CZ142498A3

CZ142498A3 - Syntéza derivátů sulfonylpyrimidinu s protirakovinným účinkem

Info

Publication number: CZ142498A3
Application number: CZ981424A
Authority: CZ
Inventors: Biserka Dr. Žinič; Mladen Dr. Žinič; Irena Krizmanič
Original assignee: Herbos D. T.
Priority date: 1997-05-09
Filing date: 1998-05-07
Publication date: 1999-08-11
Also published as: PL326236A1; ATE237594T1; CA2237267A1; EP0877022A1; HRP970239A2; DE69813362D1; HRP970239B1; DE69813362T2; EP0877022B1

Description

Syntéza derivátů sulfonylpyrimidinu s protirakovinným účinkem

Oblast techniky

Vynález se týká N-l sulfonylových derivátů na bázi pyrimidinového jádra, které mají protirakovinné vlastnosti, jejich přípravy a jejich protirakovinového účinku.

Dosavadní stav techniky

Aplikace derivátů sulfonylurey je známá v lékařské chemii a zemědělské chemii. Tyto sloučeniny vykazují zajímavé biologické účinky: antidiabetické, antibakteriální a protirakovinové účinky a rovněž velmi silný herbicidní účinek. V současnosti herbicidy typu sulfonylurea představují výrazný pokrok z důvodu jejich vysoké aktivity a téměř žádné toxicity vůči lidem a zvířatům.

Na druhé straně je zde docela velký počet biologicky aktivních nukleosidových derivátů s antibiotickými, rakovinu zpomalujícími a virostatickými účinky. Upravené nukleosidy jsou jedinými sloučeninami, které mají in vitro a in vivo antivirový a anti HIV účinek.

Úkolem vynálezu je vytvoření nových N-l sulfonylových derivátů na bázi pyrimidinového jádra, které by představovaly nový druh sulfonylcyklourey, což by umožnilo nové kombinace farmak s antivirovými a protrakovinovými účinky a vývoj nových chemoterapeutik.

Podstata vynálezu

Sulfonylurey jsou sloučeniny se silným antibakteriálním (F. Kurzer, Chem. Rev. 50 (1952) 1.) a hypoglykemickým účinkem (Chem. Abstr. 102 (1985) 214964r; G. Leviti, US 4.435.206; Chem. Abstr. 100 (1984) 34458d; Chem. Abstr. 100 (1984) 34459e; L. Aguilar- Bryan, D. A. Nelson, Q. A. Vu, Μ. B. Humphrey, a A. E. Boyd,. J. Biol. Chenz.

• · ·

265 (1990) 8218.; Chem. Abstr. 108 (1988) 161258d; Chem. Abstr. 106 (1987)

149243w; A. G. Hatzidimitriou, D. P. Kessissoglou, a G. E. Manoussakis, J. Inorg. Biochem. 49 (1993) 157.). Jsou to silné diuretika (Chem. Abstr. 103 (1985) 215193w. EPAI-I51.451), protinádorové účinné látky (Chem. Abstr. 108 (1988) 94225a, EP-AI222.475; F. Mohamadi, Μ. M. Spels, a G. B. Grindey, J. Med. Chem. 35 (1992) 3012.; J. J. Howbert, C. S. Grossman, T. A. Crowell, B. J. Rieder, R. W. Harper, K. E. Kramer, E.

V. Tao, J. Aikins, G. A. Poore, a další, J. Med. Chem. 33 (1990) 2393; Chem. Abstr.120 (1994) 245006a, EP-A2-2.583.960) a anticholesterolika (D. R. Sliškovič, B. R. Krause, J. A. Picard, M. Anderson, R. F. Bousley, K. L. Hamelehle, R. Homan, T. N. Julian, Z. A.

Rashidbaigi, a R. L. Stanfield, J. Med. Chem. (1994) 560; Chem Abstr. 119 (1993) 138915j, WO-AI-9.308.16I; P. R. Carter, D. H. Hey, a D. S. Morris, J. Chem Soc. (1948) 143.). Suifonylurey, které mají heteroaromatické (Het) skupiny vázané na NH sulfonylureového mostu (R-SCh-NH-CO-NH-Het), jsou mimořádně účinnými herbicidy.

Nové sulfonylcyclourey, t.j. N-l sulfonylové deriváty uracilu and cytosinu, nejsou známé a nejsou známé ani jejich biologické účinky. Pouze Martirosyan (Z. A. Martirosyan, V. I. Gundar, a S. L. Zav'yalov, Izv. Akad Nauk SSSR, Ser. Khim. 8 (1970) 1841) izoloval 1p-toluensulfonyluracil jako vedlejší (nechtěný) produkt v transformaci C-4 keto- skupiny uracilu. Z hlediska biologické účinnosti jsou N-l sulfonylové deriváty na bázi pyrimidinového jádra velice zajímavé sloučeniny, jelikož mají kombinaci biologicky aktivních složek: sulfonylureový fragment a jádrovou (nukleovou) bázi. Nové, neznámé sulfonylcyclourey jsme připravili spojením sulfonylového fragmentu na N- 1 atom pyrimidinové báze (uráčil, cytosin nebo 1,3,5-triazin). Tyto sloučeniny by mohly mít potenciálně biologické vlastnosti z hlediska jejich podobných strukturálních vlastností jako aktivní suifonylurey, které asi mají šestiprvkový vodíkem vázaný pseodocyklus.

········ «····«·· • · · · · · · ··· · · · ··· ·· · ·

Na druhé straně lze u sloučenin modifikovaných nukleosidů zvažovat jejich možný protirakovinový účinek (Chemistry, Biology, and Clinical Uses of Nucleoside Analogs, A. Bloch (Ed.), New York,1975, str. 185.), a rovněž antivirový účinek (E. de Clercq, v: Design of Anti-AIDS Drugs, E. de Clercq (Ed.), Amsterdam, Elsevier Science Publishers, B. V., 1990, p.l; H. Mitsuya, T. Shirasaka, a S. Broder, v: Design of Anti-AIDS Drugs, E. de Clercq (Ed.), Amsterdam, Elsevier Science Publishers, B. V.,1990, str. 25.).

Tento vynález ukazuje, že N-l sulfonylové deriváty na bázi pyrimidinového jádra mají význačný protirakovinový účinek in vitro na různé druhy nádorových buněk. Vytčený úkol splňuje vynález, kterým jsou N-l sulfonylové deriváty na bázi pyrimidinového jádra s obecným vzorcem I, II, III, IV, V a VI způsob jejich přípravy a jejich biologická účinnost.

I

V

• · · · • · ··· · ···· · ·· · • ······ · ·· ···· · · • · · ·· · · ··· · · · · · ··· ··

V obecném vzorci I je:

X = O,S;

Y = H, F, Cl, Br, I, C1-C5 alkyl, NO?, NH?, substituovaný alkynyl (C=CR_;; R« = H,

Si(CH₃)₃, Ci- C₃ alkyl, halogen, CO-alkyl); substituovaný alkenyl (CH= CR₅; R₅ = H,

F, Cl, Br, I, Ci- C₃ alkyl, CN, COCH₃, CO?CH₃);

Ri ⁼ SO2-R6;

= Cj- C₃ (rozvětvený) alkyl, Cj- C₃ (rozvětvený) haloalkyl, Cj- C₃ alkyl substituovaný

Cj- C₃ (halo)alkoxy skupinou, C₂-acyl,

(Q = C,N; R₇ = H, CH₃; Rg = H, NHCOCHs),

(R₉ = _Fj; p_H, F, Cl, Br, I, CH₃, OCH₃, -N=N-C₆H₄-p-N(CH₃)₂, -C6H4-P-SO2CI, NO2; o-NO₂; m-NO₂, CF₃, OCF₃),

(Z = N,C),

• ·

V obecném vzorci lije:

X=jakvl;

V =jak v I;

Rj = R₂ = H, SO₂-Ró; (Ró = jak v I)

R] * R₂ kombinace - SO₂-R^ (R^ = jak v I)

R, = SO₂-Réje li R₂ = H;

V obecném vzorci III je:

X = O, S, N;

V =jak v I;

Rj =jak v I;

R₃ = CHj, C₂Hj ;

V obecném vzorci IV je:

X = jak v I;

Rj =jak I;

Ri = jak v I se substituovaným alkinylem;

V obecném vzorci V je:

X =jak v I;

Rj =jak I;

R4 = jak v I se substituovaným alkinylem:

V obecném vzorci Vije:

X =jak v I;

V = H, alkyl;

Rj = jak I;

Z = C, N.

• · · · • · • ·

Pro syntézu derivátů sulfonylpyrimidinu jsou použity dvě metody:

a) kondenzace silylované pyrimidinové báze s různými chloridy sulfonylu v acetonitrilu;

b) reakce pyrimidinových bází s chloridy sulfonylu v pyridinu.

BSA _>

CH₅CN^,r

R]SO₂CI

X

Ri I

Rovnice la

Většina sloučenin z obecného vzorce I se připraví dle rovnice la.

Deriváty uracilu jsou silylované Ν,Ο-bis (trimetylsilyl) acetamidem (BSA) v suchém acetonitrilu pod refluxem po 60 minut J.R. Hanson, A. Hough a A.T. White, J. Chem. Soc. Chem. Commun. (1968) 466) dle metody a). Takto aktivované sloučeniny reagují s vhodnými chloridy sulfonylu (1.2-2.0 eq.), při pokojové teplotě na reflux, po 1 až 24 hodin, čímž se získají N - 1 substituované deriváty obecného vzorce I s 75 - 95% výtěžkem.

Stejné sloučeniny se získají metodou b); při reakci derivátů uracilu s chloridy sulfonylu v pyridinu, při pokojové teplotě, po 20 hodin, při 70% výtěžku, rovnice lb:

Rovnice lb

Před kondenzací s chloridy sulfonvlu (sulfurylu) se zavádějí různé substituce nukleového jádra.

Zavedení halogenu na pozici C - 5 nukleového jádra pyrimidinu je vědě již známé (A.M. Michelson, v: Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, vol.l, W,W, Zorbach a R.S. Tipson (Eds.), New York, John Wiley +Sons, 1968, str. 491.) podle rovnice 2:.

Rovnice 2

Zavedení alkenylových náhrad na pozici C - 5 nukleového jádra pyrimidinu je rovněž známé v oboru (H. Eirota, Y. Kitade, Y. Isobe, Y. Maki, Heterocycles 26 (1987) 355.), rovnice 3a:.

s • · · ·

Rovnice 3 a

Zavedení alkinylových náhrad na pozici C - 5 nukleového jádra pyrimidinu je rovněž známé v oboru (T. Ueda, v zChemistry of Nucleosides and Nucleotides, L.B. Townsend (Ed.), New York, Plenům Press, 1988, str. 25.). Prekurzorem je 5-jodo derivát nukleového jádra pyrimidinu, rovnice 3b.

R4C=CH -----—------------>.

(Ph₃P)₂PdCl₂CuI/Et₃N

Rovnice 3b

C-5 bromový derivát pyrimidinu lze čpavkem transformovat na C-5 amino derivát nukleového jádra pyrimidinu (M. Roberts a D. W. Visser, .1. Am, Chem. Soc. 74 (1952) 668.).

C-5 dusíkový derivát lze připravit nitrací nukleového jádra pyrimidinu s HNO₃ (I. Wempen, I. L. Doerr, L. Kaplan, a J. J. Fox, J. Am. Chem. Soc. 82 (1960) 1624.).

Sloučeniny obecného vzorce II se připraví podobným způsobem jako sloučeniny obecného vzorce I (J. R. Hanson, A. Hough, a A. T. White, J. Chem. Soc.; Chem. Commun. (1968) 466; J. J. de Koning, H. J. Kooreman. H. S. Tan, a J. Verweij, .1. Org. Chem. 40 (1975) 1346.). Deriváty cytosinu jsou silylované s BSA v suchém acetonitrilu, pod refluxem po dobu 30 minut, dle metody a). Tyto aktivované sloučeniny reagují s příslušným chloridem sulfonylu při 20° C na reflux, po dobu 1 hodiny, a získává se N - 1 sulfonylový derivát obecného vzorce II s výtěžkem 10-80 %, rovnice 4a:

BSA

CH₃CN

Rovnice 4a

N -1, NH - 4 disulfonylové deriváty cytosinu II lze získat dle metody b) (Rovnice 4b): Ri = R2 = SCHRó (Ró ⁼ jak v I), Rj Φ R2 je kombinací SO2R0 (R$ = jak v I). V reakci cytosinu s 2 eq. chloridů sulfonylu Cl SCbRó (Ró ⁼ jak v I) v pyridinu se získaly sloučeniny obecné formule II s R] = R2· V reakci N-l sulfonylových derivátů cytosinu s různými chloridy sulfonylu Cl SCLRó (Ró = jak v I) se získaly sloučeniny obecného vzorce II s R] R₂.

R1-R2

Rovnice 4b

C-5 Halogenové deriváty cytosinu lze připravit dle známých postupů (J. Duval a J. P. Ebel, Bull. Soc. Chim. Biol. 46 (1964) 1059; P. K. Chang, v: Nucleic Acid Chemistry, • · • ·· ··· ···· • · · · ···· · ·· · • ······ · · · ··· ·· · • · · · · · · ··· · ·· ··· ·· ··

Část 2, L. B. Townsend a R. S. Tipson (Eds.), New York, Jolrn Wiley & Sons, 1978, str.

779.).

Sloučeniny obecného vzorce III, IV, V a VI se připraví transformací nukleového jádra pyrimidinu s následující kondenzací s vhodnými chloridy sulfonylu (podobně ke sloučeninám obecného vzorce I a II, t.j. dle metody a): kondenzace silylovaných derivátů pyrimidinu s vhodnými chloridy sulfonylu v acetonitrilu nebo dle metody b): kondenzace nukleového jádra pyrimidinu s vhodnými chloridy sulfonylu v pyridinu).

Transformace nukleového jádra pyrimidinu pro syntézu sloučenin III, IV, V a VI se připraví dle následujícího:

Alkylaci na pozici C-4 nukleového jádra pyrimidinu (N-l ochranná skupina, X = O,

S ve sloučenině III) lze provést diazometanem resp. diazoetanem. Jako vedlejší produkt byly v případě X= O získány O- Alkylové deriváty,a v případě X = S S-alkylové deriváty jako hlavní produkt. (N. K. Kochetkov a E. I. Budovskij v: Organic Chemistry of Nucleic Acids, část B, Plenům Press, London and New York, 1972, str. 370.).

Prekurzory pro syntézu sloučenin obecného vzorce IV (X=O,S) se připraví cyklizací derivátů

C-5 alkenyl uracilu s t-BuOTC (rovnice 5a), R. C. Bleackley, A. S. Jones, a R. T. Walker,

Tetrahedron 32 (1976) 2797.) nebo reakcí cyklizace derivátů C-5 alkynyl uracilu s Cul/EtjN (M. J. Robins a P. J. Barr, Tetrahedron Lett. 22 (1981) 421.), dle rovnice 5b.

t-BuQ'K⁺

DMF

Rovnice 5a • · • ·

Cul

Et₃N

Rovnice 5b

Prekurzory pro syntézu sloučenin obecného vzorce V se připraví podobným způsobem.

Prekurzory pro syntézu sloučenin obecného vzorce VI (Z=N) se připraví z N-l chráněného uracilu, transformací C-4 keto skupiny na C-4 imidazoyl nebo C-4-OtrifluoiOmetylsulfonát, což dá, v reakci s azidem sodným bicyclický produkt (rovnice 6a), A. Matasuda, et al., Chem. Pharm. Bull. 33 (1985) 2575.), rovnice 6a:

Rovnice 6a

Prekurzory pro syntézu sloučenin obecného vzorce VI (Z=C) se připraví z N-l chráněného uracilu, v reakci s chlóroacetaldehydem (Schéma (6b), N.K. Kochetkov, V. N.

Shibaev, a A. A. Kost, v: Nucleic Acid Chemistry, část 3, L. B.Townsend a R. S. Tipson (Eds.), New York, John Wiley & Sons. 1986, sír. 279), rovnice 6b:

Rovnice 6b

Sloučeniny 1, 2, 3 a 4, jak je znázorněno rovnicí 7:

sloučeniny obecného vzorce I:

(R, = - SO₂-C₆H₅ - p-CH₃, X = O, Y = H), (Rj = - SO₂-C₆H₅ - p-CH₃, X = O, Y = Br), a sloučeniny obecného vzorce II: 3 (R] = u

X = O, Y = H), a 4 (R] = - SOo-CďHj - p - CH₃, X = O, Y = H)), byly zkoušeny in vitro na lidských nádorových buňkách slinivky (MiaPaCa2), na lidských nádorových buňkách děložního čípku HeLa), na buňkách rakoviny hrtanu (Hep 2) a běžných lidských vazivových buňkách (Hef 2).

• ·

(CH₃)₂NOC

Rovnice 7

Všechny zkoušené sloučeniny vykazují významný účinek zpomalující růst rakovinových buněk typu MiaPaCa2 a HeLa (60 - 90% v koncentraci 10'⁵ M) a výrazně menší zpomalovací účinek na normální typy buněk (20 - 35%). Nej významnější zpomalující vliv na typ buněk Hep 2 byl zjištěn pro sloučeninu 3 (S0%) v koncentraci ΙΟ'⁵ M.

Příklady provedení vynálezu

Za účelem objasnění vynálezu uvádíme následující příklady provedení vynálezu:

PŘÍKLAD 1. l-Methansulfonyluracil

Směs uracilu (500 mg, 4.45 mmol) a N. O-bis(trimethyIsilyl)acetamidu (2.3 ml, 8.90 mmol) se ohřívá pod refluxem v suchém acetonitrilu (15 ml) po dobu 30 minut. Bezbarvý roztok se ochladí na 0 °C a přidá se chlorid methansulfonylu (0.69 ml, 8.90 mmol). Po • · · · · · · • ··· · ♦ · · • 4 · · · · · » · · · ·»*·«· · · · · · · ·· · • « · · · · • ····· · · · · ohřívání pod refluxem např. přes noc se získaná bílá suspenze ochladí a pevná fáze se oddělí filtrací. Po rekrystalizaci se z horkého methanolu získají bílé krystaly (630 mg, 75%), mp 228-231 °C; UV (MeOH): λ _max /nm 210.8 a 245.1 (log ε 3.86 a 3.93); IR (KBr) v _m2x /cm’¹: 3200 (m), 3080 (m), 2950 (w), 2850 (w), 1725-1695 (s), 1640 (m),1440 (s),1360 (s), 1275 (s), 1 180 (s), 1170 (s); ’Η-NMR (d6-DMSO) δ /ppm: 11.87 (s, 1 H, NH), 7.87 (d, 1 Η, H-6, J= 8.3 Hz), 5.80 (d, 1 Η, H-5, J= 8.3 Hz), 3.70 (s, 3H, CH3); ¹³C-NMR (d6-DMSO) δ /ppm: 163.28 (s, C-4), 148.76 (s, C-2), 138.23 (d, C-6), 103.41 (d, C-5), 41.62 (q, CH₃); Anal. počítáno pro C₅H₆N₂O₄S (M_r = 190.18): C (31.58), H (3.18), N (14.73), zjištěno: C (31.81), H (3.06), N (14.89).

PŘÍKLAD 2. 1 - p - toluensulfonyluracil

Směs uracilu (1 g, 8.90 mmol) a BSA (4.6 ml, 17.80 mmol) se ohřívá pod refluxem v suchém acetonitrilu (30 ml) po dobu 1 hodiny. Bezbarvý roztok se ochladí na 0 °C a přidá se p-toluensulfonylchlorid (3.39 g, 17.80 mmol). Po ohřívání pod refluxem např. přes noc se získaná bílá suspenze ochladí a profiltruje. Získaná pevná fáze se rekrystalizuje z horkého etanolu, čímž vzniknou bílé krystaly produktu (2.25 g, 95%), t.t. 259 °C; UV (MeOH): λ _max/nm : 234.8 a 249.3 (log ε : 3.78 a 3.81); IR (KBr) v _max / cm’¹: 3120 (w), 3030 (w), 2830 (w), 1730 (s), 1700 (s),1615 (w), 1595 (w), 1405 (m), 1355 (m), 1190 (s), 1170 (s); 'H-NMR (ds-DMSO) δ /ppm: 11.74 (s, 1 H, NH), 8.15 (d, IH, H-6, J= 8.3 Hz), 7.93 (d, 2H, Ph, J= 8.3 Hz), 7.50 (d, 2H, Ph, J= 8.3 Hz), 5.86 (d,lH, H-5, J= 8.3 Hz), 2.43 (s,3H, CH3); ^,3C-NMR (d6-DMSO) δ/ppm: 163.07 (s, C-4), 147.54 (s, C-2), 146.64 (d, C-6),138.26 (s, Ph),133.42 (s, Ph),130.18 (d, Ph),129.19 (d, Ph),104.05 (d, C-5), 21.27 (q, CH₃); Anal. počítáno pro C]i,HioN₂0₄S (M_r= 266.22): C (49.63), H (3.79), N (10.53), zjištěno: C (49.62), H (3.65), N (

10.51 ).

« ·· ··*· 99 · ♦ 9 · * * · « 9 · 9 999 9 * *

999999 9 9 · 99· 9·9

9 · · 9 9 9 >99 9 99 <·· >* 99

PŘÍKLAD 3. 1- (2-SuIfonyl-3-N,N dimethylaminokarbonylpyridin) uráčil

Syntéza pyridinsulfonylchloridu.

Směs 2-fenylmethylthio-3-N,N dimethylaminokarbonylpyridinu (950 mg, 3.49 mmol), methylenchloridu (16 ml), vody (8 ml) a koncentrované HC1 (1.1 ml) se ochladí na -7 °C. Při teplotě udržované pod 0 °C se po kapkách po dobu 15 minut přidává 5%-ní NaOCl (14 ml, 10.50 mmol). Získaná žlutá emulze se při °C míchá dalších 30 minut. Reakční směs se pak extrahuje methylenchloridem, a organický extrakt se propere roztokem N^SiOs a suší nad Na2SC>4 (teplota se přitom udržuje blízko °C). Organická vrstva se pak filtruje a odpařuje pod sníženým tlakem bez vnějšího zahřívání. Získaný surový sulfonylchlorid se ihned použije v kondenzační reakci s uracilem.

Kondenzace uracilu sulfonylchloridem

Směs uracilu ( 104 mg, 0.93 mmol) a BSA (0.46 ml,1.85 mmol) se ohřívá pod refluxem v suchém acetonitrilu (3 ml) po dobu 50 minut. Bezbarvý roztok se ochladí na 0 °C a položí se na sulfonylchlorid. Po míchaní při pokojové teplotě po dobu 1.5 hodiny se rozpouštědlo odpaří pod sníženým tlakem bez vnějšího zahřívání. Ke zbytku se přidá methanol a získá se pevná bílá fáze. Produkt se rekrystalizuje z methanolu (300 mg, 100%), t.t. 226 °C; UV (MeOH): λ _max/nrn 211.8 a 244.8 (log ε 4.21 a 4.06); IR (KBr) v ^/cm’¹: 3210 (w), 3090 (m), 2940 (w), 2860 (w), 1730 (s), 1690 (s), 1650 (s), 1630 (s),l585 (m),1550 (w),1510 (w),1415 (s),1365 (s),1265 (s),l 180 (s);’H-NMR (d6- DMSO) δ/ppm: 11.91 (s, 1 H, NH), 8.77 (d, IH, H-6', J= 4.6 Hz), 8.15 (d, IH, H-4', J= 7.8 Hz), 8.11 (d,lH, H-6, J= 8.3 Hz), 7.87 (dd,lH, H-5', Ι5·6·=4.6 Hz,, Ι5·4·=7.8 Hz), 5.93 (d,lH, H-5, J= 8.3 Hz), 3.01 (s, 3H, NCH3), 2.87 (s, 3H, NCH3); ^I3C-NMR NMR (d6- DMSO) δ/ppm: 165.04 (s, C-2'),162.96 (s, C-4), 150.70 (d, C-6'),149.99 (s, 0=0),148.27 (s, C - 2),139.39 (d, C-4'), 138.20 (d, C-6), 133.44 (s, C-3'), 129.43 (d, C-5'), 104.38 (d, C-5), 38.60 (q, NCH₃), 34.85 (q, NCH₃); Anal.

·

9 ······ • · · · · «· ,, ··· ········· ίο · ···· · · · · · ······ • · 9 · · ·· ••9 · ···«··· ·· výpočet pro C^H^NAS (M_r= 324.33): C (44.44), H (3.73), N (17.28), zjištěno: C (44.54), H (3.92), N (17.25).

PŘÍKLAD 4. 5-Bromo-l-p-toluensuIfonyluracil

1- p-toluensulfonyluracil (200 mg, 0.75 mmol) se rozpustí v suchém N,N dimethylformamidu (13 ml), a přidá se roztok bromu (2.2 ml, 1.65 mmol) v methylenchloridu. Rudá reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se pak odpaří a do zbytku se přidá etanol. Pevná bílá fáze produktu se filtruje a rekrystalizuje z vody (140 mg, 54%), t.t. 248-250 °C; UV (MeOH): λ _max/nni 232.8 a 269.6 (log ε 3.05 a 3.02); IR (KBr) v _niax/cnť^!: 3150 (w), 3050 (w), 2920 (w), 2840 (w),1750 (ms),1675 (s),1610 (m),1590 (m),1420 (m),1320 (w),1250 (s),l 175 (s);’H-NMR (d6-DMSO) δ /ppm:12.12 (s,l H, NH), 8.43 (s,l Η, H-6), 8.00 (d, 2H, Ph, J= 8.1 Hz), 7.51 (d, 2H, Ph, >8.1 Hz), 2.44 (s, 3H, CH3),¹³C-NMR (d6-DMSO) δ /ppm: 159.06 (s, C-4), 146.77 (s, C-2), 136.88 (d, C-6), 146.65 (s, Ph), 132.86 (s, Ph), 129.94 (d, Ph), 129.35 (d, Ph), 98.91 (s, C-5), 21.32 (q, CH₃); Anal. vypočteno pro CiiH₉N₂O₄SBr(M_r= 345.17): C (38.27), H (2.63), N (8.12), zjištěno: C (38.34), H (2.47), N (8.10).

PŘÍKLAD 5. 5-Bromo-l-methanasulfonyluracil l-Methansulfonyluracil (200 mg, 1.05 mmol) se rozpustí v suchém DMF (18 ml), a přidá se roztok brómu (3 ml, 2.31 mmol) v methylenchloridu. Rudá reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se pak odpaří a do zbytku se přidá ethanol. Pevná bílá fáze produktu se filtruje a rekrystalizuje z vody (171 mg, 60%), t.t. 235 °C; UV (MeOH): λ _max/nm 264.1 (log ε 3.86); IR (KBr) v _max/cm·': 3150 (m), 3100 (s), 3050-3010 (br, s), 2940 (m), 2860 (m),1730 (s),l680 (br, s), 1610 (s),1420 (s),l370 (s),1325 (s),1255 (s), 1 180 (s);^!H-NMR (d_ó-DMSO) δ /ppm : 12.35 (s,lH, NH), 8.10 (s,lH, H-6), 3.71 (s, 3H,

CH₃);¹³C-NMR (dó-DMSO) δ /ppm :159.19 (s, C- 4), 147.94 (s, C-2), 137.02 (d, C-6), 98.10 (d, C-5), 41.55 (q, CH₃); Anal. vypočteno pro CíHíN^SBr (M_r= 269.08): C (22.32), H (1.87), N (10.41), zjištěno: C (22.37), H (1.77), N (10.23 ).

PŘÍKLAD 6. 5-Jodo-l-methansulfonyluracil

Směs 5-jodouracilu (300 mg, 1.27 mmol) a BSA (0.63 ml, 2.53 mmol) se ohřívá pod refluxem v suchém acetonitrilu (4 ml) po dobu 45 minut. Roztok se ochladí na 0 °C a přidá se MsCl (0.30 ml, 3.80 mmol). Po ohřívání pod refluxem např. přes noc se získaná bílá suspenze ochladí a filtruje. Bílá pevná fáze se rekrystalizuje z methanolu a získají se bílé krystaly produktu (365 mg, 92%), mp 234-237 °C; UV (MeOH): λ _max/nm 212.8 a 272.4 (log ε 3.67 a 3.49); IR (KBr) v _max/cnť’: 3140 (m), 3100 (w), 3030 (s), 2930 (m), 2850 (m), 1725 (s), 1675 (s), 1600 (s), 1420 (s), 1370 (s), 1260 (s), 1 180 (s); 'H-NMR (d₆-DMSO) δ /ppm : 12.21 (s, IH, NH), 8.08 (s, IH, H-6), 3.69 (s, 3H, CH₃); ^,3C-NMR (d₆-DMSO) δ /ppm : 160.81 (s, C-4), 148.47 (s, C-2), 141.47 (d, C-6), 72.48 (s, C-5), 41.49 (q, CH₃); Anal. vypočteno pro CjHsN^SI (M_r= 316.09): C (19.00), H (1.59), N (8.86), zjištěno: C (19.16), H (1.66), N (8.73).

PŘÍKLAD 7. 5-jodo-l-p -toluensulfonyluracil

A) Směs 5-jodouracilu (200 mg, 0,84 mmol) a BSA (0.44 ml,1.69 mmol) se ohřívá pod refluxem v suchém acetonitrilu (3 ml) po dobu 1 hodiny. Roztok se ochladí na 0 °C a přidá se TsCl (322 mg, 1.69 mmol). Po ohřívání pod refluxem např. přes noc se získaná bílá suspenze ochladí a filtruje. Bílá pevná fáze se rekrystalizuje z horkého methanolu a získají se bílé krystaly (360 mg, 90%).

• · • · · · • ·

B) Do suspenze 5-jodouracilu (200 mg, 0.84 mmol) v suchém pyridinu (9 ml) se přidá TsCl (320 mg, 1.68 mmol). Po promíchaní při pokojové teplotě např. přes noc se rozpouštědlo odpaří pod sníženým tlakem. Přidá se ethanol a výsledná pevná fáze se filtruje a rekrystalizuje z methanolu a získají se bílé krystaly produktu (230 mg, 71%), t.t. 237 °C; UV (MeOH): λ _max/nm 230.8 a 273.9 (log ε 4.05 a 3.87); IR (KBr) v _max/cni·': 3460-3410 (br, w), 3140 (w), 3060 (w), 2930 (w), 2850 (w),1765 (s),1670 (s),1600 (s),1410 (m), 1250 (s), 1180 (s); Ή -NMR (dé-DMSO) δ /ppm : 12.06 (s, 1 H, NH), 8.40 (s, IH, H-6), 7.99 (d, 2H, Ph, > 8.1 Hz), 7.50 (d, 2H, Ph, > 8.1 Hz), 2.43 (s, 3H, CH₃); ^,3C-NMR (d₆-DMSO) δ /ppm : 160.64 (s, C-4), 147.29 (s, C-2), 141.24 (d, C-6), 146.75 (s, Ph), 133.07 (s, Ph), 130.07 (d, Ph), 129.43 (d, Ph), 73.41 (s, C-5), 21.25 (q, CH₃); Anal. vypočteno pro C11H9N2O4SI (M_r= 392.11): C (33.69), H (2.31), N (7.15), zjištěno: C (33.73), H (2.53), N (7.08).

PŘÍKLAD 8. 1-p-toluensulfonylcytosin

Směs cytosínu (222 mg, 2.00 mmol) a BSA (1.48 ml, 6.00 mmol) se ohřívá pod refluxem v suchém acetonitrilu (7 ml) po dobu 30 minut. Roztok se ochladí na 0 °C a přidá se TsCl (457 mg, 2.40 mmol). Po ohřívání pod refluxem po dobu 45 minut se rozpouštědlo odpaří. Do zbytku se přidá ethanol a získaná pevná fáze se odfiltruje a rekrystalizuje z horkého ethanolu a získají se bílé krystaly produktu (421 mg, 80%), t.t. 216 °C; UV (MeOH):): λ _niax/nm 209.1 a 248.0 (log ε 3.52 a 3.57); IR (KBr) v max/cnf¹: 3360 (s), 3100 (s),1660 (s, br),1550 (s),1490 (s),1380 (s),1355 (s),1285 (s),l 185 (s), 1 175 (s); ); ’H -NMR (de-DMSO) δ /ppm : 8.12 (d, IH, H-6, >7.94 Hz), 7.94 (s, 2H, NH2), 7.86 (d, 2H, Ph, J=8.24 Hz), 7.45 (d, 2H, Ph, >8.17 Hz), 5.96 (d, IH, H-5, >7.94 Hz), 2.41 (s, 3H, CH3); ^J5C-NMR (d6-DMSO) δ /ppm :166.27 (s, C-4),151.22 (s, C-2),145.61 (d, C-6),139.73 (s, Ph),134.47 (s, Ph),129.80 (d, Ph), 129.02 (d, Ph), 97.50 (d, C-5), 21.20 (q, CH₃); Anal. vypočteno pro

ChHuNsOjS (M_r= 265.30): C (49.80), H (4.18), N (15.84), zjištěno: C (50.09), H (4.02), N (15.89).

PŘÍKLAD 9. l-(2-Sulfonyl-3-N,N dimetylaminokarbonylpyridin)cytosin

Kondenzace cytosinu se sulfonylchloridem

Směs cytosinu (191 mg, 1.71 mmol) a BSA (1.28 ml, 5.15 mmol) se zahřívá v suchém acetonitrilu (6 ml) pod refluxem po dobu 30 minut. Bezbarvý roztok se ochladí na 0 °C a dá na sulfonylchlorid [připravený jako pro uracilový derivát, začínajíc 1.06 g (3.89 mmol) 2fenylmethylthio-3-Ν,Ν dimethylaminokarbonylpyridinem]. Po míchání při pokojové teplotě po době 2 hodin se pod sníženým tlakem odpaří rozpouštědlo bez vnějšího zahřívání. Ke zbytku se přidá methanol a bílá pevná fáze produktu se odfiltruje a rekrystalizuje z methanolu (290 mg, 53%), t.t. 218°C; UV (MeOH): λ _max/nm 246.1 (log ε 4.07); IR (KBr) v _Μ/αη': 3400 (m), 3140 (v, br), 2920 (vw), 1700 (s), 1510 (m), 1490 (s), 1390 (s), 1360 (s), 1280 (m), 1170 (s); ’H -NMR (d₆-DMSO) δ /ppm : 8.68 (d, IH, H-6', J = 4.6 Hz), 8.06 (m, 4H, H-4', H6, NH₂), 7.78 (dd, 1 Η, H-5', J₅-₆· = 4.6 Hz, = 7.6 Hz), 6.04 (d, IH, H-5, J= 7.9 Hz), 2.99 (s, 3H, NCH₃), 2.89 (s, 3H, NCH₃); ^,3C-NMR (d₆-DMSO) δ /ppm : 166.43 (s, C-2'), 165.47 (s, C-4), 151.96 (s, C=O), 150.86 (s, C-2), 149.92 (d, C-6’), 140.49 (d, C-4'), 137.44 (d, C-6), 133.20 (s, C-3'),128.27 (d, C-5'), 97.61 (d, C-5), 38.38 (q, NCH₃), 34.52 (q, NCH₃); Anal. vypočteno pro C^H^NiCLS, (M_r = 322.34): C (44.71), H (3.75), N (21.73), zjištěno: C (44.72), H (3.87), N (21.79).

PŘÍKLAD 10. 1-Methansulfonylcytosin a 4-N methansulfonylcytosin

Směs cytosinu (500 mg, 4.50 mmol) a BSA (3.3 ml, 13.50 mmol) se zahřívá v suchém acetonitrilu (15 ml) pod refluxem po dobu 30 minut. Bezbarvý roztok se ochladí na 0 °C a přidá se MsCl (0.42 ml, 5.40 mmol). Roztok se zahřívá např. přes noc pod refluxem .

Rozpouštědlo se pak odpaří a zbytek se vyčistí sloupcovou chromatografií (metylenchloríd: metanol 9:1). Jako bílé krystaly se izoluje 1-Metansulfonylcytosin (91 mg, 11.5 %) a 4-N metansulfonylcytosin (226 mg, 26.5%). Výtěžnost reakce je kolem 38%.

1-Methansulfonylcytosin: t.t. 222 °C; UV(MeOH): λ _m!X/mn 218.1 a 283.7 (log ε 4.29 a 4.45); IR (KBr) v ^/cm'¹: 3410 (s), 3380 (s), 3100 (s), 2950 (m),1680-1640 (br, s),l520 (s), 1485 (s), 1350 (s), 1320 (s), 1290 (s), 1170 (s); ’H -NMR (d6-DMSO) δ /ppm : 7.92 (d, 2H, NH2, J= 8.7 Hz), 7.86 (d, I Η, H-6, J= 7.8 Hz), 5.91 (d,l Η, H-5, J= 7.8 Hz), 3.64 (s, 3H, CH3); ¹³C-NMR (d6-DMSO) δ /ppm : 166.23 (s, C-4),152.20 (s, C-2), 139.26 (d, C-6), 96.76 (d, C-5), 41.16 (q, CH₃); Anal. Výpočet pro C₅H₇N₃O₃S (M_r= 189.20): C (31.74), H (3.73), N (22.21), zjištěno: C (31.92), H (4.01), N (22.02).

4-N Methansulfonylcytosin: t.t. 281-282 °C; UV(MeOH): λ _max/nm 220.8 a 286.4 (log ε 3.38 a 3.74); IR (KBr) v max/cm’¹: 3200 (br, m), 3100 (m), 2930 (m), 1730 (s), 1640 (s), 1565 (s), 1450 (m), 1400 (m), 1380 (s), 1300 (s), 1130 (s); 'H -NMR (d6-DMSO) δ /ppm : 11.64 (s, 2H, NH-SO2- a NH), 7.60 (d, IH, H-6, J= 7.6 Hz), 6.35 (d, IH, H-5, J= 7.6 Hz), 2.95 (s, 3H, CH3); ^!3C-NMR (d6-DMSO) δ /ppm :160.37 (s, C-4),

149.70 (s, C-2),144.13 (d, C-6), 95.48 (d, C-5), 42.21 (q, CH₃); Anal. výpočet pro C₅H₇N₃O₃S (M_r= 189.20): C (31.74), H (3.73), N (22.21 ), zjištěno: C (31.92), H (3.71 ), N (22.12).

PŘÍKLAD 11. 5-Bromo-1 - p -toluensulfoncytosin

A) Směs 5-bromocytosinu (110 mg, 0.58 mmol) a BSA (0.43 ml,1.74 mmol) v suchém acetonitrilu (2 ml) se ohřívá pod refluxem po dobu 45 minut. Bezbarvý roztok se ochladí na 0 °C a přidá se TsCl (133 mg, 0.70 mmol). Po 30 minutách refluxování se pod sníženým tlakem bez vnějšího ohřívání rozpouštědlo odpaří. Do zbytku se přidá ethanol a odfiltruje se • ·· · · ♦ · · ·· ··· · ···· · ··· • ······ · ·· ··· · ·· • « · a » aa • a· a ·· ··· ·· · · pevná fáze 5-bromcytosinu. Filtrát se odpaří a zbytek se vyčistí preparativní chromatografií (metylenchloride : metanol 9:1), získal se produkt (48 mg, 24%) a 1- p- toluensulfonylcjtosin (8 mg, 5%).

B) Do suspense 5-bromocytosinu (150 mg, 0.79 mmol) v suchém pyridinu (8 ml) se přidá TsCl (300 mg, 1.58 mmol). Po míchání při pokojové teplotě např. přes noc se odpaří rozpouštědlo pod refluxem bez vnějšího ohřívání. Přidá se ethanol a odfiltruje se pevný 5bromocytosin. Filtrát se odpaří a zbytek se vyčistí preparativní chromatografií ethylenchlorid : methanol 9:1 ). Produkt se získá po rekrystalizaci z methanolu (50 mg, 18%), t.t. 213 °C; UV (MeOH): λ _max/nni 234.7 a 254.0 (log ε 3.98 a 3.95); IR (KBr) v η^/αη'¹: 3450 (s), 3070 (m), 2960 (w), 2920 (w), 1680 (s), 1640 (s), 1600 (m), 1490-1475 (s), 1370 (s), 1170 (s); ’H -NMR (d6-DMSO) δ /ppm : 8.61 (s, IH, NH). 8.35 (s, IH, H-6), 7.95 (d, 2H, Ph, J=8.1 Hz), 7.72 (s, IH, NH), 7.46 (d, 2H, Ph, J= 8.1 Hz), 2.42 (s, 3H, CH3); ¹³C-NMR (d6-DMSO) δ /ppm : 162.85 (s, C-4), 149.94 (s, C- 2), 146.08 (s, Ph), 139.74 (d, C-6), 133.83 (s, Ph), 129.89 (d, Ph), 129.44 (d, Ph), 90.27 (s, C-5), 21.27 (q, CH₃); Anal. výpočet pro C]]H]oN₃0₃SBr (M_r=344.19): C (38.39), H (2.93), N (12.21), zjištěno: C(38.19), H (2.94), N (12.44).

PŘÍKLAD 12: 5 - Jodo-1 - p-toluensulfonylcytosin

A) Směs 5-jodocytosinu (250 mg, 1.06 mmol) a BSA (0.78 ml, 3.17 mmol) ) v suchém acetonitrilu (3.5 ml) se ohřívala pod refluxem po dobu 45 minut. Do získaného červeného roztoku se přidal TsCI (242 mg, 1.27 mmol). Po olnřátí pod refluxem po dobu 45 minut se rozpouštědlo odpařilo a zbytek se vyčistil preparativní chromatografií (methylenchlorid : methanol 9:1). Produkt se získal po rekrystalizaci z metanolu (20 mg, 5%), t.t. 210 °C; a rovněž se izoluje 1-p-toluensulfonylcytosin,, 8 mg (3%).

B) Do suspenze 5-jodocytosine (200 mg, 0.84 mmol) v suchém pyridinu (9 ml) se přidá • · · ·

TsCl (322 mg, 1.69 mmol). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se rozpouštědlo odpaří pod sníženým tlakem bez vnějšího zahřívání. Do zbytku se přidá ethanol a bílá pevná fáze produktu se odfiltruje a rekrystalizuje z ethanolu (171 mg, 52%), UV (MeOH): λ _max/nm 228.9 a 289.4 (log ε 4.15 a 3.67); IR (KBr) v ^/cm'¹: 3480 (m), 3310(m), 3200(w), 2920 (vw), 2850 (vw), 1640 (s), 1560 (s), 1525 (m), 1390 (s), 1370 (s), 1190 (s), 1170 (s); 'H NMR (d6-DMSO) δ /ppm : 9.18 (s, IH, NH), 8.82 (s, IH, NH), 8.25 (s, IH, H-6), 7.53 (d, 2H, Ph, .7=8.0 Hz), 7.16 (d, 2H, Ph, J=7.8 Hz), 2.3 l(s, 3H, CH3); ¹³C-NMR (d6-DMSO) δ /ppm : 160.32 (s, C-4), 153.52 (d, C-6), 142.55 (s, C-2), 147.51 (s, Ph), 138.57 (s, Ph), 128.56 (d, Ph), 125.76 (d, Ph), 54.99 (s, C-5), 20.91 (q, CH₃). Anal.výpočet pro CnHujNsCbSBI (M=391.19): C (33.77), H (2.58), N (10.74), zjištěno C (33.94), H (2.75), N (10.71).

PŘÍKLAD 13. 4-N-Metansulfonvl-l-p-toluensulfonylcytosin

A) Do studené suspenze 1-p- toluensulfonylcytosinu (50 mg, 0.19 mmol) v suchém pyridinu (2 ml) se přidá MsCl (0.029 ml, 0.38 mmol). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se rozpouštědlo odpaří pod sníženým tlakem. Do zbytku se přidá ethanol a bílá pevná fáze produktu se odfiltruje a rekrystalizuje z ethanolu (20 mg, 31%).

B) Do suspenze 4-N- metansulfonylcytosinu (63 mg, 0.33 mmol) v suchém pyridinu (3.5 ml) se přidá TsCl (127 mg, 0.67 mmol). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se rozpouštědlo odpaří pod sníženým tlakem. Do zbytku se přidá ethanol a bílá pevná fáze produktu se odfiltruje a rekrystalizuje z ethanolu (11 mg). Zbytek se vyčistí preparativní chromatografií (methylenchlorid: metanol 20:1), a izoluje se dalších 30 mg produktu. Celkový výtěžek je asi 38.5%; t.t =229 °C; UV (MeOH): λ _max/nm 234.4 a 276.5 (log ε 3.51 a 3.68); IR (KBr) v ^/cní': 3200 (m), 3100 (m), 2920 (m), 2850 (m), 1730 (s), 1640-1630 ··· · · ·«··· ··· φ ···· · ·«· • ····«* · · · ··· ··· « · · ·· · · • · * · φ · · · · «·*9 (s), 1570 (m), 1460 (ni), 1410-1390 (m), 12S0 (s), 1175 (s), 1115(m); 'H -NMR (d₆-DMSO) /ppm : 12.28 (brs, IH, NH), 8.26 (d, IH, H-6, J=8.4 Hz), 7.93 (d, 2H, Ph, J=8.1 Hz), 7.51 (d, 2H, Ph, J=8.1 Hz), 6.69 (d, IH, H-5, J=8.4 Hz), 3.02 (s, 3H, CH₃), 2.44 (s, 3H, CH₃); ¹³C-NMR(d₆-DMSO) δ /ppm : 158.86 (s, C-4), 146.78 (s, C-2), 146.22 (s, Ph), 139.06 (d, C6), 132.68 (s, Ph), 130:03 (d, Ph), 129.29 (d, Ph), 98.65 (s, C-5), 41.00 (q, CH₃), 21.33 (q, CH₃). Anal. výpočet pro C₁₂Hi₃N₃O₅S₂ (M= 343.39): C (41.97), H (3.82), N (12.24), zjištěno: C (41.98), H (4.00), N ( 12.06).

PŘÍKLAD 14. l-Methansulfonyl-4-N-toluensulfonylcytosin

A) Směs 1-metansulfonylcytosinu (32 mg, 0.17 mmol) a BSA (0.084 ml, 0.34 mmol) se ohřívá pod refluxem v suchém acetonitrilu (1 ml) pod dobu 45 minut. Přidá se TsCl (39 mg, 0.20 mmol), a po ohřívání pod refluxem po dobu 2 hodin se odpaří rozpouštědlo a zbytek se vyčistí preparativní chromatografií (methylenchlorid : metanol 3:1). Po rekrystalizaci z etanolu se získají bílé krystaly produktu (28 mg, 48%).

B) Do suspenze 1-methansulfonylcytosinu (52 mg, 028 mmol) v suchém pyridinu (3 ml) se přidá TsCl (63 mg, 0.33 mmol). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se odpaří rozpouštědlo pod sníženým tlakem. Do zbytku se přidá etanol a bílá pevná fáze produktu se filtruje a rekrystalizuje z etanolu (85 mg, 90%); t.t.=206-208 °C; UV (MeOH): λ _niax/nm

234.5 a 277.2 (log ε 3.89 a 4.06); IR (KBr) v „^/cm’¹: 3220 (m), 3100 (w), 2920 (w), 2850 (w), 1730 (s), 1640 (s), 1590-1570 (s, dublet), 1480-1450 (s, br), 1400 (s, dublet), 1370 (s), 1330 (s), 1275-1255 (s, dublet), 1190 (s),l 170 (s); 'H -NMR (dó-DMSO) δ /ppm : 12.30 (s, IH, NH), 8.27 (d,lH, H-6, >8.4 Hz), 7.94 (d, 2H, Ph, J= 8.1 Hz), 7.51 (d, 2H, Ph, J= 8.1 Hz), 6.69 (d,lH, H-5, J= 8.4 Hz), 3.03 (s, 3H, CH3), 2.44 (s, 3H, CH3); ^,3C-NMR (d6-DMSO) δ /ppm : 158.99 (s, C-4),146.98 (s, C- 2),146.36 (s, Ph),139.26 (d, C-6),132.84 (s, Ph),130.20 • » · ···· · · · · ······ · · · · · · · · · • · · · · · • · · « · · · · 9 9 (d, Ph),129.45 (d, Ph), 98.70 (s, C-5), 42.39 (q, CH₃), 21.30 (q, CH₃). Anal. vypočteno pro

C_]2H₁₃N₃O₅S₂ (M_r= 343.39): C (41.97), H (3.82), N ( 12.24), zjištěno: C (42.01 ), H (3.47), N( 12.46).

PŘÍKLAD 15. 1,4-N Dimetansulfonylcytosin

Do studené suspenze cytosinu (500 mg, 4.50 mmol) v suchém pyridinu (15 ml) se přidá MsCl (0.7 ml, 9.00 mmol). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se odpaří rozpouštědlo pod sníženým tlakem. Do zbytku se přidá ethanol a bílá pevná fáze produktu se filtruje a rekrystalizuje z etanolu (825 mg, 69%); t.t.=220 °C ; UV (MeOH): λ _max/nm 220.0 a 2732 (log ε 3.84 a 4.19); IR (KBr) v max/cnť¹: 3260 (m), 3030 (w), 2940 (w), 1790-1760 (s), 1640 (s), 1575 (m), 1465-1455 (m, dublet), 1390 (s), 1350 (s),1290-1260 (s),l 150 (s),l 125 (s); 'HNMR (ds-DMSO) δ /ppm : 12.40 (s,lH, NH), 7.99 (d, IH, H-6, J= 8.4 Hz), 6.64 (d, IH, H-5, J= 8.4 Hz), 3.72 (s, 3H, CH3), 3.04 (s, 3H, CH3); ¹³C-NMR (d6-DMSO) δ /ppm :163.98 (s, C4),152.38 (s, C-2),144.20 (d, C-6), 102.98 (s, C-5), 47.27 (q, CH₃), 46.39 (q, CH₃). Anal. vypočteno pro C₆H₉N₃O₅S₂ (M_r= 267.29): C (26.96), H (3.39), N (15.72), zjištěno: C (27.05), H (3.30), N (15.61).

PŘÍKLAD 16. 1,4-N Di-p -toluensulfonylcytosin

A) Do suspenze 1- p -toluensulfonylcytosinu (200 mg, 0.81 mmol) v suchém pyridinu (8.5 ml) se přidá TsCl (185 mg, 0.97 mmol). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se odpaří rozpouštědlo pod sníženým tlakem. Zb\1ek se vyčistí preparativní chromatografií (methylenchlorid/metanol 9:l ). Po rekrystalizaci z ethanolu se získá produkt (295 mg, 87%);

t.t =182 °C; UV (MeOH): λ _max/nrn 227.2 a 283.0 (log ε 4.39 a 4.45); IR (KBr) v _max/cm‘^!:

3200 (w), 3090 (w), 3030 (w), 2920 (w), 2850 (w), 1730-1715 (s, dvojice), 1630 (s), 1570 (s, dvojice), 1450 (m, dvojice), 1400 (s, dublet), 1370 (m), 1290 (s), 1260 (m), 1175 (s), 1155 (s);

• · · · • · · ’Η -NMR (d₆-DMSO) δ /ppm : 12.10 (brs,lH, NH), 8.26 (d, IH, H-6, J= 8.4 Hz), 6.76 (d, IH,

H-5, J= 8.4 Hz), 7.93 (d, 2H, Ph, J= 8.1 Hz), 7.73 (d, 2H, Ph, J= 8.1 Hz), 7.49 (d, 2H, Ph, J=

8.1 Hz), 7.37 (d, 2H, Ph, J= 8.1 Hz), 2.43 (s, 3H, CH₃), 2.38 (s, 3H, CH₃); ¹³C-NMR (d₆DMSO) δ /ppm : 159.79 (s, C-4), 146.79 (s, Ph),146.42 (s, C-2),142.94 (s, Ph),139.52 (d, C6),132.91 (s, Ph),132.90 (s, Ph), 130.06 (d, Ph),129.63 (d, Ph),129.38 (d, Ph),126.47 (d, Ph), 98.78 (s, C-5), 21.21 (q, CH₃), 20.95 (q, CH3). Anal. vypočteno pro CjgHnNsOsS: (M_T= 419.48): C (51.54), H (4.09), N (10.02), zjištěno: C (51.26), H (4.20), N (10.00).

B) Do suspenze cytosinu ( 100 mg, 0.90 mmol) v suchém pyridinu (9.5 ml) se přidá TsCl (343 mg, 1.80 mmol). Po míchání při pokojové teplotě po dobu 48 hodin se odpaří rozpouštědlo pod sníženým tlakem. Zbytek se vyčistí preparativní chromatografií (methylenchlorid/metanol 15:1 ). Po rekrystalizaci z ethanolu se získá produkt, 106 mg (44.4%) 1-p-toluensulfonylcytosinu a 92 mg (24.4%) 1,4-N di - p- toluensulfonylcytosinu.

PŘÍKLAD 17. Růst zpomalující účinek

Sloučeniny 1, 2, 3 a 4, dle znázornění v rovnici 7 :

sloučeniny obecného vzorce I:

(Ri = - SO₂-C₆H₅ - p-CH₃, X = O, Y = H), 2 (Rj = - SO₂-C₆H₅ - p-CH₃, X = O, Y = Br), a sloučeniny obecného vzorce II: 3 (Rj = cx

X = O, Y - H), a 4 (Rj = - SO₂-CóH5 - p-CH₃, X = O, Y = H byly testovány na účinky proti rakovině in vitro s použitím lidských nádorových buněk slinivky břišní (MiaPaCa 2), na lidských nádorových buňkách děložního čípku (HeLa), na lidských nádorových buňkách hltanu (Hep 2) a běžných lidských vazivových buňkách (Hef 2).

Buněční výstelky. Nechaly se růst lidské nádorové buňky slinivky břišní (MiaPaCa 2), hrtanu (Hep 2), děložního čípku (HeLa) a běžné vazivové lidské buňky (Hef 2) v jedné vrstvě při 37 °C ve vlhčené atmosféře s 5% CO2 v DMEM doplněným s 10% plodovým hovězím sérem, 2 mM glutaminu,100 U/ml penicilinu a 100 mg/ml streptomycinu. Byly rutinně kontrolovány na mykoplasmickou kontaminaci metodou Hoechst 33250 fluorochromovým barvením a technikami aerobních a anaerobních kultur.

Buněční cytotoxícita. Pro potřeby experimentů byly buňky (200 ml; 2x10⁴ buněk /ml) umístěny na 96 sklíček pro mikromanipulaci. Po 24 hodinách se do buněk přidaly zkoušené sloučeniny různých koncentrací (10’⁴ - 10’^s M). Po třech dnech se určila životaschopnost buněk pomocí vyloučení trypanové modře. Kontrolní buňky se nechaly růst za stejných podmínek bez přidání zkoušených sloučenin.. Růst buněk byl určen barvící procedurou MTT (Mickisch et al., 19S9). Tato metoda závisí na proměně vodou rozpustné tetrazoliové soli (MTT) v nachově zbarvenou formazanovou sraženinu. Reakce vyvolaná enzymy dehydrogenázy probíhá pouze v živých buňkách. Zkoušky byly prováděny na 96 sklíčcích pro mikrokultury. Bylo použito 104 živých nádorových buněk na sklíčko, po 4 h inkubační době pg MTT7100, μ 1 celkový střední objem. Krystaly formazanu se rozpustily v DMSO a sklíčka se ihned měřila na čtečce mikrokultur při 540 nm.

Výsledky. Růst inhibičních účinků zkoumaných sloučenin 1, 2, 3 a 4, rovnice 7, pro různé buněčné výstelky lidských nádorových buněk a normální buněčné výstelky je zobrazen v tabulkách I, II, III a IV.

• ·

Rovnice 7

Na buňkách HeLa (lidských rakovinných buněk děložního čípku) se zjistil velice silný inhibiční účinek pro látky 1, 2, 3 a 4 při koncentraci 10’⁵ M. Tato koncentrace zpomalila buněčný růst o 85% (Tabulka I).

TABULKA I

HeLa	Log koncentrace (M)
látka	-8	-7	-6	-5
1.	98.7	94.5	92.3	11.2
2.	94.5	92.4	82.2	10.3
3.	98.9	25.5	14.8	14.8
4.	94.5	37.4	38.3	30.5

HeLa

log concentration (M)

Legenda: % from control = % z kontrol, vzorku, log concentration = logaritmus koncentrace Nejvýraznější růst inliibičních účinků na Hep 2 (rakovinné buňky hrtanu) byl pozorován u látky 3, při koncentrace ΙΟ'⁵ M. Tato koncentrace zpomalila růst o 80%. Látky 1, 2 a 4 prokázaly méně výrazný inliibiční účinek, o 20%, při koncentraci 10'⁵ M (Tabulka 2).

TABULKA II

Hep 2	Log koncentrace (M)
látka	-8	-7	-6	-5
1.	-	-	-	-
2.	101.3	100.2	90.4	81.3
3.	95.9	81.4	80.3	25.4
4.	97.7	91.5	84.3	80.7

Legenda: % from control = % z kontrol, vzorku, log concentration = logaritmus koncentrace

Na MiaPaCa 2 (rakovinné buňky slinivky břišní) byl zpomalující-inliibiční účinek na buňkách zjištěn při koncentraci 10‘⁵ M. Látka 1 zpomalila růst buněk o 55%, látka 2 o 80%, látka 3 o 40% a látka 4 o 65% (Tabulka III).

TABULKA III

MiaPaCa 2	Log koncentrace (M)
látka	-8	-7	-6	-5
1.	127.0	127.1	79.2	45.4
2.	126.0	114.6	52.1	23.1
3.	130.4	101.3	82.5	62.3
4.	101.0	91.5	82.5	35.2

MíaPaCa 2

I

Legenda: % fřom control - % z kontrol, vzorku, log concentration = logaritmus koncentrace Zpomalující účinky zkoušených sulfonylových derivátů na běžné lidské buňky jsou slabé v porovnání s rakovinovým buňkami. Koncentrace 10'⁵ M všech zkoušených látek zpomaluje růst buněk o více než 50% u nádorových buněk (MiaPaCa 2, Hela), ale účinek na normální řady buněk byl menší než 40% (Tabulka IV).

TABULKA IV

Hef 2	Log koncentrace (M)
látka	-8	-7	-6	-5
1.	98.0	98.4	80.4	77.7
2.	102.0	101.8	89.0	58.3
3.	95.2	89.3	71.9	65.4
4.	105.0	99.2	98.4	80.3

Hef 2 i

120

-8 -7 -6 -5 log concentration (M)

Nejvýraznější účinek proti zhoubnému bujení byl u zkoumaných sulfonylových derivátů (1, 2,3 a 4) získán u koncentrace 10’⁵ M. Inhibiční účinek zkoumaných ςη ··· ····· ··· ······· · ♦····♦ • · · · · · ··· » ····· ·· · sulfonylureových derivátů byl výrazně nižší na normálních lidských vazivových buňkách v porovnání s k rakovinovým buňkám. Například látka 1 vykázala téměř 90% zpomalení u

HeLa buněk a pouze 20% u Hef 2 buněk. Látka 3 vykázala 75% zpomalující účinek na Hep2 a pouze 35% růst zpomalující účinek na Hef 2. Rovněž sloučenina 4 zpomalila růst o 70% u

HeLa a MiaPaCa 2 buněk a pouze o 20% u Hef 2.

Průmyslová využitelnost

Tento vynález se využije při procesu výroby (přípravy) N-l sulfonylových a N-l, NH4 sulfonylových derivátů báze jádra pyrimidinu (uracilu a cytosinu) podle vynálezu a jejich modifikací dle obecných rovnic I, II, III, IV, V a VI. Látky 1, 2, 3 a 4 představené rovnicí 7 (sloučeniny obecné formule I: 1 (Ri = - SO2-C6H5 - p-CHj, X = O, Y = H), 2 (Ri = - SO2C₆H₅ - p-CHs, X = O, Y = Br), a sloučeniny obecného vzorce II: 3 (Ri = a

X = O, Y = H), a 4 (R, = - SO2-C₆H₅ - p-CH₃, X = O, Y = H), vykazují in vitro protirakovinový účinek. Sloučeniny předvedené v tomto vynálezu jsou předmětem pro rozvoj protirakovinových léků.

Claims

Patentové nároky

1. Sloučeniny obecného vzorce I, kde :

X = O,S;

Y = H, F, Cl, Br, I, C1-C5 alkyl, NO2, NH2, substituovaný alkynyl (C=CR4; R4 = H, Si(CH3)3, Cl - C3 alkyl, halogen, CO-alkyl); substituovaný alkenyl (CH= CR5; R5 = H, F, Cl, Br, I, ClC3 alkyl, CN, COCH3, CO2CH3);

R1 = SO2-R6;

R6 = Cl- C3 (rozvětvený) alkyl, Cl- C3 (rozvětvený) haloalkyl, Cl- C3 alkyl substituovaný ClC3 (halo)alkoxy skupinou, C2-acyl,

F

F &io (R_I0 = CH₃ and R_n=H, SO₂C1; R₁₀ = CH(CH₃)₂ andR_H = H), • · > ·
2. Sloučeniny obecného vzorce II, kde:

X =jak v I;

Y =jak v I;

R1 = R2 = H, SO2-R6; (R6 = jak v I)

R1 * R2 kombinace - SO2-R6 (R6 = jak v I)

R1 = SO2-R6 je li R2 = H;
3. Sloučeniny obecného vzorce III, kde:

X = O, S, N;

Y =jak v I;

R1 = jak v I;

R3 = CH3, C2H5 ;
4. Sloučeniny obecného vzorce IV, kde:

X=jakvl;

R1 =jak I;

R4 = jak v I se substituovaným alkynylem;
5. Sloučeniny obecného vzorce V, kde:

X = jak v I;

R1 = jak I;

R4 = jak v I se substituovaným alkynylem;
6. Sloučeniny obecného vzorce VI, kde:

X =jak v I;

Y = H, alkyl;

R1 = jak I;

Z = C, N.

··· ··*···· ··· · ···· · ·· · • ···· · · · · · ··· ··· • · · · ·· · ··· · · · · · · φ ·· ·
7. Sloučenina podle nároku 1, 1-Methansulfonyluracil (l-metanesulfonylpyriinidin- 2,4(3H)dion).
8. Sloučenina podle nároku 1, 1-p-toluensulfonyluracil (1-p-toluensulfonylpyrimidin- 2,4(3H)dion).
9. Sloučenina podle nároku 1, l-(2-sulfonyl-3-N.N-dimethylaminocarbonylpiridin)uracil l-(2sulfonyl-3-Ν,Ν dimethylaminocarbonylpiridin)pyriinidin-2,4(3H)-dion).
10. Sloučenina podle nároku 1, 5-bromo-l p-toluensulfonyluracil (5-bromo-l ptoluensulfonylpyrimidin-2,4(3H)-dion).
11. Sloučenina podle nároku 1, 5-bromo-l-methansulfonyluracil (5-bromo-lmethansulfonylpyrimidin-2,4(3H)-dion).
12. Sloučenina podle nároku 1, 5-jodo-l-metansuIfonyluracil (5-jodo-lmethansulfonylpyrimidin-2,4(3H)-dion).
13. Sloučenina podle nároku 1, 5-jodo-l- p-toluensulfonyluracil (5-jodo-l-l - ptoluensulfonylpyrimidin-2,4(3H)-dion).
14. Sloučenina podle nároku 2, 1-p-toluensulfonylcytosin (4-amino-l-ptoluensulfonylpyrimidin- 2-on).
15. Sloučenina podle nároku 2, 1,4-N- Di- p-toluensulfonylcytosin (4-N-ptoluensulfonylamino-1- p-toluensulfonylpyrimidin-2r\on).
16. Sloučenina podle nároku 2, l-(2-sulfonyl-3-N.N dimethylaminocarbonylpiridin)cytosin 1(2-sulfonyl-3-N,N- dimethylaminocarbonylpiridin) pyrimidin-2-on).
17. Sloučenina podle nároku 2, 1 -methansulfonylcytosin (4-amino-lmethansulfonylpyrimidin-2-on).
18. Sloučenina podle nároku 2, 4-N - methansulfonylcytosin(4-Nmethansulfonylaminopyrimidin-2( 1 H)-on).
19. Sloučenina podle nároku 2, 1,4-N - dimethansulfonylcytosin (4-N metbansulfonyl-1methansulfonylpyrimidin-2-on).
20. Sloučenina podle nároku 2, 4-N - methansulfonyl-I p-toluensulfonylcytosin (4-N methansulfonylamino-1- p-toluensulfonylpyrimidin-2-on).
21. Sloučenina podle nároku 2, l-methansulfonyl-4-N p-toluensulfonylcytosin (1methansulfonyI-4-N- p-toluensulfonylaminopyrimidin-2-on).
22. Sloučenina podle nároku 2, 5-bromo-l p-toluensulfonylcytosin (4-ainino-5-bromo-l ptoluensulfonylpyrimidin-2-on).

• · · · · · · · · · • · · · ···· · ·· · • ···· · · · · · ··· ··· • · · · · · · • · · · ··*·· »· ··
23. Sloučenina podle nároku 2, 5-jodo-l p-toluensulfonylcytosin (4-amino-5-jodo-l - ptoluensulfonylpyrimidin-2-on).
24. Způsob přípravy derivátů sulfonyl pyrimidinu obecného vzorce I, dle nároku 1, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s řádně aktivovanými deriváty nukleového jádra pyrimidinu; R1=C1-C3 (rozvětvený) alkyl, C1-C3 haloalkyl, C1-C3 alkyl substituovaný s C1-C3 (halo)alkoxy skupinou, C2-acyl,

NHCOCHj), (R, = ;p-H, F, Cl, Br, I, CH_3> OCH₃, -N=N-C₆H4-p-N(CH₃)₂, -C₆H4-p-SO₂C1, NO₂; o-NO₂; ™-NO₂, CF₃, OCF₃),

R,o - CH₃ and R| | — H, SO₂C1

R_lo = CH(CH₃)2 and Rj i = H • · · ·
25. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce II, dle nároku 2, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s řádně aktivovanými deriváty nukleového jádra pyrimidinu; Rl=jak v nároku 24 a H;

1,2 - 2,0 ekvivalenty v organickém rozpouštědlu, 0,5 - 24 hodin, 20 - 80^cC.
26. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce III, dle nároku 3, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s řádně aktivovanými deriváty nukleového jádra pyrimidinu; Rl=jak v nároku 24 ;

1,2 - 2,0 ekvivalenty v organickém rozpouštědlu, 0,5 - 24 hodin, 20 - 80^cC.
27. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce IV, dle nároku 4, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s řádně aktivovanými deriváty nukleového jádra pyrimidinu; Rl=jak v nároku 24;

1,2 - 2,0 ekvivalenty v organickém rozpouštědlu, 0,5 - 24 hodin, 20 - 80^cC.
28. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce V, dle nároku 5, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s řádně aktivovanými deriváty nukleového jádra pyrimidinu; Rl=jak v nároku 24;

1,2 - 2,0 ekvivalenty v organickém rozpouštědlu, 0,5 - 24 hodin, 20 - 80°C.
29. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce VI, dle nároku 6, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s řádně aktivovanými deriváty nukleového jádra pyrimidinu; Rl=jak v nároku 24;

1,2 - 2,0 ekvivalenty v organickém rozpouštědlu, 0,5 - 24 hodin, 20 - 80^cC.
30. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce I, dle nároku 1, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s deriváty nukleovéhojádra pyrimidinu;

Rl=jak v nároku 24;

1,2 - 2,0 ekvivalenty v pyrimidinu, 1- 48 hodin, 20°C.
31. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce II, dle nároku 2, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s deriváty nukleového jádra pyrimidinu;

Rl=jak v nároku 24;

1,2 - 2,0 ekvivalenty v pyrimidinu, 1- 48 hodin, 20°C.
32. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce III, dle nároku 3, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s deriváty nukleového jádra pyrimidinu;

Rl = jak v nároku 24;

1,2 - 2,0 ekvivalenty v pyrimidinu, 1- 48 hodin, 20°C.
33. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce IV, dle nároku 4, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s deriváty nukleovéhojádra pyrimidinu;

Rl=jak v nároku 24;

1,2 - 2,0 ekvivalenty v pyrimidinu, 1- 48 hodin, 20°C.
34. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce V, dle nároku 5, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s deriváty nukleového jádra pyrimidinu;

Rl=jak v nároku 24;

1,2 - 2,0 ekvivalenty v pyrimidinu, 1- 48 hodin, 20°C.

• · • · · · ♦ · · * * · • · »« »4 • · · » · · · *«···· * · » • · · · • <· e · · »
35. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce VI, dle nároku 6, reakcí sulfonylchloridů R1-S02C1 s deriváty nukleoiťho jádra pyrimidinu;

Rl=jak v nároku 24;

1,2 - 2,0 ekvivalenty v pyrimidinu, 1- 48 hodin. 20^cC.
36. Způsob přípravy derivátů sulfonylpyrimidinu obecného vzorce I, II, III, IV, V a VI, dle nároků 1 - 35, přičemž některé z nich mají protirakovinové účinky.