CH645899A5 - Verbindung mit anthelminthischer und akarizider wirkung. - Google Patents
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Description
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf eine neue Verbindung der Formel B, die im folgenden als Verbindung B-41 D bezeichnet wird; sie wird durch Züchtung eines die Verbindung der Formel B erzeugenden Mikroorganismus der Gattung Streptomyces in einem Nährboden dafür und Abtrennen der so erzeugten Verbindung von dem Nährboden 60 hergestellt und hat wertvolle akarizide und anthelminthische Aktivitäten.
Aus der GB-PS Nr. 1 390 336 der Patentinhaberin ist bekannt, dass Mikroorganismen der Gattung Streptomyces, insbesondere Streptomyces Stamm B-41-146 (FERM P-1438), eine antibiotische Substanz B-41 zu erzeugen vermögen, die in neun verschiedene Bestandteile aufgetrennt werden kann, die in der genannten Patentschrift als Ai, A2,
R2
hX
(I)
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wiedergegeben. Die Definitionen der Symbole R1, R2, R3, R4 und R5 sind in der folgenden Tabelle I angegeben; diese enthält auch, sofern vorhanden, die entsprechende B-41-Bezeichnung, wie sie in der GB-PS Nr. 1 390 336 angewandt wird. Von den durch Streptomyces Stamm B-41-146 erzeugten dreizehn bekannten Verbindungen sind die Milbemycine ai-io hinsichtlich der Struktur der erfindungsge-mässen neuen Verbindung B-41 D am ähnlichsten, und die Definitionen der Symbole R1, R2, R3, R4 und R5die für die Verbindung B-41 D zutreffen, sind ebenfalls in der Tabelle I angegeben.
In dieser Tabelle werden die folgenden Abkürzungen verwendet:
MH bedeutet eine 2-Methylhexanoyloxygruppe der Formel:
o ch3 II l
-o-c — ch -c4h9
PC bedeutet eine 2-Pyrrolylcarbonyloxymethylgruppe der Formel:
-CH2-0-C-ÇI
h
Tabelle I
Milbemycin
R1
R2
R3
R4
R5 B-41
Cti
H
H
chs ch3
oh As
0C2
H
H
ch3
chs och3b2
CC3
H
H
c2h5
ch3
oh A4
CC4
H
H
c2h5
ch3
och3b3
a?
oh
MH
ch3
ch3
oh Ai
<X6
oh
MH
ch3
ch3
ochsbi a?
oh
MH
c2h5
ch3
oh -
an oh
MH
c2h5
ch3
och3-
(X9
H
H
ch3
PC
oh Ci aio
H
H
c2h5
PC
oh C2
-
H
H
ch(ch3)2
ch3
oh D
Die Strukturen der Milbemycine ßi und ß2 werden durch die Formel:
ch3
(II)
oh oh ch3
och.3
wiedergegeben, worin R6 für Milbemycin ßi Methyl und für Milbemycin ß2 Äthyl bedeutet. Milbemycin ßi entspricht der Verbindung B-41 Ai aus der GB-PS Nr. 1 390336.
Die Struktur von Milbemycin ß3 wird durch die Formel:
ch3
ch3
(III)
ch;
ch oh wiedergegeben.
Es wurde nun, wie oben bereits erwähnt, eine neue Verbindung gefunden, die durch das gleiche Fermentierungsver-fahren erhältlich ist, wie es zur Herstellung der Milbemycine verwendet wird, die aber eine bessere akarizide und anthel-minthische Aktivität hat.
Somit bezieht sich die vorliegende Erfindung, wie erwähnt, auf die Verbindung der Formel B, auch Verbindung B-41D genannt, die der Formel:
CH
CH
CH3
OH
CH3
OH
entspricht.
Die Erfindung bezieht sich auch auf ein Verfahren zur Herstellung der Verbindung B-41D durch Züchtung eines die Verbindung B-41D erzeugenden Mikroorganismus der Gattung Streptomyces in einem Nährboden dafür und Abtrennung der Verbindung B-41 D von dem Nährboden.
Die Verbindung B-41 D hat die oben angegebene Formel und die folgenden physikalischen und chemischen Eigenschaften:
(1) Aussehen: amorphes Pulver oder Kristalle.
(2) Elementaranalyse für C33H47O7:
Ber.: C 71,09%; H 8,80%; O 20,11%.
Gef.: C 71,40%; H 8,82%; O 20,22%.
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(3) Molekulargewicht: 556.
(4) Ultraviolettabsorptionsspektrum:
ist in Fig. 1 der beiliegenden Zeichnung dargestellt. Absorp-tionsmaxima bei 237 nm (Schulter, 8 = 29 400) und 243 nm (s = 30 500).
(5) Infrarotabsorptionsspektrum (Kaliumbromidtablette): ist in Fig. 2 der beiliegenden Zeichnung dargestellt.
(6) Magnetisches Resonanzspektrum bei 100 MHz in CDCb unter Verwendung von Tetramethylsilan als innerer Standard: ist in Fig. 3 der beiliegenden Zeichnung dargestellt.
(7) Löslichkeit: Leicht löslich in Äthylacetat, Aceton, Äthanol und Methanol.
Kaum löslich in Wasser.
(8) Dünnschichtchromatographie auf Kieselgel (Kieselgel 60 F254, Merck Co.), entwickelt mit einem Gemisch aus Dioxan und Tetrachlorkohlenstoff im Volumenverhältnis 18:82:
Rf-Wert = 0,40.
Die Verbindung B-41 D wird hergestellt, indem man einen Mikroorganismus der Gattung Streptomyces, aber insbesondere Streptomyces Stamm FERM P-1438, auch Stamm B-41 -146 genannt, züchtet. Die morphologischen, Kultur-und physiologischen Merkmale und taxonomischen Eigenschaften des Stammes B-41-146 sind im einzelnen in der GB-PS Nr. 1 390 336 beschrieben. Dieser Stamm wurde am 26. April 1972 beim Fermentation Research Institute, Agency of Industriai Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, 1-3, Higashi 1-chome, Yatabe-machi Tsubuka-gun, Ibaraki-ken 305-JP hinterlegt und kann dort unter der Ordnungsnummer FERM P-1438 (auch als «Bikoken-kinki 1438" bezeichnet) bezogen werden.
Bekanntlich neigen Mikroorganismen der Gattung Streptomyces dazu, sowohl unter natürlichen Bedingungen als auch bei Anwendung von künstlichen Operationen, wie beispielsweise ultraviolette Strahlung, ionisierende Strahlung oder chemische Behandlung, zu mutieren. Dies trifft auch für den im erfindungsgemässen Verfahren verwendeten Stamm B-41-146 zu. Demzufolge kann jede die Verbindung B-41D erzeugende Mutante des beschriebenen Streptomyces-Stammes B-41-146 verwendet werden, um die erfïndungsge-mässe Verbindung herzustellen.
Die erfindungsgemässe Verbindung kann erhalten werden, indem man Streptomyces Stamm B-41-146 in einem geeigneten Nährboden züchtet und dann die resultierende Verbindung aus der Fermentierungsflüssigkeit gewinnt. Beliebige bekannte Nährstoffe, die bisher schon für die Züchtung von Mikroorganismen der Gattung Streptomyces verwendet worden sind, können verwendet werden. Im allgemeinen sollte ein solcher Nährboden bekanntlich mindestens eine oder mehrere Quellen von assimilierbarem Kohlenstoff und eine oder mehrere Quellen von assimilierbarem Stickstoff enthalten. Zu den geeigneten Kohlenstoffquellen gehören Glucose, Saccharose, Stärke, Glycerin, Malzextrakt, Melasse und Sojabohnenöl. Eine besonders bevorzugte Kohlenstoffquelle ist Glucose, vorzugsweise in einer Menge von bis zu 8% (Gew./Vol.), insbesondere von 6 bis 8% (Gew./Vol.),
bezogen auf den Nährboden. Es wird bevorzugt, nicht nur Glucose, sondern als zusätzliche Kohlenstoffquelle ausserdem Lactose und/oder Maltose und/oder Maisstärke, vorzugsweise in einer Menge von 0,5 bis 2,0% (Gew./Vol.), zu verwenden. Um einen konstanten pH-Wert aufrechtzuerhalten, setzt man vorzugsweise während der ganzen Züchtung zusätzliche Glucose zu.
Zu den geeigneten Stickstoffquellen gehören Sojabohnen-s mehl, Weizenkeime, Fleischextrakt, Pepton, frische Hefe, Maisquellwasser, Ammoniumsulfat und Ammoniumnitrat. Eine besonders bevorzugte Stickstoffquelle ist eine Kombination von Sojabohnenmehl und Magermilch, vorzugsweise 0,5 bis 1,0% (Gew./Vol.) Sojabohnenmehl und 1,0 bis 2,0% 10 (Gew./Vol.) Magermilch. Gewünschtenfalls kann in den Nährboden auch eine Aminosäure (z.B. Glycin oder Arginin) einverleibt werden.
Gewünschtenfalls können anorganische Salze, wie Calciumcarbonat, Natriumchlorid, Kaliumchlorid oder Phos-ls phate, zugesetzt werden; auch andere organische oder anorganische Substanzen, die dazu bestimmt sind, das Wachstum der Mikroorganismen zu unterstützen und die Erzeugung der gewünschten Verbindung zu begünstigen, können zugesetzt werden.
20 Überraschend gute Ausbeuten an der Verbindung B-41 D können erhalten werden, wenn man einen Nährboden verwendet, der 6 bis 8% (Gew./Vol.) Glucose, 0,5 bis 2% (Gew./ Vol.) Lactose und/oder Maltose und/oder Maisstärke, 0,5 bis 1,0% (Gew./Vol.) Sojabohnenmehl und 1,0 bis 2,0% 25 (Gew./Vol.) Magermilch enthält.
Obgleich ein beliebiges bekanntes Verfahren zur Züchtung von Streptomyces Stamm B-41-146 angewandt werden kann, ist wie im Falle der Fermentierung zur Herstellung anderer biologisch aktiver Substanzen die Flüssigkeitskultur, insbe-30 sondere die submerse Kultur, das geeignetste Verfahren. Die Züchtung wird vorzugsweise aerob und bei einer Temperatur, die innerhalb eines weiten Bereiches liegen kann, zweckmässig bei 22 bis 30°C, vorzugsweise bei ca. 28°C, ausgeführt. Die Erzeugung der gewünschten Verbindung B-41 D 35 erreicht nach 5- bis lOtätiger Züchtung entweder unter Schütteln oder in einem Tank ein Maximum.
Die Bestimmung der Verbindung B-41D in der Kulturflüs-sigkeit kann folgendermassen ausgeführt werden: Eine bekannte Menge, z.B. 3 g, der Kulturflüssigkeit wird in ein 40 kleines Reagenzglas gegeben; dann werden 10 ml Aceton zugesetzt, worauf das Gemisch durch Schütteln extrahiert und dann zentrifugiert wird. Die so erhaltene überstehende Flüssigkeit wird mit Aceton auf ein Gesamtvolumen von 10 ml aufgefüllt. Die resultierende Lösung wird an einer vor-45 bestimmten Stelle auf eine Dünnschichtchromatographieplatte (Kieselgel, z.B. Kieselgel 60 f254, erhältlich von E. Merck) in einer Menge von z.B. 10 bis 20 jxl aufgebracht. Die Platte wird dann 4 Stunden lang mit einem Gemisch aus Dioxan und Tetrachlorkohlenstoff im Volumenverhältnis 50 18:82 entwickelt. Darauf wird die Probe mit Hilfe eines bei zwei Wellenlängen messenden Dünnschichtchromatogra-phieabtastgerätes bei einer Wellenlänge von 245 nm (Millimikron) und der Vergleich bei 380 nm untersucht. Der Betrag der Absorption wird mit demjenigen einer bekannten Stan-55 dardprobe der Verbindung verglichen, woraus die Menge der Verbindung B-41D berechnet werden kann.
Die Verbindung B-41D kann aus der Kulturflüssigkeit unter Verwendung eines natürlichen Adsorptionsmittels, wie Aktivkohle, Aluminiumoxyd oder Kieselgel, eines syntheti-60 sehen Adsorptionsmittels, wie Diaion HP-20, ein Produkt der Mitsubishi Chemical Industries, Limited, eines Absorptionsmittels, wie Avicel, ein Produkt der Asahi Chemical Industry Co., Limited, oder Filtrierpapier, eines Ionenaustauscherharzes, eines Ionenaustauschergelfilters oder dergleichen 65 gewonnen werden. Die Gewinnung kann aber nach dem folgenden Verfahren am wirksamsten ausgeführt werden:
Zuerst wird die Fermentierungsflüssigkeit unter Verwendung eines Filterhilfsmittels, wie Diatomeenerde, filtriert,
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wobei ein Filterkuchen erhalten wird, der dann mit Methanol extrahiert wird, um die gewünschte Verbindung in einer wässrig-methanolischen Lösung zu lösen. Dann wird die wässrig-methanolische Lösung mit Wasser versetzt und die resultierende Lösung mit Hexan extrahiert. Die Hexanphase wird abgetrennt und durch Eindampfen unter vermindertem Druck eingeengt, wobei eine ölige Substanz erhalten wird, die die gewünschte Verbindung B-41D enthält. Diese ölige Substanz wird auf eine Kieselgel (z.B. Wakogel C-200) enthaltende Säule aufgetragen und mit einem geeigneten Gemisch, z.B. im Volumenverhältnis 95:5, von Hexan und Aceton eluiert, wobei Fraktionen aufgefangen werden, die die gewünschte Verbindung enthalten. Diese Fraktionen werden durch Eindampfen unter vermindertem Druck eingeengt und ergeben wiederum eine ölige Substanz, die in einer kleinen Menge Methanol gelöst und auf eine Säule mit Sephadex LH-20 (Markenprodukt der Pharmacia Co.) aufgetragen und mit Methanol eluiert wird. Die die gewünschte Substanz enthaltenden Fraktionen werden aufgefangen, das Lösungsmittel wird entfernt, und der Rückstand wird in einer kleinen Menge Methanol gelöst. Wasser wird zugesetzt, worauf man das Gemisch bei Raumtemperatur stehen lässt. Die resultierende Verbindung B-41 D wird in Form eines Schaumes oder von Blasen erhalten, die beim Zerplatzen ein amorphes Pulver ergeben. Wenn dieses aus einem Gemisch aus Hexan und Äthylacetat im Volumenverhältnis 20:1 umkristallisiert wird, erhält man die Verbindung B-41 D in Form kleiner Nadeln vom Schmelzpunkt 186 bis 188°C.
Obgleich die Verbindung B-41 D vor der Verwendung abgetrennt und gereinigt werden kann, z.B. in der oben beschriebenen Weise, ist es auch möglich, das Reinigungsverfahren in jedem beliebigen gewünschten Stadium abzubrechen und das rohe Produkt, das ein Gemisch von Milbe-mycinen sowie die Verbindung B-41 D enthält, als solches zu verwenden. Wenn ein Gemisch, das zwei oder mehr derartige Verbindungen enthält, ohne vollständige Trennung verwendet wird, genügt es, wenn es so gereinigt ist, dass es bei einer Konzentration von 5 ppm eine 100%ige akarizide Wirkung hat. Der Gehalt an Verbindung B-41 D in dem rohen Gemisch beträgt in diesem Falle vorzugsweise mindestens 25 Gew.%, insbesondere ca. 50 Gew.%, wobei der Rest aus Verunreinigungen aus der Kulturflüssigkeit sowie anderen Milbemycinen besteht.
Die erfindungsgemässe Verbindung hat eine hervorragende akarizide Aktivität gegen adulte Tiere und Eier von Milben, wie die gemeine Spinnmilbe (Tetranychus urticae), die Obstbaumspinnmilbe (Panonychus ulmi), die «citrus red mite» (Panonychus citri) und Rost-Gallmilben (z.B. der Gattungen Aculops oder Aculus), die als Parasiten auf Obst, Gemüsen und Blumen vorkommen. Sie ist auch aktiv gegen Milben der Gattungen Ixodidae, Dermanyssidae und Sar-coptidae, die als Parasiten auf Tieren vorkommen. Die Verbindung ist ferner äusserst aktiv gegen Ektoparasiten, wie Oestrus, Lucilia, Hypoderma, Gasterophilus, Fliegen, Läuse usw., sowie Insekten von hygienischer Bedeutung, wie Schaben oder Fliegen, und andere Schadinsekten in Gartenbau und Landwirtschaft, wie Blattläuse und Larven von Insekten der Ordnung Lepidoptera. Ausserdem ist sie aktiv gegen Nematoden, wie diejenigen der Gattung Meloidogyne, und Wurzelmilben, wie diejenigen der Gattung Rhizogly-phus, die im Erdboden vorkommen.
Für die Verwendung als anthelminthisches oder akarizides Präparat wird die erfindungsgemässe Verbindung vorzugsweise mit einem Träger verdünnt, um Präparate, wie Pulver, grobe Pulver, Granulate, feine Granulate, Spritzpulver, emulgierbare Konzentrate oder Öle, zu bilden.
Die bei der Herstellung derartiger Präparate verwendeten Träger können synthetisch oder natürlich und anorganisch oder organisch sein; im allgemeinen kann jeder beliebige Träger verwendet werden, der herkömmlicherweise zu Insektiziden oder Akariziden zugesetzt wird, um zu erleichtern, dass die Wirkstoffkomponente das zu behandelnde Objekt, sz.B. Pflanze, Milbe oder schädliches Insekt, erreicht, oder um die Aufbewahrung, den Transport oder die Handhabung der Wirkstoffkomponente zu erleichtern.
Zu den Beispielen von geeigneten festen Trägern gehören anorganische Substanzen, wie Ton, Talkum, Diatomeenerde, io Kaolin, Bentonit, Calciumcarbonat oder synthetisches Calci-umsilikat, natürliche oder synthetische Harze, wie Cumaron-harze, Alkydharze und Polyvinylchloride, Wachse, wie Car-naubawachs und Paraffinwachs, Nussschalen, wie Walnuss-schalen, oder Sojabohnenmehl.
15 Zu den Beispielen von geeigneten flüssigen Trägern gehören Wasser, Alkohole, wie Äthanol oder Isopropanol, Glycole, wie Äthylenglycol, Glycoläther, wie Äthylenglycol-monophenyläther oder Diäthylenglycolmonoäthyläther, Ketone, wie Aceton, Methylisobutylketon, Cyclohexanon, 20 Acetophenon oder Isophoron, Äther, wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, aromatische Kohlenwasserstoffe, wie Benzol, Toluol, Xylol oder Methylnaphthalin, chlorierte Kohlenwasserstoffe, wie Trichloräthylen und Tetrachlorkohlenstoff, sowie Erdölfraktionen mit niedrigem, mittlerem und hohem 25 Siedepunkt, die Kerosin, Leichtöle oder aromatische Kohlenwasserstoffe enthalten.
Die erfindungsgemässe Verbindung kann auch als Aerosol formuliert werden; in diesem Fall wäre der Träger ein Treibmittel. Zu den geeigneten Treibmitteln gehören gasförmige 30 Fluorkohlenstoffe, einschliesslich derjenigen, die unter der Markenbezeichnung «Freon» in den Handel gebracht werden, Flüssiggas, Dimethyläther und monomeres Vinyl-chlorid.
Gewünschtenfalls kann das Präparat auch ein oberflächen-35 aktives Mittel zum Zweck der Emulgierung, Dispergierung, Benetzung oder Ausbreitung des Wirkstoffes enthalten; ein solches oberflächenaktives Mittel kann entweder ionisch oder nicht-ionisch sein. Zu den Beispielen von geeigneten anionischen oberflächenaktiven Mitteln gehören die 40 Natrium- und Calciumsalze von Ligninsulfonsäure, die ' Natrium- und Kaliumsalze der Ölsäure, das Natriumsalz der Laurylsulfonsäure und die Natrium- und Calciumsalze der Dodecylbenzolsulfonsäure. Zu den Beispielen von geeigneten kationischen oberflächenaktiven Mitteln gehören die 45 höheren aliphatischen Amine und Kondensationsprodukte der höheren aliphatischen Amine mit Äthylenoxyd. Zu den Beispielen von geeingeten nicht-ionischen oberflächenaktiven Mitteln gehören Glyceride von Fettsäuren, Saccharoseester von Fettsäuren, Kondensationsprodukte von Äthylen-50 oxyd mit höheren aliphatischen Alkoholen, Kondensationsprodukte von Äthylenoxyd mit höheren Fettsäuren, Kondensationsprodukte von Äthylenoxyd mit Alkylphenolen oder Alkylnaphtholen und Copolymerisate von Äthylenoxyd mit Propylenoxyd.
55 Die erfindungsgemässen Präparate mit anthelminthischer und akarizider Wirkung können alternativ oder zusätzlich ein Schutzkolloid, wie Gelatine, Gummiarabikum, Casein, Polyvinylalkohol oder Carboxymethylcellulose, oder ein thi-xotropes Mittel, wie Natriumpolyphosphat oder Bentonit, 60 enthalten. Die Präparate können auch andere Verbindungen mit akarizider Aktivität enthalten, z.B. ß,ß-Dimethylacryl-säure-( 1 -methylpropyl)-4,6-dinitrophenyIester, Di-(p-chlor-phenyl)-cyclopropylcarbinol, N' -(4-Chlor-2-methylphenyl)-
65 N,N-dimethylformamidin, 2,4,4',5-Tetrachlordiphenyl-sulfon, l,l-Bis-(p-chlorphenyl)-2,2,2-trichloräthanol, 2-sek.-Butylphenyl-N-methylcarbamat, m-Tolyl-N-methylcar-bamat oder Mineralöl, um die Aktivität des Präparates zu
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erhöhen; in manchen Fällen kann eine synergistische Wirkung erwartet werden.
Es ist natürlich auch möglich, die erfindungsgemässe Verbindung im Gemisch mit anderen Fungiziden, Herbiziden, Pflanzenwachstumsregulatoren, Anlockmitteln oder Düngemitteln zu verwenden.
Die Verbindung B-41 D ist auch hochwirksam als Parasi-tizid für die Behandlung von Menschen und Tieren. Die gewöhnlich als «Parasitismus» bezeichneten Krankheiten bei erkrankten Menschen und Tieren werden durch vielzellige Organismen verursacht, die allgemein als Würmer bezeichnet werden. Die Parasiten können Vieh, Geflügel und Haustiere, wie Schweine, Schafe, Ziegen, Kühe, Pferde, Hunde, Katzen und Hühner, als Epidemie befallen und können schwere wirtschaftliche Schäden verursachen. Besonders eine als Nematoden bezeichnete Gruppe von Parasiten unter den Würmern kann sich unter verschiedenen Tieren ausbreiten und häufig schwere Infektionen verursachen. Typische Gattungen von Nematoden, die die oben aufgezählten Tieren infizieren,
sind:
Haemonchus
Trichostrongylus
Ostertagia
Nematodirus
Cooperia
Ascaris
Bunostomum
Oesophagostomum
Chabertia
Trichuris
Strongylus
Trichonema
Dictyocaulus
Capillaria
Heterakis
Toxocara
Ascaridia
Oxyuris
Ancylostoma
Uncinaria
Toxascaris
Parascaris und
Strongyloides
Einige der Parasiten der Gattungen Nematodirus, Cooperia und Oesophagostomum befallen die Eingeweide, während Parasiten der Gattungen Hemonchus und Ostertagia den Magen befallen und Parasiten der Gattung Dictyocaulus in den Lungen gefunden werden. Parasiten der Familien Fila-riidae oder Setariidae werden im Herzen, den Blutgefässen und Geweben sowie Organen, wie den subkutanen Geweben und den Lymphgefässen, gefunden.
Die erfindungsgemässe Verbindung hat eine Breitspektrum-Aktivität gegen viele Endoparasiten bei verschiedenen Tieren und ist z.B. wirksam gegen Parasiten der Gattung Dirofilaria bei Hunden und der Gattungen Nematospiroides, Syphacia und Aspiculuris bei Nagetieren.
Die Verbindung B-41D ist auch wirksam gegen verschiedene Parasiten, die Menschen infizieren. Typische derartige Parasiten, die im Verdauungstrakt von Menschen gefunden werden, sind Parasiten der Gattungen
Ancylostoma
Necator
Ascaris
Strongyloides
Trichinella Capillaria Trichuris und Enterobius.
Andere medizinisch signifikante Parasiten, die im Blut, in den Geweben oder in Organen mit Ausnahme des Verdauungstraktes gefunden werden, sind solche der Gattungen Wuchereria, Brugia, Onchocerca und Loa aus der Familie Filariidae, Dracunculus aus der Familie Dracunculidae und Strongyloides und Trichinella, was eine Ausnahme ist, da sie normalerweise Ectoparasiten sind, aber häufig als Endoparasiten im Verdauungstrakt auftreten.
Wenn die Verbindung B-41 D als Parasitizid für Menschen und Tiere verwendet werden soll, wird sie vorzugsweise oral in Form einer Flüssigkeit oder von Kapseln verabreicht. Sie kann als wässrige Lösung oder als Lösung in einem anderen geeigneten, nicht toxischen Lösungsmittel oder als Suspension oder Dispersion, die ein Suspendierhilfsmittel und ein Netzmitel, wie Bentonit, oder andere Bestandteile enthält, formuliert werden. Im allgemeinen enthalten derartige Flüssigkeiten auch ein Antischaummittel. Normalerweise wird es bevorzugt, dass die Flüssigkeit den Wirkstoff in einer Menge von 0,01 bis 0,5 Gew.%, insbesondere von 0,01 bis 0,1 bis 0,1 Gew.%, enthält.
Es ist auch möglich, die Verbindung B-41 D in Form einer Dosierungseinheit, z.B. in Form von trockenen festen Kapseln, Pillen oder Tabletten, die eine vorbestimmte Menge des Wirkstoffes enthalten, zu verabreichen. Diese Formulierungen können erhalten werden, indem man den Wirkstoff mit einem oder mehreren fein pulverisierten Materialien, wie Verdünnungsmitteln, Füllstoffen, Sprengmitteln oder Bindemitteln, z.B. Stärke, Lactose, Talkum, Magnesiumstearat oder pflanzliche Gummis, homogen mischt. Das Gewicht und der Gehalt an Wirkstoff in derartigen Dosierungseinheiten kann je nach dem Typ des zu behandelnden Tieres, der Schwere der Infektion, der Art des Parasiten und dem Körpergewicht des Menschen bzw. Tieres, innerhalb weiter Grenzen schwanken.
Die Verbindung B-41 D kann an Tiere verabreicht werden, indem man sie gleichmässig in dem Futter der Tiere verteilt, oder sie kann in Form einer Flüssigkeit oder eines Feststoffes über das Futter gegossen bzw. gestreut oder in Form von Pellets verwendet werden. Um eine befriedigende antiparasitische Aktivität zu erzielen, enthält das Futterendprodukt den Wirkstoff zweckmässig in einer Menge von 0,0001 bis 0,02 Gew.%.
Die Verbindung B-41D kann auch in einem flüssigen Träger gelöst oder dispergiert werden und durch Injektion in den Düsenmagen von Geflügel, die Muskeln, die Lungen oder unter die Haut parenteral verabreicht werden. Als Träger für die parenterale Verabreichung wird vorzugsweise ein pflanzliches Öl, wie Erdnussöl oder Baumwollsamenöl, verwendet. Bei der parenteralen Verabreichung ist der Wirkstoff vorzugsweise in einer Menge von 0,05 bis 50 Gew.% der Formulierung vorhanden.
Auch die topische Verabreichung der Verbindung B-41D ist möglich; in diesem Falle wird der Wirkstoff vorzugsweise mit einem geeigneten Träger, wie Dimethylsulfoxyd oder einem Kohlenwasserstofflösungsmittel, gemischt. Die resultierende Formulierung kann direkt auf die äussere Haut aufgebracht werden, z.B. durch Besprühen.
Die optimale Menge der Verbindung B-41 D für die Erzielung der besten Ergebnisse hängt von der Art des zu behandelnden Tieres, dem Typ der Parasiteninfektion und der Schwere der Infektion ab, aber im allgemeinen verabreicht man vorzugsweise 0,01 bis 100 mg pro kg Körpergewicht des Tieres und im Falle der oralen Verabreichung insbesondere
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0,1 bis 50 mg pro kg Körpergewicht. Die Verbindung kann als Einzeldosis oder in Teildosen verabreicht werden; normalerweise ist es nur erforderlich, das Tier während einer verhältnismässig kurzen Zeit, z.B. 1 bis 5 Tage lang, zu behandeln.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung. Die Beispiele 1 und 2 beschreiben die Herstellung der Verbindung B-41D; die Beispiele 2 bis 6 beschreiben akarizide Präparate, die die Verbindung enthalten; die Beispiele 7 bis 9 erläutern ihre akarizide Aktivität, und die Beispiele 10 bis 14 erläutern ihre anthelminthische Aktivität.
Beispiel 1
Herstellung der Verbindung B-41 D
600 ml eines Nährbodens für die Vorkultur, der 2% (Gew./ Vol.) Glucose, 1% (Gew./Vol.) Sojabohnenmehl, 0,5% (Gew./Vol.) Maisquellwasser (ein Produkt der Corn Products Co.) und 0,2% Natriumchlorid enthielt, wurden in einen Erlenmeyerkolben mit 2 Liter Fassungsvermögen gefüllt. Eine Öse voll Sporen von Streptomyces Stamm B-41-146 wurde in den Nährboden geimpft und dann 48 Stunden lang bei 27°C gezüchtet. Nach Ablauf dieser Zeit wurde der Inhalt von zwei derartigen 2 Liter-Erlenmeyer-kolben in einen weithalsigen Fermenter mit flachem Boden mit 30 Liter Fassungsvermögen übergeführt, der bereits 20 Liter eines gründlich sterilisierten Nährbodens enthielt, der 4% (Gew./Vol.) Glucose, 1% (Gew./Vol.) Sojabohnenmehl, 0,5% (Gew./Vol.) Maisstärke, 1% (Gew./Vol.) Magermilch, 0,2% (Gew./Vol.) Maisquellwasser und 0,3% Natriumchlorid enthielt. Der pH-Wert des Nährbodens betrug vor der Sterilisierung 7,2 bis 7,5. Die Kultur wurde dann unter einem Innendruck von 0,5 kg/cm210 Tage lang bei 28°C bebrütet.
Nach Ablauf dieser Zeit wurden 20 Liter der Kulturflüssigkeit durch Zugabe von Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 3 gebracht; nach Zugabe von 1 kg Celite (Markenprodukt) als Filterhilfsmittel wurde das Gemisch dann unter Druck filtriert, wobei ca. 3 kg eines Filterkuchens erhalten wurde. Dieser Filterkuchen wurde mit 15 Liter Methanol extrahiert, und der Extrakt wurde filtriert. 15 Liter der so erhaltenen methanolischen Lösung wurden mit 5 Liter Wasser verdünnt und mit 20 Liter Hexan extrahiert. Die so erhaltene Hexanlösung wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und dann durch Eindampfen unter vermindertem Druck auf einem Wasserbad, das auf 40 bis 45°C gehalten wurde, eingeengt, wobei 22 g einer öligen Substanz erhalten wurden.
Diese ölige Substanz wurde in 30 ml Hexan gelöst und auf einer Säule adsorbiert, die 2 kg Kieselgel enthielt, das mit Hexan im Gleichgewicht war. Die Säule wurde mit einem Gemisch aus Hexan und Aceton im Volumenverhältnis 95:5 eluiert. 2 Liter einer Fraktion, die die gewünschte Verbindung enthielt, wurden erhalten, und diese wurde unter vermindertem Druck auf einem Wasserbad, das auf 40 bis 45°C gehalten wurde, eingeengt, wobei 550 mg einer öligen Substanz erhalten wurden. Diese Substanz wurde in 1 ml Methanol gelöst und die Lösung auf eine Säule gegeben, die 200 ml Sephadex (Markenprodukt) LH-20, das mit Methanol ins Gleichgewicht gesetzt worden war, enthielt. Die Säule wurde dann mit Methanol eluiert, wobei 65 ml einer Fraktion erhalten wurden, die die gewünschte Verbindung enthielt. Diese Fraktion wurde durch Eindampfen unter vermindertem Druck bei 45°C eingeengt und der resultierende Rückstand dann in 2 ml Methanol gelöst, worauf die methanolische Lösung mit 2 ml Wasser verdünnt wurde. Man liess das Gemisch bei Raumtemperatur stehen, wobei 110 mg der Verbindung B-41 D in Form eines amorphen Pulvers mit den weiter oben beschriebenen Eigenschaften erhalten wurden.
Beispiel 2
Herstellung der Verbindung B-41 D
Ein 2 Liter-Kolben, der 600 ml eines Vorkultur-Nährbo-dens enthielt, der 1% (Gew./Vol.) Saccharose, 0,35% (Gew./ Vol.) Polypepton und 0,05% (Gew./Vol.) Dikaliumorthophos-phat enthielt, wurde mit einer Öse voll Sporen von Streptomyces Stamm B-41-146 geimpft, worauf der Mikroorganismus 48 Stunden lang bei 27°C gezüchtet wurde. Der Inhalt von drei derartigen Kolben wurde dann in einen 600 Liter-Fermentierungstank übergeführt, der vorher mit 300 Liter eines gründlich sterilisierten Nährbodens beschickt worden war, der 8% (Gew./Vol.) Glucose, 1% (Gew./Vol.) Sojaboh-nenöl, 0,5% (Gew./Vol.) Maisstärke, 1% (Gew./Vol.) Magermilch, 0,2% (Gew./Vol.) Maisquellwasser, 0,3% (Gew./Vol.) Natriumchlorid und 0,05% (Gew./Vol.) Calciumcarbonat enthielt. Der pH-Wert des Nährbodens wurde auf 7,2 bis 7,5 gehalten. Die Züchtung wurde dann bei 28°C unter Rühren mit 150 bis 200 Umdrehungen pro Minute und bei einem Innendruck von 0,5 bis 1 kg/cm212 Tage lang ausgeführt.
Nach Ablauf dieser Zeit betrug die Menge der Verbindung B-41D in dem Nährboden 180 (xg/ml. 300 Liter des resultierenden Nährbodens wurden durch Zugabe von Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 3 gebracht, worauf 15 kg Celite als Filterhilfsmittel zugesetzt wurden und das Gemisch unter Druck filtriert wurde, wobei 40 kg eines Filterkuchens erhalten wurde. Dieser Filterkuchen wurde mit 200 Liter Methanol extrahiert und der Extrakt filtriert. Der methanolische Extrakt wurde mit 150 Liter Wasser versetzt und das resultierende Gemisch zweimal mit je 250 Liter Hexan extrahiert. Die resultierende Hexanlösung wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und dann durch Eindampfen unter vermindertem Druck in einem Wasserbad, das auf 40 bis 45°C gehalten wurde, eingeengt, wobei 350 g eines Öls erhalten wurden.
Dieses Öl wurde in 400 ml Hexan gelöst und auf einer Säule adsorbiert, die 3 kg Kieselgel enthielt, das vorher mit Hexan ins Gleichgewicht gebracht worden war. Die Säule wurde mit einem Gemisch aus Hexan und Aceton im Volumenverhältnis 95:5 eluiert, wobei 8 Liter einer Eluatfraktion erhalten wurden, die die gewünschte Verbindung enthielt. Die Fraktion wurde durch Eindampfen unter vermindertem Druck über einem Wasserbad, das auf 40 bis 45°C gehalten wurde, eingeengt, wobei 33 g rohe Kristalle erhalten wurden. Diese Kristalle wurden in einem Gemisch aus Hexan und Äthylacetat im Volumen verhältnis 20:1 gelöst und daraus umkristallisiert, wobei 17,4 g Verbindung B-41 D in Form von farblosen Nadeln vom Schmelzpunkt 186 bis 188°C, die die weiter oben beschriebenen Eigenschaften hatten, erhalten wurden.
Beispiel 3
Pulver
10 Gew.-Teile der Verbindung B-41 D in Form eines amorphen Pulvers wurden zu 5 Teilen Weissruss gegeben und homogen damit gemischt. Das resultierende Gemisch wurde sodann mit 50 Gew.-Teilen Talkum und 35 Gew.-Teilen Ton versetzt; das Ganze wurde dann homogen gemischt, danach dreimal in einer Pulverisier-Prallmühle pulverisiert und schliesslich wieder homogen gemischt, wobei ein Pulver erhalten wurde.
Beispiel 4
Spritzpulver
40 Gew.-Teile der Verbindung B-41 D in Form eines amorphen Pulvers wurden mit 20 Gew.-Teilen Weissruss gemischt. 5 Gew.-Teile Natriumdodecylbenzolsulfonat, 2 Gew.-Teile
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
645899
8
Polyvinylalkohol und 33 Gew.-Teile Ton wurden zugesetzt und homogen gemischt. Das Gemisch wurde dann dreimal unter Verwendung einer Pulverisier-Prallmühle pulverisiert und danach nochmals homogen gemischt, wobei ein Spritzpulver erhalten wurde.
Beispiel 5
Emulgierbares Konzentrat
3 Gew.-Teile der Verbindung B-41 D in Form eines amorphen Pulvers, 7 Gew.-Teile Polyoxyäthylennonylphenyl-äther, 3 Gew.-Teile Calciumdodecylbenzolsulfonat und 87 Gew.-Teile Xylol wurden gemischt; das Gemisch wurde filtriert, wobei eine Lösung erhalten wurde, die als emulgierbares Konzentrat verwendet werden konnte.
Beispiel 6
Präparat auf Ölbasis
10 Gew.-Teile der Verbindung B-41D in Form eines amorphen Pulvers wurden in 10 Gew.-Teilen Xylol gelöst, worauf 80 Gew.-Teile Maschinenöl zu der Lösung gegeben wurden und das Gemisch filtriert wurde, wobei ein Präparat auf Ölbasis erhalten wurde.
Beispiel 7
Akarizide Aktivität gegen die gemeine Spinnmilbe (Tetra-nychus urticae)
Ein 3 gew.%iges emulgierbares Konzentrat wurde nach dem in Beispiel 5 beschriebenen Verfahren hergestellt. Das Konzentrat wurde dann mit Wasser verdünnt, um die in Tabelle II angegebenen Wirkstoffkonzentrationen zu erhalten. Blättchen der chinesischen Bohne, die weibliche adulte Tiere von Tetranychus urticae enthielten, wurden unter Verwendung eines Zerstäubers vom Typ Mizuho (erhältlich von Mizuho Rikagaku Kikai Co. Limited) mit den Testlösungen in einer Menge von 5 ml pro 2 Blättchen besprüht. Die Blättchen wurden an der Luft getrocknet und in einem Raum, dessen Temperatur mit einem Thermostaten auf 25°C gehalten wurde, 72 Stunden lang stehen gelassen, worauf die Mortalität der Milben berechnet wurde. Die Anzahl der adulten Tiere betrug 30 bis 35 pro Blättchen, und 2 Blättchen wurde für jeden Test verwendet.
Der Versuch wurde unter Verwendung der Verbindung B-41 D und, als Vergleichsverbindungen, der Milbemycine cu und ct3 (B-41 A3 und A4 gemäss der GB-PS Nr. 1 390 336) sowie des bekannten landwirtschaftlichen akarizides Kelthane [Markenbezeichnung für ein Material auf Basis von 1,1 -Bis-(chlorphenyl)-2,2,2-trichloräthanol] ausgeführt. Die Ergebnisse sind in Tabelle II angegeben, ausgedrückt als prozentuale Mortalität der adulten Tiere.
Tabelle!!
Konzentration der Testlösungen (ppm)
Testverbindung
30
10
3
l
0,3
Verbindung B-41 D
100
100
100
89
32
Milbemycin ai
100
85
43
11
0
Milbemycin a3
100
90
45
8
1
Kelthane
74
25
3
—
—
Beispiel 8
Akarizide Aktivität gegen Eier der gemeinen Spinnmilbe (Tetranychus urticae)
1 Tag alte Eier von Tetranychus urticae, die vorher auf Blättchen der chinesischen Bohne abgelegt worden waren, wurden für diesen Test verwendet. Die Blättchen wurden mit der erfindungsgemässen Verbindung und den anderen Verbindungen in der in Beispiel 7 beschriebenen Weise behandelt. Die Anzahl der Eier betrug ca. 100 pro Blättchen. 2 Wochen nach der Behandlung wurde die Anzahl der Eier, die nicht ausgeschlüpft waren, gezählt; die Ergebnisse sind in Tabelle III als Prozentsatz der Gesamtzahl der Eier wiedergegeben.
Tabelle III
Konzentration der Testlösung (ppm)
Testverbindung
30
10
3
1
0,3
Verbindung B-41D
100
100
96
52
10
Milbemycin cu
98
85
60
30
0
Milbemycin CC3
93
89
55
20
5
Kelthane
19
0
0
-
-
Beispiel 9
Akarizide Aktivität gegen die «citrus red mite» (Panonychus citri)
Es wurde das in Beispiel 7 beschriebene Verfahren befolgt, wobei aber Maulbeerblätter, die weibliche adulte Tiere der «citrus red mite» trugen, verwendet wurden. Die Ergebnisse sind in Tabelle IV angegeben.
Tabelle IV
Konzentration der Testlösung (ppm)
Testverbindung 10 0,03
3
1
0,3
0,1
0,3
Verbindung B-41 D 100
100
100
95
90
50
Milbemycin ou 100
98
82
68
55
3
Milbemycin ci3 100
95
82
70
48
7
Kelthane 75
—
—
—
—
-
Zusätzlich zu den in Tabelle IV wiedergegebenen Resultaten wurde auch eine Emulsion von Kelthane mit einer Konzentration von 30 ppm getestet, aber selbst bei dieser Konzentration betrug die Mortalität nur 93%.
Aus diesen Ergebnissen ist klar ersichtlich, dass die Verbindung B-41D, verglichen mit den Milbemycinen ai und cc3, die ihrerseits wesentlich besser sind als das bekannte Akarizid Kelthane, eine extrem hohe akarizide Aktivität hat.
Beispiel 10
Anthelminthische Aktivität gegen Nematospiroides dubius
4 Wochen alte männliche Mäuse vom Stamm RFVL die je ca. 18 bis 22 g wogen, wurden oral mit Nematospiroides dubius infiziert. Die Mäuse wurden dann in Gruppen von je 5 Tieren unterteilt; jede Gruppe wurde nach der Infektion 7 Tage lang mit einem Futter gefüttert, das die Testverbindung in der in Tabelle V angegebenen Menge enthielt, worauf ihr unbehandeltes Futter verabreicht wurde. 14 Tage nach der Infektion wurden die Tiere getötet; die Anzahl der Parasiten im Dünndarm wurde gezählt und mit derjenigen bei einer Vergleichsgruppe verglichen, die in ähnlicher Weise infiziert, aber nicht behandelt worden war. Die Ergebnisse, ausgedrückt als anthelminthische Aktivität, sind in Tabelle V angegeben.
5
10
IS
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Tabelle V
Testverbindung
Menge im Futter Anthelminthische Aktivität
Verbindung B-41D
0,05%
0,005%
0,0005%
100% 100% 96%
Gemisch der Milbemycine (X2 und cu
0,03%
32%
Gemisch der Milbemycine cu bis <X6, a.9, aio und ßi
0,03%
27,6%
Die in Tabelle V dargestellten Ergebnisse beweisen, dass die Verbindung B-41 D eine anthelminthische Wirkung hat, die etwa zwei Grössenordnungen grösser ist als diejenige von Gemischen der Milbemycine, mit denen sie verglichen wird.
Beispiel 11
Anthelminthische Aktivität gegen Toxocara cati In diesem Test wurden 18 junge Katzen (3 männliche und 15 weibliche) mit einem Körpergewicht von 1,6 bis 3,0 kg verwendet, die in natürlicher Weise mit Toxocara cati infiziert worden waren. Jeder der jungen Katzen wurde oral eine Einzeldosis der Verbindung B-41D, dispergiert in Olivenöl, in den folgenden Mengen verabreicht: 2 junge Katzen erhielten 5 mg/kg Körpergewicht der Verbindung; 3 junge Katzen erhielten 2,5 mg/kg Körpergewicht; 2 junge Katzen erhielten 1 mg/kg Körpergewicht; 3 junge Katzen erhielten 0,5 mg/kg Körpergewicht; 3 junge Katzen erhielten 0,25 mg/kg Körpergewicht; 2 junge Katzen erhielten 0,1 mg/kg Körpergewicht; und 3 junge Katzen erhielten 0,05 mg/kg Körpergewicht. Vor der Behandlung betrug die EPG (d.h. die Anzahl der Eier pro g Exkremente) 150 bis 16 250. Eine Woche nach der Behandlung betrug die EPG bei allen jungen Katzen Null, und die Gesamtzahl der während dieser Woche ausgetriebenen Würmer betrug 2 bis 40. Bei der Autopsie zeigte es sich, dass alle jungen Katzen vollständig frei von Würmern waren.
Beispiel 12
Anthelminthische Aktivität gegen Toxocara canis In diesem Test wurden 13 junge Hunde (3 männliche und 10 weibliche) mit einem Körpergewicht von 1,2 bis 13,7 kg verwendet, die in natürlicher Weise mit Toxocara canis infiziert worden waren. Jedem jungen Hund wurde oral eine Einzeldosis der Verbindung B-41D, dispergiert in Olivenöl, in den folgenden Mengen verabreicht: 1 junger Hund erhielt
645899
eine Dosis von 5 mg/kg Körpergewicht; 2 junge Hunde erhielten 0,25 mg/kg Körpergewicht; 4 junge Hunde erhielten 0,1 mg/kg Körpergewicht; 3 junge Hunde erhielten 0,05 mg/kg Körpergewicht; 2 junge Hunde erhielten 0,025 mg/kg Körpergewicht; und 1 junger Hund erhielt 0,01 mg/kg Körpergewicht. Vor der Behandlung betrug die EPG 10 bis 18 400. Eine Woche nach der Behandlung betrug die EPG bei allen jungen Hunden Null, und die Gesamtzahl der während dieser Woche ausgetriebenen Würmer betrug 2 bis 36 pro jungem Hund. Bei der Autopsie zeigte es sich, dass alle jungen Hunde vollständig frei von Würmern waren.
Beispiel 13
Anthelminthische Aktivität gegen Trichuris vulpis
In diesem Test wurden 5 Hunde (2 weibliche und 3 männliche) mit einem Körpergewicht von 6,5 bis 11,5 kg und einem Alter von 2 oder 3 Jahren verwendet. Jedem Tier wurde oral eine Einzeldosis von 1 bzw. 5 mg/kg Körpergewicht der Verbindung B-41 D in Form einer mit Gelatine überzogenen Kapsel verabreicht. Es hatte sich gezeigt, dass diese Hunde in natürlicher Weise mit Trichuris vulpis infiziert worden waren. Vor der Behandlung betrug die EPG 100 bis 3500. Eine Woche nach der Behandlung betrug die EPG 0 bis 200, und die Gesamtzahl der während dieser Woche ausgetriebenen Würmer betrug 8 bis 451. Bei der Autopsie wurde festgestellt, dass die Anzahl der restlichen Würmer 0 bis 33 betrug, was einer prozentualen Eliminierung von 92 bis 100% entsprach. Es ist bekannt, dass Infektionen mit Trichuris vulpis im Blinddarm sehr schwer zu bekämpfen sind; somit zeigt die hohe prozentuale Eliminierung, die mit einer einzigen, verhältnismässig milden Dosis der erfindungsge-mässen Verbindung erzielt wird, eine ausserordentlich wirksame und wertvolle Aktivität gegen diesen Parasiten an.
Beispiel 14
Anthelminthische Aktivität gegen Ancylostoma canium
In diesem Test wurden 5 Hunde (2 weibliche und 3 männliche) mit einem Körpergewicht von 7,0 bis 11,5 kg und einem Alter von 2 oder 3 Jahren verwendet. Es war festgestellt worden, dass alle Hunde in natürlicher Weise mit Ancylostoma canium infiziert worden waren. Jedem der Hunde wurde oral eine Einzeldosis der Verbindung B-41 D in Form einer mit Gelatine überzogenen Kapsel in den folgenden Mengen verabreicht: 2 Hunde erhielten 0,5 mg/kg Körpergewicht; 2 Hunde erhielten 1 mg/kg Körpergewicht; und 1 Hund erhielt 5 mg/kg Körpergewicht. Vor der Behandlung betrug die EPG 20 bis 1550. Eine Woche nach der Behandlung betrug die EPG bei allen Hunden Null, und die Gesamtzahl der während dieser Woche ausgetriebenen Würmer betrug 4 bis 82 pro Hund. Bei der Autopsie wurde festgestellt, dass alle Hunde vollständig frei von Würmern waren.
9
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
B
1 Blatt Zeichnungen
Claims (9)
1. Verbindung der Formel:
ch3
ch ch3
ch a
(B)
2. Verfahren zur Herstellung der Verbindung der Formel B, dadurch gekennzeichnet, dass man einen die Verbindung der Formel B erzeugenden Mikroorganismus der Gattung Strep-tomyces in einem Nährboden dafür züchtet und die so erzeugte Verbindung von dem Nährboden abtrennt.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass man als Mikroorganismus Streptomyces Stamm FERM P-1438 verwendet.
4. Verfahren nach Anspruch 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, dass der Nährboden als Kohlenstoffquelle Glucose enthält, vorzugsweise in einer Menge von bis zu 8% (Gew./ Vol.), insbesondere in einer Menge von 6 bis 8% (Gew./Vol.).
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass der Nährboden zusätzlich 0,5 bis 2% (Gew./Vol.) Lactose und/oder Maltose und/oder Maisstärke enthält.
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass der Nährboden als Stickstoff quelle Sojabohnenmehl und Magermilch enthält, vorzugsweise 0,5 bis 1% (Gew./Vol.) Sojabohnenmehl und 1 bis 2% (Gew./ Vol.) Magermilch, bezogen auf den Nährboden.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass man die Züchtung bei einer Temperatur von 22 bis 30°C, vorzugsweise ca. 28°C, ausführt.
8. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass man den Nährboden reinigt, um praktisch reine Verbindung der Formel B zu erzeugen.
9. Präparat mit anthelminthischer und akarizider Wirkung, dadurch gekennzeichnet, dass es als Wirkstoffkomponente die Verbindung der Formel B enthält.
Aj, A4, Bi, B2, B3, Ci und C2 bezeichnet werden. Nachträglich wurde festgestellt, dass durch Züchtung des gleichen Stammes von Streptomyces vier andere Verbindungen mit 2s ähnlicher Struktur erhalten werden konnten. Die Struktur und die Eigenschaften aller dreizehn Verbindungen sind unter anderem in J. Antibiotics 29 (3), Seiten 76-14 bis 76-16 und 29 (6), Seiten 76-35 bis 76-42 beschrieben.
In der GB-PS Nr. 1 390 336 wurde angegeben, dass der 30 Komplex der Substanzen B-41 zusammen und die einzelnen Substanzen für sich insektizide und akarizide Eigenschaften hatten. Anschliessend wurde in der US-PS Nr. 4144 352 offenbart, dass diese und verwandte Substanzen auch anthel-minthische Aktivität hatten. In der US-PS Nr. 4 144 352 35 wurden die B-41-Substanzen als «Milbemycine» bezeichnet. Aus Gründen der Klarheit werden die bekannten Verbindungen auch in dieser Patentschrift als «Milbemycine» bezeichnet, obgleich ersichtlich ist, dass bestimmte dieser Verbindungen mit denjenigen Verbindungen identisch sind, 40 aus denen die Substanz B-41 zusammengesetzt ist, wie aus der GB-PS Nr. 1 390 336 bekannt. Verschiedene Milbemycinderi-vate sind aus den US-PS Nr. 4 093 629 und 4 134 973 bekannt.
Die dreizehn Milbemycinverbindungen, die durch Züchtung von Streptomyces B-41-146 erzeugt werden können, ent-45 sprechen der Formel I, II bzw. III. Die Struktur der Milbemycine ai-10 wird durch die Formel:
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| JP10755079A JPS5632481A (en) | 1979-08-23 | 1979-08-23 | Antibiotic b-41d, its preparation, and acaricide and anthelminthic agent and repellent containing the same as active constituent |
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