CH535259A

CH535259A - Verfahren zur Herstellung von Derivaten der 7-Aminocephalosporansäure

Info

Publication number: CH535259A
Application number: CH1773169A
Authority: CH
Inventors: Hans Dr Bickel; Rolf Dr Bosshardt; Johannes Dr Mueller
Original assignee: Ciba Geigy Ag
Priority date: 1969-11-28
Filing date: 1969-11-28
Publication date: 1973-03-31
Also published as: CH535261A; CS177055B2; ZA707786B; CS177093B2

Description

Im französischen Patent Nr. 1 463 651 sind therapeutisch wirksame Derivate der 7-Amino-cephalosporansäure der Formel
EMI1.1
beschrieben, worin R, und R2 die unten angegebene Bedeutung haben und worin R3 u.a. eine heterocyclisch verätherte Mercaptogruppe ist. Es wurde nun gefunden, dass besonders starl;

; antihiotisch wirksame Verbindungen solche der Formel I
EMI1.2
sind, worin R3 ein über ein Kohlenstoffatom an den Schwefel gebundener heterocyclischer Rest aromatischen Charakters ist, der2 Stickstoffatome und ausserdem mindestens ein weiteres Heteroatom der Gruppe Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel enthält und worin R1 und R2 für Wasserstoff oder für gegebenenfalls substituierte einwertige Kohlenwasserstoffreste oder über Kohlenstoff gebundene einwertige Heterocyclylreste oder zusammen für einen gegebenenfalls durch Heteroatome unterbrochenen undioder substituierten zweiwertigen Kohlenwasserstoffrest stehen.

Gegebenenfalls substituierte einwertige Kohlenwasserstoffreste sind vor allem Niederalkyl-, mono- oder dicyclische Aryloder Aryl-niederalkylreste, besonders monocyclische Reste wie gegebenenfalls substituiertes Phenyl Toloyl oder Benzyl: gegebenenfalls substituierte einwertige Heterocyclylreste R oder R2 sind beispielsweise mono- oder dicyclische Heterocyclylreste oder Heterocyclylniederalkylreste, vorzugsweise solche mit 5-6 Ringatomen und bis zu 3 Heteroatomen, besonders monocyclische Heterocyclylreste aromatischen Charakters mit 5-6 Ringatomen und einem Schwefel-, Sauerstoff- oder Stickstoffatom, wie Thienyl, Furyl, Pyridyl, Picolyl. Pyrryl, oder entsprechende Heterocyclyl-niederalkylreste, wie Thenyl, Furfuryl, Pyridyl(2)-methyl.

Substituenten dieser aliphatischen Kohlenwasserstoffreste oder aromatischen, araliphatischen oder heterocyclischen Ringe sind z.B. eine oder mehrere gleiche oder verschiedene funktionelle Gruppen, wie Hydroxylgruppen, Niederalkoxyoder Niederalkylmercaptogruppen, freie oder veresterte Carboxylgruppen Aminogruppen Nitrogruppen, Cyan- oder Carbonylgruppen und besonders Halogenatome oder Trifluormethylgruppen und im Falle der Ringe auch Niederalkylgruppen.

Gegebenenfalls substituierte zweiwertige Kohlenwasserstoffreste sind beispielsweise gesättigte oder ungesättigte aliphatische cycloaliphatische oder araliphatische Reste, wie die an Sauerstoff gebundenen zweiwertigen Reste von entsprechenden Aldehyden, Ketonen oder Säureamiden, besonders gegebenenfalls durch Heteroatome. wie Stickstoff,
Sauerstoff und/oder Schwefel. unterbrochene und/oder durch funktionelle Gruppen, beispielsweise durch Halogenatome.

Nitro- oder Aminogruppen substituierte zweiwertige gesättigte oder ungesättigte aliphatische oder cycloaliphatische Kohlen wasserstoffreste, wie Alkyliden-, Alkenyliden- Cycloalkyliden oder Cycloalkenylidenreste, vor allem solche mit 1-8, besonders 1-6, Kohlenstoffatomen, wie Nfethylen, und durch ein oder zwei Niederalkyl- oder Niederalkenylreste substi tuiertes Methylen, z.B.

Allyliden, Aethyliden, Isopropyliden,
Butyliden, Cyclopentyliden, Cyclohexyliden, oder durch Aryl reste substituierte zweiwertige gesättigte oder ungesättigte aliphatische Kohlenwasserstoffreste. wie Phenylalkyliden oder
Phenylalkenylidenreste, wobei die Arylreste auch substituiert sein können. z.B. durch eine oder mehrere Niederalkyl-,
Niederalkoxy-, Nitro- oder Aminogruppen undloder Halogen atome. besonders ein gegebenenfalls wie erwähnt substituierter
Benzyliden- oder Phenylallylidenrest.

Vorzugsweise stehen R, und R2 für Wasserstoff oder für eine Alkylidengruppe mit 1-6 Kohlenstoffatomen, wie oben erwähnt, oder für gegebenenfalls, insbesondere durch Halogen atome, Niedcralkyl- oder Niederalkoxygruppen oder Nitro gruppen substituiertes Benzyliden. Weiter kann Rl insbe sondere für Wasserstoff und R2 für Niederalkyl-, Phenyl-,
Phenyl-niederalkyl- oder 5-6-gliedrige Heterocyclylreste, die wie oben erwähnt substituiert sein können, stehen.

Der heterocyclische Rest R3 weist 5 bis 6, vorzugsweise 5,
Ringatome auf. kann mit einem ankondensierten Benzolring verbunden sein. Beide Ringe können durch aliphatische oder aromatische Kohlenwasserstoffreste. besonders Niederalkyl reste wie Methyl, Aethyl, Propyl Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl, tert.-Butyl Niederalkylthioreste, Cycloalkylreste wie Cyclo pentyl, Cyclohexyl. oder durch Arylreste wie Phenyl oder substituiertes Phenyl, z.B. durch eine oder mehrere Nitro gruppen oder Halogenatome oder Niederalkyl- oderNiederalk oxygruppen substituiertes Phenyl, oder durch Thienyl. besonders
Thienyl(2), substituiert sein.

Als Beispiele für den Hetero cyclylrest sind zu nennen: 11-1 ,2,3-Triazol-5-yl, 1 3,4-Triazol-
2-yl, 5-Methyl-1,3.4-triazol-2-yl. lH-1.2,4-Triazol-5-yl, 1 Phenyl-3-methyl-1H-l, 2, 4-triazol-5-yl, 4,5-Dimethyl-4H- 1, 2, 4-triazol-3-yl, 4-Phenyl-4H- 1 ,2,4-triazol-3-yl, 1 H-Tetrazol 5-yl, i 1Methyl- 1 H-tetrazol-5-yl, 1 -Aethyl- 1 H-tetrazol-5-yl,

1- n-Propyl- 1H-tetrazol-5-yl, 1-Isopropyl- 1 H-tetrazol-5-yl, 1-n Butyl- 1 H-tetrazol-5-yl, 1 -Cyclopentyl- I H- tetrazolyl-5-yl, 1 - Phenyl- 1 H- tetrazolyl-5-yl, 1 -p-Chlorphenyl- 1 H-tetrazolyl-5yl, 1,2,3-Thiadiazol-5-yl, 1,3,4-Thiadiazol-2-yl, 1,2,4 Thiadiazol-3-yl, 1 ,2,4-Thiadiazol-5-yl, 2-Methyl- 1 ,3,4-thiadia- zol-5-yl, 3-Methyl- 1 ,2,4-thiadiazol-5-yl, 2-Methylthio- 1,3,4thiadiazol-5-yl, 2-Aethyl-1,3,4- thiadiazol-5-yl, 2-n-Propyl 1 ,3,4-thiadiazol-5-yl, 2-Isopropyl- 1,3,4- thiadiazol-5-yl,

2 Phenyl- 1,3,4- thiadiazol-5-yl, 1 ,2,4-Oxadiazol-5-yl, 1,2,3 Oxadiazol-5-yl, 1 ,3,4-Oxadiazol-5-yl, 2-Methyl- 1 ,3,4-oxadiazol-5-yl, 2-Aethyl- 1 ,3,4-oxadiazol-5-yl, 2-Phenyl- 1,3,4- Oxadiazol-5-yl, 2-p-Nitrophenyl- 1,3,4- oxadiazol-5-yl. 2[Thie nyl(2)]- 1,3,4- oxadiazol-5-yl, Thiatriazol-5-yl, sowie entsprechende Reste mit 6 Ringatomen.

Die Salze der neuen Verbindungen sind Metallsalze, vor allem solche von therapeutisch anwendbaren Alkali- oder Erdalkalimetallen, wie Natrium, Kalium, Ammonium, Calcium, oder Salze mit organischen Basen, z.B. Triäthylamin, N-Aethylpiperidin, Dibenzyläthylendiamin, Procain, Diisopropylamin, Aethanolamin. Ist die Gruppe R3 basisch, so können sich innere Salze bilden.

Die neuen Verbindungen weisen eine besonders gute antibakterielle Wirkung auf. Sie sind sowohl gegenüber grampositiven wie vor allem auch gegenüber gram-negativen Bakterien wirksam, z.B. gegen Staphylococcus aureus Penicillin-resistent, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhosa und Bacterium proteus, wie sich auch im Tierversuch, z.B. an Mäusen, zeigt. Sie können daher zur Bekämpfung von Infektionen, die durch solche Mikroorganismen hervorgerufen werden, verwendet werden, ferner als Futtermittelzusätze, zur Konservierung von Nahrungsmitteln oder als Desinfektionsmittel.

Besonders wertvoll sind Verbindungen, in denen der Acylrest in 7-Stellung ein Cyanacetyl-, Methylcyanacetyl-, Phenylcyanacetyl-, p-Chlorphenylcyanacetyl- oderThienyl(2)-cyanacetylrest und R3 ein gegebenenfalls in 2-Stellung substituierter Tetrazol-5-yl- oder t,3,4-Thiadiazol-5-yl rest ist.

Die eine Alkylidengruppe aufweisenden Verbindungen können auch als Zwischenprodukte zur Reindarstellung der Verbindungen mit unsubstituiertem Cyanacetylrest verwendet werden, da die Alkylidengruppe in wässerigem Medium, insbesondere bei erhöhter Temperatur und bei alkalischem pH, hydrolytisch abgespalten werden kann.

Erfindungsgemäss werden die neuen Verbindungen erhalten, wenn man eine Verbindung der Formel II
EMI2.1
worin R4 den Acylrest der Formel Ia
EMI2.2
darstellt, in der R1 und R2 die für die Formel I angegebene Bedeutung haben, und worin R'3 für die Acetoxygruppe steht, oder ein Salz dieser Verbindung mit einem Thiol der Formel Ib
HS-R3 Ib in der R3 die für die Formel I angegebene Bedeutung hat, oder einem Metallsalz davon umsetzt und die Endstoffe in Form der freien Carbonsäuren oder deren Salze gewinnt.

Erhaltene Verbindungen der Formel 1, worin R, und R2 beide für Wasserstoff stehen, können in Verbindungen übergeführt werden, worin R1 und R2 zusammen für einen Rest der Formel
EMI2.3
stehen, in dem R'l und R'. Niederalkyl oder zusammen mit dem C-Atom Cycloalkyl bedeuten, indem man sie, zweckmässig in Gegenwart von Katalysatoren, mit einem entsprechenden Keton umsetzt. Wenn erwünscht, können die erhaltenen Verbindungen in ihre Metall-, wie Alkali- oder Erdalkalimetallsalze, oder Salze mit Ammoniak oder organischen Basen übergeführt oder aus erhaltenen Salzen die freien Carbonsäuren oder gegebenenfalls inneren Salze gebildet werden.

Die als Ausgangsstoffe verwendeten Verbindungen sind bekannt oder können nach an sich bekannten Methoden hergestellt werden. Verbindungen der Formel II, worin R'3 für die Acetoxygruppe und R4 für den Acylrest der Formel Ia steht, und ihre Herstellung sind im franz. Patent Nr. 1 463 651 beschrieben. Salze davon sind, z.B. Salze mit Alkali- oder Erd alkalimetallen oder mit Zink oder mit organischen Basen, z.B.

Triäthylamin, Diisopropylamin, Aethanolamin.

Als Metallsalze der Thiole verwendet man besonders Alkalimetallsalze wie das Natrium- oder Kaliumsalz. Die Salze können beispielsweise durch Umsetzung des Thiols mit Carbonaten, Bicarbonaten oder Hydroxiden der Alkalimetalle hergestellt werden.

Die Umsetzung mit dem Thiol wird wie im belgischen Patent 617 687 oder in der holländischen Anmeldung 6 S05 179 beschrieben in einem inerten Lösungsmittel, wie einem Alkohol, Aether, Keton, N,N-disubstituierten Amid, z.B. Dimethylformamid, Dimethylacetamid, bei der Verwendung von Salzen vorzugsweise in einem mit Wasser mischbaren inerten Lösungsmittel oder in einer Mischung von Wasser und einem solchen Lösungsmittel, z.B. in Aceton, Methanol, Aethanol. Dioxan, Tetrahydrofuran oder deren wässerigen Lösungen, vorzugsweise in wässerigem Aceton, vorgenommen. Die Reaktionstemperatur beträgt +15-70 "C, vorzugsweise 40-60 . Das pH der Lösung wird vorzugsweise zwischen 5,0 und 7,5 gehalten. Wenn nötig, wird ein Puffer, z.B.

Natriumacetat, oder, wenn die Verbindung in Form eines Alkalimetallsalzes verwendet wird, z.B. Essigsäure, zugesetzt.

Als Aldehyde, Ketone oder Nitrile sind beispielsweise solche aliphatischen Charakters zu nennen, wie Formaldehyd, Acetaldehyd, Aceton, Methyläthylketon, Aethylbutylketon, Cyclopentanon, Cyclohexanon, Cycloheptanon, Acetonitril, Trichloracetonitril oder Trifluoracetonitril, oder solche araliphatischen oder aromatischen Charakters mit höchstens 2 Ringen, die gegebenenfalls, wie oben erwähnt, substituiert sind, z.B. Benzaldehyd, p-Chlorbenzaldehyd, p-Nitroebenzaldehyd, Zimtaldehyd, Salicylaldehyd, Anisaldehyd, Vanillin, Aceto phenon, Benzophenon, p-Oxyacetophenon, Phenyiacetonitril, Benzonitril oder Zimtsäurenitril.

Als Katalysatoren für die Umsetzung mit den Carbonylverbindungen oder Nitrilen kommen vor allem Salze in Betracht, besonders Acetate von Ammoniak oder Aminen, z.B.

Ammoniumacetat, Amylaminacetat, Piperidinacetat, Triäthylammoniumacetat, Dowex-3 (freie Base und Essigsäure-Salz), ferner Verbindungen die gleichzeitig saure und basische Gruppen aufeisen. z.B. p-Aminophenol. Weiter können als Katalysatoren die Salze von Verbindungen der Formel III.

worin COR4 fiir die Carboxylgruppe steht. mit den genannten Basen dienen.

Vou.ngsweise verwendet man solche Ausgangsstoffe, die zu den erwähnten besonders wirksamen Endpr()dukten führen.

Die Erfindung betrifft auch diejenigen Ausführungsformen des Verfahrens. nach denen man von einer auf irgendeiner Stufe des Verfahrens als Z+vischellprodukt erhältlichen Verbindung ausgeht und die fehlenden Verfahrensschritte durchfiihrt. oder das Verfahren auf irgendeiner Stufe abbricht.

oder bei denen man die Ausgangsstoffe unter den Reaktionsbedingungen bildet. oder bei denen die Reaktionskomponenten gegehellenfalls in Form ihrer Salze vorliegen
Die neuen Verbindungen können als Heilmittel. z.B. in Form pharmazeutischer Präparate. Verwendung finden. Diese enthalten die Verbindungen in Nlischung mit einem für die enterale. topicale oder parenterale Applikation geeigneten pharmazeutischen organischen oder anorganischen, festen oder flüssigen Triigermaterial.

Die Erfindung wird in den folgenden Beispielen beschrie- ben. Die Temperaturen sind in Celsiusgraden angegehen.

Im Diinnchichtchromatogramm an Silicagel werden die folgenden Systeme verwendet: Ssstem52A 52A n-Butanol-Eisessig-Wasser (67:10:23)
System lt) 1 A = n-Butanol-P' ridin-Eisessig-Wasser (42:24:4:3())
System 1()2A = Essigester-Nlethyl-äthyl-keton- Ameisen sriure-Wasser (50:30:10:10).

Die Flecke werden mit Jodspray sichthar gemacht.

Beispiel 1 a) In einerLösung von 3,2 gNatriumsalz von 7-Cyanacetylamino- cephalosporansäure in 72 ml Phosphatpuffer (115 molar) von pH 6,4 werden 1.52 g 2-Methyl-1,3,4- thiadiazolin-5-thion (vgl. Acta Chimica Scand. 20, 69 (1966)) suspendiert. Dann wird durch tropfenweise Zugabe von 2n Natriumcarbonatlösung unter intensivem Rühren das pH auf 6.4 eingestellt und unter Stickstoff während 6 Stunden auf 60 C erwärmt. Das Reaktionsgemisch nimmt dabei einen pH Wert von 6,9 an. Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch mit zweimal tiOO ml Essigester.

Die organischen Phasen werden zweimal mit je 10 ml Puffer pH 6.5 zurückgewaschen und verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 1 Liter Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels4-n. Salzsäure (ca. 8.5 ml) auf pH 2,2 eingestellt. Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt.

Man trennt die Phasen, sättigt die wässerige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 1 Liter und dann mit 0,6 Liter Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 40 ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet, durch eine Säule von 90 g Silicagel ( 4.5 cm, h = 12,5 cm) filtriert und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in einem Gemisch von Aceton und Methanol gelöst und mittels Natrium-a--äthyl-hexanoat in das Natriumsalz übergeführt.

Durch Rückführung in die Säureform in der bei der Extraktion geschilderten Weise und anschliessende Filtration des in einem Gemisch aus gleichen Teilen von Chloroform und Aceton gelösten-Rückstandes durch eine Säule von Silicagel (:Höhe 1:9) erhält man 7-Cyanacetylamino-3- (2-methyl- 1,3,4thiadiazol- 5-ylthio) methylceph-3-em-4- carbonsäure. Die Verbindung weist im US-Spektrum in Wasser ein Maximum bei i 268 nm auf.

Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf52A = 0.36, RflolA = 0.54 Rflo2A = 0,68.

Zum Vergleich: für 7-Bromacetyl-cephalosporansäure ist Rf52A = 042 Rf101, = 0,54, Rf,02A = 0.77: für Ceporin ist RflolA = 0.28, Rf,,lA = 0,23.

b) In einer Lösung von 12.8 g Natriumsalz der 7 Cyanacetylamino-cephalosporansäure in 280 ml Phosphatpuffer vom pH 6,4 werden 6,0 g 2-Methyl-1,3,4-thiadiazolin -5thion suspendiert. Dann wird durch tropfenweise Zugabe von 2-n-Natriumcarhonatlösung unter intensivem Rühren das pH auf 6,6 eingestellt und unter Stickstoff während 8 Stunden auf 60 C erwärmt. Man kühlt ah und extrahiert das Gemisch nacheinander mit 2 Liter und 1.5 Liter Essigester. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 20 ml Puffer pH 6,5 zurückgewaschen und verworfen.

Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 2.5 Liter Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 4-n. Salzsäure (ca. 35 ml) auf pH 2,4 eingestellt. Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt. Man trennt die Phasen, sättigt die wässrige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 1,5 Liter und dann mit
1 Liter Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 100 ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet, durch eine Säule von 150 g Silicagel ( 4,5 cm, h = 21 cm) filtriert und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand (13,9 g) wird in ca. 50 ml Aceton gelöst, mit trockenem Essigester versetzt und im Vakuum auf ein kleines Volumen eingeengt.

Dann nimmt man nochmals in Essigester auf. engt ein und gibt einige Tropfen Hexan dazu. Man lässt eine Stunde bei - 15 stehen, nutscht das Präcipitat ab und wäscht zuerst mit Essigester + Hexan (3: 1), dann mit Hexan nach. 3.7 g des so erhaltenen Präcipitates werden aus einer acetonischen Lösung an 35 g neutralem Silicagel adsorbiert.

Das trockene Adsorbat gibt man auf eine Säule von 300 g Silicagel ( 4.5 cm, h = 45 cm) und eluiert zuerst mit einem Gemisch aus 2 Vol-Teilen Chloroform und 1 Vol. Teil Aceton und später mit Chloroform + Aceton (1:1). Die ersten 1,2 Liter Eluat werden verworfen, die nachfolgenden 1,2 Liter enthalten das Reaktionsprodukt. Die letzten 1,2 Liter werden im Vakuum zur Trockne eingedampft, der Rückstand in 40 Volumteilen Aceton gelöst, 10 Volumteile Methanol zugefügt und dann durch Zugabe von 1,3 Volumteilen einer 3-m. methanolischen Lösung von Natrium-a-äthylhexanoat in das kristalline Natriumsalz der 7-Cyanacetylamino-3- (2-methyl- 1,3,4- thiadiazol-5-ylthio)methylceph- 3-em-4-carbonsäure übergeführt.

Das Natriumsalz besitzt keinen scharfen Schmelzpunkt, sondern zersetzt sich bei ca. 215 C unter Braunfärbung. Die freie Säure schmiltzt bei 146-147 (im Vakuumröhrchen, unter Zersetzung). Im UV-Spektrum ist man = 272 nm (± = 13 500) [a]20 = -35'l 1 (c = 1.02 in Wasser).

D
Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rfs2A = 0,36; RflolA = 0,54; Rf102A = 0,68; Rf in Essigester-Eisessig (9:1) = 0,14.

Die Verbindung weist eine hohe Aktivität gegenüber grammpositiven und grammnegativen Mikroorganismen auf, sowohl bei parenteraler als auch bei peroraler Anwendung. Bei invitro-Tests (Verdünnungstest) mit Spaphylococcus aureus liegt die minimale Hemmkonzentration (MIC) bei 0,01 bis ly; mit gramnegativen Keimen wie E. coli, Klebsiella pneumoniae oder Salmonella typhosa liegt die MIC im Verdünnungstest bei 0,1 bis 0,5.

Beispiel 2
In einer Lösung von 12,8 g Natriumsalz der 7-Cyanacetylamino-cephalosporansäure in 280 ml Phosphatpuffer (10%ig) vom pH 6,7 werden 5,27 g 1-Methyl-5-mercapto-tetrazol suspendiert. Dann wird durch tropfenweise Zugabe von 2-n Natriumcarbonatlösung unter intensivem Rühren das pH auf 6,6 eingestellt und unter Stickstoff während 7 Stunden auf 60 "C erwärmt. Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch nacheinander mit 2 Liter und 1,5 Liter Essigester. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 20 ml Puffer pH 6,5 zurückgewaschen und verworfen. Die vereinigten wässrigen Phasen werden mit 2,5 Liter Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 4-n. Salzsäure (ca. 30 ml) auf pH 2,5 eingestellt. Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt.

Man trennt die Phasen, sättigt die wässerige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 1,5 Liter und dann zweimal mit 1 Liter Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 100 ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum auf ein Volumen von ca. 150 ml eingeengt. Zu dieser Lösung gibt man in kleinen Portionen unter gutem Rühren 150 ml Hexan und lässt dann mehrere Stunden in der Kälte stehen. Man nutscht ab und wäscht den Rückstand mit einem Gemisch aus Essigester und Hexan (1:1).

Das Filtrat wird verworfen. Der Rückstand (6.57 g) wird aus einer acetonischen Lösung an 50 g neutrales Silicagel adsorbiert. Das trockene Adsorbat gibt man auf eine Säule von 450 g neutralem Silicagel ( 5,75 cm, h = 41 cm) und eluiert mit einem Gemisch aus 2 Vol. Teilen Chloroform und 1 Vol.Teil Aceton. Die ersten 1,5 Liter Eluat werden verworfen, die nachfolgenden 2 Liter enthalten das Reaktionsprodukt.

Diese 2 Liter werden im Vakuum zur Trockne eingedampft, der Rückstand in 40 Volumteilen Aceton gelöst, 10 Volumteile Methanol zugefügt und dann durch Zugabe von 1.3 Volumteilen einer 3-m. methanolischen Lösung von Natrium-a-äthyl- hexanoat in das kristalline Natriumsalz der 7-Cyanacetylamino3- (1 -methyltetrazolyl-5-ylthio) methylceph-3-em- 4carbonsäure übergeführt. Im UV-Spektrum ist AmaX = 268 nm (e = 11 150): [o]20 = + 22 + 1 10(c = 0.99 in Wasser).

D
Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf52A = 0,28: Rf,o,A = 0,54; Rfl02A = 0,76: Rf in Essigester-Eisessig (9:1) = 0,19.

Beispiel 3
In einer Lösung von 12,8 g Natriumsalz der 7-Cyanacetylamino-cephalosporansäure in 280 ml Phosphatpuffer (10%in) vom pH 6,7 werden 6,0 g 3-Methyl- 1,2,4-thiadiazolin-5-thion suspendiert. Dann wird durch tropfenweise Zugabe von 2-n Natriumcarbonatlösung unter intensivem Rühren das pH auf u.u eingestellt und unter Stickstoff während 6 Stunden auf 60 C erwärmt. Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch nacheinander mit 2 Liter und 1,5 Liter Essigester. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 20 ml Puffer pH 6,5 zurückgewaschen und verworfen. Die vereinigten wässrigen Phasen werden mit 2,5 Liter Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 4-n. Salzsäure auf pH 2,5 eingestellt.

Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt. Man trennt die Phasen, sättigt die wässrige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 1,5 Liter und dann zweimal mit 1 Liter Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 100 ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum auf ein Volumen von ca. 60 ml eingeengt.

wobei ein voluminöses Präcipitat entsteht. Zu diesem Brei gibt man in kleinen Portionen unter gutem Rühren 100 ml Hexan und lässt 1 Stunde in der Kälte stehen. Man nutscht ab und wäscht den Rückstand mit einem gemisch aus Essigester und Hexan (2:3). Das Filtrat wird verworfen. Der Rückstand wird aus einer acetonischen Lösung an 50 g neutrales Silicagel adsorbiert. Das trockene Adsorbat gibt man auf eine Säule von 450 g neutralem Silicagel ( = 5,75 cm, h = 41 cm) und eluiert zuerst mit einem Gemisch aus 2 Vol.Teilen Chloroform und 1 Vol.Teil Aceton. Die ersten 1,2 Liter Eluat werden verworfen, die nachfolgenden 2,5 Liter enthalten das Reaktionsprodukt.

Diese 2,5 Liter werden im Vakuum zur Trockne eingedampft, der Rückstand in 3O Volumteilen Aceton gelöst. 10 Volumteile Methanol zugefügt und dann durch Zugabe von 1,3 Volumteilen einer 3-m. methanolischen Lösung von Natrium-u- äthylhexanoat in das kristalline Natriumsalz der 7-Cyanacetylamino-3- (3-methyl-l.2.4-thiadiazol-5-ylthio) methylceph-3em-4-carbonsäure übergeführt.

Im UV-Spektrum ist ,,rna,. = 274 nm (F = 14 750): [a]70 = -3't 1 (c = 0,99 in Wasser). D
Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf2A = 0,47: Rf(O(A = 0,62: Rf(02A = 0,84: Rf in Essigester-Eisessig (9:1) = 0,37.

Beispiel 4
In einer Lösung von 25,6 g Natriumsalz der 7-Cyanacetylamino-cephaiosporansäure in 560 ml Phosphatpuffer (1OCFig) vom pH 6,7 werden 16,0 g 2-Methylthio-l,3,4- thiadiazolin-5thion suspendiert. Dann wird durch tropfenweise Zugabe von 2-n-Natriumcarhonatlösung unter intensivem Rühren das pH auf 6.6 eingestellt und unter Stickstoff während 6 Stunden auf 60 "C erwärmt. Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch nacheinander mit 2,5 Liter und 2 Liter Essigester. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 50 ml Puffer pH 6,5 zurückgewaschen und verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 2,5 Liter Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 4-n.

Salzsäure auf pH 2,5 eingestellt.

Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt. hlan trennt die Phasen, sättigt die wiisserige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 1,5 Liter und dann dreimal mit 1 Liter Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 100 ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum auf ein Volumen von ca. 400 ml eingeengt.

wobei ein Präcipitat entsteht. Zu diesem Gemisch gibt man unter gutem Rühren 350 ml Hexan und lässt 1 Stunde in der Kälte stehen. Man nutscht das voluminöse Präcipitat ab und wäscht den Rückstand mit einem Gemisch aus Essigester und Hexan (1:1). Das Filtrat wird verworfen. Der Rückstand wird aus einer acetonischen Lösung an 50 g neutrales Silicagel adsorbiert. Das trockene Adsorbat gibt man auf eine Säule von 750 g neutralem Silicagel ( = 5,75 cm, h = 41 cm und eluiert mit einem Gemisch aus 2 Vol.Teilen Chloroform und 1 Vol.Teil Aceton. Der erste Liter Eluat wird verworfen, die nachfolgenden 2 Liter enthalten das Reaktionsprodukt.

Diese 2 Liter werden im Vakuum zur Trockne eingedampft. der Rückstand in 40 Volumteilen Aceton gelöst. 10 Volumteile Methanol zugefügt und dann durch Zugabe von 1.3 Volumteilen einer 3m. methanolischen Lösung von Natrium-o-äthylhexanoat in das kristalline Natriumsalz der 7-Cyanacetylamino-3- (2 methylthio-1,3,4- thiadiazol-5-ylthio)methylceph- 3-em-4carbonsäure übergeführt.

Im UV-Spektrum ist A,,, = 274 nm (e = 13 500): [ov]2() = -79"f. 10(c = 0,95 in Wasser). D
Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rfs2A = 0,40: RflOlA = 0 45: Rf,02A = 0,78: Rf in Essigester-Eisessig (9:1) = 0,30.

Beispiel 5
In einer Lösung von 12,8 g Natriumsalz der 7-Cyanacetylamino-cephalosporansäure in 280 ml Phosphatpuffer (10 Zig) vom pH 6,7 werden 5,27 g 2-Methyl-1,3,4- oxadiazolin-5-thion suspendiert. Dann wird durch tropfenweise Zugabe von 2-n Natriumcarbonatlösung unter intensivem Rühren das pH auf 6,6 eingestellt und unter Stickstoff während 7 Stunden auf 60 "C erwärmt. Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch nacheinander mit 2 Liter und 1,5 Liter Essigester. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 20 ml Puffer pH 6,5 zurückgewaschen und verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 2 Liter Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 4-n. Salzsäure auf pH 2,5 eingestellt.

Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt. Man trennt die Phasen, sättigt die wässerige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 1,5 Liter und dann zweimal mit
1 Liter Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 100 ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum auf ein Volumen von ca. 200 ml eingeengt.

wobei ein Präcipitat entsteht. Zu diesem Brei gibt man unter gutem Rühren 200 ml Hexan und lässt I Stunde in der Kälte stehen. Man nutscht ab und wäscht den Rückstand mit einem Gemisch aus Essigester und Hexan (1:1). Das Filtrat wird verworfen. Der Rückstand wird aus einer acetonischen Lösung an 30 g neutrales Silicagel adsorbiert. Das trockene Adsorbat gibt man auf eine Säule von 570 g neutralem Silicagel ( = 5,75 cm, h = 47 cm) und eluiert mit einem Gemisch aus 7 Vol.Teilen Chloroform und l Vol.Teil Aceton. Die ersten 2 Liter Eluat werden verworfen, die nachfolgenden 2 Liter enthalten das Reaktionsprodukt.

Diese 2 Liter werden im Vakuum zur Trockne eingedampft und dann in wenig Essigester aufgenommen. Man erhält auf diese Weise nahezu farblose, stark solvatisierte Kristalle der Sliureform. Diese werden in 40 Volumteilen Aceton gelöst, 10 Volumteile Methanol zugefügt und dann durch Zugabe von 1,3 Volumteilen einer 3-m.

methanolischen Lösung von Natrium-a-äthylhexaneat unter langsamem Einengen der Lösung in das kristalline Natriumsalz der 7-Cyanacetylamino-3- (2-methyl- 1,3,4- oxadiazel-5- ylthio > methylceph- 3-em-4-carbonsäure übergeführt.

Im UV-Spektrum ist A,a, = 268 nm (e= 10 500); [&alpha;]D20D -57"t l0(c - 0,9 in Wasser). D
Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagei ist Rfs2A = 0.27: Rflt"A = 0,38: Rf(102A = 0,65: Rf in Essigester-Eisessig (9:1) = (),18* Beispiel 6
In einer Lösung von 6,4 g Natriumsalz der 7-Cyanacetyl aminocephalosporansäure in 140 ml Phosphatpuffer (10%ig) vom pH 6,7 werden 2,7 g 1,3,4-thiadiazolin-5-thion suspendiert.Dann wird durch tropfenweise Zugabe von 2-n Natriumcarbonatlösung unter intensivem Rühren das pH auf 6,5 eingestellt und unter Stickstoff während 6 Stunden auf 60 "C erwärmt.

Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch nacheinander mit 750 ml und 500 ml Essigester. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 30 ml Puffer pH 6,5 gewaschen und verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 1 Liter Essigester überschichtet und unter intensivem Rohren mittels 4-n. Salzsäure (ca. 15 ml) auf pH 2,5 eingestellt. Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt.

Man trennt die Phasen, sättigt die wässerige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 0,5 Liter und dann noch zweimal mit je 250 ml Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 50 ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum auf ca. 100 ml Volumen eingeengt. Zu dieser Lösung gibt man unter intensivem Rühren 100 ml Hexan zu, wobei sich ein Niederschlag bildet. Man lässt eine halbe Stunde bei 05stehen, nutseht das Präcipitat ab und wäscht zuerst mit Essigester + Hexan (1:1), dann rnit Hexan nach. 3,66 g des so erhaltenen Präcipitates werden aus einer acetonischen Lösung an 30 g Silicagel adsorbiert.

Das trockene Adsorbat gibt man auf eine Säule von 400 g Silicagel ( 5,75 cm, h = 35 cm) und eluiert mit einem Gemisch aus 2 Vol.Teilen Chloroform und 1 Vol.Teil Aceton. Die ersten 1,7 Liter Eluat werden verworfen, die nachfolgenden 1,5 Liter enthalten das Reaktionsprodukt.

Sie werden im Vakuum zur Trockne eingedampft, der Rückstand wird in wenig Essigester aufgenommen und durch Einengen der Lösung in eine solvatisierte farblose Kristallform übergeführt. Diese schon nahezu reine Substanz wird in der 20 fachen Menge Methanol suspendiert, durch Zugabe von 1.3 Volumteilen einer 3-m. methanolischen Lösung von Natrium a-äthylhexanoat in Lösung gebracht und durch Einengen der Lösung im Vakuum in das kristalline Natriumsalz der 7 Cyanacetylamino-3- 1 ,3,4-thiadiazol-5-ylthio) methylceph-3em- 4-carbonsiiure übergeführt.

Im UV-Spektrum ist AmaX = 270 nm (E = 13 150); [ct-l20 = l40l 1 (c = 1,04 in Wasser). D
Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rfs2A = 0,31:Rf101A = 0,47: Rf,(,2A = 0,68: Rf in Essigester-Eisessig (9:1) = 0,21.

Beispiel 7
In einer Lösung von 12,8 g Natriumsalz der 7-Cyanacetyl aminocephalosporanssiure in 280 ml Phosphatpuffer (10e,fig) vom pH 6,7 werden 5,8 g 5-Mercapto-3-methyl-1, 2, 4-triazol suspendiert. Dann wird durch tropfenweise Zugabe von 2-n Natriumcarbonatlösung unter intensivem Riihren das pH auf 6,8 eingestellt und unter Stickstoff während S Stunden auf 60 CC erwärmt. Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch dreimal mit je 1,5 Liter Essigester. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 50 ml Puffer pH 6,5 gewaschen und verworfen.

Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 2 Liter Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 4-n. Salzsäure (ca. 45 ml) auf pH 2,5 eingestellt. Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt.

Man trennt die Phasen, sättigt die wässerige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 1.5 Liter und dann mit 1 Liter Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 100 ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum auf ca. 300 ml eingeengt. Zu dieser Lösung gibt man unter intensivem Rühren 300 ml Hexan zu, wobei sich ein Niederschlag bildet. Man lässt eine halbe Stunde bei 0 stehen, nutscht das Präcipitat ab und wäscht zuerst mit Essigester + Hexan (1:1), dann mit Hexan nach. 5,9 g des so erhaltenen Präcipitates werden aus einer acetonischen Lösung an 30 g Silicagel adsorbiert.

Das trockene Adsorbat gibt man auf eine Säule von 470 g Silicagel ( 5,75 cm. h = 42 cm) und eluiert zuerst mit einem Gemisch aus 2 Vol Teilen Chloroform und I Vol.Teil Aceton (6 Liter) und später mit einem Gemisch aus 1 Vol.Teil Chloroform und 1 Vol.Teil Aceton (3 Liter). Die ersten 6 Liter Eluat werden verworfen, die nachfolgenden 3 Liter, u-elche das Reaktionsprodukt enthalten, werden im Vakuum zur Trockne eingedampft, und der Rückstand wird mit Essigester verrieben. Nach Filtration erhält man die 7 Cyanacetylamino-3- (3-methyl-1,2,4-triazol-5-ylthio) methylceph-3-em- 4-carbonsäure als leicht gefärbtes Pulver.

Dieses wird in Methanol suspendiert, durch Zugabe von 1,3 Volumteilen einer 3-n. methanolischen Lösung von Natrium-a- äthylhexanoat in Lösung gebracht und nach Zugabe des gleichen Volumens abs. Aethanols und Einengen auf ein kleines Volumen in das feste Natriumsalz übergeführt. Die leichte Färbung der Substanz kann durch Behandlung mit Aktivkohle in inethanolischer Lösung entfernt werden. Zur Reinigung wird das Natriumsalz durch Ansäuern seiner wässerigen Lösung auf pH 2,5 und Extraktion mit Essigester wieder in die Säure übergeführt, diese wie oben mit Essigester verrieben und daraus in der oben beschriebenen Weise wieder das Natriumsalz gewonnen.

Im UV-Spektrum ist Amax = 267 nin (e = 9900); [a]20 = -1It 1(c= 1,0 in Wasser). D
Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf52A = 0.31; Rf1OlA = 0,45: Rf)o2A = 0,57; Rf in Essigester-Eisessig (9:1) = 0,1.

Beispiel 8
In einer Lösung von 8,84 g 7-(a-Phenyl-a- cyanacetylamino)- cephalosporansäure in 190 ml Phosphatpuffer (10%mg) vom pH 6,7 werden 3,23 g 1-Methyl-5-mercapto-tetrazol suspendiert. Dann wird durch Zugabe von 80 ml einer 10%igen Lösung von K2HPO4 unter intensivem Rühren das pH auf 6,5 eingestellt und unter Stickstoff während 7 Stunden auf 60 "C erwärmt. Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch nacheinander mit 1 Liter und 0,5 Liter Essigester. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 20 ml Puffer pH 6,5 zurückgewaschen und verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 1,5 Liter Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 4-n. Salzsäure (ca. 37 ml) auf pH 2,6 eingestellt. Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt.

Man trennt die Phasen, sättigt die wässerige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 1 Liter und dann mit 0,5 Liter Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 70 ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum auf ein Volumen von ca. 100 ml eingeengt. Zu dieser Lösung gibt man in kleinen Portionen unter gutem Rühren 100 ml Hexan und lässt dann mehrere Stunden in der Kälte stehen. Man nutscht ab und wäscht den Rückstand mit einem Gemisch aus Essigester und Hexan (1:1). Das Filtrat wird verworfen. Der Rückstand (8,5 g) wird aus einer acetonischen Lösung an 50 g neutrales Silicagel adsorbiert. Das trockene Adsorbat gibt man auf eine Säule von 450 g neutralem Silicagel ( 5,75 cm, h = 41 cm) und eluiert mit einem Gemisch aus 2 Vol.Teilen Chloroform und 1 Vol.Teil Aceton.

Der erste Liter Eluat wird verworfen, die nachfolgenden Fraktionen enthalten das Reaktionsprodukt. Diese werden im Vakuum zur Trockne eingedampft, der Rückstand in 40 Volumteilen Aceton gelöst, 10 Volumteile Methanol zugefügt und dann durch Zugabe von 1,3 Volumteilen einer 3-m methanolischen Lösung von Natrium-a-äthyl-hexanoat in das kristalline Natriumsalz der 7-(a:-Phenyl-a-cyanacetylamino)- 3- (1 -methyltetrazolyl-5- ylthio) methylceph-3-em- 4-carbonsäure übergeführt.

Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf52A = 0,44, Rf in Essigester-Eisessig (9:1), Laufstrecke 16 cm = 0,33.

Beispiel 9
In einer Lösung von 207 mg 7-(cu-PhenyE-- cyanacetylamino- cephalosporansäure in 4,5 ml Phosphatpuffer (10%ig) von pH 6,7 werden 86 mg 2-Methyl-1,3,4-thiadiazolin- 5-thion (vgl. Acta Chimica Scand.)59 u9 (1966)) suspendiert. Dann wird durch Zugabe von 2,7 ml einer 10%gen Lösung von K2HPO4 unter intensivem Rühren das pH auf 6,5 eingestellt und unter Stickstoff während 7 Stunden auf 60 C erwärmt.

Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch mit zweimal 40 ml Essigester. Die organischen Phasen werden mit je 3 ml Puffer pH 6,5 zurückgewaschen und verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 50 ml Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 4-n. Salzsäure auf pH 2,6 eingestellt. Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt. Man trennt die Phasen, sättigt die wässerige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 30 ml und dann mit 20 ml Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 5 ml gesättigter Kocllsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft.

Der Rückstand wird in einem Chloroform-Aceton (1: Gemisch gelöst, durch eine Säule von 20 g Silicagel Höhe = 1:9) filtert und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in wenig Aceton gelöst und mittels einer 3-m. methanolischen Lösung von Natrium-g-äthyl-hexanoat in das Natriumsalz der 7- (a-Phenyl-a-cyanacetylamino) -3- (2-methyl- 1,3,4- thiadiazol-5-ylthio) methylceph-3-em- 4-carbonsäure übergeführt.

Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf52A = 0,49, Rf in Essigester-Eisessig (9:1), Laufstrecke 15 cm = 0,25.

Zum Vergleich: für 7-Bromacetyl-cephalosporansäure ist Rfs2A = 0,41, Rf in Essigester-Eisessig (9:1), Laufstrecke 15 cm = 0,36.

Beispiel 10
In einer Lösung von 421 mg 7- (x-Thienyl) (2) -a- cyanacetylamino) -cephalosporansäure in 9 ml Phosphatpuffer (10%mg) vom pH 6,7 werden 152 mg 1-Methyl-5-mercaptotetrazol suspendiert. Dann wird durch Zugabe von 3,75 ml einer lQ%igen Lösung von K2HPO4 unter intensivem Rühren das pH auf 6,5 eingestellt und unter Stickstoff während 7 Stunden auf 60 C erwärmt. Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch nacheinander mit 50 ml und 25 ml Essigester. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 5 ml Puffer pH 6,5 zurückgewaschen und verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 80 ml Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 2-n. Salzsäure auf pH 2,6 eingestellt.

Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt. Man trennt die Phasen, sättigt die wässrige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 50 ml und dann mit 25 ml Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 1Q ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum auf ein Volumen von ca. 5 ml eingeengt. Zu dieser Lösung gibt man tropfenweise unter gutem Rühren 5 ml Hexan und lässt dann mehrere Stunden in der Kälte stehen. Man nutscht ab und wäscht den Rückstand mit einem Gemisch aus Essigester und Hexan (1:1). Das Filtrat wird verworfen. Der Rückstand wird aus einer acetonischen Lösung an 2,5 g neutrales Silicagel adsobiert.

Das trockene Adsorbat gibt man auf eine Säule von 25 g neutralem Silicagel (Izl 2,0 cm, h = 17 cm) und eluiert mit einem Gemisch aus 2 Vol.Teilen Chloroform und 1 Vol.Teil Aceton. Ein Vorlauf von 50 ml wird verworfen, die nachfolgenden Fraktionen enthalten das Reaktionsprodukt. Diese werden im Vakuum zur Trockne eingedampft, der Rückstand in 40 Volumenteilen Aceton gelöst, 10 Volumteile Methanol zugefügt und dann durch Zugabe von 1,3 Volumteilen einer 3m methanolischen Lösung von Natrium-a-äthyl-hexanoat in das Natriumsalz der 7-(a-Thienyl (2)-x-cyanacetylamino) -3 (1-methyltetrazol-5-ylthio) -methylceph-3-em -4-carbonsäure übergeführt.

Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf52A = 0,42, Rf in Essigester-Eisessig (9:1), Laufstrecke 15 cm = 0,3.

Beispiel II
In einer Lösung von 675 mg 7- (a-p-Chlorphenyl-a- cyanacetylamino) -cephalosporansäure in 15 ml Phosphatpuffer (10%mg) vom pH 6,7 werden 228 mg 1-M ethyl-5-mercapto- tetrazol suspendiert. Dann wird durch Zugabe von 5,6 ml einer 10%gen Lösung von K2HPO4 unter intensivem Rühren das pH auf 6,5 eingestellt und unter Stickstoff während 7 Stunden auf 60 "C erwärmt. Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch nacheinander mit 80 ml und 40 ml Essigester. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 5 ml Puffer pH 6,5 zurückgewaschen und verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 100 ml Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 2-n. Salzsäure auf pH 2,6 eingestellt.

Eine dabei auftretende braune Fällung wird durch Filtration entfernt. Man trennt die Phasen, sättigt die wässerige Lösung mit Kochsalz und extrahiert mit 80 ml und dann mit 40 ml Essigester nach. Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je 10 ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind, werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum auf ein Volumen von ca. 10 ml eingeengt. Zu dieser Lösung gibt man in kleinen Portionen unter gutem Rühren 10 ml Hexan und lässt dann mehrere Stunden in der Kälte stehen. Man nutscht ab und wäscht den Rückstand mit einem Gemisch aus Essigester und Hexan (1:1). Das Filtrat wird verworfen. Der Rückstand wird aus einer acetonischen Lösung an 4 g neutrales Silicagel adsorbiert.

Das trockene Adsorbat gibt man auf eine Säule von 40 g neutralem Silicagel ( 2,4 cm, h = 18.5 cm) und eluiert mit einem Gemisch aus 2 Vol.Teilen Chloroform und 1 Vol.Teil Aceton. Ein Vorlauf von 60 ml wird verworfen, die nachfolgenden Fraktionen enthalten das Reaktionsprodukt.

Diese werden im Vakuum zur Trockne eingedampft. der Rückstand in 40 Volumteilen Aceton gelöst. 10 Volumteile Methanol zugefügt und dann durch Zugabe von 1.3 Volumteilen einer 3-m methanolischen Lösung von Natrium-a-äthyl- hexanoat in das Natriumsalz der 7- (&alpha;-p-Chlorphenyl-&alpha;- cyanacetylamino) -3- (1 -methyltetrazol-5-ylthio) methylceph 3-em-4-carbonsäure übergeführt.

Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rfs2A 0.47, Rf in Essigester-Eisessig (9:1). Laufstrecke 15 cm. = 0.4.

Beispiel 12
In einer Lösung von 345 mg 7- (o-Csanpropionylamino) cephalosporansäure in S ml Phosphatpuffer (1(1 ^, ig) von pH 6.7 werden 175 mg 2-Methyl- 1,3,4-thiadiazolin-5-thion (vgl.

Acta Chimica Scand. 20. 69 (1966)) suspendiert. Dann wird durch Zugabe von ca 5 ml einer lOr/igen Lösung von K2HPO4 unter intensivem Rühren das pH auf 6,5 eingestellt und unter Stickstoff während 7 Stunden auf 60 C erwärmt.

Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch mit zweimal 60 ml Essigester. Die organischen Phasen werden mit je 5 ml Puffer pH 6.5 zurückgewaschen und verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 75 ml Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 2-n. Salzsäure auf pH 2,6 eingestellt. Eine dabei auftretende hell-braune Fällung wird durch Filtration entfernt Man trennt die Phasen. sättigt die wässerige Lösung mit Kochsalz und extrahiert zweimal mit 40 ml Essigester nach.

Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je lo ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind. werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trocke eingedampft. Der Rückstand wird in einem Chloroform-Aceton(1:1 )-Gemisch gelöst. durch eine Säule von 20 g Silicagel (O : Höhe = 1:9) filtriert und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in wenig Aceton gelöst und mittels einer 3-m. methanolischen Lösung von Natrium-a-äthyl-hexanoat in das Natriumsalz der 7- (a-Cyanopropionylamino) -3- (2-methyl-1,3.4-thiadiazol- 5ylthio)methylceph- 3-em-4-carkonsäure übergeführt.

Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist RfS2A = 0,38, Rf in Essigester-Eisessig (9:1). Laufstrecke 15 cm. = 0.15.

Beispiel 13
1,0 g 7-Cyanacetylamino-3- (1-methyl-tetrazol-5-ylthio) methylceph-3-em-4-carbonsäure und 220 mg wasserfreies Ammoniumacetat werden in einem Gemisch von 20 ml Aceton und 14 ml Dimethylformamid gelöst und 20 Stunden bei 22 C unter Lichtausschluss stehen gelassen. Man dampft im Hochvakuum zur Sirupdicke ein, nimmt den Rückstand in 30 ml 10Cc Phosphatpuffer pH 6,3 auf und extrahiert mit 100 ml und dann mit 50 ml Essigester. Die Extrakte werden zweimal mit je 20 ml Puffer rückextrahiert. Die Essigesterlösungen werden verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen überschichtet man mit 150 ml Essigester und stellt mittels 2-n. Salzsäure unter intensivem Rühren auf pH 2.4 ein.

Die Phasen werden getrennt. die wässerige mit Kochsalz gesättigt und noch zweimal mit je 60 ml Essigester nachextrahiert. Die Essigesterphasen wäscht man sukzessive zweimal mit je 10 ml gesättigter Kochsalzlösung. trocknet mit Natriumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Das Rohprodukt (1.07 g) wird durch Chromatographie an der 25-fachen Menge Silicagel gereinigt.

Durch Gemische aus Chloroform-Aceton (98:2) und (95:5) wird dabei die 7- (&alpha;-Cyano-1ss-dimethylacralamino) -3- (1 methyl-tetrazol-5-s lthio) methylceph-3-em 4-carbonsäure in reiner Form eluiert Sie kristallisiert aus einem Gemisch von Methanol und Aether.

Schmelzpunkt 1 10-unter Zersetzung. Im Diinnschicht- chromatogramm an Silicagel ist Rf52A 0,.4. Rf101 = ().55. Rf in Essigester-Eisessig (9' 5). Laufstrecke 1, cm, = 0.23.

Das wasserlösliche Njtrinm',alz lässt sich mittels Natrium-n äthylhexanoat in Ntcth,nol-Aceton-Lösung in kristallisierter reiner Form darstellen.

PATENTANSPRUCH 1
Verfahren zur Herstellung neuer Derivate der 7-Aminocephalosporansäure, der Formel I
EMI7.1
worin R1 und R, für Wasserstoff oder gegebenenfalls substituierte einwertige Kohlenu-asserstoff- oder iiber Kohlenstoff gebundene Heterocyclylreste oder zusammen für einen gegebenenfalls durch Heteroatome unterbrochenen und oder substituierten zweiwertigen Kohlenwasserstoftrest stehen und R3 ein über ein Kohlenstoffatom an den Schwefel gebundener heterocyciischer Rest aromatischen Charakters ist. der 2 Stickstoffatome und ausserdem mindestens ein weiteres Heteroatom der Gruppe Stickstoff.

Sauerstoff und Schwefel enthält. und ihrer Salze. dadurch gekennzeichnet dass man eine Verbindung der Formel II
EMI7.2

**WARNUNG** Ende DESC Feld konnte Anfang CLMS uberlappen**.

Claims

**WARNUNG** Anfang CLMS Feld konnte Ende DESC uberlappen **. nutscht ab und wäscht den Rückstand mit einem Gemisch aus Essigester und Hexan (1:1). Das Filtrat wird verworfen. Der Rückstand wird aus einer acetonischen Lösung an 4 g neutrales Silicagel adsorbiert. Das trockene Adsorbat gibt man auf eine Säule von 40 g neutralem Silicagel ( 2,4 cm, h = 18.5 cm) und eluiert mit einem Gemisch aus 2 Vol.Teilen Chloroform und 1 Vol.Teil Aceton. Ein Vorlauf von 60 ml wird verworfen, die nachfolgenden Fraktionen enthalten das Reaktionsprodukt.

Diese werden im Vakuum zur Trockne eingedampft. der Rückstand in 40 Volumteilen Aceton gelöst. 10 Volumteile Methanol zugefügt und dann durch Zugabe von 1.3 Volumteilen einer 3-m methanolischen Lösung von Natrium-a-äthyl- hexanoat in das Natriumsalz der 7- (α-p-Chlorphenyl-α- cyanacetylamino) -3- (1 -methyltetrazol-5-ylthio) methylceph 3-em-4-carbonsäure übergeführt.

Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rfs2A 0.47, Rf in Essigester-Eisessig (9:1). Laufstrecke 15 cm. = 0.4.

Beispiel 12 In einer Lösung von 345 mg 7- (o-Csanpropionylamino) cephalosporansäure in S ml Phosphatpuffer (1(1 ^, ig) von pH 6.7 werden 175 mg 2-Methyl- 1,3,4-thiadiazolin-5-thion (vgl.

Acta Chimica Scand. 20. 69 (1966)) suspendiert. Dann wird durch Zugabe von ca 5 ml einer lOr/igen Lösung von K2HPO4 unter intensivem Rühren das pH auf 6,5 eingestellt und unter Stickstoff während 7 Stunden auf 60 C erwärmt.

Man kühlt ab und extrahiert das Gemisch mit zweimal 60 ml Essigester. Die organischen Phasen werden mit je 5 ml Puffer pH 6.5 zurückgewaschen und verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 75 ml Essigester überschichtet und unter intensivem Rühren mittels 2-n. Salzsäure auf pH 2,6 eingestellt. Eine dabei auftretende hell-braune Fällung wird durch Filtration entfernt Man trennt die Phasen. sättigt die wässerige Lösung mit Kochsalz und extrahiert zweimal mit 40 ml Essigester nach.

Nachdem die organischen Phasen zweimal mit je lo ml gesättigter Kochsalzlösung durchgeschüttelt worden sind. werden sie mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trocke eingedampft. Der Rückstand wird in einem Chloroform-Aceton(1:1 )-Gemisch gelöst. durch eine Säule von 20 g Silicagel (O : Höhe = 1:9) filtriert und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in wenig Aceton gelöst und mittels einer 3-m. methanolischen Lösung von Natrium-a-äthyl-hexanoat in das Natriumsalz der 7- (a-Cyanopropionylamino) -3- (2-methyl-1,3.4-thiadiazol- 5ylthio)methylceph- 3-em-4-carkonsäure übergeführt.

Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist RfS2A = 0,38, Rf in Essigester-Eisessig (9:1). Laufstrecke 15 cm. = 0.15.

Beispiel 13 1,0 g 7-Cyanacetylamino-3- (1-methyl-tetrazol-5-ylthio) methylceph-3-em-4-carbonsäure und 220 mg wasserfreies Ammoniumacetat werden in einem Gemisch von 20 ml Aceton und 14 ml Dimethylformamid gelöst und 20 Stunden bei 22 C unter Lichtausschluss stehen gelassen. Man dampft im Hochvakuum zur Sirupdicke ein, nimmt den Rückstand in 30 ml 10Cc Phosphatpuffer pH 6,3 auf und extrahiert mit 100 ml und dann mit 50 ml Essigester. Die Extrakte werden zweimal mit je 20 ml Puffer rückextrahiert. Die Essigesterlösungen werden verworfen. Die vereinigten wässerigen Phasen überschichtet man mit 150 ml Essigester und stellt mittels 2-n. Salzsäure unter intensivem Rühren auf pH 2.4 ein.

Die Phasen werden getrennt. die wässerige mit Kochsalz gesättigt und noch zweimal mit je 60 ml Essigester nachextrahiert. Die Essigesterphasen wäscht man sukzessive zweimal mit je 10 ml gesättigter Kochsalzlösung. trocknet mit Natriumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Das Rohprodukt (1.07 g) wird durch Chromatographie an der 25-fachen Menge Silicagel gereinigt.

Durch Gemische aus Chloroform-Aceton (98:2) und (95:5) wird dabei die 7- (α-Cyano-1ss-dimethylacralamino) -3- (1 methyl-tetrazol-5-s lthio) methylceph-3-em 4-carbonsäure in reiner Form eluiert Sie kristallisiert aus einem Gemisch von Methanol und Aether.

Schmelzpunkt 1 10-unter Zersetzung. Im Diinnschicht- chromatogramm an Silicagel ist Rf52A 0,.4. Rf101 = ().55. Rf in Essigester-Eisessig (9' 5). Laufstrecke 1, cm, = 0.23.

Das wasserlösliche Njtrinm',alz lässt sich mittels Natrium-n äthylhexanoat in Ntcth,nol-Aceton-Lösung in kristallisierter reiner Form darstellen.

PATENTANSPRUCH 1 Verfahren zur Herstellung neuer Derivate der 7-Aminocephalosporansäure, der Formel I EMI7.1 worin R1 und R, für Wasserstoff oder gegebenenfalls substituierte einwertige Kohlenu-asserstoff- oder iiber Kohlenstoff gebundene Heterocyclylreste oder zusammen für einen gegebenenfalls durch Heteroatome unterbrochenen und oder substituierten zweiwertigen Kohlenwasserstoftrest stehen und R3 ein über ein Kohlenstoffatom an den Schwefel gebundener heterocyciischer Rest aromatischen Charakters ist. der 2 Stickstoffatome und ausserdem mindestens ein weiteres Heteroatom der Gruppe Stickstoff.

Sauerstoff und Schwefel enthält. und ihrer Salze. dadurch gekennzeichnet dass man eine Verbindung der Formel II EMI7.2

worin R4 den Acylrest der Formel Ia EMI8.1 darstellt, in der R1 und R2 die für die Formel I angegebene Bedeutung haben, und worin R3'für die Acetoxygruppe steht, oder ein Salz dieser Verbindung mit einem Thiol der Formel Ib HS-R3 Ib in der R3 die für die Formel I angegebene Bedeutung hat, oder einem Metallsalz davon umsetzt und dass man die Endstoffe in Form der freien Carbonsäuren oder deren Salze gewinnt.

UNTERANSPRÜCH E 1. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet. dass die Umsetzung mit dem Thiol in einem inerten, mit Wasser mischbaren Lösungsmittel oder in einer Mischung von Wasser und einem solchen Lösungsmittel vorgenommen wird.

2. Verfahren nach Unteranspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Umsetzung bei Temperaturen von + 15 bis 70 C.

durchgeführt wird.

3. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin Rl und R2 für Wasserstoff stehen.

4. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I, oder ihre Salze herstellt, worin R1 für Wasserstoff und R2 für einen Kohlenwasserstoffrest oder für einen über Kohlenstoff gebundenen Heterocyclylrest steht.

5. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin R1 für Wasserstoff und R2 für einen Niederalkylrest steht.

6. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin Rl für Wasserstoff und R2 für einen gegebenenfalls substituierten Phenylrest steht.

7. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin R1 für Wasserstoff und R2 für einen Thienylrest steht.

8. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin R1 und R2 zusammen für einen Rest der Formel EMI8.2 stehen, in dem R1, und R2' Niederalkyl oder zusammen mit dem C-Atom Cycloalkyl bedeuten.

9. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin R3 ein gegebenenfalls substituierter über ein Kohlenstoffatom gebundener Heterocyclylrest aromatischen Charakters mit 5 Ringatomen ist, der 2 Stickstoffatome und ausserdem mindestens ein weiteres Heteroatom der Gruppe Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel enthält.

10. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin R3 ein gegebenenfalls substituierter über ein Kohlenstoffatom gebundener Triazolylrest ist.

11. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin R3 ein gegebenenfalls substituierter über ein Kohlenstoffatom gebundener Tetrazolylrest ist.

12. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin R3 ein gegebenenfalls substituierter über ein Kohlenstoffatom gebundener Thiadiazolylrest ist.

13. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin R3 ein gegebenenfalls substituierter über ein Kohlenstoffatom gebundener Oxadiazolylrest ist.

14. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin R3 ein gegebenenfalls substituierter über ein Kohlenstoffatom gehundener 1 ,3,4-Thiadiazolylrest ist.

15. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass R3 ein durch Niederalkyl substituierter über ein Kohlenstoffatom gebundener Triazolyl- Tetrazolyl-, Thiadiazolyl- oder Oxadiazolylrest ist.

16. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8. dadurch gekennzeichnet, dass R3 ein durch Phenyl oder substituiertes Phenyl substituierter über ein Kohlenstoffatom gebundener Triazolyl-, Tetrazolyl-, Thiadiazolyl- oder Oxadiazolylrest ist.

17. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass R3 ein durch Cyclopentyl oder Cyclohexyl substituierter über ein Kohlenstoffatom gebundener Triazolyl-, Tetrazolyl-, Thiadiazolyl- oder Oxadiazolylrest ist.

18. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin R3 für 2-Methyl-tetrazol-5-yl steht.

19. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I oder ihre Salze herstellt, worin R3 für 2-Methyl- 1 ,3,4-thiadiazol-5-yl steht.

20. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-8. dadurch gekennzeichnet, dass man 7 Cyanacetylamino- 3-desacetoxy-3- (2-methyl- 1 .3,4-thiadiazol- 5-ylthio) -cephalosporansäure oder ihre Salze herstellt.

21. Verfahren nach Patentanspruch I oder einem der Unteransprüche 1-1, dadurch gekennzeichnet, dass man 7 Cyanacetylamino-3-desacetoxy-3- (2-methyl-tetrazol-5-ylthio)- cephalosporansäure oder ihre Salze herstellt.

PATENTANSPRUCH II Verwendung der nach dem Verfahren von Patentanspruch I erhaltenen Verbindungen der Formel I, worin R, und R2 für Wasserstoff stehen und R3 die angegebene Bedeutung hat, zur Herstellung von Verbindungen der Formel 1, worin R, und R2 zusammen für einen Rest der Formel EMI8.3 stehen, in dem R1' und R2,Niederalkyl oder zusammen mit dem C-Atom, Cycloalkyl bedeuten. dadurch gekennzeichnet, dass man die genannten Verbindungen der Formel 1, worin R1 und R2 für Wasserstoff' stehen. mit einem entsprechenden Keton umsetzt.

UNTERANSPRUCH 22. Verwendung nach Patentanspruch II, dadurch gekennzeichnet. dass die Umsetzung in Gegenwart eines Katalysators vorgenommen wird.