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Procédé pour la préparation d'un sel d'argent de la cyclosériné La présente invention se rapporte à un procédé de préparation d'un sel d'argent de la cyclosérine, notamment à partir d'un milieu nutritif dans lequel cet antibiotique s'est formé.
La cyclosérine est un agent bactéricide à spectre étendu dont l'activité s'exerce vis-à-vis des bactéries Gram négatives et des bactéries Gram positives, y compris des mycobactéries telles que le Mycobacte- rium ranae. La cyclosérine est produite à partir du Streptomyces orchidaceaus. Cet antibiotique est une substance amphotère possédant des groupes faiblement acides et des groupes faiblement basiques, très soluble dans l'eau, partiellement soluble dans les glycols, dans l'alcool isopropylique, dans le méthanol, dans l'éthanol et dans l'acétone.
Il est insoluble dans l'hexane, le benzène, le chloroforme, l'éther, l'éther de pétrole, le dioxane, le 1 butanol, l'acétate d'éthyle et le dichloréthylène. Il fond avec décomposition à environ 153 C, et s'hydrolyse à 140 C avec de l'acide chlorhydrique 1 N.
Lors de la production de la cyclosérine, on cultive le microorganisme Streptomyces orchidaceaus dans un milieu nutritif contenant une source appropriée de protéine et une source appropriée d'hydrate de carbone, de l'air étant fourni au milieu que l'on met à incuber à une température comprise entre environ 20() et environ 300 C.
Le procédé selon l'invention est caractérisé en ce qu'on ajoute du nitrate d'argent à une solution aqueuse impure de cyclosérine, à un pH compris entre 5,5 et 9,0 et qu'on recueille la cyclosérine d'argent précipitée.
Pour mettre en couvre l'invention, on opère avantageusement comme suit On filtre en premier lieu la solution aqueuse impure de cyclosérine et on la décolore avec du charbon animal activé. On adsorbe ensuite l'antibiotique à partir de la solution aqueuse sur une résine échan- geuse d'anions fortement basique sous forme hydroxyde.
Des résines échangeuses d'anions fortement basiques que l'on peut utiliser comprennent les produits marque Dowex 1 et Dowex 2 qui sont tous deux fabriqués par la Société Dow Chemical Company (Midland, Michigan) et les produits marque Amberlite XE-75 , Amberlite XE-98 , Amberlite IRA-400 , Amberlite IRA-410 , qui sont fabriqués par Rohm & Haas Company, à Philadelphie (Pennsylvanie).
Après l'adsorption de l'antibiotique sur une résine échangeuse d'anions fortement basique, on procède ensuite à l'élution de l'antibiotique en utilisant une solution aqueuse d'une matière dont l'anion est capable de déplacer la cyclosérine de la résine, cet anion étant autre que OH.
Des matières d'élution appropriées comprennent des sulfates, des chlorures, des acétates, des formiates, des phosphates, des citrates, des oxalates, etc., solubles dans l'eau, ainsi .que l'acide sulfurique, l'acide chlorhydrique, l'acide acétique, l'acide formique, l'acide phosphorique, l'acide citrique, l'acide oxalique, etc.
Après l'élution de l'antibiotique à partir de la résine échangeuse d'anions, on décolore le produit d'élution avec du charbon activé, si cela est nécessaire et, ensuite, on précipite l'antibiotique à partir de la solution aqueuse par addition à celle-ci de nitrate d'argent. Avant l'addition du nitrate d'argent on règle le pH de la solution de cyclosérine à une valeur comprise entre 5,5 et 9,0 et on règle à nouveau le pH à une valeur comprise dans cette gamme
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après l'addition du sel métallique. On préfère utiliser un pH de 6,5.
Bien entendu, il y a des cas où l'on peut précipiter l'antibiotique sous forme de sel d'argent à partir d'un milieu nutritif clarifié sans qu'il soit nécessaire de l'adsorber préalablement sur une résine échangeuse d'anions et de l'en extraire par élution. On filtre alors le milieu nutritif dans lequel l'antibiotique est produit, on clarifie ce milieu en utilisant du charbon activé, dont on forme une suspension dans le milieu nutritif filtré et que l'on filtre ensuite pour le séparer de ce milieu afin d'obtenir une solution aqueuse partiellement purifiée de l'antibiotique.
Les exemples suivants illustrent la présente invention.
Exemple 1 On filtre 288 litres d'un milieu nutritif dans lequel la cyclosérine a été produite et qui contient 4,8 unités de cyclosérine par cm3 et on les fait passer dans une colonne contenant 10 litres de Dowex-2 (résine échangeuse d'anions fortement basique) sous la forme OH, avec un débit de 1200 cm3 par minute.
On lave ensuite la colonne avec de l'eau et on sépare la cyclosérine de la résine par élution avec de l'acide sulfurique 0,2 N avec un débit de 1200 cm3 par minute, le produit d'élution étant recueilli en dix-huit fractions de 2 litres.
On règle ensuite le pH des fractions du produit d'élution à environ 7,0, après quoi on mélange 1 % en poids de charbon décolorant avec les fractions du produit d'élution, puis on l'en sépare par filtration. On ajoute ensuite au produit d'élution décoloré, 0,5 mg de nitrate d'argent par unité d'activité antibiotique du produit d'élution, le pH étant maintenu à 6,5 avec de la soude caustique.
Un sel cristallisé d'argent de la cyclosérine précipite à partir du produit d'élution et on le filtre, on le lave avec de l'acétone et on le sèche sous vide. Le tableau suivant mentionne les résultats obtenus pour neuf des fractions de produits d'élution mentionnés ci-dessus.
EMI2.48
<tb> Produit <SEP> Filtrat
<tb> Produit <SEP> Activité <SEP> Activité <SEP> Grammes <SEP> Activité
<tb> d'élution <SEP> No <SEP> d <SEP> élucion <SEP> Unités <SEP> cm.
<SEP> décoloré <SEP> Unités <SEP> cm3 <SEP> A <SEP> NO <SEP> Produit <SEP> gr <SEP> Unités/mg
<tb> Vol/cm3 <SEP> / <SEP> Vol/cm3 <SEP> / <SEP> g <SEP> a
<tb> 10 <SEP> 2260 <SEP> 15 <SEP> 2400 <SEP> 12 <SEP> 22,6 <SEP> 12,8 <SEP> 1,92
<tb> 11 <SEP> 2280 <SEP> 27 <SEP> - <SEP> 21 <SEP> 24,0 <SEP> 24,4 <SEP> 1,23
<tb> 12 <SEP> 2180 <SEP> 34 <SEP> 2340 <SEP> 31 <SEP> 35,0 <SEP> 33,9 <SEP> 1,80
<tb> 13 <SEP> 2020 <SEP> 47 <SEP> 2120 <SEP> - <SEP> 43,4 <SEP> 29,7 <SEP> 2,12
<tb> 14 <SEP> 2220 <SEP> 55 <SEP> 2400 <SEP> - <SEP> 53,3 <SEP> 38,2 <SEP> 2,5
<tb> 15 <SEP> 2160 <SEP> 32 <SEP> 2465 <SEP> 28 <SEP> 36,7 <SEP> 29,4 <SEP> 2,4
<tb> 16 <SEP> 2130 <SEP> 25 <SEP> 2370 <SEP> 20 <SEP> 28,8 <SEP> 24,4 <SEP> 2,0
<tb> 17 <SEP> 2050 <SEP> 17 <SEP> 2220 <SEP> 13 <SEP> 22,6 <SEP> 21,8 <SEP> 1,18
<tb> 18 <SEP> 1960 <SEP> 11 <SEP> 2100 <SEP> 8 <SEP> 12,7 <SEP> 10,
4 <SEP> 0
Exemple 2 On mélange une portion de 102 cmB d'un milieu nutritif contenant 5 unités par cm3 de cyclosérine avec 4 % de charbon activé, on agite le mélange et on le filtre. On ajoute 170 mg de nitrate d'argent au filtrat et le sel, d'argent de la cyclosérine précipite sous la forme de petits cristaux blancs. On filtre les cristaux et on les sèche pour obtenir 160 mg de sel d'argent cristallisé de la cyclosérine.