CS245182B1 - Kmeň mikroorganizmu Streptomyces fradiae CCM 3765 - Google Patents

Description

245182 2

Vynález sa týká kmeňa mikroorganizmu Streptomyces fradiae CCM 3765 /interně označenieNMU 2/32/ produkujáceho tylozín.

Zvýšenie priemyselnej výroby tylozínu je možné dosiahnut zvýšením výrobnej kapacity,alebo zvyšováním produkcie pri jeho biosyntéze. Druhý spósob, t.j. zvyšovanie produkcie prijeho biosyntéze nevyžaduje na rozdiel od prvého, velké investiční náklady. Je založená nalepšej produkčnej schopnosti kmeňa používaného pre biosyntézu alebo na lepších fermentačnýchpodmienkách, ktoré sa zabezpečujú dokonalejším riadením fermentácie.

Tento druhý spósob je v sáčasnej době jedinou možnou cestou zvýšenia výtažnosti a jednýmz hlavných prínosov je zlepšovanie produkčných vlastností kmeňa. Produkčně kmene sú získávanéradom zavedených postupov dlhodobých šlachtitelských programov. Výsledné kmene vykazuji! potom rad výzmaných odlišných vlastností, z ktorých najdóleži-tejšie sá tie vlastnosti, ktoré sa prejavujú vo zvýšenej produkcii tylozínu vo fermentorochvo výrobě.

Kmen Streptomyces fradiae CCM 3765 bol získaný pósobením mutagénov a opakovanými pasiv-nými selekciami na východzí kmeň Streptomyces fradiae EMS 98. Spósob šlachtenia kmeňa jeznázorněný na nasledujúcej schéme, kde je uvedená genealogická línia vedáca ku kmeňu, naktorý je uplatňovaný patentový návrh.

Streptomyces fradiae EMS 98PS 115 - 10 UV - 1UV 1/31

PS 131 - 7 NMU - 1 NMU - 1/19 NMU - 2 NMU - 2/32

Skratkyi PS - pasívna selekcia - selekcia bez pósobenia mutagénuUV - pósobenie UV světla MNU - pósobenie nitrozometyl močoviny

Posledně mutagénne pósobenie bolo na kmeň inertného označenia MNU 1/19 nitrozometyl-močovinou v koncentrácii 0,15 M po dobu 100 min. fosfátovom pufre s hodnotou pH 6,8 naspórovd suspenziu kmeňa MNU 1/19, získaná zmytím vysporulovanej kultury vodou. Po dobupósobenia bola mutačně zmes miešaná na elektromagnetickom miešadle pri 25 °V. V časových intervaloch po 40, 60, 80 a 100 min. pósobenia nitrozometylmočoviny boliodoberané vzorky a riedené riediacou radou s koeficientom 10 za sáčasného zrieďovanianitrozometylmočoviny na neúčinná koncentráciu. Zriedené vzorky boli naočkované'na Petriho mi-sky so sporulačným agarom tak, aby nedochádzalo ku vzájbmnému kontaktu kolonií a po vys-por ulovaní boli samostatné kolonie preoěkované na šikmé agary.

Spory pre pasívnu selekciu boli suspendované v destilovanéj vodě, riedené riediacouradou s faktorora 10 a očkované na Petriho misky so sporulačnou pódou. Po 14-dennej inkubáciipri teplote 28 °C boli izoláty vysporulované a bolo možné ich preočkovat na šikmé agary.

Claims (1)

1. 3 245182 Inkubácia tohto základného sporulačného materiálu prebiehala pri 28 °C 10 až 12 dní. Vyššie uvedeným spósobom aplikáciou mutagénov a pasívnej selekcie bol získaný izolát NMU 2/32. Izoláty bolí hodnotené podlá schémy šikmý agar - vegatívne inokulum - vlastná fermen- tácia. Kmeň mikroorganizmus Streptomyces fradiae CCM 3765 převyšuje produkciu dosial používanýchkmeňov o 80 až 120 %. Kmeň tvoří pri kultivácii na sporulačnej pode s kvasničným extraktom,hovádzím extraktom, hydrolytovaným kaseinom a dextrínom kolonie o priemere 4 až 6 iron vyvýšenénad substrátom so sporulovaným stredom, s bielymi sporami v střede po 10 až 12-dňovej kulti-vácii pri 28 °C. Přednostou tohto kmeňa je jeho odolnost k mechanickému namáhaniu, ktorému je kultúrapodrobená počas miešania vo fermentore. Hlavnou a najvýznamnéjšou vlastnostou kmeňa Strepto-myces fradiae CCM 3765 je zvýšená produkcia tylozínu pri submerznej fermentácii. Přikladl Fermentácia v bankách na rotačných třepačkách Vegetativně inokulum bolo připravené submerzne v 500 ml varných bankách so 60 ml ino-kulačnej pódy /kukuřičný extrakt, sójová múka, sójový olej a CaCC>3/. živná póda po vysterili-zovaní bola naočkovaná klučkou spor zo šikmého agaru a inkubovaná na rotačnom trepacom stroji40 až 48 hodin. Takto připraveným vegetatívnym inokulom boli očkované produkčně varné banky o obsahu500 ml s objemom fermentačnej pódy 60 ml /zdroj uhlíka repná melasa, sójový olej, zdroj dusí-ka rybia múka, kukuřičný gluten, anorganické soli a CaCO^/. Fermentácia prebieha 8 až 9 dníkultivácie. Produkcia tylozínu za vyššie uvedených podmienok dosiahla 6 000 mj./ml. Příklad 2 Fermentácia v poloprevádzkovom fermentore Fermentácia v poloprevádzkovom fermentore o objeme 5 000 1 bola dvojstupňová. Očkovaciapóda obsahovala kukuřičný extrakt, sójová máku, krmné droždie, sójový olej a CaCO^, Fermentačnápóda obsahovala kukuřičný extrakt, rybiu máku, kukuřičný gluten, repná melasu, sójový oleja CaCOj. Fermentor bol plněný 2 800 1 pódy a očkovaný 10 % objemu z očkovacieho fermentoru. Kul-tivácia prebiehala pri teplote 28 °C, miešanie 180 obr./min., vzdušnenie 2 500 1/min. za200 hod. kultivácie. Produkčným kmeňom Streptomyces fradiae CCM 3765 bola dosiahnutá produkcia6 300 mj./ml. PREDMET VYNÁLEZU Kmeň mikroorganizmu Streptomyces fradiae CCM 3765 produkujúci tylozín.