CA2167930A1 - Oxathiolanes, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui en renferment - Google Patents
Oxathiolanes, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui en renfermentInfo
- Publication number
- CA2167930A1 CA2167930A1 CA002167930A CA2167930A CA2167930A1 CA 2167930 A1 CA2167930 A1 CA 2167930A1 CA 002167930 A CA002167930 A CA 002167930A CA 2167930 A CA2167930 A CA 2167930A CA 2167930 A1 CA2167930 A1 CA 2167930A1
- Authority
- CA
- Canada
- Prior art keywords
- radical
- general formula
- compounds
- formula
- acyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Abandoned
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D411/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- C07D411/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
- C07F7/02—Silicon compounds
- C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
- C07F7/18—Compounds having one or more C—Si linkages as well as one or more C—O—Si linkages
- C07F7/1804—Compounds having Si-O-C linkages
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Abstract
La présente invention se rapporte au domaine de la chimie organique et plus précisement à celui de la chimie thérapeutique. Elle a spécifiquement pour objet, les 5 (cytosinyl-1) 1,3-oxathiolanes de configuration cis répondant à la formule générale (I) dans laquelle R est un radical acyle au aralcoyle, dérivés d'un hétérocycle mono- ou bicyclique azoté et le groupe hydroxyméthyle en position 2 est en position cis par rapport au plan déterminé par les positions 2 et 5. Les composés de formule générale (I) servent de principes actifs à des compositions pharmaceutiques, notamment à action antivirale.
Description
~16793~
OXATHIOLANES, LEUR PROCEDE DE PREPARATION
ET LES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES QUI EN RENFERMENT
La présente invention se rapporte au domaine de la chimie organique et plus précisément à celui de la chimie thérapeutique.
Elle a pius particulièrement pour objet des 2',3'-didesoxynucléosides substitués en o position 2 par un cycle 1,3-oxathiolane.
Elle a spécifiquement pour objet les 5-(cytosinyl-1) 1,3-oxathiolanes de configuration cis (2R-5S ou 2S-5R) répGndanl à la formule générale IE~ R
HCt---- O ~ ~
~Y
S
que l'on peut représenter sous l'une des deux représentations spatiales ~0 ~S
5~ HO--CH ~ ~
S NE~ R
dans laquelle R est un radical acyle ou aralcoyle, dérivés d'un hétérocycle mono- ou bicyclique azoté
et le groupe hydroxyméthyle en position 2 est en position cis par rapport au plan déterminé par les positions 2 et 5.
WO 95/32200 ; 2 PCT~R95100683
OXATHIOLANES, LEUR PROCEDE DE PREPARATION
ET LES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES QUI EN RENFERMENT
La présente invention se rapporte au domaine de la chimie organique et plus précisément à celui de la chimie thérapeutique.
Elle a pius particulièrement pour objet des 2',3'-didesoxynucléosides substitués en o position 2 par un cycle 1,3-oxathiolane.
Elle a spécifiquement pour objet les 5-(cytosinyl-1) 1,3-oxathiolanes de configuration cis (2R-5S ou 2S-5R) répGndanl à la formule générale IE~ R
HCt---- O ~ ~
~Y
S
que l'on peut représenter sous l'une des deux représentations spatiales ~0 ~S
5~ HO--CH ~ ~
S NE~ R
dans laquelle R est un radical acyle ou aralcoyle, dérivés d'un hétérocycle mono- ou bicyclique azoté
et le groupe hydroxyméthyle en position 2 est en position cis par rapport au plan déterminé par les positions 2 et 5.
WO 95/32200 ; 2 PCT~R95100683
- 2 ~ 6 ~
Parmi les dfflérentes définitions prises par le substituant R, on dfflérenciera:
a) les dérivés nicotiniques où l'hétérocycle est une structure pyridique et le 5 groupement acyle est en position 2, 3 ou 4, de formule la (X)n CO-- ( Ia ) ,~
dans laquelle X représente de l'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe nitro,o un alcoxy inférieur ou un radical trifluoro".ell"~le et n est un nombre entier variant de 1 à 3 b) les dérivés dihydropyridiques où l'hétérocycle est une 1,4-dihydropyridine et le radical acyle est en position 2, 3 ou 4, de formule ~b (X)n CO_ (~b) I
dans laquelle R1 est un radical alcoyle ayant de 1 à 10 atomes de carbone X et n sont définis comme précédem",e"l c) les dérivés nicotiniques quaternisés où l'atome d'azote porte un substituant alcoyle et le radical acyle est en position 2, 3 ou 4, ayant la formule générale Ic O
_11 ~(X)~ ~>
~ A (Ic) dans laquelle A est un anion minéral ou organique R1, X et n sont définis comme précédemment WO 95/32200 ~ I ~ 7 9 3 ~ PCT~5/o~ 683 d) les dérivés quinoléiques où l'hétérocycle est une structure bicyclique ayant la formule générale Id (X)n, ~ C-- (Id) dans laquelle le radical carbonyle peut être en position 2, 3 ou 4 X représente de l'hydrogène, un halogène, un radical trifluorométhyle, un alcoxyinférieur ou un groupe nitro et n' représente un nombre entier variant de 1 à 6.
e) les dihydroquinoleines de formule générale Ie (X)nl ~ C-- (le) N
I
R
dans laquelle R1 et X sont définis comme précédemment et n' est un nombre entier variant de 1 à 6 fl les quinoléines quaternisées de formule générale If (X)nl ~ C-- A~) (If) R I
20 dans laquelle R1, X et n' sont définis comme précédemment le radical acyle se trouve en position 2, 3 ou 4 et A est un anion minéral ou organique g) les (dihydropyridyl) alcoyles de formule générale Ig WO95/32200 21~ 7 ~ 3 0 4 PCT/~R9SJ'~
(X)n ¢~ (CE~! ) m-- (Ig) N
Rl dans laquelle R1, X et n sont définis com",e précédemment et m est un nombre variant de 1 à 6 ainsi que leurs sels d'addition avec un acide minéral ou organique.
Les composés de formule I peuvent etre dédoublés en leurs isomères optiques. On obtient ainsi l'isomère (+) et l'isomère (-).
o Les infections rétrovirales sont la cause de maladies graves, en particulier du syndrome d'immunodéficience acquise (SIDA) qui est une affection virale souvent fatale, et à un degré moindre les hépatites. Plusieurs composés de type nucléosidiques ou hétéro-nucléosidiques, sont actuellement cliniquement utiliséspour le traitement de ces affections rétrovirales. Ceux-ci sont les dérivés AZT (3'-azido-2',3'-didesoxythymidine) (Proc. Natl. Acad. Sci. 82, 7096-7100, 1985), ddC(2',3'-didesoxycytidine) (Proc. Natl. Acad. Sci. 86, 1911 -15, 1986), d4T (2',3'-didéhydro-3'-désoxythymidine) (Biochem. Biophys. Res. Comm. 142, 128--34, 1987),ddl (2',3'-didésoxyinosine) (Antiviral. Chem. Chemother 2, 221, 1991), BCH-189 ou 3TC (2',3'-dideoxy 3'-thiacytidine) décrit dans la demande de brevet européen 90301335.7 et suivants. Le nombre restreint de ces composés a"li~et,oviraux à la disposition du praticien, et leur efficacité thérapeutique limitée appelle la recherche de nouveaux composés dont les vertus thérapeutiques seraient accrues et les effets secondaires diminués.
On connalt déjà des dérivés de 2-[(1-hydroxyméthyl) 1,3-oxathiolan 5-yl] cytosine et notar"r"e"~ les esters de la fonction hydroxyméthyle (demande de brevet européen0.382.526) ou les dérivés halogénés en position 5' du noyau pyrimidique (R.F
SCHINAZI et al. Antimicrob Agents and Chemotherapy 36 (1992) 2423-2431).
Les composés de l'invention possèdent la propriété d'inhiber la réplication de rétrovirus humains, en particulier le VIH et le virus de l'hépatite B (\/HB). Ces composés, dérivés du BCH-189 ou 3TC, incluent dans leur structure une entité 1,4-dihydro-1-méthyl-3-quinoleylcarbonyl fixée sur le groupement amine exocyclique de la cytidine. Cette entité structurale particulière confère en pharmacologie 2~ ~793~
WO 95t32200 5 PCT/FRg~,/00~
. ~ ... ..............................................:
expérimentale la propriété d'augmenter et de faciliter le passage de la barrièrehémato-encéphalique (Pharmacol. Ther 19, 337-396, 1983 - Methods Enzymol.
112, 381-396, 1985 - Drug. Des. Del, 1, 51~4, (1986) - J. Med. Chem. 31, 244-249, 1988 - J . Med. Chem. 32, 1782-1788, 1989 - J. Med. Chem. 32, 1774-1781, 1989) .
1.
La synthèse chimique de ces composés a été effectuée à partir de protocoles expe,i",ei)taux classiques. La mise au point de ces nouveaux hétéronucléosides nécessite comme composé de départ le dérivé 2',3'-didéoxy-3'-thiacytidine dont plusieurs méthodes de synthèse sont décrites dans la littérature chimique (J. Org.
o Chem. 56, 6503, 1991 - J. Org. Chem. 57, 2217, 1992 - Tet. Lett. 33, 4625, 1992 -N-~cleosicles and Nucleotides 12, 225, 1993). A partir de ce dérivé, la synthèse des composés faisant l'objet de la présente invention et celle des intermédiaires qui s'y ra~.po,le"t, sont décrites dans la présente de",ande de brevet.
L'invention se rapporte aussi au procédé d'obtel)lion des composés de formule générale I qui consiste à soumettre un 5-(cytosinyl-1) 1,3-oxathiolane cis à l'action d'un dérivé fonctionnel d'acide carboxylique de formule ROH où R est un radical acyle dérivé d'un hétérocycle a~ o"~alique ou dihydroaromatique, mono- ou bicyclique azoté ou à l'action d'un dérivé actif aralcoylé de formule R'Z où R' est un radical aralcoyle dérivé d'un héterocycle aromatique ou dihydroaromatique, mono-ou bicyclique, azoté et Z est un radical labile facilement clivable.
D'une manière plus précise, le dérivé fonctionnel d'acide ROH est un halogénure, un anhydride, un anhydride mixte formé avec un carbGdiilnide ou un ester réactif cGm"~e un ester de phénol.
Dans le cas d'un dérivé aralcoylé, Z est un atome d'halogène ou un radical alcoyl-ou aryl sulfonyle.
L'invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques à action antivirale caractérisées en ce qu'elles re"ren,)el,t à titre de principe actif au moins un composé de formule générale I ou un de ses sels d'addition avec un acide minéral ou organique. en association ou en mélange avec un excipient ou un véhicule inerte, non-toxique, pharmaceutiquement compatible, notamment pour I'usage topique ou général.
Dans ces compositions, la teneur en principe actif de forme générale I s'échelonne de 0,1 mg à 100 mg par prise unitaire en fonction de la voie d'administration.
wo 95,32200 ~ ~ ~ 7 ~ 3 ~ 6 PCT/I~ Ç~3 EXEMPLE I
Isomères du Cis 2~diphénylterbuty1silyloxyméthyl)-5 tN4-(3"-pyridinylcarbonyl) cytosine-1'-yl]-1,3-oxathiolane 1 A température ambiante, sous atmosphère d'azote, on additionne dans un mélange de dichlorométhane (7 ml) et de diméthytfolmalllide (2 ml), 1 eq d'acide nicotinique (27 mg, 0,21 mmol) 1,1 eq. de BOP (93 mg, 0,23 mmol), 1,1 eq. de HOBT (31 mg, 0,23 mmol), 1 eq. de 5'-terbutyldiphénylsilyl-2',3'didesoxy-3'-thiacytidine (39 mg, o 0,23 mmol), 4 eq. de DIEA (146 1~l, 0,84 mmol). Le mélange est agité pendant une nuit à température ambiante, lavé par une solution d'acide citrique à 5% (10 ml), puis par une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 5% (10 ml). Le mélange résultant est extrait à l'acétate d'éthyle (3x10 ml), séché sur Na2SO4, et évaporé. Le résidu est purifié sur plaque de gel de silice. On obtient 48 mg de composé pur.
[1H] RMN: ~ (CDCI3) = 1.1 (s,9H,tBu); 3.1-3.6 (m,2H,CH2-O); 3.7-4.2 (m,2H,C4H2);5.25 (t,1H,Cs-H); 3.1-3.6 (m,2H,CH2-O); 5.5 (d,1H,Cs~-H); 6.35 (q,1H,C2-H); 7.4-7.8 (m,1H,aromatique); 8.0 (d,1H,C6'-H); 8.3 (d,1H,nicotinyl); 8.8 (d,1H,nicotinyl); 8.8 (d,1H,nicotinyl); 9.1 (d,1H,nicotinyl).
EXEMPLE ll Isomères du Cis 2~hydroxymethyl)-5 tN4~3"-pyridinylcarbonyl) cytosine-1'-yl] -1,3-oxathiolane 2 Le composé 1 (25 mg, 0,05 mmol) est dissout dans 3 ml de tétrahydrofurane anhydre. A cette solution, on ajoute 3 eq (135 1~1, 0,15 mmol) de fluorure de tétrabutyla""nonium. La solution est agitée à température ambiante pendant 3 h.
Après évaporation du solvant, le produit résultant est chromatographié sur plaque de silice préparative (éluant : toluène/CH30H 15%). On isole 13 mg de composé
désiré.
[1H] RMN: ~ (CDCI3) = 3.1-3.6 (m,2H,CH2-O); 3.7-4.2 (m,2H,C4H2); 5.25 (t,1H,Cs-H); 5.5 (d,H,Cs~-H); 6.35 (q,1H,C2-H); 7.4-7.8 (m,1H,aromatique); 8.0 (d,1H,C6'-H);
8.3 (d,1 H,nicotinyl); 8.8 (d,1 H,nicotinyl); 9.1 (s,1 H,nicotinyl).
EXEMPLE lll Isomères du Cis 2~terbutyl cliphenyl-silyloxyméthyl)-5-[N4~3"-tosyl) cytosine-1 '-yll-1,3~xathiolane 4 WO 9S/32200 2 ~ 6 7 9 ~ ~ PCT/FR951C~3 . ~
A une solution de dérivé 5 (56 mg, 0,12 mmol) dans la pyridine (3 ml), on additionne à 60C sous atmosphère d'azote 2 eq. de chlorure d'acide paratoluène sulfonique (46 mg, 0,24 mmol). Après 20 h d'agitation à température ambiante, le mélange est 5 évaporé à sec, lavé par une solution d'acide citrique à 5% (10 ml), puis extrait à
l'acétate cl'éthyle (3x10 ml). Les phases organiques réunies sont séchées sur Na2SO4 et évaporées. On isole 48 mg de produit désiré.
[1H] RMN: (CDCI3) = 1.1 (s,9H,tbu); 2,45 (s,3H,CH3 tosyl); 3.15-3.55 (m,2H,C2-CH2-O); 3.85-4.2 (m,2H,C4H2); 5.25 (t,1H,Cs-H); 6.3 (t,1H,C2-H); 7.3-7.7 (m,14H,ArH); 8.05 (d,1H,C6'-H);
EXEMPLE IV
Isomères du Cis 2~diphénylterbutylsilyloxyméthyl)-5-[N4(3"-pyridinyl carbonyl) s cytosine-1 '-yl]-1,3-oxathiolane 3 A une solution de dérivé 4 (47 mg, 0,075 mmol) dans la lutidine (2 ml) sous atmosphère d'azote à 90C, on ajoute 6 eq. (46 ~I, 0,45 mmol) de pyridinylmethylamine. Le chauffage est maintenu pendant 48 h sous agitation. Après 20 refroidissement, le mélange est évaporé, lavé par une solution d'acide citrique à 5%
(10 ml), puis extrait à l'~céPte d'éthyle (3x10 ml), séché sur Na2SO4. Après évaporation, le résidu est purifié par cl,romalographie sur plaque de gel de silice.
(éluant: EtOAC/MeOH, 10/1) 2s EXEMPLE~ V
Isomères du Cis 2~terbutyl~iphényl-silyloxyméthyl)-5-(cytosine-1'-yl)-1,3-oxathiolane 5 Une solution de 2',3'-didéoxy-3'-thiacytidine (105 mg, 0,45 mmole) dans la pyridine 30 (6 ml) est traitée sous almosphère d'azote par du chlorure de diphénylterbutylsilyle (140 ,ul, 0,5 mmole). Le mélange réactionnel est agité pendant 24 heures à
température ambiante. Après conce"l,dliG" sous vide, on ajoute 30 ml d'eau et on extrait à l'acétate d'éthyl (3x20 ml). Les phases organiques réunies sont alors séchées sur Na2SO4 et concentrées à sec pour donner le composé 5 (210 mg, Rdt 35 qualllildlil) sous forme d'un solide blanc.
wo 95/32200 2 ~ ~ 7 3 3 ~ 8 PCT/FR95/00683 Rf (AcOEVMeOH 2/1) = 0,62 [1H] RMN (CDCI3) ~: 1,1 (s,9H,tbu); 3,1-3,6 (m,2H,C2-CH2-0); 3,7-4,2 (m,2H,C4-H2); 5,25 (t,1H,Cs-H); 5,5 (d,H,Cs~-H); 6,35 (q,1H,C2-H) 7,4-7,8 (m,10H,2Ph); 8,0 (d,1 H,C6~-H) EXEMPLE Vl Isomères du Cis iodure de 2~hydroxyméthyl)-5-tN4-(1"-méthyl-3~-pyridinylcarbonyl) cytosine-1 '-yl]-1,3~xathiolane 6 Sous atmosphère d'azote à 1 eq (46 mg, 0,14 mmol) de composé 2 dissous dans 4 ml d'acétonitrile anhydre, on ajoute 9 eq. (1,25 mmol, 77 ,ul) d'iodure de méthyle. La solution résultante est chauffée à 50C pendant 48 h. Après évaporation des solvants, le résidu est purifié par flash ol,ro,,,atoyl~ e~ éluant BuOH/H20/acide acétique [5:2,5:2,5]. On obtient un solide jaune (55 mg).
[1H] RMN: (DMSO d6) ~ = 3.25 (t,2H,CH24); 3~90 (dd,2H,C2-CH2); 4.45 (s,3H,N+-CH3); 5.25 (t,1H,CH-5); 6.30 (t,1H,CH-2); 6.92 (d,1H,CH~'); 7.30 (d,1H,nicotinyl);
7.85 (d,1H,nicotinyl); 8.05 (d,1H,CH-5'); 8.20 (d,1H,nicotinyl); 7.85 (d,1H,nicotinyl);
9.01 (d,1H,nicotinyl).
20 Spectre de masse: (FAB+) 349 (M-1)+
EXEMPLE Vll Isomères du Cis 2~hydroxyméthyl)-5-tN4~ néhtyl-1",4"-dihydro-3"-pyridinyl carbonyl) c~losi-,e 1'-yl]-1,3-oxathiolane 7 Dans 3 ml d'une solution dégazée de méthanol contenant 10% d'eau, on dissout 30 mg (0,06 mM) de composé 6. A cette solution, on ajoute 15 mg de bicarbonate de sodium et 60 mg de dithionite de sodium. Le mélange réactionnel est agité sous .azote pendant 3 h. La solution devient ora.,gée. On évapore le solvant puis on resuspend les sels dans un minimum de méthanol; on filtre. Le filtrat est purifié par cl~ro",alog~a~,hie sur couche mince préparative (1 mm). (Eluant: Toluène/méthanol 1: 1) pour donner 6 mg d'un solide blancjaune SM: (FAB+) 349 (M-1)+
EXEMPLE Vlll Isomères du Cis 2-hydroxyméthyl 5-[N4-3"~uinolinylcarbonyl) cytosin-1'-yl]
1,3~xathiolane 8 WO9513220~ 7 ~ ~ ~ PCT/~ c~3 A 2 ml de diméthylrormamide anhydre, on ajoute 74,4 mg (0,43 mmol) d'acide 3-quinoline carboxylique puis 96 mg (0,47 mmol) de 1,3-dicyclohexyl carbodiimide et 63,4 mg (0,47 mmol) d'hydrate d'hydroxybenzotriazole. Le mélange est agité
pendant 1 h à température ambiante sous azote. Un précipité blanc de s dicyclohexylurée apparaît et on ajoute alors 100 mg (0,43 mmol) de 2,3'-dideoxy 31-thiacytidine. Le mélange est agité pendant une nuit. Ensuite, on évapore le cJi"~ell,ylformamide sous pression réduite, et le résidu est hydrolysé par une solution aqueuse saturée en NaCI (10 ml). On extrait le résidu à deux reprises par de l'acétate d'éthyle (2x10 ml). Les phases organiques sont combinées, séchées sur 10 sulfate de magnésium puis filtrées. Le solvant est évaporé. Le produit est purifié par fflash) chro,nalographie. (Eluant: acétate d'éthyle/ méthanol 98:2) pour donner 78 mg d'un solide blanc (0,2 mmol) soit un rendement de 46,5 %
PF = 116-118C - IR =1656 cm~1 (carbonyle de la fonction amide) 15 l1H] NMR (DMSO d6) ~ = 11,75 (s,1H,NH); 9,40 (d,1H,CH-2"); 9,15 (d,1H,CH4");
8,65 (d,1Hl,CH-5'); 8,20 (m,2H,CH-8" et-CH-5"); 8,0 (m,1H,CH-6"); 7,80 (m,1H,CH-7"); 7,45 (d,1H,CH-6'); 6,35 (t,1H,CH-2); 5,55 (t,1H,CH-5); 3,98 (t,2H,C2-CH2-4)l13C]NMR: (DMSO d6 ) ~ = 37,14 (C-4); 61,95 (CH20-C2); 87,28 (C-2); 88,29 (C-5); 95,85 (C-5'); 122,21 (C-3"); 126,28 (C-6"); 127,71 (C-5"); 129,63 (C-10"); 129,87 20 (C-7"); 132,08 (C-8"); 137,65 (C~"); 138,89 (C-6'); 148,91 (C-9"); 149,29 (C-2");
163,16 (C 2'); 164,51 (C4') Spectre de masse: (Fab+) 385 (M+1)+. 769 (2M+1)+
EXEMPLE IX
Isomères du Cis iodure de 2-hydroxyméthyl 5-tN4~1"-methyl 3"-quinolinylcarbonyl) cytosin-1'yl3-1,3-oxathiolane 9 On prépare une solution de composé 8 (78 mg soit0,20 mmol) dans 4 ml d'acétonitrile. On ajoute 112 ,ul (1,8 mmol) d'iodure de méthyle et le mélange est 30 chauffé à 40C sous azote pendant 24 h. Le solvant est chassé et le résidu brut est alors dissout dans le minimum d'acétonitrile. On le reprécipite par addition d'éther.
On obtienl: ainsi un solide orangé (60 mg soit un rendement de 55%.
PF = 156-159C
[1H] NMR: (CD30D) ~ = 3,32 (t,2H,CH2-4); 3,99 (dd,2H,C2-CH2); 4,80 (s,3H,+N-35 CH3); 5,313 (t,1H,CH-5); 6,0 (d,1H,CH-6'); 6,33 (t,1H,CH-2); 8,13 (m,1H,CH-7"); 8,39 (m,1H,CH-6"); 8,60 (m,2H,CH-8"); 8,72 (d,1H,CH-5'); 9,79 (d,1H,CH-4"); 9,95 (d,1H,CH-2").
Spectre de masse: (Fab+) 399 [M-l]+, 799 12(M-I)]+.
WO 95/32200 lo PCT/FR95/~ 3 2~7~3~ --EXEMPLE X
Isomères du Cis 2-hydroxymethyl 5-[N4~1"-méthyl 1",4"-dihydro 3"-quinolinylcarbonyl) cytosin-1'-yl]-1,3~xathiolane 10 On ajoute à une solution de 30 mg (0,057 mmol) du composé 9 dans 3 ml de ",éll.anol aqueux dégazé (3 ml contenant 10% d'eau), 15 mg de bicarbonate de sodium et 60 mg de dithionite de sodium. Le mélange est agité pendant une heure sous azote. Le solvant est évaporé et le résidu brut est purifié par chromatographie o préparative. (Eluant: acétate d'éthyle/méthanol 1:1). On obtient finalement 10 mg d'un solide vitreux jaune soit un rendement de 46%.
[1 H] NMR : (D2O) ~ = 3,24 (m,3+2H,NCH3+CH2-4"); 3,48 (m,2H,CH24); 3,93 (m,2H,C2H2); 5,29 (t,1H,CH-5); 6,96 (d,1H,CH-6'); 7,13 (m,2H,CH-6"+CH-7"); 7,27 15 (m,2H,CH-5"+CH-8"); 7,45 (d,1H,CH-2"); 8,23 (d,1H,CH-5') Spectre de masse: (Fab+) 399 (M-1)+
EXEMPLE Xl Isomères cis du 2-hydroxymethyl-5-tN4~2~a,a,a-brifluoro rn-toluidino) 20 nicotinyl)-cytosine-l'yl]-1,3~xathiolane 11 A une solution de 2',3'-didéoxy-3'-thiacytidine (50 mg, 0,2 mmol) dans 5 ml de DMF
anhydre, on additionne 1 1 eq. de BOP (93 mg, 0,23 mmol), 1 eq. d'acide niflumique (acide 2-(a,a,a-trifloro-m-toluidino) nicotinique) et 4 eq. de DIEA (146 ,ul, 0.84 mmol).
~s Le mélange est agité une nuit à température ambiante, lavé par une solution d'acide citrique à 5% (10 ml), puis par une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 5%
(10 ml). Le mélange résultant est extrait de l'acétate d'éthyle (3 x 10 ml), séché sur sulfate de sodium, puis évaporé. Le résidu est puriFié par chromalographie sur colonne de gel de silice (éluant: acétate d'éthyle/toluène 1 :9). On obtient un solide 30 blanc (49 mg, rendement 48%).
TEST D'EVALUATION DES PROPRIETES ANTIVIRALES
TESTS ANTI-HIV - Protocole expérimental WO 9S/32200 ~ ~ 2 ~ fi 7 ~ 3 ~ PCT/~h~S o^c83 a) généralités Appareillage: I'ull,~ce"l,irugeuse utilisée est de type Beckman TL 100. Le comptage des particules radioactives a été effectué sur un appareil Hewlett Packard Tri-Carb Modèle 1600. Les syncitia sont observées d'un microscope inversé Labovert.
Composition du tampon de Iyse NTE: Tris-hydroxyméthylaminométhane (10 mM);
NaCI (100 mM); EDTA (1 mM) b) tests d'évaluation des propriétés antivirales en culture cellulaire L'évaluation de l'effet antiviral est basée sur l'étude de l'effet cytopathogène du virus o VIH-1 sur la lignée cellulaire MT4. La lignée MT4 a pour origine des cellules T
isolées à partir d'un patient transformées par le virus VTLH-1. L'effet cytopathogène du virus VIH-1 se traduit par la for~ liGn de cellules géantes multinuclées appelées "syncitia" visibles au microscope. Cet effet du VIH-1 est observé 4 à 5 jours après l'infection; il est suivi par la mort des cellules 15 L'effet cytopathog.ène est directement correlé à l'infection des cellules par le virus à
sa réplication intracellulaire et à l'expression des antigènes viraux par les cellules.
Une inhibition de cet effet correspond donc à une inhibition de la multiplication du virus VIH-1 Les cellules MT4 sont e"L,etenues à 3105 cellules/ml dans du milieu RPMI 1640:
20 10% de sérum de veau foetal décomplémenté pendant 30 mn à 56C (hormones facteurs de croissance sériques ...) 1% glutamine 1% pénicilline streptomycine et 2 l~g/ml de polyrène qui favorise l'adhésion du virus sur les cellules.
L'action du traitement par l'antiviral est permanent. En effet celui-ci est présent avant pendant et après l'infection virale. Des dilutions s~lccessives sont effectuées 25 dans le sérum de veau foetal à 10% afin de pouvoir cultiver les MT4 pendant 8 jours et observer la for",dlion des syncitia Test MT4:
Avant l'in~ection: 3.106 cellules/1001 1 sont distribuées dans une microplaque 96 30 puits et centrifugées 3 mn à 2000 tpm (tours par minutes). Le culot est alorspréincubé 1 h à 37C avec 100 ~I de dfflérentes concel-l,dlions d'antiviral à tester.
Infection: I'infection est réalisée en micropuits en rajoutant 100 TCIU (unités infectieuses) du virus VIH-1 (ce titre du virus VIH-1 est déterminé pour induire la formation de syncitia en 4 ou 5 jours). L'antiviral est toujours présent lors de35 I'infection et la dilution du virus à 100 TCIU.
Après l'infection: après une incubation de 1 h à 37C les MT4 sont lavées 3 foisavec du RPMI 1640 et mises en culture à raison de 3105 cellules par millilitre de chacune des concentrations des composés à tester en plaques de 24 puits. Lors du WO95/32200 ~ ~ ~ 7 ~ 3 ~ 12 PCT/FR95~C'~3 passage effectué au jour J3, les celluies MT4 sont diluées au 1/3. La concentration de l'antiviral est maintenue. Chaque jour, I'apparition de syncitia est observée au microscope afin de détecter un éventuel retard par rapport au témoin VIH-1. A J8, Ie dosage de la transcriptase inverse est effectué. Si les cellules ne sont pas infectées, c'est donc qu'il y a protection par l'antiviral testé.
Dosaqe de la lldr~cril~tase inverse:
La transcriptase inverse est une ADN polymérase ARN dépendante. Cet enzyme permet la réplication des rétrovirus. Grâce à celui-ci, I'ARN du virus, copié en ADN, o s'intègre dans le génome cellulaire. L'ADN proviral est transcrit par les enzymes de la cellule en ARN viral. Pour le dosage de l'activité tra"s.;, i~lase inverse, on concentre 100 fois 1 ml de surnageant de culture par ultracentrifugation pendantmn à 95000 tpm; le culot viral obtenu après ultracentrifugation est remis en suspension dans 10 ~ul de tampon NTE + TRITON 0.1% (éther de polyoxyéthylène);
15 celui-ci sert à Iyser le virus et à libérer la transcriptase inverse. In vitro, c'est l'activité
transcriptase inverse qui est mise en évidence. Cet enzyme utilise une matrice synthétique poly A possérl~nt une amorce oligo dT ayant de 12 à 18 résidus. Le substrat radioactif de cette réaction est le [3H]dl~P (thyrnidine triphosphatée radioactive à 1mGi/ml); les macromolécules tritiées néoformées, sont précipitées par 20 de l'acide trichloroacétique et séparées du [3H]l~P libre par filtration. L'activité
enzymatique de la transcriptase inverse est mesurée par la radioactivité incorporée dans les complexes poly-rA/poly-dT. Cette radioactivité est déter"linée dans un con,pteur de particules, après addition du liquide scintillant tenant fonction d'amplificateur TEST ANTI-HBV- Protocole e~a~érimental Parmi les dfflérentes méthodologies employées pour évaluer l'activité de composés sur le virus de l'hépatite B (\/HB), le modèle du virus de l'hépatite B du canard (Duck 30 HBV) a été utilisé (J.Med. Virology 1990, 31, 82-89; Viral Hepatitis and Liver Disease, 1988, 506-509; Hepatology, 1989, 10, 186-191). Le matériel de culture pour tester "in vitro" I'activité anti-VHB de composés est constitué d'hépatocytes de canard, infectés par le virus de l'hépatite B du canard (DHB\/), (Antimicrob. Agents Chemother. 1989, 33, 336-339; J. Med. Virology, 40, 59~4; Antivir. Res. 1993, 21, 35 155-171; Antimicrob. Agents Chemother. 1993, 37, 1539-1542). En effet, le virus de l'hépatite B du canard est reconnu comme étant très proche du virus de l'hépatite B
humain (Viral Hepatitis and Liver Disease, 1988, 526-529; Antiviral Research, 1987, 8, 189-199). Dans des conditions standardisées (\/irology, 1989, 171, 564-572), la WO 9~/3220~ 1 3 ~ 3 ~ PCT/FR95/00683 culture d'hépatocytes de canard permet la réplication complète du DHBV. L'activité
antivirale des composés testés est mesurée en fonction de la quantité d'ADN viral produit pendant 10 jours de culture des hépatocytes infectés.
5 Protocoleexpérimenl~
Un caneton de 3 semaines, atteint par le DHBV, est utilisé pour la préparation des hépatocytes. Le canard est tué sous anesthésie et l'isolement des hépatocytes est effectué selon la méthodologie de Guillouzou (Research in isolated and cultured hepatocytes, J. Libbey Eurotex Ltd/lNSERM, 1986). Les cellules sont mises en suspension dans le milieu de Leibowitz et 5 l~g/ml d'insuline bovine, 7.10-5 mole d'hémisuccinate d'hy-llocorlisone et 1.5% de DMSO sont ajoutés. La densité des cellules est de 8.106 cellules, étalées dans des boîtes de culture de 100x20 mm.Les composés testés sont ajoutés à la culture après l'étalement des cellules. Lemilieu est changé tous les jours, pendant 10 jours. La production d'ADN viral du15 virus de l'hépatite B de canard dans le surnageant des cellules est estimée par la méthode cl'hybridation "Dot Blot", selon Fourel et al. (\/iral Hepatitis and Liver Disease, 1988, 506-509; Hepatology, 1989, 10, 186-191) L'inhibition est expriméeen pourcentage de la quantité d'ADN présent dans le surnageant des cellules, parrapport à une culture infectée par le DHBV non traitée avec un dérivé nucléosidique.
RESULTATS VIROLOGIQUES
Tests I IIV:
Les composés dont la synthèse est décrite dans la présente demande de brevet, et25 les structures données dans la description de l'art antérieur, ont un effet sur l'inhibition de la replication du virus HIV-1 BRU (BRU:souche virale expérimentée) dans le cas où les cellules infectées sont du type MT4.
Dans le tableau I ont a décrit les résultats des tests. La colonne 1 donne le nom des composés étudiés les plus représenlalirs, et dans la colonne 2 sont reportées les 30 valeurs dites IC50 (concentration de composant donnant 50% d'inhibition de laréplication du virus HIV dans des cellules MT4 infectées, mesurée au jour J7 après l'infection). Par observation et comptage du nombre de syncitia formés par rapport à
celui compté dans le cas de cellules MT4 infectées mais non traitées par le composé
antiviral, la valeur du IC50 est déterminée.
WO 9S/32200 ~4 PCT/FR95/00683 ., ",,, ~
Tests DBHV:
Les composés décrits les plus représe~talir~, ont été testés pour leur effet sur la replication du virus Duck HBV (DHB\/) selon le protocole exposé dans la partie expérimentale de ce document.
Dans le tableau 2 sont décrits les résultats des tests.
Abréviations:
AcOEt: acétate d'éthyle ADN: acide désoxyribonucléique APTS: acide para-toluène sulfonique ARN: acide ribonucléique AZT: 3'-azido-2'-3'-dideoxy-thymidine ou Zidovudine BOP: hexafluorophosphate de be"~ul,i~olyloxytrisdiméthyl-aminophos phonium CCM: chromatographie sur couche mince 15 DCC: N,N'-dicyclohexylcarbodiimide DCU: N,N'-dicyclohexylurée DIEA: N,N-diisopropyl N-éthylamine DMF: N,N-diméthylro""a",ide DHBV: Duck hepatitis B Virus 20 FAB+: "Fast positiv Atomic Bombardment"
3HdTTP: Thymidine triphosphatée ~.lio~.live à 1 mCUml HOBT: 1-hydroxybenzotriazole IR: infra-rouge PF: point de fusion 25 RMN: resonnance magnétique nucléaire SIDA: syndrome de l'immunodéfil,ience ~cq~ise SM: spe~;l,ur"t:l,ie de masse TBAF: fluorure de tétrabutyla",mo~ fn TBDPSCI: chlorure de tétrabutyldiphénylsilyle 30 3-TC: (-)-(2R,3S)-2-hydroxyméthyl-5-(cytosine-1'-yl)-1.3-oxdll~iolane ou Lamivudine TCIU: unités infectieuses THF: tétrahydrofuranne TPM: tours par minute TsCI: chlorure de tosyle 35 UV: ultra-violet VIH: Virus de l'immunodeficience humaine VHB: Virus de l'hepatite B
VTLH: Virus des cel' lles T Iymphotropiques humaines WO9~it32200 ~ ~ 6 7 9 3 0 PCT/FR9~1/OOC83 Tab5 Effet des nucléosides selon l'invention sur l'inhibition de la replication du virus HIV-1, exprimés sous la somme de ICso Composés COMPOSES IC50 N
9 ~100 ,uM
1 0 1 -1 0 ~M
8 1 0 ,uM
W095/32200 2~ 6 7~ 3 (1 16 PCT/~R95100683 Composés COMPOSES IC50 N
2 0.1~ M
11 ~100 ,uM
BCH-189 1 ~uM
(produit de référence) WO 95/32200 ~ 7 2 1 6 7 9 3 ~ PCT/FR95/00683 Tableau ll Effet des nucléosides selon l'invention sur l'inhibition de la replication du virus DHBV
Composés COMPOSES IC50 N
BCH-189 1 10.5 I M
(composé de référence) 210.5 ,uM
8 2~M
9 2~uM
WO 9S/32200 2 ~ ~ ~
11) ~ 9 3-~ 18 PCT/FR95100683 Composés COMPOSES IC50 1 0 2 ,uM
Parmi les dfflérentes définitions prises par le substituant R, on dfflérenciera:
a) les dérivés nicotiniques où l'hétérocycle est une structure pyridique et le 5 groupement acyle est en position 2, 3 ou 4, de formule la (X)n CO-- ( Ia ) ,~
dans laquelle X représente de l'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe nitro,o un alcoxy inférieur ou un radical trifluoro".ell"~le et n est un nombre entier variant de 1 à 3 b) les dérivés dihydropyridiques où l'hétérocycle est une 1,4-dihydropyridine et le radical acyle est en position 2, 3 ou 4, de formule ~b (X)n CO_ (~b) I
dans laquelle R1 est un radical alcoyle ayant de 1 à 10 atomes de carbone X et n sont définis comme précédem",e"l c) les dérivés nicotiniques quaternisés où l'atome d'azote porte un substituant alcoyle et le radical acyle est en position 2, 3 ou 4, ayant la formule générale Ic O
_11 ~(X)~ ~>
~ A (Ic) dans laquelle A est un anion minéral ou organique R1, X et n sont définis comme précédemment WO 95/32200 ~ I ~ 7 9 3 ~ PCT~5/o~ 683 d) les dérivés quinoléiques où l'hétérocycle est une structure bicyclique ayant la formule générale Id (X)n, ~ C-- (Id) dans laquelle le radical carbonyle peut être en position 2, 3 ou 4 X représente de l'hydrogène, un halogène, un radical trifluorométhyle, un alcoxyinférieur ou un groupe nitro et n' représente un nombre entier variant de 1 à 6.
e) les dihydroquinoleines de formule générale Ie (X)nl ~ C-- (le) N
I
R
dans laquelle R1 et X sont définis comme précédemment et n' est un nombre entier variant de 1 à 6 fl les quinoléines quaternisées de formule générale If (X)nl ~ C-- A~) (If) R I
20 dans laquelle R1, X et n' sont définis comme précédemment le radical acyle se trouve en position 2, 3 ou 4 et A est un anion minéral ou organique g) les (dihydropyridyl) alcoyles de formule générale Ig WO95/32200 21~ 7 ~ 3 0 4 PCT/~R9SJ'~
(X)n ¢~ (CE~! ) m-- (Ig) N
Rl dans laquelle R1, X et n sont définis com",e précédemment et m est un nombre variant de 1 à 6 ainsi que leurs sels d'addition avec un acide minéral ou organique.
Les composés de formule I peuvent etre dédoublés en leurs isomères optiques. On obtient ainsi l'isomère (+) et l'isomère (-).
o Les infections rétrovirales sont la cause de maladies graves, en particulier du syndrome d'immunodéficience acquise (SIDA) qui est une affection virale souvent fatale, et à un degré moindre les hépatites. Plusieurs composés de type nucléosidiques ou hétéro-nucléosidiques, sont actuellement cliniquement utiliséspour le traitement de ces affections rétrovirales. Ceux-ci sont les dérivés AZT (3'-azido-2',3'-didesoxythymidine) (Proc. Natl. Acad. Sci. 82, 7096-7100, 1985), ddC(2',3'-didesoxycytidine) (Proc. Natl. Acad. Sci. 86, 1911 -15, 1986), d4T (2',3'-didéhydro-3'-désoxythymidine) (Biochem. Biophys. Res. Comm. 142, 128--34, 1987),ddl (2',3'-didésoxyinosine) (Antiviral. Chem. Chemother 2, 221, 1991), BCH-189 ou 3TC (2',3'-dideoxy 3'-thiacytidine) décrit dans la demande de brevet européen 90301335.7 et suivants. Le nombre restreint de ces composés a"li~et,oviraux à la disposition du praticien, et leur efficacité thérapeutique limitée appelle la recherche de nouveaux composés dont les vertus thérapeutiques seraient accrues et les effets secondaires diminués.
On connalt déjà des dérivés de 2-[(1-hydroxyméthyl) 1,3-oxathiolan 5-yl] cytosine et notar"r"e"~ les esters de la fonction hydroxyméthyle (demande de brevet européen0.382.526) ou les dérivés halogénés en position 5' du noyau pyrimidique (R.F
SCHINAZI et al. Antimicrob Agents and Chemotherapy 36 (1992) 2423-2431).
Les composés de l'invention possèdent la propriété d'inhiber la réplication de rétrovirus humains, en particulier le VIH et le virus de l'hépatite B (\/HB). Ces composés, dérivés du BCH-189 ou 3TC, incluent dans leur structure une entité 1,4-dihydro-1-méthyl-3-quinoleylcarbonyl fixée sur le groupement amine exocyclique de la cytidine. Cette entité structurale particulière confère en pharmacologie 2~ ~793~
WO 95t32200 5 PCT/FRg~,/00~
. ~ ... ..............................................:
expérimentale la propriété d'augmenter et de faciliter le passage de la barrièrehémato-encéphalique (Pharmacol. Ther 19, 337-396, 1983 - Methods Enzymol.
112, 381-396, 1985 - Drug. Des. Del, 1, 51~4, (1986) - J. Med. Chem. 31, 244-249, 1988 - J . Med. Chem. 32, 1782-1788, 1989 - J. Med. Chem. 32, 1774-1781, 1989) .
1.
La synthèse chimique de ces composés a été effectuée à partir de protocoles expe,i",ei)taux classiques. La mise au point de ces nouveaux hétéronucléosides nécessite comme composé de départ le dérivé 2',3'-didéoxy-3'-thiacytidine dont plusieurs méthodes de synthèse sont décrites dans la littérature chimique (J. Org.
o Chem. 56, 6503, 1991 - J. Org. Chem. 57, 2217, 1992 - Tet. Lett. 33, 4625, 1992 -N-~cleosicles and Nucleotides 12, 225, 1993). A partir de ce dérivé, la synthèse des composés faisant l'objet de la présente invention et celle des intermédiaires qui s'y ra~.po,le"t, sont décrites dans la présente de",ande de brevet.
L'invention se rapporte aussi au procédé d'obtel)lion des composés de formule générale I qui consiste à soumettre un 5-(cytosinyl-1) 1,3-oxathiolane cis à l'action d'un dérivé fonctionnel d'acide carboxylique de formule ROH où R est un radical acyle dérivé d'un hétérocycle a~ o"~alique ou dihydroaromatique, mono- ou bicyclique azoté ou à l'action d'un dérivé actif aralcoylé de formule R'Z où R' est un radical aralcoyle dérivé d'un héterocycle aromatique ou dihydroaromatique, mono-ou bicyclique, azoté et Z est un radical labile facilement clivable.
D'une manière plus précise, le dérivé fonctionnel d'acide ROH est un halogénure, un anhydride, un anhydride mixte formé avec un carbGdiilnide ou un ester réactif cGm"~e un ester de phénol.
Dans le cas d'un dérivé aralcoylé, Z est un atome d'halogène ou un radical alcoyl-ou aryl sulfonyle.
L'invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques à action antivirale caractérisées en ce qu'elles re"ren,)el,t à titre de principe actif au moins un composé de formule générale I ou un de ses sels d'addition avec un acide minéral ou organique. en association ou en mélange avec un excipient ou un véhicule inerte, non-toxique, pharmaceutiquement compatible, notamment pour I'usage topique ou général.
Dans ces compositions, la teneur en principe actif de forme générale I s'échelonne de 0,1 mg à 100 mg par prise unitaire en fonction de la voie d'administration.
wo 95,32200 ~ ~ ~ 7 ~ 3 ~ 6 PCT/I~ Ç~3 EXEMPLE I
Isomères du Cis 2~diphénylterbuty1silyloxyméthyl)-5 tN4-(3"-pyridinylcarbonyl) cytosine-1'-yl]-1,3-oxathiolane 1 A température ambiante, sous atmosphère d'azote, on additionne dans un mélange de dichlorométhane (7 ml) et de diméthytfolmalllide (2 ml), 1 eq d'acide nicotinique (27 mg, 0,21 mmol) 1,1 eq. de BOP (93 mg, 0,23 mmol), 1,1 eq. de HOBT (31 mg, 0,23 mmol), 1 eq. de 5'-terbutyldiphénylsilyl-2',3'didesoxy-3'-thiacytidine (39 mg, o 0,23 mmol), 4 eq. de DIEA (146 1~l, 0,84 mmol). Le mélange est agité pendant une nuit à température ambiante, lavé par une solution d'acide citrique à 5% (10 ml), puis par une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 5% (10 ml). Le mélange résultant est extrait à l'acétate d'éthyle (3x10 ml), séché sur Na2SO4, et évaporé. Le résidu est purifié sur plaque de gel de silice. On obtient 48 mg de composé pur.
[1H] RMN: ~ (CDCI3) = 1.1 (s,9H,tBu); 3.1-3.6 (m,2H,CH2-O); 3.7-4.2 (m,2H,C4H2);5.25 (t,1H,Cs-H); 3.1-3.6 (m,2H,CH2-O); 5.5 (d,1H,Cs~-H); 6.35 (q,1H,C2-H); 7.4-7.8 (m,1H,aromatique); 8.0 (d,1H,C6'-H); 8.3 (d,1H,nicotinyl); 8.8 (d,1H,nicotinyl); 8.8 (d,1H,nicotinyl); 9.1 (d,1H,nicotinyl).
EXEMPLE ll Isomères du Cis 2~hydroxymethyl)-5 tN4~3"-pyridinylcarbonyl) cytosine-1'-yl] -1,3-oxathiolane 2 Le composé 1 (25 mg, 0,05 mmol) est dissout dans 3 ml de tétrahydrofurane anhydre. A cette solution, on ajoute 3 eq (135 1~1, 0,15 mmol) de fluorure de tétrabutyla""nonium. La solution est agitée à température ambiante pendant 3 h.
Après évaporation du solvant, le produit résultant est chromatographié sur plaque de silice préparative (éluant : toluène/CH30H 15%). On isole 13 mg de composé
désiré.
[1H] RMN: ~ (CDCI3) = 3.1-3.6 (m,2H,CH2-O); 3.7-4.2 (m,2H,C4H2); 5.25 (t,1H,Cs-H); 5.5 (d,H,Cs~-H); 6.35 (q,1H,C2-H); 7.4-7.8 (m,1H,aromatique); 8.0 (d,1H,C6'-H);
8.3 (d,1 H,nicotinyl); 8.8 (d,1 H,nicotinyl); 9.1 (s,1 H,nicotinyl).
EXEMPLE lll Isomères du Cis 2~terbutyl cliphenyl-silyloxyméthyl)-5-[N4~3"-tosyl) cytosine-1 '-yll-1,3~xathiolane 4 WO 9S/32200 2 ~ 6 7 9 ~ ~ PCT/FR951C~3 . ~
A une solution de dérivé 5 (56 mg, 0,12 mmol) dans la pyridine (3 ml), on additionne à 60C sous atmosphère d'azote 2 eq. de chlorure d'acide paratoluène sulfonique (46 mg, 0,24 mmol). Après 20 h d'agitation à température ambiante, le mélange est 5 évaporé à sec, lavé par une solution d'acide citrique à 5% (10 ml), puis extrait à
l'acétate cl'éthyle (3x10 ml). Les phases organiques réunies sont séchées sur Na2SO4 et évaporées. On isole 48 mg de produit désiré.
[1H] RMN: (CDCI3) = 1.1 (s,9H,tbu); 2,45 (s,3H,CH3 tosyl); 3.15-3.55 (m,2H,C2-CH2-O); 3.85-4.2 (m,2H,C4H2); 5.25 (t,1H,Cs-H); 6.3 (t,1H,C2-H); 7.3-7.7 (m,14H,ArH); 8.05 (d,1H,C6'-H);
EXEMPLE IV
Isomères du Cis 2~diphénylterbutylsilyloxyméthyl)-5-[N4(3"-pyridinyl carbonyl) s cytosine-1 '-yl]-1,3-oxathiolane 3 A une solution de dérivé 4 (47 mg, 0,075 mmol) dans la lutidine (2 ml) sous atmosphère d'azote à 90C, on ajoute 6 eq. (46 ~I, 0,45 mmol) de pyridinylmethylamine. Le chauffage est maintenu pendant 48 h sous agitation. Après 20 refroidissement, le mélange est évaporé, lavé par une solution d'acide citrique à 5%
(10 ml), puis extrait à l'~céPte d'éthyle (3x10 ml), séché sur Na2SO4. Après évaporation, le résidu est purifié par cl,romalographie sur plaque de gel de silice.
(éluant: EtOAC/MeOH, 10/1) 2s EXEMPLE~ V
Isomères du Cis 2~terbutyl~iphényl-silyloxyméthyl)-5-(cytosine-1'-yl)-1,3-oxathiolane 5 Une solution de 2',3'-didéoxy-3'-thiacytidine (105 mg, 0,45 mmole) dans la pyridine 30 (6 ml) est traitée sous almosphère d'azote par du chlorure de diphénylterbutylsilyle (140 ,ul, 0,5 mmole). Le mélange réactionnel est agité pendant 24 heures à
température ambiante. Après conce"l,dliG" sous vide, on ajoute 30 ml d'eau et on extrait à l'acétate d'éthyl (3x20 ml). Les phases organiques réunies sont alors séchées sur Na2SO4 et concentrées à sec pour donner le composé 5 (210 mg, Rdt 35 qualllildlil) sous forme d'un solide blanc.
wo 95/32200 2 ~ ~ 7 3 3 ~ 8 PCT/FR95/00683 Rf (AcOEVMeOH 2/1) = 0,62 [1H] RMN (CDCI3) ~: 1,1 (s,9H,tbu); 3,1-3,6 (m,2H,C2-CH2-0); 3,7-4,2 (m,2H,C4-H2); 5,25 (t,1H,Cs-H); 5,5 (d,H,Cs~-H); 6,35 (q,1H,C2-H) 7,4-7,8 (m,10H,2Ph); 8,0 (d,1 H,C6~-H) EXEMPLE Vl Isomères du Cis iodure de 2~hydroxyméthyl)-5-tN4-(1"-méthyl-3~-pyridinylcarbonyl) cytosine-1 '-yl]-1,3~xathiolane 6 Sous atmosphère d'azote à 1 eq (46 mg, 0,14 mmol) de composé 2 dissous dans 4 ml d'acétonitrile anhydre, on ajoute 9 eq. (1,25 mmol, 77 ,ul) d'iodure de méthyle. La solution résultante est chauffée à 50C pendant 48 h. Après évaporation des solvants, le résidu est purifié par flash ol,ro,,,atoyl~ e~ éluant BuOH/H20/acide acétique [5:2,5:2,5]. On obtient un solide jaune (55 mg).
[1H] RMN: (DMSO d6) ~ = 3.25 (t,2H,CH24); 3~90 (dd,2H,C2-CH2); 4.45 (s,3H,N+-CH3); 5.25 (t,1H,CH-5); 6.30 (t,1H,CH-2); 6.92 (d,1H,CH~'); 7.30 (d,1H,nicotinyl);
7.85 (d,1H,nicotinyl); 8.05 (d,1H,CH-5'); 8.20 (d,1H,nicotinyl); 7.85 (d,1H,nicotinyl);
9.01 (d,1H,nicotinyl).
20 Spectre de masse: (FAB+) 349 (M-1)+
EXEMPLE Vll Isomères du Cis 2~hydroxyméthyl)-5-tN4~ néhtyl-1",4"-dihydro-3"-pyridinyl carbonyl) c~losi-,e 1'-yl]-1,3-oxathiolane 7 Dans 3 ml d'une solution dégazée de méthanol contenant 10% d'eau, on dissout 30 mg (0,06 mM) de composé 6. A cette solution, on ajoute 15 mg de bicarbonate de sodium et 60 mg de dithionite de sodium. Le mélange réactionnel est agité sous .azote pendant 3 h. La solution devient ora.,gée. On évapore le solvant puis on resuspend les sels dans un minimum de méthanol; on filtre. Le filtrat est purifié par cl~ro",alog~a~,hie sur couche mince préparative (1 mm). (Eluant: Toluène/méthanol 1: 1) pour donner 6 mg d'un solide blancjaune SM: (FAB+) 349 (M-1)+
EXEMPLE Vlll Isomères du Cis 2-hydroxyméthyl 5-[N4-3"~uinolinylcarbonyl) cytosin-1'-yl]
1,3~xathiolane 8 WO9513220~ 7 ~ ~ ~ PCT/~ c~3 A 2 ml de diméthylrormamide anhydre, on ajoute 74,4 mg (0,43 mmol) d'acide 3-quinoline carboxylique puis 96 mg (0,47 mmol) de 1,3-dicyclohexyl carbodiimide et 63,4 mg (0,47 mmol) d'hydrate d'hydroxybenzotriazole. Le mélange est agité
pendant 1 h à température ambiante sous azote. Un précipité blanc de s dicyclohexylurée apparaît et on ajoute alors 100 mg (0,43 mmol) de 2,3'-dideoxy 31-thiacytidine. Le mélange est agité pendant une nuit. Ensuite, on évapore le cJi"~ell,ylformamide sous pression réduite, et le résidu est hydrolysé par une solution aqueuse saturée en NaCI (10 ml). On extrait le résidu à deux reprises par de l'acétate d'éthyle (2x10 ml). Les phases organiques sont combinées, séchées sur 10 sulfate de magnésium puis filtrées. Le solvant est évaporé. Le produit est purifié par fflash) chro,nalographie. (Eluant: acétate d'éthyle/ méthanol 98:2) pour donner 78 mg d'un solide blanc (0,2 mmol) soit un rendement de 46,5 %
PF = 116-118C - IR =1656 cm~1 (carbonyle de la fonction amide) 15 l1H] NMR (DMSO d6) ~ = 11,75 (s,1H,NH); 9,40 (d,1H,CH-2"); 9,15 (d,1H,CH4");
8,65 (d,1Hl,CH-5'); 8,20 (m,2H,CH-8" et-CH-5"); 8,0 (m,1H,CH-6"); 7,80 (m,1H,CH-7"); 7,45 (d,1H,CH-6'); 6,35 (t,1H,CH-2); 5,55 (t,1H,CH-5); 3,98 (t,2H,C2-CH2-4)l13C]NMR: (DMSO d6 ) ~ = 37,14 (C-4); 61,95 (CH20-C2); 87,28 (C-2); 88,29 (C-5); 95,85 (C-5'); 122,21 (C-3"); 126,28 (C-6"); 127,71 (C-5"); 129,63 (C-10"); 129,87 20 (C-7"); 132,08 (C-8"); 137,65 (C~"); 138,89 (C-6'); 148,91 (C-9"); 149,29 (C-2");
163,16 (C 2'); 164,51 (C4') Spectre de masse: (Fab+) 385 (M+1)+. 769 (2M+1)+
EXEMPLE IX
Isomères du Cis iodure de 2-hydroxyméthyl 5-tN4~1"-methyl 3"-quinolinylcarbonyl) cytosin-1'yl3-1,3-oxathiolane 9 On prépare une solution de composé 8 (78 mg soit0,20 mmol) dans 4 ml d'acétonitrile. On ajoute 112 ,ul (1,8 mmol) d'iodure de méthyle et le mélange est 30 chauffé à 40C sous azote pendant 24 h. Le solvant est chassé et le résidu brut est alors dissout dans le minimum d'acétonitrile. On le reprécipite par addition d'éther.
On obtienl: ainsi un solide orangé (60 mg soit un rendement de 55%.
PF = 156-159C
[1H] NMR: (CD30D) ~ = 3,32 (t,2H,CH2-4); 3,99 (dd,2H,C2-CH2); 4,80 (s,3H,+N-35 CH3); 5,313 (t,1H,CH-5); 6,0 (d,1H,CH-6'); 6,33 (t,1H,CH-2); 8,13 (m,1H,CH-7"); 8,39 (m,1H,CH-6"); 8,60 (m,2H,CH-8"); 8,72 (d,1H,CH-5'); 9,79 (d,1H,CH-4"); 9,95 (d,1H,CH-2").
Spectre de masse: (Fab+) 399 [M-l]+, 799 12(M-I)]+.
WO 95/32200 lo PCT/FR95/~ 3 2~7~3~ --EXEMPLE X
Isomères du Cis 2-hydroxymethyl 5-[N4~1"-méthyl 1",4"-dihydro 3"-quinolinylcarbonyl) cytosin-1'-yl]-1,3~xathiolane 10 On ajoute à une solution de 30 mg (0,057 mmol) du composé 9 dans 3 ml de ",éll.anol aqueux dégazé (3 ml contenant 10% d'eau), 15 mg de bicarbonate de sodium et 60 mg de dithionite de sodium. Le mélange est agité pendant une heure sous azote. Le solvant est évaporé et le résidu brut est purifié par chromatographie o préparative. (Eluant: acétate d'éthyle/méthanol 1:1). On obtient finalement 10 mg d'un solide vitreux jaune soit un rendement de 46%.
[1 H] NMR : (D2O) ~ = 3,24 (m,3+2H,NCH3+CH2-4"); 3,48 (m,2H,CH24); 3,93 (m,2H,C2H2); 5,29 (t,1H,CH-5); 6,96 (d,1H,CH-6'); 7,13 (m,2H,CH-6"+CH-7"); 7,27 15 (m,2H,CH-5"+CH-8"); 7,45 (d,1H,CH-2"); 8,23 (d,1H,CH-5') Spectre de masse: (Fab+) 399 (M-1)+
EXEMPLE Xl Isomères cis du 2-hydroxymethyl-5-tN4~2~a,a,a-brifluoro rn-toluidino) 20 nicotinyl)-cytosine-l'yl]-1,3~xathiolane 11 A une solution de 2',3'-didéoxy-3'-thiacytidine (50 mg, 0,2 mmol) dans 5 ml de DMF
anhydre, on additionne 1 1 eq. de BOP (93 mg, 0,23 mmol), 1 eq. d'acide niflumique (acide 2-(a,a,a-trifloro-m-toluidino) nicotinique) et 4 eq. de DIEA (146 ,ul, 0.84 mmol).
~s Le mélange est agité une nuit à température ambiante, lavé par une solution d'acide citrique à 5% (10 ml), puis par une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 5%
(10 ml). Le mélange résultant est extrait de l'acétate d'éthyle (3 x 10 ml), séché sur sulfate de sodium, puis évaporé. Le résidu est puriFié par chromalographie sur colonne de gel de silice (éluant: acétate d'éthyle/toluène 1 :9). On obtient un solide 30 blanc (49 mg, rendement 48%).
TEST D'EVALUATION DES PROPRIETES ANTIVIRALES
TESTS ANTI-HIV - Protocole expérimental WO 9S/32200 ~ ~ 2 ~ fi 7 ~ 3 ~ PCT/~h~S o^c83 a) généralités Appareillage: I'ull,~ce"l,irugeuse utilisée est de type Beckman TL 100. Le comptage des particules radioactives a été effectué sur un appareil Hewlett Packard Tri-Carb Modèle 1600. Les syncitia sont observées d'un microscope inversé Labovert.
Composition du tampon de Iyse NTE: Tris-hydroxyméthylaminométhane (10 mM);
NaCI (100 mM); EDTA (1 mM) b) tests d'évaluation des propriétés antivirales en culture cellulaire L'évaluation de l'effet antiviral est basée sur l'étude de l'effet cytopathogène du virus o VIH-1 sur la lignée cellulaire MT4. La lignée MT4 a pour origine des cellules T
isolées à partir d'un patient transformées par le virus VTLH-1. L'effet cytopathogène du virus VIH-1 se traduit par la for~ liGn de cellules géantes multinuclées appelées "syncitia" visibles au microscope. Cet effet du VIH-1 est observé 4 à 5 jours après l'infection; il est suivi par la mort des cellules 15 L'effet cytopathog.ène est directement correlé à l'infection des cellules par le virus à
sa réplication intracellulaire et à l'expression des antigènes viraux par les cellules.
Une inhibition de cet effet correspond donc à une inhibition de la multiplication du virus VIH-1 Les cellules MT4 sont e"L,etenues à 3105 cellules/ml dans du milieu RPMI 1640:
20 10% de sérum de veau foetal décomplémenté pendant 30 mn à 56C (hormones facteurs de croissance sériques ...) 1% glutamine 1% pénicilline streptomycine et 2 l~g/ml de polyrène qui favorise l'adhésion du virus sur les cellules.
L'action du traitement par l'antiviral est permanent. En effet celui-ci est présent avant pendant et après l'infection virale. Des dilutions s~lccessives sont effectuées 25 dans le sérum de veau foetal à 10% afin de pouvoir cultiver les MT4 pendant 8 jours et observer la for",dlion des syncitia Test MT4:
Avant l'in~ection: 3.106 cellules/1001 1 sont distribuées dans une microplaque 96 30 puits et centrifugées 3 mn à 2000 tpm (tours par minutes). Le culot est alorspréincubé 1 h à 37C avec 100 ~I de dfflérentes concel-l,dlions d'antiviral à tester.
Infection: I'infection est réalisée en micropuits en rajoutant 100 TCIU (unités infectieuses) du virus VIH-1 (ce titre du virus VIH-1 est déterminé pour induire la formation de syncitia en 4 ou 5 jours). L'antiviral est toujours présent lors de35 I'infection et la dilution du virus à 100 TCIU.
Après l'infection: après une incubation de 1 h à 37C les MT4 sont lavées 3 foisavec du RPMI 1640 et mises en culture à raison de 3105 cellules par millilitre de chacune des concentrations des composés à tester en plaques de 24 puits. Lors du WO95/32200 ~ ~ ~ 7 ~ 3 ~ 12 PCT/FR95~C'~3 passage effectué au jour J3, les celluies MT4 sont diluées au 1/3. La concentration de l'antiviral est maintenue. Chaque jour, I'apparition de syncitia est observée au microscope afin de détecter un éventuel retard par rapport au témoin VIH-1. A J8, Ie dosage de la transcriptase inverse est effectué. Si les cellules ne sont pas infectées, c'est donc qu'il y a protection par l'antiviral testé.
Dosaqe de la lldr~cril~tase inverse:
La transcriptase inverse est une ADN polymérase ARN dépendante. Cet enzyme permet la réplication des rétrovirus. Grâce à celui-ci, I'ARN du virus, copié en ADN, o s'intègre dans le génome cellulaire. L'ADN proviral est transcrit par les enzymes de la cellule en ARN viral. Pour le dosage de l'activité tra"s.;, i~lase inverse, on concentre 100 fois 1 ml de surnageant de culture par ultracentrifugation pendantmn à 95000 tpm; le culot viral obtenu après ultracentrifugation est remis en suspension dans 10 ~ul de tampon NTE + TRITON 0.1% (éther de polyoxyéthylène);
15 celui-ci sert à Iyser le virus et à libérer la transcriptase inverse. In vitro, c'est l'activité
transcriptase inverse qui est mise en évidence. Cet enzyme utilise une matrice synthétique poly A possérl~nt une amorce oligo dT ayant de 12 à 18 résidus. Le substrat radioactif de cette réaction est le [3H]dl~P (thyrnidine triphosphatée radioactive à 1mGi/ml); les macromolécules tritiées néoformées, sont précipitées par 20 de l'acide trichloroacétique et séparées du [3H]l~P libre par filtration. L'activité
enzymatique de la transcriptase inverse est mesurée par la radioactivité incorporée dans les complexes poly-rA/poly-dT. Cette radioactivité est déter"linée dans un con,pteur de particules, après addition du liquide scintillant tenant fonction d'amplificateur TEST ANTI-HBV- Protocole e~a~érimental Parmi les dfflérentes méthodologies employées pour évaluer l'activité de composés sur le virus de l'hépatite B (\/HB), le modèle du virus de l'hépatite B du canard (Duck 30 HBV) a été utilisé (J.Med. Virology 1990, 31, 82-89; Viral Hepatitis and Liver Disease, 1988, 506-509; Hepatology, 1989, 10, 186-191). Le matériel de culture pour tester "in vitro" I'activité anti-VHB de composés est constitué d'hépatocytes de canard, infectés par le virus de l'hépatite B du canard (DHB\/), (Antimicrob. Agents Chemother. 1989, 33, 336-339; J. Med. Virology, 40, 59~4; Antivir. Res. 1993, 21, 35 155-171; Antimicrob. Agents Chemother. 1993, 37, 1539-1542). En effet, le virus de l'hépatite B du canard est reconnu comme étant très proche du virus de l'hépatite B
humain (Viral Hepatitis and Liver Disease, 1988, 526-529; Antiviral Research, 1987, 8, 189-199). Dans des conditions standardisées (\/irology, 1989, 171, 564-572), la WO 9~/3220~ 1 3 ~ 3 ~ PCT/FR95/00683 culture d'hépatocytes de canard permet la réplication complète du DHBV. L'activité
antivirale des composés testés est mesurée en fonction de la quantité d'ADN viral produit pendant 10 jours de culture des hépatocytes infectés.
5 Protocoleexpérimenl~
Un caneton de 3 semaines, atteint par le DHBV, est utilisé pour la préparation des hépatocytes. Le canard est tué sous anesthésie et l'isolement des hépatocytes est effectué selon la méthodologie de Guillouzou (Research in isolated and cultured hepatocytes, J. Libbey Eurotex Ltd/lNSERM, 1986). Les cellules sont mises en suspension dans le milieu de Leibowitz et 5 l~g/ml d'insuline bovine, 7.10-5 mole d'hémisuccinate d'hy-llocorlisone et 1.5% de DMSO sont ajoutés. La densité des cellules est de 8.106 cellules, étalées dans des boîtes de culture de 100x20 mm.Les composés testés sont ajoutés à la culture après l'étalement des cellules. Lemilieu est changé tous les jours, pendant 10 jours. La production d'ADN viral du15 virus de l'hépatite B de canard dans le surnageant des cellules est estimée par la méthode cl'hybridation "Dot Blot", selon Fourel et al. (\/iral Hepatitis and Liver Disease, 1988, 506-509; Hepatology, 1989, 10, 186-191) L'inhibition est expriméeen pourcentage de la quantité d'ADN présent dans le surnageant des cellules, parrapport à une culture infectée par le DHBV non traitée avec un dérivé nucléosidique.
RESULTATS VIROLOGIQUES
Tests I IIV:
Les composés dont la synthèse est décrite dans la présente demande de brevet, et25 les structures données dans la description de l'art antérieur, ont un effet sur l'inhibition de la replication du virus HIV-1 BRU (BRU:souche virale expérimentée) dans le cas où les cellules infectées sont du type MT4.
Dans le tableau I ont a décrit les résultats des tests. La colonne 1 donne le nom des composés étudiés les plus représenlalirs, et dans la colonne 2 sont reportées les 30 valeurs dites IC50 (concentration de composant donnant 50% d'inhibition de laréplication du virus HIV dans des cellules MT4 infectées, mesurée au jour J7 après l'infection). Par observation et comptage du nombre de syncitia formés par rapport à
celui compté dans le cas de cellules MT4 infectées mais non traitées par le composé
antiviral, la valeur du IC50 est déterminée.
WO 9S/32200 ~4 PCT/FR95/00683 ., ",,, ~
Tests DBHV:
Les composés décrits les plus représe~talir~, ont été testés pour leur effet sur la replication du virus Duck HBV (DHB\/) selon le protocole exposé dans la partie expérimentale de ce document.
Dans le tableau 2 sont décrits les résultats des tests.
Abréviations:
AcOEt: acétate d'éthyle ADN: acide désoxyribonucléique APTS: acide para-toluène sulfonique ARN: acide ribonucléique AZT: 3'-azido-2'-3'-dideoxy-thymidine ou Zidovudine BOP: hexafluorophosphate de be"~ul,i~olyloxytrisdiméthyl-aminophos phonium CCM: chromatographie sur couche mince 15 DCC: N,N'-dicyclohexylcarbodiimide DCU: N,N'-dicyclohexylurée DIEA: N,N-diisopropyl N-éthylamine DMF: N,N-diméthylro""a",ide DHBV: Duck hepatitis B Virus 20 FAB+: "Fast positiv Atomic Bombardment"
3HdTTP: Thymidine triphosphatée ~.lio~.live à 1 mCUml HOBT: 1-hydroxybenzotriazole IR: infra-rouge PF: point de fusion 25 RMN: resonnance magnétique nucléaire SIDA: syndrome de l'immunodéfil,ience ~cq~ise SM: spe~;l,ur"t:l,ie de masse TBAF: fluorure de tétrabutyla",mo~ fn TBDPSCI: chlorure de tétrabutyldiphénylsilyle 30 3-TC: (-)-(2R,3S)-2-hydroxyméthyl-5-(cytosine-1'-yl)-1.3-oxdll~iolane ou Lamivudine TCIU: unités infectieuses THF: tétrahydrofuranne TPM: tours par minute TsCI: chlorure de tosyle 35 UV: ultra-violet VIH: Virus de l'immunodeficience humaine VHB: Virus de l'hepatite B
VTLH: Virus des cel' lles T Iymphotropiques humaines WO9~it32200 ~ ~ 6 7 9 3 0 PCT/FR9~1/OOC83 Tab5 Effet des nucléosides selon l'invention sur l'inhibition de la replication du virus HIV-1, exprimés sous la somme de ICso Composés COMPOSES IC50 N
9 ~100 ,uM
1 0 1 -1 0 ~M
8 1 0 ,uM
W095/32200 2~ 6 7~ 3 (1 16 PCT/~R95100683 Composés COMPOSES IC50 N
2 0.1~ M
11 ~100 ,uM
BCH-189 1 ~uM
(produit de référence) WO 95/32200 ~ 7 2 1 6 7 9 3 ~ PCT/FR95/00683 Tableau ll Effet des nucléosides selon l'invention sur l'inhibition de la replication du virus DHBV
Composés COMPOSES IC50 N
BCH-189 1 10.5 I M
(composé de référence) 210.5 ,uM
8 2~M
9 2~uM
WO 9S/32200 2 ~ ~ ~
11) ~ 9 3-~ 18 PCT/FR95100683 Composés COMPOSES IC50 1 0 2 ,uM
Claims (15)
1. Les 5-(cytosinyl-1) 1,3-oxathiolanes de configuration cis (ou 2R5S ou 2S-5R), répondant à la formule générale I
(I) dans laquelle R est un radical acyle ou aralcoyle, dérivés d'un hétérocycle mono- ou bicyclique azoté
et le groupe hydroxyméthyle en position 2 est en position cis par rapport au plan déterminé par les positions 2 et 5.
(I) dans laquelle R est un radical acyle ou aralcoyle, dérivés d'un hétérocycle mono- ou bicyclique azoté
et le groupe hydroxyméthyle en position 2 est en position cis par rapport au plan déterminé par les positions 2 et 5.
2. Les 5-(cytosinyl.1) 1,3-oxathiolanes selon la revendication 1°, de configuration 2R-5S, de formule générale:
(1)
(1)
3. Les 5-(cytosinyl-1) 1,3-oxathiolanes, selon la revendication 1°, de configuration 2S-5R, de formule générale:
(2)
(2)
4. Les composés nicotiniques, selon l'une des revendications 1° à 3°, dans laquelle R a la formule I:
(Ia) dans laquelle X représente de l'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe nitro, un alcoxy inférieur ou un radical trifluorométhyle et n est un nombre entier variant de 1 à 3 et où le reste acyle est en position 2, 3 ou 4
(Ia) dans laquelle X représente de l'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe nitro, un alcoxy inférieur ou un radical trifluorométhyle et n est un nombre entier variant de 1 à 3 et où le reste acyle est en position 2, 3 ou 4
5. Les composés dihydropyridiniques, selon l'une des revendications 1° à 3°, dans laquelle R a la formule (Ib) dans laquelle R1 est un radical alcoyle ayant de 1 à 10 atomes de carbone X et n sont définis comme précédemment et le radical acyle est en position 2, 3 ou 4.
6. Les composés nicotiniques quaternisés selon l'une des revendications 1° à 3°
dans laquelle R a la formule générale Ic (Ic) dans laquelle A est un anion minéral ou organique R1, X et n sont définis comme précédemment et le radical acyle est en position 2, 3 ou 4.
dans laquelle R a la formule générale Ic (Ic) dans laquelle A est un anion minéral ou organique R1, X et n sont définis comme précédemment et le radical acyle est en position 2, 3 ou 4.
7. Les composés quinoléiniques selon l'une des revendications 1° à 3°, dans laquelle R a la formule générale Id (Id) dans laquelle le radical carbonyle est en position 2, 3 ou 4 X représente de l'hydrogène, un halogène, un radical trifluorométhyle, un alcoxyinférieur ou un groupe nitro et n' représente un nombre entier variant de 1 à 6.
8. Les composés dihydroquinoléiniques selon l'une des revendications 1° à 3°, dans laquelle R a la formule générale Ie (Ie) dans laquelle R1 et X sont définis comme précédemment et n' est un nombre entier variant de 1 à 6
9. Les composés quinoléiniques quaternisées selon l'une des revendications 1° à
3°, dans laquelle R à la formule générale If (If) dans laquelle R1, X et n' sont définis comme précédemment le radical acyle se trouve en position 2, 3 ou 4 et A est un anion minéral ou organique
3°, dans laquelle R à la formule générale If (If) dans laquelle R1, X et n' sont définis comme précédemment le radical acyle se trouve en position 2, 3 ou 4 et A est un anion minéral ou organique
10. Les composés (dihydropyridyl alcoyle) selon l'une des revendications 1° à 3°, dans laquelle R a la formule Ig (Ig) dans laquelle R1, X et n sont définis comme précédemment et m est un nombre variant de 1 à 6
11. Les sels d'addition avec un acide minéral ou organique des composés selon l'une des revendications 1 à 10°.
12. Les isomères optiques des composés selon l'une des revendications 1 à 11°.
13. Un composé selon la revendication 1° ou la revendication 11° ou la revendication 12° à savoir le cis 2-hydroxyméthyl 5-[N4-(3"-pyridyl carbonyl) cytosine 1'-yl] 1,3-oxathiolane et ses sels d'addition avec un acide minéral ou organique, sous forme racémique ou optiquement active..
14. Un procédé d'obtention des composés selon l'une des revendications 1 à 13°
qui consiste à soumettre un 5-(cytosinyl-1) 1,3-oxathiolane cis à l'action d'un dérivé fonctionnel d'acide carboxylique de formule ROH où R est un radical acyle dérivé d'un hétérocycle aromatique ou dihydroaromatique, mono- ou bicyclique, azoté ou à l'action d'un dérivé actif aralcoylé de formule R'Z où R' est un radical aralcoyle dérivé d'un hétérocycle azoté, aromatique ou dihydroaromatique, mono- ou bicyclique, et Z est un radical labile facilement clivable.
qui consiste à soumettre un 5-(cytosinyl-1) 1,3-oxathiolane cis à l'action d'un dérivé fonctionnel d'acide carboxylique de formule ROH où R est un radical acyle dérivé d'un hétérocycle aromatique ou dihydroaromatique, mono- ou bicyclique, azoté ou à l'action d'un dérivé actif aralcoylé de formule R'Z où R' est un radical aralcoyle dérivé d'un hétérocycle azoté, aromatique ou dihydroaromatique, mono- ou bicyclique, et Z est un radical labile facilement clivable.
15. Les compositions pharmaceutiques à action antivirale, caractérisées en ce qu'elles renferment à titre de principe actif au moins un composé de formule générale I
(I) dans laquelle R est un radical acyle ou aralcoyle, dérivés d'un hétérocycle mono- ou bicyclique azoté, aromatique ou dihydroaromatique et le groupe hydroxyméthyle en position 2 est en position cis par rapport au plan déterminé par les positions 2 et 5 ou un de ses sels d'addition avec un acide sous forme racémique ou optiquement active en mélange ou en association avec un excipient inerte, non toxique, pharmaceutiquement compatible..
(I) dans laquelle R est un radical acyle ou aralcoyle, dérivés d'un hétérocycle mono- ou bicyclique azoté, aromatique ou dihydroaromatique et le groupe hydroxyméthyle en position 2 est en position cis par rapport au plan déterminé par les positions 2 et 5 ou un de ses sels d'addition avec un acide sous forme racémique ou optiquement active en mélange ou en association avec un excipient inerte, non toxique, pharmaceutiquement compatible..
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9406262A FR2720397B1 (fr) | 1994-05-24 | 1994-05-24 | Nouveaux oxathiolanes, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui en renferment. |
| FR94/06262 | 1994-05-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CA2167930A1 true CA2167930A1 (fr) | 1995-11-30 |
Family
ID=9463449
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CA002167930A Abandoned CA2167930A1 (fr) | 1994-05-24 | 1995-05-24 | Oxathiolanes, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui en renferment |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5708000A (fr) |
| EP (1) | EP0733053A1 (fr) |
| JP (1) | JPH09502453A (fr) |
| KR (1) | KR100242891B1 (fr) |
| CN (1) | CN1080264C (fr) |
| AP (1) | AP612A (fr) |
| AU (1) | AU688052B2 (fr) |
| BR (1) | BR9506244A (fr) |
| CA (1) | CA2167930A1 (fr) |
| CZ (1) | CZ21996A3 (fr) |
| FI (1) | FI960316A7 (fr) |
| FR (1) | FR2720397B1 (fr) |
| HU (1) | HU219299B (fr) |
| NO (1) | NO306299B1 (fr) |
| NZ (1) | NZ287478A (fr) |
| OA (1) | OA10258A (fr) |
| PL (1) | PL181713B1 (fr) |
| RU (1) | RU2142462C1 (fr) |
| WO (1) | WO1995032200A1 (fr) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2720397B1 (fr) * | 1994-05-24 | 1996-08-23 | Laphal Laboratoires Sa | Nouveaux oxathiolanes, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui en renferment. |
| IT1290447B1 (it) | 1997-03-28 | 1998-12-03 | Zambon Spa | Derivati 1,3-ossatiolanici ad attivita' antivirale |
| US8354427B2 (en) * | 2004-06-24 | 2013-01-15 | Vertex Pharmaceutical Incorporated | Modulators of ATP-binding cassette transporters |
| LT2502911T (lt) | 2004-06-24 | 2017-09-11 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Atp surišančios kasetės transporterių moduliatoriai |
| CA2634113A1 (fr) * | 2005-12-24 | 2007-07-05 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Promedicaments de modulateurs de transporteurs abc |
| WO2007079139A2 (fr) | 2005-12-28 | 2007-07-12 | Vertex Pharmaceuticals, Inc. | Formes solides de n-[2,4-bis(1,1-diméthyléthyl)-5-hydroxyphényl]-1,4-dihydro-4-oxoquinoléine-3-carboxamide |
| UY30118A1 (es) * | 2006-01-31 | 2007-06-29 | Tanabe Seiyaku Co | Compueto amina trisustituido |
| US12458635B2 (en) | 2008-08-13 | 2025-11-04 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pharmaceutical composition and administrations thereof |
| US20100074949A1 (en) | 2008-08-13 | 2010-03-25 | William Rowe | Pharmaceutical composition and administration thereof |
| SI2408750T1 (sl) | 2009-03-20 | 2015-11-30 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Postopek za izdelavo modulatorjev cistično-fibroznega transmembranskega regulatorja prevodnosti |
| US8802700B2 (en) | 2010-12-10 | 2014-08-12 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Modulators of ATP-Binding Cassette transporters |
| EP2819670A1 (fr) | 2012-02-27 | 2015-01-07 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Composition pharmaceutique et son administration |
| KR20170063954A (ko) | 2014-10-07 | 2017-06-08 | 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 낭성 섬유증 막횡단 전도도 조절자의 조정제의 공-결정 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5047407A (en) * | 1989-02-08 | 1991-09-10 | Iaf Biochem International, Inc. | 2-substituted-5-substituted-1,3-oxathiolanes with antiviral properties |
| DK0560794T3 (da) * | 1990-11-13 | 1996-12-23 | Iaf Biochem Int | Substituerede 1,3-oxathiolaner med antivirale egenskaber |
| IL100965A (en) * | 1991-02-22 | 1999-12-31 | Univ Emory | 2-Hydroxymethyl-5-(5-fluorocytosin-l-yl)-1,3-oxathiolane its resolution and pharmaceutical compositions containing it |
| WO1992020344A1 (fr) * | 1991-05-16 | 1992-11-26 | Glaxo Group Limited | Combinaisons antivirales contenant des analogues de nucleosides |
| GB9110874D0 (en) * | 1991-05-20 | 1991-07-10 | Iaf Biochem Int | Medicaments |
| FR2720397B1 (fr) * | 1994-05-24 | 1996-08-23 | Laphal Laboratoires Sa | Nouveaux oxathiolanes, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui en renferment. |
-
1994
- 1994-05-24 FR FR9406262A patent/FR2720397B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-05-24 BR BR9506244A patent/BR9506244A/pt active Search and Examination
- 1995-05-24 EP EP95920986A patent/EP0733053A1/fr not_active Withdrawn
- 1995-05-24 PL PL95312693A patent/PL181713B1/pl unknown
- 1995-05-24 CN CN95190647A patent/CN1080264C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-05-24 JP JP7530108A patent/JPH09502453A/ja not_active Ceased
- 1995-05-24 CA CA002167930A patent/CA2167930A1/fr not_active Abandoned
- 1995-05-24 AU AU26209/95A patent/AU688052B2/en not_active Ceased
- 1995-05-24 FI FI960316A patent/FI960316A7/fi unknown
- 1995-05-24 RU RU96105063A patent/RU2142462C1/ru active
- 1995-05-24 HU HU9600155A patent/HU219299B/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-05-24 WO PCT/FR1995/000683 patent/WO1995032200A1/fr not_active Ceased
- 1995-05-24 CZ CZ96219A patent/CZ21996A3/cs unknown
- 1995-05-24 KR KR1019960700446A patent/KR100242891B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1995-05-24 US US08/586,892 patent/US5708000A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-05-25 NZ NZ287478A patent/NZ287478A/en unknown
-
1996
- 1996-01-23 NO NO960272A patent/NO306299B1/no not_active IP Right Cessation
- 1996-01-23 AP APAP/P/1996/000784A patent/AP612A/en active
- 1996-01-24 OA OA60770A patent/OA10258A/fr unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1995032200A1 (fr) | 1995-11-30 |
| FR2720397B1 (fr) | 1996-08-23 |
| HU219299B (en) | 2001-03-28 |
| AP9600784A0 (en) | 1996-04-30 |
| OA10258A (fr) | 1997-10-07 |
| FI960316A0 (fi) | 1996-01-23 |
| NO306299B1 (no) | 1999-10-18 |
| CN1080264C (zh) | 2002-03-06 |
| HUT75112A (en) | 1997-04-28 |
| KR960703903A (ko) | 1996-08-31 |
| AU2620995A (en) | 1995-12-18 |
| FR2720397A1 (fr) | 1995-12-01 |
| FI960316L (fi) | 1996-03-22 |
| CZ21996A3 (en) | 1996-05-15 |
| US5708000A (en) | 1998-01-13 |
| KR100242891B1 (ko) | 2000-03-02 |
| RU2142462C1 (ru) | 1999-12-10 |
| FI960316A7 (fi) | 1996-03-22 |
| PL181713B1 (en) | 2001-09-28 |
| JPH09502453A (ja) | 1997-03-11 |
| AU688052B2 (en) | 1998-03-05 |
| EP0733053A1 (fr) | 1996-09-25 |
| NZ287478A (en) | 1997-09-22 |
| NO960272L (no) | 1996-01-23 |
| AP612A (en) | 1997-09-05 |
| CN1130906A (zh) | 1996-09-11 |
| BR9506244A (pt) | 1997-08-12 |
| NO960272D0 (no) | 1996-01-23 |
| PL312693A1 (en) | 1996-05-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR0172590B1 (ko) | 2-히드록시메틸-5-(5-플루오로시토신-1-일)-1,3-옥사티올란의 항비루스 활성 및 그것의 분해방법 | |
| CA2882201C (fr) | Promedicament du tenofovir et utilisations pharmaceutiques associees | |
| CN100560073C (zh) | 用于治疗病毒感染的n4-酰基胞嘧啶核苷 | |
| JP3421335B2 (ja) | 鏡像異性的に純粋なβ−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌクレオシド | |
| CA2167930A1 (fr) | Oxathiolanes, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui en renferment | |
| CN113929724B (zh) | 一种核苷类化合物及其药物组合物和用途 | |
| CA2436958A1 (fr) | Derives d'acyclonucleosides pyrimidiniques, leur procede de preparation et leur utilisation | |
| CN114555607A (zh) | 一类靶向蛋白质水解通路的功能分子及其制备和应用 | |
| WO2009084655A1 (fr) | PROCÉDÉ DE FABRICATION DE 4'-ÉTHYNYL-d4T | |
| CZ293942B6 (cs) | Způsob zvýšení výtěžku jednoho z enanciomerů alkoholů | |
| US10745434B2 (en) | Uridine phosphoramide prodrug, preparation method therefor, and medicinal uses thereof | |
| EP2887938B1 (fr) | Procédé de préparation de tecovirimat | |
| EP0121635A1 (fr) | 3',5'-Diarabinosides, leur préparation et leur application en thérapeutique | |
| Camplo et al. | Synthesis and antiviral activity of N-4′-dihydropyridinyl and dihydroquinolinylcarbonyl-2-hydroxymethyl-5-[cytosin-1′-yl]-1, 3-oxathiolane derivatives against human immunodeficiency virus and duck hepatitis B virus | |
| AU2004200957B2 (en) | Antiviral activity and resolution of 2-hydroxymethyl-5-(5-flurocytosin-1-yl)-1,3-oxathiolane | |
| CN1456556A (zh) | 双（5－甲酰基糠基）醚衍生物、制备方法及药学的应用 | |
| WO2026048763A1 (fr) | Composition pharmaceutique pour la prévention ou le traitement d'infections virales | |
| RU2235724C2 (ru) | Способы разделения смеси энантиомеров | |
| CN114262348A (zh) | 环状核苷磷酸酯类化合物及其应用 | |
| PL171150B1 (pl) | Sposób rozdzielania racemicznej mieszaniny enancjomerów nukleozydu PL PL | |
| FR2677026A1 (fr) | Nucleosides a base modifiee. | |
| FR2537144A1 (fr) | 3',5'-diarabinosides, leur preparation et leur application en therapeutique | |
| WO1997034891A1 (fr) | 1,3-thiazolidin-4-ones et 1,3-thiazolidines substituees, procede d'obtention de ces composes et leurs utilisations comme medicaments |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FZDE | Discontinued |