CZ195599A3

CZ195599A3 - Gelové prostředky pro lokální podání léčiva

Info

Publication number: CZ195599A3
Application number: CZ991955A
Authority: CZ
Inventors: Joseph M. Beaurline; Patrick J. Roddy; Mark A. Tomai
Original assignee: Minnesota Mining And Manufacturing Company
Priority date: 1996-12-03
Filing date: 1997-12-01
Publication date: 1999-09-15
Also published as: HU229599B1; US20020015715A1; US6365166B2; KR20000069233A; EP0942724A2; NO992638L; PT942724E; BR9713677B1; NO325684B1; IL130065A0; HUP0000568A3; IL130065A; US5939090A; DE69723721D1; NZ335821A; BR9713677A; HUP0000568A2; WO1998024436A3; DE69723721T2; AU5368698A

Description

Gelové prostředky pro lokální podání léčiva

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká zlepšených farmaceutických gelových prostředků pro lokální podání léčiv. V jiném aspektu se předkládaný vynález se týká zlepšených farmaceutických gelových prostředků pro lokální podání obsahujících 4-amino-2-ethoxymethyl-a,α-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol.

Dosavadní stav techniky

Farmaceutické gelové a krémové prostředky pro lokální podání léčiv jsou v oboru známé. Nicméně, mnohé z takových prostředků nejsou vhodné pro určité aplikace vzhledem k problémům souvisejícím například s nerozpustností a/nebo degradací léčiva v prostředku, fyzikální nestabilitou prostředku (separací složek, zahuštění, srážením/aglomerizací aktivních složek a podobně) a vzhledem k dráždění kůže nebo sliznice, na kterou je prostředek aplikován. Také - podle účelu prostředku - může být žádoucí, aby při podání prostředku nedocházelo k systémovému podání aktivní složky, zejména tehdy, když při takovém systémovém podání může dojít ke vzniku vedlejších účinků.

U.S. patent č. 5238944 popisuje lokální prostředek obsahující 1-isobutyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-4-amin, který je účinný pro léčbu bradavic v oblasti genitálu a jiných onemocnění. Nicméně, ačkoliv je přípravek užitečný pro zamýšlený účel, je tento prostředek krém, u které může docházet k problémům se separací, a obsahuje kyselinu isostearovou, která jej činí bolestivým při aplikaci na otevřené léze, jako jsou například léze vyskytující se v případě infekce virem herpes simplex.

Sloučenina 4-amino-2-ethoxymethyl-o;,α-dimethyl-lH-imidazo[4,

5-c]chinolin-l-ethanol popsaná v U.S. patentu 5389640 je ze stejné chemické třídy sloučenin jako l-isobutyl-lH-imidazo[4,5-c] chinolin-4-amin, ačkoliv má některé významně odlišné chemické, fyzikální a biologické vlastnosti. Bylo prokázáno, že sloučenina indukuje po orálním podání u myší a krys tvorbu interferonu a faktoru nekrosy nádorů. Bylo také prokázáno, že sloučenina indukuje tvorbu interferonu-α, faktoru nekrosy nádorů, interleukinu-la, interleukinu-ΐβ, interleukinu-6 a interleukinu-8 v kulturách lidských mononukleámích buněk periferní krve. Sloučenina také vykazuje antivirovou aktivitu viru herpes simplex při subkutáním, dermálním nebo intravaginálním podání morčatům 24 hodin před infekcí.

Nicméně, systémové podání 4-amino-2-ethoxymethyl-a,adimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu může být také doprovázeno nežádoucími účinky, včetně horečky, únavy, bolesti hlavy, nevolnosti a zvracení. Nesystémová lokální indukce cytokinů by proto měla být výhodná v tom, že nedojde k vedlejším účinkům spojeným se systémovou indukcí těchto cytokinů.

Podstata vynálezu

V souladu s tím je jedním předmětem předkládaného vynálezu vysoce stabilní farmaceutický gelový prostředek, který je vhodný pro lokální aplikaci na kůži a/nebo sliznici.

Jiným předmětem předkládaného vynálezu je gelový prostředek, který je vhodný pro lokální aplikaci na kožní a/nebo slizniční léze.

Jiným předmětem předkládaného vynálezu je gelový prostředek, ve kterém je 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol solubilní a nepodléhá významné • · φ · φ φ φ · · φ φ · φ φ ·ΦΦΦ φ φφ φ φφφ φ · φ φ · φ degradaci při skladování.

Ještě jiným předmětem předkládaného vynálezu je lokální gelový prostředek pro lokální podání 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl -lH-imidazo[4,5-c]chinolin-1-ethanolu, při kterém nedochází k průniku nežádoucích množství aktivní sloučeniny do systémového oběhu.

Tyto předměty, stejně jako jiné předměty, které budou zřejmé z následujícího popisu, jsou poskytnuty farmaceutickými gelovými prostředky obsahujícími léčivo, koloidní oxid křemičitý, triacetin a, výhodně, propylenglykol. Léčivem je výhodně 4-amino -2-ethoxymethyl-a,α-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c] chinolin-l-ethanol, o kterém bylo zjištěno, že je dostatečně solubilní a chemicky stabilní v gelových prostředcích podle předkládaného vynálezu. Kromě toho bylo zjištěno, že gelové prostředky podle předkládaného vynálezu, oproti některým jiným gelovým prostředkům, umožňují vynikající lokální podání léčiva bez významného průniku léčiva do systémového oběhu (což vylučuje nežádoucí účinky).

Jak bylo zmíněno, gelové prostředky podle předkládaného vynálezu výhodně obsahují propylenglykol. Jedním důvodem, proč tomu tak je, je překvapivě to, že obsažení propylenglykolu zahuŠtuje gelové prostředky a tak je integrita výsledného gelu při tělesné teplotě zachována. Mělo by být nicméně uvedeno, že gelové prostředky bez propylenglykolu, ale s 4-amino-2-ethoxymethyl-a,α-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolem, koloidním oxidem křemičitým a triacetinem, jsou také vhodné, ale méně výhodné.

Předkládaný vynález také obsahuje způsob pro indukci cytokinů, jako je interferon a faktor nekrosy nádorů, lokálně v kůži nebo v • · · · • · • · sliznicích savců, který obsahuje lokální aplikaci prostředku popsaného výše na kůži nebo sliznice savců, v množství, které je účinné pro indukci cytokinů. Prostředky podle předkládaného vynálezu jsou také vhodné pro léčbu onemocnění aplikací prostředku na kožní a/nebo slizniční leze, nebot gelové prostředky neobsahují dráždivě složky.

Popis obrázků na připojených výkresech

Vynález bude popsán dále s odkazem na testy provedené za použití přístroje zobrazeného na připojených výkresech, kde:

Obr. l je modifikovaný testovací Franzův přístroj pro uvolňování léčiva s difusní komůrkou; a

Obr. 2 je alternativně modifikovaný testovací Franzův přístroj pro uvolňování léčiva s difusní komůrkou.

Všechna uvedená procenta jsou vztažena k celkové hmotnosti prostředku, pokud není uvedeno jinak.

Předkládaný vynález poskytuje gelové prostředky, které výhodně obsahuj í 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c] chinolin-l-ethanol (někdy též označovaný jako léčivo).

Sloučenina 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c] chinolin-l-ethanol je známým činidlem zvyšujícím imunitní odpověď s antivirovými vlastnostmi. Může být syntetizována za použití techniky popsané v U.S. patentu 5389640, jehož objev je zde uveden jako odkaz. Sloučenina může být použita pro léčbu virových infekcí jako je infekce virem herpes simplex typ I a II a bradavice v oblasti genitálu. Dále, skutečnost, že sloučenina indukuje různé cytokiny včetně interferonu naznačuje, že tato sloučenina a prostředky pro lokální podání obsahující tuto sloučeninu mohou být užitečné pro léčbu jiných onemocnění, při který je účinná léčba interferonem. 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-1-ethanol bude výhodně přítomen v prostředku podle předkládaného vynálezu v terapeuticky účinném množství, t.j. v množství účinném pro léčbu vybraného onemocnění nebo účinném pro prevenci recidivy takového onemocnění. Obyčejně bude 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-l -H-imidazo[4,5-c]-chinolin-l-ethanol přítomen v prostředku podle předkládaného vynálezu v množství 0,001 až 0,6% hmotnostních, lépe přibližně od 0,01 do přibližně 0,5% hmotnostních vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.

4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol vykazuje významnou rozpustnost v prostředcích podle předkládaného vynálezu. Ve výhodném provedení předkládaného vynálezu je léčivo v podstatě zcela rozpuštěno v prostředku.

Prostředky podle předkládaného vynálezu obsahují koloidní oxid křemičitý jako gelotvorné činidlo. Koloidní oxid křemičitý je komerčně dostupný pod několika obchodními názvy: AEROSIL od Degussa (Deutsche Gold- und Silber Schneideanstalt vormals Roessler, Frankfurt, Germany), CAB-O-SIL od Cabot Corporation (Tuscola, IL, USA) a Wacker HDK od Wacker-Chemie GmbH (Munich, Germany). Komerčně dostupné jsou různé stupně koloidního oxidu křemičitého, které mají různé povrchové plochy. Výhodný přípravek má specifickou povrchovou plochu přibližně 200 m²/g a je dostupný pod obchodní značkou AEROSIL 200. Koloidní oxid křemičitý bude obyčejně v prostředcích podle předkládaného vynálezu obsažen v množství přibližně 7% až 12%, výhodně 8% až 11%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.

• · · · • · · ·

Prostředky podle předkládaného vynálezu výhodně obsahují propylenglykol (1,2-propandiol). Překvapivě bylo zjištěno, že přidání propylenglykolu zahuščuje gelové prostředky a tak umožňuje udržení integrity gelu při tělesné teplotě. Soudí se, že propylenglykol může účinkovat jako rozpouštědlo pro koloidní oxid křemičitý a jako solubilizační činidlo pro léčivo. Propylenglykol bude obyčejně v prostředcích podle předkládaného vynálezu obsažen v množství přibližně 1% až 30%, výhodně 5% až 25%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.

Prostředky podle předkládaného vynálezu také obsahují triacetin (1,2,3-propantrioltriacetat). Soudí se, že triacetin může účinkovat jako rozpouštědlo pro koloidní oxid křemičitý a jako solubilizační činidlo pro léčivo. V prostředcích podle předkládaného vynálezu, které neobsahují propylenglykol, bude triacetin obvykle obsažen v množství přibližně 88% až 93%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku. V prostředcích podle předkládaného vynálezu, které obsahují propylenglykol, bude triacetin obvykle obsažen v množství přibližně 58% až 92%, výhodně přibližně 63% až 88%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku. Nicméně, aktuální procentuální obsah triacetinu a jiných složek bude záviset na tom, zda budou v prostředku obsaženy další přísady.

Prostředek podle předkládaného vynálezu může být vyroben smísením 4-amino-2-ethoxymethyl-o;,a-dimethyl-lH-imidazo [4,5-c] chinolin-1-ethanolu s triacetinem a propylenglykolem, pokud je přítomen, a zahřátím za míšení na teplotu přibližné 50-55 °C.

Když se zdá, že 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol je zcela rozpuštěn, přidá se koloidní oxid křemičitý a mísí se do smáčivého stavu. Výsledná směs se mísí ve vysokorychlostním vrtulovém mixeru, dokud se nevytvoří homogenní gel.

Bylo zjištěno, še prostředky podle předkládaného vynálezu indukují interferon a faktor nekrosy nádorů při lokální aplikaci na kůži myší. Lokální indukce napomáhá vyloučení nežádoucích účinků spojených se systémovým podáním těchto cytokinů. Jak bylo uvedeno výše, tyto nežádoucí účinky zahrnují horečku, únavu, bolesti hlavy, nevolnosti a zvracení. Schopnost prostředků podle předkládaného vynálezu indukovat produkci interferonu a faktoru nekrosy nádorů v kůži naznačuje, že budou užitečné pro lokální léčbu onemocnění jako je infekce herpes simplex virem typu I a II, bradavice, včetně bradavic v oblasti genitálu, bazocelularní karcinom, intraepiteliální neoplasie čípku děložního a aktinická keratosa.

Příklady uvedené dále jsou ilustrací předkládaného vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Test indukce cytokinů

Data indukce cytokinů uvedená v příkladech uvedených dále byla získána následující metodou.

Pro každý testovaný prostředek se použijí dvě skupiny holých SKH-l myší samičího pohlaví (4 myši na skupinu). 10 μΐ prostředku obsahujícího léčivo se aplikuje na pravý bok a rozetře se během 1 minuty. 10 μΐ placebo gelu (který obsahuje stejný hmotnostní poměr oxidu křemičitého a propylenglykolu jako testovaný gel a zbytek tvoří triacetin) se aplikuje na levý bok a rozetře se během 1 minuty. Jednu hodinu po podání dávky se první skupina myší usmrtí. Dvě hodiny po podání dávky se usmrtí druhá skupina myší. Kůže se omyje a odeberou se vzorky tkáně (100 mg) z pravého boku (ošetřeného léčivé) a z levého boku (ošetřeného placebem). Jednotlivé vzorky se umístí do kryozkumavek a rychle se zmrazí v kapalném dusíku. Vzorky se potom homogenizují v 1 ml RPMI media obsahujícího 10% fetální telecí sérum a centrifugují se při 2000 rpm po dobu 10 minut. Supernatant se odebere a zmrazí se do testování na přítomnost interferonu (IFN) a faktoru nekrosy nádorů (TNF). TNF je testován za použití komerčně dostupného ELISA kitu (Genzyme, Cambridge, MA) a výsledky jsou vyjádřeny jako pg/ml ± SEM. Interferon se měří za použití biotestu využívajícího L929 myších fibroblastů infikovaných virem encephalomyokarditidy. Podrobně je technika biotestu popsána v publikaci G.L.Brennan a L.H.Kronenberg, Automated Bioassay of Interferons in Micro-test Plates, Biotechniques, June/July 78, 1983, která je zde uvedena jako odkaz. Stručně, technika je následující: ředění interferonu a L929 buněk se inkubují při 37 °C po dobu 12 až 24 hodin. Inkubované buňky se infikují inokulem viru encephalomyokarditidy. Infikované buňky se inkubují po další dobu při 37 °C před kvantifikací virového cytopatického efektu. Virový cytopatické efekt se kvantifikuje barvením, po kterém následuje spektrofotometrické měření absorbance. Výsledky jsou vyjádřeny jako jednotky/ml ± SEM, vzhledem k hodnotám získaným pro NIH myší interferonový referenční standard.

Metoda testu pro uvolnění léčiva

Data uvolňování léčiva uvedená v příkladech uvedených dále byla získána následující metodou.

Použije se modifikovaná Franzova difusní komůrka 10 ukázaná na obr. 1. Komůrka je vyrobena ze skla a obsahuje přibližně 11 ml receptorové kapaliny v těle komůrky. Otvor těla komůrky má průměr přibližně 1,6 cm (2,0 cm² povrchové plochy). Syntetická membrána 11 (mikroporosní polyethylenový film, CoTran™9711 od 3M Company) je umístěn mezi horní částí 13 a dolní Částí 15 komůrky. Membrána je udržována v pozici pomocí Teflon^R 0-kroužku 14. Horní a dolní • · · · • * • · ·· ·· ·· ··♦ ♦·· ···< » · · · * · ♦ · * «· « ··· «·<· , , část je spojena pomocí svorky (není zobrazena) .

Část komůrky pod membránou je zcela naplněna receptorovou kapalinou (O,1M pufr obsahující octan sodný, pH 4,0), takže receptorová kapalina je v kontaktu s membránou. Receptorová kapalina se mísí pomocí magnetické míchací tyčinky 17 a magnetické míchačky (není zobrazena). S výjimkou použití je vzorkový vstup uzavřen.

Při hodnocení gelového prostředku je membrána umístěna přes otvor dolní části difusní komůrky. O-kroužek se umístí na vrch membrány. 1,50 g prostředku se umístí na vrchní část membrány a šíří se rovnoměrně po povrchu membrány, který leží uvnitř O-kroužku. Difusní komůrka se sestaví a spodní část se naplní ll ml teplé (32 ± 1 °C) receptorové kapaliny.

Vstupní otvor pro vzorek se uzavře a komůrka se umístí do inkubátoru s konstantní teplotou (32 + 1 °C) a vlhkostí (50% ± 15% relativní vlhkost). Receptorová kapalina se v průběhu pokusu míchá. Celý objem receptorové kapaliny se odstraňuje v intervalech 30, 60, 120, 240 a 360 minut a ihned se nahradí čerstvou kapalinou. Odebraná kapalina se analyzuje na obsah 4-amino-2-ethoxymethyl-a, a-dimethyl-lH-imidazo [4,5-c] chinolin-i-ethanolu za použití UV spektrofotometru vybaveného průtokovou kyvetou (1,0 cm pro gely obsahující 0,05% nebo 0,01% léčiva, 0,2 cm pro gely obsahující 0,25% léčiva) a měří se absorbance při 247 nm. Výsledky jsou uvedeny jako kumulativní množství léčiva uvolněného v 30, 60, 120, 240 a 360 minutě a jsou vyjádřeny v j ednotkách mg/cm² .

Test pro penetraci přes kůži in vitro.

Data penetrace kůží uvedená v příkladech uvedených dále • · ·«* ·«· ·«· « • · · · ···· · · Λ 9 ίο «... .... . .

byla získána následující metodou.

Použije se modifikovaná Franzova difusní komůrka 20 ukázaná na obr. 2. Použijí se dva typy kůže, kůže holých myší a kůže lidských mrtvol. Jak je uvedeno na obr. 2, kůže 22 je uchycena mezi horní část 23 a dolní část 25 komůrky, které jsou přichyceny na sebe pomocí svorky 28.

Část komůrky pod membránou je zcela naplněna receptorovou kapalinou (O,1M pufr obsahující octan sodný, pH 4,0), takže receptorová kapalina je v kontaktu s kůží. Receptorová kapalina se mísí pomocí magnetické míchací tyčinky 27 a magnetické míchačky (není zobrazena). S výjimkou použití je vzorkový vstup 29 uzavřen.

Při hodnocení gelového prostředku je kůže umístěna přes otvor dolní části difusní komůrky. 300 mg prostředku se umístí rovnoměrně na kůži. Difusní komůrka se sestaví a spodní část se naplní 10 ml teplé (32 ± 1 °C) receptorová kapaliny.

Vstup pro vzorek se uzavře a komůrka se umístí do inkubátoru s konstantní teplotou (32 + 1 °C) a vlhkostí (45% + 15% relativní vlhkost). Receptorová kapalina se v průběhu pokusu míchá. Celý objem receptorové kapaliny se odstraňuje v intervalech 3, 6, 12, 24, 48 a 72 hodin a ihned se nahradí čerstvou kapalinou. Prvních 5 ml odebrané kapaliny se filtruje přes 0,45 μ Acrodisc CRPTFE 25 mm filtr (Miltex Instrument Company, Ohio) a odstraní se.

Potom se filtruje 1 ml a umístí se do zkumavky pro kapalinovou chromatografii s vysokou rozlišovací schopností. Zkumavka se uzavře a potom se zmrazí do analýzy. Vzorek se analyzuje na obsah 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c] chinolin-1-ethanolu za použití kapalinové chromatografie s vysokou rozlišovací schopností (kolona: 15 cm x 0,46 cm Supelcosil

LC-8-DB (Supelco, INc., Bellefonte, PA, USA), velikost částic 5 μτη; mobilní fáze: acetonitril/75 mM vodný pufr obsahující fosforečnan amonný s 5 mM triethylaminem, pH 2,5, 19%/18% obj./obj.; průtok: 2,0 1/min; detektor: UV při 245 nm). Výsledky jsou uvedeny jako kumulativní množství léčiva penetrujícího v 3, 6, 12, 24, 48 a 72 hodině a jsou vyjádřeny v jednotkách ^g/ml.

Příklad 1

4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c] chinolin-1-ethanol (0,75 g) se přidá k triacetinu (272,25 g) v 600 ml skleněné kádince. Vzniklá směs se zahřívá (přibližně 55 °C) za míšení, dokud se nerozpustí veškeré léčivo. Do roztoku se přidá koloidní oxid křemičitý (27,0 g, AEROSIL^R 200 od Degussa, Frankfurt, Germany) a roztok se mísí tyčkou do dosažení smáčivého stavu. Výsledná směs se mísí ve vysokorychlostním vrtulovém mixeru, dokud se nevytvoří homogenní gel. Gel obsahuje 0,25% 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-1-ethanolu, 9,0% koloidního oxidu křemičitého a 90,75% triacetinu.

Příklad 2

Propylenglykol (20,0 g) , triacetin (343,0 g) a 4-amino-2-ethoxymethyl-α,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c] chinolin-l-ethanol (1,0 g) se umístí v 600 ml skleněné kádince a provede se zahřívání (50 °C ± 5 °C) za míšení, dokud se nerozpustí všechno léčivo. Do roztoku se přidá koloidní oxid křemičitý a roztok se mísí tyčkou do dosažení smáčivého stavu. Výsledná směs se mísí ve vysokorychlostním vrtulovém mixeru, dokud se nevytvoří homogenní gel. Gel obsahuje 0,25% 4-amino-2-ethoxymethyl-o;, a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu, 5,0% propylenglykolu, 9,0% koloidního oxidu křemičitého a 85,75% triacetinu.

Příklad 3

Propylenglykol (820,0 g) a 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl -lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol (1,0 g) se umístí v 600 ml skleněné kádince a provede se zahřívání (přibližně 50 °C) za míšení, dokud se nerozpustí léčivo. Do roztoku se přidá triacetin (283,0 g) a výsledná směs se mísí, dokud nevznikne roztok. Zahřívání se ukončí. Do roztoku se přidá koloidní oxid křemičitý (36,0 g) a roztok se mísí tyčkou do dosažení smáčivého stavu. Výsledná směs se mísí ve vysokorychlostním vrtulovém mixeru, dokud se nevytvoří homogenní gel. Gel obsahuje 0,25% 4-amino-2-ethoxymethyl-α, a-dimethyl-lH-imidazo [4,5-c] chinolin-1-ethanolu, 20,0% propylenglykolu, 9,0% koloidního oxidu křemičitého a 70,

75% triacetinu.

Gelové prostředky příkladů 1-3 se testují na schopnost indukovat tvorbu cytokinů metodou popsanou výše. Výsledky uvedené v tabulce 1, dále, demonstrují, že všechny tři prostředky vyvolávají signifikantní tvorbu interferonu a faktoru nekrosy nádorů v místě aplikace 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu. Výsledky jsou uvedeny jako průměr ± průměrná standardní odchylka od 4 jednotlivě testovaných zvířat. ND znamená neprovedeno.

Tabulka 1

Indukce cytokinů
Prostředek	Čas	Koncentrace	cytokinů
	(h)

		Pravý bok	Levý bok
		IFN	TNF	IFN	TNF
		(U/ml)	(pg/ml)	(U/ml)	(pg/ml)
1	1	346+54	699±187	86+37	273±65
1	2	215±107	496±123	106+98	344±95
2	1	277+80	340±97	127±71	163±24
2	2	210±70	61O±83	1O6±1O5	237±42
3	1	<l±0	304+39	<1+0	165±20
3	2	577±210	1138±232	105±98	454±175
neošetřeno	0	3±1	120+15	ND	ND

Příklad 4

Za použití metody příkladu 1 se připraví gel obsahující 0,05% 4-amino-2-ethoxymethyl-a,α-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin -1-ethanolu, 9,0% koloídního oxidu křemičitého a 90,95% triacetinu.

Příklad 5

Za použití metody příkladu 2 se připraví gel obsahující 0,05% 4-amino-2-ethoxymethyl-a,α-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin -l-ethanolu, 5,0% propylenglykolu, 9,0% koloídního oxidu křemičitého a 85,95% triacetinu.

Příklad 6

Za použití metody příkladu 3 se připraví gel obsahující 0,05% 4-amino-2-ethoxymethyl-a,α-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin -1-ethanolu, 20,0% propylenglykolu, 9,0% koloídního oxidu křemičitého a 70,95% triacetinu.

Gelové prostředky příkladů 4-6 se testují na schopnost indukovat tvorbu cytokinů metodou popsanou výše. Výsledky uvedené v tabulce 2, dále, demonstrují, že všechny tři prostředky vyvolávají signifikantní tvorbu interferonu a faktoru nekrosy nádorů v místě aplikace 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu. Výsledky jsou uvedeny jako průměr ± průměrná standardní odchylka od 4 jednotlivě testovaných zvířat. ND znamená neprovedeno.

Tabulka 2

Indukce cytokinů
Prostředek	Čas (h)	Koncentrace cytokinů
Pravý bok	Levý bok
IFN (U/ml)	TNF (pg/ml)	IFN (U/ml)	TNF (pg/ml)
4	1	0,9±0,5	412±105	<1,0	280±51
4	2	20±10	345±72	<1,0	153±19
5	1	0,3±0,3	348±35	<1,0	262±26
5	2	69±58	346±24	<1,0	194±19
6	1	<l±0	279±45	<1,0	170±40
6	2	43±320	260±47	<1,0	129±41
neošetřeno	0	<1,0	220±28	ND	ND

Příklad 7

Za použití metody příkladu 1 se připraví gel obsahující 0,01% 4-amino-2-ethoxymethyl-α,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin -1-ethanolu, 9,0% koloidního oxidu křemičitého a 90,99% triacetinu.

Příklad 8

Za použití metody příkladu 2 se připraví gel obsahující

0,01% 4-amino-2-ethoxymethyl-α,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin

-1-ethanolu, 5,0% propylenglykolu, 9,0% koloidního oxidu • · · ·

15· křemičitého a 85,99% triacetinu.

Příklad 9

Za použití metody příkladu 3 se připraví gel obsahující 0,01% 4-amino-2-ethoxymethyl-o;, a-dimethyl-lH-imidazo [4,5-c] chinolin -l-ethanolu, 20,0% propylenglykolu, 9,0% koloidního oxidu křemičitého a 70,99% triacetinu.

Gelové prostředky příkladů 7-9 se testují na schopnost indukovat tvorbu cytokinů metodou popsanou výše. Výsledky uvedené v tabulce 3, dále, demonstrují, že prostředek z příkladu 8 vyvolává signifikantní tvorbu faktoru nekrosy nádorů v místě aplikace 4-amino-2-ethoxymethyl-o', a-dimethyl-lH-imidazo [4,5-c] chinolin-l-ethanolu. Výsledky jsou uvedeny jako průměr + průměrná standardní odchylka od 4 jednotlivě testovaných zvířat. ND znamená neprovedeno.

Tabulka 3

Indukce cytokinů
Prostředek	Čas		Koncentrace	cytokinů
	(h)

		Pravý bok	Levý bok
		IFN		TNF	IFN	TNF
		(U/ml)		(pg/ml)	(U/ml)	(pg/ml)
7	1	<1,0		455±93	<1,0	421±63
7	2	<1,0		382±86	<1,0	398+54
8	1	<1,0		406+25	<1,0	316±31
8	2	<1, 0		296±23	<1,0	375±18
9	1	<1,0		380+43	<1, 0	352±52
9	2	<1,0		296±23	<1,0	366±56
neošetřeno	0	<1, 0		273±44	ND	ND

• · * · · · » · · » · · · ·

Příklad 10

Za použití metody příkladu 3 se připraví gel obsahující 0,25% 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin -l-ethanolu, 20,0% propylenglykolu, 8,0% koloidního oxidu křemičitého a 71,75% triacetinu.

Příklad 11

Za použití metody příkladu 3 se připraví gel obsahující 0,25% 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin -l-ethanolu, 20,0% propylenglykolu, 10,0% koloidního oxidu křemičitého a 69,75% triacetinu.

Gelové prostředky příkladů 2, 3, 5, 6, 8, 10 a 11 se testují na schopnost uvolňovat 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-1-ethanol za použití testovací metody uvedené výše. Výsledky uvedené v tabulce 4, dále, ukazují, že všech pět prostředků uvolňuje 4-amino-2-ethoxymethyl-a,adimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol. Každá hodnota je průměrem hodnot z 6 difusních komůrek.

Tabulka 4

Uvolňování léčiva
Prostředek	Kumulativní uvolněné množství (mg/cm²)
Příklad 2 Příklad 3 Příklad 5 Příklad 6 Příklad 8 Příklad 10 Příklad 11	30 min. 0,13 0,15 0,03 0,03 0,024 0,14 0,12	60 min. 0,18 0,23 0,04 0,04 0,041 0,22 0,17	120 min. 0,24 0,33 0,05 0,07 0,062 0,33 0,25	240 min. 0,41 0,50 0,09 0,12 0,091 0,58 0,45	360 min. 0,56 0,62 0,11 0,15 0,108 0,72 0,59

In vitro penetrace 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]ehinolin-1-ethanoiu přes kůži holých myší nebo přes kůži lidských mrtvol z gelového prostředku podle příkladu 3 byla určena za použití testovací metody uvedené výše. Výsledky uvedené v tabulce 5, dále, ukazují, že gel uvolňuje 4-amino-2-ethoxymethyl-α, a-dimethyl-lH-imidazo [4,5-c] ehinol in-1-ethanol do kůže a skrz kůži. Každá uvedená hodnota je průměr šesti nezávislých měření se standardní odchylkou.

Tabulka 5

Čas (h)	In vitro penetrace přes kůži
Kumulativní penetrující množství (gg/ml)
Kůže holých myší	Kůže lidských mrtvol
3 6 12 24 48 72	0,073 ± 0,08 0,147 ± 0,133 0,413 ± 0,210 1,085 ± 0,380 2,89 ±1,18 5,455 ± 3,88	0 0 0 0 0,292 ± 0,088 0,493 ± 0,158

• · · ·

Claims

Pa-terxtOAré n á. x? o 3c y

1. Gelový prostředek pro lokální podání léčiva vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství léčiva, koloidní oxid křemičitý, propylenglykol a triacetin.
2. Gelový prostředek podle nároku 1 vyznačující se tím, že koloidní oxid křemičitý je přítomen v množství přibližně 7% až přibližně 12%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
3. Gelový prostředek podle nároku 1 vyznačující se tím, že propylenglykol je přítomen v množství přibližně 1% až přibližně 30%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
4. Gelový prostředek podle nároku 1 vyznačující se tím, že propylenglykol je přítomen v množství přibližně 5% až přibližně 25%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
5. Gelový prostředek podle nároku 1 vyznačující se tím, že triacetin je přítomen v množství přibližně 58% až přibližně 92%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
6. Gelový prostředek pro lokální podání 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu vyznačující se tím, že obsahuje:

terapeuticky účinné množství 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu;

koloidní oxid křemičitý; a triacetin.
7. Gelový prostředek podle nároku 6 vyznačující se • · » · · · • ·· · ·· • · · • « · tím, že dále obsahuje propylenglykol.
8. Gelový prostředek podle nároku 6 vyznačující se tím, že 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol je přítomen v množství přibližně 0,001% až přibližně 0,6%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
9. Gelový prostředek podle nároku 6 vyznačující se tím, že 4-amino-2-ethoxymethyl-a,α-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol je přítomen v množství přibližně 0,01% až přibližně 0,5%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
10. Gelový prostředek podle nároku 6 vyznačující se tím, že 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol je rozpuštěn v gelovém prostředku.
11. Gelový prostředek podle nároku 6 vyznačující se tím, že koloidní oxid křemičitý je přítomen v množství přibližně 7% až přibližně 12%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
12. Gelový prostředek podle nároku 6 vyznačující se tím, že koloidní oxid křemičitý je přítomen v množství přibližně 8% až přibližně 10%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
13. Gelový prostředek podle nároku 6 vyznačující se tím, že triacetin je přítomen v množství přibližně 88% až přibližně 93%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
14. Gelový prostředek podle nároku 7 vyznačující se tím, že triacetin je přítomen v množství přibližně 58% až přibližně 92%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
15. Gelový prostředek pro lokální podání 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu vyznačující se tím, že obsahuje:

(a) terapeuticky účinné množství 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu;

(b) koloidní oxid křemičitý v množství přibližně 7% až přibližně 12%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředkujíc) propylenglykol v množství přibližně 1% až přibližně 30%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku; a (d) triacetin v množství přibližně 58% až přibližně 92%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
16. Gelový prostředek podle nároku 15 vyznačující se tím, že propylenglykol je přítomen v množství přibližně 5% až přibližně 25%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
17. Gelový prostředek podle nároku 15 vyznačující se tím, že 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol je přítomen v množství přibližně 0,001% až přibližně 0,6%, vzhledem k celkové hmotnosti prostředku.
18. Gelový prostředek podle nároku 15 vyznačující se tím, že obsahuje přibližně 0,05 až přibližně 0,3 hmotnostních procent 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanolu, přibližně 8 až přibližně 10 hmotnostních procent koloidního oxidu křemičitého a přibližně 90 až přibližně 92 hmotnostních procent triacetinu.
19. Gelový prostředek podle nároku 15 vyznačující se tím, že obsahuje přibližně 0,05 až přibližně 0,3 hmotnostních procent 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c] chinolin-l-ethanolu, přibližně 8 až přibližně 10 hmotnostních procent koloidního oxidu křemičitého, přibližně 15 až přibližně • r • »

25 hmotnostních procent propylenglykolu a přibližně 65 až přibližně 77 hmotnostních procent triacetinu.
20. Způsob pro lokální indukci tvorby cytokinů v kůži nebo sliznici vyznačující se tím, že na kůži nebo na sliznici savců se umístí takové množství gelového prostředku obsahuj ícího 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol, které je účinné pro indukci tvorby cytokinů.
21. Způsob pro lokální indukci tvorby interferonu v kůži nebo sliznici vyznačující se tím, že na kůži nebo na sliznici savců se umístí takové množství gelového prostředku obsahuj ícího 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol, které je účinné pro indukci tvorby interferonu.
22. Způsob pro lokální indukci tvorby faktoru nekrosy nádorů v kůži nebo sliznici vyznačující se tím, že na kůži nebo na sliznici savců se umístí takové množství gelového prostředku obsahujícího 4-amino-2-ethoxymethyl-a,a-dimethyl-lH-imidazo[4,5-c]chinolin-l-ethanol, které je účinné pro indukci tvorby faktoru nekrosy nádorů.
23. Způsob podle nároku 20 vyznačující se tím, že gelový prostředek je aplikován na kožní a/nebo slizniční leze

Wř99