CS272886B1 - Mouse lymphocyte hybridome blvgp 51 ueo-6a12/a7 - Google Patents
Mouse lymphocyte hybridome blvgp 51 ueo-6a12/a7 Download PDFInfo
- Publication number
- CS272886B1 CS272886B1 CS152289A CS152289A CS272886B1 CS 272886 B1 CS272886 B1 CS 272886B1 CS 152289 A CS152289 A CS 152289A CS 152289 A CS152289 A CS 152289A CS 272886 B1 CS272886 B1 CS 272886B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- virus
- hybridome
- monoclonal antibody
- ueo
- glycoprotein
- Prior art date
Links
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 5
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 16
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 claims description 5
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 claims description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 4
- 101500007117 Bovine leukemia virus Surface protein Proteins 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 6
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 abstract description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 abstract description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 abstract 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 abstract 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 abstract 1
- 108010011013 glycoprotein GP51 Proteins 0.000 abstract 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract 1
- 241000714266 Bovine leukemia virus Species 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 4
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000920732 Bovine leukemia virus Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález sa týká nového myšieho lymfocytárneho hybrídómu BLVgp51UE0-6A12/A7 t.j. hybridně j bunečnej linie, ktorá bola zostrojená fúziou buniek myšej myelómovej linie Sp2/0 a myších lymfoidných buniek, produkujících protilátky namierené proti obalovému glykoproteínu gp51 virusu bovinnej leukémie (BLV). Obalový glykoproteín je doležitou súčastou virusu bovinnej leukémie, je zodpovědný za infektivitu virusu. Nález anti gp-protílátok u zvierat má zásadný význam pre diagnostiku leukémie hovádzieho dobytka.
Doteraz sa protilátky proti antigénom BLV vyrábajú tak, že purífikovaný gp51 je opakované injikovaný produkčným zvíeratám, najčastejšie králikom. Sérum takto imunizovaných zvierat, odobrané pa určitej době půsohenia antigénu, slúži ako zdroj protilátok. Tento postup má mnohé nevýhody, pre každí imunizáciu je nutné izolovat znova glykoproteín gp51 z virusu, jeho purifíkácia je drahá a časové náročná. Okrem toho séru imunizovaných zvierat sa nachádza heterogénna zmes protilátok, ktorých spektrum je v každom zvierati rožne a neopakovatelné. Sérum takto získané obsahuje tiež protilátky voči.nečistotám antigénového preparátu, ktoré je potom nutné odstraňovat vysycovaním. Z týchto dóvodov výrobně šarže sa značné odlišujú a kvalita získaných polyklonálnych protilátok nie je štandartná.
Uvedené nedostatky výše uvedeného postupu konvenčnej imunizácie odpadní, keď máme k dispozici! hybridónr, produkujúci monoklonálnu protilátku proti obalovému glykúproteínu BLV, ktorý je uložený v zbierke hybridómov oddelenia molekulárnej virológie, Ústavu experimentálně j onkológie SAV v Bratislavě, ul. Čsl. armády 21, pod označením UE0-6A12/A7.
Uvedený hybridóm bol získaný v podstatě postupom známým v odbornej literatúre ako hybridómová technológia (Kohler, G., Milstein, C. z Continucts cultures of fused cells secreting antibody of prodefined specificity, Nátuře 256, 495, 1975), R. H. Burdon, Ρ. H. VanKnippenberg: Laboratory techniques in biochemístry and molecular biology, Vol. 13, Monoclonal Antibody Technology, Elsevier, Amsterdam 1984). Postup, ktorým boli hybridómy připravené bol námi modifikovaný (0. Orlík, .Č. Altaner: Modifications of hybridoma technology yield of monoclonal antibody producing cells, J. Immunoi. Methods, 115, 55-59, 1988).
Výhodou hybrídómu je, že produkuje homogenně monoklonálne protilátky, ktoré reagují s obalovým glykoproteínom BLV. Hybridóm SLVgp51-6A12/A7, je možno kultivovat in vitro v médíách vhodných pře živočišné buňky a súčasne je adaptovaný pre rast in vivo v peritoneálnej dutině myšieho kmeňa 8ALB/c. Z konzerv, ktoré sí uchovávané v kapalnom dusíku, je možno zahájit produkciu protilátky bez ďalšieho antigénu. Protilátka produkovaná klónom BLVgp51-6A12/A7 reaguje specificky s determinantou obalového glykoproteínu 8LV a má neutralizačný charakter.
Příklad
Za účelom pomnoženia hybridómových buniek in‘vivo bolo 2-10 x 10^ buniek injikované do peritoneálnej dutiny myší kmeňa BALB/c. Týmto myšiam bolo 14 dní predtým injikované do peritoneálnej dutiny 0,5 ml Přistanu alebo inkompletného Freudova adjuvans za účelom vytvorenia sterilného ascitu, ktorý napomáhá rastu injikovaných hybridómových buniek. Po 14 dnách rastu hybridómových buniek v peritoneálnej dutině, myš bola usmrtená a naprodukovaná ascitická tekutina bola sterilně odobraná. Celkom sa získalo 8 ml ascitovej tekutiny, ktorá obsahovala 9 mg/ml imunoglobulínu. Monoklonálna protilátka reagovala specificky s glykoproteínom gp51-BLV a s desíntegrqvaným vírusom v rádíoprecipitačnom teste a rádioimunologickom teste. Z ascitickej tekutiny bol imunoglobulín izolovaný pomocou chromatografie na kolóne Protein A-Sepharese alebo inou vhodnou metodou. Takto purifikovaná monoklonálna protilátka je vhodná pre potahovanie polystyrénových materiálov (mikrotítračné doštičky, polystyrénové tyčinky) za účelom přípravy diagnostických súprav na detekciu BLV infikovaných zvierat.
In vitro rastů buňky hybrídómu ako polosuspenzná kultúra. Základným kultivačným médíom je Dulbeccova modifikácia Eaglova minimálneho esenciálneho média doplněného 5 percentami koňského alebo iného séra vhodného pre tkáňové kultúry. Hybridóm je kultivovaný pri
CS 272006 fll 2 °C v C02 termostate, jeho štandardná generační doba je přibližné 24 hodin. Produkovaná . protilátka je monoklonálny imunoglobulín podtriedy IgGl.
Hybridóm BLVgpUEO-6A12/A7 mĎže byí priemyslovo využívaný ako zdroj protilátky proti obalovému glykoproteínu gp51 BLV v diagnostických metodách, v purifikačných metodách a iných aplikáciach.
Konkrétné má využitie: pri výrobě imunodiagnostických súprav na detekciu infekcie hovadzieho dobytka vírusom bovinnej leukémie, při purifikácii virusového glykoproteínu imunoafinltnou chromatografiou, při vyhodnocovaní antigénnej variability virusového glykoproteínu, pre přípravu antiidiotypovej protilátky pre vakcinačné účely, ako zdroj protilátky jedinej podtriedy pře přípravu sér, pře detekciu virusového antigénu v infikovaných zvieratách, pře neutralizáciu BLV.
Claims (1)
- PREDMET VYNÁLEZUMyší lymfocytárny hybridóm BLVgp51UE0-6Al2/A7, produkujúci neutralizačnú monoklonálnu protilátku podtriedy IgGl proti obalovému glykoproteínu gp51 virusu bovinnej leukémie.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS152289A CS272886B1 (en) | 1989-03-11 | 1989-03-11 | Mouse lymphocyte hybridome blvgp 51 ueo-6a12/a7 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS152289A CS272886B1 (en) | 1989-03-11 | 1989-03-11 | Mouse lymphocyte hybridome blvgp 51 ueo-6a12/a7 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS152289A1 CS152289A1 (en) | 1990-06-13 |
| CS272886B1 true CS272886B1 (en) | 1991-02-12 |
Family
ID=5349809
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS152289A CS272886B1 (en) | 1989-03-11 | 1989-03-11 | Mouse lymphocyte hybridome blvgp 51 ueo-6a12/a7 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS272886B1 (sk) |
-
1989
- 1989-03-11 CS CS152289A patent/CS272886B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS152289A1 (en) | 1990-06-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI83538C (fi) | Foerfarande foer produktion av en hybridomcellinje. | |
| FI87734B (fi) | Immunologisk motverkan foer tumoerer och virus | |
| JPH05506573A (ja) | ＨＩＶ―１糖タンパクに反応性を有するＩｇＧ―１ヒトモノクローナル抗体およびその使用方法 | |
| US4731237A (en) | Immune response to virus induced by anti-idiotype antibodies | |
| JPS592276B2 (ja) | ウイルス抗体の製造方法 | |
| AU653366B2 (en) | Method for inhibiting the infectivity of human immunodeficiency virus | |
| US7871621B2 (en) | Anti-HBs monoclonal antibody | |
| CS272886B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridome blvgp 51 ueo-6a12/a7 | |
| FI111518B (fi) | Menetelmä monoklonaalisten vasta-aineiden ja vasta-ainetta sisältävän farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi | |
| Oxford | The use of monoclonal antibodies in virology | |
| CS272888B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridome blvgp 51 ueo-25 e11/2 | |
| Stanley et al. | Monkey-derived monoclonal antibodies against Plasmodium falciparum. | |
| CS272889B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridome blv p 24 ueo-25 e 11/8 | |
| CS272887B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridome blvgp 30 ueo-94 c 11/2/e11 | |
| CS272890B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridome blvgp 51 ueo-4e9/32e5 | |
| EP0370090B1 (en) | Immunogens and biologically active peptides derived from shared sequences from antigens and anti-idiotypic antibodies or antibodies specific for cellular receptors of the antigens | |
| WO1990001066A1 (en) | Porcine polyclonal and monoclonal antibodies | |
| Novak et al. | Preparation and characterization of hybridomas producing monoclonal antibodies against human alpha interferon | |
| RU93019968A (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животного mus musculus - продуцент моноклональных антител к с-концевой части белка р24 вируса иммунодефицита человека i типа | |
| RU2257414C1 (ru) | Штамм гибридных клеток с3/s-3e5 животных mus musculus l., продуцирующих моноклональные антитела к коксиеллам бернета | |
| CS269050B1 (sk) | Myši lymfocytárny hybridům VU VIH7 | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS253240B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBslC6B12 | |
| CN109627333A (zh) | 新疆伊犁株马驽巴贝斯虫Bc48蛋白单克隆抗体制备方法 | |
| CS270543B1 (cs) | Myši lymfocytáeny hybridóm VU 2-L/5 |