CZ137399A3 - Retrovirový produkční systém pro produkci replikačně defektivních vektorovýh partikulí - Google Patents

Retrovirový produkční systém pro produkci replikačně defektivních vektorovýh partikulí Download PDF

Info

Publication number
CZ137399A3
CZ137399A3 CZ991373A CZ137399A CZ137399A3 CZ 137399 A3 CZ137399 A3 CZ 137399A3 CZ 991373 A CZ991373 A CZ 991373A CZ 137399 A CZ137399 A CZ 137399A CZ 137399 A3 CZ137399 A3 CZ 137399A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
vector
genes
retroviral
gene
hiv
Prior art date
Application number
CZ991373A
Other languages
English (en)
Inventor
Alan John Kingsman
Susan Mary Kingsman
Narry Kim
Kyriacos Mitrophanous
Original Assignee
Oxford Biomedica (Uk) Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9621680.9A external-priority patent/GB9621680D0/en
Priority claimed from GBGB9624457.9A external-priority patent/GB9624457D0/en
Application filed by Oxford Biomedica (Uk) Limited filed Critical Oxford Biomedica (Uk) Limited
Publication of CZ137399A3 publication Critical patent/CZ137399A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/16043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16051—Methods of production or purification of viral material
    • C12N2740/16052—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález popisuje retrovirové vektorové produkční systémy, a retrovirové vektorové partikule, které produkují tyto systémy. Zvláště popisuje systémy a vektorové partikule, ve kterých se nevyskytují jisté retrovirové auxiliární faktory. Vynález se také týká použití retrovirových vektorů zvláště v genové terapii.
Dosavadní stav techniky
Retrovirové vektory slouží vzhledem k jejich účinnosti, bezpečnosti a stabilní dlouhotrvající expresi genu jako nástroje pro klinický transfer genu. Ze zprávy instituce United States National Institutes of Health RAC vydané v září 1996 (Ross, G., Erickson, R., Knorr,D., Motulsky, A.G., Parkman, R., Samulski, J., Straus, S. E. and Smith, B.R. (1996) . Iium. Gene Ther. 7, 1781-1790) 76 ze 107 studii, které zmiňuje NIH, se uskutečnily na základě vektorových systémů odvozených od viru myší leukémie (MLV).
Jedním hlavním nedostatkem těchto vektorů je jejich neschopnost infikovat buňky, které se nemnoží, jako jsou neurony, makrofágy a haematopoeitické kmenové buňky. Tyto buňky tvoří důležité cíle genové terapie.
Lidský virus selhání imunity typ 1 (HIV-1) patří do subrodiny retrovirů. Lentiviry a běžně i jiní zástupci této rodiny HIV mohou infikovat buňky v klidovém stádiu. Tato skutečnost činí lentiviry atraktivní jako vektory vhodné pro genovou terapii.
Virové determinanty pro infekci nedělících se buněk virem. HIV-1 zahrnuje matricový protein pl7 (MA) a vpr (Gallay, P., • · ··· ···· · · · · • · · · · · ···· · ··· ··· ······· · ·
Stitt, V., Mundy, C., Oettinger, M., and Trono, D., (1996*). J.
Virol. 70, 1027-1032). MA vykazuje karyofilní vlastnosti, které mu propůjčuje konzervativní úsek základních zbytků, jenž tvoří nukleární lokalizační signál (NLS) (Bukrinsky, M.I., Haggerty, S., Dempsey, M.P., Sharova, N., Adzhubel, A., Spitz, L., Lewis, P., Goldfarb, D., Emerman, M., and Stevenson, M. (1993) . Nátuře 365, 666-669) . Vpr také obsahuje zřetelné LNS (Mahalingam, S., Collman, R.G., Patel, M., Monken, C.E., and Srinivasan, A. (1995). Virology 212, 331-339). Jestliže chybí funkční gen vpr, mutanti viru MA-NLS se v makrofágách účinně nereplikují (Heinzinger, N.K., Bukinsky, M.I., Haggerty, S.A., Ragland, A.M., Kewalramani, V., Lee, M. A., Gendelman, H.E., Ratner, L., Stevenson, M., and Emerman, M. (1994). Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 91, 7311-7315). Tyto data se interpretují tak, že vpr stejně jako MA funguje jako karyofilní determinanta HIV-1. Jestliže je nepřítomen vpr a je přítomen funkční MA, účinnost transdukce makrofágů odvozených od monocytů klesá o více než 50 % (Naldini, L., Blomer, U., Gallay, P., Ory, D., Mulligan, R., Gage, F.H., Verma, I.M., and Trono, D. (1996). Science 272, 263-267; Naldini, L., Blomer, U., Gage, F.H., Trono, D., and Verma, I.M. (1996). Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 93, 11382-11388).
Hlavní zájem následující práce popsané v publikaci Lever, A., Gottlinger, H., Haseltine, W., and Sodroski, J. (1989). J. Virol. 63, 4085-4087, která ukazuje sekvence požadované při pakování HIV-1, je vývoj vektoru vhodného pro genovou terapii založeného na HIV-1. Transfer cizorodých genů do linie lidských T-buněk prostřednictvím replikace vektoru založeném na detektivním HIV-1 se popisuje v publikaci Poznaňský, M., Lever, A. Bergeron, L., Haseltine, W., and Sodroski, J. (1991). J. Virol. 65, 532-536. Jiné skupiny výzkumníků vytvořily vektory založené na HIV-1, které jsou indukovatelné genem, tat (Buchschacher , G.L., Jr. And Panganiban, A.T.
(1992). J. Virol. 66, 2731-2739) nebo které používají «··· ·· ·· · *· ·« • · · 4 4 4 4444
44« 4444 · 4 4 ·
4 444 4 4444 4 444 444
4444444 4 4
44 44 4 44 44 heterogenní promotory (Shimada, T., Fujii, H., Mitsuya, H., and Nienhuis, A. W. (1991). J. Clin. Invest. 88, 1043-1047) .
Titry virů získané s těchto vektorů byly však nízké (nejvíce 103 infekčních partikul! v jednom mililitru) a není zřejmé, zda uvedený vektorový systém může garantovat produkci vektorů bez pomocného viru. V současné době se věnuje velké úsilí produkci vektorů bez pomocného viru založeného na ko-transfekcích tří plazmidů (Richardson, J. H., Kaye, J.F., Child, L.A., and Lever, A.M. (1995). J. Gen. Virol. 76, 691-696). Vektory HIV se mohou pseudotypovat glykoproteinem viru vesikulární stomatitidy (VSV-G) a tyto partikule jsou infekční i po zakoncentrování ultracentrifugou (Akkina, R.K., Walton, R.M., Chen, M.L., Li, Q.X., Planelles, V., and Chen, I.S. (1996). J. Virol. 70, 2581-2585). Pseudotypování VSV-G potvrzuje širší rozmezí hostitelů a eliminuje změny rekombinace za účelem produkce obalů viru HIV divokého typu. Transdukce in vivo nedělících se neuronových buněk se demonstrovala VSV-G pseudotypováním HIV-1 ve tří plazmidovém ko-transfekčním systému (Naldini, L., Blomer, U., Gallay, P., Ory, D., Mulligan, R., Gage, F.H., Verma, I.M., and Trono, D. (1996). Science 272, 263-267; Naldini, L., Blomer, U., Gage, F.H.,
Trono, D., and Verma, I.M. (1996). Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 93, 11382-11388).
Virus HIV-1 obsahuje devět genů. Tři z nich gag, pol a env se nachází ve všech retrovirech. Jde o strukturální geny. Dalších šest genů: vif, vpu, vpr, nef, tat a rev se označují jako auxiliární geny. Jiné retroviry mají odlišné sady auxiliárních genů v jejich genomech divokého typu. Některé z auxiliárních genů ostatních retrovirů jsou analogy genů HIV1, ačkoli v literatuře nejsou uváděná vždy pod stejnými jmény. Analogové auxiliární geny vykazují homologii v nukleotidových sekvencích a mají stejné nebo podobné funkce. Kmeny HIV-2 a SIV obecně obsahují geny env, vpr, vif, tat a nef, které jsou analogy genů HIV-1. HIV-2 a některé kmeny SIV také obsahují • · ·» • · · · • · « · • · · · · · • · »· ·» ··· · ·· • · ·· » • · • · ··· ···· • · · · · · t ·· ·· ·<? · vpx, některým kmenům SIV chybí vpr. Lentoviry odlišné od HIV-1 také obsahují auxiliární geny, které nejsou analogy auxiliárních genů HIV-1. Retrovirové auxiliární geny se například popisují v publikacích Tomonaga, K., and Mikami, T. (1996). J. General Virol. 77, 1611-1621; Joag, S.V., Stephens, E.B. and Narayan, O.in Fields Virology, Vol. 2, 1970-1982 (Lippincott-Raven Publishers).
V současnosti všechny vektorové systémy založené na HIV obsahují některé nebo všechny auxiliární geny HIV. Gen rev umožňuje vznik exportního proteinu RNA a tat je hlavní transaktivátor provirové dlouhé terminální repetice (LTR). Auxiliární geny mají důležitou úlohu při virové replikaci a patogenezi. Auxiliární geny nebyly ještě úplně charakterizovány ani se nedefinovala jejich funkce.
Uvažuje se, že některé z auxiliárních genů se podílí na patogenezi HIV-1. Gen tat se implikuje při vývoji Kaposihi sarkomu (Barillari, G., Gendelman, R., Gallo, R.C. and Ensoli,
B. (1993). Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 90, 7941-7945;
Ensoli, B., Barillari, G., Salahuddin, S.Z., Gallo, R.C. and Wong Staal, F., (1990). Nátuře 345, 84-86). Zjistilo se, že vpr HIV způsobuje zástavu vývoje buněk a apoptózu, což je příčinou dysfunkce T-buněk u pacientů z AIDS (Jowett, J.B., Planelles, V., Poon, B., Shah, N.P., Chen, M.L., and Chen, I.S. (1995). J. Virol. 69, 6304-6313). Naznačuje se, že také extracelulární Vpr, který se nachází v periférní krvi se podílí na tkáňově specifické patologii spojené s infekcí HIV, protože Vpr indukuje buněčnou proliferci a diferenciaci (Levý, D.N., L.S. Fernandes, W.V. Wiliams, and D.B. Weiner (1993), Cell, 72, 541-50; Levý, D.N., Y. Refae; and D.B. Weiner (1995), J. Virol., 69, 1243-52).
Protože role auxiliárních genů není zřejmá a pravděpodobně se podílejí na patogenezi, je nutné jejich odstranění z vektorových produkčních systémů HIV-1, přičemž se musí • to • to to·· ······ ··· ·· · to······ · to • to ·» ·· to toto ·» zachovat dostatečně vysoký titr retrovirového vektoru a schopnost transdukovat buňky, které se nemnozí.
Data uvedená v publikacích Naldini, L., Blomer, U., Gallay, P., Ory, D., Mulligan, R., Gage, F.H., Verma, I.M., and Trono, D. (1996). Science 272, 263-267; Naldini, L., Blomer, U., Gage, F.H., Trono, D., and Verma, I.M. (1996). Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 93, 11382-11388; ukazují, že přítomnost nebo absence genu vpu neovlivňuje titr vektorových partikulí. V těchto publikacích se uvádí, že použitý pakovací systém produkuje titr 4 x 105, když je pseudotypován VSV-G a tento systém nezahrnuje geny env a vpu. V jiném systému, který neobsahoval pouze gen env, se získal stejný titr (Naldini, L., Blomer, U., Gallay, P., Ory, D., Mulligan, R., Gage, F.H., Verma, I.M., and Trono, D. (1996). Science 272, 263-267;
Naldini, L., Blomer, U., Gage, F.H., Trono, D., and Verma,
I.M. (1996). Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 93, 11382-11388).
Jak už se však uvedlo shora v textu, u jiného systému popisovaného v publikacích Naldini, L., Blomer, U., Gallay,
P., Ory, D., Mulligan, R., Gage, F.H., Verma, I.M., and Trono,
D. (1996). Science 272, 263-267; Naldini, L., Blomer, U.,
Gage, F.H., Trono, D., and Verma, I.M. (1996). Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 93, 11382-11388; který neobsahuje geny vpr ani vpu, se účinnost transdukce ve srovnání s vpr pozitivním systémem snížila o 50 %.
Zjistilo se, že když se odstraní některé nebo všechny auxiliární geny z retrovirových vektorových produkčních systémů, neovlivní to podstatně titry vektorových partikulí nebo schopnost vektorových partikulí transdukovat nedělící se buňky.
Podstata vynálezu
Vynález proto popisuje retrovirový vektorový produkční systém pro produkci vektorových partikulí vhodných pro genovou ·· • · · · 9» ·· • · · ·· terapii, které jsou založeny na lentivirech a jsou replikačně detektivní. Uvedené vektorové partikule jsou schopny infikovat a transdukovat nedělící se savčí cílové buňky. Uvedený systém obsahuje sadu sekvencí nukleových kyselin, které kódují komponenty vektoru. V systému je přítomen nebo zůstává nepřítomen jeden nebo více funkčních genů vybraných ze skupiny zahrnující HIV-1 auxiliární geny vpr> viř, tat a nef nebo analogové auxiliární geny jiných lentivirů, jejichž auxiliární geny jsou v normálním případě přítomny v lentivirech, na nichž jsou partikule založeny. Funkční gen vpu nemusí být také přítomen s podmínkou, že produkční systém tvoři vektor založený na HIV-1 a geny vpr a vpu nejsou přítomny, tak obsahuje také jeden z jiných auxiliárních genů.
Dále vynález popisuje retrovirové vektorové partikule, které produkuje zde popsaný retrovirový systém. Dále vynález popisuje konstrukci DNA určenou pro použití ve zde popsaném retrovirovém vektorovém produkčním systému. Uvedená konstrukce DNA kóduje pakovatelný RNA vektorový genom vhodný pro retrovirové vektorové partikule a je operabilně spojena s promotorem. Konstrukce neobsahuje žádné funkční retrovirové auxiliární geny, může být přítomen pouze gen rev. Konstrukce DNA může tvořit část sady konstrukcí DNA, které také kódují některé nebo všechny strukturní komponenty vektorových partikul!.
Vynález dále popisuje použití zde popsaných retrovirových vektorových partikul! při genové terapii a při přípravě léků pro genovou terapii; a způsob provedení genové terapie cílové buňky, přičemž způsob zahrnuje infekci a transdukci cílové buňky za použití zde popsané retrovirové vektorové partikule. Vynález dále popisuje transdukované cílové buňky, které jsou výsledkem uvedených použití a metod. Vynález popisuje systém pro zavádění genů, který je možno použít pro účely medicíny.
Termín exprese „založená na lentivirech znamená, že vektorové partikule jsou odvozeny od lentivirů. Genom • ·0 0 · 0· 0 tt 0 0
0 0 «00 0 0 0 0 • · · 0 0 0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 000 000 000000 0 0
0 · 0 00 0 ·0 · 0 vektorové partikule obsahuje jako základ komponenty z lentivirů. Vektorové partikule jako celek obsahují podstatné vektorové komponenty, které jsou kompatibilní s genomem RNA, zahrnující reverzní transkripci a integrační systémy. Obvykle budou zahrnovat proteiny gag a pol odvozené z lentivirů.
Protože jsou retrovirové vektorové partikule odvozeny od lentivirů, jsou schopny infikovat a transdukovat nedělící se buňky. Vektorové partikule jsou schopny do genomu cílové buňky zavést vybraný gen nebo geny, jako jsou terapeuticky aktivní geny. Během procesu infekce lentiviry tvoří v cytoplazmš cílové buňky pre-integrační komplex, který obsahuje integrázu, proteiny jádra a provirovou DNA. Komplex je schopen projít jadernou membránou cílové buňky prostřednictvím signálních sekvencí v proteinech. Retroviry jiné než lentiviry buď nezahrnují tyto proteiny nebo obsahují proteiny, ale bez vhodných signálních sekvencí.
Příklady lentivirů jsou HIV-1 a HIV-2, SIV, FIV, BLV, EIAV, CEV a virus visna. Z těchto virů jsou nejlépe prozkoumány HIV a SIV. Při genové terapii se preferují viry, které nezpůsobují selhání imunity, protože v případě virů selhání imunity se diskutuje jejich bezpečnost.
Absence funkčních auxiliárních genů u retrovirového produkčního systému znamená, že tyto funkční geny nebudou také přítomny u retrovirových vektorových partikul!, které tento systém produkuje. Také libovolné auxiliární proteiny, které by byly kódovány těmito geny inkorporovanými do vektorových partikulí, nebudou ve vektorových partikulích přítomny. Auxiliární geny mohou být přítomny v DNA kódující vektorový genom nebo dohromady s pakovacími komponenty. Pozice auxiliárního genu ve vektorovém produkčním systému závisí částečně na jeho vztahu s jinými retrovirovými komponenty. Gen viř je například často v pakovacích buňkách součástí pakovací kazety gag-pol. Odstranění funkčního auxiliárního genu pro ·*·» ·'· ·♦ 9 99 ·· • · · 9 · * · · · · • · · 9 9 9 » 9 9 9 9
999 999999 99 9 999
9 9 9 9 9 9 9 9 «· 99 9 99 9 9 účely vynálezu může zahrnovat jeho odstranění z pakovacích komponentů nebo z vektorového genomu nebo z obou.
Aby se odstranil funkční auxiliární gen, není nutné odstranit gen jako celek. Obvykle stačí odstranit část genu nebo nějakým způsobem gen porušit. Absence funkčního auxiliárního genu znamená, že gen není přítomen ve formě, ve které je schopen kódovat funkční auxiliární protein.
V preferovaném systému podle vynálezu jsou funkční geny vpr a tat nebo analogy genů normálně přítomných v lentlvirech, na kterých jsou vektorové partikule založeny, přítomny. Tyto dva auxiliární geny jsou asociovány s charakteristickými znaky lentivirů, které jsou zvláště požadovány v případě vektorů určených pro genovou terapii. Vynález však není limitován s ohledem na kombinaci auxilárních genů, které nejsou přítomny, jinou podmínkou, než tou uvedenou shora v textu. V systému podle vynálezu vhodném pro produkci vektorových partikul! založených na HIV-1 může chybět libovolná kombinace tří nebo více nebo s výhodou čtyř genů v jejich funkční formě. Nejvýhodnější je, když chybí všech pět funkčních forem auxiliárních genů ypr, vif, tat, nef a vpu. V podobném případě v systémech, které se spojují s jinými lentiviry, je nejvýhodnější když chybí funkční forma všech auxiliárních genů (mimo genu rev, který je s výhodou přítomen nebo nahrazen systémovým analogem systému rev/RRE).
Za účelem zaručit účinný export transkriptů RNA vektorového genomu z jádra do cytoplazmy se upřednostňuje zahrnout do vektorového genomu sekvence genu rev a rev responzivního elementu (RRE) nebo alternativní sekvence, které uskutečňují stejnou funkci jako systém rev/RRE. Funkční analog systému rev/RRE se nachází například v opičím viru MasonPfizer. Je znám jako CTE a obsahuje v genomu sekvenci typu RRE, o níž se tvrdí, že v infikovaných buňkách společně reaguje s faktorem. Uvažuje se, že buněčný faktor je analogem
• · · * fl · · · flflfl flflfl genu rev. CTE se pak může použít jako alternativní systém re v/RRE.
Je zřejmé, že vektor fungující jako producent zde popsaných retrovirových vektorových partikulí musí obsahovat systém reverzní transkripce (kompatibilní místa reverzní transkripce a navázání primerů) a integrační systém (kompatibilní místa pro integrázu a integraci), což umožňuje konverzi proviru a integraci dvouřetězcové DNA do genomu cílové buňky. Navíc je nutné, aby vektorový genom obsahoval pakovací signál. Tyto systémy a signály se obecně odvodily od lentivirů, na kterých se vektor zakládá. Je zřejmé, že ačkoli vektor podle vynálezu je založen na lentivirů, elementy lentivirů inkorporované do vektoru mohou být geneticky nebo jinak pozměněnou formou elementů lentivirů divokého typu. Změn je možné dosáhnout manipulací buď genomu RNA nebo jiných komponentů retrovirového vektorového systému produkujícího partikule. Části lentivirového genomu, které nejsou pro vektor nutné, mohou být odstraněny. Vektorový produkční systém může také použít substituenty například lentivirového genu env, přičemž vznikne vektor vhodný pro odlišné rozmezí cílových buněk (to se označuje jako pseudotypování).
Retrovirové vektorové partikule podle vynálezu nesou za účelem zavedení do cílové buňky jeden nebo více vybraných genů. Geny se vybírají podle účinku, kterého se má dosáhnout. Za účelem genové terapie musí být přítomen alespoň jeden terapeuticky aktivní gen kódující genový produkt, který působí proti stavu, který je nutno léčit nebo kterému je nutno předcházet. Navíc se může vybrat gen, který působí jako markér, protože kóduje detekovatelný produkt. Terapeutické geny mohou kódovat například antisense RNA, ribozym, transdominantní negativní mutant cílového proteinu, toxin, kondicionální toxin, antigen, který indukuje protilátky nebo pomocné T-buňky nebo cytotoxické T-buňky, jednořetězcové protilátky nebo protein potlačující nádor.
φφφφ ·· • « φ* * φφ φφ φφφ φ · φ φ • · φ · · « « φφφφ * * · · Φ * ΦΦΦΦ · ·9· ΦΦΦ * Φ Φ · Φ Φ · » · »·ΦΦ «Φ 9 «Φφφ
Upřednostňuje se, aby konstrukce vektorového genomu byla taková, že v provirové DNA je transkripce terapeutického genu nebo genů řízena 5'LTR, není však jinak operabilně spojen s žádným jiným promotorem ve vektoru. Exprese genu nebo genů tak probíhá v jedné transkripční jednotce. Také se upřednostňuje, aby 5'LTR byla modifikovanou LTR lentiviru, kde funkce promotoru není závislá na genu tat. Toho lze dosáhnout nahrazením funkcí promotorů lentiviru R a U3 funkcemi alternativních promotorů, které se mohou získat z jiných retrovirů a nebo nemusí pocházet z retrovirů. Uvedená strategie se popisuje v publikaci Cannon, P.M., Kim,N., Kingsman, S.M., and Kingsman, A.J. (1996). J. Virol. 70, 82348240 a v příkladech.
Je zřejmé, že termín „gen zde zahrnuje nukleovou kyselinu kódující požadovaný polypeptid nebo RNA. Geny zavedné vektory podle vynálezu obvykle tvoří cDNA.
Retrovirové vektorové partikule podle vynálezu jsou také schopny infikovat a transdukovat buňky, které, se pomalu dělí a které viry jiné než lentiviry, jako jsou například MLV, nejsou schopny dostatečně infikovat a transdukovat. Pomalu se dělící buňky se dělí přibližně jednou za tři až čtyři dni. Savčí buňky, které se nedělí nebo se dělí pomalu, zahrnují mozkové buňky, kmenové buňky, terminačně diferenciované makrofágy, plicní epiteliální buňky a různé jiné typy buněk. Také sem patří různé nádorové buňky. Ačkoli nádory zahrnují buňky, které se rychle dělí, některé nádorové buňky, zvláště ty, které se nacházejí ve středu nádoru, se dělí s malou frekvencí.
Zde popisovaná konstrukce DNA kódující genom vektoru je spojena s vysoce účinným promotorem, jako je například promotor CMV. Jsou známy i jiné vysoce účinné promotory. Pomocí retrovirového vektorového produkčního systému tak vzniká silná exprese vektorové RNA.
···· ·♦ t« · ., · * · * * · · · « Β
-L_L · · · · · ♦ . · β · ·
9 4 9 4 4 « * **J *· J ·* * * *· 9 9 4 44
Vhodné buňky nebo produkční buňky, které se používají v retrovirovém produkčním systému podle vynálezu jsou dobře známy v oboru. Řada retroviru se už rozdělila do replikačně detektivních genomů a pakovacích komponentů. Pro ty, kdo nejsou shopni je vytvořit, jsou tedy dostupné. Produkční buňky kódují virové komponenty, které nejsou kódované genomem vektoru. Jsou to například proteiny gag, pol a env. Geny gag, pol a env se mohou zavést do produkčních buněk a stabilně se začlenit do genomu buňky za vzniku pakující se buněčné linie. Retrovirový vektorový genom se pak zavede do pakující se buněčné linie transfekcí nebo transdukci za vzniku stabilní buněčné linie, která zahrnuje všechny sekvence DNA, jenž jsou nutné, aby se produkovaly retrovirové vektorové partikule. Jiným přístupem je současné zavedení odlišných sekvencí DNA do buněk transientní trojnásobnou transfekcí. Tyto sekvence jsou nutné při produkci retrovirových vektorových partikulí, například sekvence kódující env, gag-pol kódující sekvence a defektivní retrovirový genom. V preferovaném systému podle vynálezu oba strukturální komponenty a vektorový genom jsou kódovány DNA, která se stabilně integruje do genomu hostitelské buňky.
Za účelem produkce bezpečného HIV pakujícího se systému, který neobsahuje žádné zbytečné geny, se vyvinul systém, jenž neobsahuje geny vpr, nef, tat, vif nebo vpu (obrázek č. 1) . Pakovací komponenty se nacházejí na třech separovaných plazmidech. Aby se zajistilo, že nedojde k rekombinací a produkci pomocného viru, minimalizovaly se překrývající se sekvence. Ukázalo se, že tento vektor HIV transdukuje nedělící se buňky ošetřené afidikolinem za nepřítomnosti genu vpr. Získaný titr je podobný titru v systému, který obsahuje všechny auxiliární geny (Naldini, L., Blomer, U., Gage, F.H., Trono, D., and Verma, I.M. (1996). Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 93, 11382-11388).
> fcfc · • t » · • · · fc fc fcfcfc « fcfcfc* fcfc·· » fcfc · • fc ·· fc fcfc 1 fc fcfc 4 • fcfc ··« fc « • fc ··
Jde o první minimalizovaný lentivirový vektorový systém (S Naldini, L., Blomer, U., Gage, F.H., Trono, D., and Verma, I.M. (1996). Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 93, 11382-11388).
Skutečnost, že v tomto systému se pozorovaly vysoké titry, ukazuje, že auxiliární geny (mimo genu rev) jsou zbytečné při produkci vysokého titru a při transdukci nedělících se buněk. To je v rozporu se závěry, které se popisují v publikaci Naldini, L., Blomer, U., Gallay, P., Ory, D., Mulligan, R., Gage, F.H., Verma, I.M., and Trono, D. (1996). Science 272, 263-267, kde se uvádí, že vysoký titr viru je způsobený začleněním přídavných proteinů (jako je nef) do virových partikulí.
Systém může přinášet další výhody pro terapii HIV. Nahrazení LTR HIV-1 odlišným promotorem, jako je například konstitutivní promotor HCMV, umožňuje použití molekul, jako jsou Tat transdominantní mutantí
C.O., H. Rhim, C.H. Herrmann and A.P. Rice (1994), J. Acquired Immune Defic. Syndrome. 7, 655-664) nebo provokatéři TAR (Lisziewicz, J., D. Sun, J. Smythe, P. Lusso, F. Lori, A. Louie, P. Markham, J. Rossi, M. Reitz and R.C. Gallo (1993), Proč. Nati. Acad. Sci, USA, 90, 8000-4), jako terapeutická činidla, které nebudou ovlivňovat produkci vektoru.
Je zřejmé, že zde popsané minimalizované lentivirové vektory, které nenesou auxiliární geny viru divokého typu, se mohou také použít jako vakcíny.
anti-Tat (Echetebu,
Přehled obrázků na výkrese
Obrázek č. 1 ukazuje vektorový produkční systém podle vynálezu za použití ko-transformace tří plazmidů do buněk 293T.
Obrázek č. 2 zobrazuje vektorové genomy založené na HIV určené pro účely vynálezu. Čísla označují koordináty z HXB2. Promotor HCMV (-597 až -1) . HIV sekvence (455 až 1415; 5743 ···» 99 • · · ft · · • · ft ft ftft · >· ftft • ft ft • · · • « ···· • ftft ftft ·
99 ♦ ftft ft • ftft · •ftft ··· • ft ftft ftft (H3Z) nebo 5881 (H4Z) až 6403; 7621 až 8897; 8897 až 9720) z HXB2. Promotor HCMV jako vnitřní promotor (900 bp) . Klónovací místo (Xhol). Základní kostru; pBluescriptKS+.
Obrázek č. 3 zobrazuje plazmidy exprimující HIV gag-pol gen, které jsou určené pro použití podle vynálezu. Kódující oblast gagpol HIV-1 a RRE se klónovaly do pCl-neo (Promega) v restrikčních místech Xhol a Notl.
Obrázek č. 4 zobrazuje účinnosti transdukce vektorů podle vynálezu, které neobsahují pět auxiliárních faktorů. Transdukci nedělících se buněk. Účinnosti transdukce vektorů H4Z se stanovily X-gal barvením a vynesly se na osu Y v jednotkách I.f.u/ml. Buňky se zastaveným růstem ve fázi Gl/S se připravily aplikací afidikolinu (5 ug/ml).
Příklady provedení vynálezu
Plazmid pGP-RREl je expresivní plazmid odvozený od pWI3 (Kim,
S.Y., Byrn, R., Groopman, J., and Baltimore, D. (1989). J. Virol. 63, 3708-3713. RRE plazmidu pWI3 (přístupové číslo: U26942) se začlenilo prostřednictvím fragmentu StylI/StylI s tupými konci ¢7720-8050) do pBluescriptu KS+ štěpeného restríkčním enzymem Smál za vzniku pBSRRE. Fragment Narl/EcoRI pWI3 (637-5743) se začlenil do pBSRRE štěpeného restrikčními enzymy Clal a EcoRI za vzniku pBSGPRREl. Xhol/Notl fragment (obsahující gagpol a RRE) se začlenil do expresivního plazmidu pCl-Neo za vzniku pGR-RREl. Aby se odstranila kódující oblast vif, vektor pBSGPRREl se štěpil restrikčními enzymy Ndel a Smál, upravily se tupé konce a znovu se ligoval za vzniku pBSGPRRE2. Gen gagpol a RRE se začlenily do pCl-neo do restrikčního místa Xhol a Notl za vzniku pGP-RRE2.
Konstrukce pTIN406, pTIN408 a pTIN414 se popisují v publikaci Cannon, P.M., Kim,N., Kingsman, S.M., and Kingsman, A.J. (1996). J. Virol. 70, 8234-8240. 5'LTR pH3Z a pH4Z obsahuje promotor CMV v pozici U3 a oblasti HIV R a U5.
·· 9
9 9 · *· ··
HIVdge se připravil z HlVgpt (Page, K.A., Landau, N.R., and Littman, D.R. (1990). J. Virol. 64, 5270-5276) tak, že se restrikční místo Clal (829) upravilo na tupý konec za vzniku mutace posunem rámce. HIVdge se štěpil restrikčními enzymy Bglll a Pstl (473-1414) a začlenil se do pTIN406. pTIN406 obsahuje strukturu LTR z CMV, R(HIV) a U5 (MLV) . Tak vznikla hybridní LTR obsahující CMV, a R, U5 z HIV, která se nazývá pBS5'. Aby vznikl plazmid obsahující gen rev a RRE, fragment EcoRI/Xhol (5743-8897) se získal štěpením HIVdgel.2, který je derivátem HIVdge obsahující deleci z restrikčního místa Ndel do restrikčního místa Bglll (6403-7621), a začlenil se do pBS5'za vzniku pBS5'R. 3'LTR se připravila inzercí Notl/Xhol fragmentu pBS3'do pBS5'R za vzniku pH2. pBS3' se připravila třícestnou ligaci Xhol/HindlII fragmentu pWI3, HindlII/KpnI fragmentu z pTIN408 do pBluescriptu KS+ (Xhol/KpnI). Promotor CMV se začlenil do jediného restrikčního místa Xhol pH2 z pSPCMV (Sall/Xhol) za vzniku pH2CMV. pSPCMV se vytvořil inzercí pLNCX (přístupové číslo: M28246) (Pstl/HindlII) do pSP72 (Promega). Gen β-galaktozidázy se začlenil z PTIN414 do pSP72 (Xhol/Sphl) za vzniku pSPlacZ. pSPlacZ se štěpil restrikčními enzymy Xhol a Sáli, získala se tak kódující oblast β-galaktozidázy, která se začlenila do pH2-CMV za vzniku pH3Z. Za účelem vytvořit tat deficientní vektor se zkonstruoval pH4Z. Prvních 50 bp tat-kódující oblasti se odstranilo nahrazením EcoRI(5743)I-Spel fragmentu v pH3 EcoRI(5881)-Spěl PCR produktem, který se amplifikoval za použití PCR primerů DELT5 (5'-CGTGAATTCGCCTAAAACTGCTTGTACCA3') a DELT3 (5'-GAACTAATGACCCCGTAATTG-3') za vzniku pH4. Nsil/Spel fragment z pH4 se začlenil do pH3Z za vzniku pH4Z.
vpr expresivní plazmid se konstruoval PCR amplifikaci vpr kódující oblasti z pNL4.3 (přístupové číslo: U26942) za použití následujících primerů:
5'primer: GCGAATTCGGATCCACCATGGAACAAGCCCCAGAAGAC (5563-5583) a
4444 • 4
4 • 4 « · 4 * ·
4*
9 9 9 9 9 9 9999 • 9 ♦ 4 44
4 4 4 * 9 * 4 * 999 444
4 •4 44
3'primer: GCGAATTCGGATCCTCTAGGATCTACTGGCTCCATT (5834-5853). Tento amplikon se klonoval do pLIGATOR (R & D Systems) . Expresivní plazmid pCl-vpr se připravil iznercí Mlul/Xhol fragmentu obsahujícího kódující oblast vpr do pCl-Neo (Promega).
PAC29.1 se štěpil restrikčním fragmentem. BamHI za vzniku kódující oblasti VSV-G, který se začlenil do pSA91 (BglII).
Buněčné linie:
Buňky 293T (293ts/A1609) (DuBridge et al., 1987) se udržoval Dulbecově modifikovaném „Eagle médiu (GIBCO), buňky HeLa a 208F se udržovaly v médiu MEM (GIBCO) , přičemž všechny média obsahovaly 10 % (objem/objem) fetálního telecího séra doplněného antibiotiky.
Produkce a testování vektorů
Zásobní roztoky retrovirových vektorů se připravily podle dříve publikovaného protokolu (Soneoka et al., 1995). Buňky 293T pocházející z lidských ledvin (1,5 x 10s) se nanesly na plotny o průměru 10 cm a přechodně se transfekovaly 15 mg každého plazmidů (expresivní plazmidy gag~pol a env spolu s vektorovým plazmidem) precipitací DNA s fosforečnanem vápenatým (Chen, C. and Okayama, H. (1987). Mol. Cell Biol. 7, 2745-2752). 0 36 hodin později se shromáždily supernatanty kultur, filtrovaly se přes filtr s póry o velikosti 0,45 mm a buď se použily ihned nebo se zamrazily při teplotě -70°C. Transdukce se provedla přidáním viru k cílovým buňkám. Buňky byly v kontaktu s virem po dobu dvou hodin za přítomnosti polybrenu v koncentraci 8 mg/ml, pak následuje přidání čerstvého média. Při měření exprese β-galaktozidázy o 48 hodin později se použil 5-bromo-4-chloro-3-indolyly b-D-galaktozid (X-Gal), jak se popisuje v publikaci (Soneoka et al., 1995). Titry se zjistily určením počtu jednotek tvořících lac z (modré zbarvení) na jeden mililitr (I.f.u./ml). Přidáním
ΦΦΦΦ »* φφ φ φφ φφ • · · φ φ φ * φ φ · • · φ φφφφ φφφφ φ φ · · φ φ ««·« * φφφ ·φφ φ · φ · φ · φ » φ φφ φ· φφ φ φφ φ· afidokolinu (5mg/ml) 24 hodin před infekcí a pak denně během experimentu se připravila kultura, jejíž růst se zastavil ve fázi Gl/S.
Výsledky
Produkce vektoru HIV
Vektory H3Z (přítomnost tat) a H4Z (bez přítomnosti tat) jsou vektory založené na HIV-1, které se připravují kotransfekcí tří plazmidů do buněk 293T (obrázek č. 2) . Za účelem účinného pakování jader HIV, vektory obsahují prvních 778 baží genu gag s mutací posunu v rámci, které se nacházejí 40 bp od startovacího kodonu ATG, což brání expresi proteinu gag. Aby se podpořil export mRNA HIV, RRE se podílí na zvýšení účinnosti pakování a gen rev se exprimuje z vektoru. Do vektoru se začlenil gen β-galaktozidázy vnitřně řízený promotorem CMV, který slouží jako reportní gen. V případě obou vektorových genomů transkripci řídí promotor CMV, jenž se použil, aby nahradil 5'LTR U3. To činí vektorový genom nezávislý na genu tat. Připravily se dvě konstrukce HIV-1 gagpol (obrázek č. 3); jsou to pGP-RREl (gen vif je přítomen) a pGP-RRE2 (gen vif není přítomen). Exprese gagpol je nezávislá na genu tat, protože geny gagpol se začlenily do plazmidů pCl-neo, což je expresivní plazmid řízený promotorem CMV. Konstrukce pRV67, což je VSV glukoproteinová konstrukce, se použila pro pseudotypování. Pravděpodobnost vytvoření replikačně kompetentního viru rekombinací lze minimalizovat umístěním různých genů na odlišné plazmidy.
Účinnost transdukce vektorem
Dočasnou ko-transfekcí buněk 293T z lidských ledvin třemi plazmidy se vytvořily replikačně defektivní retrovirové partikule, které se popisují shora v textu, a použily se bezprostředně nebo se zamrazily při teplotě -70 °C. Při
9 9
9 A ♦ ΑΑΑ AA • 9 • ·
A 9 9
99
ΑΑΑ 999
9 • A AA produkci viru se použily různé vektorové konstrukce. Zjistilo se, že minimální konstrukce (H4Z a pGP-RRE2) davají srovnatelné titry s viry, které obsahují geny vif, vpr, nef a tat (tabulka č. 1).
Při testování minimálního systému na různých buněčných liniích se titry lišily (tabulka č. 2). Při ošetření látkou polybren vektory poskytovaly titr 3,2 x 105 I.f.u./ml a když se neošetřily polybrenem jejich titr je 9,1 x 104 I.f.u./ml. Stejné vektory bez polybrenu vykazují titr 9,6 x 103 I.f.u./ml a 8,3 x 103 I.f.u./ml v buňkách HeLa a 208F. Tyto titry jsou srovnatelné s těmi, které se popisují v publikaci Naldini et al., 1996 (Naldini, L., Blomer, U., Gallay, P., Ory, D., Mulligan, R., Gage, F.H., Verma, I.M., and Trono, D. (1996). Science 272, 263-267), které jsou v současnosti nejvyšší, co se publikovaly.
Účinek genu vpr na transdukci buněk ošetřených afidikolinem.
Za účelem testování účinku genu vpr transdukce buňky, která se nedělí, gen vpr se zahrnul do pakovacího systému kontransfekcí pCl-ypr spolu s plazmidy pH4Z, pGP-RRE2 a pRV67. Účinnosti transdukce virových partikulí se testovaly na růstu buněk 293T a HeLa s definovaným růstem (obrázek č. 4) . Pakovací a transdukční vektory odvozené od MLV (Soneoka, 1995) slouží jako kontroly. Růst buněk HeLa a 293T se na základě ošetření afidikolinem zastavil ve fázi Gl/S. Minimální vektor H4Z HIV byl účinný při transdukci proliferujících buněk 293T a HeLa s růstem zastaveným ve fázi Gl/S, zatímco vektor založený na MLV byl účinný pouze z 0,002%.
vpr-deficientní H4Z mohl transdukovat buňky se zastaveným růstem se stejnou účinností jako vektor obsahující vpr, což naznačuje, že HIV-1 MA je dostatečný, aby poskytl vektor schopný transdukovat buňky, které se nedělí.
Závěr flfl· · • · • · • · fl fl · • fl ·· fl • fl •
• fl • flfl fl flflflfl fl · •
• fl ·· ♦ flfl fl • flfl · • flfl flflfl • fl • fl flfl
Vznikl vektorový produkční systém založený na HIV-1, který neobsahuje geny vpr, vpu, nef, vif a tat připravený kotransfekcí tří vektorů. Tento vektor může transdukovat proliferující buňky s titrem až 3,2 x 105 I.f.u./ml, který je srovnatelný s jinými vektory založenými na MLV. Titr se může zvýšit zakoncentrováním za použití ultracentrifugace (data nejsou uvedeny). Nedetekoval se žádný pomocný virus. (Data nejsou uvedeny).
Ukázalo se, že tento minimální vektor transdukuje buňky HeLa a 293T s pozastaveným růstem se stejnou účinností jako vektory obsahující geny vpr,· vif, nef a tat. Lze proto shrnout, že pouze gen rev je nutný při produkci vysokého titru vektorů založených na HIV a že tyto vektory mohou transdukovat buňky, které se nedělí.
Toto je první zpráva o konstrukci minimálního lentivirového vektoru s vysokým titrem, který je schopen transdukovak nedělící se buňky. Tento systém se díky odstranění pěti ze šesti auxiliárních genů (mimo genu rev) a minimálnímu přesahu sekvencí mezi plazmidy stal nejbezpečnější pro produkci HlV-vektorů pro genovou terapii.
Tabulka č. 1: Účinky exprese přidaného genu na titr vektoru
Přidané geny Plazmidy Titr (I.f.u /ml)a
Tat Vif Nef Vpr Vektor Gagpol Nef Vpr
+ + + pH3Z pGP- RRE1 PC1- Vpr 2, 2x 105
+ + pH3Z pGP- RRE1 pC-Nef 2,5x 105
+ + pH3Z pGP- RRE2 4, Ox 105
+ pH3Z pGP- RRE2 3,7x 105
···» *· «, . •» · * »* * 4 * « • ♦ · · ¥ ¥¥¥ ¥¥¥ • ¥ ·· ¥«
PH4Z pGP- RRE2 4, 6x 105
a: účinnost transdukce se měřila v buňkách 293T určením počtu kolonií po X-gal barvení 48 hodin po transdukci a stanovila se jako lac Z jednotky tvořící kolonie na jeden mililitr roztoku viru (I.f.u./ml).
Tabulka č. 2: Účinnost transdukce minimálním vektorem H4Z různých buněčných linií.
Buněčné linie Titr (I.f.u./ml) a
bez polybrenu S polybrenem
293T Lidské ledviny 9,1 x 104 3,2 x 10á
HeLa Lidský epitel 9, 6 x 10J N.D.
208f Fibroblastu krysy 8,3 x 103 N.D.
a: účinnost transdukce se měřila určením počtu modrých kolonií po X-gal barvení 48 hodin po transdukci a stanovila se jako lac Z jednotky tvořící kolonie na jeden mililitr roztoku viru (I,f.u./ml).

Claims (14)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY • · • 0 · • 0000 «0 00
    0 0 ·
    0 0 0
    000 000 0 0
    00 00 ýV/3p-??
    1. Retrovirový produkční systém pro produkci replikačně detektivních vektorových partikulí založený na lentivirech určený pro genovou terapii, vyznačující se tím, že uvedené vektorové partikule jsou schopny infikovat a transdukovat nedělící se savčí cílové buňky, přičemž systém obsahuje sadu sekvencí nukleové kyseliny kódující komponenty vektoru, kde jeden nebo více funkčních genů vybraných ze skupiny zahrnující HIV-1 auxiliární geny vpr, vif, tat a nef nebo obdobné auxiliární geny jiných lentivirů jsou nebo nejsou v systému přítomny, přičemž auxiliární geny jsou v normálním případě přítomny v lentivirů, na kterém jsou vektorové partikule založeny.
  2. 2. Retrovirový vektorový produkční systém podle nároku 1 určený pro produkci vektorových partikulí založených na HIV-1, vyznačující se tím, že také není přítomen funkční auxiliární gen vpu s tou podmínkou, že v případě nejsou-li geny vpu nebo vpr přítomny, tak jeden nebo více auxiliárních genů se také vybral ze skupiny zahrnující vif, tat a nef.
  3. 3. Retrovirový vektorový produkční systém podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že funkční geny vpr a tat nebo obdobné geny normálně přítomné v lentivirů, na kterém se vektorové partikule zakládají, nejsou v sytému přítomny.
  4. 4. Retrovirový produkční systém podle libovolného z nároků 1 až 3 určený pro produkci vektorových partikulí založených na HIV, vyznačující se tím, že tři nebo čtyři φφφφ φφ ·» φ φφ φφ • ΦΦ φφφ ΦΦ·· φφφ φφφφ φφφφ φφ φφφ φφφφφφ φφφ φφφ ♦ ···♦·♦ · φ φφφφ φφ φ φφ φφ nebo všech pět auxiliárních genů vpr, vif, tat, nef a vpu nejsou v systému přítomny.
  5. 5. Retrovirový produkční systém podle libovolného z nároků 1 až
    4, vyznačující se tím, že sekvence nukleové kyseliny kódující RNA genom vektoru obsahuje jeden nebo více terapeuticky aktivních genů.
  6. 6. Retrovirový produkční systém podle libovolného z nároků 1 až
    5, vyznačující se tím, že sekvence nukleové kyseliny kódující komponenty vektoru zahrnuje tři konstrukce DNA, které kódují RNA genom vektoru, proteiny gag a pol a protein env nebo jeho substituent.
  7. 7. Retrovirový produkční systém podle libovolného z nároků 1 až
    6, vyznačující se tím, že sekvence nukleové kyseliny kódující RNA genom vektoru zahrnuje sekvence rev a RRE nebo jejich funkční ekvivalenty, což umožní export transkriptů genomu z jádra do cytoplazmy.
  8. 8. Retrovirový produkční systém podle libovolného z nároků 1 až 7 v hostitelské buňce.
  9. 9. Retrovirový produkční systém podle libovolného z nároků 1 až 8,vyznačující se tím, že všechny funkční auxiliární geny v normálním případě přítomné v lentivirech, na kterých se vektorové partikule zakládají, nejsou v systému přítomny, výjimku tvoří gen rev, který může být přítomen.
  10. 10. Konstrukce DNA určená pro použití v systému podle nároku 9 kódující pakovatelný RNA vektorový genom a operabilně spojený promotor.
    ·· 4 * 4 • ···» • 4
    4 4 4«
    I 4 4 4 k 4 4 4
    444 444
    4 4
  11. 11. Konstrukce DNA podle nároku 10 kde promotorem je promotor, který nepochází z retroviru a vykazuje vysokou účinnost.
  12. 12. Sada konstrukcí DNA určených pro použití v systému podle nároku 9, vyznačující se tím, že obsahuje konstrukci DNA podle nároku 10 nebo podle nároku 11 a konstrukci DNA kódující proteiny gag a pol.
  13. 13. Sada konstrukcí DNA podle nároku 12, vyznačující se tím, že dále obsahuje konstrukci DNA kódující protein env nebo jeho substituent.
  14. 14. Konstrukce DNA určená pro použití v systému podle nároku 9, která obsahuje v jednom nebo více expresivních vektorech konstrukce DNA podle libovolného z nároků 10 až 14.
CZ991373A 1996-10-17 1997-10-17 Retrovirový produkční systém pro produkci replikačně defektivních vektorovýh partikulí CZ137399A3 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9621680.9A GB9621680D0 (en) 1996-10-17 1996-10-17 Lentiviral vectors
GBGB9624457.9A GB9624457D0 (en) 1996-11-25 1996-11-25 Retroviral vectors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ137399A3 true CZ137399A3 (cs) 1999-07-14

Family

ID=26310246

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ991373A CZ137399A3 (cs) 1996-10-17 1997-10-17 Retrovirový produkční systém pro produkci replikačně defektivních vektorovýh partikulí

Country Status (22)

Country Link
US (2) US6312682B1 (cs)
EP (2) EP0904392B1 (cs)
JP (2) JP4418536B2 (cs)
KR (1) KR20000049251A (cs)
CN (1) CN1195863C (cs)
AT (1) ATE198910T1 (cs)
AU (1) AU725143B2 (cs)
BG (1) BG103397A (cs)
CA (1) CA2267636A1 (cs)
CZ (1) CZ137399A3 (cs)
DE (1) DE69703974T2 (cs)
DK (1) DK0904392T3 (cs)
ES (1) ES2153654T3 (cs)
GB (1) GB2325003B (cs)
GR (1) GR3035600T3 (cs)
HU (1) HUP0000421A2 (cs)
IL (1) IL129017A0 (cs)
NO (1) NO991781L (cs)
NZ (1) NZ334860A (cs)
PL (1) PL332875A1 (cs)
PT (1) PT904392E (cs)
WO (1) WO1998017815A1 (cs)

Families Citing this family (243)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT904392E (pt) * 1996-10-17 2001-06-29 Oxford Biomedica Ltd Vectores retrovirais
US20070213290A1 (en) * 1996-10-17 2007-09-13 Kingsman Alan J Neurite regeneration
WO1999032646A1 (en) * 1997-12-22 1999-07-01 Oxford Biomedica (Uk) Limited Equine infectious anaemia virus (eiav) based
US7198784B2 (en) * 1996-10-17 2007-04-03 Oxford Biomedica (Uk) Limited Retroviral vectors
IL132164A0 (en) * 1997-04-09 2001-03-19 Chang Lung Ji Animal model for evaluation of vaccines
CN1247788C (zh) * 1997-05-13 2006-03-29 北卡罗来纳-查佩尔山大学 基于慢病毒的基因转移载体
US5994136A (en) * 1997-12-12 1999-11-30 Cell Genesys, Inc. Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors
US6121021A (en) * 1997-12-16 2000-09-19 Connaught Laboratories Limited Constitutive expression of non-infectious HIV-like particles
GB9803351D0 (en) 1998-02-17 1998-04-15 Oxford Biomedica Ltd Anti-viral vectors
ES2291025T3 (es) 1998-05-13 2008-02-16 Genetix Pharmaceuticals Inc. Celulas lentivirales de empaquetamiento.
EP1088086A4 (en) 1998-06-24 2003-01-08 Musc Found For Res Dev TISSUE-SPECIFIC AND TARGET RNA-SPECIFIC RIBOZYMS
US6958226B1 (en) 1998-09-11 2005-10-25 The Children's Medical Center Corp. Packaging cells comprising codon-optimized gagpol sequences and lacking lentiviral accessory proteins
GB9906177D0 (en) * 1999-03-17 1999-05-12 Oxford Biomedica Ltd Anti-viral vectors
US6271359B1 (en) 1999-04-14 2001-08-07 Musc Foundation For Research Development Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes
JP2002541822A (ja) 1999-04-14 2002-12-10 エム ユー エス シー ファンデーション フォー リサーチ ディベロップメント 組織特異的および病原体特異的毒性物質ならびにリボザイム
ATE368122T1 (de) * 1999-04-29 2007-08-15 Cell Genesys Inc Verfahren und mittel für die herstellung von sicheren rekombinanten lentiviralen vektoren mit hohem titer
CA2388301C (en) 1999-10-22 2011-01-04 Aventis Pasteur Limited Modified gp100 and uses thereof
CN1321182C (zh) * 1999-12-30 2007-06-13 卫生部艾滋病预防与控制中心 马传染性贫血病毒代表毒株的全基因克隆及其应用
EP1702983A3 (en) 2000-04-13 2007-01-10 Medical University of South Carolina Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents, ribozymes, DNAzymes and antisense oligonucleotides and methods of use thereof
US7851212B2 (en) 2000-05-10 2010-12-14 Sanofi Pasteur Limited Immunogenic polypeptides encoded by MAGE minigenes and uses thereof
US6627442B1 (en) * 2000-08-31 2003-09-30 Virxsys Corporation Methods for stable transduction of cells with hiv-derived viral vectors
GB0024550D0 (cs) * 2000-10-06 2000-11-22 Oxford Biomedica Ltd
US7575924B2 (en) 2000-11-13 2009-08-18 Research Development Foundation Methods and compositions relating to improved lentiviral vectors and their applications
CA2344208A1 (en) 2001-04-30 2002-10-30 Oxford Biomedica (Uk) Limited Method
US20030039636A1 (en) * 2001-05-01 2003-02-27 Genetix Pharmaceuticals, Inc. Novel self-inactivating (SIN) lentiviral vectors
JP2004537539A (ja) 2001-06-29 2004-12-16 スローン − ケッタリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ ヒトグロビン遺伝子をコードするベクターとその異常ヘモグロビン血症の治療におけるその使用
ATE527347T1 (de) 2001-08-02 2011-10-15 Inst Clayton De La Rech Verfahren und zusammensetzungen im zusammenhang mit verbesserten lentivirusvektor- produktionssystemen
CA2462628C (en) * 2001-10-02 2019-08-20 Institut Clayton De La Recherche Restricted expression lentiviral vectors
DK2348119T3 (en) 2002-02-01 2017-08-21 Oxford Biomedica (Uk) Ltd Polycistronic lentiviral vector
GB0221778D0 (en) * 2002-09-19 2002-10-30 Molmed Spa Conjugate
CA2506798C (en) * 2002-11-22 2013-01-22 Institut Clayton De La Recherche Compositions and systems for the regulation of genes
EP2390352A1 (en) 2003-03-18 2011-11-30 Quantum Genetics Ireland Limited Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds
US7468273B2 (en) 2003-05-01 2008-12-23 Meial Limited Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use
GB0325379D0 (en) * 2003-10-30 2003-12-03 Oxford Biomedica Ltd Vectors
MXPA06005424A (es) 2003-11-13 2007-01-25 Univ Georgia Res Found Metodos para caracterizar virus de enfermedad bursal infecciosa.
CA2556911C (en) 2004-02-19 2013-07-30 The Governors Of The University Of Alberta Leptin promoter polymorphisms and uses thereof
AU2005233583B2 (en) * 2004-04-08 2011-02-03 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for modulating cardiac contractility
ATE418346T1 (de) * 2004-04-08 2009-01-15 Sangamo Biosciences Inc Zusammensetzungen zur behandlung von neuropathischen und neurodegenerativen erkrankungen
WO2005118809A2 (en) * 2004-04-29 2005-12-15 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions for enhancing cell adhesion properties
FR2870126B1 (fr) 2004-05-17 2009-07-17 Pasteur Institut Vecteur lentiviral recombinant d'expression d'une proteine de flaviviridae et ses applications comme vaccin
ES2343270T3 (es) 2005-04-25 2010-07-27 Merial Ltd. Vacunas contra el virus nipah.
US20060292159A1 (en) * 2005-06-08 2006-12-28 Ranscht Barbara E Methods for the inhibition of neovascularization and cancer metastasis
US20080241184A1 (en) 2005-08-25 2008-10-02 Jules Maarten Minke Canine influenza vaccines
EP1951751B1 (en) 2005-11-14 2017-11-01 Merial, Inc. Gene therapy for renal failure
US7771995B2 (en) 2005-11-14 2010-08-10 Merial Limited Plasmid encoding human BMP-7
GB0526210D0 (en) 2005-12-22 2006-02-01 Oxford Biomedica Ltd Vectors
US7862821B2 (en) 2006-06-01 2011-01-04 Merial Limited Recombinant vaccine against bluetongue virus
US8765462B2 (en) 2007-05-04 2014-07-01 University Health Network IL-12 immunotherapy for cancer
CA2699394C (en) 2007-09-17 2020-03-24 The Regents Of The University Of California Internalizing human monoclonal antibodies targeting prostate cancer cells in situ
CA2705862C (en) 2007-11-16 2018-03-27 San Diego State University Research Foundation Compositions and method for manipulating pim-1 activity in circulatory system cells
US20110015239A1 (en) 2007-12-14 2011-01-20 The Regents Of The University Of California Inhibitors of calcium-activated chloride channels
WO2009153563A1 (en) 2008-06-18 2009-12-23 Oxford Biomedica (Uk) Limited Virus purification
US8871220B2 (en) 2009-04-03 2014-10-28 Merial Limited Newcastle disease virus vectored avian vaccines
CN102946907A (zh) 2010-05-28 2013-02-27 牛津生物医学（英国）有限公司 慢病毒载体向脑的递送
US8986706B2 (en) 2010-08-31 2015-03-24 Merial, Inc. Newcastle disease virus vectored herpesvirus vaccines
WO2012090073A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 The Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity
WO2012138789A2 (en) 2011-04-04 2012-10-11 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
US20140296248A1 (en) 2011-04-04 2014-10-02 Stichting het Nederlands Kanker Instiuut-Antoni van Leeuwenhoek ziekenhuis Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
US9216213B2 (en) 2011-04-20 2015-12-22 Merial, Inc. Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile
JP6407714B2 (ja) 2011-04-25 2018-10-17 アドヴァンスド バイオサイエンス ラボラトリーズ インコーポレイテッド 短縮型ｈｉｖエンベロープタンパク質（ｅｎｖ）、前記に関連する方法及び組成物
ES2674439T3 (es) 2011-06-01 2018-06-29 Merial, Inc. Administración sin aguja de vacunas contra el VSRRP
CA2844927C (en) 2011-08-12 2017-10-31 Merial Limited Vacuum-assisted preservation of biological products, in particular of vaccines
AU2012216792A1 (en) 2011-09-12 2013-03-28 International Aids Vaccine Initiative Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing HIV-1 proteins by broadly neutralizing antibodies
EP2586461A1 (en) 2011-10-27 2013-05-01 Christopher L. Parks Viral particles derived from an enveloped virus
GB201118636D0 (en) 2011-10-28 2011-12-07 Oxford Biomedica Ltd Nucleotide sequence
WO2013093629A2 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Netherlands Cancer Institute Modular vaccines, methods and compositions related thereto
GB201202516D0 (en) 2012-02-13 2012-03-28 Ucl Business Plc Materials and methods relating to packaging cell lines
WO2013138776A1 (en) 2012-03-16 2013-09-19 Merial Limited Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g
US9347065B2 (en) 2012-03-29 2016-05-24 International Aids Vaccine Initiative Methods to improve vector expression and genetic stability
RS61387B2 (sr) 2013-02-15 2024-06-28 Bioverativ Therapeutics Inc Gen optimizovanog faktora viii
US9556419B2 (en) 2013-03-12 2017-01-31 Merial Inc. Reverse genetics Schmallenberg virus vaccine compositions, and methods of use thereof
US20160060652A1 (en) * 2013-03-13 2016-03-03 Lapian's Corp Microvesicle and method for producing the same
GB201318804D0 (en) 2013-10-24 2013-12-11 Adaptimmune Ltd Vectors for transgene expression
ES2747951T3 (es) 2013-10-24 2020-03-12 Ospedale San Raffaele Srl Método
WO2015077717A1 (en) 2013-11-25 2015-05-28 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer by means of the dna methylation status
WO2015085147A1 (en) 2013-12-05 2015-06-11 The Broad Institute Inc. Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data
GB201322798D0 (en) 2013-12-20 2014-02-05 Oxford Biomedica Ltd Production system
JP7060324B2 (ja) 2013-12-20 2022-04-26 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド ネオ抗原ワクチンによる併用療法
GB201407322D0 (en) 2014-04-25 2014-06-11 Ospedale San Raffaele Gene therapy
US11008561B2 (en) 2014-06-30 2021-05-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor IX gene
GB201412494D0 (en) 2014-07-14 2014-08-27 Ospedale San Raffaele And Fond Telethon Vector production
AU2015343369B2 (en) 2014-11-03 2018-11-22 Georgia Tech Research Corporation Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus
US10975442B2 (en) 2014-12-19 2021-04-13 Massachusetts Institute Of Technology Molecular biomarkers for cancer immunotherapy
EP3234130B1 (en) 2014-12-19 2020-11-25 The Broad Institute, Inc. Methods for profiling the t-cell- receptor repertoire
US20180271891A1 (en) 2015-03-11 2018-09-27 The Broad Institute Inc. Selective treatment of prmt5 dependent cancer
JP6913032B2 (ja) 2015-05-20 2021-08-04 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 共通ネオ抗原
TW202241500A (zh) 2015-06-09 2022-11-01 美商博德研究所有限公司 用於贅瘤疫苗之調配物及其製備方法
PH12017502380B1 (en) 2015-06-23 2022-10-26 Merial Inc Prrsv minor protein-containing recombinant viral vectors and methods of making and use thereof
ES2987957T3 (es) 2015-11-23 2024-11-18 Novartis Ag Vectores de transferencia lentivirales optimizados y usos de los mismos
EP3383920B1 (en) 2015-11-30 2024-01-10 The Regents of the University of California Tumor-specific payload delivery and immune activation using a human antibody targeting a highly specific tumor cell surface antigen
KR20180118659A (ko) 2016-02-01 2018-10-31 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 최적화된 viii 인자 유전자
WO2017180587A2 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
AU2017254477A1 (en) 2016-04-18 2018-11-01 Jennifer G. ABELIN Improved HLA epitope prediction
JP2019519250A (ja) 2016-05-10 2019-07-11 ユナイテッド ステイツ ガバメント アズ リプレゼンテッド バイ ザ デパートメント オブ ベテランズ アフェアーズＵｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ Ａｓ Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ Ｂｙ Ｔｈｅ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ Ｏｆ Ｖｅｔｅｒａｎｓ Ａｆｆａｉｒｓ Ｈｉｖ−１感染と複製に必須な遺伝子を切断するｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓの構築物のレンチウィルスによる送達
AU2017263137B2 (en) * 2016-05-13 2021-05-27 Flash Therapeutics Particle for the encapsidation of a genome engineering system
GB201608944D0 (en) 2016-05-20 2016-07-06 Ospedale San Raffaele And Fond Telethon Gene Tharapy
IL326479A (en) 2016-10-12 2026-04-01 Bioverativ Usa Inc Anti-c1s antibodies and methods of use thereof
EP3535294B1 (en) 2016-11-07 2025-02-12 Neuracle Science Co., Ltd. Anti-family with sequence similarity 19, member a5 antibodies and method of use thereof
EP3538551A4 (en) 2016-11-10 2020-11-11 Fortis Therapeutics, Inc. CD46 SPECIFIC EFFECTOR CELLS AND USES THEREOF
US11434301B2 (en) 2016-11-11 2022-09-06 The Regents Of The University Of California Anti-CD46 antibodies and methods of use
KR20230093381A (ko) * 2017-01-09 2023-06-27 아메리칸 진 테크놀로지스 인터내셔널 인코포레이티드 예비-면역화 단계가 없는 hiv 면역요법
EP3574116A1 (en) 2017-01-24 2019-12-04 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for detecting a mutant variant of a polynucleotide
CN110809716B (zh) 2017-02-12 2023-07-07 百欧恩泰美国公司 基于hla的方法和组合物及其用途
EP3595705A1 (en) 2017-03-15 2020-01-22 Oxford BioMedica (UK) Limited Method
GB201706394D0 (en) 2017-04-21 2017-06-07 Ospedale San Raffaele Srl Gene Therapy
CN110972463B (zh) 2017-06-27 2024-05-28 纽洛可科学有限公司 抗序列相似家族19成员a5抗体在治疗青光眼中的用途
BR112019027729A2 (pt) 2017-06-27 2020-08-18 Neuracle Science Co., Ltd anticorpos anti-fam19a5 e seus usos
JP7012384B2 (ja) 2017-06-27 2022-02-14 ニューラクル サイエンス カンパニー リミテッド 癌治療のための抗ｆａｍ１９ａ５抗体の用途
CN111344011B (zh) 2017-06-27 2024-01-26 纽洛可科学有限公司 抗fam19a5抗体用于治疗纤维化的用途
WO2019068854A1 (en) 2017-10-06 2019-04-11 Ospedale San Raffaele S.R.L. GENE THERAPY OF NEURODEGENERATIVE DISEASES USING VAA VECTORS
CN111527105B (zh) 2017-10-11 2024-10-25 美国比奥维拉迪维股份有限公司 诱导补体活性的方法
FI3633040T3 (fi) 2017-12-22 2023-08-03 Oxford Biomedica Ltd Retrovirusvektori
US20210038744A1 (en) 2018-02-01 2021-02-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Use of lentiviral vectors expressing factor viii
KR102866162B1 (ko) 2018-04-24 2025-10-01 주식회사 뉴라클사이언스 신경병성 통증의 치료를 위한 서열 유사성 19, 멤버 a5 항체를 갖는 항-패밀리의 용도
KR20240056644A (ko) 2018-05-10 2024-04-30 주식회사 뉴라클사이언스 서열 유사성 19, 멤버 a5 항체를 갖는 항-패밀리 및 그의 사용 방법
CN112367973A (zh) 2018-05-15 2021-02-12 旗舰先锋创新V股份有限公司 融合剂脂质体组合物和其用途
GB201807945D0 (en) 2018-05-16 2018-06-27 Ospedale San Raffaele Srl Vector production
SG11202012978VA (en) 2018-06-25 2021-01-28 Ospedale San Raffaele Srl Gene therapy
MX2020013923A (es) 2018-06-29 2021-03-29 Apitbio Inc Anticuerpos anti molécula de adhesión celular l1 (l1cam) y usos de estos.
CA3105953A1 (en) 2018-07-09 2020-01-16 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Fusosome compositions and uses thereof
US20210382068A1 (en) 2018-10-02 2021-12-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hla single allele lines
US20220056484A1 (en) 2018-10-11 2022-02-24 Ospedale San Raffaele S.R.L. Selection by means of artificial transactivators
KR102648762B1 (ko) 2018-10-16 2024-03-19 주식회사 뉴라클사이언스 항-fam19a5 항체의 용도
EP3880179A2 (en) 2018-11-14 2021-09-22 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Fusosome compositions for cns delivery
US20230048166A1 (en) 2018-11-14 2023-02-16 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Fusosome compositions for hematopoietic stem cell delivery
WO2020102503A2 (en) 2018-11-14 2020-05-22 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Fusosome compositions for t cell delivery
CA3119341A1 (en) 2018-11-16 2020-05-22 Neoimmunetech, Inc. Method of treating a tumor with a combination of il-7 protein and an immune checkpoint inhibitor
US20220017921A1 (en) * 2018-12-04 2022-01-20 The Broad Institute, Inc. Improved vector systems for cas protein and sgrna delivery, and uses therefor
CA3121786A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Use of lentiviral vectors expressing factor ix
KR20200071198A (ko) 2018-12-10 2020-06-19 네오이뮨텍, 인코퍼레이티드 Nrf2 발현 조절 기반 T 세포 항암면역치료법
WO2020131586A2 (en) 2018-12-17 2020-06-25 The Broad Institute, Inc. Methods for identifying neoantigens
CA3124457A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Biontech Us Inc. Method and systems for prediction of hla class ii-specific epitopes and characterization of cd4+ t cells
KR20240000655A (ko) 2018-12-27 2024-01-02 주식회사 뉴라클사이언스 죽상경화증을 치료하기 위한 항-fam19a5 항체의 사용
MX2021004504A (es) 2019-01-02 2021-10-01 Neuracle Science Co Ltd Anti-familia con similitud de secuencia 19, anticuerpos del miembro a5 y método de uso de los mismos.
CN115835887A (zh) 2019-03-10 2023-03-21 牛津生物医学（英国）有限公司 用于治疗帕金森病的基因治疗组合物和方法
GB201905244D0 (en) 2019-04-12 2019-05-29 Ospedale San Raffaele Method for analysisng insertion sites
GB201905301D0 (en) 2019-04-15 2019-05-29 Ospedale San Raffaele Srl Gene therapy
GB201907493D0 (en) 2019-05-28 2019-07-10 Ospedale San Raffaele Agents and methods for treating viral infections
EP4025698A1 (en) 2019-09-03 2022-07-13 Sana Biotechnology, Inc. Cd24-associated particles and related methods and uses thereof
JP7803014B2 (ja) 2019-09-30 2026-01-21 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド レンチウイルスベクター製剤
US12394502B2 (en) 2019-10-02 2025-08-19 The General Hospital Corporation Method for predicting HLA-binding peptides using protein structural features
WO2021094752A1 (en) 2019-11-12 2021-05-20 Oxford Biomedica (Uk) Limited Production system
AU2021207586A1 (en) 2020-01-13 2022-07-21 Neoimmunetech, Inc. Method of treating a tumor with a combination of IL-7 protein and a bispecific antibody
EP4093751A1 (en) 2020-01-22 2022-11-30 Outpace Bio, Inc. Chimeric polypeptides
WO2021151006A2 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Outpace Bio, Inc. Chimeric polypeptides
AU2021217373A1 (en) 2020-02-05 2022-08-04 Neoimmunetech, Inc. Method of treating a solid tumor with a combination of an IL-7 protein and CAR-bearing immune cells
US20240052366A1 (en) 2020-02-13 2024-02-15 Oxford Biomedica (Uk) Limited Production of Lentiviral Vectors
DE102020111571A1 (de) 2020-03-11 2021-09-16 Immatics US, Inc. Wpre-mutantenkonstrukte, zusammensetzungen und zugehörige verfahren
DE102020106710A1 (de) 2020-03-11 2021-09-16 Immatics US, Inc. Wpre-mutantenkonstrukte, zusammensetzungen und zugehörige verfahren
GB202003618D0 (en) 2020-03-12 2020-04-29 Univ Bristol Gene Therapy
WO2021181108A1 (en) 2020-03-13 2021-09-16 Oxford Biomedica (Uk) Limited Lentiviral vectors
AU2021248815A1 (en) 2020-03-31 2022-10-13 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Targeted lipid particles and compositions and uses thereof
EP4143326A1 (en) 2020-04-27 2023-03-08 University of Iowa Research Foundation Compositions and methods for the treatment of cystic fibrosis
GB202007169D0 (en) 2020-05-14 2020-07-01 Ospedale San Raffaele Srl Epidermal growth factor receptor
GB202007106D0 (en) 2020-05-14 2020-07-01 Ucl Business Plc Cyclosporine analogues
GB202007199D0 (en) 2020-05-15 2020-07-01 Oxford Biomedica Ltd Viral vector production
US20230190871A1 (en) 2020-05-20 2023-06-22 Sana Biotechnology, Inc. Methods and compositions for treatment of viral infections
JP2023537565A (ja) 2020-06-24 2023-09-04 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド タンパク質を発現するように改変されたレンチウイルスベクターの調製物から遊離第ｖｉｉｉ因子を除去する方法
GB202010009D0 (en) 2020-06-30 2020-08-12 Syncona Investment Man Ltd Vector
JP2023534765A (ja) 2020-08-07 2023-08-10 フォーティス セラピューティクス，インク． 免疫複合体を標的とするｃｄ４６およびその使用方法
WO2022047316A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Sana Biotechnology, Inc. Modified anti-viral binding agents
WO2022079054A1 (en) 2020-10-12 2022-04-21 Ospedale San Raffaele S.R.L. Replacement of rag1 for use in therapy
WO2022087453A1 (en) 2020-10-22 2022-04-28 Lyell Immunopharma, Inc. Chimeric activation receptors
WO2022093718A1 (en) 2020-10-26 2022-05-05 Neoimmunetech, Inc. Methods of inducing stem cell mobilization
KR20230104176A (ko) 2020-11-02 2023-07-07 네오이뮨텍, 인코퍼레이티드 코로나바이러스의 치료를 위한 인터류킨-7의 용도
JP2023549112A (ja) 2020-11-05 2023-11-22 ネオイミューンテック， インコーポレイテッド Ｉｌ－７タンパク質とヌクレオチドワクチンの組み合わせで腫瘍を治療する方法
GB202017725D0 (en) 2020-11-10 2020-12-23 Oxford Biomedica Ltd Method
GB202018657D0 (en) 2020-11-26 2021-01-13 Ospedale San Raffaele Srl Agents and methods for increasing liver immune response
GB202019108D0 (en) 2020-12-03 2021-01-20 Ospedale San Raffaele Srl Vector
JP2024501482A (ja) 2020-12-14 2024-01-12 ビオンテック ユーエス インコーポレイテッド がん免疫療法のための組織特異的抗原
US11965022B2 (en) 2020-12-31 2024-04-23 Sana Biotechnology, Inc. Methods and compositions for modulating CAR-T activity
KR20230151513A (ko) 2021-01-11 2023-11-01 사나 바이오테크놀로지, 인크. Cd8 표적 바이러스 벡터의 용도
CA3207426A1 (en) 2021-02-15 2022-08-18 Vania Broccoli Epigenetic silencing for treatment of cancer
GB202103470D0 (en) 2021-03-12 2021-04-28 Univ Bristol Promoter
WO2022232191A1 (en) 2021-04-26 2022-11-03 Csl Behring L.L.C. Lentiviral vectors useful for the treatment of disease
AU2021202658A1 (en) 2021-04-28 2022-11-17 Fondazione Telethon Gene therapy
KR20240028362A (ko) 2021-05-28 2024-03-05 라이엘 이뮤노파마, 인크. Nr4a3-결핍 면역 세포 및 이의 용도
IL308836A (en) 2021-05-28 2024-01-01 Sana Biotechnology Inc Lipid Particles Containing Baboon Truncated Endogenous Retrovirus (BAEV) Envelope Glycoprotein and Related Methods and Uses
KR20240027676A (ko) 2021-06-02 2024-03-04 라이엘 이뮤노파마, 인크. Nr4a3-결핍 면역 세포 및 이의 용도
CA3225283A1 (en) 2021-07-14 2023-01-19 Sonja SCHREPFER Altered expression of y chromosome-linked antigens in hypoimmunogenic cells
EP4381081A1 (en) 2021-08-04 2024-06-12 Sana Biotechnology, Inc. Use of cd4-targeted viral vectors
KR20240067122A (ko) 2021-09-30 2024-05-16 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 감소된 면역원성을 갖는 인자 viii 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산
GB202114534D0 (en) 2021-10-12 2021-11-24 Oxford Biomedica Ltd Novel viral regulatory elements
GB202114530D0 (en) 2021-10-12 2021-11-24 Oxford Biomedica Ltd Retroviral vectors
GB202114532D0 (en) 2021-10-12 2021-11-24 Oxford Biomedica Ltd Lentiviral Vectors
GB202114528D0 (en) 2021-10-12 2021-11-24 Oxford Biomedica Ltd Lentiviral vectors
JP2024538769A (ja) 2021-10-12 2024-10-23 オスペダーレ サン ラファエレ エス．アール．エル Ｒａｇ１遺伝子における突然変異を修正するのに有用なポリヌクレオチド
GB202114529D0 (en) 2021-10-12 2021-11-24 Oxford Biomedica Ltd Lentiviral vectors
GB202114972D0 (en) 2021-10-19 2021-12-01 Ospedale San Raffaele Srl Gene therapy
WO2023077107A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Sana Biotechnology, Inc. Methods and reagents for amplifying viral vector nucleic acid products
US20250129067A1 (en) 2021-11-08 2025-04-24 Progentos Therapeutics, Inc. Platelet-derived growth factor receptor (pdgfr) alpha inhibitors and uses thereof
GB202117844D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Oxford Biomedica Ltd Purification method
WO2023114949A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Sana Biotechnology, Inc. Methods and systems of particle production
US20250059239A1 (en) 2021-12-17 2025-02-20 Sana Biotechnology, Inc. Modified paramyxoviridae fusion glycoproteins
EP4448775A1 (en) 2021-12-17 2024-10-23 Sana Biotechnology, Inc. Modified paramyxoviridae attachment glycoproteins
CN119836296A (zh) 2021-12-30 2025-04-15 新免疫技术有限公司 用il-7蛋白和vegf拮抗剂的组合治疗肿瘤的方法
EP4209511A1 (en) 2022-01-05 2023-07-12 Gyala Therapeutics Sociedad Limitada Anti-cd84 antibodies amd chimeric antigen receptors
MX2024008495A (es) 2022-01-05 2024-09-04 Gyala Therapeutics Sl Anticuerpos anti-cd84 y receptores de antigenos quimericos.
US20250082777A1 (en) 2022-01-10 2025-03-13 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023150518A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Cd3-targeted lentiviral vectors and uses thereof
WO2023150647A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023158836A1 (en) 2022-02-17 2023-08-24 Sana Biotechnology, Inc. Engineered cd47 proteins and uses thereof
WO2023183313A1 (en) 2022-03-22 2023-09-28 Sana Biotechnology, Inc. Engineering cells with a transgene in b2m or ciita locus and associated compositions and methods
GB202204272D0 (en) 2022-03-25 2022-05-11 Ucl Business Ltd Method for engineering innate-like lymphocytes
WO2023193015A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Sana Biotechnology, Inc. Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies
EP4507719A1 (en) 2022-04-13 2025-02-19 Universitat Autònoma de Barcelona Treatment of neuromuscular diseases via gene therapy that expresses klotho protein
GB202206346D0 (en) 2022-04-29 2022-06-15 Ospedale San Raffaele Srl Gene therapy
GB202209098D0 (en) 2022-06-21 2022-08-10 Ucl Business Ltd Cyclosporine analogues
US20250375536A1 (en) 2022-07-01 2025-12-11 The University Of Bristol Vector
US20260000790A1 (en) 2022-07-08 2026-01-01 Ospedale San Raffaele S.R.L. Transgene cassettes
EP4303226A1 (en) 2022-07-08 2024-01-10 Ospedale San Raffaele S.r.l. Transgene cassettes and epigenetic silencers for the treatment of disorders
WO2024015892A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 The Broad Institute, Inc. Hla-ii immunopeptidome methods and systems for antigen discovery
US20260027145A1 (en) 2022-07-27 2026-01-29 Sana Biotechnology, Inc. Methods of transduction using a viral vector and inhibitors of antiviral restriction factors
CA3262766A1 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Stemcell Technologies Canada Inc. Polynucleotides encoding bound antigens and their uses
WO2024033544A1 (en) 2022-08-12 2024-02-15 Ospedale San Raffaele S.R.L. Deglycosylation of native glycoproteins expressed on a tumor cell surface
GB202211935D0 (en) 2022-08-16 2022-09-28 Oxford Biomedica Ltd envelope proteins
WO2024044655A1 (en) 2022-08-24 2024-02-29 Sana Biotechnology, Inc. Delivery of heterologous proteins
EP4590688A1 (en) 2022-09-21 2025-07-30 Sana Biotechnology, Inc. Lipid particles comprising variant paramyxovirus attachment glycoproteins and uses thereof
EP4602174A1 (en) 2022-10-13 2025-08-20 Sana Biotechnology, Inc. Viral particles targeting hematopoietic stem cells
JP2026504619A (ja) 2022-11-07 2026-02-06 ネオイミューンテック， インコーポレイテッド 非メチル化ｍｇｍｔプロモーターを含む腫瘍を治療する方法
WO2024100294A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 Ospedale San Raffaele S.R.L. Cdh17 car
GB202217332D0 (en) 2022-11-18 2023-01-04 Univ Bristol Methods
WO2024119157A1 (en) 2022-12-02 2024-06-06 Sana Biotechnology, Inc. Lipid particles with cofusogens and methods of producing and using the same
KR20260016905A (ko) 2023-03-22 2026-02-04 오스페달레 산 라파엘 에스.알.엘. 유전자 치료
WO2024220597A2 (en) 2023-04-18 2024-10-24 Sana Biotechnology, Inc. Digital droplet based assay for detecting replication competent lentiviral vector
WO2024220560A1 (en) 2023-04-18 2024-10-24 Sana Biotechnology, Inc. Engineered protein g fusogens and related lipid particles and methods thereof
EP4698666A1 (en) 2023-04-18 2026-02-25 Sana Biotechnology, Inc. Universal protein g fusogens and adapter systems thereof and related lipid particles and uses
WO2024227946A1 (en) 2023-05-03 2024-11-07 Ospedale San Raffaele S.R.L. Gene therapy
GB202307366D0 (en) 2023-05-17 2023-06-28 Ospedale San Raffaele Srl Vector
AU2024274792A1 (en) 2023-05-23 2025-10-23 Sana Biotechnology, Inc. Tandem fusogens and related lipid particles
CN121399150A (zh) 2023-05-25 2026-01-23 美国杰特贝林生物制品有限公司 经修饰载体
WO2024259299A1 (en) 2023-06-14 2024-12-19 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for identification of vhh antibodies that bind a target antigen
GB202309909D0 (en) 2023-06-29 2023-08-16 Purespring Therapeutics Ltd Regulatory elements
GB202309914D0 (en) 2023-06-29 2023-08-16 Purespring Therapeutics Ltd Promoters
KR20260033048A (ko) 2023-07-03 2026-03-10 네오이뮨텍, 인코퍼레이티드 이종이합체 fc 분자 및 이의 용도
WO2025043172A1 (en) 2023-08-23 2025-02-27 Sana Biotechnology, Inc. Modified cd47 proteins and their uses
WO2025097055A2 (en) 2023-11-02 2025-05-08 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods of use of t cells in immunotherapy
WO2025133635A1 (en) 2023-12-22 2025-06-26 The University Of Bristol Therapies for preventing or treating inflammatory eye disease
WO2025184529A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Sana Biotechnology, Inc. Viral particles with fusogen display and related compositions and methods
WO2025212519A1 (en) 2024-04-01 2025-10-09 Moonlight Bio, Inc. Dll3 binding proteins and uses thereof
WO2025215591A1 (en) 2024-04-12 2025-10-16 Csl Behring L.L.C. Modified vectors for xla gene therapy
WO2026052819A1 (en) 2024-09-06 2026-03-12 Ospedale San Raffaele S.R.L. Gene therapy
WO2026087627A1 (en) 2024-10-22 2026-04-30 Ospedale San Raffaele S.R.L. Fusion protein

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU6170486A (en) * 1985-08-23 1987-02-26 Advanced Genetics Research Institute Defective viral vaccines
WO1991019798A1 (en) * 1990-06-20 1991-12-26 Dana Farber Cancer Institute Vectors containing hiv packaging sequences, packaging defective hiv vectors, and uses thereof
EP0588914A1 (en) * 1991-05-29 1994-03-30 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Eukaryotic expression vectors with regulation of rna processing
US5981505A (en) * 1993-01-26 1999-11-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for delivery of genetic material
JPH06261764A (ja) * 1993-02-17 1994-09-20 Wisconsin Alumni Res Found 混合型ｌｔｒ含有超複合型レトロウイルス及びその使用方法
EP0759471A4 (en) * 1994-05-10 1997-10-15 Hisamitsu Pharmaceutical Co RECOMBINANT VECTOR OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF
US6326007B1 (en) * 1995-07-20 2001-12-04 The Regents Of The University Of California Attenuated lentivirus vectors expressing interferon
US6013516A (en) 1995-10-06 2000-01-11 The Salk Institute For Biological Studies Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
WO1997014809A2 (en) * 1995-10-16 1997-04-24 Dana-Farber Cancer Institute Novel expression vectors and methods of use
PT904392E (pt) * 1996-10-17 2001-06-29 Oxford Biomedica Ltd Vectores retrovirais
US5994136A (en) 1997-12-12 1999-11-30 Cell Genesys, Inc. Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors

Also Published As

Publication number Publication date
CN1195863C (zh) 2005-04-06
DE69703974T2 (de) 2001-07-19
HK1016651A1 (en) 1999-11-05
HUP0000421A2 (hu) 2000-06-28
DE69703974D1 (de) 2001-03-01
CN1234836A (zh) 1999-11-10
JP2001502539A (ja) 2001-02-27
HK1014993A1 (en) 1999-10-08
NZ334860A (en) 2001-02-23
GB2325003A (en) 1998-11-11
GB2325003B (en) 2000-05-10
ATE198910T1 (de) 2001-02-15
US20020034502A1 (en) 2002-03-21
PT904392E (pt) 2001-06-29
US6669936B2 (en) 2003-12-30
GB9815778D0 (en) 1998-09-16
CA2267636A1 (en) 1998-04-30
EP1041152A1 (en) 2000-10-04
EP0904392B1 (en) 2001-01-24
JP2009291205A (ja) 2009-12-17
GR3035600T3 (en) 2001-06-29
PL332875A1 (en) 1999-10-25
ES2153654T3 (es) 2001-03-01
IL129017A0 (en) 2000-02-17
AU4712297A (en) 1998-05-15
US6312682B1 (en) 2001-11-06
WO1998017815A1 (en) 1998-04-30
DK0904392T3 (da) 2001-04-30
KR20000049251A (ko) 2000-07-25
JP4418536B2 (ja) 2010-02-17
NO991781L (no) 1999-06-17
AU725143B2 (en) 2000-10-05
EP0904392A1 (en) 1999-03-31
JP4855504B2 (ja) 2012-01-18
BG103397A (en) 2000-07-31
NO991781D0 (no) 1999-04-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0904392B1 (en) Retroviral vectors
US7198784B2 (en) Retroviral vectors
US6235522B1 (en) Lentiviral vectors
US7250299B1 (en) Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors
AU720993B2 (en) Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
Kafri Gene delivery by lentivirus vectors: an overview
Chang et al. The molecular genetics of lentiviral vectors-current and future perspectives
US20020123471A1 (en) Lentivirus based vector and vector system
Pandya et al. Lentivirus and foamy virus vectors: novel gene therapy tools
Barker et al. Vectors derived from the human immunodeficiency virus, HIV-1
Molina et al. Mapping of the bovine immunodeficiency virus packaging signal and RRE and incorporation into a minimal gene transfer vector
HK1016651B (en) Retroviral vectors
US20120034693A1 (en) Recombinant vector and use in gene therapy
Brady et al. High-Titer Human Immunodeficiency Virus
Kafri Gene Delivery by Lentivirus Vectors

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic