CH344999A

CH344999A - Procédé de déshydrogénation d'un 3-céto-stéroïde non saturé en position 4(5)

Info

Publication number: CH344999A
Authority: CH
Inventors: Malcolm Shull Gilbert; Albert Kita Donald
Original assignee: Pfizer & Co C
Priority date: 1954-05-21
Filing date: 1955-05-21
Publication date: 1960-03-15
Also published as: CH356765A; BE544631A

Description


  Procédé de déshydrogénation  d'un     3-céto-stéroïde    non saturé en     position    4(5)    Le présent brevet a pour objet un procédé pour  la déshydrogénation de     3-céto-stéroïdes    non saturés  en position 4(5), en vue d'introduire une double Sai  son dans le noyau, au moyen d'enzymes oxydantes  élaborées par des micro-organismes.  



  On a trouvé qu'en soumettant un     3-céto-stéroïde     non saturé en position 4(5) à     l'action    oxydante d'en  zymes produites par une espèce du genre     Mycobacté-          rium,    on introduit dans le noyau une double liaison,  généralement en position 1(2). Dans certains cas,  notamment quand la progestérone forme la matière  initiale, de faibles proportions d'un produit de réduc  tion, dans lequel la double liaison en position 4(5) a  été saturée, se forment également. En outre, il peut  arriver que la déshydrogénation soit accompagnée de  l'introduction d'un ou plusieurs groupes     oxy.     



  Le procédé de la présente invention peut être mis  en     oeuvre    en soumettant le stéroïde choisi, en solu  tion aqueuse ou en suspension, à l'action d'une cul  ture de     Mycobactérium    en croissance active, de cel  lules de     Mycobactérium    séparées de la culture en  croissance et mises en suspension dans un milieu ap  proprié, ou d'extraits d'enzymes oxydantes obtenus à       partir    d'une culture d'une espèce du genre     Mycobac-          térium.     



  Divers     3-céto-stéroïdes    non saturés en position  4(5) peuvent être employés comme matière initiale  pour le procédé selon la présente invention. Ces com  posés comprennent des substances comme la testo  stérone, la     stigmasténone,    la     17-hydroxy-11-désoxy-          corticostérone,    la     11-désoxy-corticostérone,    et d'au  tres composés analogues, qui correspondent à la for  mule  
EMI0001.0020     
    dans laquelle R représente de l'hydrogène, un reste  hydroxyle, alcoyle, acyle saturé ou non,     -CO-CH20H,          -CO-CH20-acyle,        -CO-CH20-alcoyle,    etc.,

   les res  tes alcoyle ou acyle ne contenant pas plus de 10  atomes de carbone; Ri peut être de l'hydrogène, un       radical    hydroxyle ou     -O-acyle.    R et RI peuvent aussi  représenter ensemble un groupe     céto.    L'emploi dans  la formule ci-dessus de traits pleins reliant les restes  R et Ri ne tient pas compte des     stéréisomères,    R ou  RI pouvant avoir la configuration a ou     [3.     



  Les produits obtenus peuvent être isolés et iden  tifiés par des chromatogrammes sur papier. Cette mé  thode est connue et décrite par exemple dans le Rap  port du     XIIe    Congrès International de Chimie pure et       appliquée.     



  Pour la mise en     oeuvre    du procédé différentes es  pèces du genre     Mycobactérium    peuvent être em  ployées. Celles-ci comprennent des espèces     connues     telles que     Mycobactérium   <I>espèce 607, M.</I>     beroli-          nense,   <I>M.</I>     lacticola,   <I>M.</I>     thamnopheos    et, en particu  lier, des souches de l'espèce M.     smegmatis          ATCC    101.           Plusieurs    méthodes peuvent être utilisées     pour    la  mise en     oeuvre    du procédé.

   Suivant la     première,    des       milieux    nutritifs sont ensemencés par des cultures en  tubes obliques des mycobactéries choisies. Un tel mi  lieu peut se composer, par exemple, d'un     bouillon     nutritif habituel et de glycérine. Un agent     tensio-          actif,    tel qu'un dérivé     polyoxyéthylène    d'un ester  d'un     alcool    à 6 atomes de carbone avec un acide  gras, par exemple   Tween 80   (marque déposée),  est utile lorsqu'il est ajouté au     milieu    en une faible       proportion.    L'addition d'asparagine est également  utile.

   Les solutions nutritives ensemencées et     stériles     peuvent être cultivées dans des     flacons    agités pendant  deux à trois jours afin d'obtenir un     inoculum    apte à  être transféré dans des     récipients    plus grands, agités  et aérés et donnant à leur tour les cultures néces  saires pour l'inoculation de cuves utilisées pour la  fermentation submergée, à l'échelle industrielle. Le  même     milieu    du type décrit ci-dessus peut être em  ployé pour le traitement de stéroïdes selon la pré  sente invention, à grande échelle. Naturellement, le       milieu    peut varier considérablement.

   En général, il  contient en tout cas un hydrate de carbone, une  source de composés organiques d'azote, des sels mi  néraux et des traces de     différents    métaux.  



  Le composé stéroïde peut aussi être ajouté di  rectement à une     portion        stérilisée    de     milieu    nutritif,  tel que     décrit        ci-dessus,    et ensuite le     milieu    est ense  mencé avec les mycobactéries choisies. Approxima  tivement la même proportion de composé stéroïde  choisi peut être     utilisée    aussi dans ce cas. Des prises  d'essai du mélange agité et aéré peuvent être enle  vées à des     intervalles    pour     déterminer    la conversion  du composé stéroïde en produit désiré.

   Le mélange  est maintenu à une température de     25o    à     30o        C    pen  dant la croissance des cellules et la conversion du sté  roïde. Généralement de deux à sept jours sont néces  saires pour la production maximum des composés  désirés. Alternativement, la croissance des cellules  peut être établie avant l'addition du stéroïde.  



  Suivant la deuxième méthode, les cellules sont  séparées des cultures en croissance, et     mises    en sus  pension dans un     milieu    approprié. Un tel     milieu    peut  se composer par exemple, d'une solution 0,01 molaire  en     fumarate    de sodium ou autre     accepteur    d'hydro  gène et en     sulfate    de magnésium et 0,03     molaire    en  citrate de sodium.

   La présence d'une certaine quan  tité de triphosphate d'adénosine, par exemple       0,125        1%        est        aussi        très        utile.        Des        cellules        lavées        et          centrifugées    du     Mycobactérium    choisi peuvent être  mises en suspension dans un tel milieu ajusté a un  pH d'environ 6, par exemple à l'aide d'acide citri  que. Après l'addition du composé stéroïde à traiter,  le mélange peut être soumis à l'inoculation à 370 C.

    En général, la transformation maximale est atteinte  après environ 1 à 4 jours. L'emploi de la suspension  des cellules     d'environ    100     millilitres    des cultures agi  tées et aérées de mycobactéries dans environ 20 mil  lilitres du- milieu susmentionné et     d'environ    25 à en-         viron    200 milligrammes de     stérôide    par 100 millili  tres du     milieu    donne de bons résultats.  



  Suivant la troisième méthode on     utilise    les en  zymes oxydantes élaborées par les mycobactéries. Ces  enzymes peuvent être formées pendant la fermenta  tion et soit sécrétées par le micro-organisme, ou rete  nues dans les cellules de celui-ci. Dans le     premier    cas,  le     milieu    exempt de cellules, sur lequel l'organisme a  fait sa croissance, peut être     utilisé    pour     effectuer    la  conversion des composés stéroïdes choisis.

   Dans le  second cas, les enzymes peuvent être libérées des cel  lules par plusieurs procédés connus tels que le  broyage, l'autolyse, le gel et le dégel rapides et répé  tés de la matière cellulaire ou l'emploi d'un solvant       miscible    à l'eau, en particulier de l'acétone. Les en  zymes de mycobactéries peuvent être utilisées     dans     des milieux similaires à ceux     utilisés    avec les cellules  cultivées, c'est-à-dire un milieu comprenant un ac  cepteur d'hydrogène tel qu'un     fumarate,    un tampon  et dans quelques cas, un métal bivalent, en particu  lier du magnésium, ainsi qu'une faible proportion de  triphosphate d'adénosine.

   Les enzymes oxydantes de  mycobactéries, exemptes de cellules, peuvent être em  ployées dans des milieux indiqués ci-dessus à une  température d'environ 200 à environ 400 C. En gé  néral, la déshydrogénation des composés stéroïdes  choisis nécessite de quelques heures à trois jours.  



  La méthode la plus convenable pour suivre le  cours de la réaction est celle de la chromatographie  sur papier, par exemple du papier imprégné d'alu  mine en utilisant pour le développement des     chro-          matogrammes    les systèmes solvants suivants    Système I -     Hexane     Système II     -Hexane-éther    (19 volumes à 1 volume)  Système III -     Hexane-éther    (16 volumes à 1 volume)  Système IV -     Ether.       Un autre mode d'exécution consiste à employer  des feuilles de papier-filtre non traitées et à dévelop  per avec le système V, se composant de benzène sa  turé avec de l'eau. Le papier est alors enlevé et sé  ché à la température ambiante.  



  Des méthodes diverses et bien     connues    peuvent  être employées afin de détecter les différents stéroï  des sur les chromatogrammes sur papier, par exem  ple l'examen à l'aide d'un explorateur     fluorescent,     tel que     décrit    par Haines et al.,     Fédération        Procee-          dings.,    Volume 9, p. 180 (1950), ou phosphorescent.  Des échantillons types des stéroïdes connus peuvent  être développés côte à côte avec la matière préparée  selon l'invention. De cette manière il est possible de  distinguer les stéroïdes nouvellement produits.

   Une  autre méthode     pour    déceler les composés stéroïdes  sur les feuilles de papier consiste en un traitement  dans une atmosphère de chlore suivi de l'arrosage  avec une solution de 380 grammes de trichlorure  d'antimoine dans 100     millilitres    d'anhydride acéti  que, du chauffage à 90 - 1000 C jusqu'à     siccité    et de  l'examen dans une chambre obscure avec une lampe.  solaire en utilisant un filtre     Corning        N     9863.

        Pour déceler les stéroïdes qui possèdent une  chaîne latérale     21-hydroxy-20-céto    on arrose le pa  pier avec une solution de chlorure de     triphényl-tétra-          zolium    dans l'hydroxyde de potassium alcoolique tel  que décrit par Burton et al. J.     Biol.        Chem,    Volume  188, p. 763 (1951).  



  Les produits obtenus par le nouveau procédé dé  crit peuvent être isolés de leur solution aqueuse par  extraction à l'aide de divers solvants organiques non  miscibles à l'eau. Les hydrocarbures halogénés infé  rieurs, tels que le chloroforme, sont particulièrement  utiles. Après l'extraction le solvant peut être enlevé  par distillation et le produit solide est alors isolé.  Cette matière peut être ensuite purifiée par recris  tallisation dans des solvants organiques ou par chro  matographie, par exemple sur des colonnes d'alu  mine ou d'autres matières solides adsorbantes appro  priées. L'emploi d'une colonne gel de silice-éthanol  avec un mélange de 98 % à 2 % en volume de  chlorure de méthylène et d'éthanol (95 0/0) comme  développant s'est avéré particulièrement utile.

   Des  méthodes pour la séparation de produits de cette na  ture ont été décrites récemment dans la littérature.  Pour certains usages il n'est pas nécessaire de sépa  rer les produits, mais le mélange brut peut être di  rectement employé. Dans certains cas on a trouvé  qu'il est avantageux     d'acyler    les produits bruts et  d'opérer avec les esters résultants qui sont quelque  peu plus stables.  



  Les produits obtenus sont utiles comme intermé  diaires dans la synthèse d'autres produits de valeur.  Par exemple les produits déshydrogénés, qui contien  nent une non-saturation en position 1(2), en même  temps que le groupe     3-céto    et la non-saturation en  position 4(5), sont particulièrement susceptibles d'aro  matisation selon     Inhoffen.    On obtient ainsi un groupe  de dérivés de     l'estrone.    L'introduction de groupes     oxy     dans les noyaux des stéroïdes déshydrogénés confère  à ces molécules de nouveaux centres chimiquement  actifs, et augmente fortement leur aptitude à subir  d'autres réactions chimiques.

      <I>Exemple I:</I>  A une culture de     Mycobactérium        smegmatis    cul  tivée sur un milieu     d'agar    solide on ajoute 50 milli  litres d'une solution nutritive ayant la composition  suivante    Bouillon nutritif solide . . .

   8     g/litre     Glycérine     ...............    20     cç/litre       Tween 80   (marque déposée) 0,2     cc/litre     Asparagine     ............    5     g/litre       Le     milieu    est stérilisé avant l'ensemencement,  placé dans un     flacon        d'Erlenmeyer    de 250 millilitres  et secoué à     27o    C pendant trois jours.

   Le contenu  d'un     flacon    à secouer est utilisé pour inoculer deux  litres du même milieu stérilisé dans une cuve de 4 li  tres équipée pour opérer la fermentation sous condi  tions submergées, l'agitateur tournant à- une vitesse  de 1750 tours par minute. L'aération est     continuée       pendant 48 heures à une vitesse d'un volume d'air  stérile pour un volume de milieu par minute. Les cel  lules formées sont alors essorées et lavées à l'eau.  



  On prépare un milieu contenant 0,01 mol de     fu-          marate    de sodium, 0,01 mol de sulfate de magné  sium, 0,03 mol de citrate de sodium par litre     ainsi          que        0,125,%        de        triphosphate        d'adénosine.        Vingt        mil-          lilitres    de ce milieu sont placés dans un     flacon        d'Er-          lenmeyer    de 125 millilitres.

   Après ajustage du pH  à 6,0 à l'aide d'acide citrique, le mélange de réaction  est additionné de 25 mg d'acétate de     composé    S. Le  mélange réactionnel est ensemencé avec les cellules  de 100 millilitres de la fermentation et le mélange  incubé à 37      C.    Des échantillons sont pris à des in  tervalles, et les stéroïdes présents     extraits    au moyen  de chloroforme. Après séparation de la phase     orga-          nique,    le solvant est enlevé et le produit dissout dans  l'éthanol. La chromatographie sur papier de     cette    so  lution montre qu'à la fin de six heures. une certaine  déshydrogénation du noyau de l'acétate du composé S  était intervenue.

   La réaction procède très rapidement  et après 24 heures une conversion appréciable est  obtenue. Après 48 heures, une conversion maximum  du noyau stéroïde est observée. Des chromatogram  mes sur papier exécutés à l'aide du système solvant V  donnent les résultats suivants. Les     chiffres    donnés  dans le tableau sont des valeurs     Rf    et les noms en  parenthèse sont les composés stéroïdes qui corres  pondent à chacune des taches sur le     chromatogramme     sur papier. -Ces essais sont opérés 48 heures après  l'inoculation du milieu avec les cellules.

      <I>Valeurs R</I>     f   <I>avec système V</I>  1,0 (Acétate de composé S)  1,58 (Composé S)  0,30     (Ai-déhydro-composé    S  et     14a-hydroxy-composé    S)  0,20 (pas encore identifié)    <I>Exemple 11:

  </I>    Dans une cuve en verre de quatre litres     équipée     pour opérer la fermentation sous conditions submer  gées et aérées on ajoute deux litres du milieu suivant  (connu comme milieu de     Turfitt)     Nitrate d'ammonium . . . . . . . . . . . . . . 0,1 0/0  Phosphate de potassium     acide   <B>......</B> 0,025 0/0       Heptahydrate    de sulfate de magnésium 0,25 0/0  Chlorure de sodium . . . . . . . . . . . . . . 0,0005      /o          Heptahydrate        de        sulfate        ferreux    . .     ....        0,00001%     Carbonate de calcium - . . . . . . .

   . . . . 0,5 0/0  Le milieu aqueux est     stérilisé    et ensuite addi  tionné de 0,25 g d'acétate de composé S. Le mélange  est alors ensemencé avec 100 cc d'une culture de       Mycobactérium        smegmatis    cultivé dans un     flacon    à  secouer sur un bouillon nutritif. Le mélange est agité  et aéré à l'aide d'air stérile. Le mélange entier est  alors extrait avec deux litres de chloroforme.

   Des  échantillons de ce produit sont soumis à un examen  à l'aide de la chromatographie sur papier en utilisant      trois systèmes     différents.    Le tableau suivant indique  les valeurs     Rp    pour les systèmes     divers.    Les compo  sés correspondant à ces taches sont désignes en  marge du tableau.

    
EMI0004.0004     
  
    <I>Valeurs <SEP> Ri</I>
<tb>  Système
<tb>  III <SEP> IV <SEP> V
<tb>  0,07 <SEP> 0,5 <SEP> (Composé <SEP> S)
<tb>  0,94 <SEP> (Acétate <SEP> de <SEP> composé <SEP> S)
<tb>  0,72 <SEP> (Composé <SEP> S)
<tb>  0,45 <SEP> (Ai-déhydro-composé <SEP> S
<tb>  et <SEP> 14(x-hydroxy-composé <SEP> S)
<tb>  0,22 <SEP> (pas <SEP> encore <SEP> identifié)       Un autre système de chromatographie sur papier  donna de meilleurs résultats particulièrement dans la  séparation du     Ai-déhydro-composé    S et du     14a-          hydroxy-composé    S, qui chacun avait la valeur     Rp     de 0,45 lors de l'emploi du système V. Cet autre  système fut employé dans une chromatographie des  cendante au lieu d'une chromatographie ascendante.

    Le papier fut imprégné avec un mélange de 80 vo  lumes de méthanol et 20 volumes d'eau. L'atmo  sphère dans le récipient     fut    saturée avec de la va  peur de toluène, qui était saturé avec de l'eau. Le  développement fut accompli à l'aide d'un mélange de  100 volumes de toluène et 20     volumes    d'alcool  éthylique.  



  En utilisant ce système, les résultats suivants fu  rent obtenus  
EMI0004.0011     
  
    Valeurs <SEP> Rs
<tb>  <B>1,00</B> <SEP> (Composé <SEP> S)
<tb>  0,68 <SEP> (Al-déhydro-composé <SEP> S)
<tb>  0,48 <SEP> (14a-hydroxy-composé <SEP> S)
<tb>  0,25 <SEP> (pas <SEP> encore <SEP> identifié)       Ces valeurs     Rs    furent obtenues en assignant une  valeur de 1,00 à la distance parcourue par le com  posé S, et à chacun des autres composés une valeur  égale au rapport entre la distance parcourue par     ce     composé et la distance parcourue par le composé S.  Le front du solvant et l'acétate de composé S pas  saient tous les deux tout au long de la feuille et hors  du papier.  



  Le mélange fut finalement séparé par     application          successive    à des colonnes de gel de silice-éthanol.  Lorsque la fermentation     fut    achevée, le mélange  de fermentation fut     extrait    au moyen de chloro  forme et évaporé jusqu'à un volume d'environ 20     cc.     Cet extrait concentré     fut    alors appliqué à une co  lonne de gel de     silice-éthanol    et     élué    avec un mé  lange chlorure de méthylène-alcool jusqu'à     ce    que  la plus grande partie du     A1-déhydro-composé    S fût  enlevée.

   La colonne fut alors     éluée    avec du métha  nol afin d'enlever tous les stéroïdes restants. Cette  procédure fut répétée plusieurs fois, débutant chaque  fois avec l'extrait d'une fermentation opérée     comme     décrit ci-dessus. Ces     éluats        méthanoliques    furent en-    suite combinés, évaporés jusqu'à     siccité    et dissous  dans 20 cc de chloroforme. Cette solution de chloro  forme fut alors appliquée à une colonne de gel de  silice-éthanol et     éluée    au moyen du mélange chlo  rure de méthylène-alcool.  



  Des fractions de 50 cc furent recueillies environ  toutes les deux heures ; ces fractions renfermaient  
EMI0004.0030     
  
    Fraction <SEP> <B>1-8</B> <SEP> (rien)
<tb>  <B>9-17</B> <SEP> (Composé <SEP> S)
<tb>  <B>18-19</B> <SEP> (AI-déhydro-composé <SEP> S)
<tb>  20-21 <SEP> (A'-déhydro-composé <SEP> S
<tb>  et <SEP> 14a-hydroxy-com  posé <SEP> S)
<tb>  Fraction <SEP> 22 <SEP> - <SEP> 23 <SEP> (14-hydroxy-composé <SEP> S)       Les fractions furent évaporées jusqu'à siccité et  les cristaux recueillis.

   Le     Al-déhydro-composé    S     fut          recristallisé        deux    fois dans de l'acétate d'éthyle, et  le     19a-hydroxy-composé    S fut recristallisé deux fois  dans de l'alcool     éthylique.     



  Le     AI-déhydro-composé    S ou     1,4-prégnadiène-          17a,        21-diol-3,20-dione    possède les caractéristiques  physiques suivantes : point de fusion 235 - 2360 C ;       étone    -     +    71,9e ; adsorption  pouvoir rotatoire     [ajD          maximum    des rayons ultraviolets à 245     m#t.     



  Le     14a-hydroxy-composé    S ou     4-pregnène-14a,          17a-21-triol-3,20-dione    est un composé blanc et cris  tallin, qui possède les caractéristiques physiques sui  vantes<B>:</B> point de fusion 226 - 228e C et pouvoir ro  tatoire     [a]#        étone    - + 129,6e.

    
EMI0004.0051     
  
    <I>Analyse</I>
<tb>  Calculé <SEP> pour <SEP> C.1H300s
<tb>  C <SEP> 69,57 <SEP> ; <SEP> H <SEP> 8,35
<tb>  Trouvé <SEP> C <SEP> 69,64 <SEP> ; <SEP> H <SEP> 8,30       <I>Exemple I11:</I>  Une expérience fut conduite exactement     comme     décrit dans l'exemple ci-dessus, excepté que<B>0,25g</B>       d'acétate    de     désoxycorticostérone    furent employés  comme matière initiale. Après incubation pendant  quatre jours à<B>270C</B> dans des, conditions pour le  reste identiques, le produit fut recueilli et analysé à  l'aide de chromatogrammes sur papier.

   Les résultats  sont indiqués dans le tableau suivant  
EMI0004.0055     
  
    <I>Valeurs <SEP> Rf</I>
<tb>  système
<tb>  <B>il</B> <SEP> III <SEP> IV <SEP> V
<tb>  0,39 <SEP> 0,87 <SEP> 1,0 <SEP> (Acétate <SEP> de <SEP> désoxycor  ticostérone)
<tb>  0,27 <SEP> 0,67 <SEP> 0,97 <SEP> (Désoxycorticostérone)
<tb>  0,32 <SEP> 0,72 <SEP> (Al-déhydro-désoxycor  ticostérone)
<tb>  0,17 <SEP> 0,44 <SEP> (produit <SEP> de <SEP> substitu  tion <SEP> nucléaire <SEP> de <SEP> dês  oxycorticostérone <SEP> à
<tb>  fonction <SEP> monohydroxy)         Comme dans les cas précédents les produits dans       cet    exemple sont formés par déshydrogénation dans  le noyau de la matière stéroïde initiale.

   La position  exacte du groupe hydroxyle dans le produit de subs  titution nucléaire à fonction     monohydroxy    n'est pas  encore connue, sauf qu'il est dans une position diffé  rente de celle du groupe hydroxyle nucléaire dans la       corticostérone.       <I>Exemple IV</I>    Une série d'expériences fut conduite en utilisant  la procédure décrite dans l'exemple 1, mais au     lieu     d'employer le     Mycobactérium        smegmatis    les espèces  suivantes de mycobactéries furent utilisées    M.     phlei     M.     ranae     M.     butyricum     M.     berolinense     M.

       thamnopheos     M.     lacticola     M.     friedmanni     M.     tuberculosis       Le produit principal formé au départ d'acétate  de composé S, le     Al-déhydro-composé    S     fut    isolé du  mélange de réaction par extraction.    <I>Exemple V</I>    Une expérience fut conduite exactement     comme     décrit dans l'exemple II, excepté que 0,25 g de pro  gestérone furent utilisés comme matière de départ.

    Les produits obtenus étaient la     Al-déhydro-progesté-          rone    et une progestérone     monohydroxylée.    Les ca  ractéristiques physiques de la     Al-déhydro-progesté-          rone    obtenue sont identiques avec celles rapportées  dans la littérature. La position exacte du groupe  hydroxyle introduit dans l'autre composé n'est pas  encore connue.  



  Dans cette expérience on a obtenu outre les pro  duits susmentionnés une petite quantité d'un produit  de réduction formé par saturation de la double liai  son en position 4. Les caractéristiques physiques  trouvées pour ce produit     alloprégnane-3p-ol-20-one     sont identiques avec celles rapportées antérieurement  dans la littérature.

Claims

REVENDICATION Procédé de déshydrogénation d'un 3-céto-stéroïde non saturé en, position 4(5), en vue d'introduire une double liaison dans le noyau de ce dernier, caracté risé en ce qu'on soumet ledit stéroïde à l'action oxy dante d'enzymes produites par une espèce du genre Mycobactérium. SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que ledit stéroïde est déshydrogéné en composé Al-déhydro correspondant. 2. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que la déshydrogénation est accompagnée de l'in- .

troduction d'un ou plusieurs groupes oxy. 3. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce qu'on met ledit stéroïde en contact dans une cul ture submergée et aérée avec une espèce du genre Mycobactérium en croissance active. 4. Procédé selon la sous-revendication 3, carac térisé en ce que ladite culture est maintenue à une température d'environ 250 à 300 C, tout en étant sou mise à une agitation et une aération continues. 5. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce qu'on sépare les cellules d'un organisme du genre Mycobactérium d'une culture en croissance et qu'on met lesdites cellules en contact avec le stéroïde. 6.

Procédé selon la revendication, caractérisé en ce qu'on met ledit stéroïde en contact avec des ex traits oxydants obtenus à partir d'une culture d'une espèce du genre Mycobactérium. 7. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce qu'on transforme le composé S en Ai-déhydro- composé S. 8. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce qu'on transforme l'acétate du composé S en acé tate de Ai-déhydro-composé S. 9. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce qu'on transforme l'acétate de désoxycorticostérone en acétate de Ai-déhydro-désoxycorticostérone. 10.

Procédé selon la revendication, caractérisé en ce qu'on transforme la testostérone en Ai-déhydro- testostérone. 11. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce qu'on transforme la progestérone en Ai-déhydro- progestérone. 12. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le micro-organisme employé est le Mycobac- térium smegmatis. 13.

Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le micro-organisme employé est le Mycobac- térium phlei.