CH485670A - Verfahren zur Herstellung eines Tetracosapeptids - Google Patents

Verfahren zur Herstellung eines Tetracosapeptids

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CH485670A CH220963A CH220963A CH485670A CH 485670 A CH485670 A CH 485670A CH 220963 A CH220963 A CH 220963A CH 220963 A CH220963 A CH 220963A CH 485670 A CH485670 A CH 485670A
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valyl
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Ciba Geigy
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Description


  



  Verfahren zur Herstellung eines   Tetracosapeptids   
Im Patent Nr. 471 819 ist die Herstellung neuer Tetracosapeptide der Formel   L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L- (X)-    -L-glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryp  tophyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-  -lysyl-L-a rginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-va-      lyl-L-tyrosyl-L-prolin,    sowie der entsprechenden Verbin  dung,    die statt des   Glutamylrestes    den Rest des Glutamins aufweist, und ihrer Derivate, Säureadditionssalze und Schwermetallkomplexe beschrieben.

   Diese Verbindungen, insbesondere das L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl -L-glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryp  tophyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L- -lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-va-    lyl-L-tyrosyl-L-prolin und sein   Zinkkomplex    sowie die entsprechende   Glutaminylverbindung,    haben eine hohe   adrenocorticotrope    (ACTH-) Wirksamkeit.



   Es wurde nun gefunden, dass das Verfahren zur Herstellung der genannten Verbindungen, insbesondere des   L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutamyl-L-       -histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycyl-L- -lysyl-L-prolyl-L-valyi-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-arginyl-     -L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L  -prolins.    bei dem man das Dekapeptid der Aminosäuren
1-10 mit dem Tetradecapeptid der Aminosäuren   11-24    kondensiert, verbessert werden kann.

   Das bei diesem Verfahren verwendete Tetradecapeptidderivat tert.-Bu   tyloxycarbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-tert.-butyl- oxycarbonyl-L-lysyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-ar- ginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-tert.-butyloxycarbonyl-      -L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester    wird vorteilhaft erhalten, wenn man L-Prolin-tert.-butylester mit   Carbobenzoxy-L-valyl-L-tyrosin-azid kondensiert,    aus dem   crhaltenen Tripeptidderivat    die Carbobenzoxygruppe abspaltet, den freien Tripeptidester mit Carbo  benzoxy-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysin    kondensiert, aus dem erhaltenen   Tetrapeptidester    die   Carbobenzoxy-    gruppe abspaltet,

   den freien   Tetrapeptidester    mit Carbo  benzoxy-L-valin    kondensiert, aus dem erhaltenen Penta  peptidester    die Carbobenzoxygruppe abspaltet, den so erhaltenen   L-Valyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-      -L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester    mit Carbobenzoxy-L  -arginyl-L-arginyl-L-prolin zum geschützten    Octapeptidester kondensiert, aus diesem die Carbobenzoxygruppe abspaltet und den erhaltenen freien Octapeptidester mit   Carbobenzoxy-Nf-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-pro- lyl-L-valyl-glycyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-tcrt.-bu-      tyloxycarbonyl-L-lysin-azid,

      das durch Kondensation von   Carbobenzoxy-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-pro-      lyl-L-valyl-glycin    mit   NF-tert.-Butyloxycarbonyl-L-lysyl-      -tert.-butyloxycarbonyl-L-lysin-methylester zum Carbo- benzoxy-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-va- lyl-glycyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-tert.-butyloxy-      carbonyl-L-lysin-methylester    und überführung des Esters in das Hydrazid und Azid erhalten wird, zum   Tetradeca-    peptidester kondensiert und schliesslich aus diesem die Carbobenzoxygruppe abspaltet, vgl.   Fig. 1.    BOC bedeutet die   tert.-Butyloxycarbonylgruppe.    Z die   Carbobenzoxy-    gruppe. 
EMI2.1     




     Fig. 1    
Das   erhaltene Tetradecapeptidderivat kann.    wie im Hauptpatent Nr. 471 819 beschrieben, mit dem Decapeptidderivat   tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-       -seryl-L-methionyl---tert.-butyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-    -phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycin oder mit der entsprechenden am Histidinrest tritylierten Verbindung   (vgl.    franz. Patent   Nr.    85   518)    zum Tetracosapeptidderivat kondensiert werden, aus dem dann. wie im Hauptpatent beschrieben, die Schutzgruppen abgespalten werden.



   Die Erfindung wird im nachfolgenden Beispiel beschrieben. Die Temperaturen sind in Celsiusgraden angegeben.



   Für die Papierchromatographie wurden die folgenden Systeme benützt : System   4 ()    :   n-Butanol-Äthanol-Wasser    = 2 : 2 : 1         43 : tert.   Amylalkohol-lsopropanol-Wasser =   
100 : 40 : 55    45 :   sek.-Butanol-3'7    Ammoniak =   100    : 44    49 :   sek.-Butanol-Triäthylamin-Diäthylbarbitur-       säure-Wasser-Isopropanol    =   100.      0,    8 :
1.8 g : 60 10   >  >  53 : n-Butanol-ameisensäure-Wasser = 480 : 6 :
314    54 :   sek.-Butanol-Isopropanol-Monochloressig-       säure-Wasser = 70 : 10    : 3 g : 40      56    :

   S-Butanol-isopropanol-5% Veronal-Na trium-in Wasser = 100 : 15   : 10    : 60    87    :   Isopropanol-Ameisensäure-Wasser    = 400 :    20    : 60    100: Essigester - Pyridin - Essigsäure - Wasser =
60 : 20 : 6 1    101: n - Butanol-Pyridin-Essigsäure - Wasser =
30 : 20 :   6 # 24         102    :   Essigester-Methyläthylketon-Ameisensäure-     -Wasser = 50 : 30 : 10   :)0.   



   Beispiel 1 L-Prolin-tert-butylester a) Hydrochlorid
In einer Druckflasche werden 5   g    trockenes   L-Prolin.   



     150 ml trockeness alkoholfreies Chloroform. 5 ml    reinste, konzentrierte Schwefelsäure und 150 ml flüssiges Isobutylen bei Zimmertemperatur so lange geschüttelt, bis Lösung eintritt (ca. 3-4 Tage). Nach Abkühlen auf-15  wird das Druckgefäss geöffnet und das Isobutylen unter   Feuchtigkeitsausschluss    im Vakuum abdestilliert. Die verbleibende   Chloroformlösung    wird unter Eiskühlung mit   200 ml 20^, Kaliumcarbonatlösung    gewaschen und mit Natriumsulfat getrocknet. Nach Abnutschen des Na  triumsulfats    wird der Gehalt der Chloroformlösung an   L-Prolin-tert.-butylester    durch Titration einer Probe mit verdünnter Salzsäure ermittelt.

   Hierauf wird die restliche Chloroformlösung auf - 15  gekühlt und mit der genau berechneten Menge Salzsäure in Alkohol versetzt. Eindampfen und Zerreiben des Rückstands mit Äther gibt   6, 88 g kristallines L-Prolin-tert.-butylester-hydrochlorid      (76%      d.    Th.) vom   F.      107-108 .    Das Produkt ist   äusserst    hygroskopisch. b) freier Ester
Zur Überführung in den freien Ester wird das Hydrochlorid in möglichst wenig Wasser gelöst, die Lösung mit viel Äther überschichtet und durch Zugabe von konzentrierter Kaliumcarbonatlösung stark alkalisch gestellt.



  Der dabei ausgeschiedene Ester wird in dem Äther aufgenommen; die Ätherlösung gibt nach Trocknen und Eindampfen öligen L-Prolin-tert.-butylester, der direkt weiterverarbeitet werden kann   2.    Carbobenzoxy-L-valyl-L-tyrosin-azid    12*9 g (0,    3 Mol) Carbobenzoxy-L-valyl-L-tyrosin-hydrazid [H. Schwarz. F. M.   Bumpus    und I. Page. J. Am.



  Chem. Soc.   79,    5697   (1957)] werden    in einem Gemisch von 600 ml 2-n.   Satzsäure    und   1200 ml Dimethylform-    amid gelöst und nach Kiihlen auf - 15  unter Rühren mit 70 ml einer 5-n. wässrigen Lösung von Natriumnitrit versetzt. Die Lösung wird weitere 5 Min. bei - 10  gerührt und anschliessend in viel Eiswasser eingetragen.



  Das ausgeschiedene Azid wird abfiltriert, in kaltem Essigester gelost, die Lösung bei   OD    mit gesättigter Natrium  bicarbonat) ösung und Eiswasser gewaschen,    kurz über Magnesiumsulfat getrocknet und direkt für den weiteren Umsatz verwendet.



  3. Carbobenzoxy-L-Valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butyl ester
51.   5      L-Prolin-tert.-butylester    werden in der nach 2. erhaltenen Lösung   von Carbobenzoxy-L-valyl-L-tyrosin-    -azid in ca. 2. 9 Litern Essigester von   0     gelöst u. während 5 Std. bei   0     und 15 Std. bei   22     im Dunkeln stehen gelasse.

   Das Reaktionsgemisch wird nun im 5-Liter Kolben bei   4 () D    auf das   halbe Volumen eineeengt.    Dabei fällt der kristalline   Carbobenzoxy-L-valyl-L-tyrosyl-L-    -prolin-tert.-butylester aus, der durch eine Glasfritte abfiltriert. mit wenig   E ; sigester.    dann mit Benzol (50 ml) und mit   Benzol-Petroläther 1 # 1 (75 ml) gewaschen    und zuletzt bei 55'im Vakuum getrocknet wird. Ausbeute :   79,      5 g.

   F. 173-175'9 Das Filtrat (Volumen ca. 1,    5 Liter) wird in einem Scheidetrichter abgekühlt und bei   0  wie    folgt gewaschen mit 450 ml Zitronensäure 10%: 3mal mit 300   ml      gesattigter    Natriumchloridlösung: 2mal mit 250 ml gesättigter Natriumbicarbonatlösung; 3mal mit 150 ml Wasser. Die Essigesterphase wird nach   Zu-    satz von   200 ml Benzol    zur Trockene eingedampft, nochmals mit 100 ml Benzol versetzt und wiederum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in   25 ml Acetonitril    durch Erwärmen gelöst, mit 45 ml Benzol versetzt und nach Animpfen über Nacht bei   0     kristallisieren gelassen.

   Der Niederschlag wird abfiltriert, mit wenig Benzol und zuletzt mit Petroläther gewaschen und bei   55     im Vakuum getrocknet. Ausbeute : 29 g, F. 163 - 167 . Durch einmaliges Umkristallisieren dieser 29 g aus 430   ml      heissem    Acetonitril erhält man   19. 2 g    reines Material vom F.   173-175 , durch    Aufarbeiten der noch verbliebenen Mutterlauge noch weitere 3g vom F. 172 - 173  Papierchromatographie : nach 1 Std. bei   40  mit konz. Salzsaure ; 200-f auf Whatman 1,    Anfärbung mit Ninhydrin und Pauly : Rf (40) =   0.    65 ; Rf (45) = 0.48, 4.

   L-Valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester
28,   35 g Carbobenzoxy-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-    -tert.-butylester vom F. 173 - 175  werden in 250 ml Methanol (dest.) suspendiert und nach Zugabe von 3 g   Palladiumkohle      0'' unter    Absorption des sich bildenden Kohlendioxyds in der   Schüttelentc    hydriert. Die Wasserstoffaufnahme ist in weniger als 2 Std. beendet und nach insgesamt 4 Std. wird der Katalysator durch eine G4 Nutsche abfiltriert und mit 25 ml Methanol ausgewaschen.



  Die   klare, farblose Liisung    wird im Vakuum eingeengt und bei   45     getrocknet. Die   amorphe, schaumige Masse    wird fein pulverisiert und im Hochvakuum bei   45     bis zur Gewichtskonstanz nachgetrocknet. Man erhält   21,    3 g (98,   5 T)    chromatographisch reinen   L-Valyl-L-tyrosyl-L-    -prolin-tert.-butylester vom F.   ca.    100  (unscharf)   [α]D =     -47,   4     (c = 2 in Methanol).



  Papierchromatographie : direkt oder nach Hydrolyse mit konz. Salzsäure während 1 Std. bei   40     ;   200 y    auf Whatman   1,    Anfärbung mit Ninhydrin und Pauly : Rf (40) = 0, 87; Rf   (45) = 0, 92 :    nach Salzsäurebehandlung : Rf (40)   = 0. 65 :    Rf (45)   = 0,    48.



  5.   Carbobenzc xy-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-       -vcrlyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester       19, 15    g   Carbobenzoxy-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L-ly-    sin und   21, 8 g L-Valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester    werden in 200 ml destilliertem Acetonitril gelöst und dazu bei   20     auf einmal und unter Rühren   11,    4 g Dicyclohexylcarbodiimid in fester Form zugegeben. Es löst sich sofort, unter gleichzeitigem Auskristallisieren von Dicy  clohexylharnstoff. Anfänglich    wird kurz mit Eis gekühlt, damit die Temperatur nicht über   25     steigt. Man rührt sodann während 3 Std. bei Zimmertemperatur und lässt noch über Nacht stehen.

   Nach Zugabe von 1 ml Eisessig rührt man 30 Min. bei Zimmertemperatur, dann 30 Min. bei 0  und filtriert den ausgeschiedenen Dicyclohexylharnstoff ab. Das Filtrat ergibt beim Eindampfen zur Trockene   44,    3 g eines amorphen Pulvers, das in 44, 3 ml Essigester warm gelöst und durch Zugabe von   221    ml Petroläther wieder ausgeschieden wird. Nach Dekantieren des Lösungsmittels und Trocknen der pulverisierten   Fal-    lung bei   45     im Hochvakuum erhält man 37,   94 g    Carbo  benzoxy-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-ty-      rosyl-L-prolin-tert.-butylester    vom F.   ca.    100 .

   Das Produkt wird direkt hydriert.   Hi,--62. 3  0. 5     (c    =    1, 98 in Methanol).



  Papierchromatographie : nach 1 Std. bei   40  mit    konz.



  Salzsäure. 200 y auf Whatman   1,    Anfärbung mit Ninhydrin und   Pauly    : Rf (40) = 0. 40 ; Rf (45) =   0,    28.



  6.   NE-tert.-Butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-aalyl-L-tyrosyl-       -L-prolin-tert-butylester   
37. 37 g   Carbobenzoxy-N#-tert.-butyloxycarbonyl-L-ly-    syl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester werden in 200 ml Methanol gelöst und nach Zugabe von 3 g Palladiumkohle   e) 0% in    der Schüttelente unter Kohlendioxyd Absorption hydriert. Die Wasserstoffaufnahme ist in ca. 6 Std. beendet. Man filtriert den Katalysator durch eine G4 Fritte ab. spült mit Methanol und dampft das Filtrat zur Trockene ein.

   Nach Pulverisieren trocknet man im Hochvakuum bei   45     und erhält so   29.    68 g chromatographisch einheitlichen   N#-tert.-Butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-      -L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester    vom F.   95-100 .   



     [α]D = - 61.8  #    0,   5     (c =   2.    0 in Methanol).



  Papierchromatographie :   200    auf Whatman   1,    Anfärbung mit Ninhydrin und Pauly : Rf (40) =   0,    86.



  7.   ('arhpbenzoxy-L-valyl-NE-tert.-hutyloxyearbonyl-L-       @ysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester   
In einem Dreihalskolben mit Rührwerk, Tropftrichter, Thermometer und Kalziumchlorid-Rohr werden 8,   73 g Carbobenzoxy-L-valin    und   5.      09 ml Triäthylamin    in 85   ml    abs. Essigester gelöst und auf-10  abgekühlt.



  Dazu lässt man unter Rühren und Kühlen bei-10    wäh-    rend ca. 1   4 Min. 4s57 ml Isobutylchlorcarbonat    zutropfen. Man spült mit 12   ml    Essigester nach und rührt noch während 15 Min. bei - 10  Sodann werden 21, 92g   NF-tert.-Butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-      -prolin-tert.-butylester, gelost    in 50 ml abs. Essigester. während 5 Min.   bei-5  zugetropft    und mit 15 ml Essigester nachgespült. Man rührt das Gemisch 30 Min. bei   0 ,    lässt dann die Temperatur auf   20     steigen und rührt noch 1 Std. bei Zimmertemperatur weiter. Zur Aufarbeitung versetzt man mit 170 ml Wasser und extrahiert mit 270 ml Essigester.

   Die Essigesterlösung wird nacheinander gewaschen mit 85 ml Weinsäure   107toc      (0 ).    85   ml    Wasser. zweimal mit je 100   ml    Natriumbicarbonatlösung, zweimal mit je 100 ml verdünnter Natriumsulfatlösung. Nach Stehenlassen über Magnesiumsulfat dampft man zur Trockene ein und erhält nach Pulverisieren und Nachtrocknen bei   45       29,    98 g eines amorphen Rohproduktes.



  Dieses wird heiss in 300 ml Acetonitril gelöst, angeimpft und unter Rühren erkalten gelassen. Nach Stehenlassen bei Zimmertemperatur filtriert man den kristallinen Niederschlag ab und trocknet ihn bei   45     im Vakuum. Man   erhält 23,    55 g   Carbobenzoxy-L-valyl-NF-tert.-butyloxy-      carbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butyl-    ester vom F.   159-164 .    das zur weiteren Reinigung nochmals während 3 Min. in 235 ml siedendem Acetonitril gerührt wird. Nach Stehenlassen über Nacht bei Zimmertemperatur wird filtriert, mit 70 ml Acetonitril gewaschen und im Hochvakuum bei 45  getrocknet.

   Man erhält 22.   55 g    Reinprodukt vom F.   162 - 165  [α]n =     - 71,   4       +    1  (c =   0,    9 in Methanol).



  Papierchromatographie : nach 1 Std. bei 40  in konz.



  Salzsäure. 200   y    auf Whatman 1, Anfärbung mit Ninhydrin und   Pauly    : Rf (40) = 0, 40 ; Rf (45) =   0.    36.   



  8. L-Valyl-N#-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-     -tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester
47, 98 g   Carbobenzoxy-L-valyl-NF-tert.-butyloxycarbo-    nyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester vom F.   161-163     werden in   320 ml Methanol    suspendiert und nach Zugabe von   3.      2g Palladiumkohle 109    in der Schüttelente unter Kohlendioxyd-Absorption hydriert.



  Die Wasserstoffaufnahme erfolgt unter gleichzeitiger Auflösung des suspendierten   Pentapeptides    und ist in ca. 3 Std. beendet. Nach   weiteren 1-2    Std. wird der   Kataly-    sator durch eine G4-Fritte abfiltriert. mit Methanol nachgewaschen und das Filtrat zur Trockne eingeengt. Das pulverisierte Material wird im Hochvakuum bei   45     bis zur Gewichtskonstanz nachgetrocknet. Man erhält dabei   40,      27 g    (98. 7% d. Th.) amorphen   L-Valyl-NF-tert.-butyl-      oxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-bu-    tylester mit unscharfem Schmelzpunkt bei ca. 130    [oc], =-69, 2' +    0.   6     (c = 2 in Methanol).



  Papierchromatographie:   200 γ auf Whatman 1. Anfär-    bung mit Ninhydrin und Pauly: Rf (40) = 0,92: Rf (45) = 0, 94.



  9. Carbobenzoxy-L-arginyl-L-prolin-methylester   -hydrochlorid   
154 g   (0.    5 Mol)   Carbobenzoxy-L-arginin    und   83    g (0. 5 Mol) L-Prolin-methylester-hydrochlorid werden in   2.      5    Litern Chloroform suspendiert und unter kräftigem   Rüh-    ren mit   112 g    (0, 55 Mol)   Dicyclohexyl-carbodiimid    versetzt. Das Reaktionsgemisch wird während 5 Std. bei 50 gerührt, darauf auf   20     gekühit und unter Rühren mit 5 ml Eisessig versetzt.

   Nach weiterem Rühren während 2 Std. bei   0-5     wird das kristalline Gemisch von   Dicvclo-    hexylharnstoff und Reaktionsprodukt   abizentitsclit, mit    Chloroform gewaschen und im Vakuum bei   40  getrock-    net. Man verrührt das Gemisch mit 2 Litern Wasser während 30 Min. bei   40     und filtriert vom ungelösten Di cyclohexylharnstoff ab. Das wässrige Filtrat wird im Vakuum bei 40 - 50  Badtemperatur zum Sirup konzentriert und mit   150ml Äthanol    versetzt. Nach 2 Std. wird das ausgeschiedene kristalline Produkt abfiltriert und mit Äthanol gewaschen.

   Man   erhält 192 g    (=   84%)    Carbobenzoxy-L-arginyl-L-prolin-methylester-hydrochlorid vom F.   164-165 .    Aus der Mutterlauge gewinnt man nach Einengen weitere 5g vom F.   163-165 ,    total   197 g       (=      86%    d. Th.). Nach Umkristallisieren aus 1, 5 Litern abs. Äthanol schmilzt das Produkt bei   165-167  ; [a] D =       7R9     (c - 1, 8 in   Wasser),-64. 4     (c =   1,    9 in Methanol) und-67, 1  (c = 2 in   Methanol/Wasser    1 : 1).



   Das Produkt ist papierchromatographisch einheitlich.



   Rf-Werte in den Systemen 43 :   0,    79; 49 :   0,    90 ; 54 :   0,    86;
87 :   0.    82. Anfärbung mit Sakaguchi.



   10. L-arginyl-L-prolin-methylester-dihydrochlorid
45, 6 g (0, 1 Mol) Carbobenzoxy-L-arginyl-L-prolin  -methylester-hydrochlorid    werden in   400 ml Methanol    unter Erwärmen gelöst und nach Kühlen auf Zimmertemperatur mit einer Lösung, enthaltend 0,   15 Mol    Chlorwasserstoff in Methanol versetzt. Nach Zugabe von 2, 0 g   Palladiumkohle (10e/f)    wird bei Zimmertemperatur und Normaldruck hydriert ; innert 30 Min. werden 2180 ml Wasserstoff aufgenommen. Die Lösung wird vom Kata lysator abfiltriert, im Vakuum bei höchstens   35     eingedampft und der Rückstand bei 0, 1 mm Hg über Kaliumhydroxyd getrocknet.

   Das erhaltene Öl ergibt beim Ver reiben   mit 150 mol    Essigester   35g (98C% C)    eines farblosen amorphen Pulvers des   L-Arginyl-l..-prolin-methylester-    -dihydrochlorids. Die Substanz ist papierchromatogra phisch einheitlich : Rf-Werte in den Systemen 49 : 0, 57 ;
54 : 0, 37 : 56 : 0. 42 : 87 :   0, 36 (Anfärbung    mit Sakaguchi Reagens).



   11. Carbobenzoxy-L-arginyl-L-arginyl-L-prolin-methyl ester-dihydrochlorid    30,      8g (0. 1 Mol) Carbobenzoxy-L-arginin    und 35,   8g    (0, 1 Mol)   L-Arginyl-L-prolin-methylester-dihydrochlorid    werden in 100 ml   Dimethylforriamid    suspendiert und bei Zimmertemperatur 30 Min. lang verrührt bis zur fast vollständigen Lösung. Nach Zugabe von 100 ml Chloroform wird die Lösung   auf-5'gekühlt    und mit   22,    7g (0, 11   Mol) Dicyclohexyl-carbodiimid    versetzt.

   Anschliessend werden unter Rühren bei-5  innert ca. 30 Min. weitere 300 ml Chloroform zugetropft und das Reaktionsgemisch, aus dem sich allmählich Dicyclohexylharnstoff abscheidet. wird über Nacht bei   0     gerührt. Nach Zugabe von 2 ml Eisessig und weiterem Rühren während 1 Std. bei   0     wird der ausgeschiedene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert und mit Dimethylformamid/Chloroform 1 : 4 nachgewaschen. Das Filtrat wird im Vakuum bei   40     zum Sirup eingedampft und der Rückstand in 300 ml Wasser aufgenommen. Der unlösliche Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und das Filtrat zweimal mit je 100 ml Chloroform extrahiert.

   Die wässrige Lösung wird im Vakuum vollständig eingedampft und der Rückstand im Hochvakuum bei   40     getrocknet : Zäher hydroskopischer
Schaum; 78 g (ber. 64. 8 g) ; enthält Wasser, das sich durch weitere Trocknung nicht entfernen   lässt.   



   Zur weiteren Reinigung werden 90 g Rohprodukt in 200 ml Methanol gelöst und unter Rühren mit 1 Liter Essigester ausgefällt. Das abgeschiedene ölige Produkt verfestigt sich bei mehrmaligem Verreiben mit Essigester zu einem amorphen Pulver. Nach Trocknen bei   40     und 0,1 mm Hg : 86 g, F.   90-120 .    Das umgefällte Produkt enthält ca.   3c L-Arginyl-L-prolin    und ca.   3Ec    Carbobenzoxy-L-arginin : es ist jedoch genügend rein für den weiteren Umsatz.



  12. Carbobenzoxy-L-arginyl-L-arginyl-L-prolin-hydro chlorid    32,    4 g (ca. 50 mMol) rohes Carbobenzoxy-L-arginyl  -L-arginyl-L-prolin-methylester-dihydrochlorid    werden unter Rühren in   100 ml l-n. Natronlauge gelöst    und 20 Min. bei   20     weitergerührt. Dann gibt man unter gutem Rühren 52 ml 2-n. Salzsäure zu und dampft die Reaktionslösung im Vakuum bei   30  ein.    Der zähflüssige Rückstand wird bis zur Gewichtskonstanz bei 0.1 mm Hg und 30  zum spröden, farblosen Schaum getrocknet : 34 g Gemisch, enthaltend ca. 70% Carbobenzoxy-L-arginyl-L-arginyl-L-prolin-dihydrochlorid neben Natriumchlorid und anderen Verunreinigungen.



   Zur Überführung in das   Carbobenzoxy-tripeptidmo-    nohydrochlorid werden 34 g des   Dihydrochlorids    in   150 ml Dimethylformamid aufgenommen, vom unlösli-    chen Natriumchlorid abfiltriert und unter Rühren bei Raumtemperatur mit   10, 1 g Triäthylamin    versetzt. Das ausgeschiedene Triäthylaminhydrochlorid wird abfiltriert und das klare Filtrat mit dem   Monohydrochlorid    des Carbobenzoxytripeptids angeimpft. Das   Monohydrochlo-    rid kristallisiert langsam in feinkörniger Form aus. Man lässt 20-24 Std. bei Raumtemperatur stehen. saugt dann das Kristallisat ab und wäscht mit Dimethylformamid und Essigester nach.

   Nach Trocknen im Vakuum bei   50     erhält man   19 g    (=   66'xi    d. Th.) Carbobenzoxy-L-arginyl  -L-arginyl-L-prolin-monohydrochlorid    vom   F.    248 bis   249 .    Umkristallisiert durch Lösen in   100 ml Methanol,    enthaltend 1 Äquivalent Chlorwasserstoff und Zugabe von 2   Äquivalent Triäthylamin : 16. 7 g F¯ 259-262  ;    [a]   25D = -64.8  # 1  (c = 1.    4 in Wasser) ; schwer löslich in allen organischen   Lösungsmitteln ; leicht lös-    lich in Wasser.

   Die Substanz ist einheitlich im Papierchromatogramm (200   y    einer   5%igen    Lösung in Wasser) : Rf-Werte in den Systemen 49 :   0,    68 ; 54 : 0. 64: 56 : 0, 63 ; 87 :   0. 62 : Anfärbung    mit   Sakaouchi-Relgens    13. Carbobenzoxy-L-arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl  -tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L  -prolin-tert.-butylester-sulfat
9 g   (15 mMol) Carbobenzoxy-L-arginyl-L-arginyl-L-    -prolin-hydrochlorid werden in 75 ml Dimethylformamid suspendiert und durch Zugabe von 7.5 ml einer 2-n.



  Lösung von Chlorwasserstoff in Essigester unter Rühren gelöst (Überführung ins Dihydrochlorid). Nach Kühlen auf-10  werden unter   Rühren 1. 8g (15mMol)    frisch destilliertes Pivaloylchlorid und   anschliessend 1, 5 g    (15 mMol) Triäthylamin zugegeben und nach 10 Min. wird die Lösung des gemischten Anhydrids mit 9.   5 g (12.    5   mMol) L - Valyl-N#-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-va-      lyl-L-tyrosy !-L-prolin-tert.-butylester. geleist    in 20 ml Di  methylformamid,    versetzt.

   Nach weiterem Riihren während 10 Min. bei-10  werden 100 mi Wasser zugegeben und anschliessend 75 ml 2-n.   Natriumsulfatliisung zuge-    tropft.   Das auseeschiedene kristalline Sulfat    des Octapeptidderivats wird noch 15 Min. abfiltriert. mit Wasser gewaschen und im Vakuum bei   40     getrocknet :   13.      7 g      (78%)    farbloses Pulver mit unscharfem Schmelzpunkt bei ca.   220 .    Das Rohprodukt wird in 75   ml    80% Me  thanol    gelöst und durch Zugabe von   250      ml    Wasser aus  gefällt : 11, 8 g.   



   Im Dünnschichtchromatogramm auf Silicagel sind die Rf-Werte in den Systemen 100 : 0, 30: 102: 0,42. Die Sub stanz enthält Spuren einer langsamer laufenden Verbindung, ist aber genügend rein für den weiteren Umsatz.   



  14. L-Arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-tert.-butyloxy- carbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-     -butylester-triacetat   
14 g (10 mMol) Carbobenzoxy-L-arginyl-L-arginyl-L-    -prolyl-L-valyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L -tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester-sulfat werden in 200 ml   80go    Methanol suspendiert und in Gegenwart von 2 g Palladiumkohle   (10J)    bei Zimmertemperatur und Nor  maldruck    hydriert. Nach Aufnahme der berechneten Menge Wasserstoff kommt die Hydrierung zum Stillstand. Die vom Katalysator abfiltrierte Lösung wird zur Entfernung von Sulfationen über eine Säule von 200 ml Amberlite IRA-400 (Acetatform) filtriert und mit   80'7o    Methanol nachgewaschen.

   Das Eluat wird im Vakuum eingedampft und der Rückstand zum Pulver verrieben.



  Die Ausbeute an   L-Arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-      -tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-pro-      lin-tert.-butylester-triacetat    ist nahezu quantitativ.



  Im Dünnschichtchromatogramm auf Silicagel sind die Rf-Werte in den Systemen 54 :   0,    40; 101 :   0,    60 ; auf Aluminiumoxyd : 0, 22 in System   102. Anfärbung    mit Sakaguchi-und Reindel-Hoppe-Reagens.   



   15. Carbobenzoxy-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-  -prolyl-L-valyl-glycin       40,      85 g    (61. 7 mMol)   Carbobenzoxy-Ne-tert.-butyloxy-      carbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycin-äthylester    (R.



  Schwyzer    &     W.   Rittel.    Helv. 44, 159 [1961]) werden in   800 ml Äthanol gelost,    die Lösung auf   5     gekühlt und   80    ml   1-n.    Natronlauge zugegeben. Nach 3 Stunden bei   5  wird I    Liter Wasser zugegeben, die überschüssige Natronlauge durch Zugabe von festem Kohlendioxyd neutralisiert und das Äthanol im Vakuum abdestilliert.



  Dabei scheidet sich in der verbleibenden wässrigen Phase das Natriumsalz des Tetrapeptidderivates als gallertiger Niederschlag aus. Er wird durch Erwärmen auf   45     gelöst, von etwas ungelöstem Material abfiltriert. die Lösung auf   5     gekiihlt und mit 80 ml kalter   1-n.    Salzsäure versetzt. Dabei fällt das   Carbobenzoxy-NF-tert.-butyloxy-      carbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycin    als feinpulveriger Niederschlag aus. Er wird abfiltriert und mit Eiswasser chloridfrei gewaschen dann im Vakuum über Schwefelsäure getrocknet. Die Ausbeute beträgt 34, 19g   (886Yo    d. th.); F. ca.   71-95 .    Das Produkt ist für weitere Umsetzungen genügend rein.



  16. Carbobenzoxy-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L  -prolyl-L-valyl-glycyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl  -tert.-butyloxycarbonyl-L-lysin-methylester    23,      3 g    (36. 8 mMol)   Carbobenzoxy-NE-tert.-butyloxy-      carbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-elycin    werden in 200 ml abs. Tetrahydrofuran und 5.   65 ml (1, 1    Aeq.) abs. Tri äthylamin gelost. Zu der   auf 15  gekühiten Lösung    tropft man unter Rühren 3. 63   ml      Chlorameisensäure-      äthylester (1,    03   Aeq.).

   Man riihrt    20 Minuten bei - 15  und tropft dann eine Lösung von   17, 5 g (35,    9   mMol)      N# - tert.-Butyloxycarbonyl-L-lysyl-N#-tert.-butyloxycar-      bonyl-L-lysin-methylester (dargestellt    nach Anmeldung G. Nr.   8219/60-Case 4351/1-3)    in 80 ml abs. Tetra  hydrofuran    zu. Das Reaktionsgemisch wird 24 Stunden bei Raumtemperatur belassen. Dann wird das   ausgeschie-    dene Material (Gemisch von   Triiithylaminhydrochlorid    und Hexapeptidderivat)   abgenutscht    und mit   Tetrahydro-    furan und viel Essigester gewaschen, wobei das Hexapeptidderivat wieder in Lösung geht.

   Man vereinigt die Tetrahydrofuran-und   Essigester-Filtrate,    dampft zur Trockne ein und verteilt den Rückstand zwischen Wasser und viel Essigester. Die Essigesterlösung wird unter Eiskühlung mit verdünnter Zitronensäurelösung. Wasser, Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Ein  dampfrückstand    wird 2mal mit je 500   ml    Äther und 3mal mit je 1 Liter   Tetrahydrofuran-Äther-Gemisch    (1 : 4) zerrieben. Dabei erhält man das Hexapeptidderivat als unlösliches   gallertiges Pulver :    die Ausbeute beträgt 31,   3 g.   



  Zur weiteren Reinigung wird das Rohprodukt in 300 ml Acetonitril unter Erwärmen gelöst und die Lösung in einem Wasserbad von   60     (im   Dewargefäss)    langsam erkalten gelassen. Dabei kristallisiert das Hexapeptidderivat im Verlaufe mehrerer Tage in feinen Nadeln aus, daneben scheidet sich noch etwas gallertiges Material aus. Der Niederschlag wird deshalb mehrere Male wieder auf ca. 50 - 60  erwärmt. wobei die Kristalle ungelöst bleiben und das gallertige Material in Lösung geht.



  Schliesslich wird auf diese Weise das Hexapeptidderivat vollständig kristallin erhalten ; F. 121-126 . Ausbeute 30, 12 g (76% d. Th.). Zur Analyse wird aus Methanol und Acetonitril   umkristallisiert. F. 121 - 126 ; [α]D = - 50.8     (c =   1,    89 in Methanol).



  Bei Dünnschichtchromatographie auf   Silicagelplatten    zeigt das geschützte Hexapeptidderivat nur 1 Fleck, Rf Wert =   0,    03 in Essigester. Rf =   0,    23 in Chloroform Methanol = 19 : 1 : Rf = 0, 65 in Chloroform-Methanol  = 9 :   1 ; (die Platten    werden mit Reindel-Hoppe-Reagens entwickelt).



  17.   Carbobenzoxy-N#-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-    prolyl-L-valyl-glycyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl  -tert.-butyloxycarbonyl-L-lysin-hydrazid   
20. 00g (18, 0 mMol) Carbobenzoxy-NF-tert.-butyl- oxycarbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-tert.-butyl- oxycarbonyl-L-lysyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysin-me-    thylester werden in 200   ml    Methanol gelöst und die auf   0     gekühlte Lösung   mit 10 ml Hydrazinhydrat    versetzt.



  Die klare Lösung wird 3 Tage bei   2c belassen. hierauf    auf ein kleines   Volumes    eingeengt und mit viel Wasser versetzt. Das dabei ausfallende Produkt wird griindlich zerrieben, genutscht und mit viel Eiswasser gewaschen.



  Das noch feuchte Material wird wiederum in wenig Methanol gelöst und erneut mit Wasser gefällt. Abnutschen und Trocknen im Vakuum bei 40  gibt 18. 82 g   (94%    d. Th.) rohes   Hexapeptidhydrazid.    F.   141-145 .   



     37,      0g Rohprodukt liefert    nach Umkristallisieren aus 500 ml   t-Butanol-Was, er    2 : 3   34,    30 g kristallines Hydrazid vom F.   156 - 158 . [α]25D = - 51,9  # 0.5     (c = 1, 91 in Methanol).



   Bei der Dünnschichtchromatographie auf   Silicagel-    platten   (60y    des   Hydrazids aufgetragen und    mit Reindel Hoppe-Reagens entwickelt) erhalt man folgende Rf-Werte :   0,    0   (Benzol-Essigester 1 # 1): 0,   26   (Chloroform-Me-    thanol 9   : 1)    ;   0,    73   (Dioxan-Wasser    9 :    I).   



  18.   Carbobenzoxy-N#-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-     -prolyl-L-valyl-glycyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl  -tert.-hutyloxycarbonyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L  -prolyl-L-valyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl  -L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester   
6, 26 g (5, 66 mMol) C'arhobenzoxy-NF-tert.-butyloxy- carbonyl-L-Iysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-tert.-butyloxy-    carbonyl-L-lysyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysin-hydrazid werden in 50 ml Dimethylformamid geliist, die Lösung auf - 20  gekühlt und unter Rühren werdenh 15 ml 1-n. 



  Salzsäure so zugetropft, dass die Temperatur nicht über   -15     steigt. Hierauf werden in gleicher Weise 5, 7 ml   1-n.    Natriumnitritlösung eingetropft und die Lösung bei   -7     20 Min. gerührt. Dann wird eine Lösung von 6, 12 g   (4.    53   mMol) L-Arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-      -tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-pro-    lin-tert.-butylester-triacetat und   3,    1 ml Triäthylamin in 60 ml Dimethylformamid bei-7  eingetropft und das Reaktionsgemisch 65   Std. bei-2  belassen.    Hierauf wird das Lösungsmittel bei   0,    1 mm Hg und   40  Bad-    temperatur abdestilliert und der Rückstand mit Äther mehrmals unter Zerreiben gewaschen :

     10,    7 g Rohprodukt. Das Produkt zeigt in der Dünnschichtchromatographie auf Silicagel das Tetradecapeptidderivat als Hauptfleck mit Rf   0.    35 in System   100,    0, 25 in System 53 (Anfärbung mit Sakaguchi-und Reindel-Hoppe-Reagens) und zusätzlich unverändertes Octapeptidderivat, sowie mehrere aus dem Hexapeptidanteil stammende Nebenprodukte.



   Zur Abtrennung der Cl-Ionen wird das Rohprodukt in 200 mi   0,    5-n. Essigsäure in   50'rXC    Methanol gelöst, über eines Säule von 50 ml   Merck-Ionenaustauscher    II (schwach basisch, Acetatform) filtriert und mit 200 ml des gleichen Lösungsmittels nachgewaschen. Das im Eluat enthaltene Produkt wird direkt weiter umgesetzt.



  19.   N#-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-     -glycyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-tert.-butyloxy carbonyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-va    lyl-tert.-butylo.    l-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl   -L-prolin-tert.-but ylester-tri tosylat   
Die Lösung des geschützten Tetradecapeptidesters wird mit 10 ml Eisessig versetzt und in Gegenwart von 1 g   Palladiumkohle (10'  Pd)    hydriert. Nach 17 Std. und Aufnahme von 157 ml Wasserstoff kommt die Hydrierung zum Stillstand. Hierauf wird vom Katalysator abfiltriert und das Filtrat eingedampft. Der Rückstand wird mit Petroläther gewaschen und 18 Std. bei   40     und 0. 01 mm Hg getrocknet. Man   erhält 7,    5 g Rohprodukt.



  Dieses wird in   50ml t-Butanol-Wasser I. I gelöst,    auf eine Säure von 60 g Carboxymethylcellulose (im gleichen Lösungsmittelgemisch suspendiert) gegossen und unter Verwendung eines Uvicords und eines linearen Gradienten zwischen 1 Liter   50%      t-Butanol    und 1 Liter   500    t-Butanol,   enthaltend) 0% Essigsäure,    chromatographiert.



  Nach Durchlauf von   560 ml Lösunesmittel    beginnt die Elution des Tetradecapeptidderivats. Dieses wird in mehreren Fraktionen aufgefangen. die separat eingedampft werden. Dabei werden   4. 1    g reines   NE-tert-Butyloxycar-      bonyl-L-Iysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-tert.-butyloxycar- bonyl-L-Iysyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-arginyl-L- -arginyl-L-prolyl-L-valyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-    -L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester-triacetat gewonnen. Weitere 2.   8 g unreinere Substanz    werden in 10 ml Wasser gelöst und nochmals an   16 g    Carboxymethylcellulose chromatographiert, unter Verwendung eines linearen Gradienten zwischen 500 ml Wasser und 500   ml      0%iger Essigsäure.

   Dabei    werden weitere   2,    15 g reine Substanz erhalten ; total 6,25 g (= 60% ber. auf das eingesetzte Octapeptid).



  Im Dünnschichtchromatogramm auf Silicagel sind die Rf-Werte : 0. 23 im System   100,    0. 25 im System 52.



   Das erhaltene Triacetat des Tetradecapeptidderivats wird wie folgt in das   Tritosylat    übergeführt :
6, 25 g (2, 73 mMol) werden   in 100 ml trockenem    Pyridin gelöst,   mit 1. 70 g p-Toluolsulfosäure    versetzt, die Lösung zur Trockne verdampft, der Rückstand zur Entfernung von Pyridinacetat 18 Std. bei 35  und 0. 01 mm Hg getrocknet und zur Entfernung von Pyridintosylat mit Aceton verrieben und abgenutscht : 7. 26 g farbloses Pulver vom F. 155 - 162 .



   Der geschützte   Tetradecapeptid-tert.-butylester    wird in der im Hauptpatent beschriebenen Weise mit tert. -Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl  --tert.-butyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phenyla) anyl-L-ar-      ginyl-L-tryptophyl-glycin    oder mit der entsprechenden am Histidinrest   tritylierten Verbindung    zum geschützten Te  tracosapeptid-tert.-butylester    kondensiert und aus diesem mittels Trifluoressigsäure. wie im Hauptpatent beschrieben, sämtliche Schutzgruppen abgespalten.

Claims (1)

  1. PATENTANSPRUCH Verfahren zur Herstellung eines Tetracosapeptides der Formel L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L -glutamyl-L-histidvl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-trypto- phyl-glycyl-L-lysyl L-prolyl-L-s alvl-glycyl-L-lysyl-L-ly- syl-L-arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl- -L-tyrosyl-L-prolin durch Kondensation des Decapeptidderivats :
    tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl- -L-methionyl-Y-tert.-butyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phe- nylalanyl-L-arginyl-L-triptophyl-glycin oder der entsprechenden am Histidinrest tritylierten Verbindung mit dem Tetradecapeptidderivat NF-tert.-Butyloxycarbonyl-L-ly- syl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L- -Iysyl-Ne-tert.-butyloxycárbonsl-L-lysyl-L-arginyl-L-argi- nyl-L-prolyl-L-valyl-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L- -valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester und nachfolgende Abspaltung der Schutzgruppen.
    dadurch gekennzeichnet, dass man das Tetradecapeptidderivat dadurch herstellt, dass man L-Prolin-tert.-butylester mit Carbo benzoxy-L-valyl-L-tyrosin-azid kondensiert, aus dem er haltenen Tripeptidderivat die Carbobenzoxygruppe abspaltet. den freien Tripeptidester mit Carbobenzoxy-Nf- -tert.-butyloxycarbonyl-L-lysin kondensiert, aus dem erhaltenen Tetrapeptidester die Carbobenzoxygruppe abspaltet, den freien Tetrapeptidester mit Carbobenzoxy- -L-valin kondensiert,
    aus dem erhaltenen Pentapeptidester dieCarbobenzoxygruppe abspaltet. den so erhaltenen L-Valyl-N±-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyro- syl-L-prolin-tert.-butylester mit Carbobenzoxy-L-arginyl- -L-arginyl-L-prolin zum geschützten Octapeptidester kon densiert, aus diesem die Carbobenzoxygruppe abspaltet und den erhaltenen freien Octapeptidester mit Carbo benzoxy-NE-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-proly !-L- -valyl-glycyl-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-Nt-tert.- -butyloxycarbonyl-L-lysin-azicl.
    das durch Kondensation von Carbobenzoxy-NF-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L- -prolyl-L-valyl-glycin mit NF-tert.-Butyloxycarbonyl-L- -lysyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-1 ysin-methylester zum Carbobenzoxy-Ne-tert.-butyloxvcarbonyl-L-lysyl-L-pro- lyl-L-valyl-glycyl-Ne-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-NF- -tert-butyloxycrrbonyl-L-lxsin-methxlester und Überführung des Esters über das Hxdrlzid in das Azid erhalten wird, zum Tetradecapeptidester kondensiert und schliessl : ch aus diesem die Carbobenzoxygruppe abspal- tet.
    CIBA AktiengescHschaft Anmerkung des Eidg. Amtes für geistiges Eigentum: Sollten Teile der Beschreibung mit der im Patentanspruch gegebenen Definition der Erfindung nicht in Einklang stehen, so sei daran erinnert, dass gcmäss Art. 51 des Patentgesetzes der Patentanspruch für den sachliclhen Geltungsbereich des Patentes massgcbend ist.
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