguns dias.

Dentre mais de 950 espécies de mosquito, várias delas podem transmitir chikungunya, mas somente Aedes aegypt e Aedes albopictus foram identificados até hoje como vetores epidêmicos, devido a sua adaptação a áreas de habitação humana. Essas mesmas espécies também estão envolvidas na transmissão deoutros arbovírus: febre da dengue,, febre da dengue hemorrágica (HDF), febre amarela, etc.

O perfil clínico é dominado por uma febre alta semelhante àquela da dengue (a dengue é freqüentemente confundida com a chikungunya e vice- versa), combinada com dor de junta incapacitante e às vezes com erupção cutânea. Entretanto, há formas severas que têm sido ignoradas até hoje: hepatite fulminante, ataques cardíacos, meningoencefalite, etc. Vários outros arbovírus do gênero alfavírus (cápside de aproximadamente 30 kD e RNA poliadenilado a 3') como Ross River, 0'nyong-nyong e Mayaro têm sido associados com sintomas semelhantes.

A incubação da doença dura de quatro a sete dias em média. Viremia1 a presença do vírus no sangue e, portanto de possível transmissão estende-se por aproximadamente cinco dias. Desenvolvem-se então anticorpos. Estes permanecem no sangue. Portanto, a imunidade é geralmente adquirida para toda a vida, ou pelo menos por um ano (conforme estudo de fase Il abaixo).

Descrição do estado da técnica

Atualmente não existe tratamento viricida nem vacina que tenham recebido autorização para comercialização.

O tratamento é puramente sintomático, para baixar a febre e reduzir a dor.

Um estudo de fase I e um estudo de fase Il foram efetuados nos EstadosUnidos para uma vacina de chikungunya, pelo Instituto de Pesquisas Médicas de Doenças Infecciosas do Exército dos Estados Unidos.

O estudo de fase Il (Edelman R et al. "Estudo de fase Il da segurança e imunogenicidade de vacina de vírus vivo de chikungunya'TSI-GSD-218. Junho de 2000; Am J Trop Med Hyg, 62:681-5), pesquisa randomizada, dupla cega, controlada por placebo constituída de um estudo da segurança e imunogenicidade de uma vacina de vírus de chikungunya (CHIK) viva purificada sobre placa em 73 voluntários adultos que apresentavam boa saúde. 59 voluntários foram imunizados uma vez subcutanemente com a vacina de CHIK e 14 foram injetados com o placebo. 57 (98%) dos 58 que receberam a vacinadesenvolveram anticorpos neutralizadores anti-CHIK no dia 28, e 85% dos indivíduos vacinados ainda estavam soropositivos um ano depois.

A combinação de dois compostos antivirais, ribavirina e interferon-alfa, também foi testada em chikungunya (Briolant S et ai., "Inibição da replicação in vitro de vírus Chikungunya e Semlik Forest por compostos antivirais: efeito sinergístico da combinação inteferon-alfa e ribavirina", Antiviral Res., Fev. 2004; 61 (2): 111-7). Essa combinação de IFN-alfa2b e ribavirina apresenta um efeito antiviral sinergístico em chikungunya, que é suficientemente promissor para se considerar seu uso em terapia.

Entretanto, esse tratamento seria extremamente caro e repetitivo eenvolveria os muitos efeitos colaterais conhecidos do interferon.

Objetivos e breve descrição da invenção

Em face dessa ausência de tratamento estabelecido, uma vacina que não estará pronta em breve e tratamentos antivirais penosos, o Solicitante procurou 1 oferecer um novo tratamento contra chikungunya.

O solicitante demonstrou de uma forma surpreendente que a administração de um concentrado de imunoglobulinas específicas de chikungunya pode ser usado para resolver esse problema técnico.

Definições

O termo "concentrado" refere-se a um produto obtido por eliminação decertos componentes. Um concentrado de imunoglobulinas é obtido por eliminação de certos componentes do plasma para obter uma fração de plasma enriquecida de imunoglobulina.

O termo "imunoglobulina" (Ig) refere-se a uma globulina natural, presente principalmente no plasma, com funções de anticorpo, que pode ser usada em terapia curativa ou preventiva.

As imunoglobulinas são heterodímeros compostos de 2 cadeias pesadas e 2 cadeias leves, ligadas por pontes de dissulfeto. Cada cadeia é constituída, na posição N-terminal, de um domínio ou região variável (codificada por genes V-J rearranjados para a cadeia leve e V-D-J para a cadeia pesada), a qual éespecífica para o antígeno contra o qual o anticorpo é dirigido e, em posição C-terminal, de uma região constante, composta de um único domínio CL para a cadeia leve ou 3 domínios (CH1, CH2 e CH3) para a cadeia pesada. A combinação de domínios variáveis e domínios CH1 e CL das cadeias leves e pesadas forma as partes Fab, que são conectadas à região Fc por uma região dobradiça muito flexível que permite que cada Fab se ligue ao antígeno alvo enquanto a região Fc1 intermediária das propriedades de efetor do anticorpo, permanece acessível às moléculas do efetor como os receptores FcyR e C1q.

As imunoglobulinas IgG são as mais abundantes (75 a 80 % dos anticorpos na circulação). Elas protegem o corpo contra bactérias, vírus e toxinas que circulam no sangue e na linfa. Além disso, elas se ligam rapidamente ao complemento (um dos componentes do sistema imune). Elas também participam de resposta de memória, que é a base da imunidade sobre a qual se funda o mecanismo de vacinação. Finalmente, as imunoglobulinas G atravessam a barreira placentária e assim produzem imunidade passiva no feto.

As lgA's são encontradas principalmente em secreções como saliva, suco intestinal, suor e leite materno. O principal papel das imunoglobulinas A é prevenir que os agentes patogênicos se liguem a células, particularmente as células de proteção que constituem as membranas mucosas e a epiderme.

As lgM's são imunoglobulinas secretadas ao primeiro contato do corpocom um antígeno. Elas são o primeiro tipo de imunoglobulinas liberadas por plasmócitos. A presença de IgM no sangue indica uma infecção em curso.

A proteólise enzimática de imunoglobulinas por papaína gera 2 fragmentos idênticos, que são conhecidos como Fab (Fragmento de ligação a antígeno) e fragmento Fc (fração cristalizável). O fragmento Fc suporta as funções de efetor das imunoglobulinas.

Por proteólise por pepsina, um fragmento F (ab)' 2 é gerado, no qual os dois fragmentos Fab permanecem ligados por duas pontes de dissulfeto, e o fragmento Fc é clivado em vários peptídeos. O fragmento F (ab)' 2 é formado por dois fragmentos Fab' (um fragmento Fab consiste em um Fab e uma regiãodobradiça), ligados por pontes de dissulfeto intercatenárias para formar um F (ab)' 2.

O termo "cromatografia" refere-se a um método de separação dos componentes de uma mistura com base em sua adsorção seletiva por um meio adequado.

Descrição detalhada da invenção

Primeiramente, a invenção se refere a um concentrado de imunoglobulinas específicas do vírus de chikungunya como um produto medicinal.

O uso de frações de plasma humano enriquecidas de imunoglobulina para o tratamento de várias infecções e deficiências congênitas é conhecido desde o desenvolvimento do processo de precipitação por etanol por Cohn (Cohn et al. 1946, J. Am. Chem. Soe. 68, 459; Oncley et al. 1949, J. Am. Chem. Soc.71, 541).

Particularmente, o concentrado de acordo com a invenção é composto de um concentrado de imunoglobulinas A, G e M, ou um concentrado de imunoglobulinas exclusivamente G, ou um concentrado de imunoglobulinas exclusivamente M, específicas do vírus de chikungunya como um produto medicinal.

Particularmente de forma preferida, o concentrado de acordo com a invenção inclui no mínimo 50 % de imunoglobulinas IgG, e de 90 a 98% de proteínas que reagem com anticorpos dirigidos especificamente contra as imunoglobulinas humanas.

O concentrado de acordo com a invenção pode conter, além das imunoglobulinas completas específicas do vírus de chikungunya, fragmentos F (ab)' 2 e/ou Fab específicas do vírus de chikungunya, particularmente de 5 a 50% de F (ab)' 2 e/ou Fab, particularmente no mínimo 50 a 60 g/L de Ig e fragmentos para uma preparação farmacêutica.

Esses fragmentos F (ab)' 2 ou Fab, que contêm o local de ligação do anticorpo, podem ter perdido um certo número das propriedades do anticorpo integral do qual eles derivam, como a capacidade de se ligarem a receptores Fcgama.O concentrado de acordo com a invenção pode conter, além das imunoglobulinas completas específicas do vírus de chikungunya, fragmentos do vírus específicos de chikunguya F(ab)'2 ou Fab provindo exclusivamente de IgG e IgM.

De acordo com a invenção, de 1 a 10 mmol de magnésio e/ou zincopodem ser adicionados ao concentrado.

Outro objeto da invenção é o uso de um concentrado de acordo com a invenção para a fabricação de um produto medicinal para o tratamento de chikungunya.

Esse tratamento é profilático e/ou curativo. Ele é usado ou para conferirimunidade passiva a pessoas ainda não infectadas em uma região de epidemia, ou para tratar pacientes já infectados com o vírus.

O produto medicinal em questão é administrado por via tópica, subcutânea, oral, mucosal, intramuscular ou intravenosa.

Ele é eficaz por várias semanas, aproximadamente 21 dias, período após oqual essa administração deve ser repetida se a epidemia ou os sintomas persistirem.

A invenção também se refere a um processo para preparar um concentrado de acordo com a invenção.

A primeira etapa desse processo compreende a criação de um pool depelo menos 1.000 doações de plasma, cada doação contendo um título suficiente de Ig anti-chikungunya. Um soro que contém um título suficiente corresponde, por exemplo, a um soro que permanece positivo para a detecção de anticorpos anti-chikungunya, após diluição a 1/1000, quando o título é medido por Elisa.

Essas doações provêm de pessoas que estiveram em contato com adoença, ou pacientes que desenvolveram a doença.

A titulação pode ser efetuada de acordo com o procedimento descrito por C. van de Water et al., Journal of Immunological Methods, 166 (1993), 157-164.

Para enriquecer esse pool de plasma em imunoglobulinas, os outroscomponentes do plasma, conhecidos como "contaminantes de lipídeo e proteína"são precipitados em uma única etapa. Essa purificação por precipitação em uma única etapa pode ser efetuada por diluição do plasma em condições de precipitação de acordo com Steinbuch (Steinbuch M., Archiv. Biochem. Biophys., 134, 279-284) e pela adição de ácido caprílico. Ela também pode ser obtida pela adição de agentes de precipitação como Rivanol, cloreto de alumínio, cloreto de cetilpiridínio, ácido octanóico, polifosfatos e na presença de agentes de adsorção como, por exemplo, fosfato tricálcico e bentonita.

O sobrenadante que resulta da precipitação pode constituir o concentrado de imunoglobulinas de acordo com a invenção. Ele contém, portanto, uma mistura de IgG, AeM. Esse sobrenadante é recuperado, por exemplo, por centrifugação ou filtragem, opcionalmente com a adição de pelo menos um aditivo de filtragem.

O sobrenadante que resulta da centrifugação ou filtragem pode então sofrer o processamento de desativação viral, por exemplo, um processamento de desativação viral convencional com um solvente/detergente (Triton X100).

Se a precipitação efetuada foi uma precipitação caprílica, como a descrita acima, os resíduos de ácido caprílico no sobrenadante são eliminados por cálcio P04.

Para obter um. concentrado de IgG, IgA ou IgM1 o método descrito no pedido de patente EP1385886 pode ser aplicado, particularmente os procedimentos correspondentes ao ajuste de pH, adsorção em uma coluna pré-carregada, adsorção na coluna do sobrenadante que contém as imunoglobulinas e as proteínas que as acompanham, lavagem da coluna e eluição das várias categorias de imunoglobulinas como, por exemplo, IgG, A ou M.

Após a etapa de desativação viral, o sobrenadante sofre então uma etapaadicional de purificação por cromatografia em um trocador de ânion executada em pH alcalino. Particularmente, o pH do sobrenadante é ajustado antes para um pH variando de 8,9 a 9,1, e a coluna é carregada com um tampão, cujo pH varia de 8,9 a 9,1. A etapa de cromatografia permite a adsorção de imunoglobulinas na coluna e passagem de proteínas não retidas para o efluente. A cromatografiapode ser executada, por exemplo, sobre um gel de polisacarídeo ou vinil reticulado, enxertado com grupos DEAE, TMAE ou QAE.

Após lavar a coluna com o mesmo tampão que o tampão de carga para eliminar proteínas não retidas, as imunoglobulinas G são eluídas com um tampão de fosfato, cujo pH varia de 4 a 7, preferivelmente pH 6,2.

Uma eluição opcional subseqüente com o mesmo tampão de fosfato suplementado com NaCI de 100 a 175 mM, preferivelmente 150 mM, a um pH de 6 a 6,3, pode ser usada para coletar a IgA.

Uma eluição subseqüente opcional com o mesmo tampão ajustado para um pH variando de 6 a 7 e suplementado com NaCI de 250 a 350 mM, preferivelmente 300 mM, pode ser usado para coletar a IgM.

Qualquer tipo de mistura entre IgA1 IgG e IgM pode ser considerado misturando os concentrados da forma acima descrita.

As imunoglobulinas assim eluídas e coletadas podem ser concentradas por ultrafiltragem e submetidas, por exemplo, a filtragem de esterilização convencional e então a filtragem através de filtros nanométricos com porosidade decrescendo de 100 para 15 nanômetros.

À solução de imunoglobulinas concentradas e filtradas adiciona-se um agente estabilizador farmaceuticamente aceitável, como os descritos no pedido de patente W02004/091656, então essa solução é acondicionada como uma solução estéril e opcionalmente congelada e/ou liofilizada.

A aplicação de nanofiltragem torna possível eliminar vírus resistentes ao tratamento de desativação viral com solvente / detergente.

Para preparar um concentrado de Ig e fragmentos F(ab)' 2 ou Fab específicos do vírus de chikungunya, prepara-se da forma descrita acima um concentrado de imunoglobulinas (1), isto é, uma mistura de IgA, G e M ou uma mistura de IgG e M ou somente de IgG1 ou somente de IgM, e então, em uma segunda etapa, uma parte do concentrado de Ig obtido é submetido a proteólise para obter fragmentos F(ab)' 2 ou Fab (2). Finalmente, em uma terceira etapa, os concentrados (1) e (2) são misturados.Para obter fragmentos F(ab)' 2, faz-se proteólise a pH 4,0, a 35 oC, com pepsina de 1%, esta percentagem correspondendo à razão do peso da pepsina para o peso total do peso de proteína do concentrado (protocolo IGLOO).

Para obter fragmentos Fab1 faz-se proteólise com papaína a 1%, esta percentagem correspondendo à razão do peso da papaína para o peso total do peso proteína do concentrado.

A proteólise de imunoglobulinas G, A e/ou M também pode ser efetuada com o uso de plasmina e/ou tripsina, sendo que a implementação dessas proteases é bem conhecida pelos peritos do setor.

O exemplo revelado abaixo descreve uma configuração específica dainvençã, mas não deve ser considerado como uma limitação do escopo da mesma.

Exemplo 1: Preparação de um concentrado de imunoglobulina anti-chikungunya.

1-1. Criação de um pool de plasma

Coleta-se um litro de plasma rico em anticorpos anti-chikungunya de doadores voluntários recentemente infectados pelo vírus de chikungunya e curados dos sintomas da doença. O título do anticorpo é medido pelo Elisa, e consiste em fixar antígenos do vírus em uma placa de microtitulação, e entãorevelar os anticorpos específicos através de um reagente marcado com peroxidase de raiz forte dirigido contra imunoglobulinas. Para criação do pool de plasma, são conservadas as amostras testadas positivas, a uma diluição de no mínimo 1/1000 no contexto de um método Elisa "específico".

1-2. Preparação das imunoglobulinas

O pool de plasma resultante da etapa 1-1 é resfriado para -3 oC e, duranteo resfriamento, adiciona-se etanol em um volume suficiente para obter uma concentração final de etanol de 8%. O precipitado que nele se forma é descartado.

O pH do sobrenadante é então ajustado para pH 5,9 através da adição detampão de acetato, por exemplo, resfriado a -5 oC e completado com um volumede etanol suficiente para obter uma concentração final de etanol de 19%. O precipitado que nele se forma é coletado por centrifugação, por exemplo, e suspenso novamente em tampão de acetato, por exemplo, para obter um pH final de 4,7 a 4,9.

Adiciona-se então ácido octanóico a 20 oC, sob agitação intensa, paraobter uma concentração final de ácido octanóico de 20 g/l.

O precipitado aí formado é separado por centrifugação ou filtragem aluvial e descartado. Fosfato tricálcico ou carvão ativado é adicionado ao sobrenadante e então a mistura é clarificada por filtragem de leito profundo.

O pH do sobrenadante que contém imunoglobulina, que resulta da etapade clarificação, é ajustado para pH 9 através da adição de tampão de NaOH/glicina, por exemplo, e o sobrenadante é aplicado a uma coluna de troca de ânion (TMAE Fractogel, por exemplo), que é carregada a pH 9 com um tampão de glicina/NaCI a pH 9.

É efetuada a lavagem com o tampão de carga até o OD [diâmetro externo]de saída da coluna a 280 nm estar próximo do OD280 medido por ocasião do estabelecimento da linha basal.

É então efetuada a eluição de IgG com um primeiro tampão de fosfato de sódio a pH 6,2. Uma segunda eluição é efetuada com um tampão de fosfato suplementado com NaCI a 300 mM. O eluído correspondente contém IgA, IgM e parte da lgG4. O processo de operação detalhado dessa purificação é revelado em EP 1385886.

1-3. Preparação de um concentrado ativo contra chikungunya

25% do primeiro eluído, contendo a IgG, são extraídos e adicionados a eluídos que contêm lgG4, IgA e IgM. Essa mistura de imunoglobulinas é concentrada a 50 g/l através de ultrafiltragem em uma membrana, cujo limiar de corte é igual ou mais baixo do que 30 kD.

O pH da mistura concentrada é ajustado por diafiltragem contra um tampão de citrato a pH de 3,8 a 4,2, para obter um pH ácido compreendido nessa faixa. A solução é então suplementada com pepsina (10000 FlP/mg) de forma que a quantidade de pepsina corresponda a 1 % da quantidade total de proteínascontidas na mistura concentrada. Essa solução é então filtrada sob condições de esterilidade a 0,2 mm e incubada por 20 h a 37°C.

Após a incubação, o hidrolisado de proteína é neutralizado, por exemplo, pela adição de hidróxido de sódio a pH 6,2 +/- 0,2. O hidrolisado de proteína neutralizado é diafiltrado contra um tampão de glicina a pH 6,2 +/- 0,2, até o OD280 atingir cerca de 0,005, com o OD2so sendo medido na linha de filtrado da membrana de limiar de corte de 30 kD.

Os peptídeos resultantes da proteólise de pepsina, cujo tamanho é igual ou menor do que 30 kD, são descartados por ocasião da passagem através da membrana de limiar de corte. O hidrolisado de proteína obtido, portanto, contém fragmentos Fab, fragmentos F (ab)' 2 mas carece de fragmentos Fc.

O hidrolisado de proteína resultante é então misturado com os 75% restantes do primeiro eluído, que contêm a IgG. Em seguida a mistura é concentrada por ultrafiltragem para atingir uma concentração final variando de 50 a 160 g/l, dependendo da via de administração selecionada. O título do concentrado é medido de acordo com o método descrito em Edelman, R et al. (American Journal of Tropical Medicine and Hygiene, 62 (6), 2000, páginas 681-685). O título assim obtido em anticorpos específicos anti-chikungunya do concentrado é no mínimo 3 a 10 vezes mais alto do que o plasma inicial.

1 -4. Uso da preparação

O concentrado que resulta da etapa 1-3 é estabilizado através da mistura com uma formulação que compreende excipientes farmaceuticamente aceitáveis, como, por exemplo, glicina sob uma concentração final de 0,22 M, ou como os descritos no pedido de patente WO 2004/091 656. O pH da formulação adicionada ao concentrado é compatível com a obtenção de uma mistura líquida, cujo pH varia de 4,2 a 5,6.

A mistura líquida resultante pode ser administrada, por exemplo, por via intravenosa, subcutânea ou intramuscular, dependendo do estado flebológico do receptor.

A dose administrada corresponde de 0,2 a 0,8 ml/kg e pode, no caso deuma epidemia, ser administrado como medida de precaução a cada 3 semanas apacientes particularmente expostos, por exemplo, a idosos, mulheres grávidas ou neonatos.

Claims (25)

1. Concentrado de imunoglobulinas específicas do vírus de chikungunya como um produto medicinal.

2. Concentrado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é composto de um concentrado de imunoglobulinas A, G e M.

3. Concentrado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é composto de um concentrado de imunoglobulinas G.

4. Concentrado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é composto de um concentrado de imunoglobulinas M.

5. Concentrado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4,caracterizado pelo fato de que inclui de 90 a 98% de imunoglobulinas.

6. Concentrado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que também contém fragmentos F(ab)' 2 específicos do vírus de chikungunya.

7. Concentrado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6,caracterizado pelo fato de que também contém fragmentos Fab específicos do vírus de chikungunya.

8. Concentrado de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que contém de 5 a 50% de F (ab)' 2 e/ou Fab.

9. Concentrado de acordo com a reivindicação 6, 7 ou 8, caracterizadopelo fato de que o fragmento F (ab)' 2 ou Fab são fragmentos F (ab)' 2 ou Fab de IgG e IgM.

10. Concentrado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que são adicionados de 1 a 10 mmol de magnésio ao mesmo.

11. Concentrado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que são adicionados de 1 a 10 mmol de zinco ao mesmo.

12. Uso de um concentrado definido nas reivindicações de 1 a 11 para a fabricação de um produto medicinal para o tratamento de chikungunya.

13. Uso de acordo com a reivindicação 12 para a fabricação de um produto medicinal em uma forma a ser administrada por via tópica, subcutânea,oral, intramuscular ou intravenosa.

14. Processo de preparação de um concentrado de acordo com a reivindicação 1 ou 2, na qual o referido processo compreende as seguintes etapas:- criação de um pool de no mínimo 1000 doações de plasma, cada doação contendo um título suficiente de Ig anti-chikungunya,- precipitação de contaminantes lipídicos e protéicos em uma únicaetapa,- recuperação de um concentrado de Ig no sobrenadante.

15. Processo para preparação de um concentrado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o referido processocompreende as seguintes etapas:- criação de um pool de no mínimo 1.000 doações de plasma, cada doação contendo um título suficiente de Ig anti-chikungunya,- precipitação de contaminantes lipídicos e protéicos em uma única etapa, - cromatografia do sobrenadante em um trocador de ânion em pH alcalino,- eluição de IgG com um tampão de fosfato a pH compreendido entre 4 e 7, preferivelmente a pH 6,2,- opcionalmente, eluição, em seguida, de IgA com o mesmo tampão de fosfato com NaCI de 100 a 175 mM adicionado ao mesmo, preferivelmente 150mM, a um pH de 6 a 6,3,- opcionalmente, eluição, em seguida, de IgM com o mesmo tampão de fosfato a um pH compreendido entre 6 e 7 e com NaCI de 250 a 350 mM adicionado ao mesmo,- opcionalmente, mistura dos concentrados de IgG, IgA e IgM.

16. Processo de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o pH do sobrenadante é ajustado para o intervalo entre 8,9 e 9,1 e a coluna de cromatografia é carregada com um tampão a pH de 8,9 a 9,1 antes da cromatografia.

17. Processo para preparação de um concentrado de acordo com areivindicação 6, 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas:(1) preparação de um concentrado de Ig de acordo com a reivindicação 14 ou 15, ou de IgG de acordo com a reivindicação 15 ou 16, ou deIgM de acordo com a reivindicação 15 ou 16,(2) submissão de uma parte do primeiro concentrado a proteólise para obtenção de fragmentos F (ab)' 2 ou Fab,(3) mistura das frações (1) e (2).

18. Processo para preparação de um concentrado de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas:(1) preparação de um concentrado de IgG de acordo com a reivindicação 15 ou 16,(2) preparação de um concentrado de IgM de acordo com a reivindicação 15 ou 16,(3) mistura das frações (1) e (2),(4) submissão de uma parte da primeira mistura a proteólise para obtenção de fragmentos F (ab)' 2 ou Fab de IgG e IgM,(5) mistura de (3) e (4).

19. Processo de acordo com a reivindicação 17 ou 18, caracterizado pelo fato de que a proteólise ocorre em pepsina a 1% em peso de proteínas a pH 4 e oC para obter fragmentos F (ab)' 2.

20. Processo de acordo com a reivindicação 17 ou 18, caracterizado pelo fato de que a proteólise para obtenção dos fragmentos Fab ocorre em papaína.

21. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 20, caracterizado pelo fato de que a precipitação é uma precipitação caprílica e no qual os resíduos de ácido caprílico no sobrenadante são eliminados por cálcio P04.

22. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 21,caracterizado pelo fato de que o precipitado é separado por filtragem após a adição de pelo menos um aditivo de filtragem.

23. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 22, caracterizado pelo fato de que o sobrenadante é tratado com um solvente/detergente.

24. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 23, caracterizado pelo fato de que as imunoglobulinas eluídas são concentradas por ultrafiltragem e passadas por filtragem de esterilização convencional, e então por filtragem através de filtros nanométricos com porosidade decrescendo de 100 para 15 nanômetros.

25. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 24, caracterizado pelo fato de que a solução de concentrado e imunoglobulinas filtradas tem um estabilizador farmaceuticamente aceitável adicionado à mesma, que então é acondicionada como uma solução estéril e opcionalmente congelada e liofilizada.