CH617437A5

CH617437A5 -

Info

Publication number: CH617437A5
Application number: CH1659374A
Authority: CH
Inventors: Shinji Terao; Mitsuru Shiraishi; Toshio Miyawaki; Isao Minamida; Masayoshi Yamaoka; Mitsuo Numata
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1973-12-20
Filing date: 1974-12-13
Publication date: 1980-05-30
Also published as: SE7415839L; GB1463999A; NL7416608A; AU7642174A; JPS5093990A; FR2255075B1; FR2255075A1; US4011214A; NO744526L; DE2458695A1; JPS5715597B2; CA1031324A; DK666574A

Description

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von 3-(Morpholinoalkoxyiminomethyl)-cephemverbin-dungen der Formel

R*NH-

Y

N

O

\

-CHaOH

(in)

10

COOH

erzeut werden kann, wobei R1 ebenfalls die bereits angegebene Bedeutung hat. Dieses Verfahren ist in der BE-PS 808 341 sowie in der DT-OS 2 360 620 beschrieben.

Es wurde nun gefunden, dass Cephalosporin-lactolderi-15 vate (II) mit 0-(Morpholinoalkyl)-hydroxylaminen der Formel

HaN—O—R8—N

O

\ /

(IV)

RXNH

CH=N-0-R2-N

/ \

O

(I)

COOH

in der R1 eine Acylgruppe und R2 eine Alkylengruppe ist, die mit einer niederen Alkoxygruppe substituiert sein kann.

Vor kurzem wurde von der Anmelderin ein gekürztes Verfahren aufgezeigt, nach dem ein Cephalosporin-lactol-derivat der Formel

%

R*NH (

N

OH

O

(ID

reagieren, wobei R2 die bereits angegebene Bedeutung hat, und 3-(Morpholinoalkoxyiminomethyl)-cephemverbindungen der Formel I erzeugt werden, die stabil sind und eine starke inhibierende Wirkung mit breitem Wirkungsspektrum gegenüber grampositiven und gramnegativen Bakterien und insbesondere gegen Escherichia coli und Klebsiella pneumoniae haben, wobei die Wirkung stärker ist als bei irgendeinem bekannten Cephalosporin.

Die Vorteile der Erfindung, die die genannten Verbindungen, ihre Herstellung und diese enthaltende pharmazeuti-30 sehe Mittel umfasst, werden aus der nachfolgenden Beschreibung noch näher hervorgehen.

Bei dem Ausgangsmaterial (II) ist die Acylgruppe, R1, vorzugsweise eine von den Acylgruppen, wie sie in den entsprechenden Körpern von Penicillinen und Cephalosporin-derivaten gefunden werden und insbesondere eine substituierte Oxyacetylgruppe wie Phenoxyacetyl, Phenoxy-propionyl oder dergleichen, sie kann jedoch auch irgendeine der folgenden sein: Acylgruppen aliphatischer Carbonsäuren wie Formyl, Acetyl, Propionyl, Hexanoyl, Butanoyl, Hep-40 tanoyl, Octanoyl, Cyclopentanoyl usw.; Acylgruppen von mono-substituierten aliphatischen Carbonsäuren wie Phenyl-acetyl, Cyclohexylacetyl, 1-Cyclohexenylacetyl, 1,4-Cyclo-hexadienylacetyl, 2-TMenylacetyl, Tetrazolylthioacetyl, Tetrazolylacetyl, Cyanoacetyl, Phenoxyacetyl, Acetoacetyl, 45 4-Methylthio-3-oxobutyryl, 4-Carbamoylmethylthio-3-oxo-butyryl, a-Phenoxypropionyl, a-Phenoxybutyroyl, a-(p-Nitro-phenoxy)-acetyl, a,(p-Aminophenoxy)-propionyl, p-Nitro-phenylacetyl, Phenylpropionyl, Butylthioacetyl, a-(p-Chlor-phenoxy)-acetyl, a-(2-Pyridyloxy)-acetyI, a-(3-Pyridyloxy)-50 acetyl, a-(4-Pyridyloxy)-acetyl, Phenylthioacetyl, Chlor-phenylthioacetyl, Benzylthioacetyl, Phenethylthioacetyl, Allylthioacetyl, 4-Pyridylthioacetyl, Benzylthiopropionyl, (1-Imino-2-phenyläthyl)-aminoacetyl, 2-(3-Sydnon)-acetyl, 1-Pyrazolylacetyl, 4-Nitro-l-pyrazolylacetyl, 4-Chlor-l-pyrazol-55 ylacetyl, 3,5-DimethyI-l-pyrazolylacetyl, 2-Furylacetyl, 6-(2'-Oxo-3'-methylpyridazinyl)-thioacetyl usw.; Acylgruppen von di-substituierten aliphatischen Carbonsäuren wie a-Carboxy-phenylacetyl, a-Brompropionyl, a-Aminophenylacetyl, Man-delyl, a-Sulfophenylacetyl, a-SuIfo-(p-aminophenyl)-acetyI, 60 1-Cyclohexenylglycyl, Thienylglycyl, Furylglycyl, Cyclo-hexadienylglycyl, Phenylmethylglycyl, Carbamoylphenylace-tyl, 5-Amino-5-carboxyvaleryl, 5-Carboxy-5-(2',6'-dialkyl-3',5'-dicarboaIkoxy-l',4'-dihydropyrido-l'-yl)-valeryl, 5-Phenylacetylamino-5-carboxyvaleryl, 5-Benzoylamino-5-65 carboxyvaleryl, 5-(p-ToIuolsulfonyl)-amino-5-carboxyvaleryl, 5-(Benzyloxycarbonyl)-amino-5-carboxyvaleryl, «-(/j-Methyl-sulfonyläthoxycarbonyl)-aminophenylacetyl usw.; Acryloyl; aromatische Acylgruppen wie Benzoyl, 2,6-Dimethoxy-

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benzoyl, 2-Äthoxynaphthoyl, 2-Phenylbenzoyl, p-Nitro-benzoyl usw.; heterocyclische Acylgruppen wie 5-Methyl~3-phenyl-4-isooxazolylcarbonyl, 3-o-Chlorphenyl-5-methyl-4-isooxazolylcarbonyl, 3-(2,6-Dichlorphenyl)-5-methyl-4-iso-oxazolylcarbonyl usw., um einige Beispiele zu nennen. Wenn solche Acylgruppen Aminoreste besitzen, können sie durch Gruppen geschützt werden Wie Alkyloxycarbonyl (z. B. Iso-bornyloxycarbonyl usw.), /3-Alkylsulfonyläthoxycarbonyl (z. B. /3-Methylsulfonyläthoxycarbonyl usw.), Arylcarbonyl, das mit tertiären niederen Alkylgruppen substituiert sein kann (z. B. Benzoyl, Phthalyl, p-t.-Butylbenzoyl usw.), Aral-kylcarbonyl (z. B. Phenylacetyl usw.), Arylthiocarbonyl (z. B. Phenylthiocarbonyl usw.), Aralkyloxycarbonyl (z. B. Benz-yloxycarbonyl usw.), Arylsulfonyl, das mit niederen Alkyl-gruppen substituiert sein kann (z. B. p-Toluolsulfonyl, p-t.-Butylbenzolsulfonyl usw.) oder dergleichen.

Erwünschtere Acylgruppen sind Formyl, Benzoyl oder

Gruppen der Formel

R3 >

CHCO-

R4

in der R3 Wasserstoff, Phenyl, Phenoxy, Thienyl, Tetrazolyl, Furyl, Pyrazolyl, Pyridyloxy, Cyclohexenyl, Acetyl, Cyano, io 3-Amino-3-carboxypropyl oder 3-geschütztes Amino-3-carboxypropyl bedeutet und R4 für Wasserstoff oder eine Hydroxyl-, Sulfo-, Amino-, Carboxyl- oder niedere Alkyl-gruppe steht.

Jedes dieser Cephalosporin-lactolderivate (II) existiert im 15 Gleichgewicht mit einer Aldehydverbindung (VI) die ein Tautomeres der ersteren ist, wie durch die nachfolgende Gleichung gezeigt ist.

R*NH

(ID

> R*NH

CHO

COOH (VI)

Dieses Gleichgewicht wird durch den pH-Wert der Lösung, die Polarität des Lösungsmittels und andere Faktoren in einem bedeutenden Ausmasse beeinflusst.

Die Hydroxylgruppe des Cephalosporin-lactolderivats (II) kann durch eine Alkoxygruppe wie z. B. Methoxy, Äthoxy oder Propoxy oder eine Acyloxygruppe wie Acetoxy ersetzt sein.

Ebenfalls brauchbar sind verschiedene Ester der 4-Carboxylfunktion der Aldehydverbindung (VI) (japanische Patentpublikation 68 594/1973). Als solche Ester können gebräuchlicherweise leicht spaltbare Ester oder pharmazeutisch akzeptable Ester verwendet werden, wie sie nachfolgend beschrieben sind.

Beide Fälle sind als von der Bezeichnung Cephalosporin-lactolderivate (II), die für die Umsetzung gemäss der Erfindung brauchbar sind, mit umfasst zu betrachten.

Bei der anderen Ausgangsverbindung (IV) kann die mit R2 bezeichnete Alkylengruppe irgendeine von solchen Alky-lengruppen wie Methylen, Äthylen, Trimethylen, Tetramethylen, 1-Methyläthylen, 2-Methyläthylen, 1-Methyl-propylen, 2-Methylpropylen, 3-Methylpropylen, 1,1-Di-methyläthylen usw. sein. Diese Alkylengruppen können Sub-stituenten wie Alkoxygruppen, z. B. Methoxy, Äthoxy usw. aufweisen. Jedes dieser 0-(Morpholinoalkyl)-hydroxylamine wird der geplanten Reaktion entweder in freier Form oder in Form von Salzen mit Säuren wie Salzsäure, Schwefelsäure, Essigsäure usw., unterworfen.

Die Umsetzimg des Cephalosporin-lactolderivats (II) mit 0-(Morpholinoalkyl)-hydroxylamin (IV) wird üblicherweise dadurch erreicht, dass man dieselben in äquimolaren Mengen in einem Lösungsmittel mischt, obgleich ihr Verhältnis innerhalb vernünftiger Grenzen variiert werden kann.

Obgleich das Lösungsmittel irgendein Lösungsmittel sein kann, das die Reaktion nicht nachteilig beeinflusst, ist es von Vorteil, vor allen anderen Dimethylsulfoxid, Dimethyl-formamid, Tetrahydrofuran, Dioxan, Äthylacetat, Aceto-nitril und Sulfolan sowie geeignete Mischungen von solchen Lösungsmitteln usw. zu verwenden. In den meisten Fällen ist die Umsetzung innerhalb von 1 bis 8 Stunden beendet. Das 0-(Morpholinoalkyl)-hydroxylamin kann als das entspre30

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chende Salz einer starken Säure wie z. B. Hydrochlorid oder Sulfat verwendet werden. In einem solchen Falle wird die Reaktion zu Zeiten glatter ablaufen, wenn ein Alkalimetallsalz einer schwachen Säure wie Natriumacetat, Kalium-acetat oder Natriumbicarbonat zum Reaktionssystem hinzugegeben wird.

Die zur Isolierung und Reinigung von so erhaltenen 3-(Morpholinoalkoxyiminomethyl)-cephemverbindungen (I) anwendbaren Verfahrensweisen variieren in feinen Einzelheiten mit der besonderen Kombination von R1 und R2, jedoch kann die Verbindung (I) üblicherweise nach bekannten Verfahren abgetrennt und gereinigt werden wie durch Lösungsmittelextraktion, Chromatographie unter Anwendung von Ionenaustauscherharzen, Polystyrolharz, Silicagel, Sephadex-harz usw. als Adsorptionsmittel oder Molekularsiebe und/ oder durch Umkristallisieren.

Die so erhaltene 3-(Morpholinoalkoxyiminomethyl)-ce-phemverbindung (I) kann mit freier 4-Säuregruppe zur Anwendung kommen oder alternativ in Form von Salzen mit einem nicht-toxischen Kation wie z. B. Natrium, Kalium oder dergleichen, einer basischen Aminosäure wie z. B. Arginin, Ornithin, Lysin, Histidin oder dergleichen oder einem Polyhydroxyalkylamin, z. B. N-Methylglucamin, Di-äthanolamin, Triäthanolamin, Tris-hydroxymethylamino-methan oder dergleichen.

Das Cephalosporin-lactolderivat (II), das für die obige Umsetzung verwendet wird, kann leicht durch Oxidation eines 3-Hydroxymethylcephalosporinderivats der Formel

R1NH

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65 (wobei R1 die bereits angegebene Bedeutung hat) oder eines Alkalimetallsalzes oder Esters desselben mit einer 6-wer-tigen Chromverbindung erhalten werden.

Die 3-(Morpholinoalkoxyiminomethyl)-cephemverbindun-

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gen (1) gemäss der Erfindung können auch durch Acylierung eines Aminocephalosporansäurederivats (V) erhalten werden.

Das so für die Acylierungsreaktion zu verwendende Aminocephalosporansäurederivat(V) kann durch Abtrennung — in an sich bekannter Weise — der 7-Acylgruppe von dem entsprechenden Acylderivat wie 7/3-(D-5-(p-t.-Butylbenzoyl)-amino-5-carboxy-valeramido)-3-morpholinoalkyloxyimino-methyl-3-cephem-4-carbonsäure oder 7/S-(D-5-(p-t.-Butyl-benzolsulfonyl)-amino-5-carboxyvaleramido)-3-morpholino-alkyloxyiminomethyl-3-cephem-4-carbonsäure erhalten werden und wird der geplanten Reaktion in freier Form oder als Salz oder leicht spaltbarer Ester unterworfen. Als solches Salz können die entsprechenden Salze von Alkalioder Erdalkalimetallen oder von organischen Aminen wie von Natrium, Kalium, Magnesium, Aluminium, Trimethyl-amin, Triäthylamin, Tributylamin usw. angewandt werden. Als leicht spaltbare Ester können die Reaktionsrprodukte von Aminocephalosporansäurederivaten (V) mit Silylierungsmit-teln wie Trialkylhalogenosilanen, Triaralkylhalogenosila-nen, Trialkoxyhalogenosilanen, Hexaalkyldisilazan, N,Q-Bis-(trimethylsilyl)-acetamid usw.; Silenierungsmitteln wie Di-alkyldihalogenosilanen, Diaralkyldihalogenosilanen usw.; zinnhaltigen Veresterungsmitteln wie Zinnoxid(trialkyl-zinn), N-Trialkylstannyldialkylaminen, Trialkylstannylalkoxi-den usw.; und die Reaktionsprodukte von Aminocephalo-sporansäurederivaten (V) mit Alkylsulfonylalkylhalogeniden, Alkylthioalkylhalogeniden usw. verwendet werden.

Für die Herbeiführung der Acylierungsreaktion lässt man eine in das Aminocephalosporansäurederivat (V) einzuführende Carbonsäure oder ein reaktives Derivat derselben auf das Aminocephalosporansäurederivat (V) einwirken. Als solche reaktiven Derivate sind unter anderem die entsprechenden Säurehalogenide, z. B. Säurechlorid, Säure-bromid usw., die Säureanhydride mit Alkylcarbonaten, Alkyl-phosphaten, anderen Carbonsäuren usw., aktivierte Ester der Carbonsäure mit Pentachlorphenol, p-Nitrophenol, N-Hydroxysuccinimid usw. und die reaktiven Derivate der Carbonsäure mit Kondensationsmitteln wie Carbodiimiden, N,N'-Carbonyldiimidazol, Acetylen, Äthern usw. zu nennen. Unter den gebräuchlicheren Arten der besagten einzuführenden Carbonsäure befinden sich solche, die Acylgruppen der oben für R1 genannten Art besitzen.

Die Acylierungsreaktion wird üblicherweise in einem Lösungsmittel durchgeführt. Unter den für diesen Zweck geeigneten Lösungsmitteln sind solche herkömmlichen organischen Lösungsmittel wie Aceton, Dioxan, Chloroform, Methylenchlorid, Tetrahydrofuran, Äther, Äthylacetat usw. zu nennen und abhängig von der speziell benutzten Ausgangsverbindung kann die Reaktion in Wasser oder einem wässrigen Lösungsmittel durchgeführt werden. Obwohl keine besondere Beschränkung hinsichtlich der Reaktionstemperatur besteht, wird die Reaktion in vielen Fällen unter Kühlung oder bei Zimmertemperatur durchgeführt. In Verbindung mit dieser Umsetzung kann die beabsichtigte Verbindung (I) als das innere Salz oder als ein Salz erzeugt werden, indem man die Anwesenheit einer Base im Reaktionssystem zulässt.

Eine solche Base bzw. basische Verbindung kann beispielsweise ein Alkalibicarbonat, Alkalicarbonat, Alkalihydroxid oder ein organisches Amin wie z. B. Triäthylamin, Pyridin oder N,N-Dimethylanilin sein. Wenn das Ausgangsmaterial ein Ester des Aminocephalosporansäurederivats (V) ist, erfolgt die Hydrolyse, wenn nötig, in an sich bekannter Weise und das Reaktionsprodukt kann nach herkömmlichen Verfahren wie Lösungsmittelextraktion, Chromatographie oder dergleichen, gewonnen und nach Bedarf durch Umkristallisieren oder andere Verfahren gereinigt werden.

Die in der vorstehenden Weise gemäss der Erfindung erhaltenen 3-(Morpholinoalkoxyiminomethyl)-cephemverbin-

dungen (I) können mit freier Carboxylgruppe in 4-Stellung verwendet werden, jedoch auch nach vorangehender Umwandlung dieser Carboxylfunktion in ein Salz, beispielsweise mit einem nicht-toxischen Kation wie z. B. Natrium, Kalium oder dergleichen, einer basischen Aminosäure wie z. B. Ar-ginin, Ornithin, Lysin, Histidin oder dergleichen oder einem Polyhydroxyalkylamin, z. B. N-Methylglucamin, Diäthanol-amin, Triäthanolamin, Tris-hydroxymethylaminomethan oder dergleichen zur Anwendung kommen. Auch kann die 4-Carboxylfunktion der Verbindung zur Erzeugung von biologisch aktiven Ester-Derivaten verestert werden, die erhöhte Blutpegel und eine anhaltendere Wirkung ergeben.

Für diesen Zweck brauchbare Esterreste sind a-Alkoxy-(a-substituierte)-methylgruppen wie Alkoxymethyl, a-Alkoxy-äthyl oder dergleichen, beispielsweise Methoxymethyl, Äthoxy-methyl, Isopropoxymethyl, a-Methoxyäthyl, a-Äthoxyäthyl usw.; Alkylthiomethylgruppen wie Methylthiomethyl, Äthyl-thiomethyl, Isopropylthiomethyl usw.; und Acyloxymethyl-gruppen oder a-Acyloxy-(a-substituierte)-methylgruppen wie Pivaloyloxymethyl, a-Acetoxybutyl usw., um nur einige zu nennen.

Die so erhaltenen 3-(Morpholinoalkoxyiminomethyl)-ce-phemverbindungen (I) sind Cephalosporinderivate, die nicht nur neu sind, sondern auch eine starke antimikrobielle Wirksamkeit gegenüber gramnegativen und grampositiven Bakterien besitzen und somit als Arzneimittel für die Therapie von Infektionskrankheiten bei Tieren einschliesslich des Menschen wertvoll sind. Wie bekannte Cephalosporinpro-dukte können die konzipierten Verbindungen (I) gemäss der Erfindung beispielsweise in Form von Pulvern oder Lösungen oder Suspensionen verabreicht werden, die nach Routineverfahren mit physiologisch akzeptablen Trägern oder Exzi-pienten erhalten werden können. Beispielsweise werden die konzipierten Verbindungen (I) gemäss der Erfindung, wie z. B. 7/H2'-Thienylacetamido)-3-(2"-morpholinoäthoxy)-iminomethyl-3-cephem-4-carbonsäure, 7/?-(D-Mandelyl-amido)-3-(2'-morpholinoäthoxy)-iminomethyl-3-cephem-4-carbonsäure und 7/?-(a-Sulfophenylacetamido)-3-(2'-mor-pholinoäthoxy)-immomethyl-3-cephem-4-carbonsäure-na-triumsalz für die Behandlung von Infektionskrankheiten beim Menschen jeweüs erwünschtermassen parenteral (nicht-oral) mit einer täglichen Dosis im Bereich von etwa 5 bis 20 mg/kg Körpergewicht in 3 bis 4 Teildosen pro Tag verabreicht.

Nachfolgend wird die Erfindung anhand von Beispielen erläutert. Die in diesen angegebenen Kernmagnetresonanzspektren (NMR abgekürzt) wurden mit einem «Varian T-60»- oder «HR-100»-Spektrometer erhalten. Die «chemical shifts» bzw. chemischen Verschiebungen sind in ppm relativ zum inneren Standard — Tetramethylsilan (5) — angegeben. Wenn nichts anderes angegeben ist, wurde deuteriertes Chloroform als Lösungsmittel verwendet. Das Symbol s bedeutet ein Singulett, d ein Dublett, t ein Triplett, q ein Quartett, ABq ein Quartett vom AB-Typ, m ein Multiplett und J eine Kopplungskonstante in Hertz.

Ferner bedeutet in der Beschreibung «DMSO» Dimethyl-sulfoxid, «nm» Nanometer, «IR» die Absorptionsbanden im Infrarotspektrum und «UV» die Absorptionen im UV-Absorptionsspektrum. «Amberlite» sind Harze von Röhm & Haas Co., USA. Alle Temperaturen sind unkorrigiert und die Prozentsätze jeweils auf das Gewicht bezogen.

Beispiel 1

(1) N-(p-(t.-Butyl)-benzoyl)-cephalosporin C Zu Mononatrium-cephalosporin C (47,4 g) wurden 500 ml Wasser und 150 ml Aceton hinzugegeben und die Mischung bei 3 bis 4° C gehalten.

Unter Rühren wurde der pH-Wert der Mischung mit s

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Natriumcarbonatpulver auf 9 eingestellt und dann p-(t.-Butyl)-benzoylchlorid (21,5 g) tropfenweise über eine Zeitdauer von 1,5 Stunden hinzugegeben. Während der tropfenweisen Zugabe wurde der pH-Wert mit Natriumcarbonatpulver bei 9,0 gehalten. Die Mischung wurde 1,5 Stun- 5 den lang bei 15° C und pH 9,0 weiter gerührt, wonach der pH-Wert mit Phosphorsäure auf 7,0 eingestellt und der Hauptteil des Acetons unter vermindertem Druck abdestilliert wurde. Der eingeengte Rest wurde zweimal mit Äthylacetat (400 ml) gewaschen und in einen Scheidetrichter gegeben. M Die wässrige Schicht wurde auf 5° C abgekühlt und der pH-Wert unter Rühren mit Phosphorsäure auf 2,5 gebracht. Die Lösung wurde dreimal mit Äthylacetat (600 ml) extrahiert. Die Extrakte wurden vereinigt, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur ^ Trockne eingeengt. Auf diese Weise wurde N-[p-(t-Butyl)-benzoylj-cephalosporin C erhalten. IR: 1778,1730,1708,1680,1660,1540 cm-*.

NMR(de-DMSO) <5: 1,28(9H), etwa 1,5—1,9(4H), 2,01(3H), 2,10—2,35(2H), 3,36 & 3,61(2H, ABq), 4,37(1H), 4,68 & 20 4,99(2H, ABq), 5,06(1H), 5,67(1H), 7,46 & 7,82(4H, ABq), 8,41(1H), 8,79(1H).

(2) Dinatrium-7/j-(D-5-(p-t-butylbenzamido)-5-carboxy-valeramido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4carboxylat 25 Dinatrium-N-[p-(t-butyl)-benzoyl]-cephalosporin C (47 g)

wurde in 11 Phosphatpuffer von pH 7,2 gelöst und dann mit 50 g Lipase «Saiken 100» (von Osaka Saikin Kenhusho)

versetzt.

Die Mischung wurde 18 Stunden lang auf einem Wasser- 30 bad bei 30° C unter Rühren umgesetzt. Während dieser Zeitdauer wurde eine wässrige Lösung von Natriumbicarbonat von Zeit zu Zeit zugegeben, so dass der pH-Wert des Systems nicht unter 7,2 abfiel. Nach der Umsetzung wurde die Lösung (auf 5° C) abgekühlt und ihr pH-Wert mit Phosphor- 35 säure auf 2,90 eingestellt. Dann wurde 11 Äthylacetat hinzugegeben und anschliessend gut gerührt. Da diese Mischung das unlösliche Enzym enthielt, wurde über «Celite» filtriert. Der «Celite» sowie auch die unlöslichen Anteile wurden gut mit Äthylacetat (500 ml) gewaschen. Das Filtrat und die 40 Äthylacetat-Waschflüssigkeit wurden vereinigt und in einen Scheidetrichter gegeben. Die organische Schicht wurde dreimal mit 100 ml Wasser gewaschen und mit einer 3°/oigen wässrigen Lösung von Natriumbicarbonat gut geschüttelt. Die wässrige Natriumbicarbonatlösung wurde allmählich zuge- 45 setzt, bis der pH-Wert der wässrigen Schicht bei 5,50 lag. Die abgetrennte wässrige Schicht wurde mit 2 n Natronlauge auf pH 7,0 gebracht und dann gefriergetrocknet. Auf diese Weise wurde Dinatrium-7/5-(D-5-p-(t-butyl)-benzamido-5-carboxylvaleramido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylat50 erhalten.

IR: 1760 cm-«.

NMR(D20) <5: 1,25(9H); 3,27 & 3,57(2H, ABq), 4,30(2H); 5,07(1H); 5,68(1H); 7,50 & 7,84(4H, ABq). js

(3) 7/?-(D-5-(p-t-Butylbenzoyl)-amino-5-carboxyvaler-amido)-9-oxo-ll-hydroxy-llH-furano-(4,3-cephem Zu dem gemäss (2) erhaltenen 3-Hydroxymethyl-ce-

phalosporinderivat (2,5 g) wurden 80 ml Aceton hinzugege- 60 ben und die resultierende Suspension unter Kühlung auf 5° C gerührt. Zu der Mischung wurde eine Chromsäure/ Schwefelsäuremischung (1,88 ml), hergestellt durch Zugabe von konzentrierter Schwefelsäure (4,52 ml; H2SO4-Gehalt: 1,77 g/ml) zu Chromsäureanhydrid (2,67 g; gewählt: 6S Reagenzqualität) und sorgfältiges Verdünnen der Mischung mit Wasser auf ein Gesamtvolumen von 15,0 ml) tropfenweise über eine Zeitdauer von 3 Minuten hinweg hinzugegeben, wonach weitere 20 Minuten lang bei 5° C gerührt wurde. Nach Beendigung der Reaktion wurde der Hauptteil des Acetons abdestilliert und der Rest mit Wasser (30 ml) verdünnt und dreimal mit Äthylacetat (50 ml) extrahiert. Die Äthylacetatlösung wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt.

Auf diese Weise wurde 7/?-(D-5-(p-t-Butylbenzoyl)-amino-5-carboxyvaleramido)-9-oxo-ll-hydroxy-llH-furano-(4,3-c)-3-cephem erhalten.

(4) Mononatrium-7/?-(D-5-(p-t-butylbenzoyl)-amino-5-

carboxyvaleramido)-3-(2-morpholinoäthoxy)-iminomethyl-

3-cephem-4-carboxylat

7/j-(D-5-(p-t-Butylbenzoyl)-amino-5-carboxyvaIeramido)-9-oxo-ll-hydroxy-llH-furan(4,3-c)-3-cephem (2,8 g) wurde in 20 ml Dimethylsulfoxid gelöst und die Lösung mit 0-(2-Morpholinoäthyl)-hydroxylamin-dihydrochlorid (1,0 g) in einer Einzelportion versetzt und die Mischung 1 Stunde lang bei Zimmertemperatur gerührt. Zu dieser Lösung wurde wasserfreies Natriumacetat (0,431 g) über eine Zeitdauer von 1 Stunde hinweg hinzugegeben, wonach die Mischung weitere 2 Stunden lang gerührt wurde. Die Reaktionsmischung wurde dann mit kaltem Wasser (10 ml) verdünnt und mit 10°/oigem wässrigen Natriumbicarbonat auf pH 7 gebracht. Sie wurde dann der Säulenchromatographie an Polystyrolharz (Amberlite XAD-2) unterworfen und mit Wasser und dann mit 20°/oigem wässrigen Äthanol entwickelt. Die durch Elution mit 20%igem wässrigen Äthanol erhaltenen Fraktionen wurden vereinigt und gefriergetrocknet zur Gewinnung der oben angegebenen gewünschten Verbindung. Ausbeute: 1,2 g (33,8 °/o).

IR(KBr): 1775,1605 cm-i.

NMR(DaO) <3: l,31(s, t-Bu), 1,5—2,2(m; -(CH2)2-); 2,3—2,6 (m; -CH2CO); 2,6—2,9(m; Morpholin ß-CH2 & -CH2-N=); 3,44 & 3,72(ABq; J=18Hz, 2-CHa); 3,82(m; Morpholin a-CHä); 4,30(m; OCH2-); 4,54(m; Valeryl-CH=); 5,17(d; J=5Hz, 6-H); 5,74(d; J=5Hz, 7-H); 7,56 & 7,88(je e; J=8Hz, Benzol); 8,26(s; -CH=NO-).

Beispiel 2

(1) N-[p-(t-Butyl)-benzolsulfonyl]-cephalosporin C In ähnlicher Weise wie in Beispiel 1 (1) aber mit p-(t-

Butyl)-benzolsulfonylchlorid an Stelle von p-(t-Butyl)-benzoylchlorid wurde die vorstehend genannte Verbindung erhalten. Ausbeute: 51,9 g.

IR(KBr): 1770, 1728,1710,1660 cm-«.

NMR(de-DMSO) <3:1,29(9H); 2,01(2H); 3,40&3,64(2H; ABq); 4,70 & 5,02(2H; ABq); 5,06(1H; d); 5,64(1H; q); 7,56 & 7,68(4H; ABq); 7,94(1H; d); 8,72(1H; d).

(2) Dinatrium-7/j-[D-5-(p-t-butylbenzolsulfonyl)-amino-5-Carboxyvaleramido]-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylat

N-[p-(t-Butyl)-benzolsulfonyl]-cephalosporin C-Di-natrium (50 g) wurde in 11 Phosphatpuffer von pH 7,2 gelöst und dann mit Lipase «Saiken 100» (von Osaka Saikin Ken-kusho; 50 g) versetzt. Die Reaktionsmischung wurde auf einem Wasserbad bei 30° C unter Rühren 18 Stunden lang umgesetzt. Während dieser Zeitdauer wurde eine wässrige Lösung von Natriumbicarbonat von Zeit zu Zeit hinzugegeben, um den pH-Wert des Systems über 7,2 zu halten. Nach Beendigung der Reaktion wurde die Reaktionsmischung auf 5° C abgekühlt und ihr pH-Wert mit Phosphorsäure auf 2,90 eingestellt. Zu der resultierenden Mischung wurde 11 Äthylacetat hinzugegeben und die Mischung sorgfältig ge

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rührt, wonach das unlösliche Enzym unter Verwendung von «Celite» als Filterhilfe abfiltriert wurde. Der Filterkuchen wurde mit Äthylacetat (500 ml) gut gewaschen. Das Filtrat und die Äthylacetat-Waschflüssigkeit wurden vereinigt und die Mischung gut geschüttelt. Die organische Schicht wurde mit Wasser (dreimal 100 ml) gewaschen und kräftig mit 3%iger wässriger Natriumbicarbonatlösung durchgeschüttelt. Zu der wässrigen Schicht wurde allmählich eine wässrige Lösung von Natriumbicarbonat hinzugegeben, bis ihr pH-Wert 5,50 erreichte und der pH-Wert der resultierenden Lösung wurde mit 2 n wässriger Natronlauge auf 7,0 eingestellt und die Lösung dann gefriergetrocknet. Auf diese Weise wurde die oben genannte gewünschte Verbindung erhalten. IR: 1754,1660,1595 cm-*.

NMR(D20) «5: 1,30(9H); 4,36(2H); 5,15(1H; d); 5,68(1H; d); 7,60&7,86(4H; ABq).

(3) 7/?-[D-5-(p-t-Butylbenzolsulfonyl)-amino-5-carboxy-valeramido]-9-oxo-ll-hydroxy-HH-furano[4,3c]-3-cephem

Eine Suspension von Dinatrium-7/?-[D-5-(p-t-butyl-benzolsulfonyl)-amino-5-carboxyvaleramido]-3-hydroxy-methyl-3-cephem-4-carboxylat in 300 ml Aceton wurde unter Kühlung auf 5° C gerührt. Zu der Suspension wurde eine Chromsäure/Schwefelsäure-Mischung (6,10 ml; hergestellt wie in (1) von Beispiel 1 beschrieben) tropfenweise über eine Zeitdauer von 5 Minuten hinweg zugegeben, wonach weitere 15 Minuten lang bei 5° C gerührt wurde. Nach Beendigung der Reaktion wurde der Hauptteil des Acetons unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rest mit Wasser (250 ml) verdünnt und die so erhaltene Mischung dann zweimal mit Äthylacetat (300 ml) extrahiert. Die vereinigten Äthylacetat-Extrakte wurden zweimal mit einer gesättigten wässrigen Natriumchloridlösung (300 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockne eingeengt. Diese Verfahrensweise lieferte die oben genannte Verbindung. Ausbeute: 7,3 g (78,9 %>).

(4) Mononatrium-7/5-[D-5-(p-t-butylbenzolsulfonyl)-amino-5-carboxyvaleramido]-3-(2-morpholinoäthoxy)-iminomethyl-3-cephem-4-carboxylat 7jS-[D-5-(p-t-Butylbenzolsulfonyl)-amino-5-carboxy-

valeramido]-9-oxo-ll-hydroxy-HH-furano(4,3-c)-3-cephem (5,67 g) wurde in 70 ml trockenem Dimethylsulfoxid gelöst und dann mit einer Einzelportion 0-(2-Morpholinoäthyl)-hydroxylamin-dihydrochlorid (2,19 g) versetzt. Die Mischung wurde 3 Stunden lang bei Zimmertemperatur gerührt, wonach Natriumbicarbonat (3,36 g) in Wasser (40 ml) hinzugegeben wurde. Die Lösung wurde an einer Säule von Polystyrolharz (Amberlite XAD-2) mit Wasser und dann mit 15%igem wässrigen Äthanol entwickelt. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und nach Abdestil-lieren des Äthanols unter vermindertem Druck gefriergetrocknet. Diese Verfahrensweise lieferte die oben angegebene gewünschte Verbindung. Ausbeute: 2,29 g (32 %>).

IR(KBr): 1764, 1655,1599 cm-i.

NMR(DaO) <5: l,37(s; t-Bu); l,63(m, -CH2CH2-); 2,19(m; -CH2CONH-); 2,7—3,0(m; Morpholinß-Cih & -CH2N=); 3,5—4,0(m; 2-CHs Morpholin a-CH» & Valeryl -CH=); 4,32(m; =NO-CH2-); 5,21(d; J=5Hz; 6-H); 5,77(d; J=5Hz; 7-H); 7,62 & 7,90 (je d; J=9Hz; Benzol); 8,32 (s; -CH=N-).

Beispiel 3

7/5-(Phenylacetamido)-3-(2-morpholinoäthoxy)-imino-

methyl-3-cephem-4-carbonsäure

7/3-(Phenylacetamido)-9-oxo-ll-hydroxy-llH-furano-

(4,3-c)-3-cephem (0,346 g) wurde in trockenem Dimethylsulfoxid (10 ml) gelöst und nachfolgend mit einer Einzelportion 0-(2-Morpholinoäthyl)-hydroxylamin-dihydrochlorid (0,219 g) versetzt. Die Mischung wurde 30 Minuten lang bei Zimmertemperatur gerührt. Zu dieser Mischung wurde wasserfreies Natriumacetat (0,082 g) über eine Zeitdauer von 2 Stunden hinzugegeben, wonach die Mischung eine weitere Stunde lang bei Zimmertemperatur gerührt wurde. Zu dieser Mischung wurde eine Lösung von Natriumacetat (0,164 g) in Wasser (10 ml) unter Kühlen hinzugegeben und die resultierende Mischung an einer Säule von Polystyrolharz (Amberlite XAD-2) zuerst mit Wasser und dann mit 5%igem wässrigen Äthanol und schliesslich mit 15%igem wässrigen Äthanol entwickelt. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und das Äthanol abdestilliert. Der Rest wurde gefriergetrocknet, woraufhin die gewünschte Verbindung erhalten wurde. Ausbeute: 0,412 g (87 %). IR(KBr): 1765, 1665, 1605 cm-i.

NMR(D20) <5: 2,6—3,0(m; Morpholin £-CH2), 3,5—3,8(m;

2-CH2 & Morpholin ct-CH2 & -CH2CO); 4,20(m;

©

-CH2NH=); 4,70(m; =NOCH2-); 5,07(d; J=5Hz; 6-H);

5,60(d; J=5Hz; 7-H); 7,25(s; Benzol); 8,38(s; -CH=N-).

Beispiel 4

7/3-(2-Thienylacetamido)-3-(2-morpholinoäthoxy)-imino-

methyl-3-cephem-4-carbonsäure

7|ß-(2-Thienylacetamido)-9-oxo-ll-hydroxy-llH-furano-(4,3-c)-3-cephem (0,352 g) wurde in trockenem Dimethylsulfoxid (10 ml) gelöst und dann mit 0-(2-Morpholinoäthyl)-hydroxylamin-dihydrochlorid (0,219 g) in einer Einzelportion versetzt. Die Mischung wurde 1 Stunde lang bei Zimmertemperatur gerührt. Zu dieser Mischung wurde wasserfreies Natriumacetat (0,082 g) über eine Zeitdauer von 1 Stunde hinzugegeben, wonach die Mischung eine weitere Stunde lang bei Zimmertemperatur gerührt wurde. Danach wurde eine Lösung von 0,33 g Natriumacetat in 10 mlWasser hinzugegeben und die resultierende Mischung an einer Säule von Polystyrolharz (Amberlite XAD-2) mit Wasser und dann mit 20°/oigem wässrigen Äthanol entwickelt. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und nach Abdestillieren des Äthanols gefriergetrocknet. Auf diese Weise wurden 0,205 g der oben genannten gewünschten Verbindung erhalten (Ausbeute: 43 %>).

IR(KBr): 1771,1667,1605 cm-'.

UVîmax (s in Wasser): 233 nm (10 800); 296 nm (17 600). NMR(de-DMSO) Ò: 2,83(m; Morpholin /3-CH2); 2,98 (m;

-CHo-Morpholin) ; 3,4—4,0(m; 2-CH2 & Morpholin a-

CH2 & -CH2CO); 4,25(m; =NOCH2-); 5,09(d; J=5Hz;

6-H); 5,64(q; J=5 & 8Hz; 7-H); 6,91 (Thienyl 3- & 5-H);

7,30 (Thienyl 4-H); 8,30(s; -CH=N-); 9,13(d; J=8Hz;

-CONH-).

Beispiel 5

(1) 7/3-Amino-3-(2-morpholinoäthoxy)-iminomethyl-3-

cephem-4-carbonsäure

In einer Mischung von N,N-Dimethylanilin (5,32 ml) und Dichlormethan (40 ml) wurden 4,62 g 7/5-[D-5-(p-t-Butyl-benzoyl)-amino-5-carboxyvaleramido]-3-(2-morpholino-äthoxy)-iminomethyl-3-cephem-4-carbonsäure suspendiert. Die Suspension wurde auf —10° C abgekühlt und gerührt. Bei einer nicht über —10° C hinausgehenden Temperatur wurden 1,575 ml Phosphortrichlorid tropfenweise hinzugegeben und die Mischung 1 Stunde lang gerührt, woraufhin eine homogene Lösung erhalten wurde. Die Lösung wurde

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

7

617 437

auf — 20° C heruntergekühlt und mit 2,916 g Phosphor-pentachlorid versetzt. Die Mischung wurde 2 Stunden lang gerührt und dann auf— 50° C heruntergekühlt und tropfenweise mit kaltem Methanol (26 ml) versetzt, wobei darauf geachtet wurde, dass die Temperatur unter — 35° C blieb. s Die Temperatur wurde dann allmählich auf —■ 5° C erhöht, bei welcher Temperatur die Mischung 30 Minuten lang gerührt wurde. Nach Zugabe von 20 ml Wasser wurde die wässrige Schicht mit wässrigem Ammoniak auf pH 3,5 gebracht. Nach heftigem Rühren wurde die wässrige Schicht io abgetrennt. Die organische Schicht wurde weiter dreimal mit 20 ml Wasser extrahiert. Die wässrigen Schichten wurden vereinigt und unter vermindertem Druck auf 20 ml eingeengt. Dieses Konzentrat wurde über eine Chromatographiesäule von Polystyrolharz (Amberlite XAD-2) geschickt und 15 mit Wasser entwickelt. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und gefriergetrocknet.

Diese Verfahrensweise lieferte die oben genannte Verbindung. Ausbeute: 2,2 g.

IR(KBr): 1788-1. 20

NMR(DaO) <5: 3,2—4,9(m; 14H); 5,20(d; J=5Hz; 6-H);

5,56(d; J=5Hz); 8,57(s; -CH=NO-).

(2) Natrium-7/HD-a-sulfophenylacetamido)-3-(2-mor-

pholinoäthoxy)-iminomethyl-3-cephem-4-carboxylat 25

In 15 ml Wasser wurden 0,712 g 7/8-Amino-3-(2-morpho-linoäthoxy)-iminomethyl-3-cephem-4-carbonsäure gelöst und die Lösung mit 1 n Natronlauge auf pH 6 eingestellt. Zu dieser Lösung wurde eine Lösung von D-(—)-a-Sulfophenyl-acetylchlorid (0,47 g) in Äthylacetat (2 ml) tropfenweise hinzugegeben, wobei die Reaktionsmischung durch Zugabe von 1 n Natronlauge bei pH 6 bis 7 gehalten wurde. Nach Beendigung der tropfenweisen Zugabe wurde die Mischung 30 Minuten lang gerührt, wonach das Äthylacetat unter vermindertem Druck abdestilliert wurde. Der Rest wurde an einer Polystyrolharzsäule (Amberlite XAD-2) chromatographiert und mit Wasser entwickelt. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und gefriergetrocknet. Die Verfahrensweise lieferte die oben genannte Verbindung. Ausbeute: 0,4 g (35 °/o). 40 IR(KBr): 1768, 1670, 1606 cm-'.

NMR(D20) Ò: 3,35—4,20(12H; m); 4,52(m; -CH2;ON=); 5,15

(s; CoH5-CH=); 5,24(d; J=5Hz; 6-H; 5,79(d; J=5Hz; 7-H);

7,3—7,8(m; Phenyl); 8,25(s; -CH=NO-). 45

Beispiel 6

Iß-(D-M andeloylamido) -3 - (2-morpholinoäthoxy) -imino-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

In trockenem Dimethylformamid (10 ml) wurden 0,712 g 7/3-Amino-3-(2-morpholinoäthoxy)-iminomethyl-3-cephem-4-carbonsäure und dann 0,356 g D-Mandelsäurecarboxyan-hydrid gelöst. Die Mischung wurde bei Zimmertemperatur J5 gerührt, woraufhin Kohlendioxid-Gas unter Bildung einer homogenen Reaktionsmischung entwickelt wurde. Nach einer Stunde wurde kaltes Wasser (10 ml) zur Reaktionsmischung hinzugegeben. Die Mischung wurde dann einer Säulenchromatographie an Polystyrolharz (Amberlite XAD-2) unterworfen und mit Wasser und dann mit 10°/oigem wässrigen Äthanol60 entwickelt. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und nach Abdestillieren von Äthanol unter vermindertem Druck gefriergetrocknet. Diese Verfahrensweise lieferte die oben genannte Verbindung. Ausbeute: 0,259 g (27 o/»). 65

IR(KBr): 1780, 1675, 1605, 1510 cm-».

UVAmax (s in Wasser): 296 nm (19 000).

NMR(de-DMSO) <5: 2,6—3,15(m; Morpholin /J-CHaund -CH2N=); 3,47 & 3,82(ABq; J=18Hz; 2-CH2); 3,70(m; Morpholin a-CH2); 4,26(m; -CHaON=); 5,07(s; CoH5CH(OH)-); 5,08(d; J=5Hz; 6-H); 5,68(q; J=5 & 8Hz; 7-H); 7,15—7,55(m; C6H5-); 8,29(s; -CH=NO-); 8,66(d; J=8Hz, -NH-).

Elementaranalyse:

berechnet für C22H26N4O7S • 2H2O

0/0C 50,18; fl/oH 5,74; O/0N 10,64

gefunden: 0/0C 50,69; %H5,71; <VoN 10,64

Beispiel 7

(1) Natrium-7/?-(D-mandeloylamido)-3-hydroxymethyl-

3-cephem-4-carboxylat

Zu 4,06 g 7/?-(D-Mandeloylamido)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure wurden 20 ml Wasser und 0,84 g Natriumbicarbonat hinzugegeben, wodurch die Säure in ein Natriumsalz umgewandelt wurde. Zu der so erhaltenen wässrigen Lösung wurde ein Phosphatpuffer (pH 7,2; 100 ml) und dann 4,77 g Lipase «Saiken 100» (von Osaka Saikin Kenkyusho) hinzugegeben und das System bei einer konstanten Temperatur von 30° C und bei einem pH von etwa 7,2 16 Stunden lang gerührt. Die Reaktionsmischung wurde unter Saugwirkung (mit «Hyflo-Supercel» als Filterhilfe) filtriert und das Filtrat unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde auf eine Polystyrolharzsäule (Amberlite XAD-2) gegeben und mit Wasser entwickelt. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden gesammelt und unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde gefriergetrocknet, woraufhin das gewünschte Produkt erhalten wurde.

(2) 7/5-(D-Mandeloylamido)-9-oxo-ll-hydroxy-llH-

furano-(4,3-c)-3-cephem

In 100 ml Aceton wurden 1,93 g Natrium-7/3-(D-mandeloylamido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylat suspendiert und unter Rühren und Kühlung auf — 3° C wurden 1,25 ml des unten angegebenen Reagenz (siehe Bemerkung) über eine Zeitdauer von 5 Minuten hinzugegeben. Die Mischung wurde bei 0° C eine weitere Stunde lang gerührt, wonach das Aceton unter vermindertem Druck abdestilliert wurde. Der Rest wurde mit 100 ml Wasser verdünnt und dreimal mit Äthylacetat (150 ml) extrahiert. Der Extrakt wurde zweimal mit einer wässrigen gesättigten Natriumchloridlösung (300 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockne eingeengt. Die Verfahrensweise lieferte die oben genannte Verbindung. Ausbeute: 1,41 g (78 %).

IR(KBr): 1787, 1673 cm-'.

NMR(de-DMSO + D20) d: 3,4—3,8(m; 2-CEU); 5,09(s;

CeH5-CH(OH)-); 5,10(d; J=5Hz; 6-H); 5,80(d; J=5Hz;

Bemerkung: Reagenz = eine Mischung von 2,67 g Chromsäureanhydrid und 2,26 ml konzentrierter Schwefelsäure, mit Wasser auf 10 ml verdünnt.

(3) Iß-(D-Mandeloylamido)-3-(2-morpholinoäthoxy)-iminomethyl-3-cephem-4-carbonsäure In trockenem Dimethylsulfoxid (3 ml) wurden 0,08 g 7/3-(D-Mandeloylamido)-9-oxo-ll-hydroxy-llH-furano-(4,3-c)-3-cephem gelöst und dann mit 0-(2-Morpholinoäthyl)-

617 437

8

hydroxylamin-dihydrochlorid (0,06 g) versetzt. Die Mischung wurde 30 Minuten lang bei Zimmertemperatur gerührt und dann 0,022 g wasserfreies Natriumacetat hinzugegeben. Die Mischung wurde weitere 30 Minuten lang bei Zimmertemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit 5 ml kaltem Wasser versetzt und über eine Säule von Polystyrolharz (Amberlite XAD-2) geschickt, die mit Wasser und dann mit 10%igem wässrigen Äthanol eluiert wurde. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und der Äthanol unter vermindertem Druck abdestilliert. Schliesslich wurde der Rest gefriergetrocknet zur Erzielung der oben genannten Verbindung. Ausbeute: 0,077 g (71 °/o).

IR, NMR und TLC dieses Produktes stimmten gut mit den beim Produkt gemäss Beispiel 6 erhaltenen überein.

. -

Beispiel 8

7/HCyanoacetamido)-3-(2-morpholinoäthoxy)-imino-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

In trockenem Dimethylsulfoxid (3 ml) wurden 0,08 g Iß-(Cyanoacetamido)-9-oxo-l 1-hydroxy-1 lH-furano-(4,3-c)-3-cephem gelöst und die Lösung dann mit 0,06 g 0-(2-Morpholinoäthyl)-hydroxylamin-dihydrochlorid versetzt. Die Mischung wurde 30 Minuten lang bei Zimmertemperatur gerührt, wonach 0,022 g wasserfreies Natriumacetat über etwa 1 Stunde hinweg zugesetzt wurden. Die Mischung wurde weitere 30 Minuten lang gerührt und dann mit kaltem Wasser (5 ml) versetzt und der Säulenchromatographie an Polystyrolharz (Amberlite XAD-2) unterworfen. Das Chromato-gramm wurde mit Wasser und dann mit 5°/0igem wässrigen Äthanol entwickelt. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und der Äthanol unter vermindertem Druck abdestilliert. Schliesslich wurde der Rest gefriergetrocknet unter Erzielung der oben genannten Verbindung. Ausbeute: 0,077 g (67 %)•

IR(KBr): 2250(CN), 1778,1688, 1607,1570 cm-i.

UV,?max (s in Wasser): 296 nm (19 900).

NMR(D20) <5: 1—4,3(14H; m); 3,92(s; NC-CH2-CO); 5,33 d; J=5Hz; 6-H); 5,81(d; I=5Hz; 7-H); 8,32(s; -CH=NO-).

Beispiel 9

7jS-(D-Mandeloylamido)-3-(2-morpholino-l-methyl-äthoxy)-iminomethyl-3-cephem-4-carbonsäure

In trockenem Dimethylsulfoxid (8 ml) wurden 0,362 g 7y?-(D-Mandeloylamido)-9-oxo-ll-hydroxy-llH-furano-(4,3-c)-3-cephem gelöst und dann mit 0,233 g Ó-(2-Morpholino-l-methyläthyl)-hydroxylamin-dihydrochlorid in einer Portion versetzt. Die Mischung wurde 30 Minuten lang bei Zimmertemperatur gerührt, wonach 0,082 g wasserfreies Natriumacetat über eine Zeitdauer von 40 Minuten hinweg zugesetzt wurden. Danach wurde die Mischung 1,5 Stunden lang bei Zimmertemperatur gerührt. Unter Kühlung mit Eis wurde eine Lösung von 0,164 g Natriumacetat in 8 ml Wasser zu der vorstehenden Mischung hinzugegeben. Die Mischung wurde dann an einer Säule mit Polystyrolharz (Amberlite XAD-2) chromatographiert und mit Wasser, 10°/oigem wässrigen Äthanol und 15%igem wässrigen Äthanol in der genannten Reihenfolge entwickelt. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und der Äthanol unter vermindertem Druck abdestilliert. Schliesslich wurde der Rest gefriergetrocknet unter Erzielung der oben genannten Verbindung. Ausbeute: 0,221 g (44 %>).

IR(KBr): 1777,1670,1607 cm-'.

UVAmax(ein Wasser): 295 nm (18 900).

NMR(de-DMSO + D20) <5: 1,24 & 1,26 (jeweils d; J=6Hz; O-CH(CHs)-); 3,10(m; Morpholin ß-CHz & -CH2-N=); 3,47 & 3,78(ABq; J=18Hz; 2-CH2); 3,84(m; Morpholin a-CHs); 4,25(m; NO-CH(CH3)-); 5,06(d; J=5Hz; 6-H); 5,09(s; C6H5-CH(OH)-); 5,63(d; J=5Hz; 7-H); 7,2—7,5 (m; C6H5-); 8,30 & 8,33 (jeweils s; -CH=NO-).

Elementaranalyse berechnet für C23H28N4O7S ■ 2,5H20:

0/0c 50,26; %H 6,05; o/0N 10,19;

gefunden: "/0C 50,58; °/oH6,00; o/0N 9,99.

Beispiel 10

7/HD-Mandeloylamido)-3-(3-morpholinopropoxy)-imino-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

In trockenem Dimethylsulfoxid (8 ml) wurden 0,362 g 7/?-(D-Mandeloylamido)-9-oxo-ll-hydroxy-llH-furano-(4,3-c)-3-cephem gelöst und dann mit 0,233 g 0-(3-Morpho-linopropyl)-hydroxylamin-dihydrochlorid in einer Portion versetzt. Die Mischung wurde 30 Minuten lang bei Zimmertemperatur gerührt, wonach 0,082 g wasserfreies Natriumacetat über eine Zeitdauer von 1,5 Stunden hinweg zugesetzt wurden. Die Mischung wurde weitere 30 Minuten lang bei Zimmertemperatur gerührt. Unter Kühlung mit Eis wurde eine Lösung von 0,146 g Natriumacetat in 8 ml Wasser zu der obigen Reaktionsmischung hinzugegeben. Die Mischung wurde dann an einer Säule von Polystyrolharz (Amberlite XAD-2) chromatographiert und mit Wasser und dann mit 12,5°/oigem wässrigen Äthanol entwickelt. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und der Äthanol unter vermindertem Druck abdestilliert. Schliesslich wurde der Rest gefriergetrocknet unter Erzielung der oben genannten Verbindung. Ausbeute: 0,21 g (42 %>)• IR(KBr): 1778, 1674,1607 cm-*.

UVAmax (e in Wasser): 296 nm (15 700).

NMR(d0-DMSO + DaO) Ô: 2,05(m; CH2CH2CH2N);3,17(m; Morpholin ß-CH2 & -CH2N=); 3,3—3,9(m; Morpholin a-CH2 & 2-CHs); 4,0—4,4(m; NOCH2-); 4,99(d; J=5Hz; 6-H); 5,07(s; CGH5-CH(OH)-); 5,59(d; J=5Hz; 7-H); 7,2—7,5(m; C6H5-); 8^6(s; -CH=N).

Elementaranalyse berechnet für C2SH28N4O1S • 2,5HaO:

%C 50,26; %H 6,05; o/0N 10,19;

gefunden: o/oC 50,46; %H 5,70; o/0n 9,92,

Beispiel 11

7/3-(D-Mandeloylamido)-3-(2-morpholino-(l-methoxy-methyl)-äthoxy)-iminomethyl-3-cephem-4-carbonsäure

In trockenem Dimethylsulfoxid (6 ml) wurden 0,362 g 7/?-(D-Mandeloylamido)-9-oxo-ll-hydroxy-llH-furano-(4,3-c)-3-cephem gelöst und dann mit 0,263 g Ó-(2-Morpholino-l-methoxymethyl-äthyl)-hydroxylamin-dihydrochlorid in einer Einzelportion versetzt. Die Mischung wurde 30 Minuten lang bei Zimmertemperatur gerührt, wonach 0,082 g wasserfreies Natriumacetat über eine Zeitdauer von 1 Stunde hinweg zugegeben wurden. Die Mischung wurde weitere 30 Minuten lang bei Zimmertemperatur gerührt und dann mit einer Lösung von Natriumacetat (0,164 g) in Wasser (6 ml) versetzt. Die Mischung wurde an einer Säule mit Polystyrolharz (Amberlite XAD-2) chromatographiert und mit Wasser, mit 12,5°/oigem wässrigen Äthanol und 15"/oigem wässrigen Äthanol in der angegebenen Reihenfolge entwickelt. Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und der Äthanol unter vermindertem Druck abdestil5

10.

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

9

617 437

liert. Schliesslich wurde der Rest gefriergetrocknet unter Erzielung der oben genannten Verbindung. Ausbeute: 0,228 g (43 o/o).

IR(KBr): 1779, 1676, 1608 cm-1.

NMR(ds-DMSO) (5: 2,70(m; Morpholin ß-CH2); 2,98(m; 5

-CHsN=); 3,21(s; CH30); 3,3—3,9(m; 2-CH2, Morpholin a-CH2 & -CH2O-); 4,17(m; =CH-CH2N); 5,10(s; C0H5-CH(OH)-); 5,12(d; J=5Hz; 6-H); 5,71(q; J=5 & 8Hz; 7-H); 7,1—7,5(m; C6Hs-); 8,28(s; -CH=N-); 8,71(d; J=8Hz; -CONH-). ""

Claims

617 437

PATENTANSPRUCH 1. Verfahren zur Herstellung einer 3-(Morpholinoalkoxy-iminomethyl)-cephemverbindung der Formel in der R1 die bereits angegebene Bedeutung hat, leicht aus einem 3-Hydroxymethyl-cephalosporinderivat der Formel

R'NH

CH=N-0-R2-N

COOH

in der R1 ein Acylrest und R2 ein Alkylenrest ist, der mit einer niederen Alkoxygruppe substituiert sein kann, und deren pharmazeutisch akzeptable Salze, dadurch gekennzeichnet, dass man ein Cephalosporinlactolderivat der Formel

S

RiNH

20

(H)

25

oder ein Alkyl- oder Acylderivat der Hydroxygrappe desselben mit einem 0-(Morpholinoalkyl)-hydroxylamin der Formel

HsN-O-Rä-N Qo (IV)

oder einem Salz desselben umsetzt.
2. Verwendung der nach dem Verfahren nach Anspruch 1 hergestellten 3-(Morpholinoalkoxyiminomethyl)-cephemver-bindungen der Formel, dadurch gekennzeichnet, dass der Acylrest gegen einen anderen Acylrest ausgetauscht wird.

35