BRPI0906444B1

BRPI0906444B1 - compostos de 4-piridinona, composição farmacêutica que os compreende, bem como uso dos mesmos

Info

Publication number: BRPI0906444B1
Application number: BRPI0906444-3A
Authority: BR
Inventors: Robert M.Borzilleri; Zhen-wei Cai
Original assignee: Bristol-Myers Squibb Company
Priority date: 2008-01-23
Filing date: 2009-01-22
Publication date: 2021-03-16
Also published as: BRPI0906444A8; WO2009094417A1; CA2713111C; AU2009206440B2; US20120114643A1; US20110034416A1; PT2235002E; CO6230986A2; US8258118B2; JP2011510087A; BRPI0906444B8; CN101977906B; CA2713111A1; NZ586630A; PL2235002T3; ZA201005248B; US8124768B2; ES2398335T3; EP2235002B1; DK2235002T3

Abstract

COMPOSTOS DE 4-PIRIDINONA, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA QUE OS COMPREENDE, BEM COMO USO DOS MESMOS. A presente invenção refere-se a compostos de fórmula (I) e sais dos mesmos. Também, refere-se a métodos para usar os compostos no tratamento de doenças proliferativas, tal como câncer, e composições farmacêuticas compreendendo ao menos um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável.

Description

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se em linhas gerais aos compostos de 4-piridinona e sais dos mesmos, a métodos para usar tais compostos no tratamento de doenças incluindo câncer, e composições farmacêuticas compreendendo ao menos um dos ditos compostos ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Met, também referido como receptor do fator de crescimento de hepatócito (HGFR), é expresso predominantemente em células epiteliais, mas também foi identificado em células endoteliais, mioblastos, células he- matopoiéticas e neurônios motores. A superexpressão do fator de crescimento de hepatócito e da ativação de Met esteve associada com o início e progressão em um número de diferentes tipos de tumores bem como na promoção de doença metastática.

O Pedido de Patente Publicada US 2005/0245530 A1 descreve compostos de heterociclo monocíclico que inibem a atividade da proteína tirosina quinase de receptores de fator de crescimento tal como Met, assim tornando-os úteis como agentes anticâncer. Como se pode apreciar, permanece uma necessidade por compostos anticâncer que sejam úteis para tratar câncer ativado por Met e que vantajosamente tenham atividade contra outras rotas de câncer.

Os requerentes encontraram um potente composto que tem atividade contra cânceres dependentes da ativação de Met e também que tem atividade contra cânceres como um inibidor de VEGFR. Os requerentes também descobriram profármacos do composto úteis para a administração do composto em uma forma mais solúvel. É agora possível fornecer compostos com diferentes perfis farmacológicos se comparado a compostos anticâncer atualmente conhecidos para tratar cânceres ativados por Met, e que têm estabilidade, biodisponibilidade, solubilidade, índice terapêutico e valores de toxicidade que asseguram a drogabilidade.

Breve Descrição dos Desenhos A invenção é ilustrada com relação aos desenhos em anexo descritos abaixo. A figura 1 mostra atividades antitumor do Exemplo 1 e do Exemplo 2 contra xenoenxertos de carcinoma gástrico GTL-16. A figura 2 mostra atividade antitumor do Exemplo 1 dosado oralmente uma vez ao dia por 14 dias (setas denotam a dosagem) em 6,25 mpk (mg/kg), 12,5 mpk, e 25 mpk contra xenoenxertos de glioblastoma U87. A figura 3 mostra os perfis de solubilidade de pH do Exemplo 1 e do Exemplo 2.

Sumário da Invenção

São descritos os compostos de fórmula (I): G

ou sais dos mesmos, em que: G é H, -CHX-OP(=O)(OH)2, ou -CHX-OC(=O)Z; X é H ou alquila opcionalmente substituída com um ou mais dentre OH, ha- logênio, ciano, e/ou -NR1R2; Z é alquila, cicloalquila, arila, ou heterociclo opcionalmente substituído com um ou mais dentre alquila, OH, halogênio, ciano, e/ou -NR3R4; e R1, R2, R3, e R4 são independentemente H e/ou alquila.

Descreve-se também composições farmacêuticas compreendendo ao menos um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos; e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.

Ainda descreve-se um método para tratar câncer compreendendo administrar a um mamífero em necessidade dos mesmos ao menos um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

Descrição Detalhada da Invenção

Lista-se abaixo definições de vários termos usados para descrever a presente invenção. Essas definições se aplicam aos termos à medida que eles são usados por toda a especificação (a menos que eles sejam, de outra forma, limitados em casos específicos) ou individualmente ou como parte de um grupo maior.

O termo "alquila" e "alk" refere-se a um radical alcano (hidrocarboneto) de cadeia linear ou ramificada contendo de 1 a 12 átomos de carbono, preferencialmente de 1 a 6 átomos de carbono, e mais preferencialmente de 1 a 4 átomos de carbono. Os grupos "alquila" e/ou "alk" exemplificados incluem, mas não estão limitados, por exemplo, a metila, etila, propila, isopropila, n-butila, t-butila, pentila, hexila, heptila, octila, nonila, decila e dodeci- la.

O termo "alquila inferior" refere-se a um grupo "alquila" e/ou "alk" contendo de 1 a 4 átomos de carbono e preferencialmente de 1 a 2 átomos de carbono. Quando um subscrito é usado com relação a um grupo alquila ou outro, o subscrito refere-se ao número de átomos de carbono que o grupo contém. Por exemplo, o termo "C0-C4 alquila" inclui uma ligação e um grupo alquila contendo de 1 a 4 átomos de carbono, e 0 termo "Cf-04 alquila" refere-se a grupos alquila contendo 1 a 4 átomos de carbono. Os grupos de alquila inferior exemplificados incluem, mas não estão limitados, por exemplo, a metila, etila, propila, isopropila, n-butila, t-butila e isobutila.

O grupo "alquila" e/ou "alk" pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, preferencialmente 1 a 4 substituintes, em qualquer posição disponível e substituível. Os substituintes exemplificados incluem halogênio (por exemplo, um único substituinte halo ou múltiplos substituintes halo formando, no último caso, grupos tais como, por exemplo, um grupo perfluoroalquila ou um grupo alquila produzindo -CCI3 ou -CF3), hidroxila, -NH2, -NH(alquila), -N(alquil)2, e ciano.

O termo "cicloalquila" refere-se a um grupo hidrocarboneto completamente saturado contendo de 1 a 4 anéis e 3 a 8 átomos de carbono por anel. Os grupos cicloalquila exemplificados incluem, mas não estão limita- dos, por exemplo, a ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila e ciclo- heptila. O grupo cicloalquila pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, preferencialmente 1 a 4 substituintes, em qualquer ponto de conexão disponível ou substituível. Os substituintes exemplificados incluem aqueles grupos citados para alquila substituída.

O termo "arila" refere-se a grupos hidrocarboneto aromáticos cíclicos tendo de 1 a 2 anéis aromáticos, tal como, por exemplo, fenila, bife- nila ou naftila. Quando o grupo arila contém dois anéis aromáticos (por e- xemplo, bicíclico, etc.), os anéis aromáticos podem ser unidos em um único ponto (por exemplo, bifenila) ou fundidos (por exemplo, naftila e fenantrení- la). O grupo arila pode ser opcionalmente substituído com um ou mais subs-tituintes, preferencialmente 1 a 5 substituintes, em qualquer posição de anel disponível e substituível, ou onde a valência permite em quaisquer anéis fundidos ou acoplados a esses. Os substituintes exemplificados incluem alquila e aqueles grupos citados para alquila substituída.

Os termos "heterociclo" e "heterocíclico" referem-se a grupos cíclicos não aromáticos ou aromáticos (isto é, "heteroarila") completamente saturados, parcialmente saturados ou completamente insaturados que são, por exemplo, sistemas de anel bicíclico de 7 a 11 membros ou monocíclicos de 3 a 7 membros tendo ao menos um heteroátomo em ao menos um anel contendo um átomo de carbono. Cada anel do heterociclo, heterocíclico contendo o heteroátomo pode ter 1, 2, 3, ou 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e/ou S, onde os heteroátomos N e/ou S podem opcionalmente ser oxidados e os heteroátomos N podem ser opcionalmente quaternizados. Um heterociclo ou grupo heterocíclico pode ser acoplado ao restante da molécula em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono do anel ou sistema de anel. O heterociclo ou grupo heterocíclico pode ser substituído em qualquer ponto de conexão disponível com ao menos um substituinte, preferencialmente 1 a 4 substituintes, selecionados a partir de alquila e aqueles citados para alquila substituída.

Os heterociclos ou heterocíclicos monocíclicos incluem, mas não estão limitados, por exemplo, a óxido de etileno, azetidinila, pirrolidinila, pir- rolila, pirazolila, oxetanila, pirazolinila, imidazolila, imidazolinila, imidazolidini- la, oxazolila, oxazolidinila, isoxazolinila, isoxazolila, tiazolila, tiadiazolila, tia- zolidinila, isotiazolila, isotiazolidinila, furila, tetra-hidrofurila, tienila, oxadiazolila, piperidinila, piperazinila, 2-oxopiperazinila, 2-oxopiperidinila, 2- oxopirrolodinila, 2-oxoazepinila, azepiπila, hexa-hidrodiazepinila, 4- piperidoπila, piridila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, triazinila, triazolila, tetrazolila, tetra-hidropiranila, morfolinila, tiamorfolinila, sulfóxido de tiamorfo- linila, tiamorfolinil sulfona, 1,3-dioxolano, e tetra-hidro-1,1-dioxotienila.

Os heterociclos, ou heterociclicos biciclicos exemplificados incluem, mas não estão limitados, por exemplo, a indolila, isoindolila, benzoti- azolila, benzodioxolila, benzoxazolila, benzoxadiazolila, benzotienila, quinu- clidinila, quinolinila, tetra-hidroisoquinolínila, isoquinolinila, benzimidazolila, benzopiranila, indolizinila, benzofurila, benzofurazanola, cromonila, coumari- nila, benzopiranila, cinolinila, quinoxalinila, indazolila, pirrolopiridila, furopiri- dinila, tal como, por exemplo, furo[2,3-c]piridinila, furo[3,2-b]piridinila], e fu- ro[2,3-b]piridinila; di-hidrobenzodioxinila; di-hidrodioxidobenzotiofenila; di- hidroisoindolila; di-hidroindolila; di-hidroquinolinila; di-hidroquinazolinila, tal como, por exemplo, 3,4-di-hidro-4-oxo-quinazolinila; triazinüazepinila; e tetra- hidroquinolinila.

A frase "terapeuticamente eficaz" é destinada a qualificar a quantidade de cada agente, que alcançará o objetivo de otimizar a gravidade do distúrbio e a frequência de incidência ao longo do tratamento de cada agente independente, enquanto evitando efeitos colaterais tipicamente associados com terapias alternativas. Por exemplo, os agentes anticâncer eficazes prolongam a sobrevida do paciente, inibem rapidamente a proliferação do crescimento celular associado com o neoplasmo, ou efetuam a regressão do neoplasma.

Os compostos de Fórmula (I) formam sais que estão também dentro do escopo desta invenção. O termo "sal(ais)”, como empregado aqui, denota sais ácidos e/ou básicos com ácidos e bases orgânicos e/ou inorgâ-nicos. Em adição, quando um composto de fórmula (I) contém tanto uma porção básica, tal como, mas não limitada a um grupo piridinila, quanto uma porção ácida, tal como, mas não limitada a um grupo di-hidrogênio fosfato, zwitterions ("sais internos") podem ser formados e estão incluídos dentro do termo "sal(ais)", como usado aqui. Sais farmaceuticamente aceitáveis (isto é, não tóxicos, fisiologicamente aceitáveis) são preferenciais, embora outros sais sejam também úteis, por exemplo, em etapas de isolamento ou purificação que podem ser empregadas durante as preparações. Os sais dos compostos de Fórmula (I) podem ser formados, por exemplo, reagindo-se um composto de fórmula (I) com uma quantidade de ácido ou base, tal como uma quantidade equivalente, em um meio tal como um no qual o sal precipita ou em um meio aquoso seguido por liofilização.

A frase "sal(ais) farmaceuticamente aceitável(áveis)", como usada aqui, a menos que de outra forma indicado, inclui saís contendo ânions ou cátions farmacologicamente aceitáveis, tal como sais cloridrato, bromidra- to, iodrato, nitrato, sulfato, bissulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, acetato, lactato, salicilato, citrato, citrato ácido, tartarato, pantotenato, bitarta- rato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, gluca- ronato, mesilato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanossulfonato, etanossulfonato, sulfato, benzenossulfonato, p-toluenossulfonato e pamoato (isto é, 1,1’-metileno-bis-(2-hidróxi-3-naftoato)).

Os compostos de Fórmula (I) formam sais que podem, por exemplo, ser usados para isolar e/ou purificar os compostos de Fórmula (I). Os sais de compostos de fórmula (I) podem ser formados, por exemplo, reagindo-se um composto de Fórmula (I) com, por exemplo, uma quantidade equivalente de ácido ou base em um meio que permita o sal formado da seguinte maneira seja, por exemplo, ou removido por precipitação, ou isolado via liofilização.

Os sais ácidos exemplificados que os compostos de Fórmula (I) podem formar com ácidos orgânicos e/ou inorgânicos incluem, mas não estão limitados, por exemplo, a sais acetato, ascorbato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, bitartarato, citrato ácido, citrato, etanossulfonato, formiato, fumarato, gentisinato, gluconato, glucaronato, glutamato, cloridrato, bromidrato, iodrato, isonicotinato, maleato, mesilato, metanossulfonato, nitra- to, pantotenato, fosfato, fosfato ácido, sacarato, salicilato, succinato, sulfato, tartarato, p-toluenossulfonato, lactato e pamoato (isto é, 1,1’-metileno-bis-(2- hidróxi-3-naftoato)). Tais sais podem ser formados de acordo com métodos conhecidos pelos versados na técnica.

Os sais básicos exemplificados que os compostos de Fórmula (I) podem formar com bases orgânicas e/ou inorgânicas incluem, mas não estão limitados, por exemplo, a sais de amónio, sais de metal alcalino, tal como, por exemplo, sais de sódio, lítio e potássio, sais de metal alcalino terroso, tal como, por exemplo, sais de cálcio e magnésio, sais formados com bases orgânicas, tal como, por exemplo, benzatinas, diciclo-hhexilamina, 2- amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol (trisamina oi tris), hidrabaminas (tal como, por exemplo, N.N-bis(de-hidroabietil) etilenodiamina), N-metil-D- glucaminas, N-metil-D-glicamidas, e f-butil aminas; sais formados com ami- noácidos tal como, por exemplo, arginina e lisina, e sais formados usando agentes, tais como, por exemplo, haletos de alquila inferior (por exemplo, cloretos, brometos e iodetos de metila, etila, propila e butila), sulfatos de di- alquila (por exemplo, sulfatos de dimetila, dietila, dibutila e diamila), haletos de cadeia longa (por exemplo, cloretos, brometos e iodetos de decila, laurila, miristila e estearila), e haletos de aralquila (por exemplo, brometos de benzi- la e fenetila) para quaternizar grupos contendo nitrogênio básicos. Tais sais podem ser formados de acordo com os métodos conhecidos pelos versados na técnica.

O termo "profármaco", como empregado aqui, denota um composto que, mediante a administração a um sujeito, passa por conversão química por processos metabólicos ou químicos para produzir o composto de Fórmula (II) ou um sal do mesmo. Várias formas de profármaco(s) são bem conhecidas na técnica. Para exemplos de tais derivados de profárma- cos, vide: a) Design of Prodrugs, editado por H. Bundgaard, (Elsevier, 1985) e Methods in Enzymology, Vol. 112, pág. 309 a 396, editado por K. Widder e outros (Academic Press, 1985); b) A Textbook of Drug Design and Development, editado por

Krosgaard-Larsen e H. Bundgaard, Capítulo 5, "Design and Application of Prodrugs," porH. Bundgaard, pp. 113 a 191 (1991); e c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8:1 a 38 (1992).

A frase "amplificação gênica", como usada aqui, significa a síntese seletiva de um fragmento de DNA que resulta em múltiplas cópias do gene Met ou fragmento do cromossomo no qual Met é codificado.

A frase "mutação de Met ativado", como usada aqui, significa uma mudança seletiva na sequência de DNA de Met resultando em uma proteína Met que é constitutivamente (isto é, permanentemente) fosforilada.

A frase "estimulação de HGF“, como usada aqui, significa a capacidade de HGF se ligar a seu receptor cognato (Met) de tal forma a ativar o receptor que resulta em uma resposta fenotípica. No caso de Met, essa pode ser proliferação celular, motilidade, diferenciação e/ou sobrevida.

O termo "paciente", como usado aqui, abrange todas as espécies de mamíferos, incluindo humanos, vacas, cavalos, cachorros e gatos; e preferencíalmente, humanos.

Em uma modalidade, os compostos de Fórmula (I):

ou sais dos mesmos são fornecidos, em que: G é H, -CHX-OP(=O)(OH)2, ou -CHX-OC(=O)Z; X é H ou alquila opcionalmente substituída com um ou mais dentre OH, ha- logênio, ciano, e/ou -NR1R2; Z é alquila, cicloalquila, arila ou heterociclo opcionalmente substituído com um ou mais dentre alquila, OH, halogênio, ciano, e/ou -NR3R4; e R1, R2, R3, e R4 são independentemente H e/ou alquila.

Em uma modalidade, o composto de Fórmula (I) ou sal do mes- mo, é fornecido em que G é H. O composto dessa modalidade tem a estrutura representada pela Fórmula (II):

O composto de Fórmula (II) pode existir na forma de enol repre-

Como usados aqui, os termos "composto de Fórmula (II)" e "composto de Fórmula (I) em que G é H" se referem ao composto de Fórmula (II) na forma ceto, na forma enol, ou em qualquer mistura compreendendo as formas ceto e enol.

Em outra modalidade, o composto de Fórmula (II) é fornecido como um sal. Exemplos de sais do composto de Fórmula (II) incluem, mas não estão limitados a sais de ácido trifluoroacético e ácido clorídrico.

Em uma modalidade, os compostos de Fórmula (I) ou sais dos mesmos são fornecidos, em que: G é -CHX-OP(=O)(OH)2 OU -CHX-OC(=O)Z; X é H OU alquila opcionalmente substituída com um ou mais dentre OH, halogênio, ciano, e/ou -NR1R2; Z é alquila, cicloalquila, arila ou heterociclo opcionalmente substituído com um ou mais dentre alquila, OH, halogênio, ciano, e/ou -NR3R4; e R1, R2, R3, e R4 são independentemente H e/ou alquila. Preferencialmente, X é H ou metila. Os compostos ou sais dos mesmos dessa modalidade são úteis como profármacos do composto de

Fórmula (II). Mediante a administração a um mamífero, os compostos dessa modalidade ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos passam por conversão química in vivo por processos metabólicos ou químicos para pro-duzir o composto de Fórmula (II). 5 Em uma modalidade, os compostos de Fórmula (I) ou sais dos mesmos, são fornecidos em que G é -CHX-OP(=O)(OH)Z; X é H ou CÍ-04 alquila opcionalmente substituída com um ou mais dentre OH, halogênio, ciano e/ou -NR1R2; e R1 e R2 são índependentemente H e/ou alquila. Os compostos dessa modalidade têm a estrutura de Fórmula (111):

Preferencialmente, X é H, metila, metila substituída, etila ou etila substituída; mais preferencialmente, X é H ou metila, e mais preferencialmente X é H. Os compostos de Fórmula (III) podem ser fornecidos como sais farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, sais etanolamina, bis- etanolamina, trisamína, bis-trisamina, ou N-metil-D-glucamina. Um exemplo de um composto de Fórmula (III) é o composto de Fórmula (llla):

que pode ser fornecido como um sal. Os sais adequados do composto de Fórmula (llla) incluem, mas não estão limitados a sais etanolamina, bis- etanolamina, trisamina, e bis-trisamina. Os compostos de Fórmula (III) ou sais dos mesmos dessa modalidade são úteis como profármacos do com- posto de Fórmula (II).

Em uma modalidade, os compostos de Fórmula (I) ou sais dos mesmos são fornecidos em que: G é -CHX-OC(=O)Z; X é H ou alquila opcionalmente substituída com um ou mais dentre OH, halogênio, ciano e/ou - NR1R2; Z é alquila, cicloalquila, arila ou heterociclo opcionalmente substituído com um ou mais dentre alquila, OH, halogênio, ciano, e/ou -NR3R4; e R1, R2, R3, e R4 são independentemente H e/ou alquila. Preferencialmente, X é H, C1-C4 alquila, ou C1-C4 alquila substituída; mais preferencialmente, H, metila, etila, metila substituída, ou etila substituída; e mais preferencialmente, H ou metila. Preferencialmente, Z é Ci-C6 alquila, C-|-C6 alquila substituída, C3-C6 cicloalquila, C3-C6 cicloalquila substituída, fenila substituída, heterociclo monocíclico ou bicíclico opcionalmente substituído. Mais preferencialmente, Z é CrCe alquila substituída com -NH2 ou heterociclo de 5 a 6 membros compreendendo um heteroátomo de nitrogênio, tal como grupos pirrolidinila e piperidinila. Os compostos de Fórmula (II) ou sais dos mesmos dessa modalidade são úteis como profármacos do composto de Fórmula (II).

Em outra modalidade, os compostos de Fórmula (I) ou sais dos mesmos, são fornecidos em que G é:

Os compostos dessa modalidade podem ser fornecidos como sais. Os compostos ou sais dos mesmos dessa modalidade são úteis como profármacos do composto de Fórmula (II).

Em uma modalidade, um composto de Fórmula (I) ou um sal do mesmo é fornecido. O dito composto é: A/-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4- di-hidropiridina-3-carboxamida (1); di-hidrogênio fosfato de (3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenilcar- bamoil)-5-(4-fluorofenii)-4-oxopiridin-1 (4/7)-il)metila (2); 2-aminopropanoato de (S)-(3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenil- carbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1 (4H)-il)metila (3); 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-(3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3- fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1(4H)-il)metiía (4); 2-amino-4-metilpentanoato de (S)-(3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3- fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1(4H)-il)metila (5); piperidina-3-carboxilato de (3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3- fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1(4H)-il)metila (6); pirrolidina-2-carboxilato de (S)-(3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluoro- fenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1(4H)-il)metila (7); pirrolidina-3-carboxilato de (S)-(3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-iloxi)-3- fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)~4-oxopiridin-1(4H)-il)metila (8); piperidina-4-carboxilato de (3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofe- nilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1(4H)-il)metila (9); piperidina-4-carboxiIato de 1-(3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-iloxi)-3- fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1 (4H)-il)etila (10); 2-amino-3-metilbutanoato de (2S)-1 -(3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3- fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fIuorofenil)-4-oxopiridin-1(4H)-il)etila (11); ou 1-metilpiperidina-4-carboxilato de (3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3- fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1 (4H)-il)metila (12).

O fator de crescimento de hapatócito (HGF), também conhecido como fator de dispersão (SF), por causa de sua capacidade de romper a formação de colônia in vitro, é uma citocina mesenquimamente derivada conhecida por induzir múltiplas respostas pleiotrópicas em células normais e neoplásicas (Sonnenberg e outros, J. Cell Biol., 123: 223 a 235 (1993); Mat- sumato e outros, Crít. Rev. Oncog., 3: 27 a 54 (1992); e Stoker e outros, Nature, 327: 239 a 242 (1987)). Essas respostas são conhecidas por incluir a proliferação tanto em células epiteliais quanto em células endoteliais, disso- ciação de colônias epiteliais em células individuais, estimulação de motilidade (motogênese) de células epiteliais, sobrevida celular, indução de morfo- gênese celular (Montesano e outros, Cell, 67: 901 a 908 (1991)), e promoção de invasão (Stella e outros, Int. J. Biochem. Cell Biol., 12: 1357 a 1362 (1999) e Stuart e outros, Int. J. Exp. Path., 81: 17 a 30 (2000)), todos pro-cessos cruciais que causam metástase. O HGF também foi relatado como promovendo a angiogênese (Bussolino e outros, J. Cell Biol., 119: 629 a 641 (1992)). Em adição, o HGF desempenha uma função crucial na regeneração de tecido, cicatrização de feridas, e processos embrionários normais, todos os quais são dependentes da motilidade e proliferação celular.

O HGF inicia esses processos fisiológicos através de ligação de alta afinidade com seu receptor cognato, o receptor de proteína tirosina qui- nase Met, um proto-oncogene identificado (Park e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 84: 6379 a 6383 (1987) e Bottaro e outros, Science, 251: 802 a 804 (1991)). A forma madura de Met consiste em uma subunidade α externa altamente glicosilada, bem como uma subunidade β com um grande domínio extracelular, um segmento transmembrana e um domínio de tirosina quinase citoplásmico. O engate de ligante induz a dimerização de Met que resulta em um receptor ativado autofosforilado. A ativação de Met promove cascatas de transdução de sinal como definido pela transfosforilação de resíduos de tirosina citoplásmicos chave responsáveis por recrutar múltiplas proteínas efeto- ras (Furge e outros, Oncogene, 19: 5582 a 5589 (2000)). Essas incluem a subunidade p85 da PI3-quinase, fosfolipase Cy (Gaul e outros, Oncogene, 19: 1509 a 1518 (2000)), proteínas adaptadoras Grb2 e She, a proteína fos- fatase SHP2 e Gab1. O último adaptador emergiu como a molécula de atracação a jusante principal que se torna tirosina fosforilada em resposta à o- cupação de ligante (Schaeper e outros, J. Cell Biol., 149: 1419 a 1432 (2000); Bardelli e outros, Oncogene, 18: 1139 a 1146 (1999) e Sachs e outros, J. Cell Biol., 150: 1375 a 1384 (2000)). A ativação de outras moléculas de sinalização foi relatada em células estimuladas por HGF, mais notavel-mente Ras, MAP quinases, STATs, ERK-1, -2, e FAK (Tanimura e outros, Oncogene 17: 57 a 65 (1998); Lai e outros, J. Biol. Chem., 275: 7474 a 7480 (2000) e Furge e outros, Oncogene, 19: 5582 a 5589 (2000)). A função de muitas dessas moléculas de sinalização foi estabelecida na proliferação celular.

Met, também referido como receptor de fator de crescimento de hepatócito (HGFR), é expresso predominantemente em células epiteliais, mas também foi identificado em células endoteliais, mioblastos, células he- matopoiéticas e neurônios motores. A superexpressão de HGF e a ativação de Met estavam associadas com o início e progressão em um número de diferentes tipos de tumor, bem como na promoção de doença metastática. A evidência inicial ligando Met a câncer foi suportada pela identificação de mutações missense no domínio de quinase, que predispõe os indivíduos a carcinomas renais papilares (PRC) e carcinomas hepatocelulares (HCC) (Lu- bensky e outros, Amer. J. Pathology, 155: 517 a 526 (1999)). As formas mu- tadas de Met também foram identificadas em câncer ovariano, HCC na infância, carcinoma gástrico, carcinoma de células escamosas no pescoço e cabeça, carcinoma de pulmão de células não pequenas, metástase colorre- tal (Christensen e outros, Cancer Res., 63: 7345 a 7355 (2003); Lee e outros, Oncogene, 19: 4947 a 4953 (2000) e Direnzo e outros, Clin. Cancer Res., 1: 147 a 154 (1995)). Em adição, mais evidência suportando a função da Met no câncer é baseada na superexpressão de HGF e receptor de Met em vários tumores incluindo carcinomas da tiroide, ovariano e pancreático. Ele também demonstrou ser amplificado em metástases do fígado de carcinomas colorretais (Rong e outros, Cancer Res., 55: 1963 a 1970 (1995); Rong e outros, Cancer Res., 53. 5355 a 5360 (1993); Kenworthy e outros, Br. J. Cancer, 66: 243 a 247 (1992) e Scarpino e outros, J. Pathology, 189: 570 a 575 (1999)). TPR-Met (uma forma ativada similar a BCR/Alb em CML) foi identificado e descrito no carcinoma gástrico humano (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 4892 a 4896 (1991)). Em pacientes com carcinoma de mama invasive e em um estudo recente em pacientes com câncer de pulmão de células não pequenas, a expressão ou do receptor ou ligante é um preditor de sobrevida diminuída, ainda ligando Met à progressão do tumor (Camp e outros, Cancer, 86: 2259 a 2265 (1999) e Masuya e outros, Br. J. Cancer, 90: 1555 a 1562 (2004)). Em geral, a maior parte dos tumores humanos e linhagens de células tumorais de origem mesenquimal expressa inapropria- damente HGFR e/ou HGF.

Numerosos dados experimentais suportam a função de HGF e Met na invasão, crescimento, sobrevida e progressão do tumor levando por fim à metástase. Pré-clinicamente, a expressão transgênica de HGF resulta em um fenótipo metastático (Takayama e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 94: 701 a 706 (1997)) e Met amplificado/superexpresso transforma espontaneamente células NIH-3T3 (Cooper e outros, EMBO J„ 5: 2623 a 2628 (1986)).

Os agentes biológicos, tal como ribozimas, anticorpos e RNA antissenso direcionados ou a HGF ou Met, se mostraram inibir a tumorogê- nese (Stabile e outros, Gene Therapy, 11: 325 a 335 (2004); Jiang e outros, Clin. Cancer Res, 9: 4274 a 4281 (2003) e Genentech US 6.214.344 (2001)). Assim, espera-se que os moduladores de quinase de pequena molécula seletivos direcionados a Met tenham potencial terapêutico para o tratamento de cânceres nos quais a ativação do receptor Met desempenha função no desenvolvimento e progressão de tumores primários e metástases secundá-rias. O HGF é também conhecido por regular a angiogênese, um processo crucial no crescimento e disseminação do tumor. Então, há um potencial para essa classe de moduladores causar impacto em doenças dependentes de angiogênese, bem como que eles podem incluir entre outros, retinopatia diabética, degeneração macular, obesidade e doença inflamatória tal como artrite reumatoide.

O composto de Fórmula (II) é útil para o tratamento de câncer, por exemplo, cânceres dependentes da ativação de Met. A ativação de Met é regulada por amplificação gênica, uma mutação de Met ativado e/ou estimulação de HGF. Assim, o tratamento compreende administrar ao paciente o composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pro- fármaco do mesmo. Concluiu-se que o composto de Fórmula (II) é especialmente útil para tratar câncer por causa da potência aumentada sobre os inibidores de Met quinase conhecidos. Ademais, o composto de Fórmula (II) é especialmente útil para o tratamento de câncer porque ele também tem atividade como um inibidor de VEGFR (receptor de fator de crescimento endometrial vascular), tal como um inibidor de VEGFR-2.

Em uma modalidade, um método é fornecido para tratar câncer compreendendo administrar a um mamífero em necessidade de tratamento um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. O método dessa modalidade pode ser usado para tratar uma variedade de cânceres, incluindo, mas não limitado a câncer de bexiga, câncer de mama, colorretal, gástrico, de cabeça e pescoço, de rim, de fígado, de pulmão, ovariano, de pâncreas/vesícula biliar, de próstata, de tiroide, osteos- sarcoma, rabdomiossarcoma, histiocitoma fibroso maligno (MFH), fibrossar- coma, glioblastomas/astrocitomas, melanoma, e mesotelioma. Preferencialmente, o método dessa modalidade é usado para tratar câncer de pulmão, de cabeça e pescoço, gástrico, ou de bexiga. Os compostos adequados para a administração no método de tratamento dessa modalidade incluem profármacos do composto de Fórmula (II), tal como os compostos de Fórmula (I) nos quais G é -CHX-OP(=O)(OH)2 ou -CHX-OC(=O)Z; X é H ou alquila opcionalmente substituída com um ou mais dentre OH, halogênio, ciano, e/ou -NR1R2; Z é alquila, cicloalquila, arila, ou heterociclo opcionalmente substituído com um ou mais dentre alquila, OH, halogênio, ciano, e/ou - NR3R4; e R1, R2, R3, e R4 são independentemente H e/ou alquila. Preferencialmente, X é H, 0,-04 alquila, ou C,-C4 alquila substituída; mais preferencialmente, H, metila, etila, metila substituída, ou etila substituída; e mais prefe-rencialmente, H ou metila. Preferencialmente, o mamífero é um humano.

Em uma modalidade, um método é fornecido para tratar câncer compreendendo administrar a um mamífero em necessidade de tratamento o composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pro- fármaco do mesmo. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pro- fármaco do mesmo pode ser administrado nesse método. O método dessa modalidade pode ser usado para tratar uma variedade de cânceres, incluindo, mas não limitados a câncer de bexiga, de mama, colorretal, gástrico, de cabeça e pescoço, de rim, de fígado, de pulmão, ovariano, de pân- creas/vesícula biliar, de próstata, de tiroide, osteossarcoma, rabdomiossar- coma, MFH/fibrossarcoma, melanoma, mesotelioma e glioblasto- mas/astrocitomas. Preferencialmente, o método dessa modalidade é usado para tratar câncer de pulmão, de cabeça e pescoço, gástrico, ou de bexiga. Preferencialmente, o mamífero é um humano.

Em uma modalidade, um método é fornecido para tratar câncer compreendendo administrar a um mamífero em necessidade de tratamento um ou mais profármacos do composto de Fórmula (II) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos ditos profármacos. Por exemplo, o método pode ser usado para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais profármacos do composto de Fórmula (II) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos ditos profármacos. Após a administração ao mamífero, um ou mais profármacos do composto de Fórmula (II) passam por conversão química in vivo por processos químicos ou metabólicos para produzir o composto de Fórmula (II). Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais profármacos refere-se à quantidade(s) de profármaco(s) administrados ne- cessária(s) para fornecer uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (II) in vivo. Preferencialmente, um profármaco é administrado no método dessa modalidade. Mais preferencialmente, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um profármaco é administrada no método dessa modalidade. Os profármacos adequados incluem os compostos de Fórmula (I) nos quais G é -CHX-OP(=O)(OH)2 ou -CHX-OC(=O)Z; X é H ou alquila opcionalmente substituída com um ou mais de OH, halogênio, ciano, e/ou -NR1R2; e Z é alquila, cicloalquila, arila, ou heterociclo opcionalmente substituído com um ou mais dentre alquila, OH, halogênio, ciano e/ou - NR3R4; e R1, R2, R3, e R4 são independentemente H e/ou alquila. Preferencialmente, X é H, 0,-04 alquila, ou C1-C4 alquila substituída: mais preferencialmente, H, metila, etila, metila substituída, ou etila substituída, e mais preferencialmente, H ou metila. O método dessa modalidade pode ser usado para tratar uma variedade de cânceres, incluindo, mas não limitados a câncer de bexiga, de mama, colorretal, gástrico, de cabeça e pescoço, de rim, de figa- do, de pulmão, ovariano, de pâncreas/vesícula biliar, de próstata, de tiroide, osteossarcoma, rabdomiossarcoma, MHF/fibrossarcoma, glioblasto- mas/astrocitomas, melanoma, e mesotelioma. Preferencialmente, o método dessa modalidade é usado para tratar câncer de pulmão, de cabeça e pescoço, gástrico, ou de bexiga. Preferencialmente, o mamífero é um humano.

Em uma modalidade, um método é fornecido para tratar câncer compreendendo administrar a um mamífero, em necessidade de tratamento, o composto de Fórmula (llla) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. O composto de Fórmula (llla) é um profármaco do composto de Fórmula (II). No presente método, uma quantidade terapeuticamente aceitável do composto de Fórmula (llla) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser administrado. Uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (llla) refere-se à quantidade do profármaco administrado necessária para fornecer uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (II) in vivo. O método dessa modalidade pode ser usado para tratar uma variedade de cânceres, incluindo, mas não limitados a câncer de bexiga, de mama, colorretal, gástrico, de cabeça e pescoço, de rim, de fígado, de pulmão, ovariano, de pâncreas/vesícula biliar, de próstata, de tiroide, osteossarcoma, rabdomiossarcoma, MHF/fibrossarcoma, glioblas- tomas/astrocitomas, melanoma, e mesotelioma. Preferencialmente, o método dessa modalidade é usado para tratar câncer de pulmão, de cabeça e pescoço, gástrico, ou de bexiga. Preferencialmente, o mamífero é um humano. Os sais farmaceuticamente aceitáveis do composto de Fórmula (llla) úteis no método dessa modalidade incluem o sal de bis-etanolamina e o sal de bis-trisamina.

Em uma modalidade, o uso de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer é fornecido. Preferencialmente, na presente modalidade, o câncer sujeito a tratamento é câncer de câncer de bexiga, de mama, colorretal, gástrico, de cabeça e pescoço, de rim, de fígado, de pulmão, ovariano, de pâncreas/vesícula biliar, de próstata, de tiroide, osteossarcoma, rabdomiossarcoma, melanoma, glioblastomas/astrocitomas, MHF/fibrossarcoma ou mesotelioma.

Em uma modalidade, um método é fornecido para tratar câncer em um mamífero em que o câncer é dependente de ativação de Met, em que a ativação de Met é regulada por amplificação gênica, uma mutação de Met ativado e/ou estimulação de HGF, compreendendo administrar ao paciente um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. O método dessa modalidade pode ser usado para tratar uma varie-dade de cânceres, incluindo, mas não limitados a câncer de bexiga, de mama, colorretal, gástrico, de cabeça e pescoço, de rim, de fígado, de pulmão, ovariano, de pâncreas/vesícula biliar, de próstata, de tiroide, osteossarcoma, rabdomiossarcoma, MHF/fibrossarcoma, melanoma, mesotelioma e glioblas- tomas/astrocitomas. Preferencialmente, o método dessa modalidade é usado para tratar câncer de pulmão, de cabeça e pescoço, gástrico ou de bexiga. Os compostos adequados para a administração no método de tratamento nessa modalidade incluem profármacos do composto de Fórmula (II), tal como os compostos de Fórmula (I) nos quais G é -CHX-OP(=O)(OH)2 ou - CHX-OC(=O)Z; X é H ou alquila opcionalmente substituída com um ou mais dentre OH, halogênio, ciano, e/ou -NR1R2; Z é alquila, cicloalquila, arila, ou heterociclo opcionalmente substituído com um ou mais dentre alquila, OH, halogênio, ciano, e/ou -NR3R4; e R1, R2, R3, e R4 são independentemente H e/ou alquila. Preferencialmente, X é H, C1-C4 alquila, ou Cq-C4 alquila substituída; mais preferencialmente, H, metila, etila, metila substituída, ou etila substituída; e mais preferencialmente, H ou metila. Preferencialmente, o mamífero é um humano. Preferencialmente, uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente eficaz do mesmo é administrado no método dessa modalidade.

Em uma modalidade, um método é fornecido para tratar câncer em um mamífero onde o câncer é dependente da ativação de Met, em que a ativação de Met é regulada por amplificação gênica, uma mutação de Met ativada e/ou estimulação de HGF, compreendendo administrar ao paciente um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco do mesmo. O método dessa modalidade pode ser usado para tratar uma variedade de cânceres, incluindo, mas não limitados a, câncer de bexiga, de mama, colorretal, gástrico, de cabeça e pescoço, de rim, de fígado, de pulmão, ovariano, de pâncreas/vesícula biliar, de próstata, de tiroide, os- teossarcoma, rabdomiossarcoma, MHF/fibrossarcoma, glioblasto- mas/astrocitomas, melanoma, e mesotelioma. Preferenciafmente, o método dessa modalidade é usado para tratar câncer de pulmão, de cabeça e pescoço, gástrico ou de bexiga. Preferencialmente, o mamífero é um humano. Preferencialmente, uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco do mesmo é administrado no método dessa modalidade.

Em uma modalidade, um método é fornecido para tratar câncer em um mamífero em que o câncer é dependente de ativação de Met, em que a ativação de Met é regulada por amplificação gênica, uma mutação de Met ativado e/ou estimulação de HGF, compreendendo administrar ao paciente um ou mais profármacos do composto de Fórmula (II) ou sais dos ditos profármacos. Após a administração ao mamífero, um ou mais profármacos do composto de Fórmula (II) passam por conversão química in vivo por processos metabólicos ou químicos para produzir o composto de Fórmula (II). Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais profármacos refere- se à quantidade(s) de profármaco(s) administrado(s) necessária para fornecer uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (II) in vivo. Preferenciaimente, um profármaco é administrado em uma quantidade terapeuticamente eficaz no método dessa modalidade. Os profármacos adequados incluem os compostos de Fórmula (I) nos quais G é -CHX- OP(=O)(OH)2 ou -CHX-OC(=O)Z; X é H ou alquila opcionalmente substituída com um ou mais dentre OH, halogênio, ciano, e/ou -NR1R2; Z é alquila, ci- cloalquila, arila, ou heterociclo opcionalmente substituído com um ou mais dentre alquila, OH, halogênio, ciano, e/ou -NR3R4; e R1, R2, R3, e R4 são independentemente H e/ou alquila. Preferencialmente, X é H, CrC4 alquila, ou CÍ-04 alquila substituída; mais preferencialmente, H, metila, etila, metila substituída, ou etila substituída; e mais preferencialmente, H ou metila. O método dessa modalidade pode ser usado para tratar uma variedade de cânceres, incluindo, mas não limitados a câncer de bexiga, de mama, colorretal, gástrico, de cabeça e pescoço, de rim, de fígado, de pulmão, ovariano, de pâncreas/vesícula biliar, de próstata, de tiroide, osteossarcoma, rabdomiossarcoma, MHF/fibrossarcoma, glioblastomas/astrocitomas, melanoma, e mesotelioma. Preferencialmente, o método dessa modalidade é usado para tratar câncer de pulmão, de cabeça e pescoço, gástrico ou de bexiga. Preferencialmente, o mamífero é um humano.

Em uma modalidade, um método é fornecido para tratar câncer em um mamífero em que o câncer é dependente da ativação de Met, em que a ativação de Met é regulada por amplificação gênica, uma mutação de Met ativada e/ou estimulação de HGF, compreendendo administrar ao paciente um composto de Fórmula (llla) ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. O composto de Fórmula (llla) é um profármaco do composto de Fórmula (II). Uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (llla) refere-se à quantidade do profármaco administrado necessária para fornecer uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (II) in vivo. Preferencialmente, uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (llla) ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos é administrada. O método dessa modalidade pode ser usado para tratar uma variedade de cânceres, incluindo, mas não limitados a câncer de bexiga, de mama, colorretal, gástrico, de cabeça e pescoço, de rim, de fígado, de pulmão, ovariano, de pâncreas/vesícula biliar, de próstata, de tiroide, osteossarcoma, rabdomiossarcoma, MHF/fibrossarcoma, glioblastomas/astrocitomas, melanoma, e mesotelioma. Preferencialmente, o método dessa modalidade é usado para tratar câncer de pulmão, de cabeça e pescoço, gástrico ou de bexiga. Preferencialmente, o mamífero é um humano.

Ao tratar câncer, uma combinação de agentes quimioterápicos e/ou outros tratamentos (por exemplo, terapia de radiação) é frequentemente vantajosa. O segundo (ou terceiro) agente pode ter o mesmo mecanismo de ação ou diferente do agente terapêutico primário. Pode ser especialmente útil empregar combinações de fármacos citotóxicos em que dois ou mais fármacos sendo administrados agem de diferentes maneiras ou em diferen- tes fases do ciclo celular, e/ou onde dois ou mais fármacos têm toxicidades ou efeitos colaterais não sobrepostos, e/ou cada um dos fármacos sendo combinados tem uma eficácia demonstrada no tratamento do estado de doença particular manifestada pelo paciente.

Em uma modalidade, um método é fornecido para tratar câncer compreendendo administrar a um mamífero, em necessidade de tratamento, um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pro-fármaco do mesmo; e administrar um ou mais agentes anticáncer adicionais.

A frase "agente anticáncer adicional" refere-se a um fármaco selecionado a partir de qualquer um ou mais dos seguintes: agentes alqui- lantes (incluindo mostardas de nitrogênio, sulfonatos de alquila, nitrosourei- as, derivados de etilenimina, e triazenos), antiangiogênícos (incluindo inibidores de matriz metaloproteinase), antimetabólitos (incluindo inibidores de adenosina deaminase, antagonistas de ácido fólico, análogos de purina, e análogos de pirimidina), antibióticos ou anticorpos (incluindo anticorpos mo- noclonais, anticorpos CTLA-4, antraciclinas), inibidores de aromatase, modificadores da resposta de ciclo celular, enzimas, inibidores de proteína farne- sil transferase, agentes hormonais e anti-hormonais e esteroides (incluindo análogos sintéticos, glicocorticoides, estrogênios/antiestrogênios (por exemplo, SERMs), androgênios/antiandrogênios, progestinas, agonistas de receptor de progesterona, e agonistas e antagonistas de liberação de hormônio luteinizante (LHRH), moduladores de sistema de fator de crescimento seme-lhante à insulina (IGF)/receptor de fator de crescimento semelhante à insulina (IGFR) (incluindo inibidores de IGFR1), inibidores de sinalização de inte- grina, inibidores de quinase (incluindo inibidores de multiquinase e/ou inibidores de Src quinase ou Src/Abl, inibidores de quinase dependente de cicli- na (CDK), anticorpos panHer, Her-1 e Her-2, inibidores de VEGF, incluindo anticorpos anti-VEGF, inibidores de EGFR, inibidores de proteína ativada por mitogênios (MAP), inibidores MEK, inibidores de Aurora quinase, inibidores de PDGF, e outros inibidores de tirosina quinase ou inibidores de seri- na/treonina quinase, agentes de rompimento de microtúbulos, tal como ec- teinascidinas ou seus análogos e derivados, agentes estabilizantes de micro- túbulos tal como taxanos, e os epotilonas ocorrendo naturalmente e seus análogos sintéticos e semissintéticos, agentes desestabilizantes de ligação de microtúbulos (incluindo alcaloides de vinca), inibidores de topoisomerase, inibidores de proteína prenil transferase, complexos de coordenação de pla- 5 tina, inibidores de transdução de sinal, e outros agentes usados como agentes anticâncer e citotóxicos ta) como modificadores da resposta biológica, fatores de crescimento e moduladores imunes.

Consequentemente, os compostos da presente invenção podem ser administrados em combinação com outros tratamentos anticâncer úteis 10 no tratamento de câncer ou outras doenças proliferativas. A invenção aqui citada adicionalmente compreende o uso do composto de Fórmula (I) ou sais farmaceuticamente aceitáveis ou profármacos dos mesmos na preparação de medicamentos para o tratamento de câncer, e/ou compreende o emba- lamento do composto de Fórmula (I) junto com instruções de que o compos- 15 to seja usado em combinação com outros agentes anticâncer ou citotóxicos e tratamentos para o tratamento de câncer. A presente invenção ainda compreende combinações do composto de Fórmula (I) e um ou mais agentes adicionais na forma de kit, por exemplo, onde eles são embalados juntos ou localizados em embalagens separadas a serem vendidas juntas como um 20 kit, ou onde eles são embalados para serem formulados juntos.

Os compostos da presente invenção podem ser formulados ou coadministrados com outros agentes terapêuticos que são selecionados para sua utilidade particular em abordar efeitos colaterais associados com as condições mencionadas anteriormente. Por exemplo, os compostos da in- 25 venção podem ser formulados com agentes para impedir náusea, hipersen- sibilidade e irritação gástrica, tal como antieméticos, e anti-histamínicos HT e Hz-

Os compostos da presente invenção podem conter um ou mais átomos de carbono assimétricos adicionais e então existem em duas ou 30 mais formas estereoisoméricas. A presente invenção inclui todos os possíveis estereoisômeros individuais, as formas tautoméricas individuais dos mesmos, junto com misturas dos mesmos.

A separação de diastereoisômeros pode ser alcançada por técnicas convencionais, por exemplo, por cristalização fracionada, cromatogra- fia ou HPLC de uma mistura estereoisomérica de um composto da presente invenção, ou um sal adequado ou derivado do mesmo. Um enantiômero individual do composto pode também ser preparado a partir de um intermediário opticamente puro correspondente ou por resolução, tal como por HPLC do racemato correspondente usando um suporte quiral adequado ou por cristalização fracionada dos sais diastereoisoméricos formados pela reação do racemato correspondente com um ácido ou base opticamente adequado, como apropriado.

Também abrangida dentro dessa invenção está uma classe de composições farmacêuticas compreendendo o composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável e profármaco do mesmo em associação com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos e/ou diluentes e/ou adjuvantes (coletivamente referidos aqui como materiais "veículos") e, se desejado, outros ingredientes ativos. Os compostos de Fórmula (I) podem ser administrados por qualquer via adequada, preferencialmente na forma de uma composição farmacêutica adaptada a tal via, e em uma dose eficaz para o tratamento pretendido. Os compostos e composições da presente invenção podem, por exemplo, ser administrados de forma oral, de mucosas, ou parental incluindo intravascular, intravenosa, intraperitoneal, subcutânea, intramuscular, intraesternal e técnicas de infusão, em formulações de unidade de dosagem contendo veículos farmaceuticamente aceitáveis convencionais, adjuvantes e veículos. Por exemplo, o veículo farmacêutico pode conter uma mistura de manitol ou lactose e celulose microcristali- na. A mistura pode conter componentes adicionais tal como um agente lubrificante, por exemplo, estearato de magnésio e um agente desintegrante tal como crospovidona. A mistura de veículo pode ser carregada em uma cápsula de gelatina ou comprimida como um comprimido.

Os compostos farmaceuticamente ativos desta invenção podem ser processados de acordo com métodos convencionais de farmácia para produzir agentes medicinais para a administração a pacientes, incluindo hu- manos e outros mamíferos.

Para administração oral, a composição farmacêutica pode estar na forma, por exemplo, de um comprimido, cápsula, suspensão ou líquido. A composição farmacêutica é preferencialmente produzida na forma de uma unidade de dosagem contendo uma quantidade particular do ingrediente ativo. Os exemplos de tais unidades de dosagem são comprimidos ou cápsulas. Por exemplo, esses podem conter uma quantidade de ingrediente ativo de aproximadamente 1 a 2000 mg, preferencialmente de aproximadamente 1 a 500 mg, mais preferencialmente de aproximadamente 5 a 150 mg. Uma dose diária adequada para um humano ou outro mamífero pode variar amplamente dependendo da condição do paciente e de outros fatores, mas, mais uma vez, pode ser determinada usando métodos de rotina.

As quantidades de compostos que são administrados e o regime de dosagem para tratar uma condição da doença com os compostos e/ou composições desta invenção dependem de uma variedade de fatores, incluindo a idade, peso, sexo e condição médica do sujeito, o tipo de doença, a gravidade da doença, a via e frequência de administração, e o composto particular empregado. Assim, o regime de dosagem pode variar amplamente, mas pode ser determinado usualmente usando métodos-padrão. Uma dose diária de aproximadamente 0,01 a 1.500 mg/kg de peso corporal, preferencialmente entre aproximadamente 0,5 e aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal e mais preferencialmente entre aproximadamente 0,1 a 20 mg/kg de peso corporal, pode ser apropriada. A dose diária pode ser administrada em quatro doses por dia.

Para propósitos terapêuticos, os compostos ativos desta invenção são geralmente combinados com um ou mais adjuvantes apropriados para a via indicada de administração. Se administrados oralmente, os com-postos podem ser misturados com lactose, sacarose, amido em pó, esteara- to de magnésio, óxido de magnésio, sais de sódio e de cálcio de ácido fosfórico e sulfúrico, gelatina, goma arábica, alginato de sódio, polivínilpirrolidona, e/ou polivinil álcool, e então formando comprimidos ou encapsulados para a administração conveniente. Tais cápsulas ou comprimidos podem conter uma formulação de liberação controlada como pode ser fornecido em uma dispersão de composto ativo em hidroxipropilmetil celulose.

A fase oleosa das emulsões compreendendo os compostos de Fórmula (I) pode ser constituída a partir de ingredientes conhecidos de uma maneira conhecida. Enquanto a fase pode compreender meramente um e- mulsificante, ela pode compreender uma mistura de ao menos um emulsifi- cante com uma gordura ou um óleo ou com ambos uma gordura e um óleo. Preferencialmente, um emulsificante hidrofílico está incluído junto com um emulsificante liofílíco que age como um estabilizante. É também preferencial incluir ambos um óleo e uma gordura. Juntos, os emulsificantes com ou sem estabilizantes formam a assim chamada cera emulsificante, e a cera junto com o óleo e a gordura formam a assim chamada base de pomada emulsificante que forma a fase oleosa dispersa das formulações em creme. Os e- mulsificantes e estabilizantes de emulsão adequados para uso na formulação da presente invenção incluem Tween 60, Span 80, cetoestearil álcool, miristil álcool, monoestearato de glicerila, lauril sulfato de sódio, diestearato de glicerila sozinho ou com uma cera, ou outros materiais bem conhecidos na técnica.

A escolha de óleos ou gorduras adequadas para a formulação é baseada em alcançar as propriedades cosméticas desejadas, desde que a solubilidade do composto ativo na maior parte dos óleos provavelmente a ser usada em formulações de emulsão farmacêutica seja muito baixa. Assim, o creme deveria preferencialmente ser um produto lavável sem coloração e não oleoso com consistência adequada para evitar vazamento de tubos ou outros recipientes. Alquil ésteres mono- ou dibásicos de cadeia simples ou ramificada, tal como di-isodipato, estearato de isocetila, propileno glicol diéster de ácidos graxos de coco, miristato de isopropila, oleato de decila, palmitato de isopropila, estearato de butila, palmitato de 2-etil-hexila ou uma mistura de ésteres de cadeia ramificada podem ser usados. Esses podem ser usados independentemente ou em combinação dependendo das propriedades exigidas. Alternativamente, lipídios com alto ponto de fusão, tal como parafina mole branca e/ou parafina líquida ou outros óleos minerais, podem ser usados.

As formulações para administração parenteral podem ser usadas na forma de soluções ou suspensões de injeção estéreis isotônicas aquosas ou não aquosas. Essas soluções e suspensões podem ser preparadas a partir de pós estéreis ou grânulos usando um ou mais dos veículos ou diluentes mencionados para uso nas formulações para administração oral ou usando outros agentes umectantes ou dispersantes adequados e agentes de suspensão. Os compostos podem ser dissolvidos em água, polietileno glicol, propileno glicol, etanol, óleo de milho, óleo de algodão, óleo de amendoim, óleo de gergelim, álcool benzílico, cloreto de sódio, goma tragacanto, e/ou vários tampões. Outros adjuvantes e modos de administração são bem e amplamente conhecidos na técnica farmacêutica. O ingrediente ativo pode também ser administrado por injeção como uma composição com veículos adequados incluindo solução salina, dextrose, ou água, ou com ciclodextrina (isto é, CAPTISOL®), solubilização com cossolvente (isto é, propileno glicol) ou solubilização micelar (isto é, Tween 80).

A preparação injetável estéril pode também ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente parenteralmente aceitável não tóxico, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Dentre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados são água, solução de Ringer, e solução de cloreto de sódio isotônica. Em adição, óleos fixos estéreis são convencionalmente empregados como um solvente ou meio de suspensão. Para esse propósito, qualquer óleo fixo brando pode ser empregado, incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos. Em adição, os ácidos graxos, tal como ácido oleico, encontram uso na preparação de injetá-veis.

As composições farmacêuticas podem ser submetidas a operações farmacêuticas convencionais, tal como esterilização e/ou podem conter adjuvantes convencionais, tal como conservantes, estabilizantes, agentes umectantes, emulsificantes, tampões, etc. Comprimidos e pílulas podem adicionalmente ser preparados com revestimentos entéricos. Tais composições podem também compreender adjuvantes, tal como agentes umectantes, a- doçantes, flavorizantes e perfumantes.

As composições farmacêuticas desta invenção compreendem o composto de Fórmula (I), ou um sal ou profármaco farmaceuticamente aceitável dos mesmos; e opcionalmente um agente adicional selecionado a partir de um agente inibidor de quinase (pequena molécula, polipeptídeo, anticorpo, etc.), um imunossupressor, um agente anticáncer, um agente antiviral, agente anti-inflamatório, agente antifúngico, antibiótico, ou um composto de hiperproliferação antivascular; e qualquer veículo, adjuvante ou veículo farmaceuticamente aceitável. As composições alternativas desta invenção compreendem um composto de Fórmula (I) descrito aqui ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e um veículo, adjuvante ou veículo farmaceuticamente aceitável. Tais composições podem opcionalmente com-preender um ou mais agentes terapêuticos adicionais, incluindo, por exemplo, agentes inibidores de quinase (pequena molécula, polipeptídeo, anticorpo, etc ), imunossupressores, agentes anticáncer, agentes antivirais, agentes anti-inflamatórios, agentes antifúngicos, antibióticos, ou compostos de hiperproliferação antivasculares.

Os veículos, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados nas composições farmacêuticas desta invenção incluem, mas não estão limitados a trocadores iônicos, alumina, estearato de alumínio, lecitina, sistemas de liberação de fármaco autoemulsificantes (SEDDS) tal como succinate de d-alfa-tocoferol polietilenoglicol 1000, tenso- ativos usados nas formas de dosagem farmacêuticas tal como Tweens ou outras matrizes de liberação polimérica similares, proteínas de soro, tal como albumina de soro humano, substâncias tampão tal como fosfates, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas de glicerídeo parcial de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, tal com sulfato de pro- tamina, di-hidrogênio fosfato dissódico, hidrogênio fosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissiiicato de magnésio, polivinil pirrolidona, substâncias baseadas em celulose, polietileno glicol, carboximetil celulose de sódio, poliacrilatos, ceras, copolímeros de bloco de polietileno- polioxipropileno, polietileno glicol e lanolina. Ciclodextrinas tal como alfa-, beta- e gama-ciclodextrina, ou derivados quimicamente modificados tal como hidroxialquil ciclodextrinas, incluindo 2- e 3-hidroxipropil-ciclodextrinas, ou outros derivados solubilizados podem também ser vantajosamente usados para intensificar a liberação de compostos das fórmulas descritas aqui. 5 Os compostos de Fórmula (I) podem ser preparados de acordo com os seguintes Esquemas 1 a 4. Os compostos são sintetizados prontamente usando métodos sintéticos conhecidos pelos versados na técnica. Os solvatos (por exemplo, hidratos e sais) dos compostos descritos estão também dentro do escopo da presente invenção. Os métodos de solvação e de 10 formação de sal são geralmente conhecidos na técnica. Consequentemente, os compostos e exemplos da presente invenção podem estar na forma livre ou de hidrato, e podem ser obtidos por métodos exemplificados nos seguintes esquemas abaixo.

O composto de Fórmula (I) pode ser prontamente preparado u- 15 sando a sequência sintética descrita no Esquema 1. A reação de 2,3- dicloropiridina (2) com difenilmetanimina (3) na presença de uma quantidade catalítica de acetato de paládio (II), BINAP racêmico (2,2’-bis(difenilfosfino)- 1,1 ’-binaftileno) e carbonato de césio em THF pode fornecer a benzofenona imina 4. A metalação-borilação-oxidação do intermediário 4, como denotado 20 no Esquema 1, pode fornecer 3-cloro-2-(difenilmetiíenoamino)piridin-4(1H)- ona (5), que pode então ser imediatamente tratada com 1,2-diflúor-4- nitrobenzeno e uma base, tal como carbonato de césio para obter o intermediário 6. A redução quimiosseletiva do substituinte nitro do intermediário 6 com, por exemplo, sulfeto de amónio em isopropanol, pode fornecer a amina 25 7. O intermediário 7 pode então ser acoplado a ácido 5-(4-fluorofeni()-4-oxo- 1,4-di-hidropiridina-3-carboxílico (8) usando reagentes de acoplamento de peptídeo padrão, tal como hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)- W,/V,A/’,A/’-tetrametilurônio (HATU) para obter o intermediário 9. A hidrólise catalisada por ácido de imina 9 pode então fornecer o Composto (II) deseja- 30 do. Esquema 1

O intermediário, ácido 5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina- 3-carboxílico (8), pode ser obtido usando a química descrita no Esquema 2. Assim, cloreto de 2-(4-fluorofenil)acetila (10) pode ser tratado com 2,2 5 dimetil-1,3-dioxano-4,6-diona (ácido de Meldrum) na presença de piridina e o aduto resultante pode ser submetido a refluxo em etanol para obter 4-(4- fluorofenil)-3-oxobutanoato de etila (12). O tratamento do intermediário 12 com triazina e etóxido de sódio em etanol pode fornecer o intermediário de éster necessário, que pode ser prontamente hidrolisado na presença de hi- dróxido de sódio em temperatura elevada para obter o intermediário 8.

O profármaco de fosfato, Composto (llla), que envolve fixar um grupo fosfato no nitrogênio de piridinona do Composto (II) via o ligante hidró- 5 ximetil autoclivável, pode ser preparado usando a via sintética descrita no Esquema 3. O tratamento do intermediário 9 com fosfato de di-terc-butil clo- rometila (13, vide: PCT WO 2005/090367) na presença de uma base, tal como carbonato de potássio em DMF, pode fornecer o intermediário 14 protegido. A desproteção global de 14 sob condições ácidas em etanol pode 10 fornecer o profármaco de fosfato desejado, Composto (llla). Esquema 3

Os aminoácidos podem também ser fixados no Composto (II) via o ligante hidróximetila, de uma maneira similar à descrita acima usando a sequência sintética no Esquema 4. Os clorometil ésteres 16, derivados dos aminoácidos N-protegidos correspondentes (usando os procedimentos des-critos em Synth. Commun., 14: 857 a 864 (1984) e Synth. Commun., 24: 767 a 772 (1994)), podem ser reagidos com o Composto (II) na presença de uma base, tal como carbonato de potássio para obter o intermediário 17. A remoção do grupo protetor de nitrogênio, nesse caso um grupo Boc (carbamato de t-butila), sob condições ácidas, pode fornecer o profármaco de éster de aminoácido desejado 18.

Exemplos

A invenção é ainda definida nos seguintes Exemplos. Dever-se- ia entender que os Exemplos são dados a título de ilustração somente. A partir da discussão acima e dos Exemplos, um versado na técnica pode veri-ficar as características essenciais da invenção, e sem abandonar o espírito e escopo desta, pode realizar mudanças e modificações para adaptar a invenção a vários usos e condições. Como um resultado, a invenção não está limitada pelos exemplos ilustrativos apresentados abaixo, mas de preferência definida pelas reivindicações em anexo.

Todas as reações foram executadas com agitação magnética contínua sob uma atmosfera de nitrogênio seco ou argônio. Todas as evapo-rações e concentrações foram executadas em um evaporador rotatório sob pressão reduzida. Os reagentes comerciais foram usados como recebido sem purificação adicional. Os solventes foram graus anidros comerciais e foram usados sem secagem ou purificação adicional. Cromatografia à média pressão foi executada usando sílica-gel (EMerck Kieselgel 60, 0,040 a 0,060 mm).

HPLC de Fase Reversa (RP) Analítica foi executada usando uma coluna C18 S5 Phenomenex Luna 4,6 mm x 50 mm ou uma coluna YMC S5 ODS de 4,6 mm x 50 mm. Em cada caso, um gradiente linear de 4 min (de 100% A: %0 B a 0% A: 100% B) foi usado com o seguinte sistema de fase móvel: A = 90% de H2O/MeOH + 0,2% de H3PO4 em taxa de fluxo = 4 ml/min e detecção a 220 nm.

HPLC de Fase Reversa (RP) Preparativa foi executada com uma eluição de gradiente linear usando 10% de metanol, 90% de água, 0,1% de TFA (solvente A) e 90% de metanol, 10% de água, 0,1% de TFA (solvente B) e detecção em 220 nm em uma das seguintes colunas: A - coluna Shi- madzu S5 ODS-VP 20 x 100 mm com uma taxa de fluxo de 20 ml/min; B - coluna YMC S5 ODS 30 x 100 mm com uma taxa de fluxo de 20 ml/min; C - coluna Phenomonex 20 x 250 mm com uma taxa de fluxo de 10 ml/min; D - coluna YMC S5 ODS 20 x 250 mm com uma taxa de fluxo de 10 ml/min; E - coluna YMC S10 ODS 50 x 500 mm com uma taxa de fluxo de 50 ml/min; ou F - coluna YMC S10 ODS 30 x 500 mm com uma taxa de fluxo de 20 ml/min.

O produto final foi caracterizado por 1H RMN, RP HPLC, espec- trometria de massas por ionização de eletroaspersão (ESI MS) ou por ionização de pressão atmosférica (API MS). Os espectros 1H RMN foram obtidos ou em um instrumento Bruker de 400 MHz ou um instrumento JEOL de 500 MHz. As resistências de campo são expressas em unidades de δ (partes por milhão, ppm) em relação aos picos de solvente, e multiplicidades de pico são designadas como segue: s, singleto; d, dubleto; dd, duplo dubleto; dm, duplo multipleto; t, tripleto; q, quarteto; br s, largo singleto; m, multipleto.

As seguintes abreviações são usadas para reagentes geralmente usados: Boc ou BOC: carbamato de t-butila; Fmoc: carbamato de 9H- fluorentilmetila; TEA: trietilamina; NMM: N-metilmorfolino; Ms: metanossulfo- níla; DIEA ou DIPEA: di-isopropilamina ou base de Hunig; NMP. N- metilpirrolidinona; reagente BOP: hexafluorofosfato de benzotriazol-1- iloxitris(trimetilamíno)fosfônio; DCC: 1,3-dicíclo-hexilcarbodi-imida; EDCI: cloridrato de 1-(dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida; TA ou ta: Temperatura ambiente; ÍR: tempo de retenção; h: hora(s); min: minuto(s); PyBroP: hexafluorofosfato de bromotripirrolidinofosfònio; HATU: hexafluorofosfato de O-(7- azabenzotriazol-1-il)-N./V,A/’,M’-tetrametilurônio; TBTU: tetrafluoroborato de 0-(1/7-benzotriazol-1-il)-A/,A/,A/’,W-tetrametilurônio; DMAP: 4-N,N- dimetilaminopiridina; HOBt ou HOBT. hidroxibenzotriazol; Na(OAc)3BH: tria- cetoxiboroidreto de sódio; HOAc: ácido acético; TFA: ácido trifluoroacético; LiHMDS: bis(trimetilsilil)amida de lítio; DMSO: dimetil sulfóxido; MeCN: ace- tonitrila; MeOH: metanol; EtOAc: acetato de etila; DMF: dimetil formamida; THF: tetra-hidrofurano; DCE: 1,2-dicloroetano; Et2O: dietil éter; DCM: diclo-rometano ou cloreto de metileno; m-CPBA: 4-ácido cloroperoxibenzóico; Bl- NAP racêmico: 2,2’-bis(difenilfosfino)-1,T-binaftileno.

Exemplo 1 A/-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4- di-hidropiridina-3-carboxamida

Preparação 1A: 3-cloro-A/-(difenilmetileno)piridin-2-amina

ptr ph (IA) 2,3-dicloropiridina (105,00 g, 710 mmols), Pd(OAc)2 (3,98 g, 17,74 mmols), rac-BINAP (16,57 g, 26,61 mmols), carbonato de césio (346,76 g, 1065 mmols), THF (1,05 I), e benzofenona imina (124,67 ml, 745 mmols) foram adicionados a um Reator CHEMGLASS® de 2I ajustado com um agitador mecânico e condensador de refluxo. A mistura foi aquecida a refluxo com agitação por 18 horas. O material foi filtrado, lavado com THF (100 ml), O filtrado resultante foi concentrado em vácuo em 1/3 volume e usado sem mais purificação. 1H RMN (CDCI3) δ 6,79 (dd, 1 H, J - 4,6, 7,6 Hz), 7,19 - 7,60 (m, 9 H), 7,79 - 7,95 (m, 2 H), 8,16 (dd, 1 H, J = 1,5, 5,1 Hz); MS(ESI+) m/z 293,1 (M + H)+. Preparação 1B: 3-cloro-2-(difenilmetilenoamino)piridin-4(1 /-/)-ona o c'/)

A um reator CHEMGLASS® de 4 I (ajustado com funil de adição, manta de nitrogênio) foi adicionado: 3-cloro-M-(difenilmetileno)piridin-2- amina bruta e borato de tri-isopropila (196,38 ml, 852 mmols). A solução resultante foi resfriada a 0° C. Em um reator separado foi adicionada di- isopropilamina (169,78 ml, 1207 mmols) e THF (1,05 I). Essa solução foi resfriada a 0o C e n-butil lítio (683,22 ml, 923 mmols) foi adicionado lentamente. Após agitar a 0° C, essa solução foi adicionada lentamente à primeira solução. A mistura reacional foi agitada por 30 minutos sem o banho de resfria-mento (consumo de material de partida indicado por HPLC). Água (1,05 I) foi adicionada à mistura, seguida pela adição de percarbonato de sódio (336,34 g, 1065 mmols) em uma porção. Essa mistura foi deixada agitando a 20°C por 1 hora. Uma solução saturada de NaHSO3 (~1 I) foi adicionada lentamente. A camada aquosa foi removida e DMF (840,00 ml) foi adicionado à camada orgânica e o THF foi removido por destilação (troca de solvente de THF para DMF). O DMF foi usado sem mais purificação. 1H RMN (CDCI3) δ 6,02 (d, 1 H, J=7,1 Hz), 7,10 (d, 1 H, J * 7,1 Hz), 7,20-7,80 (m, 10 H); MS (ESI+) m/z 309,07 (M + Hf. Preparação 1C: 3-cloro-M-(difenilmetileno)-4-(2-flúor-4-nitrofenóxi)-piridin-2-

A um reator CHEMGLASS® de 2 I foi adicionado 3-cloro~2- (difenilmetilenoamino)piridin-4(1/-/)-ona bruta (de acima, agora em DMF) e carbonato de cédio (300,52 g, 923 mmols) seguido pela adição de 3,4- difluoronitrobeπzeno (118,15 ml, 1065 mmols). A mistura foi aquecida a a- proximadameπte 90°C com agitação por 2 horas. A mistura foi resfriada a 25°C com agitação por 10 minutos. A essa solução foi adicionada água (1 I). A mistura foi extraída com EtOAc (1 I) e a fase aquosa foi descartada. A camada orgânica foi concentrada para obter um óleo. O óleo foi dissolvido em EtOH (200 ml) (aquecimento às vezes exigido). Após a solução ser deixada em repouso a 25°C por 4 horas, um sólido foi coletado por filtração para obter 3-cloro-A/-(difenilmetileno)-4-(2-flúor-4-nitrofenoxi)piridin-2-amina (104,00 g; rendimento de 32,73%) como um sólido amarelo. 1H RMN (CDCI3) δ 6,52 (d, 1 H, J = 5,6 Hz), 6,80 (dd, 1 H, J= 8,1, 9,1 Hz), 7,21-7,60 (m, 8 H), 7,78 -7,95 (m, 2H), 8,00 (m, 1 H), 8,11 (dd, 1 H, J = 2,5, 9,6 Hz), 8,17 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); MS (ESP) m/z 448,01 (M + H)+. Preparação 1D: 4-(4-amino-2-fluorofenóxi)-3-cloro-A/-(difenilmetileno)-piridin- 2-amina

Os materiais de partida foram adicionados a um reator CHEM

GLASS® de 2 li 3-cloro-/V-(difenilmetileno)-4-(2-flúor-4-nitrofenóxi)piridin-2- amina (110,00 g, 221 mmols), álcool isopropílico (990,00 ml), sulfeto de a- mõnio (-40% em água, 297,00 ml, 2324 mmols). A mistura foi deixada sob agitação a 20°C por 3 a 4 horas. 3-Cloro-W-(difenilmetileno)-4-(2-flúor-4- nítrofenóxi)piridin-2-amina não foi detectada por análise HPLC. A mistura reacional foi aquecida a 70°C e deixada sob agitação por 3 a 4 horas. Uma vez que a reação estava completa, água (14 ml/g.LR) foi adicionada. A mistura reacional foi resfriada a 20°C (temperatura reacional) ao longo de 1 hora. Mediante o resfriamento, um sólido foi precipitado e foi removido por filtração e lavado com água (12,5 ml/g»LR), seguido por heptano.MTBE (4:1, 5 ml/g-LR). Após LOD (-25%), 95,3 g de 4-(4-amino-2-fluorofenóxi)-3-cloro-A/- (difenilmetileno)piridin-2-amina (90AP) foram obtidos. 4-(4-amino-2- fIuorofenóxi)-3-cloro-/V-(difenilmetileno)piridin-2-amina bruta foi dissolvida em n-BuOAc (7 mL/g*LR) por aquecimento a aproximadamente 85°C. Em 85°C, heptano (7 ml/g-LR) foi adicionado por gotejamento até que a solução se torne turva. A solução foi então deixada sob resfriação a 20°C com agitação. Uma vez que a 20°C, a pasta fluida foi envelhecida por 8 horas. O sólido foi filtrado, lavado com heptano (5 ml/ g«LR), e então seco de um dia para o outro em um forno a vácuo a 60°C para obter 4-(4-amino-2-fluorofenóxi)-3- cloro-/V-(difenilmetileno)piridin-2-amina (62,53 g, rendimento de 67,69%) como um sólido ligeiramente amarelo . 1H RMN (CDCI3) δ 6,23 (dd, 1 H, J = 1,0, 5,6 Hz), 6,43 (m, 1 H), 6,49 (dd, 1 H, J = 2,5, 12,1 Hz), 6,92 (t, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,25 - 7,60 (m, 8 H), 7,87 (m, 2 H), 7,95 (d, 1 H, J = 6,1 Hz); MS(ESI+) m/z 418,6 (M + H)+. Preparação 1E: 4-(4-fluorofenil)-3-oxobutanoato de etila

A uma solução de 2,2-dimetil-1,3-dioxano-4,6-diona (ácido de Meldrum, 8,0 g, 56 mmols) dissolvida em cloreto de metileno anidro (100 ml) e piridina (11 ml), a 0o C sob atmosfera de nitrogênio, foi lentamente adicionado cloreto de 2-(4-fluorofenil)acetila (7,6 ml, 9,6 g, 56 mmols). A solução vermelha foi agitada a 0o C por 1,5 hora. A mistura reacional foi tratada com HCI a 1 N (13 ml) e diluída com cloreto de metileno (200 ml). As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com cloreto de sódio aquoso saturado, secas e concentradas em vácuo para obter 5-(2-(4- fluorofenil)acetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxano-4,6-diona. O intermediário bruto foi suspenso em etanol absoluto (150 ml) e a mistura resultante foi submetida a refluxo por 4 horas. O solvente foi então removido em vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna rápida (SiO2, 230 a 400 mesh, eluição em gradiente 8:1 hexano-acetato de etila) para obter o produto desejado (4,6 g, 37%). 1H RMN (CDCI3) δ 7,23 - 7,15 (m, 2 H), 7,05 - 6,98 (m, 2 H), 4,18 (q, 2 H, J = 7,0 Hz), 3,81 (s, 2 H), 3,46 (s, 2 H), 1,26 (t, 3 H, J = 7,0 Hz); MS(ESI+) m/z 225 (M+H)+. Preparação 1F: ácido 5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxí- lico.

A uma solução de 4-(4-fluorofenil)-3-oxobutanoato de etila (4,6 g, 21 mmols) em etanol absoluto (45 ml) foi adicionada solução de NaOEt (solução de NaOEt a 21% em EtOH, 7,7 ml) e triazina (1,67 g, 21 mmols). A mistura resultante foi aquecida a 85°C por 1,5 hora, resfriada à temperatura ambiente e tratada com mais uma porção de triazina (0,08 g, 1 mmol) e solução de NaOEt (solução de NaOEt a 21% em EtOH, 0,4 ml). A mistura rea- cional foi aquecida por mais uma hora e concentrada em vácuo. O resíduo foi tratado com HCI a 1 N até que o pH da reação fosse aproximadamente 2. O precipitado foi coletado para obter o intermediário de éster desejado, 5-(4- fluorofenil)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxilato de etila (4,5 g, 83%) como um sólido amarelo. MS(ESI+) m/z 262 (M+H)+.

O éster acima (1,0 g, 3,8 mmols) foi dissolvido em NaOH a 2N (20 ml) e aquecido a 65°C por 2 horas. A mistura clara resultante foi resfriada à temperatura ambiente e os sólidos foram removidos por filtração. O filtrado foi então acidificado com HCI a 1N até pH = 1 e o precipitado amarelo resultante foi coletado como o produto desejado (0,73 g, 82%). 1H RMN (DMSO-d6) δ 13,52 (brs, 1 H), 8,86 (s, 1 H), 8,51 (s, 1 H), 7,99 - 7,96 (m, 2 H), 7,55 - 7,51 (m, 2 H); MS(ESF) m/z 234 (M+H)+.

Preparação 1G: A/-(4-(3-cloro-2-(difenilmetilenoamino)piridin-4-ilóxi)-3-fluoro- fenil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxamida

A uma solução de 4-(4-amino-2-fluorofenóxi)-3-cloro-/V-(difenil- metileno)pirídin-2-amina (836 mg, 2,0 mmols) e ácido 5-(4-fluorofenil)~4-oxo- 1,4-di-hidropiridina-3-carboxílico (490 mg, 2,0 mmols) em DMF (10 ml) em temperatura ambiente foram adicionados HATU (913 mg, 2,4 mmols) e Dl- PEA (1,05 ml, 6,0 mmols). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas antes de ser arrefecida pela adição de água fria (50 ml). O sólido que se formou foi coletado por filtração, e lavado com água e éter. O sólido foi dissolvido em DCM e purificado por cromatografia de coluna rápida (SiCh, DCM a 10% de MeOH em DCM) para obter o produto desejado (987 mg, 78%) como um sólido amarelo-claro. MS(ESI+) m/z 633 (M + H)+.

Exemplo 1 A uma solução de /V-(4-(3-cloro-2-(difenilmetilenoamino)piridin-4- ilóxi)-3-fluorofenil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxamida (410 mg, 0,65 mmol) em THF (10 mL) em temperatura ambiente foi adicionado HCI aquoso (2 M, 0,81 ml, 1,62 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora e então concentrada em vácuo. NaH- CO3 aquoso a 5% frio (5 ml) foi então adicionado ao resíduo. O sólido que se formou foi coletado por filtração, lavado com água e então éter, e seco sob vácuo para obter o produto desejado (275 mg, 90%). 1H RMN (DMSO-cfe) δ 13,31 (s, 1 H), 12,70 (brs, 1 H), 8,63 (d, 1 H, J= 1,30 Hz), 8,09 (d, 1 H, J = 1,50 Hz), 8,02 (dd, 1 H, J = 2,50, 13,10 Hz), 7,76 (d, 1 H, J = 5,50 Hz), 7,71 (m, 2 H), 7,44 (dd, 1 H, J = 1,50, 8,80 Hz), 7,31 (t, 1 H, J = 8,80 Hz), 7,27 (t, 2 H, J = 8,80 Hz), 6,43 (br s, 2 H), 5,96 (d, 1 H, J = 5,60 Hz); MS(ESI+) m/z 469 (M+ H)+.

A/-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4- di-hidropiridina-3-carboxamida, sal cloridrato

O sal HCI de /V-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenil)-5- 5 (4-fluorofeniI)~4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxamida (Exemplos 1) é obtido tratando-se uma solução de /V-(4-(3-cloro-2-(difenilmetilenoamino)pirídin- 4-ilóxi)-3-fluorofenil)-5-(4-fluorofeni!)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3- carboxamida (Preparação 1G) em THF com HCI aquoso em excesso em temperatura ambiente. Os voláteis são removidos em vácuo para fornecer o 10 composto desejado. Exemplo 2

Di-hidrogênio fosfato de (3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenilcar- bamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1(4H)-il)metila

A uma solução de A/-(4-(3-cloro-2-(difenilmetilenoamino)piridin-4- 15 ilóxi)-3-fluorofenil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxamida (5,0 g, 7,90 mmols) em DMF (50 ml) em temperatura ambiente foram adicionados carbonato de potássio (7,64 g, 55,3 mmols) e fosfato de di-terc-butil clorometila (9,19 g, 35,5 mmols, vide: PCT WO 2005/090367). A mistura re- acional foi agitada em temperatura ambiente por 2 dias. A mistura foi então 20 diluída com EtOAc (250 ml), lavada com água (200 ml), LiCI a 10% aquoso (3 x 250 ml), seca sobre Na2SO4, e filtrada. O filtrado foi concentrado para obter um resíduo, que foi dissolvido em EtOH (160 ml). A essa solução agi-tada, foi adicionada água (60 ml), seguida pela adição lenta de HCI concentrado. (40 ml). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 25 15 minutos, e então deixada em repouso de um dia para o outro. A análise

HPLC indicou que a reação estava completa. O sólido foi coletado por filtra- ção, enxaguado com EtOH/H2O a 50% (5x), água, EtOH, e EtOAc. O sólido foi seco sob vácuo para obter o composto do titulo (4,3 g, 93%) como um sólido branco. 1H RMN (TFA-d) δ 9,60 (s, 1 H), 8,79 (s, 1 H), 7,80 - 7,90 (m, 2 H), 7,65 - 7,75 (m, 2 H), 7,57 (d, 1 H, J = 7,04 Hz), 7,45 (t, 1 H, J = 6,80 Hz), 7,25 - 7,33 (m, 2 H), 6,50 (d, 1 H, J = 5,92 Hz), 6,39 (d, 2 H, J = 9,88 Hz); MS(ESI+) m/z 579 (M+H)+.

Exemplos 3 a 11 Os Exemplos 3 a 11 foram preparados usando o seguinte Procedimento Geral: a uma mistura de W-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3- fluorofenii)-5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxamida (Exem-plo 1, 0,1 mmol) e carbonato de potássio (0,4 mmol) em DMF (1 ml), foi adicionado o derivado de clorometil éster correspondente (0,3 mmol, para preparação, vide Synth. Commun., 14: 857 a 864 (1984)). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente por 1 a 3 horas, diluída com DCM, e lavada com solução de KH2PO4 aquosa. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4 e intermediário protegido por N-Boc foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, usando uma eluição de gradiente DCM/EtOAc).

O intermediário protegido por N-Boc foi então tratado com TFA/DCM a 30% (2 ml) por 1 hora. Os solventes foram removidos em vácuo, e o produto foi purificado por HPLC preparativa para obter o composto do titulo como um sal TFA.

TABELA 1

Exemplo 12 1 -metilpiperidina-4-carboxilato de (3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)- 4-oxopiridin-1 (4/-/)-il)metila

Preparação 12A: A/-(4-(2-(benzidrilamino)-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenil)- 5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxamida A

A uma solução de M-(4-(3-cloro-2-(difenilmetilenoamino)piridin-4- ilóxi)-3-fluorofenil)-5-(4-fluorofeníl)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxamida 5 (Preparação 1G, 127 mg, 0,2 mmol) em EtOH (5 ml) e THF (5 ml) a 0o C, foi adicionado NaBH4 (300 mg, 7,93 mmols). A mistura foi agitada a 0o C por 3 horas, e então em temperatura ambiente de um dia para o outro. A reação foi arrefecida com água, extraída com DCM, e seca sobre MgSO4. Após filtração e concentração em vácuo, 120 mg do material desejado foram obti- 10 dos como um sólido branco. MS(ESI+) m/z 635 (M + H)+.

Preparação 12B: 1-ferc-butil piperidina-1,4-dicarboxilato de 4-(3-(4-(2- (benzidrilamino)-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)- 4-oxopiridin-1 (4/7)-il)metila

)

Uma mistura de A/-(4-(2-(benzidrilamino)-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3- fluorofenil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxamida (120 mg, 0,189 mmol), K2CO3 (104 mg, 0,756 mmol) e 1-ter-butil 4-chJorometil piperidina-1,4-dicarboxilato (157 mg, 0,567 mmol) em DMF (2 ml) foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas. A mistura reacional foi então diluída com DCM e o sólido que se formou foi removido por filtração. O resíduo foi lavado com solução de KH2PO4 aquosa saturada. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4 e o produto desejado foi purificado por cromatografia de coluna rápida (SiO2, eluindo com um gradiente DCM/EtOAc) para obter o composto desejado (145 mg) como um sólido branco. MS(ESI+) m/z 876 (M + H)+.

Preparação 12C: piperidina-4-carboxilato de (3-(4-(2-(benzidrilamino)-3- cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1(4F/)- il)metila

A uma solução de 1-terc-butil piperidina-1,4-dicarboxilato de 4- (3-(4-(2-(benzidrilamino)-3-cloropiridin-4-ilóxí)-3-fluorofenilcarbamoil)-5-(4- fluorofeniI)-4-oxopiridin-1(4H)-il)metila (135 mg, 0,154 mmol) em DCM (5 ml_) em temperatura ambiente, foi adicionado HCI (4 N em dioxano, 1 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas. Os solventes foram removidos em vácuo e o resíduo resultante foi purificado por HPLC preparativa para obter o produto desejado (128 mg) como um sólido branco. MS(ESI+) m/z 776 (M + H)+.

Preparação 12D: 1-metilpiperidina-4-carboxilato de (3-(4-(2-(benzidrilamino)- 3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-

A uma mistura de piperidina-4-carboxilato de (3-(4-(2- (benzidrilamino)-3-cloropiridin^-ilóxi)-3-fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)- 4-oxopiridin-1(4H)-il)metila (60 mg, 0,077 mmol), formaldeído (37% em água, 0,08 ml, 0,077 mmol) e ácido acético (0,03 ml, 0,077) em acetonitrila (2 ml) em temperatura ambiente foi adicionado NaCNBH3 (50 mg, 0,8 mmol). A mistura resultante foi agitada por 30 minutos. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo de produto bruto foi usado diretamente na próxima etapa sem mais purificação.

Exemplo 12 A preparação (12E) (0,077 mmol) foi tratada com TFA (3 ml) em temperatura ambiente por 30 minutos. Os voláteis foram removidos em vácuo e o resíduo resultante foi purificado por HPLC preparativa para obter o composto do título (32 mg) como um sólido branco. 1H RMN (CD3OD) δ 12,91 (br s, 1 H), 8,92 (d, 1 H, J = 2,52 Hz), 8,21 (d, 1 H, J = 2,00 Hz), 8,08 (dd, 1 H, J= 13,08, 2,04 Hz), 7,83 (d, 1 H, J = 7,08 Hz), 7,62 - 7,70 (m, 2 H), 7,48 (d, 1 H, J = 8,80 Hz), 7,39 (t, 1 H, J = 8,56 Hz), 7,20 - 7,28 (m, 2 H), 6,41 (d, 1 H, J = 6,28 Hz), 6,10 (s, 2 H), 3,50 - 3,60 (m, 2 H), 3,00 - 3,10 (m, 2 H), 2,89 (s, 3 H), 2,80 - 2,89 (m, 1 H), 2,25 - 2,35 (m, 2 H), 1,80 - 1,90 (m, 5 2 H); MS(ESπ m/z 624 (M + H)+.

Exemplo 13 Di-hidrogênio fosfato de (3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenilcar- bamoil)-5-(4-fluorofenil)~4-oxopiridin-1(4/-/)-il)metil, sal de bis-etanolamina HOCHZCH*NH3 z°' +

Preparação 13A: fosfato de di-terc-butil (3-(4-(3-cloro-2-(difenilmetile- 10 noamino)piridin-4-ilóxi)-3-fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin- 1 (4H)-il)metila

A uma solução de /V-(4-(3-cloro-2-(difenilmetilenoamino)piridin-4- ilóxi)-3-fluorofenil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxamida (1,0 g, 1,58 mmol) em DMF (10 ml) em temperatura ambiente foram adicio- 15 nados CS2CO3 (1,3 g, 3,95 mmols), iodeto de potássio (525 mg, 3,16 mmols) e então fosfato de di-terc-butil clorometila (1,2 mL, 1,90 mmol: 2,0 M em DMF). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente por 26 horas antes de ser arrefecida pela adição de acetato de isopropila (10 ml) e água fria (50 ml). As camadas orgânicas foram separadas e lavadas com água (50 ml). O solvente foi trocado por isopropanol (10 ml) por destilação contínua a 86°C. A solução foi resfriada a 20°C e um sólido precipitado. O sólido foi coletado por filtração e seco sob vácuo a 60°C por 12 horas para obter o produto desejado (0,98 g, 72%) como um sólido esbranquiçado. MS(ESI+) m/z 856 (M + H)+.

Exemplo 13 A um frasco de fundo redondo de 50 ml foi adicionado fosfato de di-ferc-butil (3-(4-(3-cloro-2-(difenilmetilenoamino)piridin-4-ilóxi)-3- fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1(4H)-il)metila (4 g, 4,68 mmols) e CH2CI2 (4 ml). A mistura foi resfriada a 0o C e então ácido trifluoro- acético (4 ml) foi adicionado. A mistura reacional foi deixada aquecendo a 20°C. HPLC indicou que o di-terc-butilfosfato hidrolisou no ácido. Água (0,4 ml) foi adicionada a 20°C e a mistura foi deixada agitando a 20°C por 5 a 6 horas. A mistura se tornou uma pasta espessa. Tolueno (20 ml) foi adicionado a então concentrado em aproximadamente 5 ml para remover excesso de ácido trifluoroacético, CH2CI2, e água. Isso foi repetido duas vezes. A suspensão foi diluída com EtOH (120 ml, 100%). A essa suspensão foi adicionada etanolamina até que um pH de aproximadamente 8,1 foi obtido a 20°C. A suspensão se torna clara durante a adição. Após a adição, a solução foi aquecida para 75°C e observou-se a formação de placas de cristais quadradas. A mistura foi deixada resfriando a 20°C e então agitada por 24 horas. Os sólidos foram removidos por filtração e lavados com EtOH (100%) para obter o sal bis-etanolamina como placas de cristais quadradas. O sólido foi resuspenso com EtOH (120 ml, 100%) a 75°C com etanolamina (—0,1 g). Cristais alongados em forma de agulha foram adicionados à suspensão e agitados a 75°C por 7 horas. A mistura foi deixada resfriando a 20°C e os sólidos foram coletados por filtração para obter o sal de bis-etanolamina como grandes cristais alongados. Os cristais foram secos em 55°C por 14 ho-

Exemplo 14 Di-hidrogênio fosfato de (3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenilcar- bamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1(4H)-il)metila, sal de bis-trisamina

A um frasco de fundo redondo de 50 ml foi adicionado fosfato de di-ferc-butil (3-(4-(3-cloro-2-(difenilmetilenoamino)piridin-4-ilóxi)-3- fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofenil)-4-oxopiridin-1(4H)-il)metila (1 g, 1,17 mmol) e CH2CI2 (1 ml). A mistura foi resfriada a 0o C e então ácido trifluoroa- cético (1 ml) foi adicionado. A mistura reacional foi deixada aquecendo a 20°C. HPLC indicou que o di-terc-butilfosfato tiidrolisou no ácido. Água (0,1 ml) foi adicionada a 20°C e a mistura foi agitada a 20°C por 16 horas. A mistura se tornou uma pasta fluida espessa. Tolueno (5 ml) foi adicionado a então concentrado em aproximadamente 1 ml para remover excesso de ácido trifluoroacético, CH2CI2, e água. Isso foi repetido duas vezes. EtOH (30 ml, 100%) foi adicionado, o que produziu uma suspensão turva. A suspensão foi aquecida a 75°C e solução de trisamina aquosa concentrada (2-amino-2- hidroximetil-1,3-propanodiol) foi adicionada para produzir um pH ~7,3. A solução então se torna clara e sementes de bis-trisamina foram adicionadas a 75°C e a suspensão foi envelhecida por 4 horas a 75°C. A suspensão foi resfriada a 20°C e foi envelhecida por 2 horas. Sólidos cristalinos foram coletados por filtração e secos sob vácuo a 55°C para obter o sal bis-trisamina. Ensaios

As propriedades farmacológicas do composto desta invenção podem ser confirmadas por um número de ensaios farmacológicos. Os ensaios farmacológicos exemplificados que seguem foram executados com o composto de acordo com a invenção e/ou sais e/ou profármacos dos mesmos.

Ensaio de Met Quinase As misturas de incubação empregadas para o ensaio de Met quinase contêm um GST-Met quinase expresso em baculovírus, substrato sintético polyGluiTyr, (4:1), ATP, ATP-y-33P e tampão contendo Mn+2, DTT, BSA, e Tris. As reações foram incubadas por 60 minutos a 30°C e paradas pela adição de ácido tricloroacético (TCA) frio em uma concentração final de 8%. Os precipitados de TCA foram coletados em placas UniFilter GF/C (Packard Instrument Co., Meriden, CT) usando um coletor universal FIL-TERMATE® (Packard Instrument Co., Meriden, CT) e os filtros são quantificados usando um contador de cintilação em meio líquido com 96/384 poços TopCount (Packard Instrument Co., Meriden, CT). As curvas de resposta a dose foram geradas para determinar a concentração exigida para inibir 50% de atividade de quinase (IC50). Os compostos foram dissolvidos em 10 mM em dimetil sulfóxido (DMSO) e avaliados em dez concentrações, cada um em duplicata. A concentração final de DMSO no ensaio é 1,7%. Os valores IC5o foram derivados por regressão não linear. Tabela 2

Tabela 3

Ensaio de Proliferação de Carcinoma Gástrico GTL-16

A inibição do crescimento de células GTL-16 foi avaliada por um ensaio MTS usando um kit de Ensaio de Proliferação Não Radioativo Aquoso CELLTITER 96® de Promega. O kit é composto de soluções de um novo composto de tetrazólio ((3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetóxifenil)-2- (4-sulfofenil)-2/-/-tetrazólio, sal interno; MTS) e um reagente de acoplamento de elétrons (metossulfato de fenazina, PMS). Nesse ensaio colorimétrico, a conversão de MTS em formazana solúvel aquosa é executada por enzimas desidrogenase encontradas em células metabolicamente ativas. A quantidade de produto formazana medida por sua absorbância em 490 nm é diretamente proporcional ao número de células vivas na cultura. As células GTL-16 foram incubadas em placas de microtitulação com 96 poços em 0,5% de soro fetal de bezerros e incubadas em 37°C, 5% de CO2, 95% de ar e 100% de umidade relativa por 24 horas antes da adição de um composto. Na hora do tratamento com fármaco, uma placa da linhagem celular foi processada usando o kit acima para representar uma medição da população celular na hora da adição de fármaco. Seguindo o tratamento com fármaco, as placas foram incubadas por mais 72 horas antes de processar, e medir as populações celulares. Cada composto foi testado em 8 concentrações diferentes em triplicata, como foi a amostra de controle não tratada. A inibição do crescimento de 50% (IC50) é calculada por análise dos dados em Excel que usam uma equação logística de 4 parâmetros com dados ajustados usando o algoritmo Levenburg Marquardt.

As misturas de incubação empregadas para o ensaio de VEGFR-2 contêm o substrato sintético poly glu/tyr, (4:1), ATP, ATP-y-33P e tampão contendo Mn+2, DTT, BSA, e tampão Tris. A reação é iniciada pela adição de enzima e após 60 minutos em temperatura ambiente é terminada pela adição de 30% de TCA a uma concentração final de 15% de TCA. Os inibidores são trazidos para 10 mM em 100% de DMSO. Os ensaios são preparados em um formato com 96 poços em quadruplicata. Os compostos são diluídos a 1:500 em 100% de DMSO e então 1:10 em água para uma concentração de DMSO final de 10%. As alíquotas (10 μl) são adicionadas a linhas B-H em um formato com 96 poços de 10% de DMSO. O composto (20 μl) é adicionado à linha A em uma concentração 5 vezes maior do que as condições de ensaio. As alíquotas (10 μl) são transferidas para cada linha seguida por seis diluições em série com mistura, e na linha F a 10 μl são descartados. A linha G é um controle sem composto e a linha H não tem composto nem controle de enzima. A enzima e o substrato são liberados usando uma estação Tomtec Quadra.

As placas são cobertas com coberturas pegajosas, incubadas em 27°C por 60 minutos, e então precipitadas por ácido com TCA por 20 minutos em gelo. O precipitado é transferido para microplacas GF/C UniFil- ter-96 usando ou um coletor FILTERMATE® Tomtec ou Packard. A atividade é determinada quantificando-se a radioatividade incorporada usando um Contador de Cintilação em Microplaca TopCount Packard seguindo a adição de coquetel Microscint-20 em cada poço seco das microplacas UniFilter.

A Tabela 4 mostra as atividades do Exemplo 1 e os Compostos A e B no ensaio de Met quinase, no ensaio VEGFR-2, e/ou no ensaio GTL- 16. As preparações dos compostos A e B são descritas na Publicação de Patente US 2005/0245530 nos exemplos 56 e 101, respectivamente.

Composto A Composto B Tabela 4

Composto A: A/-(4-(2-aminopiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenil)-5-benzil-4-oxo-1,4-di- hidropiridina-3-carboxamida, sal de ácido trifluoroacético.

Composto B: A/-(4-(2-aminopiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenil)-1-(4-fluorofenÍI)-2- oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida, sal cloridrato.

Determinação da Eficácia in vivo A/-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenil)-5-(4-fluorofenil)- 4-oxo-1,4-di-hidropiridina-3-carboxamida (Exemplo 1) e di-hidrogênio fosfato de (3-(4-(2-amino-3-cloropiridin-4-ilóxi)-3-fluorofenilcarbamoil)-5-(4-fluorofe- nil)-4-oxopi rid in-1 (4/-/)-il)metila (Exemplo 2) foram avaliados quanto a eficácia in vivo contra o modelo de xenoenxerto de tumor gástrico humano de GTL-16. O exemplo 2 é um profármaco do Exemplo 1. Como ilustrado na figura 1, o Exemplo 1 e o Exemplo 2 estavam ativos como definido para mais de 50% de inibição de crescimento do tumor (TGI) para ao menos um tempo de duplicação de tumor no modelo de carcinoma gástrico de GTL-16. Nenhuma toxicidade evidente foi observada em qualquer desses níveis de dose 5 quando administrados uma vez ao dia para uma duração de 14 dias. Nesse estudo, as concentrações equimolares do Exemplo 1 (25 mg/kg do Exemplo 1 e 31,2 mg/kg do Exemplo 2) resultaram em parada completa do tumor. O Exemplo 1 foi também testado no modelo de glioblastoma U87, um tumor acionado por Met baseado em um mecanismo autócrino HGF 10 de ativação de Met. Como demonstrado na figura 2, a parada completa do tumor foi observada em 25 mg/kg, similar à atividade observada contra xenoenxertos de tumor em GTL-16.

Claims

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte Fórmula (I):

ou um sal do mesmo, na qual: G é H ou -CHX-OP(=O)(OH)2; X é H.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que G é H.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que: G é -CHX-OP(=O)(OH)2; e X é H.

4. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.

5. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o referido pelo menos um composto é:

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para uso na terapia no tratamento de câncer.

7. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o referido câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, colorretal, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de rim, câncer de fígado, câncer de pulmão, câncer ovariano, câncer de pâncreas/vesícula biliar, câncer de próstata, câncer de tiroide, osteossarcoma, rabdomiossarcoma, melanoma, glioblastomas/astrocitomas, MFH/fibrossarcoma ou mesotelioma.

8. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

9. Uso de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o referido câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, colorretal, câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer de rim, câncer de fígado, câncer de pulmão, câncer ovariano, câncer de pâncreas/vesícula biliar, câncer de próstata, câncer de tiroide, osteossarcoma, rabdomiossarcoma, melanoma, glioblastomas/astrocitomas, MFH/fibrossarcoma ou mesotelioma.