WO93/12128 2 1 13 ~ PCT/FR92/01182 DERIVES DE LA 9-(8-D-XYLOF~RANNOSYL) ADENINE ET DE LA 1-(B-D-XYLOFURANNOSYL)CYTOSINE, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE. La présente invention a pour objet des dérivés de la 9-(B-~- xylofurannosyl)adénine et de la 1-(~-D-xylofurannosyl)cytosi- ne, leur préparation et leur application en thérapeutique. Les composés de l'invention répondent à la formule générale (I) B R3 0 ~/ OR dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogene, un groupe (C2 4)alcanoy- le, un groupe aroyle ou un groupe nitro, R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe (C2 ~)alcanoy- le, un groupe aroyle ou un groupe nitro, R3 représente un atome d'hydrogène, un groupe (C2 ~)alcanoy- le, un groupe aroyle ou un groupe nitro, B représente un radical de formule H R' NH2 N <N~N~J ou o~3 dan~ lequel R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe (C2 ~)alcanoyle. ~09 composé~ dan~ lesquels - R1 ~ acétyle, R2 ' R3 ~ acétyle et B ~ adénine, - Rl ~ H, R2 ' R3 ~ benzoyle et B ~ adénine, - Rl J H, R2 ~ R3 ~ acétyle et B ~ adénine, - Rl ~ acétyle, R2 ' R3 ~ benzoyle et B ~ adénine ou cyto~lne~ - Rl ~ R2 ~ R3 ~ H et B - adénine ou cytosine no ~ont toutefois pas partle de l'invention. WO93/12128 PCT/FR92/01182 ~ S~-~ 2 Les composés préférés de l'invention sont ceux pour lesquels le groupe (C2_ 4 ) alcanoyle est le groupe acétyle et le groupe aroyle est le groupe benzoyle. Les composés des exemples sont préparés selon les schémas donnés en annexe. Les composés pou~ lesquels Rl, R2 et R3 représentent un groupe NO2 sont préparés à partir des composés correspondants dans lesquels Rl, R2 et R3 représentent un atome d'hydrogène par réaction avec de l'acide nitrique en présence d'anhydride acétique et d'urée. W093/12128 ~ PCT/FR92/01182 -- 3 Les exemples suivants illustrent en détail la préparation de quelques composés selon l'invention. Les numéros indiqués entre parenthèses dans les titres des exemples correspondent à ceux du tableau donné plus loin. Les microanalyses élémentaires et les spectres U.V., RMN et de masse confirment les structures des produits obtenus. Exemple 1 (composé n 1). 9-(2,5-di-acétyl-~-D-xylofurannosyl)adénine. a) 9-(5-0-tert-butyldiméthylsilyl-B-D-xylofurannosyl)adénine. A une suspension de 3,2 g (11,97 mmoles) de 9-(B-D-xylofuran- nosyl)adénine dans 24 ml de pyridine anhydre, on ajoute 2,3 g (15,26 mmoles) de chlorure de tert-butyldiméthylsilyle. Le mélange réactionnel est a~ité à l'abri de l'humidité durant 14 heures, puis dilué avec 200 ml de chloroforme. La solution résultante est lavée successivement avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et avec de l'eau (deux fois 100 ml pour chaque lavage). La phase organique est ensuite séchée sur sulfate de sodium, filtrée et évaporée à sec et coévaporée avec du toluène. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice. On obtient 3 g de 9-(5-0-tert-butyldiméthylsilyl-B-D- xylofurannosyl)adénine pur. F = 201-202C (cristallisé dans le méthanol). b) 9-(2,3-di-0-acétyl-5-0-tert-butyldiméthylsilyl-B-D-xylofu- rannosyl)adénine. A une solutlon de 2,9 g (7,6 mmoles) de 9-(5-0-tert-butyl- dlméthylsilyl-B-D-xylofurannosyl-)adénine dans 38 ml de pyrldine anhydre, on a~oute, à 0C, 1,58 ml (16,76 mmoles) d'anhydrlde acétlque. Le mélange réactlonnel est agité à température ambiante durant 40 heures, puls dllué avec 200 ml de chloroforme. La solutlon résultante est lavée successlvement avec une solu- tlon aqueu8e 8aturée d'hydrogénocarbonate de sodium et de l'eau (deux fols 100 ml pour chaque lavage). La phase organlque est ensulte séchée sur sulfate de sodium, f~ltréo et évaporée à sec et coévaporée avec du toluène. Le W093/12128 PCT/FR92/01182 ~ a.3~ 4 résidu est purifié sur colonne de gel de silice. On obtient 1,8 g de composé pur. F = 133-134C (cristallisé dans un mélange chloroforme - éther isopropylique). c) 9-(2,5-di-0-acétyl-B-~-xylofurannosyl)adénine. A une solution de 1,7 ~ (3,65 mmoles) de 9-(2,3-di-0-acétyl- 5-0-tert-butyldiméthylsilyl-B-D-xylofurannosyl)adénine dans 44 ml de tétrahydrofuranne, on ajoute 0,31 ml (5,4 mmoles) d'acide acétique et 11,2 ml d'une solution lN de fluorure de tétrabutylammonium dans le tétrahydrofuranne. Après 3 heures d'agitation à température am~iante, le mélange réactionnel est évaporé sous pression réduite, puis coévaporé avec du toluène. Le résidu est purifié sur colonne de gel de silice. On obtient 1,1 g de composé pur. F = 117-119C (cristallisé dans l'acétate d'éthyle). ExemDle 2 (composé n 6). 9-(3-0-nitro-B-D-xylofurannosyl)adénine. A 6 ml (143 mmoles) d'acide nitrique fumant refroidi à -30C, on ajoute, par portion et sous forte agitation 218 mg (3,63 mmoles) d'urée. On laisse la température progressivement remonter jusqu'à 10C afin d'éliminer l'acide nitreux, puis on refroidit à nouveau à -30C. On ajoute alors goutte à goutte O,SS ml (5,82 mmoles) d'anhydride acétique puis, par portions, O,5 g (1,42 mmole) de 9-(2,5-di-0-acétyl-B-D-xylo- furannosyl)adénine. On laisse la température proqressivement remonter jusqu'à 20C et l'agitation est poursuivie pendant 40 minutes. Le mélange réactionnel est refroidi à -20C, puis versé goutte à goutte et sous agitation sur 200 ml d'une solution aqueuse saturée de sulfate d'ammonium, mélangée à de la glace (pH ~ 6,7). On vérifie que le pH est supérieur ou égal à 1 et on a~oute rapldement une 901ution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, jusqu'à ce que le pH soit égal à 6,5. ~a phase agueu8e o~t extraite avec du chloroforme et les phases organique9, rassemblée~, sont lavées trois fois avec de l'eau, pu~8 séChéeg gur sUlfate de sOdium et évaporées à ~ec. Le résidu egt disgout 80ug agitation dans 45 ml de WO93/12128 ~¦ J;~ PCT/FR92/01182 méthanol ammoniacal (préalablement saturé à -10C et herméti- quement fermé), et l'agitation est poursuivie pendant 6 heuresj à t~mpérature ambiante. Le mélange réactionnel est évaporé à sec et coévaporé trois fois avec de l'éthanol absolu. On obtient directement 0,27 g de 9-(3-0-nitro-B-D-xylofurannosyl)adénine pur par cristal- lisation dans l'éthanol. F = 220-223C. Exemple 3 (composé n 18). N4-acétyl-1-(2,3,5-tri-O-acétyl-B-D-xylofurannosyl)cytosine. A une suspension de 0,5 g (2,06 mmoles) de 1-(B-D-xylofuran- nosyl)cytosine dans 6,5 ml de pyridine anhydre, on ajoute goutte à goutte, à 0C et sous agitation, 1,2 ml (12,7 mmoles) d'anhydride acétique. Le mélange réactionnel est agité durant 1 heure à 0C, puis durant 48 heures à tempéra- ture ambiante. 100 ml d'eau et 100 mi de chloroforme sont ensuite ajoutés. La phase organique est séparée, séchée sur sulfate de sodium, évaporée à sec et coévaporée avec du dioxanne. Le résidu est dissout dans du dioxanne et lyophili- sé pour donner 0,64 g de N4-acétyl-1-(2,3,5-tri-O-acétyl-B-D- xylofurannosyl)cytosine pur. F = 94-97C. ExemPle 4 (composés n 10 et n 11). 1-(3,5-di-O-acétyl-B-D-xylofurannosyl)cytosine et 1-~5-O-acétyl-B-D-xylofurannosyl)cytosine. A une solution de 1,3 g (3,16 mmoles) de N4-acétyl-1-(2,3,5- tri-O-acétyl-B-D-xylofurannosyl)cytosine (composé n 18) dans 100 ml de pyridine, on ajoute 0,65 ml (13,1 mmoles) d'hydrate d'hydrazlne. Le mélange réactionnel est agité durant 1 heure à température amblante et 0,65 ml (13,1 mmoles) d'hydrate d'hydrazine e~t à nouveau ajouté. On poursuit l'agitation durant 5 heureq et ajoute 20 ml d'acétone. Après 2 heures d'agitatlon, le mélange est évaporé à sec, et coévaporé trois foi~ avec du toluène. Le ré5idu est purifié par chromatogra- phie qur colonne do gel de silice et donne, par ordre d'élu- tion, 0,50 g de composé n 10 et 0,30 g de composé n 11 , , ' ', - ~ , W093/12128 ~ 3;-.("~ PCT/FR92/01182 n 10 : F = 144-146C (cristallisé dans l'acétate d'éthyle) n 11 : F = 103-106C (lyophilisé dans l'eau). Le tableau ci-après illustre les structures et propriétés physiques de quelques composés de l'invention. WO93/12128 ~ PCT/FR92/01182 ;: 7 Tableau R30--W ~1 :omposé ,~ R3 F(C) 1 A Ac H Ac 117-119 2 A H H Ac 234-236 3 A No2 NO 2 NO2 137-140 4 A H NO2 NO2 83-185 (décomp.) A NO2 H H 168-172 6 A H NO2 H 220-223 7 A H H NO2 103-105 8 C H Bz Bz 1 8 4 - 1 8 5 9 C H H Bz 120-124 C H Ac Ac 144-146 11 C H H Ac 103-106 12 C NO2 NO2 NO2 136-140 13 C' No2 H NO2 89-94 14 C H H N02 108-112 C ~ H 149-151 FEU1L~ E ~E P~MPLAC~r31ENT WO93~12128 PCT/FR92/01182 Tableau (suite) Composé B ~ R~ R~ R~ 16 C NO2 H H 1;2-155 1~ c~ c H H H 137-138 18 C~~ A c Ac Ac Ac 94-97 19 c~ c H Ac Ac 96-101 . ~ Ac H Ac 204-206 A . adénine C = cytosine Ac , acétyle , CH3CO Bz . benzoyle . C6H5CO FEUILLE D~: REI~PLP.CEM.-~NT WO93/12128 ~ ~ 3 "~ PCT/FR92/01182 Le~ composés de l'inventlon ont été soumiq à une série d'es- sais pharmacologiques qui ont mis en évidence leur intéret comme substances à activités thérapeutiques. 1) Etude de l'activité anti VIH 1. La multiplication du VIH 1 (souche HTLV III B) dans les cel- lules MT4 (cellules T4 transformées par HTLV-l) est suivie par l'effet cytopathoqène induit par le virus. Les cellules sont infectées avec une dose de VIH 1 produisant après 4 jours une diminution de 90 % du nombre de cellules vivantes. Les composés testés sont ajoutés, après l'adsorption du virus, dans le milieu de culture à différentes concentra- tions. La via~i~ité des cellules est mesurée par une réaction colo- rimétrique basée sur leur capacité a réduire le 3-(4,5 dimé- thylthiazol-2-yl)-2,5 diphényl-tétrazolium bromide en for- mazan, propriété due aux deshydrogénases mitochondriales. La quantité de formazan produite (D.O. à 540 nm) est proportion- nelle au nombre de cellules vivantes. Le pourcentage de protection des cellules infectées par le traitement avec le~ composés est calculé en appliquant la formule propo~ée par Pauwel~ et col. D.O. 540 de~ cellules infectées traitées - D.O. 540 de~ cellules infectéc~ D.O. 540 des cellule~ non infectée~ - D.O. 540 de-~ cellules infectée~ Par cette m;thode, on met en évidenco que les concentrations llmlto~ donnant un ef~et antl VIH 1 vont de 10-3M à 10-5M. 2) Etude doJ actlvltéJ antl HSV1, antl HSV2 et antlvacclne. Sur do~ colluleJ do ~lngo llgnéo Vero, on teste l'activité antlvlralo do~ composoJ do 1 ' inventlon, en me~urant l'lnhl- bltlon de l'o~ot cytopathogèno lndult par 100 T~CD 50 (quantlto do ~lruJ capablo do nécro~or 50 % des cellules). LeJ vlrus ut~ oJ ~ont l'herpo~ ~mplex type 1 (HSV1), F~1LLE I~E REMPLAt:EM2 NT 't~ 093t1~128 ~ ~ 3C! ~ j~ PCT/FR92/01182 . souche F, l'herpès simplex type 2 (HSV2), souche G, et le virus de la vaccine, souche Copenhague. Les essais sont effectués en microplaques de 96 godets sur des cellules agées de 48 heures. Pour tous les virus, on ajoute successivement : - 100 TCID 50~ de virus dans un volume de 0.1 ml - et 0,1 ml de chaque substance à une concentration de 2 10 3M, de 2 10 4M, de 2 10 5M et de 2 10 6M. La concentra- tion finale des substances est donc de 10-3M, de 10-~M, de lO~sm et de 10-6M. Les dilutions de virus et des substances sont effectuées dans du milieu Dulbecco contenant 2 % de sérum de veau foetal (SVF). Chaque concentration de substance est testée en quadruple. Les microplaques sont centrifugées à 3000 g pendant 45 minu- tes à température ambiante. Après avoir éliminé le virus, on rajoute 0,2 ml de milieu de culture (MBE ~ 10 % de SVF) contenant les substances à tester à des concentrations de 10-3M, de 10-4M, de 10-5M et de 1 o - 6M Les microplaques sont incubées à 37C dans une atmosphère contenant 5 % de C02. L'effet antiviral des substances est mesuré en comparant l'effet cytopathogène observé dans les cupules contenant les produits à celui observé dans les cupules témoin virus. L'effet antlviral est obtenu pour des concentrations allant de 10 ~M à 10 sM. Dans un deuxième temp5, les produits ayant montré une activité antivirale sont repris selon le même protocole, mais en utilisant des dllutions finales de 10~~ , 5.10-5, 2,5.10-5, 1.105, 5.10-6, 2,5.10-6 et 10-6. Les résultats des essais pharmacologlques montrent que les compoJos de l ' lnvention sont actlfs v~g-à-vls des vlrus HIV1, HSVl, HSV2 ot vaccine. Ils ont également été testés à titre d'exemple sur le~ vlrus suivantJ : cytomégalovlrus humaln ~CMV) souche ~D 169, vlrus Slndbls, vlrus coxsackle B3 ~CoxB3), pollovlru9 type I (Polio I), 50uche Mahoney, vlrus reJpiratolre syncytlal ~RSV), souche A2, paramyxovlrus type TII ~ Para III ) . FEU!LL~ Dr R~MPLACE~q~ W093/12128 PCTtFR92tO1182 Les composés de l'invention peuvent donc etre utilisés pour leur activité antiproliférative et herpétique et dans le traitement topique d'infections cutanées à HSV1 et HSV2. FEUI~LE DE Rl.'.qPLA"E;~i_S~T P ~ /FR92/01182 W O 93/12128 ~ `Cl ~ , AN N E X E 1 ~y \p ~DMSCl TBDMS0 o ~ A R - C / tlO~y~ 0 OH OH. TBDMSO o /` R -CO ~/ ~/ ( bu ) ~ N , F OC -R O HNO~/AC20~NH2-ll-NH2 A 0, A N~/C~H~O~ ~CJ-l R C' ~ . OC~R o A Adén~n~ R ~ C1-C~ alkyle ou arylo TBDMS ~ tortlobutyl~éthyl~lyle F~A-I!LL~ ~ P~.~L~",~P.~i-5;1T WO 93/12128 ~ ~ . ] PCI /FR92/01 182 13 ANNEXE 2 R- ~/ ~ N~ COR HO ~ ~ R-C ~ R ~o ~ ICRC OH O NH2-N~2~H20 R-CO ~ O f puis séparation par chromatographie OH R CO - ~ C 0 C = cytos ine R = C 1 -C 4 alkyle FEUlLLE DF REMPLACEME:N~