CH635106A5

CH635106A5 - Dimeric indolodihydroindoles, processes for their preparation, and their use

Info

Publication number: CH635106A5
Application number: CH53578A
Authority: CH
Inventors: Gerald Lee Thompson
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1977-01-19
Filing date: 1978-01-18
Publication date: 1983-03-15
Also published as: RO78290A; DK144420C; ATA35478A; DD134527A5; JPS5390299A; MX5112E; BG33158A3; BG33293A3; JPS6153360B2; SE7800555L; FR2378032A1; IE46308B1; YU7278A; PT67535B; DE2801748A1; NL7800667A; GB1593231A; DK144420B; IE780106L; IL53813A

Description

Gegenstand der Erfindung sind ferner Antitumor-Arzneimit-5 tel, die als Wirkstoffkomponente eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz darin enthalten. R: die Gruppe CHO oder, wenn R' die Gruppe OH bedeutet, Gegenstand der Erfindung ist auch ein Verfahren zur Herstel-die Gruppe CH,, einer der Reste lung von Verbindungen der Formel worin bedeuten

R1 die Gruppe OH oder O-C-CHj,

O

1 2

7' 6' y*\^

11' T—f

R

.. ii i17. r

N f^-C-O-CHs

I II

H 0

f

I o

II

Formel (II)

V8\

-N 7

CHsO—Ov 6

1

»

3 | S|

CHz

/

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CHO

C-O-CHa

II

0

worin bedeuten

R1 die Gruppe OH oder O-C-CH3,

O

40

einer der Reste

R3 und R4 Wasserstoff und der andere dieser Reste die Gruppe C2H5, oder ihrer Salze, das dadurch gekennzeichnet ist, dass ein dimeres 1-Methylindoldihydroindol der Formel

• r

\ 1 O ' e a '

y-y

5'

« R3 3 ' •

Formel (III)

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' !" h ; 0

9 /aN -N

CHsO—

ü 9 IN 7*

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1° r l

V»V ^OH '

CH3

C-0-CH3

II

0

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6

worin R1. R'' und R4 die oben angegebenen Bedeutungen haben. Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Her-mit einem Chromsäureoxidationsmittel bei niedriger Tempera- Stellung von dimeren 4-Desacetylindoldihydroindolen der tur umgesetzt und die freie Base oder ein Salz davon gewonnen wird. Formel

9 m 4 <

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H

Formel (IV)

r-o-11

0

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f bl 71

1'° I I

I A 1 A e1

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• • e O •

4

CHz

/

£Hs

®^0H

R

C-O-CHs

II

0

worin bedeuten

R~ die Gruppe CH3 oder CHO und einer der Reste

R3 und R4 Wasserstoff und der andere dieser Reste die Gruppe CiHs, oder ihrer Salze, das dadurch gekennzeichnet ist, dass ein dimeres 4-AcetoxyindoldihydroindoI der Formel

40 5'

11 ,o

- î—L-4'

y V°'V < =7

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V5 V Vc-o-CH3

f R"

Formel (V)

I

H

0

e

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fi 5

I 13

CHsO—i16 ®.

\ A/ ^

CHa

é~0-C-CH3 II

e^OH

/

.CHs

0

R"

C-0-CH3

II

0

worin R:. R3 und R4 die oben angegebenen Bedeutungen haben. in einem Reaktionsgemisch hydrolysiert und die freie Base oder ein Salz der 4-Desacetylverbindung gewonnen wird.

Die dimeren Indoldihydroindole der Formel I inhibieren Tumore in Säurewirten.

Mehrere natürlich vorkommende Alkaloide, die aus Vinca rosea gewonnen werden können, haben sich bei der Behandlung von experimentellen malignen Geschwüren in Tieren als wirksam erwiesen.

Hierzu gehören Leurosin (US-PS 3370057), Vincaleukoblastin ( Vinblastin), das im folgenden als VLB bezeichnet wird (US-PS 3097137), Leurosidin (Vinrosidin) und Leurocristin (VCR oder Vincristin) (beide in US-PS 3205220), 4'-Deoxy-VLB "A"und "B", Tetrahedron Letters, 783 (1968) (Desacetylleurosinhydrazid ist dort gleichfalls beschrieben), 4-Desacetoxyvinblastin (US-PS 3944554), Leurocolombin (US-PS3890325), Leuroformin (N-Formylleurosin, BE-PS 811110) und Vincadiolin (US-PS 3 887 565 ). Zwei dieser Alkaloide, VLB und Leurocristin, befinden sich bereits als Arzneimittel zur Behandlung von malignen Erkrankungen, insbesondere Leukämien und verwandten Krankheiten beim Menschen im Händel.

Die aus Vinca rosea erhältlichen dimeren Indoldihydroindolal-kaloide können durch die Formel I wiedergegeben werden.

Wenn in dieser Formel R1 Acetoxy, R2 Methyl, R3 Hydroxyl, R4 Ethyl und R' Wasserstoff bedeutet, dann handelt es sich um VLB ; wenn R1 Acetoxy, R2 Formyl, R3 Hydroxyl, R4 Ethyl und R1 Wasserstoff bedeutet, handelt es sich um Vincristin; wenn R1 Acetoxy, R2 Methyl, R3 Ethyl, R4 Hydroxyl und R5 Wasserstoff bedeutet, handelt es sich um Leurosidin; wenn R1 Acetoxy, R2 Methyl, R3 und R? Wasserstoff und R4 Ethyl bedeuten, handelt es sich um 4'-Deoxy-VLB "A"; wenn R1, R2 und R5 die gleichen Bedeutungen wie für 4'-Deoxy VLB "A" haben, aber R3 Ethyl und R4 Wasserstoff bedeuten, handelt es sich um 4'-Deoxy-VLB "B" und wenn R1 Acetoxy, R2 Methyl, R3 Ethyl und R4 und R5 zusammen einen alpha-Epoxidring bedeuten, handelt es sich um Leurosin.

Von den oben genannten Alkaloiden ist Vincristin das vorteilhafteste aber auch das in geringsten Mengen aus Vinca zugängliche. Vor kurzem wurde ein oxidatives Verfahren zur Umwandlung des verhältnismässig reichlicher vorkommenden VLB in Vincristin durch Chromsäureoxidation bei niedrigen (—60°C) Temperaturen entwickelt (US-PS 3 899493). In der dimere Indo-dihydroindole enthaltenden Fraktion aus Vinca sind weitere relativ reichlich vorkommende Alkaloide wie Leurosin enthalten und es wäre erstrebenswert, diese direkt oder indirekt in Vincristin oder einen anderen Wirkstoff mit vergleichbarer oncolyti-scher Wirkung überzuführen. Es ist bekannt, dass Leurosin durch Behandlung mit Raney-Nickel in absolutem Ethanol beim Sieden unter Rückfluss in 4'-Deoxy-VLB "B" (neben schwankenden Mengen von 4'-Deoxy-VLB "A") übergeführt werden kann -vergleiche Neuss, Gorman, Cone und Huckstep, Tetrahedron Letters 783 - 7 ( 1968 ). Leurosin hat zwar oncolytische Wirksamkeit bei experimentellen Tumoren in Mäusen gezeigt, doch die klinische Wirkung ist eine begrenzte. Von 4'-Deoxy-VLB "A" und 4'-Deoxy-VLB "B" ist berichtet worden, dass ihnen eine reproduzierbare Wirkung bei experimentellen Tumoren in Mäusen fehlt.

Aufgabe der Erfindung ist die Überführung von Leurosin über 4'-Deoxy-VLB "A" und "B" in oncolytisch wirksame Derivate von 4'-Deoxy-VLB "A" und "B" und damit die indirekte Überführung des verhältnismässig reichlich vorkommenden Alkaloids Leurosin in einen Wirkstoff von grösserem klinischen Nutzen.

Eine Verbindung der Formel I, worin R4 Ethyl, R' Acetoxy, R: CHO und R3 und R^ Wasserstoffatome bedeuten, wird als 4'-Deoxyvincristin bezeichnet. Eine Verbindung, in deren Formel R1 Hydroxv bedeutet, aber die anderen Gruppen die gleichen sind, wird als 4'-Deoxy-4-desacetylvincristin bezeichnet. Da das Begleitalkaloid von Vincristin, das an 4' die entgegengesetzte

635 106

Konfiguration von Wasserstoff und Ethyl aufweist wie die in Vincristin festgestellte, nicht bekannt ist, werden die Verbindungen , in deren Formel R3 Ethyl und R4 Wasserstoff bedeutet, auf Leurosidin zurückbezogen, das an 4' die gleiche Konfiguration wie 4'-Deoxy-VLB "B" hat, und als Derivate von 1-Formylleuro-sidin bezeichnet, d. h. als4'-Deoxy-l-formylleurosidin (oder4'-Deoxyepivincristin), und als4'-Deoxy-4-desacetyl-l-formylleu-rosidin, wenn R1 für Acetoxy bzw. für Hydroxy steht. Aus jeder der vorstehenden Bezeichnungen ist ersichtlich, dass die 1-Methylgruppe von Leurosidin durch eine Formylgruppe ersetzt worden ist und dass der Ausdruck "1-Desmethyl" zur Vereinfachung weggelassen worden ist.

Zu nichttoxischen Säuren, die sich zur Herstellung von pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen der erfindungs-gemässen Verbindungen eignen, gehören insbesondere anorganische Säuren, wie Salzsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure, Schwefelsäure, Bromwasserstoffsäure, Iodwasserstoffsäure, salpetrige Säure und phosphorige Säure, und organische Säuren, wie aliphatische Mono- und Dicarbonsäuren, phenylsubstituierte Alkansäuren, Hydroxyalkansäuren und -alkandisäuren, aromatische Säuren, aliphatische und aromatische Sulfonsäuren und dergleichen. Zu den pharmazeutisch annehmbaren Salzen gehören somit bevorzugt die Sulfate, Pyrosulfate, Bisulfate, Sulfite, Bisulfite, Nitrate, Phosphate, Monohydrogenphosphate, Dihy-drogenphosphate, Metaphosphate, Pyrophosphate, Chloride, Bromide, Iodide, Acetate, Propionate, Decanoate, Caprylate, Acrylate, Formiate, Isobutyrate, Caprate, Heptanoate, Propalate, Oxalate, Malonate, Succinate, Suberate, Sebacate, Fumarate, Maleate, Benzoate, Chlorbenzoate, Methylbenzoate, Dini-trobenzoate, Hydroxybenzoate, Methoxybenzoate, Phthalate, Terephthalate, Benzolsulfonate, Toluolsulfonate, Chlorbenzol-sulfonate, Xylolsulfonate, Phenylacetate, Phenylpropionate, Phenylbutyrate, Citrate, Lactate, 2-Hydroxybutyrate, Glycol-late. Malate, Tartrate, Methansulfonate, Propansulfonate, Naphthalin-l-sulfonate und Naphthalin-2-sulfonate.

Die erfindungsgemässen Verbindungen, in deren Formel IR2 Formyl bedeutet, werden durch Tieftemperaturoxidation von 4'-Deoxy-VLB "A" oder 4'-Deoxy-VLB "B" mit Chromsäure, bevorzugt unter sauren Bedingungen, z. B. mit Chromtrioxid und Essigsäure, hergestellt.

4'-Deoxy-VLB "A" und "B" oder ihre 1-Formylderivate können unter sauren oder alkalischen Bedingungen zu den entsprechenden 4-Desacetylderivaten hydrolysiert werden. Diese 4-Desacetylderivate von 4'-Deoxy-VLB "A" und "B" können dann bei niedriger Temperatur (—60° C) mit Chromtrioxid ohne Überführung der 4-Hydroxygruppe in ein Keton zu 4'-Deoxy-4-desacetylvincristin und 4'-Deoxy-4-desacetyl-l-formylleurosidin oxidiert werden.

Bei der bevorzugten Art der Durchführung der obigen Hydrolyse wird Natriumcarbonat in Methanol bei Rückflusstemperatur verwendet. Hydrazinhydrat kann verwendet werden. Andere Basen, die verwendet werden können, sind beispielsweise Kalium-t-butoxid, Natrium- oder Kaliummethoxid oder -etho-xid, Pyridintriethylamin oder andere tertiäre Amine und Harnstoffin polaren organischen Lösungsmitteln, z. B. den niederen Alkanolen. Auch verdünntes Natrium- und Kaliumhydroxid kann verwendet werden, beispielsweise in Methanol, wobei jedoch darauf geachtet werden muss, dass Basenkonzentrationen und Reaktionstemperaturen vermieden werden, bei welchen andere hydrolysierbare Gruppen in 4'-Deoxyvincristin oder 4'-Deoxy-l-formylleurosidin in Mitleidenschaft gezogen werden. Auch nur in nichtpolaren Lösungsmitteln wirkende Basen können verwendet werden, d.h. Natrium- oder Lithiumhydrid in Benzol, Ether oder Tetrahydrofuran oder das Natriumsalz von Dimethylsulfoxid in DMSO. Temperaturen zwischen Zimmertemperatur (25° C) und dem Siedepunkt des jeweiligen Lösungsmittels können angewandt werden. Die Hydrolyse kann aber auch unter sauren Bedingungen durchgeführt werden, zum Bei7

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

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8

io

15

spiel in mit wasserfreiem Chlorwasserstoff gesättigtem absolutem Methanol bei 0°C.

Durch die folgenden Beispiele wird die Erfindung weiter erläutert.

Beispiel 1 Herstellung von 4'-Deoxyvincristin 582mg Chromtrioxid werden in 5,8 ml Essigsäure und 0,6 ml Wasser gelöst. Diese Oxidationslösung wird tropfenweise innerhalb von 5 Minuten unter Rühren zu einer Lösung von 4,62 mg 4'-Deoxy-VLB "A" in 58 ml Aceton und 2,9 ml Eisessig von etwa —50° C gegeben. Das Reaktionsgemisch wird bei dieser Temperatur etwa 30 Minuten gerührt und dann auf — 65° C abgekühlt und bei dieser Temperatur mit 12 ml 14n wässrigem Ammoniumhydroxid versetzt. Die alkalisch gemachte Reaktionsmischung wird dann auf400 ml einer Mischung aus Eis und Wasser gegossen, und die wässrige Schicht wird mit 150 ml Ether und dann dreimal mit je 150ml Chloroform extrahiert. Die organischen Schichten werden vereinigt und mit verdünntem wässrigem 20 Natriumbisulfit gewaschen, abgetrennt und getrocknet. Durch Verdampfen der organischen Lösungsmittel wird 4'-Deoxyvin-cristin als Rückstand erhalten. Die Chromatographie dieses Rückstands an 50 g Siliciumdioxid (Aktivität I) dient zur weiteren Reinigung der gewünschten Verbindung. Das Chromatogramm wird folgendermassen entwickelt: 300ml Ethylacetat-Methanol (3:1) und dann 300ml Ethylacetat-Methanol (1:1). Nach einem Vorlaufvon 100 ml werden 20 ml Fraktionen aufgefangen. Die Fraktionen 8 bis 20 werden vereinigt. Durch Verdampfen der Lösungsmittel aus den vereinigten Fraktionen werden 279 mg eines hellbraunen Feststoffs erhalten, der bei der Dünnschichtchromatographie nur einen Flecken gibt, also rein ist.

Lösungsmittel

Menge

1 : 1

20%

200

1 : 1

30%

100

1 : 1

45%

100

1 : 1

60%

400

werden folgende Fraktionen erhalten:

Fraktion

Volumen des Eluats

1

160 ml

2

100 ml

3

50 ml

4

50 ml

5

50 ml

6

120 ml

7

120 ml

25

30

Die so erhaltene freie Base von 4'-Deoxyvincristin hat folgende physikalische Kennzahl:

Massenspektrum: m/e 808 (M+), 806, 707 Infrarotspektrum: 3465,1745, 1687, 1220 cm-1 Ultraviolettspektrum: 210, 222, 255, 290, 298 nm 100 MHzNMR-Spektrum: Methylsingletts bei 3,88,3,67 und 2,07 delta.

4'-Deoxyvincristin wird als bräunlicher Feststoff in Aceton gelöst, und die Acetonlösung wird mit 0,96 ml 0,36 m (2%, Vol./ Vol.) Schwefelsäure in absolutem Ethanol versetzt. Es bildet sich eine grüne Lösung, die bei etwa 0°C über Nacht stehengelassen wird. Die Kristallisation wird durch Kratzen oder Impfen eingeleitet, und das feste kristalline 4'-Deoxyvincristinsulfat wird abfiltriert. Der Filterrückstand wird mit kaltem Aceton gewaschen. Das Sulfat ist in Aceton etwas löslich, weshalb das Filtrat zur Trockne eingedampft und der erhaltene Rückstand aus Ethanol umkristallisiert wird. Das so aus Ethanol erhaltene kristalline 4'-Deoxyvincristinsulfat wird abfiltriert, und der Filterrückstand wird mit Ethanol gewaschen. Die Gesamtausbeute an 4'-Deoxyvincristinsulfat beträgt 266 mg.

In gleicher Weise können 794 mg 4'-Deoxy-VLB «B» mit 900 mg Chromtrioxid in 10 ml Eisessig und 1 ml Wasser zu 4'-Deoxy-1-formylleurosidin oxidiert werden. Die Dünnschichtchromatographie des Rückstands, der direkt aus der Oxidationsmischung vor einer Reinigung erhalten wird, zeigt die Gegenwart eines grösseren und eines kleineren Fleckens sowie Spuren anderer Bestandteile. Durch Umkristallisieren des Rückstands aus wasserfreiem Ethanol erhält man nach Abfiltrieren und Waschen des Rückstands mit kaltem Ethanol reines kristallines Material, das nur einen Flecken ergibt.

Bei der Chromatographie der so erhaltenen kristallinen freien Base an 50 g Siliciumdioxid unter Verwendung eines Lösungsmit-65 telsystems aus gleichen Teilen Methylendichlorid und Ethylace-tat, das 20,30,45 bzw. 60 Volumenprozent Methanol enthält, als Elutionsmittel wie folgt:

35

40

45

50

55

60

Die Fraktionen 4 bis 7 werden vereinigt und ergeben 597 mg eines bräunlichen Rückstands, aus dem wiederum 435 mg weisses kristallines 4'-Deoxy-l-formylleurosidin erhalten werden (aus Ethanol). Die Verbindung hat die folgenden physikalischen Merkmale:

Massenspektrum: m/e 808 (M+), 806, 777, 775, 336, 138, 136. Infrarotspektrum: (CHC13) 3470, 1743, 1690, 1222 cm-1. Ultraviolettspektrum: (C2H5OH) 210, 222, 254, 290, 298 nm. 100 MHz NMR-Spektrum: Methylsingletts 3,87,3,65 und 2,07 delta.

pKa'=9,0 und 4,9 (in 66% DMF).

Das Sulfat wird durch Auflösen von 435 mg der freien Base in 10 ml warmem Ethanol und Zugabe von 1,5 ml 2-prozentiger Schwefelsäure in Ethanol hergestellt. Beim Kühlen scheidet sich kristallines 4'-Deoxy-l-formylleurosidinsulfat ab.

Beispiel 2

Herstellung von 4'-Deoxy-4-desacetyl-l-formylleurosidin 744 mg 4'-Deoxy-l-formylleurosidin werden mit 10 ml wasserfreiem Methanol vermischt, und die Mischung wird zum Sieden unter Rückfluss erwärmt, wobei sich der Feststoff auflöst und eine klare Lösung erhalten wird. Nach Zugabe von 200 mg festem Natriumcarbonat wird das Reaktionsgemisch 7,2 Stunden gerührt, wonach das Dünnschichtchromatogramm des rohen Reaktionsprodukts zeigt, dass praktisch das gesamte als Ausgängsmaterial verwendete 4'-Deoxy-l-formylleurosidin verschwunden ist. Das Lösungsmittel wird verdampft, und der Rückstand, der das bei der vorstehend beschriebenen Umsetzung gebildete 4'-Deoxy-4-desacetyl-l-formylleurosidin enthält, wird zwischen Wasser und Methylendichlorid verteilt. Die organische Schicht wird abgetrennt und getrocknet und liefert nach Verdampfen des Lösungsmittels 506 mg einer weissen festen Substanz, die praktisch reines 4'-Deoxy-4-desacetyl-l-formylleu-rosidin darstellt.

Die Verbindung hat folgende physikalische Merkmale: Massenspektrum: m/e 766 (M+), 764, 735, 254, 252, 205, 138 Infrarotspektrum: (CHC13) 3450,1734,1680,1596,1495,1456, 1434 cm-'.

100 MHz NMR-Spektrum: (CDC13) zeigt N-Formyl bei delta 8,80, Methylsingletts bei 3,89 (C,6-OCH3) und 3,66 (CiS-C02CH3), verbreitertes Multiplett bei 3,82 (C3-C02CH3), und kein N-CH3 bei etwa 2,75 (oder OCOCH3 bei etwa 2,06).

Das entsprechende Sulfat wird wie in den folgenden Beispielen beschrieben, unter Verwendung von Aceton als Lösungsmittel und von 0,26 ml 2-prozentiger Schwefelsäure in Ethanol hergestellt. Andere Lösungsmittel können verwendet werden, und es ist bevorzugt, ein Lösungsmittel zu verwenden, worin die Base leicht, aber das Sulfat nicht löslich ist.

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4'-Deoxy-4-desacetylvincristin und sein Sulfat werden in der 834 mg 4'-Deoxy-4-desacetylleurosidin, das aus Filtraten gleichen Weise aus 4'-Deoxyvincristin hergestellt. erhalten worden war, und etwa 30 bis 40 % des oben erwähnten polaren Materials enthält, werden in einer Mischung aus 100 ml Beispiel 3 Aceton und 7 ml Essigsäure gelöst. Die Lösung wird 15 Minuten Weitere mögliche Arbeitsweise zur Herstellung von 4'-Deoxy- 5 bei Zimmertemperatur gerührt und dann in einem Trockeneis-4-desacetyl-l-formyl-leurosidin Aceton-Bad unter einer Stickstoffatmosphäre auf — 65°C abgekühlt. 1110 mg Chromtrioxid werden in 13 ml Eisessig und 2 ml Ein Reaktionsgemisch aus l,48g4'-Deoxy-VLB «B», 1 g Wasser gelöst. Diese Lösung wird tropfenweise zu der Lösung Natriumcarbonat und 100 ml Methanol wird unter einer Stick- von 4'-Deoxy-4-desacetylleurosidin gegeben. Das Reaktionsge-stoffatmosphäre zum Sieden unter Rückfluss erwärmt. Die io misch wird 1 Stunde in dem Temperaturbereich von —60 bis Dünnschichtchromatographie einer nach 2 Stunden entnomme- —65°C gerührt und dann mit 35 ml 14 m wässrigem Amoniumhy-nen Probe zeigt, dass die Hydrolyse zur Entfernung der 4- droxid versetzt. Dann wird auf Eis gegossen und die gebildete Acetylgruppe erst etwa zur Hälfte abgelaufen ist. Nach Stehen- wässrige Suspension wird mehrere Male mit Chloroform extralassen über Nacht bei Zimmertemperatur wird das Reaktionsge- hiert. Die Chlororoformexktrate werden vereinigt, mit Wasser misch wiederum 8/: Stunden zum Sieden unter Rückfluss 15 gewaschen und getrocknet. Durch Entfernen des Chloroforms erwärmt. Die Dünnschichtchromatographie einer Probe unter im Vakuum werden 794 mg eines Rückstands erhalten, dessen Verwendung von Ether/Diethylamin/Toluol/Methanol Dünnschichtchromatographie zeigt, dass er aus Material besteht, (20:1:1:1) ergibt, dass die Umsetzung nun zu Ende gegangen ist. das ausser der ursprünglichen Verunreinigung mit sehr niedri-Der nach Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand gern RrWert nur einen Flecken ergibt. Dieser Rückstand wird an wird in einer Mischung aus Methylendichlorid und Wasser gelöst. 20 Woelm-Kieselgel unter Verwendung eines Anfangselutionsmit-Die Methylendichloridschicht wird abgetrennt und getrocknet. tels von Ethylether/Diethylamin/Toluol (20:1:1) mit einem Der durch Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand Methanolgehalt von 0,9 % chromatographiert. Das Elutionsmit-enthält nach seinem Dünnschichtchromatogramm eine sehr tel wird in Anteilen von 150 ml verwendet. Der prozentuale polare Substanz und das erwartete 4'-Deoxy-4-desacetylleurosi- Gehalt an Methanol wird bei jedem nachfolgenden 150 ml-Anteil din. Der 1,33 g ausmachende Rückstand wird in Benzol gelöst, 25 bis auf 15 % erhöht. Die Fraktionen, deren Dünnschichtomato-worin das stark polare Material praktisch unlöslich ist und durch gramm zeigt, dass sie 4'-Deoxy-4-desacetyl-l-formylleurosidin Filtrieren abgetrennt wird. Das Filtrat wird zur Trockne einge- enthalten, werden vereinigt und ergeben nach Verdampfen des dampft und der 500 mg ausmachende Rückstand wird an Woelm- Lösungsmittels 293 mg reines 4'-Deoxy-4-desacetyl-l-formylleu-Kieselgel unter Verwendung von Ether/Diethylamin/Toluol rosidin. Das Sulfat wird wie oben beschrieben hergestellt. (20:1:1) als Lösungsmittelsystem (mit steigenden Mengen 30 4'-Deoxy-4-desacetylvincristin kann wie oben beschrieben, Methanol) zum Eluieren chromatographiert. Der Verlauf der durch Hydrolyse von 4'-Deoxy-VLB « A» zu 4'-Deoxy-4-desace-Chromatographie wird durch Dünnschichtchromatographie ver- tyl-VLB und Oxidation der letztgenannten Verbindung mit Cr03 folgt und Fraktionen, worin 4'-Deoxy-4-desacetylleurosidin in Essigsäure bei —60°C hergestellt werden.

nachgewiesen wird, werden vereinigt. Nach Verdampfen des Die erfindungsgemässen Verbindungen der Formel I, insbe-

Lösungsmittels der vereinigten Fraktionen werden 348 mg Base 35 sondere diejenige, in deren Formel R1 Acetoxy bedeutet, sind erhalten, die mit 1,28 ml 2-prozentiger Schwefelsäure in Metha- starke Antitumormittel. Die Verbindung 4'-Deoxy-4-desacetyl-

nol (0,36m) versetzt wird. Durch Filtrieren werden 315 mg 4'- leurosidin ist auch ein oncolytisches Mittel. Zum Nachweis der

Deoxy-4-desacetylleurosidinsulfat erhalten. Wirksamkeit dieser Wirkstoffe gegen transplantierte Tumore in

4'-Deoxy-4-desacetylleurosidin hat die folgenden physikalischen Mäusen wird der Wirkstoff intraperitoneal in einer bestimmten

Merkmale: 40 Dosis7bis 10 Tage nach Tumoreinpflanzung oder stattdessen am

Massenspektrum: m/e 752 (M+), 750,693,691,555,338,240,138 ersten, fünften und neunten Tag nach der Einpflanzung verab-

Infrarotspektrum: (CHC13) 3455,1724,1610,1497,1457, reicht.

1431 cm~~^_ In Tabelle I sind die Ergebnisse mehrerer Versuche zusam-

100 MHz pmr-Spektrum: ô tms'5 9,43 (br s, 1, C3-OH), 7,92 (br s, mengestellt, bei welchen transplantierte Tumore in Mäusen mit

I, Indol-N-H), 7,47-7,63 (m, 1, C|,, -H), 7,06-7,31 (m, 3, C,2'.i4- 45 einer erfindungsgemässen Verbindung erfolgreich behandelt

H), 6.58 (s, 1, C|4-H), 6,10 (s, 1, C17-H), 5,78-5,87 (m, 2, C6 7-H), wurden. (ROS ist eine Abkürzung für Ridgeway osteogenes

4,10 (m,l, C4-H), 3,83 (s, 3, C16-OCH3), 3,78 (s, 3, C3-C02CH3), Sarcom, GLS für Gardner Lymphsarcom; P1534(J) undL1210

3,70 (s, 1, C->-H), 3,58 (s, 3, C18-C02CH3), 2,75 (s, 3, N-CH3), sind Leukämien; CA755 ist ein AdenocarcinomundB16istein

0,76-1,06 (in, 6, Co, ->,--H). " ' ' Melanom).

so

Tabelle I

Verbindung

Tumor mg/kg x Tage

Verabreichungsart prozentuale Inhibierung oder Verlängerung der Überlebenszeit

4'-Deoxy-l-desmethyl-

B 16

0,9 X 3

IP

toxisch

1-formylleurosidin,

0,25 - 0,6 x 3

IP

98 - 146

freie Base

755

0,6 x 3

IP

54

0,4 x 3

IP

73

0,25 X 3

IP

47

0,2 - 0,3 x 10

IP

toxisch

0,06 - 0,135 x 10

IP

33-93

0,03 - 0,09 x 9

IP

8-72

P1534(J)

0,18 x 10

IP

toxisch

P1534(J)

0,08 - 0,18 x 10

IP

9-46

GLS

0,25 - 0,6 X 3

IP

73 - 100

635 106

10

Tabelle I (Fortsetzung)

prozentuale Inhibierung Verabrei- oder Verlängerung

Verbindung Tumor mg/kg x Tage chungsart der Überiebenszeit

4' -Deoxy-1 -desmethyl-

GLS

0,18 x 3

IP

100

1 -formylleurosidin-

0,4 X 3

IP

100

sulfat

0,6 x 3

IP

toxisch

0,25 x 3

IP

toxisch

L1210

0,4-0,6 x 3

IP

toxisch

0,25 x 3

IP

65 4

ROS

0,4 x 3

IP

100

0,18 x 3

IP

93

0,25 x 3

IP

toxisch

4'-Deoxyvincristin-

B16

0,30 - 0,9 X 3

IP

36 - 143

sulfat

755

0,25-1,8 x 9-10

IP

toxisch

0,06-0,13 x 9 - 10

IP

15 - 100

0,9 x 3

IP

toxisch

0,1 -0,3 x 3

IP

36 - 100

GLS

0,4 - 0,6 x 3

IP

toxisch

0,18-0,25 x 3

IP

62-94

4'-Deoxy-4-desacetyl-

B16

0,15-0,6 x 3

IP

31 - 62 5

1-desmethyl-1 -formyl-

GLS

0,6 x 3

toxisch ieurosidin-sulfat

0,25 - 0,40 x 3

94 - 100

0,18 x 3

95

4'-Deoxy-4-desacetyl-

755

0,6 x 3

IP

toxisch leurosidin-sulfat

0,4 x 3

IP

37

0,25 x 3

IP

32

B16

0,6 x 3

IP

toxisch

0,3 x 3

IP

103

0,15 x 3

IP

77 **

GLS

0,9 x 3

IP

toxisch

0,6 x 3

IP

63

0,4 x 3

IP

toxisch

:: 1 oder mehr Undefinierte Überlebende • verschobene Behandlung am 5., 9. und 13. Tag

Bei der Verwendung der neuen Verbindungen als Antitumor- der Wirkungsstärke und der Toxizität des Wirkstoffs abhängt,

mittel kann die Verabreichung auf parenteralem oder oralem Ein anderer Weg zur Feststellung einer therapeutischen Dosis

Wege erfolgen. Für die orale Verabreichung wird ein pharma- beruht auf der Körperoberfläche, wobei eine Dosis im Bereich zeutisch annehmbares Salz einer Base der Formel II mit einer 50 von 0,1 bis 10 mg/m2 Körperoberfläche alle 7 oder 14 Tage nichttoxischen Säure, zum Beispiel das Sulfat, mit Stärke oder verabreicht wird.

einem anderen Träger vermischt, und die Mischung wird in

Gelatinekapseln eingebracht, die 7,5 bis 50 mg Wirkstoff enthal- Bei der klinischen Anwendung der erfindungsgemässen Verbinten. Das antineoplastisch wirksame Salz kann auch mit Stärke, düngen wird zunächst die gleiche Verabreichungsart und der einem Bindemittel oder Gleitmittel vermischt, und die Mischung 55 gleiche Träger gewählt und die gleiche Art von Tumoren behan-zu Tabletten verpresst werden, die 7,5 bis 50 mg des Salzes delt, wie sie für Vincristin oder VLB angegeben sind. Dabei enthalten. Die Tabletten können eingekerbt sein, damit riiedri- können die erfindungsgemässen Verbindungen in geringeren gere oder unterteilte Dosen angewandt werden können. Die Dosen verabreicht werden, als Vincristin und VLB. Bei klini-parenterale Verabreichung ist jedoch bevorzugt. Hierfür werden sehen Prüfungen ist, wie bei anderen Antitumormitteln, beson-isotone Lösungen verwendet, die 1 bis 10 mg/ml eines Salzes ders auf die Wirkung der oncolytischen Verbindungen der Erfin-eines Indoldihydroindols der Formel II, z. B. des Sulfats, enthal- dung gegen die zehn «Signal»-Tumore zu achten, die auf Seite ten. Die Verbindungen werden in Verhältnissen von 0,01 bis 1 266 von «The Design of Clinical Trials in Canser Therapy» mg/kg, vorzugsweise von 0,1 bis 1 mg/kg Körpergewicht ein- oder herausgegeben von Staquet (Futura Publishing Company, 1973), zweimal pro Woche oder alle zwei Wochen verabreicht, was von angegeben sind.

M

Claims

635 106

PATENTANSPRÜCHE 1. Dimere Indoldihydroindole der allgemeinen Formel

A

4'> R4

11' 1 4''

, A,o'\

12 î n—ü î

,31 ü,a. SK's-v Formd(1)

• ,1 5 N f—C-O-CHs

1 4

|—~C-

1 ] II 9 /8\

H i 0 |Tö 7j]

1 » è î -î e R® .CHS

\'^ \ / ru /

M 5 S 9 59"'-*°CHS

CHsO—»x 6- A Ì.2 4,«—-R1
». . « 9.2 I

v„Xe\/ \:/(

30

OH

o

I

D2

C-O-CHo

II

0

worin bedeuten 2. Als Verbindungen nach Anspruch 1:

R1 die Gruppe OH oder O-C-CH3, 4'-Desoxyvincristin,

II 4'-Desoxy-l-formylleurosidin,

O 4'-Desoxy-4-desacetyl-l-formylleurosidin, und

4'-Desoxy-4-desacetylleurosidin und ihre Salze.

R2 die Gruppe CHO oder, wenn R1 die Gruppe OH bedeutet, 3. Als Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2: Die Sulfate,

die Gruppe CH3, einer der Reste 4. Antitumor-Arzneimittel, enthaltend einen inerten Träger

, , und eine pharmazeutisch wirksame Verbindung der Formell

R undR Wasserstoff und der andere dieser Reste die Gruppe oder dn pharmazeutisch annehmbares Salz als Wirkstoff.

: r" 40 5. Verfahren zur Herstellung von dimeren 1-Formyl-indoldi-

R5 Wasserstoff, und ihre Salze. hydroindolen der Formel

5'

A R3

R4

,, r-Y^-r
,2.f irx- T,

M ç-—C

'f—C-O-CHc

14 , l ©.

H ! o

II e i 7iî

> X'A/

I yTS—I

CH3O—«v e es o-—R

V/e\/

• N e—OH

!

CHO

C-O-CH3

II

0

635 106

worin bedeuten

R1 die Gruppe OH oder O-C-CH,,

O

einer der Reste

R1 und R4 Wasserstoff und der andere dieser Reste die Gruppe C2H5 oder ihren Salzen, dadurch gekennzeichnet, dass ein dimeres 1-Methylindoldihydroindol der Formel

,K ET

,, f r.:4 -

./W'x ?

\?S>V

Formel (III)

I

H
CH.?

f—C-O-CHs

! S

9 /8S

i 1 ® 6.®

i/iK \1^ \ /

.CHs

•CH2

worin R', R-' und R4 die oben angegebenen Bedeutungen haben, gekennzeichnet, dass die Umsetzung bei —50 bis —65°C durchge-mit einem Chromsäureoxidationsmittel bei niedriger Tempera- führt wird.

tur umgesetzt und die freie Base oder ein Salz davon gewonnen wird.

35
3. Verfahren nach Ansprüchen 5 oder 7 zur Herstellung von
6. Verfahren nach Anspruch 5 zur Herstellung von dimerem 1- dimerem 1-Formyl-indoldihydroindol der Formel II, dadurch Formyl-indoldihydroindol der Formel II, dadurch gekennzeich- gekennzeichnet, dass das Reaktionsgemisch Aceton und Essignet, dass als Chromsäureoxidationsmittel Chromtrioxid und säure enthält.

Essigsäure verwendet wird.
7. Verfahren nach Anspruch 5 oder 6 zur Herstellung von 40 9. Verfahren zur Herstellung von dimeren 4-DesacetyIindoldi-dimerem 1-Formyl-indoldihydroindol der Formel II, dadurch hydroindolen der Formel

11

r~Ln

Formel (IV)

/V°Xs-\^

,a Î ou. r

Y A,5/\,s/1'

0 Fl 7|T ,

/X CH

Ii: if~i :Î";;

i

H

R'

C-O-CHs tl

0

635 106

4

worin R"1 und R Wasserstoff und der andere dieser Reste die Gruppe

R: die Gruppe CH, oder CHO und einer der Reste C:H5 bedeuten, oder ihrer Salze, dadurch gekennzeichnet,

dass ein dimeres 4-Acetoxvindoldihydroindol der Formel

5'

- R3

P/ - - -

; H

1 9

IO «5 3;

. / \ \ 9' \ /.

::i o-J:.
es. /~v° Formel (V)

>1 f^-C-O-CHs

1- I ' U

H O s /a V

' Fi 1

' <! 1 / \ jCHS

r/1\ \*y \ / m /

915 $ f ' ' "CHz

13

CH3O——O-C—CH3

s

RS

K C-O-CHs i!

0

worin R2, R1 und R4 die oben angegebenen Bedeutungen haben,

in einem Reaktionsgemisch hydrolysiert und die 4-Desacetylver-

bindung als freie Base oder als Salz davon gewonnen wird. 35 Die Erfindung bezieht sich auf Derivate von 4'-Deoxy-VLB
10. Verfahren nach Anspruch 9 zur Herstellung eines dimeren "A" und 4'-Deoxy-VLB "B".

4-Desacetyl-indoldihydroindols, dadurch gekennzeichnet, dass man ein dimeres 4-Acetoxy-indoldihydroindol mit Natriumcar- Gegenstand der Erfindung sind dimere Indoldihydroindole bonat in wasserfreiem Methanol hydrolysiert. der Formel

635 106

R3 und R4 Wasserstoff und der andere dieser Reste die Gruppe C2H5,

R5 Wasserstoff, und Salze dieser Verbindungen.