BRPI0718976A2

BRPI0718976A2 - Composto de 2-alquil-indazol, método para preparar o mesmo, intermediário, composição farmacêutica, e, uso de uma composição farmacêutica

Info

Publication number: BRPI0718976A2
Application number: BRPI0718976-1A
Authority: BR
Inventors: Maria Alessandra Alisi; Nicola Cazzolla; Guido Furlotti; Caterina Maugeri; Rosella Ombrato; Lorenzo Polenzani
Original assignee: Acraf
Priority date: 2006-11-22
Filing date: 2007-11-19
Publication date: 2014-02-04
Also published as: IL198432A; PL2099780T3; KR20090089880A; US8507528B2; IL198432A0; ES2401199T3; CA2668205A1; PT2099780E; CN101558057B; ITMI20062230A1; DK2099780T3; WO2008061688A1; US20100056573A1; AU2007323368A1; EA019217B1; JP5551443B2; CA2668205C; KR101471987B1; SI2099780T1; JP2010510265A

Description

“COMPOSTO DE 2-ALQUIL-INDAZOL, MÉTODO PARA PREPARAR O MESMO, INTERMEDIÁRIO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, USO DE UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA”

A presente invenção diz respeito a um composto de 2-alquil- indazol, um método e intermediários para preparar, uma composição farmacêutica contendo-o e o uso do segundo.

Em particular, a presente invenção diz respeito a um composto de 2-alquil-indazol tendo afinidade seletiva para o receptor de 5-HT2 ou para outros receptores de serotonina tais como os receptores de 5-HT], 5-HT4, 5- HT5, 5-HT6 e 5-HT7. Com respeito aos vários subtipos de receptor de 5-HT2, os compostos da presente invenção têm afinidade seletiva para o receptor de 5-HT2a ou para o receptor de 5-HT2b e no geral exibem afinidade preferencial para o receptor de 5-HT2A comparado com o receptor de 5-HT2c.

Ainda mais particularmente, a presente invenção diz respeito a um composto que pode ser usado no tratamento de várias patologias que envolvem o receptor de 5-HT2A, por exemplo vários distúrbios do sistema nervoso central tais como distúrbios do sono, esquizofrenia e ansiedade, desse modo como distúrbios dos músculos lisos ou do sistema gastrointestinal ou do sistema cardiovascular.

O receptor de serotonina 2A (5-HT2A) é um receptor ligado à proteína G, presente em muitas espécies e amplamente distribuído no corpo humano. O processo de transmissão do sinal que resulta da ativação do receptor não é totalmente claro. É conhecido que a ativação deste receptor, por intermédio da proteína G ligada a ele, conduz à ativação de várias enzimas tais como fosfolipase C com hidrólise conseqüente de difosfato de fosfatidilinositol e produção de trifosfato de inositol) ou fosfolipase A2 (que leva à liberação de ácido araquidônico). A resposta do receptor, além disso, leva a um fluxo de íons cálcio (Ca2+) na célula e à ativação de proteínas funcionais tais como proteína cinase C. O receptor está presente no sistema nervoso central, nas células do músculos lisos vasculares e gastrointestinais e nas plaquetas.

Agora, um composto de 2-alquil-indazolamida tendo afinidade preferencial pelo receptor de 5-HT2A foi encontrado.

Esta atividade biológica difere acentuadamente daquela de

compostos de 2-alquilindazol conhecidos descritos como pesticidas (aril ou éter-aril 2-alquilindazolamidas, WO 94/05642), como inseticidas (compostos de piridina de 2-metil-indazolamida, EP-A-O 726 266) ou como antagonistas do receptor de CRF-I (7-aril ou 7-éter-aril-2-alquil-indazolamida, US 2004/0 110 815).

Esta atividade biológica também difere daquela de compostos de 1-alquil-indazol com atividade analgésica (WO 04/101548).

Além disso, os compostos da presente invenção têm uma estrutura que é notavelmente diferente dos compostos conhecidos com 15 afinidade preferencial para o receptor de 5-HT2A e que têm fases clínicas alcançadas de desenvolvimento, por exemplo EMD-281014 (cloridreto de 7- {4-[2-(4-fluoro-fenil)-etil]-piperazino-l-carbonil}-lH-indol-3-carbonitrila) na fase I para insônia e MDL-100907 ((R)-(+)-(2,3-dimetóxi-fenil)-{l-[2-(4- fluoro-fenil)-etil]-piperidin-4-il}-metanol) na fase II para insônia.

Um primeiro aspecto da presente invenção diz respeito a um

composto de 2-alquil-indazol da fórmula geral (I):

R6

R2 (!)

onde

X é -C(0)N(R5)-ou -N(R5)C(0)-;

Y é CH ou N;

W é CH ou N; contanto que pelo menos um de Y e W seja um átomo de nitrogênio;

n é um número inteiro selecionado de 0, 1, 2 e 3;

m é um número inteiro selecionado de 0, 1, 2 e 3;

p é um número inteiro selecionado de 0, 1 e 2;

Rl é H, alquila Ci_3, alcóxi Ci_3, alquila C1.3-CO-, COOH, R’R”NCO-, R’R”NS02-, R’S02-, halogênio, R’R”N- ou R’CON(R”)-;

R2 é alquila C1-6 linear ou ramificado, alquila Ci_3-alcóxi C 1.3, aril-alquila C 1.3 em que o grupo arila pode ser substituído com 1 ou 2 substituintes selecionados de halogênio, alquila C^3 e alcóxi C]_3;

R3 e R4, que podem ser os mesmos ou diferentes, são H, hidróxi, alquila Ci_3, alcóxi Ci„3, R’R”N-, nitro, halogênio, trifluorometila ou R’CON(R”)-;

R5 é H, alquila Ci_3, alcóxi Ci_3 ou, junto com R6, forma um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina;

R6, junto com R5 ou R7, forma um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina;

R7 é H, alquila Cl-6 linear ou ramificado, aril-alquila C1.3, em que o grupo arila pode ser substituído com 1 ou 2 substituintes selecionados de halogênio, alquila C1.3, hidróxi, alcóxi Ci_3, nitro, trifluorometila e R’R”N-, ou R7, junto com R6, forma um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina;

R’ e R”, que podem ser os mesmos ou diferentes, são H ou

alquila Ci_3;

e seus sais de adição com ácidos orgânicos e inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos típicos de ácidos farmaceuticamente aceitáveis são: oxálico, maleico, metanosssulfônico, paratoluenosssulfônico, succínico, cítrico, tartárico, láctico, clorídrico, fosfórico e sulfúrico.

Preferivelmente, quando X é -C(0)N(R5)-,

Y é CH ou N;

W é CH ou N;

contanto que pelo menos um de Y e W seja um átomo de

nitrogênio;

n é um número inteiro selecionado de 1, 2 e 3;

m é um número inteiro selecionado de 0, 2 e 3;

p é um número inteiro selecionado de 1 e 2;

Rl é H, metila ou metóxi;

R2 é metila, etila, isopropila ou metoxietila;

R3 é H, 4-hidróxi, 4-metóxi, 3-cloro ou 4-fluoro;

R4 é H ou 2-fluoro;

R5 é H, metila, metóxi ou, junto com R6, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina;

R6, junto com R5 ou R7, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina;

R7 é H, etila, feniletila, 4-fluorofeniletila, 2,4-difluorofeniletila ou, junto com R6, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina.

Preferivelmente, quando X é -N(R5)C(0)-,

Y é CH;

W é N;

n é um número inteiro selecionado de 0 e 1; m é 2;

pé 2;

Rl é H, metila ou metóxi;

R2 é metila, etila, isopropila ou metoxietila;

R3 é H, 4-hidróxi, 4-metóxi, 3-cIoro ou 4-fluoro;

R4 é H ou 2-fluoro;

R5 é H, metila, ou metóxi;

R6, junto com R7, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, IO piperidina e piperazina;

R7, junto com R6, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina.

Ainda mais preferivelmente, X é -C(0)N(R5)-, Y é CH; W é 15 N; n é um número inteiro selecionado de 1 e 2; m é 2; p é um número inteiro selecionado de 1 e 2; Rl é H ou metóxi; R2 é metila ou metoxietila; R3 é H, 4-hidróxi, 4-metóxi ou 4-fluoro; R4 é H ou 2-fluoro; R5 é H ou, junto com R6, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; 20 R6, junto com R5 ou R7, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R7 é H, etila, ou, junto com R6, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina.

Um segundo aspecto da presente invenção diz respeito a um

método para preparar um composto de 2-alquil-indazol da fórmula geral (I) e seu sal de adição de ácido com ácidos orgânicos e inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis, caracterizado em que ele compreende:

1 a) a condensação de uma amina da fórmula (II) R1 0

z

(IIi)

R2

onde

Rl e R2 têm os significados estabelecidos previamente em relação ao composto da fórmula (I), e

Z é selecionado do grupo que compreende um átomo de halogênio, preferivelmente Cl ou Br, um grupo OR e OC(O)R, onde R é um grupo alquila linear ou ramificado, tendo de 1 a 6 átomos de carbono,

para fornecer um composto de 2-alquil-indazol da fórmula

geral (I); ou

lb) a reação de uma amina da fórmula geral (IV):

RS

O / RK

(IV}

onde

Rl, R2, R5, R6, R7, Y, n e p têm os significados estabelecidos

previamente em relação ao composto da fórmula (I),

com um composto da fórmula geral (V): R3, R4 e m têm os significados estabelecidos previamente em relação ao composto da fórmula (I), e

Q é um grupo de partida selecionado do grupo que compreende um átomo de halogênio, preferivelmente Cl ou Br, um grupo mesilato (MeSO3-) e um grupo tosilato (p-MePhS03-),

para fornecer um composto de 2-alquil-indazol da fórmula

geral (I); ou

lc) a condensação de uma amina da fórmula geral (VI):

onde

Rl, R2 e R5 têm os significados estabelecidos previamente em relação ao composto da fórmula (I),

com um derivado de um ácido carboxílico da fórmula geral

(VII):

R3 (VII)

onde

R3, R4, R6, R7, Y, W, n, m, e p têm os significados estabelecidos previamente em relação ao composto da fórmula (I), e

Z tem os significados estabelecidos previamente em relação ao composto da fórmula (III)

para fornecer um composto de 2-alquil-indazol da fórmula geral (I); e

2) a formação possível de um sal de adição de ácido de um composto de 2-alquil-indazol da fórmula geral (I) desse modo obtido com um ácido orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável.

5 O estágio l(a) pode ser realizado por técnicas convencionais.

Por exemplo, uma amina da fórmula (II) é reagida com um haleto de acila da fórmula (III) em que Z é, preferivelmente, um átomo de cloro, opcionalmente na presença de uma base adequada. Exemplos típicos de bases adequadas são trietilamina e diisopropiletilamina. Vantajosamente, a reação é realizada na 10 presença de um diluente adequado em uma temperatura de 0 a 140° C, durante um tempo de 0,5 a 24 horas. Preferivelmente, a temperatura de reação varia de 10 a 60° C, ao passo que o tempo de reação é de 1 a 12 horas. Tipicamente, o diluente usado é aprótico, polar ou apoiar. Exemplos de adequado diluentes apróticos apolares são hidrocarbonetos aromáticos tais 15 como tolueno e xileno. Exemplos de diluentes apróticos polares adequados são diclorometano e Ν,Ν-dimetilformamida. Preferivelmente, um diluente aprótico apoiar é usado.

O composto obtido no estágio 1 (a) também pode ser purificado por técnicas convencionais tais como cromatografia cintilante e cristalização. O estágio l(b) também pode ser realizado por técnicas

convencionais. Por exemplo, uma amina da fórmula (IV) é reagida com um composto da fórmula (V) em que Q é, preferivelmente, um átomo de bromo ou um grupo metanossulfonila, opcionalmente na presença de uma base adequada. Exemplos típicos de bases adequadas são carbonato de potássio e 25 carbonato de sódio. Preferivelmente, a reação é realizada na presença de um diluente adequado em uma temperatura da temperatura ambiente até 160° C e durante um tempo de 1 a 48 horas. Preferivelmente, a temperatura de reação varia da temperatura ambiente até 100° C, ao passo que o tempo de reação é de 6 a 24 horas. Tipicamente, o diluente usado é polar, prótico ou aprótico. Exemplos de diluentes próticos polares adequados são álcoois tais como etanol, ao passo que um exemplo de um diluente aprótico polar adequado é acetona.

O composto obtido no estágio l(b) também pode ser 5 purificado por técnicas convencionais tais como cromatografia cintilante e cristalização.

O estágio l(c) também pode ser realizado por técnicas convencionais. Por exemplo, uma amina da fórmula (VI) é reagida com um haleto de acila da fórmula (VII) em que Z é, preferivelmente, um átomo de IO cloro, opcionalmente na presença de uma base adequada. Exemplos típicos de bases adequadas são trietilamina e diisopropiletilamina. Vantajosamente, a reação é realizada na presença de um diluente adequado em uma temperatura de O a 140° C, durante um tempo de 0,5 a 24 horas. Preferivelmente, a temperatura de reação varia de 10 a 60° C, ao passo que o tempo de reação é 15 de 1 a 12 horas. Tipicamente, o diluente usado é aprótico, polar ou apoiar. Exemplos de diluentes apróticos apolares adequados são os hidrocarbonetos aromáticos tais como tolueno e xileno. Exemplos de diluentes apróticos polares adequados são diclorometano e N,N-dimetilformamida. Preferivelmente, um diluente aprótico apoiar é usado.

O composto obtido no estágio 1 (c) também pode ser purificado

por técnicas convencionais tais como cromatografia cintilante e cristalização.

A formação de um sal de adição de ácido de um composto de 2-alquil-indazol da fórmula geral (I) com um ácido orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável também pode ser realizada por técnicas 25 convencionais. Por exemplo, ela pode ser realizada dissolvendo-se o composto da fórmula (I) em um diluente adequado e tratando a solução obtida desse modo com uma solução orgânica ou aquosa do ácido de interesse. Exemplos típicos de diluentes adequados são etanol, isopropanol, acetato de etila e éter dietílico. O sal que se forma depois pode ser separado por técnicas convencionais e, se aplicável, purificado por cristalização.

Alguns intermediários das fórmulas (II), (IV), e (VI) são novos, e eles portanto constituem um outro aspecto da presente invenção.

Em particular, os seguintes são novos:

(a) os compostos da fórmula (II):

R5 R6

HNxY>^

em que

R3 e R4, que podem ser os mesmos ou diferentes, são H, hidróxi, alquila Cw, alcóxi C1.3, R’R”N-, nitro, halogênio, trifluorometila ou R’CON(R”)-, contanto, entretanto, que R3 e R4 não sejam ambos um átomo de H,

R5 é alquila C1.3,

R6 e R7, juntos, formam um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina,

Y é CH,

W é N,

n é um número inteiro selecionado de 1, 2 e 3,

p é um número inteiro selecionado de 0 e 1,

m é 2.

R’ e R”, que podem ser os mesmos ou diferentes, são H ou

alquila Ci_3;

(b) os compostos da fórmula (IV): O.

V-N { R7

T I

(IV) em que

Rl, R2, R5, R6, R7, Y, n, e p têm os significados estabelecidos

previamente em relação ao composto da fórmula (I);

(c) os compostos da fórmula (VI):

R1

R5

NH

(Vl)

R2

5

em que

tanto Rl quanto R2 têm os significados estabelecidos previamente em relação ao composto da fórmula (I), e R5 é H, alquila Ci_3 ou alcóxi C1-3.

A amina (II) pode ser preparada por métodos convencionais, por exemplo como descrito no pedido de patente do requerente WO 04/101548.

Quando R5 é diferente de H, amina (II) é vantajosamente preparada (Esquema 1) por amidação de uma amina (XI) para fornecer um composto (XII) e depois redução exaustiva do composto (XII) para fornecer a amina (II).

O

(XiI)

sao novos. Em particular, os intermediários seguintes coletivamente representados pela fórmula geral (XX) seguinte são novos e desse modo constituem um outro objetivo da presente invenção:

alquila Ci_3,

R3 e R4, que podem ser os mesmos ou diferentes, são H, hidróxi, alquila Ci_3, alcóxi Ci_3, R’R”N-, nitro, halogênio, trifluorometila ou R’CON(R”)-, onde R’ e R”, que podem ser os mesmos ou diferentes, são H ou alquila Cj.3; contanto, entretanto, que R3 e R4 não sejam ambos um átomo

selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina,

métodos convencionais. Por exemplo alquilando-se um éster de um ácido indazol-3-carboxílico (VIII) com um haleto de alquila (IX) de acordo com Chem. Pharm. Buli. (1995) 43(11), 1912-1930, depois separando o composto

2-alquilado (X) da mistura de reação por cromatografia, depois submetendo o composto 2-alquilado (X) à hidrólise básica e, finalmente, convertendo o

5

de H,

R6 e R7, juntos, formam um anel saturado de 5 ou 6 membros

15

Y é CH,

W é N,

n é um número inteiro selecionado de 1, 2 e 3, p é um número inteiro selecionado de 0, 1 e 2, e m é 2.

O ácido indazolcarboxílico (III) pode ser preparado por

20 composto desse modo obtido ao composto carboxílico desejado (III) como mostrado no Esquema 2 seguinte: o.

CH,

* Rl

N—R2

(X)

V

(Esquema 2)

O Composto (IV) pode ser preparado, por exemplo, a partir de uma amina (XIII), em que o grupo amina primária é protegido por um grupo 5 de proteção P (Esquema 3) como descrito por exemplo por Green T.W. e Wuts P.G.M., “Protective groups in organic synthesis.” John Wiley & Sons Publ. (1991). Depois, o composto (XIV) desse modo obtido é reagido com o composto (III). Em seguida, a amida que se formou (XV) é desprotegida, de acordo com as técnicas descritas por Green T.W. e Wuts P.G.M., “Protective 10 groups in organic synthesis.” John Wiley & Sons Publ. (1991), formando a amina primária (XVI) que é acilada para fornecer amida (XVII) depois reduzida, como no procedimento descrito no Esquema 1, para fornecer o composto (IV) R5 RS

hnXyXnh*

(XlH)

R5 R6

I I hnWyN^p

(XlV)

m Re N- MP

X χ

10

RS R6

nX^X1N2

(Esquema 3)

A maioria dos intermediários da fórmula geral (XV), (XVI) e (XVII) são novos.

Em particular, os seguintes intermediários representados coletivamente pela fórmula geral (XXX) seguinte são novos, e desse modo constituem um outro objetivo da presente invenção:

R1' O

W

“Λ

R2

(XXX)

onde

Rl e R2 têm os significados estabelecidos previamente em relação ao composto da fórmula (I),

T2 é H, um grupo de proteção (P) selecionado do grupo que compreende metilcarbamato de 9-fluorenila, terc-butilcarbamato, alilcarbamato, n-benzil e n-benzilideno, ou um grupo R-CO em que R é alquila C 1.3, R5 e R6, juntos, formam um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina,

Y é CH,

n é um número inteiro selecionado de 1, 2 e 3,

pé um número inteiro selecionado de 0, 1 e 2, e

m é 2.

Entretanto, com respeito ao procedimento (lc), a amina (VI) pode ser preparada de acordo com métodos convencionais, por exemplo aqueles descritos por Fusco R., “The chemistry of heterocyclic compounds, 10 Pirazols, Pirazolines, Indazoles and condensed rings.” (1967) Publ. Wiley N.Y., ou por Katritsky A. e Rees C.W., “Comprehensive heterocyclic chemistry.” Vol. 5 (1984) Publ. Pergamon Press.

O Composto (VII) também pode ser preparado por métodos convencionais, por exemplo aqueles descritos no pedido de patente WO 04/101548.

Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a uma composição farmacêutica que compreende uma dose eficaz de pelo menos um composto de 2-alquil-indazol da fórmula (I) ou de seu sal com um ácido orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

Preferivelmente, a composição farmacêutica da presente invenção é preparada na forma de dosagem adequada que compreende uma dose eficaz de pelo menos um composto de 2-alquil-indazol da fórmula (I) ou de um sal do mesmo com um ácido orgânico ou inorgânico 25 farmaceuticamente aceitável e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

Exemplos típicos de estados patológicos que poderiam beneficiar-se do tratamento com a composição farmacêutica de acordo com a presente invenção são vários distúrbios do sistema nervoso central, tais como distúrbios do sono, esquizofrenia e ansiedade, desse modo como distúrbios de músculos lisos tanto do sistema gastrointestinal quanto do sistema cardiovascular.

Portanto, um outro aspecto da presente invenção diz respeito ao uso da composição farmacêutica anteriormente mencionada para tratar um estado patológico selecionado do grupo que compreende distúrbios do sono, esquizofrenia, ansiedade, distúrbios dos músculos lisos tanto do sistema gastrointestinal quanto do sistema cardiovascular.

Exemplos de forma de dosagem adequada são tabletes, cápsulas, tabletes revestidos, grânulos, soluções e xaropes para a administração oral; emplastros medicinais para a administração transdérmica; supositórios para a administração retal e soluções estéreis injetáveis.

Outra forma de dosagem adequada são aquelas com liberação prolongada e aquelas com base em lipossomos para a administração oral, injetável ou transdérmica.

A forma de dosagem também pode conter outros ingredientes tradicionais tais como: conservantes, estabilizadores, tensoativos, tampões, sais para regular a pressão osmótica, emulsificadores, adoçantes, corantes, flavorizantes e semelhantes.

Se requerida por requerimentos terapêuticos especiais, a

composição farmacêutica da presente invenção pode conter outros ingredientes farmacologicamente ativos, cuja administração simultânea deveria ser benéfica.

A quantidade de composto de 2-alquil-indazol da fórmula (I) 25 ou de seu sal farmaceuticamente aceitável de adição de ácido na composição farmacêutica da presente invenção pode variar em uma faixa ampla dependendo de fatores conhecidos, por exemplo do tipo de patologia, da severidade da doença, do peso corporal do paciente, da forma de dosagem, da via escolhida de administração, do número de administrações por dia e da eficácia do composto de 2-alquil-indazol selecionado da fórmula (I). Entretanto, a quantidade ideal pode ser determinada por uma pessoa habilitada na técnica fácil e habitualmente.

Tipicamente, a quantidade de composto de 2-alquil-indazol da 5 fórmula (I) ou de seu sal farmaceuticamente aceitável de adição de ácido na composição farmacêutica da presente invenção será tal como para garantir um nível de administração de 0,0001 a 100 mg/kg/dia. Preferivelmente, o nível de administração é de 0,001 a 50 mg/kg/dia, ainda mais preferivelmente de 0,01 a 10 mg/kg/dia.

A forma de dosagem da composição farmacêutica da presente

invenção pode ser preparada por técnicas que são familiares a um químico farmacêutico, e compreende mistura, granulação, compressão, dissolução, esterilização e semelhantes.

As propriedades farmacológicas dos compostos da fórmula (I) de acordo com a presente invenção foram avaliadas pelos métodos descritos mais tarde, nas seções Testes A, B e C.

Brevemente, a afinidade para o receptor de 5-HT2A de rato foi demonstrada pela metodologia padrão em: Leysen J.E., Niemegeers C.J., Van Nueten J.M., Laduron P.M. (1982) “[3H]-Ketanserin, a selective 3H-ligand for serotonin2 receptor binding sites. Binding properties, brain distribution, and functional role.” Molecular Pharmacology 21: 301-314. (Teste A).

Os valores da afinidade de alguns compostos da fórmula (I) de acordo com a presente invenção para o receptor de 5-HT2A são mostrados na Tabela 1, em que a afinidade é maior para um valor mais alto de pKi.

25 Tabela I

Composto (N2) 5-HT2a (pKi) 8 7,80 1 7,49 3 7,32 4 7,32 7 7,04 10 6,58 9 6,20 2 6,09 5 5,80 A afinidade seletiva dos compostos da fórmula (!) de acordo

com a presente invenção para outros receptores ou sistemas para transportar e incorporar serotonina também foi determinada usando metodologia padrão (Teste B).

Estes testes mediram a porcentagem de inibição induzida pelos compostos da fórmula (I) de acordo com a presente invenção em uma concentração de 1 μΜ para os receptores: 5-HT]A, 5-HTiB, 5-HT1D, 5-HT2b, 5- HT3, 5-HT4, 5-HT4(b), 5-HT5(A), 5-HT6 e 5-HT7. Além disso, a porcentagem 10 de inibição induzida pelos compostos da fórmula (I) de acordo com a presente invenção em 1 μΜ no sistema de transporte de serotonina e em 10 μΜ no sistema celular para incorporar a serotonina foi medida.

Em todos os casos, os compostos da fórmula (I) de acordo com a presente invenção induziram uma porcentagem de inibição, na concentração usada, de menos do que 50 %.

A afinidade preferencial dos compostos da fórmula (I) de acordo com a presente invenção para o receptor de 5-HT2A comparada com o receptor de 5-HT2c também foi determinada usando metodologia padrão (Teste B). Estes testes mediram a porcentagem de inibição induzida pelos 20 compostos da fórmula (I) de acordo com a presente invenção em seis concentrações diferentes, a partir das quais os valores de pKi dos compostos em relação aos receptores individuais foram obtidos.

Os valores de afinidade de alguns compostos da fórmula (I) de acordo com a presente invenção para os receptores de 5-HT2A e 5-HT2c de células recombinantes humanas são mostrados na Tabela 2, em que a afinidade é maior para um valor mais alto de pKi.

Tabela 2

Composto (N°) (h)5-HT2a (pKi) (h) 5-HT2c (pKi) 8 8,79 7,27 1 8,58 7,05 3 8,68 6,83 Além disso, os compostos da fórmula (I) de acordo com a

presente invenção foram avaliados in vivo no modelo de “espasmo de cabeça” no camundongo (Teste C). Este é um teste padrão para detectar quaisquer interações com o sistema serotoninérgico como descrito em Sztanke K., Fidecka S., Kedzierska E., Karczmarzyk Z., Pihlaja K., Matosiuk D. (2005) 10 “Antionociceptive activity of new imidazol carbonil derivatives. Part 4. Synthesis and pharmacological activity of 8-aryl-3,4-dioxo-2H,8 H-6,7- dihydrimidazo[2,lc][l,2,4]triazine.” Eur. J. Med. Chem. 40: 127-134, e em Come S.J., Pickering R.W., Warner B.T. (1963) “A method for assessing the effects of drugs on the central actions of 5-hydroxitryptamine.” Br. J. 15 Pharmacol. Chemother. 20: 106-120.

Neste teste, os compostos sob investigação induziram uma diminuição no número de “espasmos de cabeça” em relação a animais tratados com metilcelulose (MTC) sozinha, demonstrando desse modo a capacidade para antagonizar os efeitos serotoninérgicos induzidos pela 20 administração de 5-hidroxitriptofano (5-HTP). Os valores de inibição obtidos no teste de “espasmo de cabeça” com os compostos de teste são mostrados na

Fig- Ι- Α descrição que segue é intencionada para ilustração adicional da presente invenção, ainda que sem limitá-la.

Exemplo 1

Cloridreto de 2-metil-N-{[l-(2-feniletil)piperidin-4-il]metil}- 2H-indazol-3-carboxamida hidratado (Composto N0 1) (Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = R4 =

R5 = Η,

η = I, ρ = 2, m = 2, Y = CH, W = Ν, R6 + R7 = -CH2-CH2-) la) Ester metiIico do ácido 2-metil-2H-indazol-3-carboxílico (Composto X: Rl = H, R2 = CH3)

Carbonato de potássio (207,1 g; 1,498 mol) e, às gotas, iodeto de metila (31 ml; 0,50 mol) foram adicionados a uma suspensão de éster metílico de ácido 1 H(2H)-indazol-3-carboxílico (74,0 g; 0,499 mol) em acetona (750 ml). A mistura de reação foi aquecida sob refluxo durante 4 h, 10 esfriada e filtrada. O solvente foi removido por evaporação em pressão reduzida e o resíduo foi absorvido duas vezes em acetato de etila.

Aproximadamente 80 g de composto bruto foi desse modo obtido. O sólido foi cristalizado duas vezes a partir de n-hexano/acetato de etila, obtendo o éster metílico do ácido 2-metil-2H-indazol-3-carboxílico (50,0 g).

1H RMN (δ, DMSO d6): 3,93 (s, 3 H); 4,17 (s, 3 H); 7,3 -7,4 (m, 1 H); 7,5 7,6 (m, 1 H); 7,7 -7,8 (m, 1 H); 8,0 -8,1 (m, 1 H).

lb) Cloreto do ácido 2-metil-2H-indazol-3-carboxílico (Composto III; Rl = H, R2 = CH3, Z = Cl)

Hidrólise do éster metílico do ácido 2-metil-2H-indazol-3-

carboxílico (Ia) (50,0 g; 0,260 mol) foi realizada em água (300 ml) contendo hidróxido de sódio (20,9 g; 0,520 mol). A mistura de reação foi fervida sob refluxo durante 2 h, esfriada até a temperatura ambiente e acidificada com HCl 2 N até que a precipitação de um sólido branco cessou. Depois da filtração e secagem em estufa sob vácuo, 45,2 g de ácido 2-metil-2H-indazol-

3-carboxílico foi obtido, e este foi usado sem purificação adicional nas reações subsequentes.

Cloreto de tionila (39 ml; 0,54 mol) foi adicionado a uma suspensão de ácido 2-metil-2H-indazol-3-carboxílico (45,2 g; 0,270 mol) em tolueno (350 ml) e a mistura de reação foi aquecida sob refluxo durante 24 h. O solvente foi removido por evaporação em pressão reduzida. O resíduo foi absorvido duas vezes em tolueno. 47,0 g de cloreto do ácido 2-metil-2H- indazol-3-carboxílico foi desse modo obtido.

1H RMN (δ, DMSO d6): 3,97 (s, 3 H); 7,3 -7,4 (m, 1 H); 7,5 -

7,6 (m, 1 H); 7,7 -7,8 (m, 1 H); 8,0 -8,1 (m, 1 H).

I c) 1 - [ 1 -(2-F eniletil)-4-piperidinil]metanamina

(Composto XI: R3 = R4 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, n = 1, p =

2, m = 2)

Benzaldeído (28,0 g; 0,264 mol) foi adicionado, às gotas, a

uma solução de 4-aminometilpiperidina (30,2 g; 0,264 mol) em tolueno (100 ml). A solução obtida desse modo foi mantida sob agitação na temperatura ambiente. Depois de 3 h, o solvente foi removido por evaporação em pressão reduzida e o resíduo foi absorvido duas vezes em tolueno. 53,4 g de N- 15 hexaidro-4-piridinilmetil-N-fenilmetilidenamina desse modo foi obtido, e foi usado em reação subsequente sem purificação adicional.

N-Hexaidro-4-piridinilmetil-N-fenilmetilidenamina (53,4 g; 0,264 mol) foi dissolvido em etanol absoluto (500 ml) contendo carbonato de potássio anidro (73,0 g; 0,528 mol) e brometo de fenetila (39,5 ml; 0,290 mol). A mistura de reação desse modo obtida foi fervida sob refluxo durante

24 h. Depois de esfriar até a temperatura ambiente, a suspensão foi filtrada e o solvente foi evaporado em pressão reduzida. O resíduo desse modo obtido foi colocado em suspensão em HCl 3 N (200 ml) e agitada na temperatura ambiente durante 2 h. A fase ácida aquosa foi lavada 4 vezes com acetato de 25 etila e depois alcalinizada ao pH de aproximadamente 13 com NaOH 6 N e extraída com diclorometano. A fase orgânica desse modo obtida foi seca em Na2SO4 anidro e o solvente foi removido por evaporação em pressão reduzida.

50,0 g de l-[l-(2-feniletil)-4-piperidinil]metanamina desse modo foi obtido.

1H RMN (δ, CDCl3): 1,3 -1,4 (m, 5 H); 1,7 -1,8 (m, 2 H); 1,9 - 2,1 (m, 2 H); 2,5 -2,6 (m, 4 H); 2,7 -2,9 (m, 2 H); 2,9 -3,1 (m, 2 H); 7,1 -7,3 (m, 5 H).

ld) Cloridreto de 2-metil-N-{[l-(2-feniletil)piperidin-4-

il]metil} -2H-indazol-3-carboxamida hidratado

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = R4 = R5 = Η, n = 1, p = 2, m = 2, Y = CH5 W = N, R6 + R7 = -CH2-CH2-)

l-[l-(2-Feniletil)-4-piperidinil]metanamina (Ic) (20,3 g; 10 0,0930 mol) foi adicionado a uma solução de cloreto do ácido 2-metil-2H- indazol-3-carboxílico (Ib) (18,0 g; 0,0930 mol) em tolueno (100 ml). A mistura de reação foi mantida sob agitação na temperatura ambiente durante a noite e depois filtrada. O sólido foi absorvido em NaOH INe extraída com diclorometano (DCM). As fases orgânicas foram combinadas e depois secas 15 em Na2SO4 anidro, e o solvente foi removido por evaporação em pressão reduzida.

O composto bruto desse modo obtido foi convertido ao cloridreto correspondente por dissolução em acetato de etila, o tratamento com um excesso de etanol clorídrico 5 N na temperatura ambiente durante 3 h, a remoção do solvente por evaporação em pressão reduzida e cristalização do sólido obtido a partir de acetato de etila/etanol absoluto.

7,2 g de cloridreto de 2-metil-N-{[l-(2-feniletil)piperidin-4- il]metil}-2H-indazol-3-carboxamida hidratado foi obtido, p. f. = 130 a 140° C

Análise elementar para C23H31CIN402

C H N Cl Encontrado em % 64,16 7,37 12,89 8,46 Calculado em % 64,10 7,25 13,00 8,59 1H RMN (δ, DMSO d6): 1,59 -2,10 (m, 5 H); 2,80 -3,40 (m, 10 H); 3,59 (d, J = 12 Hz, 2 H); 4,31 (s, 3 H); 7,15 -7,40 (m, 7 H); 7,69 (d, J = 9 Hz, I H); 7,84 (d, J = 9 Hz, I H); 8,63 (t, J = 6 Hz, 1 H); 10,50-10-70 (s amplo, 1 H).

Exemplo 2

Cloridreto de N,2-dimetil-N-{[l-(2-feniletil)piperidin-4- il]metil}-2H-indazol-3-carboxamida hemi-hidratado (Composto N° 2)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = R4 = H, R5 = CH3, n = 1, p = 2, m = 2, Y = CH, W = N, R6 + R7 = -CH2-CH2-)

2a) Cloridreto de N,2-dimetil-N-{[l-(2-feniletil)piperidin-4- iljmetil} -2H-indazol-3 -carboxamida hemi-hidratado Depois de agitar durante 1 h na temperatura ambiente, iodeto

de metila (0,83 ml; 0,013 mol) foi adicionado a uma suspensão de 2-metil-N- {[l-(2-feniletil)piperidin-4-il]metil}-2H-indazol-3-carboxamida (Id) (5,0 g; 0,013 mol) e 60 % de hidreto de sódio (0,51 g; 0,013 mol) em tetra- hidrofurano (THF) (50 ml). A mistura desse modo obtida foi agitada na 15 temperatura ambiente durante 48 h. Depois água destilada foi adicionada para remover qualquer hidreto em excesso. A fase orgânica foi separada e concentrada por evaporação em pressão reduzida.

O resíduo obtido foi purificado usando cromatografia cintilante (eluentes CHCl3/CH3OH/NH3 em proporções de 85/14/1) e convertido a cloridreto por dissolução em acetato de etila, tratamento com um excesso de etanol clorídrico 5 N na temperatura ambiente durante 3 h e remoção do solvente por evaporação em pressão reduzida.

O composto desse modo obtido foi cristalizado a partir de acetato de etila/etanol absoluto. 5,2 g de cloridreto de N,2-dimetil-N-{[l-(2-

feniletil)piperidin-4-il]metil}-2H-indazol-3-carboxamida hemi-hidratado desse modo foi obtido.

p. f. = 206 a 207° C

Análise elementar para C24H33CIN402

1H RMN (δ, DMSO d6 + D2O): 1,50 -2,30 (m, 5 H); 2,80 -3,80 (m, 14 H); 3,01 (s, 3 H); 4,15 (s, 3 H); 7,10 -7,40 (m, 7 H); 7,61 (t, J = 8 Hz, 1 H); 7,69 (d, J = 9 Hz, 1 Η).

Exemplo 3

Cloridreto de N3-({l-[2-(4-hidroxifeni)etil]hexaidro-4- piridinil}metil-2-metil-2H-3-indazolcarboxamida hidratado (Composto Ns 3)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4- OH, R4 = H, R5 -Η, η -1, ρ -2, m -2, Y -CH, W = Ν, R6 + R7 = -CH2-CH2-) 3a) l-(2-(4-Hidroxifenil)etil)-4-piperidinil metanamina (Composto XI: R3 = 4-OH, R4 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, η = 1, ρ = 2, m = 2)

A preparação foi similar àquela descrita para a preparação (Ic) partindo de N-hexaidro-4-piridinilmetil-N-fenil-metilidenamina (7,5 g, 0,037 mol) e brometo de 2-(4-hidroxifenil)etila (7,5 g; 0,037 mol) [preparado como descrito em Acta Chemica Scandinava (1967), 21 (1), 5362], 9,3 g de l-(2-(4- hidroxifenil)etil)-4-piperidinilmetanamina desse modo foi obtido.

1H RMN (δ, CDCl3 +D2O): 1,15 -1,41 (m, 3 H); 1,74 (d, J = 9 Hz, 2 H); 1,9 -2,1 (m, 2 H); 2,4 -2,6 (m, 4 H); 2,65 -2,75 (m, 2 H); 3,01 (d, J = 12 Hz, 2 H); 6,75 (d, J = 9 Hz, 2 H); 7,00 (d, J = 9 Hz, 2 H).

3b) Cloridreto de N3-({l-[2-(4-hidroxifenil)etil]hexaidro-4- piridinil}metil-2-metil-2H-3-indazolcarboxamida hidratado

l-(2-(4-Hidroxifenil)etil)-4-piperidinilmetanamina (3a) (5,6 g; 0,024 mol) foi adicionado em porções pequenas a uma solução de cloreto do ácido 2-metil-2H-indazol-3-carboxílico (Ib) (4,7 g; 0,024 mol) em tolueno (100 ml).

A mistura desse modo obtida foi agitada durante 18 h na

temperatura ambiente. Depois ela foi filtrada. O resíduo foi purificado várias vezes por cristalização a partir de acetato de etila/etanol absoluto e convertido a cloridreto por dissolução em acetato de etila, tratamento com um excesso de etanol clorídrico 5 N na temperatura ambiente durante 3 h, e remoção do solvente por evaporação em pressão reduzida.

Depois da cristalização a partir de acetato de etila/etanol absoluto, 5,0 g de cloridreto de N3-({l-[2-(4-hidroxifenil)etil]hexaidro-4- piridinil}metil)-2-metil-2H-3-indazolcarboxamida hidratado foi obtido, p. f. = 236 a 238°C

Análise elementar para C23H29CIN402 3/4 de H2O

C H N Cl Encontrado em % 62,43 6,96 12,58 8,06 Calculado em % 62,43 6,95 12,66 8,09

1H RMN (δ, DMSO d6): 1,5 -2,1 (m, 5 H); 2,8 -3,4 (m, 9 H);

3,57 (d, J = 11 Hz, 2 H); 4,30 (s, 3 H); 6,73 (d, J = 9 Hz, 2 H); 7,06 (d, J = 9 Hz, 2 H); 7,2 -7,3 (m, 1 H); 7,3 -7,4 (m, 1 H); 7,68 (d, J = 9 Hz, 1 H); 7,84 (d, J = 9 Hz, 1 H); 8,65 (t, J = 6 Hz, 1 H); 9,2 -9,5 (s amplo, 1 H); 10,4 -10,7 (s amplo, 1 H).

Exemplo 4

N-({l-[2-(4-Hidroxifenil)etil]piperidin-4-il}metil)-5-metóxi-2- metil-2H-indazol-3-carboxamida (Composto N- 4)

(Composto I; Rl = 5-CH30, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-OH, R4 = H, R5 = Η, η = 1, ρ = 2, m = 2, Y = CH, W = Ν, R6 + R7 = -

CH2-CH2-)

4a) Éster metílico do ácido 5-metóxi-2-metil-2H-indazol-3- carboxílico (Composto X: Rl = 5-CH30, R2 = CH3)

Uma mistura de ácido 5-metóxi-indazol-3-carboxílico [preparado de acordo com Gazzetta Chimica Italiana (1963) 93, 3-14] (11,8 g;

0,0610 mol), metanol (200 ml) e ácido sulfurico (2 ml) foi agitada na temperatura ambiente durante 4 h. A mistura depois foi diluída com água destilada. O sólido formado foi separado por filtração, seco em um estufa (9,6 g) e usado sem purificação adicional para a reação subsequente.

Hidróxido de potássio (3,6 g; 0,064 mol) foi adicionado, em porções pequenas, a uma suspensão contendo éster metiIico do ácido 5- metóxi-indazol-3-carboxílico (9,6 g; 0,047 mol) e iodeto de metila (3,4 ml; 0,054 mol) em dimetoxietano (DME) (50 ml). A mistura de reação foi aquecida sob refluxo durante 18 h e depois esfriada. O solvente foi removido por evaporação em pressão reduzida. O sólido foi absorvido em tolueno e lavado várias vezes com água e NaOH 6 Ν. O solvente depois foi evaporado em pressão reduzida, e o resíduo obtido foi purificado por cromatografia cintilante (n-hexano/acetato de etila = 7/3). 5,0 g de éster metílico do ácido 5- metóxi-2-metil-2H-indazol-3-carboxílico desse modo foram obtidos. 1H RMN (δ, CDCl3): 3,90 (s, 3 H); 4,03 (s, 3 H); 4,47 (s, 3 H);

7,0 -7,1 (dd, Jl = 9,3 Hz, J2 = 2,3 Hz, 1 H); 7,2 -7,3 (d, J = 2,3 Hz, 1 H); 7,6 - 7,7 (dd, Jl = 9,3 Hz, J2 = 0,7 Hz, 1 H).

4b) Cloreto do ácido 5-metóxi-2-metil-2H-indazol-3-

carboxílico

(Composto III: Rl = 5-CH30, R2 = CH3; Z = Cl)

Hidróxido de sódio (1,0 g; 0,025 mol) foi adicionado a uma suspensão de éster metílico do ácido 5-metóxi-2-metil-2H-indazol-3- carboxílico (preparada como descrito no Exemplo 4a anterior) (2,8 g; 0,013 mol) em água destilada (40 ml). A mistura desse modo obtida foi deixada reagir sob refluxo durante 4 h, esfriada e acidificada com HCl 2 N até que a precipitação de ácido 5-metóxi-2-metil-2H-indazol-3-carboxílico foi concluída, e depois da filtração este foi usado sem purificação adicional nas reações subsequentes.

Cloreto de tionila (0,8 ml; 0,01 mol) foi adicionado a um frasco contendo ácido 5-metóxi-2-metil-2H-indazol-3-carboxílico (1,1 g; 0,0050 mol) e tolueno (30 ml). A mistura de reação foi reagida sob refluxo durante 5 h e, depois de evaporar o solvente em pressão reduzida, o resíduo foi absorvido várias vezes em tolueno. 1,2 g de cloreto do ácido 5-metóxi-2- metil-2H-indazol-3-carboxílico desse modo foi obtido. 1H RMN (δ, CDCl3): 3,90 (s, 3 H); 4,47 (s, 3 H); 7,0 -7,1 (dd, Jl = 9,3 Hz, J2 = 2,3 Hz, 1 H); 7,2 -7,3 (d, J = 2,3 Hz, 1 H); 7,6 -7,7 (dd, Jl = 9,3 Hz, J2 = 0,7 Hz, 1 H).

4c) N-({-l [2-(4-Hidroxifenil)etil]piperidin-4-il)metil-5-

metóxi-2-metil-2H-indazol-3-carboxamida

l-(2-(4-Hidroxifenil)etil)-4-piperidinil metanamina (3 a) (1,25 g; 0,0050 mol) foi adicionado em porções pequenas a uma suspensão de cloreto do ácido 5-metóxi-2-metil-2H-indazol-3-carboxílico (4b) (1,2 g; 0,0050 mol) em tolueno (30 ml). A mistura desse modo obtida foi deixada reagir durante 4 h na temperatura ambiente e até o refluxo durante um adicional de 4 h. Depois a suspensão foi esfriada e filtrada. O sólido foi purificado por cristalização a partir de n-hexano/acetato de etila.

1,5 g de N-({l-[2-(4-hidroxifenil)etil]piperidin-4-il}metil)-5- metóxi-2-metil-2H-indazol-3-carboxamida desse modo foi obtido, p. f. = 218 a 219° C (decomp.)

1H RMN (δ, DMSO d6 +D2O): 1,2-1,3 (m, 2 H); 1,5-1,8 (m, 1 H); 1,73 (d, J = 12 Hz, 2 H); 1,93 (t, J = 12 Hz, 2 H); 2,3 -2,7 (m, 4 H); 2,93 (d, J = 11 Hz, 2 H); 3,26 (d, J = 6 Hz, 2 H); 3,82 (s, 3 H); 4,24 (s, 3 H); 6,66 (d, J = 9 Hz, 2 H); 6,9 -7,1 (m, 4 H); 7,59 (d, J = 9 Hz, 1 H); 8,40 (t, J = 6 Hz, 1 H).

MS mostra pico básico de 423 (MH+).

Exemplo 5

Cloridreto de N-({ l-[2-(4-metoxifenil)etil]piperidin-4- il}metil)-2-metil-2H-indazol-3-carboxamida (Composto N- 5) (Composto Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-

CH3O-, R4 = H, R5 = Η, η = 1, ρ = 2, m = 2, Y = CH, W = Ν, R6 + R7 = - CH2-CH2-)

5a) 1 -[2-(4-Metoxifenil)etil]-4-piperidinilmetanamina

(Composto XI: R3 = 4-CH30, R4 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, η = 1, ρ = 2, m = 2)

O composto foi obtido em uma maneira similar àquela descrita para a preparação de lc) partindo de N-hexaidro-4-piridinilmetil-N- fenilmetilidenamina (12,9 g; 0,0631 mol) e brometo de 2-(4-metoxifenil) etila (15,0 g; 0,0698 mol) [preparado como descrito em Acta Chemica Scandinava (1967), 21 (1), 53-62],

5,0 g de l-[2-(4-metoxifenil)etil]-4-piperidinilmetanamina foi

obtido.

1H RMN (δ, CDCl3): 1,1 -1,4 (m, 3 H); 1,6 -1,9 (m, 4 H); 1,9 - 2,1 (m, 2 H); 2,4 -2,6 (m, 4 H); 2,7 -2,8 (m, 2 H); 2,9 -3,1 (m, 2 H); 3,77 (s, 3 H); 6,7 -6,9 (m, 2 H); 7,0 -7,2 (m, 2 H).

5b) Cloridreto de N-({l-[2-(4-metoxifenil)etil]piperidin-4- il}metil)-2-metil-2H-indazol-3-carboxamida

l-[2-(4-Metoxifenil)etil]-4-piperidinilmetanamina (5a) (6,8 g; 0,027 mol) foi adicionado em porções pequenas a uma suspensão de cloreto do ácido 2-metil-2H-indazol-3-carboxílico (Ib) (5,3 g; 0,027 mol) em tolueno (200 ml). A mistura desse modo obtida foi agitada durante 48 h na temperatura ambiente e depois foi filtrada. O sólido composto foi colocado em suspensão em NaOH INe extraído 3 vezes com diclorometano. O solvente foi removido por evaporação em pressão reduzida e o resíduo foi cristalizado primeiro a partir de éter isopropílico/isopropanólico e depois a partir de acetato de etila/etanol absoluto. O composto depois foi convertido a seu cloridreto por dissolução em etanol seguido por tratamento com etanol clorídrico 5 N durante 3 h na temperatura ambiente e depois da remoção do solvente por evaporação em pressão reduzida.

Depois da cristalização a partir de acetato de etila/etanol absoluto, 5,0 g de N-({ l-[2-(4-metoxifenil)etil]piperidin-4-il}metil)-2-metil- 2H-indazol-3-carboxamida foi obtido.

p. f. = 80° C (decomp.) 1H RMN (δ, DMSO d6): 1,5 -2,1 (m, 5 H); 2,8 -3,5 (m, 8 H); 3,58 (d, J = 12 Hz, 2 H); 3,73 (s, 3 H); 4,30 (s, 3 H); 6,90 (d, J = 9 Hz, 2 H); 7,1 -7,4 (m, 4 H); 7,69 (d, J = 9 Hz, 1 H); 7,84 (d, J = 9 Hz, 1 H); 8,67 (t, J = 6 Hz, 1 H); 10,7-11,0 (s amplo, 1 H).

MS mostra pico básico de 407 (MH+).

Exemplo 6

Cloreto de N3-2-Dimetil-N3-[(l-{2-{4-(metilóxi)fenil]etil} piperidin-4-il)metil]-2H-indazol-3-carboxamida hidratado (Composto N- 6)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-

CH3O-, R4 =

H, R5 = CH3, η = 1, ρ = 2, m = 2, Y = CH, W = Ν, R6 + R7 =

-CH2-CH2-)

6a) ({l-[2-(4-Metoxifenil)etil]-4-piperidinil}metil) formamida (Composto XII: R3 = 4-CH30, R4 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, η = 1, ρ = 2, m = 2, R = H)

Ácido fórmico (0,60 ml; 0,016 mol) foi adicionado às gotas, em uma atmosfera de nitrogênio, em uma temperatura de 0o C, a um frasco contendo anidrido acético (1,25 ml; 0,0112 mol). A mistura desse modo obtida foi aquecida sob refluxo durante 2 h e, depois de esfriar até a temperatura ambiente, uma solução de l-[2-(4-metoxifenil)etil]-4- piperidinilmetanamina (5a) (1,24 g; 502 mmol) em THF (10 ml) foi adicionada.

A mistura foi reagida durante 18 h. A suspensão depois foi concentrada por evaporação em pressão reduzida. 1,0 g de ({l-[2-(4- metoxifenil)etil]-4-piperidinil}metil) formamida desse modo foi obtido. GC/MS (m/z: pico básico de 155; 121; 110). 6b) 1 {l-[2-(4-Metoxifenil)etil]-4-piperidinil}-N-

metilmetanamina (Composto II: R3 = 4-CH30, R4 = H, R5 = CH3, R6 + R7 = -CH2-CH2-, η = 1, ρ = 2, m = 2)

Uma solução de complexo de borano-dimetilsulfeto 2 N em n- hexano (6 ml) foi adicionada às gotas a uma suspensão de ({l-[2-(4- metoxifenil)etil]-4-piperidinil}metil) formamida (1,0 g; 0,0041 mol) (6a) em 20 ml de THF a 0o C. A mistura foi aquecida sob refluxo durante 5 h e depois foi esfriada até 0o C. Nesta temperatura, 2 ml de metanol depois foram adicionados e a mistura de reação foi agitada vigorosamente durante 1 h.

Depois, HCl gasoso foi borbulhado na mistura de reação até que acidez fosse concluída. Depois a mistura foi submetida ao refluxo durante 1 h. Depois de esfriá-la, metanol (10 ml) foi adicionado, e o solvente foi evaporado em pressão reduzida. O resíduo foi absorvido em água e lavado 3 vezes com acetato de etila. A fase aquosa foi alcalinizada com NaOH 6 N e extraída 3 vezes com diclorometano. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada em pressão reduzida. 0,6 g de l-{l-[2-(4- metoxifenil)etil]-4-piperidinil}-N-metilmetanamina desse modo foi obtido.

GC/MS (m/z: 127; 110; 96).

6c) Cloridreto de N3-2-dimetil-N3-[(l (2-[4-(metilóxi) fenil] etil} piperidin-4-il)metil] -2H-indazol-3 -carboxamida hidratado

l-{l-[2-(4-Metoxifenil)etil]-4-piperidinil}-N-metilmetanamina (preparado como descrito no Exemplo 6b anterior) (1,4 g; 0,0052 mol) foi adicionado, em porções pequenas, a uma solução de cloreto do ácido 2-metil- 2H-indazol-3-carboxílico (Ib) (1,1 g; 0,0061 mol) em tolueno (20 ml). A mistura desse modo obtida foi agitada durante 18 h na temperatura ambiente e depois foi filtrada.

O resíduo sólido foi absorvido em NaOH 1 N e extraído com

diclorometano. As fases orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente foi removido por evaporação em pressão reduzida. O resíduo sólido foi convertido a cloridreto por dissolução em etanol, adição de um excesso de etanol clorídrico 5 N, agitando durante 3 h na temperatura ambiente e depois remoção do solvente por evaporação em pressão reduzida.

Depois da cristalização a partir de acetato de etila/etanol absoluto, 0,8 g de cloridreto de N3-2-dimetil-N3-[(l-{2-[4-(metil- óxi)fenil]etil}piperidin-4-il)metil]-2H-indazol-3-carboxamida hidratado foi obtido, p. f. = 132,5 a 136,5° C

Análise elementar para C25HT35CIN403

C H N Cl Encontrado em % 62,95 7,65 11,61 7,59 Calculado em % 63,21 7,43 11,79 7,76

1H RMN (δ, DMSO d6 +D2O): 1,5 -2,3 (m, 5 H); 2,7 -3,7 (m, 13 H); 3,11 (s, 3 H); 3,73 (s, 3 H); 4,15 (s, 3 H); 6,90 (d, J = 8 Hz, 2 H); 7,1 -7,3 (m, 3 H); 7,33 (t, J = 8 Hz, 1 H); 7,59 (d, J = 8 Hz, 1 H); 7,69 (d, J = 9 Hz, 1 H).

Exemplo 7

Cloridreto de N-({l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidin-4- il}metil)-2-(2-metóxi-etil)-2H-indazol-3-carboxamida (Composto N- 7) (Composto I: Rl = H, R2 = CH2CH2OCH3, X - -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = H, R5 -Η, η -1, ρ -2, m -2, Y -CH, W = N, R6 + R7 = -CH2-CH2-)

7a) Carboxilato de 2-(2-metoxietil)-2H-indazol-3-etila (Composto III: Rl = H, R2 = CH3OCH2CH2, Z = CH3CH2O) Carbonato de potássio (33,6 g; 0,243 mol) e, às gotas, éter 2-

bromoetila metílico (46 ml; 0,49 mol) foram adicionados a uma solução de éster etílico do ácido lH(2H)-indazol-3-carboxílico (15,4 g; 0,0811 mol) em etanol absoluto (200 ml).

A mistura de reação foi agitada durante 48 h. O solvente depois foi removido por evaporação em pressão reduzida. O resíduo foi absorvido em clorofórmio e lavado com água 3 vezes.

A fase orgânica foi seca em Na2SO^ e, depois da filtração e evaporação do solvente, aproximadamente 10 g do composto bruto foi obtido. Este foi purificado por cromatografia cintilante usando uma mistura de 7:3 de n-hexano/acetato de etila como eluente. 4,5 g de carboxilato de 2-(2- metoxietil)-2H-indazol-3-etila desse modo foi obtido.

1H RMN (δ, CDCl3): 1,50 (t, J = 6 Hz, 3 H); 3,33 (s, 3 H); 3,91 (t, J = 6 Hz, 2 H); 4,49 (q, J = 6 Hz, 2 H); 5,13 (t, J = 6 Hz, 2 H); 7,2 -7,4 (m, 2 H); 7,79 (d, J = 9 Hz, 1 H); 8,02 (d, J = 9 Hz, 1 H).

7b) Cloreto de 2-(2-metoxietil)-2H-indazol-3-carbonila (Composto III: Rl = H, R2 = CH3OCH2CH2, Z = Cl) O carboxilato de 2-(2-metoxietil)-2H-indazol-3-etila do éster (preparado como descrito no Exemplo 7a anterior) (4,26 g; 0,0171 mol) foi hidrolisado em uma solução aquosa (30 ml) de hidróxido de sódio (1,16 g; 0,0291 mol). A mistura de reação foi aquecida sob refluxo durante 2 h, esfriada até a temperatura ambiente e acidificada com HCl 6 N até que houve precipitação completa de ácido 2-(2-metoxietil)-2H-indazol-3-carboxílico que, depois da separação por filtração e secagem em estufa sob vácuo, foi na forma de um sólido branco (3,6 g), que foi usado sem purificação adicional na reação seguinte.

Cloreto de tienila (2,6 ml; 0,036 mol) foi adicionado a uma suspensão de ácido 2-(2-metoxietil)-2H-indazol-3-carboxílico (3,6 g; 0,016 mol) em tolueno (100 ml) e a mistura de reação foi aquecida sob refluxo durante 24 h. O solvente foi removido por evaporação em pressão reduzida e o resíduo foi absorvido duas vezes em n-hexano. 3,9 g de cloreto de 2-(2- metoxietil)-2H-indazol-3-carbonila desse modo foi obtido.

1H RMN (δ, CDCl3): 3,29 (s, 3 H); 3,84 (t, J = 6 Hz, 2 H); 5,11 (t, J = 6 Hz, 2 H); 7,1 -7,4 (m, 2 H); 7,74 (d, J = 9 Hz, 1 H); 7,99 (d, J = 9 Hz, 1 H).

7c) 1 -(2-Bromoetil)-4-fluorobenzeno (Composto V: R3 = 4-F, R4 = H, m = 2, Q = Br) 60,8 g de ácido bromídrico a 47 % (0,353 mol) foi adicionado lentamente a uma solução de 2-(4-fluorofenil) etanol (20 g; 0,143 mol) em ácido sulfurico concentrado (8,5 ml; 0,16 mol). A mistura foi aquecida sob refluxo durante 3 h, depois ela foi esfriada até a temperatura ambiente e 50 ml de diclorometano foi adicionado.

A fase orgânica foi separada e lavada sucessivamente com NaOH INe água e depois foi seca em Na2SO4. Depois da filtração e evaporação do solvente em pressão reduzida, aproximadamente 13 g do composto bruto foi obtido, que foi purificado por cromatografia cintilante (n- hexano/acetato de etila = 9/1). 10,6 g de l-(2-bromoetil)-4-fluoro-benzeno desse modo foi obtido.

1H RMN (δ, CDCl3): 3,13 (t, J = 9 Hz, 2 H); 3,54 (t, J = 9 Hz, 2 H); 6,9 -7,3 (m, 4H)

7d) l-[2-(4-Fluorofenil)etil]-4-piperidino metanamina

(Composto XI: R3 = 4-F, R4 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, η = l,p = 2, m = 2)

N-hexaidro-4-piridinilmetil-N-fenilmetilidenamina (17,9 g; 0,0879 mol) foi dissolvido em etanol absoluto (100 ml) contendo carbonato de potássio anidro (24,3 g; 0,176 mol) e l-(2-bromoetil)-4- fluorobenzeno (preparado como descrito no Exemplo 7c anterior) (18,0 g; 0,088 mol). A mistura de reação foi aquecida sob refluxo durante 24 h. Depois de esfriar até a temperatura ambiente, a suspensão foi filtrada e o solvente foi evaporado em pressão reduzida. O resíduo obtido foi colocado em suspensão em HCl 3 N (120 ml) e agitado na temperatura ambiente durante 3 h.

A fase ácida aquosa foi lavada 4 vezes com acetato de etila, depois ela foi alcalinizada ao pH de aproximadamente 13 com NaOH 6 N e, finalmente, ela foi extraída 3 vezes com acetato de etila. A fase orgânica desse modo obtida foi seca em Na2SO4 anidro e, depois da filtração, o solvente foi removido por evaporação em pressão reduzida para fornecer 17,2 g de l-[2-(4-fluorofenil)etil]-4-piperidino metanamina. 1HRMN (δ, CDCl3): 1,2 -1,5 (m, 5 H); 1,6 -1,8 (m, 2 H); 1,9 - 2,1 (m, 2 H); 2,4 -2,6 (m, 4 H); 2,7 -2,8 (m, 2 H); 2,9 -3,1 (m, 2 H); 6,9 -7,2 (m, 4Η).

MS mostra 237 (MH+), 220 (pico básico). 7e) Cloridreto de N-({ l-[2-(4-Fluorofenil)etil]piperidin-4- il}metil-2-(2-metoxietil)-2H-indazol-3-carboxamida

l-[2-(4-Fluorofenil)etil]-4-piperidino metanamina (preparado como descrito no Exemplo 7d anterior) (3,23 g; 0,0131 mol) e trietilamina (5,4 ml; 0,039 mol) foram adicionados a uma solução de cloreto de 2-(2- metoxietil)-2H-indazol-3-carbonila (preparado como descrito no Exemplo 7b anterior) (3,26 g; 0,0131 mol) em tolueno (50 ml).

A mistura de reação foi agitada sob refluxo durante 5 h e depois o solvente foi evaporado em pressão reduzida. O resíduo foi absorvido em acetato de etila e foi lavado sucessivamente com NaOH 0,1 N e água. A fase orgânica foi seca em Na2SO4 anidro e, depois da filtração, o solvente foi removido por evaporação em pressão reduzida. 4,7 g do composto bruto foi obtido, que foi purificado por cromatografia cintilante (CHCI3/CH3OH/NH3 = 98/2/0,2).

O composto obtido (1,5 g) foi convertido ao cloridreto correspondente por dissolução em acetato de etila, tratamento com um excesso de etanol clorídrico 5 N na temperatura ambiente durante 3 h, remoção do solvente por evaporação em pressão reduzida e finalmente cristalização a partir de etanol absoluto.

0,6 g de cloridreto de N-({ l-[2-(4-fluorofenil)etilipiperidin-4- il}metil)-2-(2-metoxietil)-2H-indazol-3-carboxamida desse modo foi obtido, p.f.= 193,0 a 194,0° C Análise elementar para C25H31N402F . HCl

C H N Cl

Encontrado em % 63,21 6,79 11,69 7,50 Calculado em % 63,20 6,79 11,80 7,46

1H RMN (δ, DMSO d6): 1,5 -2,0 (m, 5 H), 2,8 -3,7 (m, 10 H); 3,19 (s, 3 H); 3,80 (t, J = 6 Hz, 2 H); 4,88 (t, J = 6 Hz, 2 H); 7,1 -7,4 (m, 6 H); 7,70 (d, J = 9 Hz, 1 H); 7,82 (d, J = 9 Hz, 1 H); 8,6 -8,8 (m, 1 H); 10,7 -11,0 (s amplo, 1 H).

Exemplo 8

Cloridreto de N-({l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidin-4- il}metil)-2-metil-2H-indazol-3-carboxamida (Composto N° 8)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = H, R5 = Η, n-1, ρ -2, m -2, Y -CH, W = N, R6 + R7 = -CH2-CH2-)

8a) Cloridreto de N-({l-[2-(4-Fluorofenil)etil]piperidin-4- il}metil)-2-metil-2H-indazol-3-carboxamida

O composto foi obtido como descrito no Exemplo 7e) usando 4,0 g de cloreto do ácido 2-metil-2H-indazol-3-carboxílico (preparado como descrito no Exemplo Ib anterior) (0,021 mol), tolueno (100 ml), 1 -[2-(4-fluorofenil)etil]-4-piperidino metanamina (7d) (4,8 g; 0,021 mol) e trietilamina (8,6 ml; 0,062 mol). 10,7 g do composto bruto foi obtido, que foi purificado por cromatografia cintilante (CHCI3/CH3OH/NH3 = 97/3/0,3).

O composto desse modo obtido (4,1 g) foi convertido ao cloridreto correspondente por dissolução em etanol, tratamento com um excesso de etanol clorídrico 5 N na temperatura ambiente durante 3 h, remoção do solvente por evaporação em pressão reduzida e finalmente cristalização a partir de etanol absoluto/acetato de etila.

4,3 g de cloridreto de N-({ l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidin-4- il}metil)-2-metil-2H-indazol-3-carboxamida desse modo foi obtido.

p. f. = 208,0 a 209,0° C Análise elementar para C23H27N40F . HCl

C H N Cl

Encontrado em % 64,00 6,54 12,89 8,34 Calculado em % 64,10 6,55 13,00 8,23

1H RMN (δ, DMSO d6): 1,6 -2,0 (m, 5 H); 2,8 -3,7 (m, 10 H); 4,32 (s, 3 H); 7,1 -7,4 (m, 6 H); 7,69 (d, J = 9 Hz, 1 H); 7,85 (d, J = 9 Hz, 1 H); 8,6 -8,8 (m, 1 H); 10,9 -11,1 (s amplo, 1 H). Exemplo 9

Cloridreto de 2-(2,4-Difiuorofenil)-N-({l-[(2-metil-2H- indazol-3-il)-carbonil]piperidin-4il}metil]hetanamina (Composto N- 9)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F,

R4 = 2-F,

R5 + R6 = -CH2-CH2-, η = 2, ρ = 1, m = 2, Y = CH, W = Ν,

R7 = Η)

9a) l-{ 1 -[(2-Metil-2H-indazol-3-il)carbonil]piperidin-4-

il}metanamina

(Composto XVI: Rl = H, R2 = CH3, R5 + R6 = -CH2-CH2-, η

=2,p=l)

N-Hexaidro-4-piridinilmetil-N-fenilmetilidenamina (11,3 g; 0,0558 mol) e trietilamina (9,3 ml; 0,066 mol) foram adicionados a uma solução de cloreto do ácido 2-metil-2H-indazol-3-carboxílico (preparado como descrito no Exemplo Ib anterior) (10,8 g; 0,0558 mol) em tolueno (150 ml).

A mistura foi aquecida sob refluxo durante 5 h. Depois ela foi esfriada até a temperatura ambiente e filtrada. O solvente foi evaporado em pressão reduzida. O resíduo foi agitado na temperatura ambiente com HCl 3 N (80 ml) durante 5 h. A solução ácida foi lavada 3 vezes com acetato de etila. Depois ela foi alcalinizada com NaOH 12 Ν. A fase aquosa alcalina foi extraída com diclorometano 3 vezes.

As fases orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 anidro. Depois elas foram filtradas e o solvente foi evaporado em pressão reduzida. Aproximadamente 16 g do composto bruto desse modo foi obtido, e foi purificado por cromatografia cintilante (CHCl3/CH3OH/NH3 = 95/5/0,5).

13,4 g de l-{l-[(2-metil-2H-indazol-3-il)carbonil] piperidin-4- il} metanamina foi obtido.

GC/MS (m/z) mostra 272, 159 (pico básico).

9b Metanossulfonato de 2-[2,4-difluorofenil)etila

(Composto V: R3 = 2-F, R4 = 4-F, m = 2, Q = CH3OSO2) Uma solução do ácido (2,4-difluorofenil)acético (15,0 g; 0,0871 mol) em éter etílico (100 ml) foi adicionado lentamente a uma suspensão de hidreto de lítio alumínio (6,58 g; 0,174 mol) em éter etílico (100 ml). A mistura foi aquecida sob refluxo durante 5 h e depois levada até a temperatura ambiente. O hidreto em excesso foi removido adicionando-se HCl 1 N (150 ml). A fase ácida foi separada e depois extraída 3 vezes com éter etílico. As fases orgânicas combinadas foram lavadas duas vezes com NaOH 1 N, secas em Na2SO4 e, depois da filtração, o solvente foi evaporado em pressão reduzida. 6,4 g do composto desejado desse modo foi obtido, e foi usado sem purificação adicional para a reação subsequente.

Cloreto de metanossulfonila (3,3 ml; 0,043 mol) e trietilamina (5,9 ml; 0,043 mol) foram adicionados a uma solução de 2-(2,4-difluorofenil) etanol (6,4 g; 0,0426 mol) em diclorometano (100 ml). A solução foi esfriada durante 1 h a 0o C e depois levada até a temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação depois foi tratada lavando-se, sucessivamente, com ácido sulfurico 5 N (20 ml), água (50 ml), uma solução a 5 % de NaHCO3 (50 ml) e água (50 ml). A fase orgânica depois foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi absorvido duas vezes em CCl4, desse modo obtendo 6,42 g de metanossulfonato de 2-(2,4- difluorofenil)etila.

1H RMN (δ, CDCl3): 2,92 (s, 3 H); 3,07 (t, J 6 Hz, 2 H); 4,40 (t, J = 6 Hz, 2 H); 6,7 -6,9 (m, 2 H); 7,1 -7,3 (m, 1 H).

9c) Cloridreto de 2-(2,4-difluorofenil)-N-({l-[(2-metil-2H- indazol-3-il)carbonil]-piperidin-4-}metil) etanamina K2CO3 (3,7 g; 0,027 mol) e l-{ l-[(2-metil-2H-indazol-3-il)carbonil]piperidin-4-il} metanamina (preparado como descrito no Exemplo 9a anterior) (6,73 g; 0,0247 mol) foram adicionados a uma solução de metanossulfonato de 2-(2,4-difluorofenil)etila (9b) (6,42 g; 0,0271 mol) em etanol absoluto (150 ml).

A mistura foi aquecida sob refluxo durante 30 h e depois o solvente foi evaporado em pressão reduzida. O resíduo foi absorvido em acetato de etila e lavado 3 vezes com água. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada em pressão reduzida. Aproximadamente 15 g do composto bruto desse modo foi obtido, que foi purificado por cromatografia cintilante (CHCl3/CH3OH/NH3 = 99/1/0,1). O composto desse modo obtido (2,5 g) foi convertido a seu cloridreto dissolvendo-se em etanol absoluto e o tratamento com um excesso de etanol clorídrico 5 N durante 3 h. Depois da evaporação do solvente em pressão reduzida, o resíduo sólido foi cristalizado a partir de etanol/acetato de etila, obtendo 0,7 g de cloridreto de 2-(2,4-difluorofenil)-N-({ l-[(2-metil-2H-indazol-3-il)carbonil] piperidin-4- il} metiljhetanamina.

p. f. = 108,0 a IlO5O0C

Análise elementar para C23H26N40F2 . HCl

C H N Cl Encontrado em % 61,68 5,97 12,46 8,00 Calculado em % 61,53 6,06 12,48 7,90

1H RMN (δ, DMSO d6): 1,0 -2,2 (m, 5 H); 2,8 -3,3 (m, 8 H); 3,4 -4,9 (m, 2 H), 4,17 (s, 3 H); 7,0 -7,5 (m, 5 H); 7,62 (d, J = 9 Hz, 1 H); 7,69 (d, J = 9 Hz, 1 H); 9,1 -9,5 (s amplo, 2 H).

Exemplo 10

Cloridreto de 2-(4-fluorofenil)-N-({l-[(2-metil-2H-indazol-3- il)carbonil)-piperidin-4-il}metil]etanamina (Composto N2 10)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = Η, R5 + R6 = -CH2-CH2-, η = 2, ρ = 1, m = 2, Y = CH, W = Ν, R7 = Η) 10a) Cloridreto de 2-(4-Fluorofenil)-N({-l-[2-metil-2H- indazol-3-il)-carbonil]piperidin-4-il}metil) etanamina

O composto desejado foi obtido como descrito no Exemplo 9c) usando 4,10 g de l-(2-bromoetil)-4-fluorobenzeno (preparado como descrito no Exemplo 7c anterior) (0,0201 mol), 5,0 g de l-{l-[(2-metil-2H-indazol-3- il)carbonil]piperidin-4-il} metanamina (preparado como descrito no anterior Exemplo 9a) (0,018 mol), 2,77 g de K2CO3 (0,0201 mol) e 100 ml de etanol absoluto.

Aproximadamente 7 g do composto bruto desse modo foi

obtido, e foi purificado por cromatografia cintilante (CHCl3/CH3OH/NH3 = 98/2/0,2). O composto obtido (3,5 g) foi convertido a seu cloridreto dissolvendo-se em etanol absoluto e o tratamento com excesso de etanol clorídrico 5 N durante 3 h. Depois da evaporação do solvente em pressão reduzida, o resíduo sólido é cristalizado a partir de etanol/éter diisopropílico, obtendo 2,5 g de cloridreto de 2-(4-fluorofenil)-N-({l-[(2-metil-2H-indazol- 3-il)carbonil]piperidin-4-il}metil) etanamina.

p. f. = 198 a 199° C

Análise elementar para C23H27N4QF . HCl

C H N Cl Encontrado em % 64,14 6,54 13,00 8,24 Calculado em % 64,10 6,55 13,00 8,23

1H RMN (δ, DMSO d6): 1,1 -2,2 (m, 5 H); 2,7 -3,3 (m, 8 H); 3,4 -4,9 (m, 2 H), 4,17 (s, 3 H); 7,1 -7,4 (m, 6 H); 7,61 (d, J = 9 Hz, 1 H); 7,68 (d, J = 9 Hz, 1 H); 9,0 -9,4 (s amplo, 2 H).

Exemplo 11

Cloridreto de N-etil-2-(4-fluorofenil)-N-({-l[(2-metil-2H- indazol-3-il)-carbonil]piperidin-4-il}metil) etanamina (Composto N- 11)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = Η, R5 + R6 = -CH2-CH2-, η = 2, ρ = 1, m = 2, Y = CH, W = Ν, R7 = CH3CH2)

11a) Cloridreto de N-etil-2-(4-fluorofenil)-N-({l-[(2-metil- 2H-indazol-3-il)carbonil]piperidin-4-il}metil) etanamina K2CO3 (0,71 g; 0,0052 mol), iodeto de potássio (10 mg; 0,062

mmol) e brometo de etila (0,54 ml; 0,0072 mol) foram adicionados a uma solução de 2-(4-fluorofenil)-N-({ l-[(2-metil-2H-indazol-3-il)carbonil]- piperidin-4-il}metil) etanamina (10a) (1,7 g; 0,0043 mol) em etanol absoluto (20 ml). A mistura foi aquecida sob refluxo durante 48 h e depois o solvente foi evaporado em pressão reduzida. O resíduo foi absorvido em clorofórmio e foi lavado com água duas vezes. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada em pressão reduzida. O composto bruto resultante (1,5 g) foi purificado por cromatografia cintilante (acetato etila/n-hexano/amônia = 96/4/0,2). O composto obtido (0,5 g) foi convertido a seu cloridreto dissolvendo-se em etanol absoluto e o tratamento com um excesso de etanol clorídrico 5 N durante 3 h. Depois da evaporação do solvente em pressão reduzida, o resíduo sólido foi cristalizado a partir de etanol/acetato de etila, obtendo 0,15 g de cloridreto de N-etil-2-(4-fluorofenil)-N-({l-[(2-metil-2H- indazol-3-il)carbonil]piperidin-4-il}metil)-etanamina. 1H RMN (δ, CDCl3): 0,6 -2,4 (m, 5 H); 1,44 (t, J = 9 Hz, 3 H);

2,7 -3,7 (m, 12 H); 4,28 (s, 3 H); 6,9 -7,4 (m, 6 H); 7,46 (d, J = 9 Hz, 1 H); 7,72 (d, J = 9 Hz, 1 H); 12,0 -12,7 (s amplo, 2 H).

MS mostra 423 (MH+), 159 (pico básico).

Exemplo 12

N-( {1 - [2-(2-fluorofenil)etil)piperidin-4-il} metil)-2-metil-2H-

indazol-3-carboxamida (Composto N° 12)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 2-F, R4 = H, R5 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, η = l,p = 2, m = 2, Y = CH, W = N) 12a) {1 -{2-(2-fluorofenil)etil]-4-piperidino) metanamina (Composto XI: R3 = 2-F, R4 = Η, R6 + R7 = -CH2-CH2-, Y = CH, W = Ν, η = 1, ρ = 2, m = 2)

{1 - {2-(2-Fluorofenil)etil] -4-piperidino} metanamina foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7d) usando como reagentes N-hexaidro-4-piridinilmetil-N-fenilmetilidenamina (2,03 g; mmol), e 1-(2-bromoetil)-2-fluorobenzeno (2,04 g; 10 mmol).

1,42 g de l-[2-(2-fluorofenil)etil]-4-piperidino metanamina foi

obtido.

1H RMN (δ, CDCl3): 1,0-1,4 (m, 2 H), 1,5 -2,1 (m, 5 H), 2,4 - 3,0 (m, 10 H), 6,8 -7,2 (m, 4H).

12b) N-( {1 - [2-(2-fluorofenil)etil]piperidin-4-il)metil)-2-metil- 2H-indazol-3-carboxamida

O composto foi obtido de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7e) usando como reagentes cloreto de 2-metil-2H-indazol-3- carbonila (Exemplo lb) (880 mg; 4,5 mmol) e l-[2-(2-fluorofenil)etil]-4- piperidino metanamina (Exemplo 12a) (1,06 g; 4,5 mmol).

350 mg de N-({l-[2-(2-fluorofenil)etil]piperidin-4-il}metil)-2- (2-metoxietil)-2H-indazol-3-carboxamida desse modo foi obtido, p. f.= 128 a 130° C Análise elementar para C23H27N40F

C H N Encontrado em % 70,21 6,79 14,39 Calculado em % 70,03 6,90 14,20

1H RMN (DMSO d6, δ ppm): 1,15 -1,35 (m, 2 H) 1,50 -1,83 (m, 3 Η) 1,97 (t, J = 10,82 Hz, 2 H) 2,42 -2,57 (m, 2 H) 2,77 (t, J = 7,60 Hz, 2 H) 2,94 (d, J = 10,82 Hz, 2 H) 3,25 (t, J = 6,28 Hz, 2 H) 4,28 (s, 3 H) 7,06 - 7,38 (m, 6 H) 7,67 (d, J = 8,77 Hz, 1 H) 7,77 (d, J = 8,18 Hz, 1 H) 8,54 (t, j = 5,70 Hz, 1 H). Exemplo 13

Cloridreto de 2-etil-N-({l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidin-4- il}metil)-2H-indazol-3-carboxamida (Composto N° 13)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH2CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = H, R5 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, η = 1, ρ = 2, m = 2, Y = CH, W = N)

13a) Ester metílico do ácido 2-etil-2H-indazol-3-carboxílico

(Composto X; Rl = H, R2 = CH2CH3)

O composto foi obtido de acordo com o procedimento descrito no Exemplo la) usando como reagentes o éster metílico de ácido 1H(2H)- indazol-3-carboxílico (7,4 g; 49,9 mmol) e brometo de etila (3,73 ml; 50 mmol).

4,5 g de éster metílico do ácido 2-etil-2H-indazol-3- carboxílico foi obtido.

1H RMN (δ, DMSO d6): 1,55 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 4,09 (s, 3 H), 4,62 (q, J = 7,3 Hz, 2 H), 7,2 -7,4 (m, 1 H), 7,5 -7,6 (m, 1), 7,7 -7,8 (m, 1), 7,9 -8,1 (m, 1 H).

13b) Cloreto de 2-etil-2H-indazol-3-carbonila

(Composto III: Rl = H, R2 = CH2CH3, Z = Cl)

O composto foi obtido de acordo com o procedimento descrito no Exemplo lb) usando como reagente o éster metílico do ácido 2-etil-2H- indazol-3-carboxílico (Exemplo 13a) (4,0 g; 19,6 mmol).

3,5 g de cloreto de 2-etil-2H-indazol-3-carbonila desse modo

foi obtido.

1H RMN (δ, DMSO d6): 1,51 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 4,59 (q, J = 7,3 Hz, 2 H), 7,3 -7,4 (m, 1 H), 7,5 -7,6 (m, 1), 7,7 -7,8 (m, 1), 7,9 -8,1 (m, 1 H),

13c) Cloridreto de N-({ l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidin-4-il- metil)-2-etil-2H-indazol-3-carboxamida O composto foi obtido como descrito no Exemplo 7e) usando cloreto de 2-etil-2H-indazol-3-carbonila (Exemplo 13b) (1,05 g; 5,4 mmol) e l-[2-(4-fluorofenil)etil]-4-piperidino metanamina (Exemplo 7d) (1,1 g; 5,4 mmol).

190 mg de cloridreto de N-({ l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidin-

4-il}metil)-2-etil-2H-indazol-3-carboxamida foi obtido, p. f. = 182 a 186° C

Análise elementar para C24H29N40F . HCl

C H N Cl Encontrado em % 64,60 6,54 12,69 8,04 Calculado em % 64,78 6,80 12,59 7,97

1H RMN (DMSO d6, δ ppm): 1,46 (t, J = 7,27 Hz, 3 H) 1,51 - 1,75 (m, 2 H) 1,91 (br. s., 3 H) 2,66 -3,84 (m, 10 H) 4,68 (q, J = 7,27 Hz, 2 H) 7,08 -7,39 (m, 6 H) 7,70 (d, J = 8,59 Hz, 1 H) 7,80 (d, J = 8,26 Hz, 1 H) 8,65 (t, J = 5,28 Hz, 1 H) 10,30 (br. s, 1 H).

Exemplo 14

Cloridreto de N-{l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidin-4-il}-2- metil-2H-indazol-3-carboxamida (Composto N0 14)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = H, R5 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, η = 0, ρ = 2, m = 2, Y = CH, W = Ν)

14a) l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidino-4-amina (Composto XI: R3 = 4-F, R4 = H, R6+R7 = -CH2-CH2-, Y = CH, W = Ν, η = 0, ρ = 2, m = 2)

Benzaldeído (21,2 g; 0,2 mol) foi adicionado, às gotas, a uma solução de 4-aminopiperidina (20 g; 0,2 mol) em tolueno (80 ml). A solução desse modo obtida foi agitada na temperatura ambiente. Depois de 3 h o solvente foi removido pela evaporação na pressão reduzida e o resíduo foi absorvido duas vezes com tolueno. 31 g de N-(fenilmetileno)piperidino-4- amina foi desse modo obtida e foi usada nas reações subsequentes sem outra purificação.

Uma alíquota deste produto (1,88 g, 10 mmol) foi usada, de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7d), junto com l-(2- bromoetil)-4-fluorobenzeno (Exemplo 7c) (2,03 g; 10 moles).

1,3 g de l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidino-4-amina foi desse

modo obtido e foi usado para a reação seguinte sem outra purificação.

14b) Cloridreto de N-{l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidin-4-il}- 2-metil-2H-indazol-3-carboxamida

O composto foi obtido como descrito no Exemplo 7e) usando como reagentes cloreto de 2-metil-2H-indazol-3-carbonila (Exemplo lb) (1,15 g; 5,8 mmol) e l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidino-4-amina (Exemplo 14a) (1,1 g; 5,8 mmol).

305 mg de cloridreto de N-{l-[2-(4-fluorofenil)etil]-piperidin- 4-il}-2-metil-2H-indazol-3-carboxamida foram desse modo obtidos. p. f. = 224 a 228° C

Análise elementar para C22H25N4QF . HCl

C H N Cl Encontrado em % 63,20 6,44 13,29 8,54 Calculado em % 63,38 6,29 13,44 8,50

1H RMN (DMSO d6, δ ppm): 2,09 (br. s., 4 H) 2,72 -3,83 (m, 8

H) 4,09 (br. s., 1 H) 4,29 (s, 3 H) 7,08 -7,26 (m, 3 H) 7,32 (t, J = 7,10 Hz, 3 H) 7,68 (d, J = 8,59 Hz, 1 H) 7,75 (d, J = 8,26 Hz, 1 H) 8,78 (br. s., 1 H) 10,63 (br. s., 1 H).

Exemplo 15

N-{l-[2-(4-fluorofenil)etil]pirrolidin-3-il}-2-metil-2H-indazol-

3-carboxamida (Composto N0 15)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = H, R5 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, η = 0, ρ = 1, m = 2, Y = CH, W = N) 15a) l-[2-(4-fluorofenil)etil]pirrolidino-3-amina (Composto XI: R3 = 4-F, R4 = Η, R6+R7 = -CH2-CH2-, Y = CH, W = Ν, η = 0, ρ = 1, m = 2)

Benzaldeído (21,2 g; 0,20 mol) foi adicionado, às gotas, a uma solução de 3-aminopirrolidina (17,2 g; 0,20 mol) em tolueno (80 ml). A solução desse modo obtida foi agitada na temperatura ambiente. Depois de 3 h o solvente foi removido pela evaporação na pressão reduzida e o resíduo foi absorvido duas vezes com tolueno. 21 g de N-(fenilmetileno)pirrolidino-3- amina foram desse modo obtidos e foram usados nas reações subsequentes sem outra purificação. Uma alíquota deste produto (1,7 g, 10 mmol) foi usada, de

acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7d), junto com l-(2- bromoetil)-4-fluorobenzeno (Exemplo 7c) (2,0 g; 10 mmol).

1,4 g de l-[2-(4-fluorofenil)etil]pirrolidino-3-amina foi desse modo obtido e foi usado na reação seguinte sem outra purificação. 15b) N- {1 - [2-(4-fluorofenil)etil]pirrolidin-3 -il} -2-metil-2H-

indazol-3 -carboxamida

O composto foi obtido como descrito no Exemplo 7e) usando como reagentes cloreto de 2-metil-2H-indazol-3-carbonila (Exemplo lb) (1,3 g; 6,7 mmol) e l-[2-(4-fluorofenil)etil]pirrolidino-3-amina (Exemplo 15a) (1,4 g; 6,7 mmol).

235 mg de N-{l-[2-(4-fluorofenil)etil]pirrolidin-3-il}-2-metil- 2H-indazol-3-carboxamida foram desse modo obtidos.

p. f.= 117 a 119° C

Análise elementar para C21H23N40F

C H N Encontrado em % 69,01 6,44 15,29 Calculado em % 68,83 6,33 15,29

1H RMN (DMSO d6, δ ppm): 1,83 (dddd, J = 13,01, 7,67, 5,70, 5,48 Hz, 1 H) 2,11 -2,26 (m, 1 H) 2,53 -2,82 (m, 7 H) 2,92 (dd, J = 9,35, 7,31 Hz, 1 Η) 4,27 (s, 3 Η) 4,39 -4,53 (m, 1 Η) 7,03 -7,13 (m, 2 Η) 7,19 (ddd, J = 8,33, 6,58, 0,88 Hz, 1 Η) 7,25 -7,35 (m, 3 Η) 7,66 (ddd, J = 8,50, 1,00, 0,80 Hz, 1 Η) 7,71 (ddd, J = 8,33, 1,17, 1,02 Hz, 1 Η) 8,64 (d, J = 7,02 Hz, 1 Η).

Exemplo 16

N- {1 - [2-(4-fluorofenil)etil]piperidin-3 -il} -2-metil-2H-indazol-

3-carboxamida (Composto N0 16)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = H, R5 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-CH2-, η = 0, ρ = 1, m = 2, Y = CH, W = N)

16a) l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidino-3-amina

(Composto XI: R3 = 4-F, R4 = H, R6+R7 = -CH2-CH2-CH2-, Y = CH, W = Ν, η = 0, ρ = 1, m = 2)

Benzaldeído (21,2 g; 0,2 mol) foi adicionado, às gotas, a uma solução de 3-aminopiperidina (20 g; 0,2 mol) em tolueno (80 ml). A solução

desse modo obtida foi agitada na temperatura ambiente, Depois de 3 h o solvente foi removido pela evaporação na pressão reduzida e o resíduo foi absorvido duas vezes com tolueno. 29 g de N-(fenilmetileno)piperidino-3- amina foram desse modo obtidos e foram usados nas reações subsequentes sem outra purificação.

Uma alíquota deste produto (1,88 g, 10 mmol) foi usada, de

1,5 g de l-[2-(4-fluorofenil)etil]piperidino-3-amina foi desse

modo obtido.

1H RMN (δ ppm, CDCl3): 1,00 -2,20 (m, 8 H), 2,40 -2,90 (m,

7 H), 6,80 -7,20 (m, 4 H)

16b) N-{l-[2-(4-fluorofenil)etil]pirrolidin-3-il}-2-metil-2H- indazol-3-carboxamida

O composto foi obtido como descrito no Exemplo 7e) usando como reagentes cloreto de 2-metil-2H-indazol-3-carbonila (Exemplo lb) (1,13 g; 5,8 mmol) e l-[2-{4-fluorofenil)etil]piperidino-3-amina (Exemplo 16a) (1,3 g; 5,8 mmol).

335 mg de N-{l-[2-(4-fluorofenil)etil]pirrolidin-3-il}-2-metil- 2H-indazol-3-carboxamida foi desse modo obtida.

p. f. = 194 a 197° C Análise elementar para C22H25N40F

C H N Encontrado em % 69,31 6,64 14,79 Calculado em % 69,45 6,62 14,73

1H RMN (DMSO d6, δ ppm): 1,38 -1,64 (m, 2 H) 1,66 -1,92 (m, 2 H) 2,05 -2,26 (m, 2 H) 2,53 -2,62 (m, 2 H) 2,67 -2,82 (m, 3 H) 2,95 (d, J = 8,18 Hz, 1 H) 3,94 -4,13 (m, 1 H) 4,28 (s, 3 H) 7,00 -7,11 (m, 2 H) 7,15 - 7,38 (m, 4 H) 7,67 (d, J = 8,48 Hz, 1 H) 7,72 (d, J = 8,18 Hz, 1 H) 8,30 (d, J = 8,30 Hz, 1 H).

Exemplo 17

2-metil-N-l-[(l-{2-[4-(trifluorometil)fenil]etil}piperidin-4- il)metil]-2H-indazol-3-carboxamida (Composto N0 17)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4- CF3, R4 = H, R5 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, η = 1, ρ = 2, m = 2, Y = CH, W = N)

17a) 1 -(1 - {2- [4-(trifluorometil)fenil] etil} piperidin-4-il)

metanamina

(Composto XI: R3 = 4-CF3, R4 = H, R6+R7 = -CH2-CH2-, Y = CH, W = N5 η =1, p = 2, m = 2)

1 -(1 - {2- [4-(trifluorometil)fenil]etil} piperidin-4-il)- metanamina foi preparada de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7d) usando como reagentes N-hexaidro-4-piridinilmetil-N- fenilmetilideno-amina (2,36 g; 10 mmol) e l-(2-bromoetil)-4- (trifluorometil)benzeno (2,5 g; 10 mmol).

1,8 g de l-(l-{2-[4-(trifluorometil)fenil]etil}piperidin-4-il) metanamina foi obtido e foi usado para a reação seguinte sem outra purificação,

17b) 2-metil-N-[(1 - {2- [4-(trifluorometil)fenil]etil} piperidin-4-

il)metil]-2H-indazol-3-carboxamida

O composto foi obtido de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7e) usando como reagentes cloreto de 2-metil-2H-indazol-3- carbonila (Exemplo lb) (1,28 g; 6,6 mmol) e l-(l-{2-[4- (trifluorometil)fenil]etil}piperidin-4-il) metanamina (Exemplo 17a) (1,8 g; 6,6 mmol).

415 mg de 2-metil-N-[(l-{2-[4-(trifluorometil)fenil]etil}- piperidin-4-il)metil]-2H-indazol-3-carboxamida foi desse modo obtida, p. f.= 174 a 176° C Análise elementar para C24H27N40F3

C H N Encontrado em % 64,71 6,29 12,59 Calculado em % 64,85 6,12 12,60

1H RMN (DMSO d6, δ ppm): 1,14 -1,34 (m, 2 H) 1,52 -1,81 (m, 3 H) 1,97 (t, J = 10,82 Hz, 2 H) 2,54 (t, J = 8,00 Hz, 2 H) 2,83 (t, J = 7,45 Hz, 2 H) 2,95 (d, J = 11,11 Hz, 2 H) 3,25 (t, J = 6,14 Hz, 2 H) 4,29 (s, 3 H) 7,16 -7,25 (m, 1 H) 7,27 -7,35 (m, 1 H) 7,46 (d, J = 8,18 Hz, 2 H) 7,62 (d, J = 8,18 Hz, 2 H) 7,67 (d, J = 8,77 Hz: 1 H) 7,77 (d, J = 8,48 Hz, 1 H) 8,54 (t, J - 5,70 Hz, 1 H). Exemplo 18

N-{l-[2-(2-fluorofenil)etil]piperidin-4-il}-2-metil-2H-indazol- 3-carboxamida (Composto N0 18)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 2-F, R4 = H, R5 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, η = 0, ρ = 2, m = 2, Y = CH, W = Ν) 18a) l-[2-(2-fluorofenil)etil]piperidino-4-amina (Composto XI: R3 = 2-F, R4 = H, R6+R7 = -CH2-CH2-, Y = CH, W = Ν, η = 0, ρ = 2, m = 2)

O produto foi preparado usando o procedimento descrito no Exemplo 7d) usando como reagentes N-(fenilmetileno)piperidino-4-amina (Exemplo 14a) (1,8 g; 10 mmol) e 1-(2-bromoetil)-2-fluorobenzeno (2,5 g; 10 mmol).

1,3 g de l-[2-(2-fluorofenil)etil]piperidino-4-amina foi desse modo obtido e foi usado para a reação seguinte sem outra purificação. 18b) N- {1 - [2-(2-fluorofenil)etil]piperidin-4-il} -2-metil-2H-

indazol-3-carboxamida

O composto foi obtido de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7e) usando como reagentes o cloreto 2-metil-2H-indazol-3- carbonila (Exemplo 1 b) (1,14 g;-5,8 mmol) e l-[2-(2- fluorofenil)etil]piperidino-4-amina (Exemplo 18a) (1,3 g; 5,8 mmol).

188 mg de N-{l-[2-(2-fluorofenil)etil]piperidin-4-il}-2-metil- 2H-indazol-3-carboxamida foram desse modo obtidos.

p. f. — 164 a 166° C

Análise elementar para C22H25N40F

C H N Encontrado em % 69,61 6,59 14,59 Calculado em % 69,45 6,62 14,73

1H RMN (DMSO d6, δ ppm): 1,64 (qd, J = 11,55, 3,07 Hz, 2 H) 1,89 (d, J = 11,98 Hz, 2 H) 2,13 (t, J = 10,96 Hz, 2 H) 2,54 (t, J = 8,48 Hz, 2 H) 2,79 (t, J = 7,60 Hz, 2 H) 2,95 (d, J = 11,69 Hz, 2 H) 3,73 -3,98 (m, 1 H) 4,27 (s, 3 H) 7,07 -7,39 (m, 6 H) 7,66 (dt, J = 8,70, 0,91 Hz, 1 H) 7,73 (dt, J = 8,40, 0,91 Hz, 1 H) 8,48 (d, J = 7,70 Hz, 1 H).

Exemplo 19

N-{2-[4-(4-fluorofenil)piperidin-l-il]etil}-2-metil-2H-indazol- 3-carboxamida (Composto N0 19)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = H, R5 = H, R6 +R7 = -CH2-CH2-, η = 2, ρ = 2, m = 0, Y = Ν, W = CH) 19a) N-(2-aminoetil)4(4-fluorofenil)piperidina (Composto II: R5 = H, R6 + R7 = -CH2-CH2-, R3 = 4-F, R4 =

Η, Y = N, W = CH, η = 2, ρ = 2, m = 0)

K2CO3 (1,61 g, 11,7 mmol) foi adicionado em pequenas porções a uma solução contendo 4-(4-fluorofenil)piperidina (1,05 g, 5,85 mmol) em acetona anidra (25 ml). Depois uma solução de (2-bromoetil)d- ftalimida (164 g, 6,44 mmol) em acetona anidra (25 ml) foi adicionada lentamente à mistura enquanto ela foi agitada na temperatura ambiente. No final da adição (30 min) a mistura foi aquecida até a temperatura de refluxo por 24 h.

No final da reação, a mistura foi esfriada e filtrada. A solução residual foi depois diluída com acetato de etila (50 ml) e extraída com HCl 1,5 N (3 χ 20 ml), as fases ácidas combinadas foram lavadas com acetato de etila (2 χ 10 ml) depois fortemente alcalinizada com NaOH 3 N e extraída com diclorometano (5 χ 20 ml), as fases orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 anidro e evaporada na pressão reduzida. O resíduo obtido (607 mg) foi depois dissolvido em metanol

(11 ml) e tratado com monoidrato de hidrazina (2 ml, 41 mmol) a 90° C por 2 h. a mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente, diluída com diclorometano (50 ml) e extraída diversas vezes com NaOH 3 N (5 χ 15 ml). A fase orgânica foi depois tornada anidro com Na2SO4 e evaporada na pressão reduzida.

400 mg de N-(2-aminoetil)-4-(4-fluorofenil)piperidina foram desse modo obtidos e foram usados para a reação seguinte sem outra purificação.

19b) N-{2-[4-(4-fluorofenil)piperidin-l-il]etil}-2-metil-2H- indazol-3-carboxamida

O composto foi obtido de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7e) usando como reagentes cloreto de 2-metil-2H-indazol-3- carbonila (Exemplo lb) (240 mg; 1,22 mol) e N-(2-aminoetil)-4-(4- fluorofenil)piperidina (Exemplo 19a) (400 mg).

190 mg de N-{2-[4-(4-fluorofenil)piperidin-l-il]etil}-2-metil- 2H-indazol-3-carboxamida foram desse modo obtidos.

p. f.= 105 a 107° C

Análise elementar para C22H25FN40

C H N Encontrado em % 69,21 6,62 14,99 Calculado em % 69,45 6,62 14,73

1H RMN (DMSO d6 δ ppm): 1,55 -1,83 (m, 4 H) 2,05 -2,19 (m, 2 H) 2,53 -2,56 (m, 0 H) 2,59 (t, J = 6,58 Hz, 2 H) 3,06 (d, J = 11,40 Hz, 2 H) 3,42 -3,58 (m, 2 H) 4,31 (s, 3 H) 7,11 (t, J = 8,92 Hz, 2 H) 7,17 -7,37 (m, H) 7,68 (d, J = 8,48 Hz, 1 H) 7,92 (d, J = 8,48 Hz, 1 H) 8,37 (t, J = 5,41 Hz, 1H)

Exemplo 20

N- {3 - [4-(4-fluorofenil)piperidin-1 -il]propil} -2-metil-2H- indazol-3-carboxamida (Composto N0 20)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = H, R5 = H, R6+R7 = -CH2-CH2-, η = 3, ρ = 2, m = 0, Y = Ν, W = CH) 20a) N-(3-aminopropil)-4-(4-fluorofenil)piperidina (Composto II: R5 = H, R6+R7 = -CH2-CH2-, R3 = 4-F, R4 = Η, Y = N, W = CH, η = 3, ρ = 2, m = 0)

O composto foi obtido de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 19a) usando como reagentes 4-(4-fluorofenil)-piperidina (1,10 g; 6,14 moles) e N-(3-bromopropil)ftalimida (1,82 g, 6,78 mmol).

1,6 g de N-(3-aminopropil)-4-(4-fluorofenil)piperidina foi desse modo obtido e foi usado para a reação seguinte sem outra purificação.

20b) N-{3-[4-(4-fluorofenil)piperidin-l-il]propil}-2-metil-2H- indazol-3-carboxamida

O composto foi obtido de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7e) usando como reagentes cloreto de 2-metil-2H-indazol-3- carbonila (Exemplo 1 b) (236 mg; 1,21 mol) e N-(3-aminopropil)-4-(4- fluorofenil)piperidina (Exemplo 20a) (550 mg).

120 mg de N-{3-[4-(4-fluorofenil)piperidin-l-il]propil}-2- metil-2H-indazol-3-carboxamida foram desse modo obtidos.

p. f. = 136 a 140° C

Análise elementar para C23H27FN40

C H N Encontrado em % 69,91 6,72 14,29 Calculado em % 70,03 6,90 14,20

1H RMN (CDCI3, δ ppm): 1,26 (dq, J = 12,9, 3,6 Hz, 2 H) 1,57

(bd, J= 12,9 Hz, m, 2 H) 1,84 (q, J - 5,7 Hz, 2 H) 1,94 (dt, J = 11,7, 1,5 Hz, 2 H) 2,31 (tt, J = 12,9, 4,4 Hz, 1 H) 2,58 (t, J = 5,7 Hz, 2H) 3,39 (bd, J = 11,7 Hz, 2 H) 3,70 (q, J = 5,4 Hz, 2 H) 4,46 (s, 3 H) 6,58 (dd, J = 8,4, 5,4 Hz5 2 H) 6,2 (t, J = 8,7 Hz, 2H), 7,15 -7,25 (m, 1 H) 7,3 -7,4 (m, 1H), 7,81 (t, J = 8,7 Hz, 2 H) 8,4 (bs, 1 H).

Exemplo 21

N-( 1 -benzilpiperidin-4-il)-2-metil-2H-indazol-3 -carboxamida (Composto N0 21)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = H, R4 = H, R5 = H, R6+R7 = -CH2-CH2-, η = 0, ρ = 2, m = 1, Y = CH, W = Ν)

21 a) 1 -benzilpiperidino-4-amina

(Composto XI; R3 = H, R4 = H, R6+R7 = -CH2-CH2-, Y = CH, W = Ν, η = 0, ρ = 2, m = 1)

O produto foi preparado usando o procedimento descrito no Exemplo 7d) usando como reagentes N-[fenilmetileno]piperidino-4-amina (Exemplo 14a) (1,88 g; 10 mmol) e brometo de benzila (1,7 g; 10 moles).

1,7 g de l-benzilpiperidino-4-amina foi desse modo obtido e foi usado para a reação seguinte sem outra purificação.

21b) N-(l-benzilpiperidin-4-il)-2-metil-2H-indazol-3-

carboxamida

O composto foi obtido de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7e) usando como reagentes cloreto de 2-metil-2H-indazol-3- carbonila (Exemplo lb) (1,74 g; 8,9 mmol) e 1 -benzil-piperidino-4-amina (Exemplo 21a) (1,7 g; 8,9 mmol).

460 mg de N-(l-benzilpiperidin-4-il)-2-metil-2H-indazol-3- carboxamida foi desse modo obtida.

p. f.= 167 a 169° C

Análise elementar para C21H24N40

C H N Encontrado em % 72,21 7,02 16,09 Calculado em % 72,39 6,94 16,08

1H RMN (DMSO d6, δ ppm): 1,66 (dq, J = 11,80, 2,90 Hz, 2 H) 1,82 -1,94 (m, 2 H) 2,09 (t, J = 10,67 Hz, 2 H) 2,83 (d, J = 11,69 Hz, 2 H) 3,49 (s, 2 H) 3,76 -3,95 (m, 1 H) 4,27 (s, 3 H) 7,19 (ddd, J = 8,18, 6,87, 1,02 Hz, 1 H) 7,24 -7,38 (m, 6 H) 7,66 (d, J = 8,77 Hz, 1 H) 7,72 (d, J = 8,48 Hz, 1 H) 8,48 (d, J = 7,89 Hz, 1 H).

Exemplo 22

N- {1 - [3 -(4-fluorofenil)propil]piperidin-4-il} -2-metil-2H- indazol-3-carboxamida (Composto N0 22)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(0)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = H, R5 = H, R6+R7 = -CH2-CH2-, η = 0, ρ = 2, m = 3, Y = CH, W = Ν) 22a) l-[3-(4-fluorofenil)propil]piperidino-4-amina (Composto XI: R3 = 4-F, R4 = H, R6+R7 = -CH2-CH2-, Y = CH, W = Ν, η = Ο, ρ = 2, m = 3)

O produto foi preparado usando o procedimento descrito no Exemplo 7d) usando como reagentes N-(fenilmetileno)piperidino-4-amina (Exemplo 14a) (1,9 g; 10 moles) e l-(3-bromopropil)-4-fluorobenzeno (2,2 g;

IOmmol).

1,8 g de l-[3-(4-fluorofenil)propil]piperidino-4-amina foi desse modo obtido e foi usado para a reação seguinte sem outra purificação.

22b) N- {1 -[3-(4-fluorofenil)propil]piperidin-4-il} -2-metil-2H- indazol-3-carboxamida O composto foi obtido de acordo com o procedimento descrito

no Exemplo 7e) usando como reagentes cloreto de 2-metil-2H-indazol-3- carbonila (Exemplo lb) (1,49 g; 7,6 mmol) e l-[3-(4- fluorofenil)propil]piperidino-4-amina (Exemplo 22a) (1,8 g; 7,6 mmol).

165 mg de N-{l-[3-(4-fluorofenil)propil]piperidin-4-il}-2- metil-2H-indazol-3-carboxamida foram desse modo obtidos.

p. f. = 162 a 165° C Análise elementar para C23H27N40F

C H N Encontrado em % 69,91 6,79 14,19 Calculado em % 70,03 6,90 14,20

1H RMN (DMSO d6, δ ppm): 1,55 -1,79 (m, 4 H) 1,88 (d, 2 H) 2,01 (t, J - 10,82 Hz, 2 H) 2,28 (t, J = 7,16 Hz, 2 H) 2,58 (t, J = 7,60 Hz, 2 H) 2,86 (d, J = 11,69 Hz, 2 H) 3,71 -3,96 (m, 1 H) 4,27 (s, 3 H) 7,09 (t, J = 8,92 Hz, 2 H) 7,15 -7,35 (m, 4 H) 7,66 (d, J = 8,48 Hz, 1 H) 7,73 (d, J = 8,48 Hz, 1 H) 8,47 (d, J = 7,60 Hz, 1 H).

Exemplo 23

N-( {1 - [2-(2,4-difluorofenil)etil]piperidin-4-il} metil)-2-metil- 2H-indazol-3-carboxamida (Composto N0 23)

(Composto I: Rl = H, R2 = CH3, X = -C(Q)N(R5)-, R3 = 4-F, R4 = 2-F, R5 = Η, R6 + R7 = -CH2CH2-, η = 1, ρ = 2, m = 2, Y = CH, W = Ν) 23a) {l-[2-(2,4-difluorofenil)etil]-4-piperidino} metanamina (Composto XI: R3 = 4-F, R4 = 2-F, R6+R7 = -CH2-CH2-, Y = CH, W = Ν, η = 1, ρ = 2, m = 2) {l-[2-(2,4-difluorofenil)etil]-4-piperidino} metanamina foi

preparada de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7d) usando como reagentes N-hexaidro-4-piridinilmetil-N-fenilmetilideno amina (2,0 g; mmol) e l-(2-bromoetil)-2,4-difluorobenzeno (2,2 g; 10 moles).

1,9 g de {l-[2-(2,4-difluorofenil)etil]-4-piperidino}- metanamina foi obtido e foi usado sem outra purificação para a reação seguinte.

23b) N-({ l-[2-(2,4-difluorofenil)etil]piperidin-4-il}metil)-2- metil-2H-indazol-3-carboxamida

O composto foi obtido de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 7e) usando como reagentes cloreto de 2-metil-2H- indazol-3-carbonila (Exemplo lb) (1,45 g; 7,4 mmol) e {l-[2-(2,4- difluorofenil)etil]-4-piperidino} metanamina (Exemplo 23a) (1,9 g; 7,4 mmol).

350 mg de N-({l-[2-(2,4-difluorofenil)etil]piperidin-4-il}- metil)-2-metil-2H-indazol-3-carboxamida foram desse modo obtidos.

p. f.= 122 a 126° C

Análise elementar para C23H26N4QF2

C H N Encontrado em % 66,81 6,39 13,39 Calculado em % 66,97 6,35 13,58

1H RMN (DMSO d6, δ ppm): 1,23 (qd, J = 11,79, 3,51 Hz, 2 H) 1,48 -1,80 (m, 3 H) 1,96 (t, J = 10,96 Hz, 2 H) 2,47 (t, J = 7,50 Hz, 2 H) 2,74 (t, J = 7,45 Hz, 2 H) 2,93 (d, J = 11,40 Hz, 2 H) 3,25 (t, J = 6,28 Hz, 2 H) 4,29 (s, 3 H) 6,95 -7,04 (m, 1 H) 7,09 -7,25 (m, 2 H) 7,27 -7,42 (m, 2 Η) 7,67 (d, J = 8,77 Hz, 1 Η) 7,77 (d, J = 8,18 Hz, 1 Η) 8,54 (t, J = 5,70 Hz, 1 Η).

Farmacologia Teste A

A ligação ao receptor de serotonina 5-HT2a de rato foi

efetuada usando, como material de partida, uma preparação de membranas de homogenado de córtex cerebral de rato, pré incubada por 15 minutos a 37° C e pré tratada com 100 nM de prazosina e 100 nM de pirilamina para prevenir a ligação de [3H]-cetanserina aos receptores adrenérgicos ai e histaminérgico Hl.

Os estudos de deslocamento foram conduzidos usando 1 nM de [3H]-cetanserina como radioligando. Esta concentração foi selecionada com base nos estudos de saturação usando várias concentrações de radioligando (de 0,04 nM a 10 nM) que tornaram possível obter um Bmax de 709,9 nM e um Kd de 1,7 nM.

A ligação não específica foi medida na presença de 10 μΜ de metissergida. O ensaio foi conduzido em Tris-HCl 50 mM de tampão (pH 7,4 a 37° C), com incubação por 2 horas a 37° C. Os compostos de teste foram dissolvidos em DMSO, depois diluídos em tampão (concentração de DMSO final 0,01 %) e plaqueados em placas de 96 reservatórios. Metissergida e/ou cetanserina foram usados como compostos de referência.

A ligação é iniciada pela adição de 200 μΐ de homogenado (450 μg/ml de teor de proteína); depois da incubação, as membranas foram filtradas em filtros de fibra de vidro (GF/B) (Unifilter, Packard) tratadas com 0,3 % de polietilenoimina. Depois os filtros foram lavados com solução tampão e secados em estufa por 30 minutos a 45° C. O líquido de cintilação foi adicionado a cada reservatório e 10 horas mais tarde a radioatividade foi medida por 1 minuto usando um TopCount (Packard). Os compostos de teste

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foram testados em duplicata em 8 concentrações (de 10" a 10"J M). Os valores de IC50 para cada composto foram calculados usando a análise de regressão não linear (software PRISM da GraphPad) e as constantes de inibição Ki foram determinadas usando a equação descrita por Cheng Y. e Prussof W. H. (1973) "Relationship between the inhibition constant (Ki) and the concentration of inhibitor which causes 50 percent inhibition (150) of an enzyme reaction." Biochem. Pharmacol. 22: 3099-3108.

Teste B

A ligação ao receptor 5-HTiA de serotonina foi efetuada usando métodos padrão descritos em Martin G. R. e Humphrey Ρ. P. A. (1994) "Receptor for 5-hydroxytryptamine: current perspectives on classification and nomenclature." Neuropharmacol. 33: 261-273 e em May J. A., McLaughlin Μ. A., Sharif Ν. A., Hellberg M. R. e Dean T. R. (2003) "Evaluation of the ocular hypotensive response of serotonin 5-HT)A e 5-HT2 receptor ligands in conscious ocular hypertensive cynomolgus monkeys." J. Pharmacol. Exp. Ther. 306(1): 301-309. As células CHO recombinantes para a expressão da enzima humana e metergolina como composto de referência foram usados como o material de partida.

Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ. A ligação ao receptor 5-HTm de serotonina foi efetuada

usando métodos padrão descritos em Hoyer D., Engel G. e Kalkman H.O. (1985) "Characterization of the 5-HTm recognition site in rat brain: binding studies with (-)[ 125Ijiodocyanopindolol." Eur. J. Pharmacol. 18: 1-12. Um homogenado de córtex cerebral de rato Wistar foi usado como material de partida e serotonina como composto de referência. Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ.

A ligação ao receptor 5-HTiB de serotonina foi efetuada usando a metodologia padrão descrita em: Heuring R. E. e Peroutka S. J. (1987) "Characterization of a novel 3H-5-hydroxytryptamine binding site subtype in bovine brain membranes." J. Neurosci. 7(3): 894-903. Um homogenado de caudatum cerebral bovino foi usado como material de partida e serotonina como composto de referência. Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ.

A ligação ao receptor 5-HT2a de serotonina humana foi

efetuada pela metodologia padrão descrita em Bonhaus D. W., Bach C., De Souza A., Salazar F. H., Matsuoka B. D., Zuppan P., Chan H. W., Eglen R. M. (1995) "The pharmacology and distribution of human 5- hydroxytryptamina2B (5-HT2b) receptor gene products: comparison with 5- HT2a and 5-HT2C receptors." Br. J. Pharmacol. 115(4): 622-628; e Saucier C., Albert P. R. (1997) "Identification of a endogenous 5-hydroxytryptamina2A receptor in NIH-3T3 cells: agonist-induced down-regulation involves decreases in receptor RNA and number." J. Neurochem. 68(5): 1998-2011. Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ e depois em seis concentrações para encontrar os valores pKi dos compostos individuais.

A ligação ao receptor 5-HT28 de serotonina foi efetuada usando a metodologia padrão descrita em Bonhaus D. W., Bach C., De-Souza A., Rich Salazar F. H., Matsuoka B. D., Zuppan P., Chan H. W. e Eglen R. M. (1995) "The pharmacology and distribution of human 5- hydroxytryptamina2B (5-HT2B) receptor gene products: comparison with 5- HT2a e 5-HT2C receptors." Br. J. Pharmacol. 115: 622-628. As células recombinantes CHO-Kl para a expressão da enzima humana foram usadas como material de partida e cetanserina como composto de referência. Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ.

A ligação ao receptor 5-HT2C de serotonina foi efetuada usando a metodologia padrão descrita em: Wolf W. A. e Schutz J. S. (1997) "The serotonin 5-HT2C receptor is a prominent serotonin receptor in basal ganglia: evidence from functional studies on serotonin-mediated phosphoinositide hydrolysis." J. Neurochem. 69: 1449-1458. As células recombinantes CHO-Kl para a expressão da enzima humana foram usadas como material de partida e SB242084 como composto de referência. Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ e depois em seis concentrações para encontrar os valores de pKi dos compostos individuais.

A ligação ao receptor 5-HT3 de serotonina foi efetuada usando a metodologia padrão descrita em: Boess F. G., Steward L. J., Steele J. A., Liu D., Reid J., Glencorse T. A. e Martin I. L. (1997) "Analysis of the ligand binding site of the 5-HT3 receptor using site-directed mutagenesis: importance of glutamate 106." Neuropharmacology 36: 637-647 e em Millerk W. E., Fletcher P. W. e Teitler M. (1992) "Membrana-bound and solubilized brain 5- HT3 receptor: improved radioligand binding assay using bovine area postrema or rat cortex and the radioligand [3H]GR65630, [3H]BRL43694 and [3H]LY278584." Synapse 11: 58-66. As células recombinantes HEK293 para a expressão da enzima humana foram usadas como material de partida e MDL-72222 como composto de referência. Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ. A ligação ao receptor 5-HT4 de serotonina foi efetuada usando

a metodologia padrão descrita em: Grossman C. J., Kilpatrick G. J. e Bunce Κ. T. (1993) "Development of a radioligand binding assay for 5-HT4 receptors in guinea-pig and rat brain." Br. J. Pharmacol. 109: 618-624. Um homogenado do estriado cerebral de porquinho da índia foi usado como material de partida e RS-23597190 como composto de referência. Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ.

A seletividade dos compostos de teste quanto ao receptor 5- HT4ihl de células recombinantes humanas foi determinada usando um procedimento derivado da metodologia padrão descrita em Mialet J., Berque- Bestel I., Eftekhari P., Gastineau M., Giner M., Dahmoune Y., Donzeau- Gouge P., Hoebeke J., Langlois M., Sicsic S., Fischmeister R. e Lezoualc'h F. (2000) "Isolation of the serotoninergic 5-ΗΤ4(6) receptor from human heart and comparative analysis of its pharmacological profile in C6-glial and CHO cell lines." Br. J. Pharmacol. 129: 771-781.

A ligação ao receptor 5-HT4(b) foi efetuada usando uma preparação de células recombinantes HEK293 para o receptor 5-HT4(b) humano como material de partida. No dia do experimento, um grânulo celular armazenado a -80° C foi descongelado e mantido em gelo. O grânulo foi depois homogeneizado em tampão (25 mM de Tris-HCl pH 7,4; 0,1 mM de EDTA) e a suspensão foi centrifugada a 30000 g por 20 minutos. O grânulo foi lavado três vezes em tampão de lavagem e finalmente recolocado em suspensão em tampão de incubação (25 mM de Tris-HCl pH 7,4; 0,5 mM de EDTA; 10 mM de MgSO4) a uma concentração final de aprox. 6 χ IO5 células/ml. estudos de deslocamento foram conduzidos usando 0,2 nM de [3H]-GR113808 como radioligando. Esta concentração foi selecionada com base nos estudos de saturação usando várias concentrações de radioligando (de 0,02 nM a 2,5 nM). A ligação não específica foi medida na presença de 10 μΜ de Piboserod. O ensaio foi realizado em um volume total de 250 μΐ de tampão 25 mM de Tris-HCl pH 7,4; 0,5 mM de EDTA; 10 mM de MgSO4 com incubação por 2 horas a 27° C. Os compostos de teste foram dissolvidos em DMSO e depois diluídas em tampão (concentração final de DMSO iguala 0,01 %) e plaqueados em placas de 96 reservatórios. Piboserod foi usado como composto de referência. A ligação foi iniciada pela adição de 200 μΐ de homogenado celular (35 a 92 μg/ml de teor de proteína); depois da incubação, as membranas foram filtradas em filtros de fibra de vidro (GF/B) (Unifilter, Packard) tratados com 0,1 % de polietilimina. Depois os filtros foram lavados com tampão e secados em estufa por 30 minutos a 45° C. O líquido de cintilação foi adicionado a cada reservatório e 16 horas mais tarde a radioatividade foi medida por 1 minuto usando um TopCount (Packard). A concentração de proteína foi determinada usando o método BCA (Pierce) com BSA como padrão. Os compostos de teste foram testados em duplicata em 8

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concentrações (de 10" a 10° M), os valores IC50 foram calculados para cada composto usando a análise da regressão não linear (software PRISM da GraphPad) e as constantes de inibição Ki foram determinadas usando a equação descrita por Cheng Y. e Prussof W. H. (1973) "Relationship between the inhibition constant (Ki) and the concentration of inhibitor which causes 50 percent inhibition (150) of an enzyme reaction." Biochem. Pharmacol. 22: 3099-3108.

A ligação ao receptor 5-HT5(A) de serotonina foi efetuada usando a metodologia padrão descrita em Rees S., den Daas I., Foord S., Goodson S., Bull D., Kilpatriele G. e Lee M. (1994) "Cloning and characterization of the human 5-HT5A serotonin receptor." FEBS Lett. 355: 242-246. As células recombinantes CHO-Kl para a expressão da enzima humana foram usadas como material de partida e metiotepina como composto de referência. Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ. A ligação ao receptor 5-HT6 de serotonina foi efetuada usando

a metodologia padrão descrita em Monsma F. J. Jr, Shen Y., Ward R. P., Hamblin M. W. e Sibley D. R. (1993) "Cloning and expression of a novel serotonin receptor with high affmity for tricyclic psychotropic drugs." Mol. Pharmacol. 43: 320-327. As células recombinantes HeLa para a expressão do receptor humano foram usadas como material de partida e metiotepina como composto de referência. Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ.

A ligação ao receptor 5-FH7 de serotonina foi efetuada usando a metodologia padrão descrita em Roth B. L, Craigo S. C., Choudhary M. S., Uluer S., Monsma F. J. Jr, Shen Y., Meltzer Η. Y. e Sibley D. R. (1994) "Binding of typical and atypical antipsychotic agents to 5-hydroxytryptamina-6 and 5- hydroxytryptamine-7 receptors." J. Pharmacol. Exp. Ther. 268: 1403-1410 e em Shen Y., Monsma F. J. Jr, Metcalf Μ. A., Jose Ρ. A., Hamblin M. W. e Sibley D.

R. (1993) "Molecular cloning and expression of a 5-hydroxytryptamine 7 serotonin receptor subtype." J. Biol. Chem. 268: 18200-18204. As células recombinantes CHO para a expressão do receptor humano foram usadas como material de partida e metiotepina como composto de referência. Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ. A ligação ao transportador de serotonina foi efetuada usando a

metodologia padrão descrita em Shearman L. P., McReynolds A. M., Zhou F. C., Meyer J. S. (1998) "Relationship between [125I]TI-55-labeled cocaine binding sites and the serotonin transporter in rat placenta." Am. J. Physiol. 275(6 Pt 1): C1621-1629 e em Wolf W. A. e Kuhn D. M. (1992) "Role of essential sulfhydril groups in drug interactions at the neuronal 5-HT transporter. Differences between amphetamines and 5-HT uptake inhibitors." J. Biol. Chem. 267(29): 20820-20825. As células recombinantes HEK293 para a expressão do sistema de transporte humano foram usadas como material de partida e fluoxetina como composto de referência. Os compostos de teste foram testados em duplicata em uma única concentração de 1 μΜ.

O ensaio celular de incorporação de serotonina foi efetuada usando a metodologia padrão descrita em Gu H., Wall S. e Rudnick G. (1994) "Stable expression of biogenic amine transporter reveals differences in inhibitor sensitivity, kinetics and ion dependence." J. Biol. Chem. 269(10): 7124-7130. As células HEK293 foram usadas e fluoxetina como composto de referência. Os compostos de teste foram testados em duplicata, em uma única concentração de 10 μΜ.

Teste C

Camundongos CD-I machos pesando de 25 a 30 g foram usados para o teste de convulsão de cabeça no camundongo. Os animais foram tratados intraperitonealmente com os compostos de teste (5 mg/kg) colocados em suspensão em metilcelulose (MTC). Os animais de controle foram tratados apenas com o veículo (MTC) pela mesma via.

Meia hora depois do tratamento com os compostos de teste, os animais foram administrados com uma injeção intraperitoneal de 5- hidroxitriptofano (5-HTP; 300 mg/kg), precursor da serotonina, com o propósito de induzir a "convulsão de cabeça", uma agitação característica da cabeça induzida nos animais pelo aumento nos níveis centrais de serotonina.

O número de convulsões de cabeça, que constitui o parâmetro para a avaliação da resposta serotoninérgica, foi medido no intervalo de 24 a 26 minutos depois da administração de 5-HTP.

Como mostrado na Fig. 1, os compostos da invenção induzem uma redução no número de convulsões de cabeça comparada com os animais tratados apenas com MTC, demonstrando a capacidade para antagonizar os efeitos serotoninérgicos induzidos pela administração de 5-HTP.

Claims

1. Composto de 2-alquil-indazol, caracterizado pelo fato de que é da fórmula geral (I): <formula>formula see original document page 65</formula> onde X é -C(0)N(R5)-ou -N(R5)C(0)-; Y é CH ou N; W é CH ou N; contanto que pelo menos um de Y e W seja um átomo de nitrogênio; η é um número inteiro selecionado de O, 1, 2 e 3; m é um número inteiro selecionado de O, 1, 2 e 3; ρ é um número inteiro selecionado de O, 1 e 2; Rl é H, alquila C^3, alcóxi C].3, alquila Ci_3-CO-, COOH, R'R"NCO-, R'R"NS02-, R'SO2-, halogênio, R'R"N- ou R'CON(R")-; R2 é alquila Cl-6 linear ou ramificado, alquila Ci_3-alcóxi Ci_3, aril-alquila Ci_3 em que o grupo arila pode ser substituído com 1 ou 2 substituintes selecionados de halogênio, alquila Cj.3 e alcóxi Ci_3; R3 e R4, que podem ser os mesmos ou diferentes, são H, hidróxi, alquila Ci_3, alcóxi Ci_3, R'R"N-, nitro, halogênio, trifluorometila ou R'CON(R")-; R5 é H, alquila Ci_3, alcóxi Ci_3 ou, junto com R6, forma um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R6, junto com R5 ou R7, forma um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R7 é H, alquila Cl-6 linear ou ramificado, aril-alquila C1.3, em que o grupo arila pode ser substituído com 1 ou 2 substituintes selecionados de halogênio, alquila Ck3, hidróxi, alcóxi C1.3, nitro, trifluorometila e R'R"N-, ou R7, junto com R6, forma um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R' e R", que podem ser os mesmos ou diferentes, são H ou alquila CV3; e seus sais de adição com ácidos orgânicos e inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o ácido orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável é selecionado do grupo que compreende ácido oxálico, maleico, metanosssulfônico, paratoluenosssulfônico, succínico, cítrico, tartárico, láctico, clorídrico, fosfórico e sulfürico.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que X é -C(0)N(R5)-; Y é CH ou N; W é CH ou N; contanto que pelo menos um de Y e W seja um átomo de nitrogênio; η é um número inteiro selecionado de 1, 2 e 3; m é um número inteiro selecionado de O, 2 e 3; ρ é um número inteiro selecionado de 1 e 2; Rl é H, metila ou metóxi; R2 é metila, etila, isopropila ou metoxietila; R3 é H, 4-hidróxi, 4-metóxi, 3-cloro ou 4-fluoro; R4 é H ou 2-fluoro; R5 é Η, metila, metóxi ou, junto com R6, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R6, junto com R5 ou R7, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R7 é H, etila, feniletila, 4-fluorofeniletila, 2,4-difluorofeniletila ou, junto com R6, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina.

4. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que X é -N(R5)C(0)-; Y é CH; W é N; η é um número inteiro selecionado de 0 e 1; m é 2; pé 2; Rl é H, metila ou metóxi; R2 é metila, etila, isopropila ou metoxietila; R3 é H, 4-hidróxi, 4-metóxi, 3-cloro ou 4-fluoro; R4 é H ou 2-fluoro; R5 é H, metila, ou metóxi; R6, junto com R7, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R7, junto com R6, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina.

5. Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que X é -C(0)N(R5)-, Y é CH; W é Ν; η é um número inteiro selecionado de 1 e 2; m é 2; ρ é um número inteiro selecionado de 1 e 2; Rl é H ou metóxi; R2 é metila ou metoxietila; R3 é H, 4-hidróxi, 4-metóxi ou 4- fluoro; R4 é H ou 2-fluoro; R5 é H ou, junto com R6, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R6, junto com R5 ou R7, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R7 é H, etila, ou, junto com R6, forma um anel saturado de 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina.

6. Método para preparar (i) um composto de 2-alquil-indazol1 a) a condensação de uma da fórmula (I) em que RI, R2, R3, R4, R6, R7, X, Y, W, n, p, e m têm os significados estabelecidos previamente na reivindicação 1, ou (ii) um sal do mesmo com um ácido orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo fato de que ele compreende:1a) a condensacão de uma amina da fórmula (II) <formula>formula see original document page 68</formula> onde Y, W, R3, R4, R5, R6, R7, n, m e ρ têm os significados estabelecidos previamente na reivindicação 1, com um derivado de um ácido indazolcarboxílico da fórmula (III) <formula>formula see original document page 68</formula> onde Rl e R2 têm os significados estabelecidos previamente na reivindicação 1, e Z é selecionado do grupo que compreende um átomo de halogênio, preferivelmente Cl ou Br, um grupo OR e OC(O)R, onde R é um grupo alquila linear ou ramificado, tendo de 1 a 6 átomos de carbono, para fornecer um composto de 2-alquil-indazol da fórmula geral (I) em que RI, R2, R3, R4, R6, R7, X, Y, W, n, p, e m têm os significados estabelecidos previamente na reivindicação 1; ou lb) a reação de uma amina da fórmula geral (IV): <formula>formula see original document page 69</formula> onde R1, R2, R5, R6, R7, Υ, η e ρ têm os significados estabelecidos previamente na reivindicação 1, com um composto da fórmula geral (V): <formula>formula see original document page 69</formula> (V) em que R3, R4 e m têm os significados estabelecidos previamente na reivindicação 1, e Q é um grupo de partida selecionado do grupo que compreende um átomo de halogênio, preferivelmente Cl ou Br, um grupo mesilato (MeSO3-) e um grupo tosilato (p-MePhS03-), para fornecer um composto de 2-alquil-indazol da fórmula geral (I) em que RI, R2, R3, R4, R6, R7, X, Y, W, n, p, e m têm os significados estabelecidos previamente na reivindicação 1; ou 1c) a condensação de uma amina da fórmula geral (VI); <formula>formula see original document page 70</formula> RI, R2 e R5 têm os significados estabelecidos previamente na reivindicação 1, com um derivado de um ácido carboxílico da fórmula geral (VII); (Vll) onde R3, R4, R6, R7, Y, W, n, m, e ρ têm os significados estabelecidos previamente na reivindicação 1, e Z tem os significados estabelecidos previamente em relação ao composto da fórmula (III) para fornecer um composto de 2-alquil-indazol da fórmula geral (I) em que RI, R2, R3, R4, R6, R7, X, Y, W, n, p, e m têm os significados estabelecidos previamente na reivindicação 1; e 2) a formação opcional de um sal de adição de ácido do composto 2-alquilindazol da fórmula geral (I) desse modo obtido com um ácido orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável.

7. Intermediário, caracterizado pelo fato de que é da fórmula (II): <formula>formula see original document page 70</formula> em que R3 e R4, que podem ser os mesmos ou diferentes, são H, hidróxi, alquila C].3, alcóxi Ci_3, R'R"N-, nitro, halogênio, trifluorometila ou R'CON(R")-, contanto, entretanto, que R3 e R4 não sejam ambos um átomo de H, R5 é alquila Ci_3, R6 e R7, juntos, formam um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina, Y é CH, W é N, η é um número inteiro selecionado de 1, 2 e 3, ρ é um número inteiro selecionado de 0 e 1, m é 2. R' e R", que podem ser os mesmos ou diferentes, são H ou alquila C].3.

8. Intermediário, caracterizado pelo fato de que é da fórmula (IV): <formula>formula see original document page 71</formula> em que Y é CH ou N; η é um número inteiro selecionado de 0, 1, 2 e 3; pé um número inteiro selecionado de 0, 1, 2 e 3; Rl é H, alquila C,.3, alcóxi Cj.3, alquila C,.3-CO-, COOH, R'R"NCO-, R'R"NS02-, R'S02, halogênio, R'R"N- ou R'CON(R")-; R2 é alquila C1-6 linear ou ramificado, alquila Ci_3-alcóxi Ci.3, aril-alquila Ci_3 em que o grupo arila pode ser substituído com 1 ou 2 substituintes selecionados de halogênio, alquila Ci_3 e alcóxi C].3; R5 é Η, alquila Ci_3, alcóxi C1.3 ou, junto com R6, forma um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R6, junto com R5 ou R7, forma um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R7 é H, alquila Cl-6 linear ou ramificado, aril-alquila Ci_3, em que o grupo arila pode ser substituído com 1 ou 2 substituintes selecionados de halogênio, alquila C1.3, hidróxi, alcóxi C^3, nitro, trifluorometila e R'R"N-, ou alternativamente R7, junto com R6, forma um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina; R' e R", que podem ser os mesmos ou diferentes, são H ou alquila Cj.3.

9. Intermediário, caracterizado pelo fato de que é da fórmula <formula>formula see original document page 72</formula> em que Rl é alquila Ck3, alcóxi Ci_3, alquila C1.3-CO-, COOH, R'R"NCO-, R'R"NS02-, R'SO2-, halogênio, R'R"N- ou R'CON(R")-; R2 é alquila Cl-6 linear ou ramificado, alquila Ci.3-alcóxi Ci_3, aril-alquila C^3 em que o grupo arila pode ser substituído com 1 ou 2 substituintes selecionados de halogênio, alquila C 1.3 e alcóxi C,.3; e R5 é H, alquila C 1.3 ou alcóxi C 1.3.

10. Intermediário caracterizado pelo fato de que é da fórmula (XX): <formula>formula see original document page 73</formula> onde Tj é H, alquila Cj.3 ou alcóxi Cj_3 ou R-CO em que R é H ou alquila C1.3, R3 e R4, que podem ser os mesmos ou diferentes, são H, hidróxi, alquila C)_3, alcóxi C]_3, R’R”N-, nitro, halogênio, trifluorometila ou R’CON(R”)-, onde R’ e R”, que podem ser os mesmos ou diferentes, são H ou alquila C]_3; contanto, entretanto, que R3 e R4 não sejam ambos um átomo de H, R6 e R7, juntos, formam um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina, YéCH, WéN, n é um número inteiro selecionado de 1, 2 e 3, p é um número inteiro selecionado de 0, 1 e 2, e m é 2.

11. Intermediário, caracterizado pelo fato de que é da fórmula geral (XXX): <formula>formula see original document page 73</formula> (XXX) onde RI é H, alquila Ci_3, alcóxi Ci_3, alquila Ci_3-CO-, COOH, R’R”NCO-, R’R,,NS02-, R’S02-, halogênio, R’R”N- ou R’CON(R”)-, R2 é alquila Cl-6 linear ou ramificado, alquila C^-alcóxi C^3, aril-alquila C]_3 em que o grupo arila pode ser substituído com 1 ou 2 substituintes selecionados de halogênio, alquila C 1.3 e alcóxi C 1.3, T2 é H, um grupo de proteção (P) selecionado do grupo que compreende 9-fluorenilmetilcarbamato, terc-butilcarbamato, alilcarbamato, N-benzila e N-benzilideno, ou um grupo R-CO em que R é alquila C1-3, R5 e R6, juntos, formam um anel saturado de 5 ou 6 membros selecionado do grupo que compreende pirrolidina, imidazolina, pirazolidina, piperidina e piperazina, Y é CH, η é um número inteiro selecionado de 1, 2 e 3, e ρ é um número inteiro selecionado de 0, 1 e 2.

12. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma dose eficaz de pelo menos um composto de 2-alquil-indazol da fórmula (I) em que RI, R2, R3, R4, R6, R7, X, Y, W, n, p, e m têm os significados estabelecidos na reivindicação 1, ou de um sal do mesmo com um ácido orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável, e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

13. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que ela compreende uma quantidade de composto de 2-alquil-indazol da fórmula (I), ou de seu sal farmaceuticamente aceitável de adição de ácido, tal como para fornecer um nível de administração de 0,0001 a 100 mg/kg/dia.

14. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que ela compreende uma quantidade de composto de 2-alquil-indazol da fórmula (I), ou de seu sal farmaceuticamente aceitável de adição de ácido, tal como para fornecer um nível de administração de 0,001 a 50 mg/kg/dia.

15. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação .14, caracterizada pelo fato de que ela compreende uma quantidade de composto de 2-alquil-indazol da fórmula (I), ou de seu sal farmaceuticamente aceitável de adição de ácido, tal como para fornecer um nível de administração de 0,01 a 10 mg/kg/dia.

16. Uso de uma composição farmacêutica como definida em qualquer uma das reivindicações de 12 a 15, caracterizado pelo fato de ser para tratar um estado patológico selecionado do grupo que compreende distúrbios do sono, esquizofrenia, ansiedade, distúrbios dos músculos lisos tanto do sistema gastrointestinal quanto do sistema cardiovascular.