CH655119A5

CH655119A5 - Glucosidi antraciclinonici.

Info

Publication number: CH655119A5
Application number: CH2708/83A
Authority: CH
Inventors: Alberto Bargiotti; Sergio Penco; Anna Maria Casazza
Original assignee: Erba Farmitalia
Priority date: 1982-05-24
Filing date: 1983-05-18
Publication date: 1986-03-27
Also published as: AU554416B2; DE3317702A1; ZA833525B; CA1237714A; IT8321198A0; FR2527212B1; FI75834B; AU1455483A; DK219483A; BE896775A; FR2527212A1; DK219483D0; SE8302831L; IL68720A; FI831709L; SU1378784A3; NL8301792A; IL68720A0; ATA178083A; US4522815A

Description

L'invenzione si riferisce ad un procedimento per la preparazione di glucosidi antraciclinonici, a specifici glucosidi antracic-linonici ed a composizione farmaceutiche che li contengono.

L'invenzione fornisce un procedimento per la preparazione di glucosidi antraciclinonici di formula generale I e II: o .oh

COCHjÄj

IO

COCH2XJ -OH

in cui Ri è un atomo di idrogeno o un gruppo ossidrile ed R2 rappresenta un atomo di idrogeno o un gruppo metossile.

Il procedimento comprende la condensazione di un antraci-clinone di formula generale III, qui sotto rappresentata, in cui 20 R è un atomo di idrogeno o un gruppo t-butil-difenil-sililossi ed R2 è come sopra definito, con il 3,4-di-0-acetil-2,6-didesossi--a-L-arabino-esopiranosil cloruro di formula IV, rimozione del gruppo(i) acetile e, se necessario, del gruppo t_-butil-difenil-sililossi dai risultati glicossidi di formula generale V e VI, in cui 25 R ed R2 sono come sopra definiti:

30

0 oh

\ / Civ)

r2 0 oh oh (iii)

oocch,

Q OH

(VI )

•deprotezione deprotezione ai)

5

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Gli antraciclinoni (III) usati come materiale di partenza sono i noti composti daunomicinone (III, R = H, R2 = CH3O: d'ora in poi Illa) ed il 4-demetossi-daunomicinone (III, R = R2 = H: d'ora on poi Illb) ed i nuovi composti 14-0-(t-butil-di-fenil-siIil)-adriamicinone (III, R = _t-butil-difenil-sililossi, R2 = CH3O: d'ora in poi IIIc) e il 14-0-(t-butil-difenil-silil)-4-de-metossi-adriamicinone (III, R = t-butil-difenil-silil, R2 = H: d'ora in poi Illd).

I composti IIIc e Illd possono essere preparati per condensazione dei noti composti adriamicinone e 4-demetossi-adria-micinone con_t-butil-difenil-clorosilano in un solvente quale di-metilformamide anidra in presenza di una base organica quale l'imidazolo. Il gruppo protettore t-butil-difenil-silile offre i vantaggi di rimanere inalterato durante la condensazione e la rimozione dei gruppi protettori acetilici e di essere facilmente distaccato per trattamento con fluoruro di tetra-n-butilammonio.

L'altro materiale di partenza, il cloro-zucchero protetto IV, è anche un composto noto (H.S. El Khadem et al., Carbohydr. Res. 58, 1977, 230).

La condensazione può essere effettuata nelle condizioni di una reazione di Koenigs-Knorr modificata, sciogliendo l'antra-ciclinone III in un solvente, quale il diclorometano, e facendolo reagire con il cloro zucchero IV in fase eterogenea catalizzata da bromuro mercurico ed ossido di mercurio oppure in una fase omogenea catalizzata dal trifluorometansulfonato di argento. Si ottiene una miscela di glucosidi antraciclinonici V e VI. Specificamente, l'uso dell'antraciclinone Illa dà una miscela di glucosidi antraciclinonici V (R = H, R2 = CH3O: d'ora in poi Va) e VI (R = H, R2 = CH3O: d'ora in poi Via); l'uso dell'antraciclinone Illb dà una miscela di glucosidi antraciclinonici V (R = R2 = H: d'ora in poi Vb) e VI (R = R2 = H: d'ora in poi VIb); l'uso dell'antraciclinone IIIc dà una miscela di glucosidi antraciclinonici V (R = _t-butil-difenil-sililossi, R2 = CH3O: d'ora in poi Ve) e VI (R = t-butil-difenil-sililossi, R2 = CH3O: d'ora in poi Vìe); e l'uso dell'antraciclinone Illd dà una miscela di glucosidi antraciclinonici V (R = _t-butil-difenil-sililossi, R2 = H: d'ora in poi Vd) e VI (R = ^-butil-difenil-sililossi, R2 = H: d'ora in poi VId).

Le miscele di glucosidi antraciclinonici Va e Via, Vb e VIb, Ve e Vìe, Vd e VId possono essere separate nei rispettivi componenti per cristallizzazione frazionata o mediante tecniche cromatografiche. La rimozione del gruppo o dei gruppi acetilici per trattamento catalitico con sodio metilato in metanolo o con soluzione acquosa di idrato sodico da Va, Vb, Vìa e VIb dà, rispettivamente, i glucosidi antraciclinonici 7-0-(2,6-didesossi--a-L-arabino-esopiranosil)-daunomicinone (I, Ri = H, R2 = CH3O: d'ora in poi la), il 4-demetossi-7-0-(2,6-didesossi-a-L--arabino-esospiranosil)-daunomicinone (I, Ri = R2 = H: d'ora in poi Ib), il 7-0-(2,3,6-tridesossi-a-L-eritro-2-ene-esospirano-sil)-daunomicinone (II, Ri = H, R2 = CH3O: d'ora in poi Ila) e il 4-demetossi-7-0-(2,3,6-tridesossi-a-L-eritro-2-ene-esospira-nosil)-daunomicinone (II, Ri = R2 = H; d'ora in poi IIb).

La rimozione del gruppo o gruppi produttori acetilici, come sopra descritto, seguita dalla rimozione del gruppo protettore t -butil-difenil-silile per trattamento con fluoruro di n-tetra-butilammonio in tetraidrofurano da Ve, Vd, Vie e VId dà, rispettivamente, i glucosidi antraciclinonici 7-0-(2,6-didesossi--a-L-arabino-esopiranosil)-adriamicinone (I, Rt = OH, R2 = CH3O: d'ora in poi le), il 4-demetossi-7-0-(2,6-didesossi-a-L--arabino-esopiranosil)-adriamicinone (I, R = OH, R2 = H: d'ora in poi Id), il 7-0-(2,3,6-tridesossi-a-L-eritro-2-ene-eso-piranosil)-adriamicinone (II, Ri = OH, R2 = CH3O: d'ora in poi Ile) e il 4-demetossi-7-0-(2,3,6-tridemetossi-a-L-eritro-2--ene-esopiranosìl)-adriamicinone (II, Ri = OH, Rj = H: d'ora in poi Ild).

1 composti la ed le sono noti e sono stati descritti nel nostro brevetto inglese N. 8128252. I restanti glucosidi antraciclinonici I e II, cioè i composti Ib, Id, Ila, IIb, IIIc e Illd sono nuovi composti e sono inclusi nello scopo della presente invenzione. Come i composti la ed le essi hanno utili proprietà nel trattamento di alcuni tumori negli animali e perciò l'invenzione fornisce una composizione farmaceutica che comprende un gluco-5 side antraciclinonico Ib, Id, IIa, IIb, Ile ò Ild in miscela con un diluente o supporto farmaceuticamente accettabile.

Degli Esempi che seguono, il N° 3 sino al N° 6 illustrano l'invenzione; il N° 1 e N° 2 la preparazione di alcuni composti di partenza.

10 Esempio 1

Preparazione del 14-0-(t-butil-difenil-silil)--adriamìcìnone (IIIc)

Una soluzione di 0,414 g di adriamicinone in 20 mi di dime-15 tilformamide anidra venne trattata con 0,28 mi di jt-butil-di-fenil-clorosilano e g 0,15 di imidazolo. La miscela di reazione venne lasciata a temperatura ambiente per la notte, poi si aggiunsero 200 mi di acqua e si estrasse la soluzione con cloruro di metilene. Lo strato organico venne separato, essiccato su sol-20 fato di sodio anidro, filtrato ed evaporato a secco sotto vuoto. Il residuo venne quindi purificato a mezzo di cromatografia su silica gel usando come sistema eluente la miscela etile acetato: toluene (1 : 2 in volume). Il composto IIIc puro (0,46 g) fonde a 208-209°C, FD-MS: m/z 652 (M+), PMR (CDCI3): inter alia 25 a 1,46 5 [s, (CH3)3-C], 3,98 8 (s, CH3O) e 4,89 8 (s, CH2-Si-).

Esempio 2

Preparazione del 4-demetossi-14-0-(t-butil-difenil-sili)--adriamicinone (Illd)

30

Una soluzione di g 0,385 di 4-demetossi daunomicinone in 15 mi di dimetilformamide anidra venne trattata con 0,3 mi di t-butil-difenil-clorosilano e g 0,15 di imidazolo. La miscela di reazione venne lasciata a temperatura ambiente per 4 ore, si ag-35 giunsero 200 mi di acqua e si estrasse la soluzione con cloruro di metilene. Lo strato organico venne separato, essiccato su sodio solfato anidro, filtrato ed evaporato a secco sotto vuoto. Il residuo venne purificato a mezzo di cromatografia su gel di silice usando come sistema eluente la miscela toluene: acetone 40 (95 : 5 in volume). Il composto puro ottenuto Illd (g 0,6) fonde a 101-102°C. FD-MS: m/z 622 (M+), PMR (CDC13): inter alia a 1,13 5 [s, (CH3)3], 3,41 5 (d, OH-C-7), 4,87 5 (s, CH2-Si-), 5,24 8 (m, C-H-7).

45 Esempio 3

Preparazione del 7-0-(2,6-didesossi-aL-arabinoesopiranosil)-daunomicinone (la) e 7-0-(2,3,6-tridesossi-a-L-eritro-2--ene-esopiranosil)-daunomicinone (Ila)

50 Ad una soluzione di g 2,0 di daunomicinone (Illa) in 200 mi di cloruro di metilene anidro furono aggiunti g 1,25 di 3,4-di--0-acetil-2,6-didesossi-a-L-arabino-esopiranosil cloruro (IV) sciolto in 30 mi di cloruro di metilene in presenza di g 12,0 di setaccio molecolare (4 Â Merck). La miscela venne trattata con 55 g 1,28 di trifluorometansulfonato di argento sciolto in 30 mi di etere anidro. Dopo 5 minuti, la miscela di reazione fu neutralizzata con 0,65 mi di collidina anidra. Dopo 30 minuti a temperatura ambiente la soluzione organica venne lavata con soluzione acquosa satura di bicarbonato di sodio, con acqua, con acido 60 cloridrico acquoso 0.1 N e finalmente con acqua. La fase organica venne separata ed evaporata a secco sotto vuoto. Il residuo risultante fu purificato a mezzo di cromatografia su colonna di gel di silice usando come eluenti il sistema etile acetato: cicloe-sano (1 : 1 in volume). Si ottennero, separatamente, g 0,9 di 65 prodotto Va, p.f. U7-118°C, PMR (CDCI3): inter alia a 1,23 ô (d, CH3-C-5'), 1,95 8 (s, CH3COOC), 2,07 8 (s, CH3COOC), 2,43 8 (s, CHjCO), 5,20 8 (CH-7) e 5,53 8 (CH-1'), e 0,9 g di prodotto Vìa, p.f. 83-84°C.

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6

Il composto Va (0,7 g) venne sciolto in acetone (45 ml) e trattato con 50 mi di soluzione acquosa di sodio idrato 0,2 N a temperatura ambiente. Dopo 1 ora il pH della soluzione venne portato a 7 e la soluzione venne estratta con cloroformio. L'evaporazione del solvente organico sotto vuoto fornì il composto puro la in resa quantitativa: p.f. 161-162°C, FD-MS: m/z 528 (M+). Analogamente il composto Via, dopo trattamento basico nelle condizioni sopra descritte, fornì il composto puro Ila: p.f. 181-182°C, FD-MS: m/z (M+), PMR (CDCI3): inter alia a 1,40 8 (d, CH3-C-5'), 2,42 S (s, CH3-CO), 5,33 5 (CH-7), 5,38 8 (CH-1') e 5,5-6,0 S (m, CH-2', CH-3').

Esempio 4

Preparazione del 4-demetossi-7-0-(2,6-didesossi-a-L-arabirìo--esopiranosil)-daunomìcinone (Ib) e del 4-demetossi-7-0-(2,3,6--tridesossi-a-L-eritro-2-ene-esopiranosil)-daunomicinone (IIb)

Ad una soluzione di g 0,74 di 4-demetossi-daunomicinone (Illb) in cloruro di metilene anidro (70 mi), vennero aggiunti g 0,65 di zucchero alogenato IV in 10 mi di cloruro di metilene in presenza di 5 g di setaccio molecolare (4 Â Merck). La miscela venne trattata con g 0,64 di trifluorometansulfonato di argento sciolti in 15 mi di etere etilico anidro. Dopo 5 minuti la miscela di reazione venne neutralizzata con 0,4 mi di collidina anidra. Dopo 1 ora a temperatura ambiente, la soluzione organica fu lavata con soluzione acquosa satura di sodio.bicarbonato, con acqua, con acido cloridrico acquoso 0,1 N e alla fine, con acqua. Si separò la fase organica che venne evaporata a secco sotto vuoto. Il residuo risultante venne purificato a mezzo di cromatografia su colonna di silice usando come sistema eluente cloroformio: acetone (96 : 4 in volume). Vennero ottenuti g 0,48 di prodotto Vb, p.f. 65-66°C, FD-MS: m/z 582 (M+-) e 0,45 g di prodotto VIb. Il composto Vb venne sciolto in 20 mi di acetone e trattato a temperatura ambiente, con 20 mi di soluzione acquosa 0,2 N di sodio idrato. Dopo un'ora si portò a 7 il pH della soluzione che venne poi estratta con cloroformio. Per evaporazione sotto vuoto dello strato organico si ottenne il composto Ib con resa quantitativa, p.f. 165-166°, FD-MS: m/z (M+ ). Analogamente il composto VIb, dopo trattamento basico nelle stesse condizioni sovra dette, fornì il composto puro IIb. PMR (CDCIj): inter alia a 1,39 5 (CH3-C-5'), 2,42 8 (s, CH3-CO), 3,50-4,00 5 (m, C-H-4', e C-H-S'), 4,08 8 (s, CH30), 5,33 8 (bs, C-H-7), 5,58 8 (bs, C-H-l'), 5,65 8 (d, C-H-3'), 5,93 ô (d, C-H-2').

Esempio 5

Preparazione del 7-0-(2,6-didesossi-a-L-arabino-esopiranosil)--adriamicinone (le) e del 7-0-(2,3,6-tridesossi--a-L-eritro-2-ene-esopiranosil)-adriamicinone (Ile)

Ad una soluzione di g 1,25 di composto IIIc, preparato come descritto nell'Esempio 1, in 100 mi di cloruro di metilene, vennero aggiunti g 0,75 di bromuro mercurico, g 2,4 di ossido mercurico, 8 g di setaccio molecolare (4 A Merck) e g 0,85 di clorozucchero IV. La miscela venne lasciata in agitazione, a temperatura ambiente, per tutta la notte, e quindi filtrata. Il filtrato venne evaporato a secco sotto vuoto ed il residuo ottenuto fu purificato a mezzo di cromatografia su colonna di silice usando il sistema eluente toluene : acetone (9 : 1 in volume).

Si ottennero g 1,2 di prodotto Ve: p.f. 55-56°C, FD-MS: m/z 866 (M+ ) e g 0,15 di prodotto Vie: p.f. 88-89°C. Il composto Ve (g 0,87) venne sciolto in 10 mi di cloruro di metilene anidro e trattato con 200 mi di soluzione 0,01 N di sodio metilato in metanolo anidro. Dopo 3 ore a temperatura ambiente si era ottenuta la rimozione dei gruppi acetilici. La miscela di reazione venne acidificata con acido acetico ed evaporata sotto vuoto. L'olio ottenuto fu sciolto in 200 mi di tetraidrofurano e trattato con g 0,7 di fluoruro di tetra-n-butilammonio. L'idrolisi del gruppo protettore t-butil-difenil-silile fu completa in 1,5 ore. Il residuo ottenuto per evaporazione del solvente sotto vuoto venne purificato a mezzo di cromatografia su colonna di silice usando come eluente il sistema toluene : acetone (1 : 1 in volume).

Si ottennero g 0,35 di composto puro le: p.f. 189-190°C, PMR (CDCI3): inter alia: a 1,34 8 (d, CH3-C-5'), 4,08 8 (s, CH3Q), 4,77 8 (s, CHzOH), 5,30 8 (dd, CH-7), 5,50 8 (d, CH-1').

Analogamente il composto Vie, per idrolisi dei gruppi protettori, fornì il composto Ile: p.f. 205-207°C, PMR (CDC13), inter alia: a 1,38 8 (d, CH3-C-5'), 3,25-4,00 8 (m, C-H-4' e C-H-S'), 4,08 8 (s, CH30), 4,76 S (d, CH2OH), 5,36 8 (ampio s, C-H-7), 5,75 8 (ampio s, C-H-l'), 5,63 8 (d, C-H-3'), 5,93 8 (d, C-H-2').

Esempio 6

Preparazione del 4-demetossi-7-0-(2,6-didesossi-a-L-arabino--esopiranosil)adriamicinone (Id) e del 4-demetossi-7-0-(2,3,6--tridesossi-a-L-eritro-2-ene-esopiranosil)-adriamicinone (Ild)

Ad una soluzione di g 0,63 di Illd, preparato come descritto nell'Esempio 2, in 50 mi di cloruro di metilene anidro, vennero aggiunti g 1,2 di ossido mercurico, g 0,4 di bromuro mercurico, g 8,0 di setaccio molecolare (4 Â Merck) e g 0,75 di cloro zucchero IV. La miscela venne mantenuta in agitazione, a temperatura ambiente, per la notte e quindi filtrata. Il filtrato fu evaporato sotto vuoto per dare un residuo che venne purificato a mezzo di cromatografia su colonna di silice, usando il sistema eluente toluene: acetone (96 : 4 in volume). Si ottennero g 0,585 di prodotto Vd, p.f. 212-213°C, FD-MS: m/z 236 (M+ ) e g 0,200 di prodotto VId.

Il prodotto Vd (g 0,5) venne sciolto in 10 mi di cloruro di metilene anidro e trattato con 150 mi di soluzione 0,01 N di sodio metilato in metanolo anidro. Dopo 3 ore a temperatura ambiente la rimozione dei gruppi protettori acetilici era completa. La miscela di reazione venne acidificata con acido acetico e portata a secco sotto vuoto. Il residuo, disciolto in 100 mi di tetraidrofurano, fu trattato con g 0,5 di fluoruro di tetra-n--butilammonio. Dopo 2 ore, l'idrolisi del gruppo t-butil-difenil-silile era completa. Il residuo ottenuto per evaporazione del solvente sotto vuoto fu purificato a mezzo di cromatografia su colonna di silice, usando il sistema eluente toluene: : acetone (1 : 1 in volume) per dare g 0,2 di prodotto puro Id, p.f. 204-206°C, FD-MS: m/z 514 (M+ ), PMR (CDC13): inter alia a 1,3 8 (d, CHì-C-j'), 4,78 8 (s, CHzOH), 5,34 8 (ampio s, CH-7), 5,54 8 (bs, C-H-l'). Analogamente il composto VId, per idrolisi dei gruppi protettori, fornì Ild, p.f. 166-167°C, PMR (CDC13): inter alia a 1,39 8 (d, CH3-C-5'), 3,96 8 (d, C-H-4'), 4,77 8 (s, CH2OH), 5,35 8 (ampio s, C-H-7), 5,55 8 (ampio s, C-H-l'), 5,71 8 (m, CH-3'), 5,95 8 (d, C-H-2').

ATTIVITÀ BIOLOGICA Dilla, Ib, Ile e Id

I composti Ila e Ile sono stati saggiati in confronto con la daunorubicina (DNR) e con la doxorubicina (DX) rispettivamente, sia in «vitro» che «in vivo» per accertarne la loro cito-tossicità ed attività antitumorale.

La Tavola I riporta gli effetti sulla efficienza di clonazione su cellule HeLa «in vitro».

Ila è circa 25 volte meno citotossico della DNR e Ile è circa 5 volte meno citotossico della DX. Un primo screening «in vitro» fu effettuato su topi CDF-1, portatori di leucemia ascitica P388 (IO6 cellule x topo). I risultati ottenuti sono riportati nella Tavola 2.

Sia Ila che Ile vennero sospesi in Tween 80 al 10% e vennero iniettati intraperitonealmente. I due composti risultarono meno tossici e potenti di DNR e DX. Ila si mostrò inattivo sulla leucemia ascitica P 388 alle due dosi saggiate, includendo la

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

7

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Dose Massima Tollerata (Mx TD) di 100 mg/kg, mentre Ile dimostrò una certa attività antitumorale, più bassa in confronto a quella della DX.

I composti la e Id sono stati studiati «in vitro» su cellule HeLa, su cellule sensibili della leucemia P388 (P388) e su quelle resistenti (P388/DX) rispetto alla DX e «in vitro» su P388 e su leucemia di Gross. I dati riportati nella Tavola 3, mostrano che Ib, saggiato «in vitro», sulla efficienza di clonazione di cellule HeLa in confronto con DNR e con la 4-demetossi-DNR(4-dm-DNR) è 3 e 6 volte meno citotossico di DNR e 4-dm-DNR rispettivamente, mentre Id è comparabile come citotossico alla DX nello stesso esperimento. Il composto Ib è stato studiato su P388/DX «in vitro».

Cellule leucemiche P388 e P388/DX vennero raccolte dal fluido ascitico dei topi ed adattate a crescere in sospensione «in vitro». I saggi di citotossicità vennero effettuati esponendo le cellule a varie concentrazioni della droga per 48 ore; alla fine del periodo di esposizione, le cellule vennere contate a mezzo di coulter celi counter e venne calcolata la ID50 (dose che dà il 50% di riduzione nel numero delle cellule in confronto con i controlli non trattati). La Tavola 4 mostra che Ib era citotossico quanto la DX sulle cellule della leucemia P388 ed era molto attivo sulle cellule della leucemia P388/DX. DNR era circa 500 volte meno attiva sul ceppo resistente che su quello sensibile.

I risultati dello screening primario «in vivo», effettuato su topi CDF-1 portatori di leucemia ascitica P388 e trattati i.p. il giorno successivo al trapianto del tumore, sono riportati nella Tavola 5, Ib risultò 2 volte più potente della DNR e circa 1,5 volte meno potente della 4-dm DNR; il confronto alla Mx TD mostra che il composto è meno attivo della DNR e 4-dm DNR. II composto Id era 5 volte più potente della DX. L'attività antileucemica contro la leucemia P388 era buona ma più bassa in confronto a quella della DX.

I risultati degli studi condotti su topi C3H/Me portatori di leucemia di Gross trapiantati e trattati i.v. il giorno successivo all'impianto del tumore, sono riportati nella Tavola 6. Sia Ib che Id risultarono più tossici e più potenti dei composti da cui derivano. Il confronto delle Mx TD mostra che Ib è più attivo della DNR e che Id possiede una buona attività antitumorale che è dello stesso ordine di grandezza di quella della DX. I composti Ib e Id furono ulteriormente studiati per la loro attività orale, sulla leucemia trapiantata di Gross in confronto con la DNR, DX somministrata i.v. e 4-dm DNR somministrata per via orale.

I dati riportati nella Tavola 7 mostrano che Ib possiede una buona attività antitumorale se somministrato per via orale nel 1 ° giorno, comparabile a quella della 4-dm DNR (già dimostratasi attiva per via orale) e a quella della DNR iniettata i.v.

I dati dell'attività antitumorale di Id somministrato per via orale al 10 giorno o 1, 2, 3 giorni dopo il trapianto del tumore sono anche riportati nella Tavola 7.

Quando somministrato per via orale, Id alla Mx TD era meno attivo dell DX i.v.

Tuttavia con una differente scheda di trattamento (1, 2, 3) l'attività antitumorale del composto risultò più elevata di quella della DX somministrata i.v.

Tavola 1

Saggio di inibizione delle colonie di cellule HeLa «in vitro» (trattamento per 24 ore)

Tavola 1 (continuazione)

Composto

Dose (ng/ml)

%a

IDso (ng/ml)

Composto Ila

400

146

100

136

400

25

143

6,2

127

1,5

120

DX

25

24

-10

12,5

40

6,2

69

Composto Ile

400

4

100

33

-50

25

65

6,2

68

1,5

86

Composto

DNR

Dose (ng/ml)

25 12,5 6,2

<%a

12 74 106

ID»

(ng/ml)

•16

a) N. di colonie; % di controlli non trattati Tavola 2

Attività antitumorale contro la leucemia ascitica P388. Trattamento i.p. nel giorno 1

Composto

Dose

T/Ca

LTSb

Morti

(mg/kg)

%

tossiche

DNR

2,9

160

0/10

4,4d

165-170

0/10

0/20

6,6d

150-160

0/10

7/20

Composto Ila

75

120

0/5

100

90

0/10

1/10

DX

4,4d

220-227

2/18

0/18

6,6e

227-305

2/26

0/26

10e

268->610

7/26

3/26

Composto Ile

17,6

118

0/8

23

127

0/7

30d

125-136

0/17

45

130

0/10

67,5

140

0/10

100

150

0/7

a) tempo medio di sopravvivenza; % sui controlli non trattati b) sopravvissuti a lungo termine (> 60 giorni)

c) valutata sulla base di reperti autoptici sui topi morti 50 d) dati di due esperimenti (range)

e) dati di tre esperimenti (range)

Tavola 3

55 Saggio di inibizione delle colonie di cellule HeLa «in vitro», (trattamento per 24 ore)

Composto

Dose (ng/ml)

%a

ID50 (ng/ml)

DNR

25

9

12,5

51

-12

6,2

83

4-dm DNR

25

0

12,5

18

-6,3

6,2

53

5,1

84

655 119

8

Tavola 3 (continuazione)

Composto

Dose (ng/ml)

%a

IDso (ng/ml)

Composto Ib

100

0

25

67

-35

6,2

87

1,5

107

DX

25

0

12,5

28

-7,5

6,2

59

Composto Id

100

0

25

0

-7

6,2

59

1,5

106

a) N. di colonie; % di controlli non trattati

Tavola 4

Effetto su leucemia P388 sensibile e P388 resistente alla doxorubicina «in vitro»

Composto

ID50 (ng/ml)a

Rd

P388b

P388/DXe

DNR

1,7

800

470

Composto Ib

1,2

30

25

a) dose che dà il 50% di riduzione del numero di cellule in confronto con i controlli non trattati b) Cellule di leucemia P388 sensibili alla DX

c) Cellule di leucemia P388 resistenti alla DX

d) rapporto tra IDJ0 di P388/DX e ID50 di P388

Tavola 5

Attività antitumorale di Ib e Id contro la leucemia ascitica P388 Trattamento i.p. nel giorno 1

Composto

Dòse

T/Ca

LTSb

Morti

(mg/kg)

%

tossiche

DNR

2,9d

159-194

0/18

0/8

4,4d

140-184

0/18

7/18

4-dm DNR

0,75

163

0/8

Composto Ib

1,25

140

0/8

2,5

163

0/9

3/9

5

63

0/10

10/10

DX

4,4

220

1/10

0/10

6,6

305

0/10

10

610

5/10

0/10

Composto Id

1,12

170

0/10

1,68

185

0/10

2,53

230

1/10

2/10

a, b, c, d vedere Tavola 2.

Tavola 6

Attività antitumorale contro la leucemia di Gross Trattamento i.v. nel giorno 1

Composto

Dose

T/Ca

Morti

(mg/kg)

%

tossiche

DNR

15

171

0/8

22,5

171

0/8

Composto Ib

2,9

214

0/7

4,4

100

7/8

DX

10

171

0/10

13

200

0/10

16,9

207

3/10

Composto Id

1,2

171

1/10

2,16

200

1/10

3,8

114

5/9

a, b, vedere Tavola 2.

Tavola 7

Attività per via orale di Ib e Id contro la leucemia di Gross

Trattamento

Via

Scheda

Composto dose (mg/kg)

T/C

%b

Morti tossiche i.v.

+ 1

DNR

15

200

0/10

22,5

125

6/10

Orale

+ 1

4-dm DNR

3

150

0/6

3,6

150

0/6

4,3

216

0/3

Orale

+ 1

Composto Ib

2,9

167

0/10

4,4

208

0/10

6,6

116

4/9

i.v.

+ 1

DX

10d

171-171

1/20

13d

200-200

1/20

16,9d

200-207

3/13

Orale

+ 1

Composto Id

1,2

171

0/9

2,1

185

0/8

3,8

214

3/8

Orale

1,2,3

Composto Id

0,48

183

0/10

0,62

208

0/10

0,8d

233-258

2/20

a) giorni dopo il trapianto del tumore b c) vedere Tavola 2

d) dati di due esperimenti (range).

5

10

15

20

25

30

35

■40

45

50

55

60

V

Claims

655 119
2

RIVENDICAZIONI 1. Un glucoside antraciclinonico di formula generale I:

in cui Ri è idrogeno o un gruppo ossidrile ed R2 è idrogeno. 2. Un glucoside antraciclinonico di formula generale II:

in cui Ri è idrogeno o un gruppo ossidrile, ed R2 è idrogeno o un gruppo metossile.
3

3

en,

(VI)

3. Un composto secondo la rivendicazione 1, che è il 4-de-metossi-7-0-(2,6-didesossi-a-L-arabino-esopiranosil)-daunomi-cinone.
4

in cui R è idrogeno ed R2 è scelto dal gruppo formato da idrogeno e da metossile, che vengono separati e purificati a mezzo di cromatografia su colonna di gel di silice usando il sistema etile acetato : cicloesano (1 : 1 in volume) come agente eluente, rimuovendo il gruppo o i gruppi protettori O-acetili dallo zucchero per trattamento con una soluzione acquosa 0,2 N di sodio idrato a temperatura ambiente, per ottenere i glucosidi puri di formula I e II.

4. Un composto secondo la rivendicazione 1, che è il 4-de-metossi-7-0-(2,6-didesossi-a-L-arabino-esopiranosil)-adria-micinone.
!5

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

655 119

5

5. Un composto secondo la rivendicazione 2, che è il 7-0--(2,3,6-tridesossi-a-L-eritro-2-ene-esopiranosil)-daunomicinone.
6. Un composto secondo la rivendicazione 2, che è il 4-de-metossi-7-0-(2,3,6-tridesossi-a-L-eritro-2-ene-esopiranosil)--daunomicinone.
7. Un composto secondo la rivendicazione 2, che è il 7-0--(2,3,6-tridesossi-a-L-eritro-2-ene-esopiranosil)-adriamicinone,
8. Un composto secondo la rivendicazione 2, che è il 4- de-metossi-7-0-(2,3,6-tridesossi-a-L-eritro-2-ene-esopiranosil)--adriamicinone.
9. Un procedimento per la preparazione di glucosidi antra-ciclinonici aventi la formula generale I e la formula generale II:

o .oh

15 in cui Ri è un gruppo ossidrile ed R2 è scelto dal gruppo formato da idrogeno o da un metossile, caratterizzato dal fatto che un antraciclinone di formula generale III:

OCHjR

(III)

in cui R è un gruppo ossidrile ed R2 è scelto dal gruppo formato da idrogeno o da un metossile, sciolto in dimetilformamide anidra, è fatto prima reagire a temperatura ambiente con t-bu-3s til-difenil-clorosilano in presenza di imidazolo per dare il corrispondente 14-t-butyl-difeniI-silil etere, che viene condensato in cloruro di metilene anidro, con il 3,4-di-0-acetil-2,6-didesossi--a-L-arabino-esopiranosil cloruro di formula IV:

40

(IV)

oocch.

50 in presenza di una miscela di bromuro mercurico, ossido mer-curico e di setaccio molecolare per ottenere una miscela dei glucosidi protetti di formula V e VI:

55

^COCHjK

"oh

(V)

^CCO?/T"° ©

oocch,

:och,r oh o

ch

(VI)

in cui R è t-butil-difenil-sililossi ed R2 è idrogeno o metossile, che vengono separati e purificati a mezzo di cromatografia su colonna di silica gel usando il sistema toluene : acetone (1:1 un volume) come agente eluente, rimuovendo il gruppo o i gruppi protettori O-acetili dallo zucchero per trattamento con una quantità catalitica di sodio metilato in metanolo e susse-guentemente il gruppo protettore 14-t-butil-difeni 1-silile dal-l'aglicone per trattamento con fluoruro di tetra-n-butilammo-nio in tetraidrofurano, per ottenere in forma pura i glucosidi di formula I e II.
10

10. Un procedimento per la preparazione di glucosidi antra-ciclinonici aventi formula generale I e II

oh coch-r oh oh

0

ho ck oh coch,r

'oh oh

0

ho ch

(II)

in cui Ri è idrogeno ed R2 è scelto dal gruppo formato da idrogeno o da un metossile, caratterizzato dal fatto che un antra-ciclinone di formula generale III:

655 119

o oh

:och.r oh oh oh

(III)

in cui R è idrogeno ed R2 è scelto dal gruppo formato da idrogeno o da metossile, sciolto in cloruro di metilene, viene fatto reagire, in presenza di trifluorometansulfonato di argento e di setaccio molcolare, con il 3,4-di-0-acetil-2,6-didesossi--L-arabino-esopiranosil cloruro di formula IV:

CI

oocch per ottenere una miscela dei clucosidi protetti di formula Ve VI:

:och,r oh oh o

:ch

(V)

:och_*

oh

0

H
11. Una composizione farmaceutica che comprende una dose terapeuticamente efficace di un composto come rivendicato nelle rivendicazioni 1 e 2 in miscela con un diluente o supporto farmaceuticamente accettabile.