CA1140111A

CA1140111A - PROCEDE DE PREPARATION D'UN NOUVEAU DERIVE DU (20S) 3.alpha.- /(AMINO-ACETYL)AMINO/ 5.alpha.-PREGNAN-20-OL ET DE SES SELS

Info

Publication number: CA1140111A
Application number: CA000358412A
Authority: CA
Inventors: Vesperto Torelli; Jean Vacher; Roger Deraedt
Original assignee: Roussel Uclaf SA
Current assignee: Sanofi Aventis France
Priority date: 1979-08-17
Filing date: 1980-08-15
Publication date: 1983-01-25
Also published as: IT1145382B; AT373902B; SE446006B; CH646182A5; GB2057448A; DK352380A; SE8005309L; DE3031161C2; ES494256A0; FI68844B; ES8103760A1; BE884794A; FR2463777B1; AU6148680A; NL8004600A; AU529528B2; ATA420880A; IE801737L; FI68844C; PT71700A

Abstract

DE DIVULGATION L'invention concerne un procédé de préparation du (20S)3.alpha.-¢(aminoacétyl)amino! 5a-prégnan-20-ol et de ses sels d'addition avec les acides organiques ou minéraux pharmaceutiquement acceptables qui consiste essentiellement à soumettre la funtumidine à l'action d'un aminoacide: <IMG> , à cliver ensuite le groupement R et, le cas échéant, à salifier le produit ainsi obtenu. Le (20S)3.alpha.-¢(aminoacétyl) amino! 5.alpha.-prégnan-20-ol et de ses sels d'addition avec les acides organiques ou minéraux stimulent en particulier les défenses de l'organisme en potentialisant notamment la production d'immunoglobulines E.

Description

.:
~3~4~

La présente invention a pour objet un procédé de pré-paration du (20S) 3~-~(aminoacétyl)amino~ 5a-prégnan-20-ol et de ses sels d'addition avec les acides organiques ou mineraux, pharmaceutiquement acceptables. Parmi les sels d'addition avec les acides, on peut citer les sels formés avec les acides chlorhydrique , bromhydrique, iodhydrique, nitrique, sulfuri-que, phosphorique, acétique, formique, benzoique, maléique, fumarique, succinique, tartrique, citrique, oxalique, glyoxy-lique, aspartique, alcanesulfoniques, tels que l'acide méthane sulfonique et- arylsulfoniques, tels que l'acide benzène sul-fonique.
; Le (20S) 3~-~(aminoacétyl) aminJ' 5~-prégnan-20-ol est un produit qui n'a jamais été décrit jusqu'ici. Le (20S) 3~-~(aminoacétyl)aminoJ 5~-pregnan-20-ol, ainsi que ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables pré-sententd'intéressantes propriétés pharmacologiques comMe le montrent les résultats des testsdonnés ci-après dans la par-tie expérimentale, ils stimulent en particulier les défenses ; de l'organisme en potentialisant notamment la production - 20 d'IgE (immunoglobulines E).
Le (20S) 3~-~(aminoacétyl)amino~ 5~-prégnan-20-ol ainsi que ses sels d'addition avec les acides pharmaceutique-ment acceptable~s peuvent donc être utilisés à titre de médi-.caments pour le traitement des maladies autoimmunes résultant . , .
d'une déficience en certains lymphocytes, qu'il s'agisse de .1 maladies du tissu conjonctif non spécifiques d'un organe ;.- donné comme, par exemple, l'arthrite rhumatoide ou le lupus érythémateux systémique, ou qu'-il s'agisse de maladies spéci-~ fiques d'un organe comme la thyroidite, le pymphygus ou l'anémie `. 30 hémolytiqué.

Les produits obten~s selon l'invention peuvent être ainsi utilises comme traitement adjuvant de l'antibiothérapie et :
~ ~ - .

- ~ ' : ~ ' - ~4~

- de la chimiothérapie anti-cancéreuse.
Les produits obtenus selon l'invention peuvent donc être utilisés pour préparer des compositions pharmaceutiques renfermant comme principe actif, au moins un médicament déEini ci-dessus.
Ces co~positions peuvent être administrées notamment par voie buccale, rectale et parentérale.
Elles peuvent être solides ou liquides et ~e présen-ter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médécine humaine, comme, par exemple, les comprimés simples ou dragéifiés, les gélules, les granulés, les suppositoires, les préparation injectables ; elles sont préparées selon les méthodes usuelles.
Le ou les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de caco, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs.
La dose administrée est variable selon l'affection traitée, le sujet en cause, la voie d'administration et le produit considéré. Elle peut être, par exemple, aomprise entre l et 100 mg par jour, par voie orale chez l'adulte.
Le procédé de préparation du (20S) 3~-~(aminoacétyl) amino~ 5~-prégnan-20-ol et de ses sels d'addition avec les acides-, pharmaceutiquement acceptables, objet de l'invention, est caractérisé en ce que l'on soumet la funtumidine ou (20S) 3~-amino 5~-prégnan-20-ol, à l'action d'un amino acide de formule II :

-~14~
o dans laquelle R représente un groupement protecteur facile-ment clivable, notamment par hydrogénolyse, pour obtenir un composé de formule III : :

~H

~ \~J\~ .

H~ ~ J III
,~ \ ' ' que l'on soumet à l'action d'un agent de clivage du groupement R, pour obtenir le composé recherché de formule I .

~ f `OH
I

HN~

C

que l'on soumet, si désiré, à l'action d'un acide pour en former le S2 1 correspondant.
.. . :
Comme groupement R, on peut utiliser, par exemple, le groupement carbobenzyloxy ou le groupement carboterbutyl-, oxy.
L'invention a notamment pour objet un procédé caracté-risé en ce que le groupement protecteur R est le radical carbo-benzyloxy.
L'invention a plus particulièrement pour objet un procédé de préparation caractérisé en ce que la réaction - entre le (20S) 3~amino 5a-prégnan-20-ol et l'amino acide de . formale II a lieu en présence d'un agent de condensation.

.

: ,.: . :.
. . .

L'agent de condensation a naturellement pour but d'activer la fonction acide de l'amino acide de formule II:

1l II

Comme agent de condensation, on peut utiliser un carbodiimide de formule :
Rl-N=C=N-R2 dans laquelle Rl et R2 identiques ou différents, représentent un radical alcoyle renfermant de 1 à 8 atomes de carbone, éventuellement porteurs d'un radical dialcoylamino, ou Rl et R2 représentent un radical cycloalcoyle.
Parmi ces derniers on peut citer, par exemple, le dicyclohexylcarbodiimide ou le 1 éthyl 3-(3-diméthylaminopro-pyle) carbodiimide.
On peut aussi utiliser un chloroformiate d'alcoyle comme, par exemple, le chloroformiate de méthyle ou d'éthyle.
On peut aussi utiliser un pyrophosphite d'alcoyle, comme par exemple le pyrophosphite d'éthyle.
L'invention a plus spécialement pour objet un pro- -; 20 cédé caractérisé en ce que l'on utilise comme agent de conden-sation le l-éthyI 3-(3-diméthylaminopropyl) carbodiimide.
~ Comme agent de clivage, on ~tilise de préférence l'hydrogène en présence de palladium.
~Ja formation de sels a lieu selon les procédés classiques, par exemple, par addition d'acides.
Le produit de départ utilisé, à savoir le (20S) 3~-amino 5~-prégnan-20-ol, est un produit connu (voir à ce sujet Merck Index 9e éditlon, rubrique 4144).
Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter.

; - 4 -' , . .
, . .

- 1~4~
" .
EXEMPLE 1: (20S~ 3~-~'(aminoacétyl) amino~ 5~-Prégnan-20-ol ~chlorhydrate et base) STADE A: (20S1 3~ benzyloxy carbon~lamino-acetyl) aminoZ 5a-~ré~nan-20-ol.
_____ ____ __ _________ On dissout 5,2 g de (20S) 3~-amino 5~-prégnan-20-ol ~et 5,2 g de N-carbobenzyloxy~lycine dans 150 cm3 de chlorofor-, . .
me et 15 cm3 de pyridine. On agite la solution au bain de glace sous azote et ajoute 3,9 g de chlorhydrate de l-éthyl 3-(3-diméthylaminopropyl) carbodiimide. Au bout d'une heure on ajoute à nouveau 310 mg de chlorhydrate de l-éthyl 3-(3-di-méthylaminopropyl) carbodiimide, maintient l'agitation pen-dant une demi-heure au bain de glace et dilue ensuite avec une solution saturée de carbonate acide de sodium. On filtre l'insoluble, le lave à part avec une solution de carbonate acide de sodium, à l'eau, à l'acide chlorhydrique normal et `a l'eau, puis le sèche à 50C. On obtient ainsi 5,1 g d'insoluble. La phase chloroformique est séparée du filtrat puis lavée à l'eau, à l'acide chlorhydrique normal, à l'eau, séchée et distillée à sec. On obtient 4,6 g de résidu semi --20 cristallisé . L'insoluble (5,1 g) et l'extrait sec (4,6g) sont joints et empâtes au reflux de 25 cm3 de méthanol~ On glace, - essore, lave au méthanol et sèche à 50~C. On obtient aïnsi 7,05 g du produit recherché fondant à 250-252C, que l'on utilise tel quel dans le stade suivant. L'échantillon analyti-que F = 254C est obtenu par recristallisation dans l'acide acétique.
STADE_B : chlorhydrate de ~20S~ 3~ amlnoacetyl amin_Z 5 -~re~nan-20-ol.

On dissout, à chaud, 7 g du produit obtenu au stade A
dans 150 cm3 d'acide acétique. On agite la solution obtenue sous barbotage d'azote, Iaisse refroidir vers 45 et ajoute 700 mg de palladium sur charbon à 10%. On r~mplace le barbotage :

- ~ - . .
: :

d'azote par un léger barbotage d'hydrogène. Au bout d'une heure, on substitue un courant d'azote au courant d'hydro-gène et poursuit le barbotage pendant 15 minutes. On filtre alors le catalyseur et le rince à l'acide acétique. On évapore à sec le filtrat. On dissout le produit cristallisé
dans 50 cm3 de méthanol. Par addition de 4 cm3 d'une solu-tion 5,5 N d'acide chlorhydrique dans l'éthanol, le produit recherché précipite.
On dilue la suspension avec 50 cm3 d'éthanol absolu, la concentre de moitié et l'abandonne une nuit vers +5C. On essore, lave à l'éthanol et sèche. On obtient 4,43 g du produit recherché.
Le filtrat additionné de 0,5 cm3 d'une solution 5,5N d'acide chlorhydrique dans l'éthanol et concentré à
petit volume fournit un deuxième jet de 0,35 g de produit recherché. On obtient le produit recherché pur fondant à 271C
après recristallisation dans l'éthanol à 80%.

20 = + 195 + 1 (1%, pyridine à 10~ d'eau).
D
; STADE C : ~réparation de la base :
On a utilisé le chlorhydrate brut obtenu au stade B. Le chlorhydrate brut est dissous dans de l'eau chaude.
par addition d'un excès de soude 2N, la base précipite. On l'essore, la lave à l'eau, la sèche et la recristallise dans du méthanol.
On obtient ainsi le produit recherché pur fondant à 269C.

~J = ~25 + 1 tl%, pyridine à 10% d'eau).
D

EXEMPLE 2 : Etude pharmacologiq~e du produit de l'exemple I
sous la forme de son chlorhydrate dénommé cl-après produit A
,: _ - effectuée en comparaison avec le LEVAMISOLE.

Le LEVAMISOLE est un produit bien Fonnu ~Merck ~ .

.

Index 9e édition rubrique 8949~ qui présente des propriétés -immunorégulatrices, vois Cancer, Research 35 927 (1975) ou New England Journal of Medicine 289 (21) 1148 (1973).
A - Potentialisation de la production d'IqE
Des souris femelles, pesant 28 à 30 g, sont illlmuni-. sées par voie sous-cutanée avec de l'ovalbumine mélangée de l'alumine aux jours 0 et 14 et leur sérum est prélévé au jour 21 pour dosage des anticorps IgE formés. Les quantités res-pectives de l'antigène (ovalbumine) et de l'adjuvant (alumine) injectées sont choisies de ~açon à ce que la production d'anticorps soit minimum.
Les produits étudiés sont administrés par voie sous-cutanée 3 heures avant la première immunisation.
Le dosage des IgE est effectué au moyen du test d'anaphylaxie cutanée passive. Ce test consiste à provoquer chez un animal par administration intra-veineuse de l'antigène une réaction antigène-anticorps dans un site cutané où ont été -injectés préalablement des anticorps préparés chez un autre animal avec le même antigène. Cette réaction est visualisée grâce à un colorant injecte en même temps que l'antigène :
il y a apparition au point d'injection des anticorps d'une tache colorée, témoln de l'éclatement des cellules sensibili-sées et de l'augmentation de la perméabillté capillaire en résultant. On recherche la plus grande dilution du sérum qui donne une tache d'un diamètre de 11 à 13 mm chez tous les animaux. La dilution adéquate du sérium est injectée par voie intradermique sous un volume de 0,1 ml à des rats mâles, pe-sant en moyen 250 g, dans la région du dos. Quarante huit heures plus tard, les animaux reçoivent par voie veineuse 0,5 ml d'une solution à 0,5% d'ovalbumine et 1% de bleu Evans dans le soluté isotonique de chlorure de sodium. Trente minutes après cette injection ils sont sacrifiés par exsanguination . .

., lq4~1 ~,1, et le diamètre de la tache bleue est mesuré par la peau retournée.
Les résultats obtenus sont les suivants :
Produit A 0,5 mg/~g par voie sous-cutanée Levamisole 20 mg/kg par voie sous-cutanée Conclusion : sur ce test le produit A est beaucoup plus immu-; nostimulant que le Levamisole.
B - Arthrite chronique à l'adjuvant L'injection d'adjuvant type Freund (Mycobacterium butyricum à 6 mg/ml dans Bayol 55) dans une patte postérieure provoque chez le rat une lésion inflammatoire primaire, puis après un temps de latence de 13 à 15 jours, le déclenchement d'inflammationssecondaires affectant la patte postérieure non injectée ainsi que les pattes antérieures, la queue et les oreilles.
Cette arthrite secondaire peut se comparer à
l'arthrite rhumatolde humaine car l'on admet l'intervention de réactions auto-immunitaires parmi ses facteurs déterminants.
Des ratsmâles, agé de 42 à 50 jours, reçoivent en injection intraplantaire 0,I0 ml d'adjuvant de Freund.

~ 20 Le traitement commence le jour de l'injection de ; l'adjuvant et dure jusqu'au sacriflce des animaux pratiqué le 17ème jour.
Les critères d'appéciation de l'activité des substan-ces sont en général :
- la croissance pondérale des animaux, toujours freinée assez proportionnellement à l'intensité de l'arthrite;
- les augmentations de volume des pattes postérieures - injectées et non~injectées par rapport au volume moyen des ., pattes correspondantes des témoins normaux : -- l'arthrite des pattes antérieures, dont le trop petit volume ne se prête pas à une mesure pléthysmométrique, et donc notée subjectivement de 0 à 3 suivant l'intésité de . . .

' , . ' : .

l'inflammation ;
- L'arthrite des oreilles et de la queue, notée 1 ou 0 selon la présence ou l'absence de nodosités.
Dans la présente expérimentation a été surtout observé l'effet sur les inflammations secondaires, c'est-à-dire, sur l'arthrite de la patte postérieure non injectée, les arthrites des pattes antérieures et les inflammations des oreilles et de la queue.
La dose active qui diminue les inflammations secon-daires d'au moins 50 % a été recherchée.
Les résultats on~ été les suivants :
- Produits A dose active lmg/kg (voie sous-cutanée) Levamisole dose active 50mg/kg (voie buccale) Conclusion : le produit A est donc tres actif sur les phénomè- -nes secondaires de l'arthrite à l'adjuvant alors qu'il faut une dose très élevée subtoxique de Levamisole pour constater un .. . .
effet comparable.

E~ Exemp~ 5~_5~E~ositions pharmaceutiques On a préparé des comprimés répondant à la formule - suivante :

Produit de l'exemple 1 (chlorhydrate) .. ~.~......... 10 mg Excipient (talc, amidon, stéarate de magnésium) q.s.p. ~ 1 comprim~.

. ., , .: - -, ...

, ..... .
.~ ,.. ..

~, :

~ 9 --., , .. : .

Claims

Les réalisations de l'invention, au sujet desquelles un droit exclusif de propriété ou de privilège est revendiqué, sont définies comme il suit :

1) Procédé de préparation du (20S) 3.alpha.-[(amino-acétyl)amino] 5.alpha.-prégnan-20-ol et de ses sels d'addition avec les acides organiques ou mineraux pharmaceutiquement accepta-bles, caractérisé en ce que l'on soumet la funtumidine ou (20S) 3.alpha.-amino 5.alpha.-prégnan-20-ol, à l'action d'un amino acide de formule II :

II
dans laquelle R représente un groupement protecteur facile-ment clivable, notamment par hydrogénolyse, pour obtenir un composé de formule III :

III

que l'on soumet à l'action d'un agent de clivage du groupement R, pour obtenir le composé recherché de formule I :

I

que l'on soumet, si désiré, à l'action d'un acide pour en former le sel correspondant.

2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé
en ce que le groupement protecteur R est le radical carbo-benzyloxy.

3) Procédé selon la revendication 1, caractérisé
en ce que la réaction entre le (20S) 3.alpha.-amino 5.alpha.-prégnan-20-ol et l'aminoacide de formule II a lieu en présence d'un agent de condensation.

4) Procédé selon la revendication 3, caractérisé
en ce que l'agent de condensation est un carbodiimide de formule :
R1-N=C=N-R2 dans laquelle R1 et R2 identiques ou différents, représentent un radical alcoyle renfermant de 1 à 8 atomes de carbone, éeventuellement porteurs d'un radical dialcoylamino, ou R1 et R2 représentent un radical cycloalcoyle.

5) Procédé selon la revendication 4, caractérisé
en ce que le carbodiimide utilisé est le 1-éthyl 3-(3-diméthyl-laminopropyle) carbodiimide.

6) Procédé selon la revendication 1, caractérisé
en ce que l'agent de clivage du groupement R est l'hydrogène en présence de palladium.

7) Procédé selon la revendication 1, caractérisé
en ce que l'on soumet le (20S) 3.alpha.-amino 5.alpha.-prégnan-20-ol à
l'action de la N-carbobenzyloxyglycine en présence du chlorhy-drate de 1-éthyl 3-(3-diméthylaminopropyl) carbodiimide pour obtenir le (20S) 3.alpha.- [(benzyloxycarbonylamino-acétyl)amino]
5.alpha.-prégnan-20-ol que l'on soumet à l'action de l'hydrogène en présence de palladium, pour former le composé recherché de formule I que l'on soumet, si désiré, à l'action d'acide chlorhydrique pour en former le chlorhydrate correspondant.

8) Le (20S) 3.alpha.-[(aminoacétyl)amino] 5.alpha.-prégnan-20-ol et ses sels d'addition avec les acides minéraux ou orga-niques, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 1 ou ses équivalents chimiques manifestes.

9) Le (20S) 3.alpha.(aminoacétyl)amino] 5.alpha.-prégnan-20-ol et ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organi-ques,chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 2, ou ses équivalents chimiques manifestes.

.
10) Le (20S) 3.alpha.-[(aminoacétyl)amino] 5.alpha.-prégnan-20-ol et ses sels d'addition avec les acides minéraux ou orga-niques, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 3 ou ses équivalents chimiques manifestes.

11) Le (20S) 3.alpha.-[(aminoacétyl)amino] 5.alpha.-prégnan-20-ol et ses sels d'addition avec les acides minéraux ou orga-niques, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 4 et ses équivalents chimiques manifestes.

12) Le (20S) 3.alpha.-[(aminoacétyl)amino] 5.alpha.-prégnan-20-ol et ses sels d'addition avec les acides minéraux ou orga-niques, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 5 ou ses équivalents chimiques manifestes.

13) Le (20S) 3.alpha.-[(aminoacétyl)amino] 5.alpha.-prégnan-20-ol et ses sels d'addition avec les acides minéraux ou orga-niques, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 6 ou ses équivalents chimiques manifestes.

14) Le (20S) 3.alpha.-[(aminoacétyl) amino] 5.alpha.-prégnan-20-ol et son chlorhydrate correspondant, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 7 ou ses équivalents chimiques manifestes.