CS270543B1 - Myši lymfocytáeny hybridóm VU 2-L/5 - Google Patents

Description

Vynález sa týká myáieho lymfocytárneho hybridómu, tj. hybridného jedoobunkového organizmu, zostrojeného buňkovou fúziou myšej myelómovej linie Sp2/0 a myšej elezinovej buňky, produkujúceho protilátku proti virusu chřipky A.

Protilátky voči proteinem virusu chřipky sa doteraz přípravujú tak, že virus resp. jeho izolované proteiny sa opakované injikujú ako antigén pokusným zvieratám, najčastejšie králikon, myšiam, alebo fretkám. Sérum takto imunizovaných zvierat, odobraté po určitej době posobenia antigénu, alúži ako zdroj protilátek, používaných predovšetkým pra kvantitativný alebo kvalitativnu analýzu antigénu - virusu chřipky - vo výskume a v imunodiagnostickej praxi.

Tento postup, nabývaný konvenčnou imunlzáciou, má niekoXko nevýhod. V sére imunizovaných zvierat sa nachádza heterogénna zmes protilátek, kterých spektrum je v každom jednotlivce organizme rožne a neopakovatelné. Organizmus epravidla vytvoří okrem protilár tok voči žiadanému antigénu i protilátky voči nečietotám antigánového preparátu, ktoré Je potřebné zo sér odstraňovat vysycováním. Výrobně šarže konvenčných sér se preto dajú ťažko Standardizovat a bývajú v širokou rozmedzí kvality. Pre výrobu každéj šarže třeba připraví? čistý imunizačný antigén a 3alšie antigény na vyeýtenie balastných protilátek proti nečietotáu.

Uvedené nedostatky vyššié zmieneného a doslal používaného postupu odpadni, ak Je k dispozicii hybridou, produkujúci monoklonálnu protilátku proti nukleoproteinu virusu chřipky A, uložený v zbierke hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislava, Mlýnská dolina 1, pod označením VU 2-L/5. '

Uvedený hybridou bol získaný sposobom známým z odbornéJ literatúry (Kohler, G., Milstein, C.,: Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature 256, (1975), 495: Gerhard. W.; Fueion of cells in suspension end outgrowth of hybrids in conditioned; medium. In: M_onoclonal antibodies. Hybrids: A New Dimension in Biological Analyses. R. H. Kennet, T. 3. McKearn, K. B. Bechtol, eds., New York, Plenum Prese (1980), 370.) klonovením súboru hybridných buniek po fúzi! myšej myelómovej linie Sp2/0 a buniek, ziekanýéh zo eleziny myši kmene BALB/c. imunizovaných virueom chřipky A/Singapore/6/86(HlNl). ’

Výhodou hybridonu podía vynálezu Je, že^produkuje homogénnu protilátku, tzv. monoklonálnu protilátku, ktorá Je echopná Specificky reagovat a nukleoproteinom chřipkového virusu typu A. Hybridou VU 2-L/5 možno kultivovat in vitro v mádlech vhodných pře živočišné buňky, alebo in vivo v_:peritoneálnej dutině myši kmene BALB/c. Z konzerv, uchovaných v kvapalnon dusíku, možno zahájit produkciu protilátky bez dalšej imunizácie antigénoa. .

Přiklad

Pře účel pomnoženia hybridomovych buniek in vivo se aplikovalo 5x10 buniek do peritoneálnej dutiny, myši. Pre lepšie uchytenie aplikovaných buniek bola myš 15 dni před přenosem buniek -hybřidómu premedikovaná parafinovým olejom (0,5 ml intraperitoneálne). Po 20 dnech rastu hybridómu v peritoneálnej dutině bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobratá. Celkem sa získalo 5 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 7 mg/ml imunsglobulinu. Ascitická tekutina, obeahujúca produkt hybridómu VU 2-L/5, vykazovala v rádioimuncanalytlekem teste špeicifickú vazbu k vírusom chřipky typu A (napr. subtyp Hl, H2, H3), ale nie voči typu B, a v rádioimunoprecipitačnom teste sa viazala na nukleoproteín virusu chřipky A.

In vitro rastů buňky hybridómu ako polosuspenzná kultúra. Majů tvar (gulatý) a velkost charakteristické pre myelómové buňky, obeahujú fúzované buňkové Jadrá, su aneuploidné. Buňky hybridómu VU 2-L/5 majú ultraštruktúrny obraz typických myelómových buniek, kde pravažujúcou organelou sú volné a na membrány viazané polyribozómy. Základným kultivačnýa médion Je Oulbeccova modifikácia Eaglovho minimálneho esenciálneho média (Dulbecco.

CS 270 543 Bl kde převážujúcou organelou sú volné a na membrány viazané polyribozomy. Základným kultivačným médiem je Oulbeccova modifikácia Eaglovho minimálneho esenciálneho média (Dulbecco. R. a Freeman, G., Virology 8 (1959), 396). Toto médium, označované ako DMEM, je pre kultiváciu hybridómu doplněné gentamycinom a inaktivovaným prekolostrálnym sérom (10%, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C - jeho středná generačná doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulín podtriedy IgGl.

Hybridóm VU 2-L/5 sa može priemyselne využívat ako :zdroj protilátky proti nukleoproteinu (nukleokapsidovému proteinu) virusu chřipky A v metodách analytických preparativnych alebo diagnostických a to:

1) pri kvantitativnom a kvalitativnom vyhodnocovaní přítomnosti nukleoproteínu virusu chřipky A vo vyšetřovaném materiál! (napr. klinické vzorky), .

2) pri vyhodnocovaní epidemiologickéj situácie,

3) pri purifikácii nukleoproteínu virusu chřipky A,

4) ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 1) prs přípravu sér Specifických pre uvedená podtriedu.

Claims (2)

1. PREOMET VYNÁLEZU

   Myší lymfocytárny hybridám VU
2. 2-L/5, produkujúci monoklonálnu protilátku podtriedy IgG 1 proti nukleoproteínu virusu chřipky A.