CZ2000283A3

CZ2000283A3 - Prostředek pro ošetřování kůže

Info

Publication number: CZ2000283A3
Application number: CZ2000283A
Authority: CZ
Inventors: Robert George Carson; Krupa Patel; Marieann Barratt; Carol Annette Bosko; Sreekumar Pillai
Original assignee: Unilever N. V.
Priority date: 1997-07-25
Filing date: 1998-07-07
Publication date: 2000-07-12
Also published as: ID23932A; WO1999004747A2; WO1999004747A3; AU730825B2; AU8858498A; TW480178B; CN1162145C; PL338451A1; JP2001510777A; DE69815099D1; BR9810810A; CZ295608B6; CA2299458A1; CN1327380A; KR20010022170A; CA2299458C; RU2203036C2; HK1024417A1; PL193397B1; KR100514271B1

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká kosmetických prostředků obsahujících resveratrol, přirozený estrogen rostlinného původu, a kosmetických způsobů ošetřování pleti pomocí aplikace takových prostředků na kůži.

Dosavadní stav techniky

Lidská kůže se skládá ze dvou hlavních vrstev, dolní silnější vrstvy, dermis, a horní tenčí vrstvy, epidermis. Dermis je vrstva, která způsobuje pevnost, elasticitu a tloušťku kůže. S věkem se elasticita a tloušťka kůže snižuje a soudí se, že toto je jeden z důvodů tvorby vrásek na kůži ve vyšším věku. Horní vrstva lidské kůže, neboli epidermis, způsobuje odolnost kůže a tvoří barieru a je složena z mnoha různých typů buněk. Keratinocyty jsou hlavním typem buněk v epidermis (75-80% celkového počtu buněk v lidské epidermis). V epidermis existují keratinocyty ve čtyřech různých stadiích diferenciace.

Epidermální diferenciace je významná pro základní funkci kůže, konkrétně pro ochrannou barieru proti zevnímu prostředí a pro prevenci ztrát vody z těla. Tvorba zrohovatělého obalu je konečným stadiem diferenciace keratinocytu. Enzym odpovědný za tvorbu zrohovatělého obalu, transglutaminasa, je markérem epidermální diferenciace. Činidla, která zvyšují tloušťku dermis a zvyšují diferenciaci keratinocytů v epidermis by měla proto být ideálními sloučeninami pro ošetřování kůže a měla by být ideální pro bránění stárnutí kůže.

Je známo, že estrogeny a syntetické sloučeniny, které účinkují jako estrogeny, zvyšují tloušťku dermis a snižují tvorbu vrásek • · · « • · na kůži při stárnutí. Změny na kůži jako je suchost kůže, ztráta elasticity kůže a ztenčení kůže po menopause se přisuzují chybění produkce estrogenů. Terapie estrogeny brání nebo zpomaluje mnoho takových změn spojených se stárnutím kůže (Creidi et al., Effects of a conjugated oestrogen cream (Premarin¹⁵·) on aging facial skin, Maturitas, 19, str. 211-223, 1994). Syntetický estrogen, diethylstilbestrol, má následující strukturu:

Tato struktura se velmi liší od struktury přirozeného estrogenů - estradiolu:

V posledních letech jsou pro terapeutické účely stále více používány fytoestrogeny (t.j. přirozené sloučeniny s aktivitou podobnou estrogenům, které jsou rostlinného původu). Některými z popsaných použití jsou použití jako hypocholesterolemických a antiatherogenních činidel, použití v léčbě kardiovaskulární onemocnění, zejména u postmenopausálních žen, použití pro léčbu osteoporosy ve stáří a použití jako protinádorových činidel, zejména při karcinomu prsu, endometria a čípku děložního u žen • · · · (Knight et al., Phytoestrogens - a short review, Maturitas, 22: 167-175, 1995).

Zájem zákazníků o přirozené výrobky v posledních letech stoupá. Zákazníci považují chemickou syntézu za postup nebezpečný pro životní prostředí. Chemicky syntetizované přísady mohou obsahovat nevhodné chemické složky. Přirozené produkty jsou považovány za čisté a jemné a lepší než chemicky syntetizované výrobky. Nicméně, získání kosmeticky příznivě působících sloučenin z rostlin není jednoduché. Pro získání skutečného příznivě působícího prostředku z přirozeného zdroje musí být identifikována specifická aktivní složka v rostlině, které skutečně způsobuje kosmeticky příznivé účinky.

Jedním známým fytoestrogenem je fotoanetol:

Nebylo popsáno použití fotoanetolu pro lokální nebo kosmetické použití.

Předkládaný vynález je alespoň částečně založen na objevu, že resveratrol je fytoestrogen, který inhibuje proliferaci keratinocytů, zvyšuje diferenciaci keratinocytů a zmírňuje iritaci nebo dráždění potenciálně přítomné při použití a-hydroxy kyselin.

Resveratrol je sloučenina nacházená v mnoha druzích rostlin.

9 9 9 • · • 9 * ·9 » 9 9 » 9 9 » 9 9 4

9 9 9 · 9 » 9 9 » · 9 9 ► 9 9 9 9 9 » 9 9

9 9

Izolace a charakterizace resveratrolu byly popsány z mnoha druhů rostlin, jako například z kořenů Japonského truskavce (Powell et al., Phytochemistry 35: str. 335, 1994), z vinné révy a hroznů (Goldberg et al., J. Agric. Food. Chem. 43: str. 1820, 1995 a Cellotti et al., Resveratrol content of some vineš obtained from dried Valpolicella grapes: Recioto and Amarone., J. Chrom. A. (Netherlands) 730: 47-52, 1996), a z kultur podzemnice olejně (Kindl et al., U.S. patent č. 5391724). Červené hrozny a červené víno obsahují vysoká množství resveratrolu a tato sloučenina je považována za jeden z důvodů příznivého kardiovaskulárního stavu konsumentů vína. Dále, bylo zjištěno, že resveratrol je účinným protinádorovým chemopreventivním činidlem a protizánětlivým činidlem. Také bylo popsáno, že resveratrol indukuje diferenciaci lidských buněk promyelocytární leukemie (Jang et al., Cancer chemopreventive activity of resveratrol, a natural product derived from grapes, Science 275: 218-220, 1997). Jang et al. popisují použití resveratrolu jako protinádorového činidla pro karcinogenům vystavené buňky myší kůže v kultuře.

Byly popsány kosmetické prostředky obsahující extrakty z hroznů. Viz například anotaci Japonské patentové přihlášky č. 06336421 (JP 421), která popisuje použití 0,5% extraktu z hroznů v kosmetických prostředcích. Scaldifi et al., (U.S. patent

č. 5683683) a Zabotto et al. (U.S. patent č. 5439672) popisují kosmetické prostředky obsahující olej z hroznových semen. Griat et al. (U.S. patent č. 5171577) popisují kosmetické pěny obsahující jadérka. Žádná z těchto přihlášek, s výjimkou JP 421, nezmiňuje použití jakéhokoliv množství vinných hroznů.

JP421 popisuje použití 0,5% extraktu z hroznů. Podle Agricultural Research Service of the United States Department of Agriculture je koncentrace resveratrolu v hroznech okolo 15 ppm. Proto je koncentrace resveratrolu v 0,5% extraktu z hroznů 0,33 μιηοΐ nebo 0,0000075 % hmotnostních.

• · · ·

Výše uvedené publikace nepopisují použití resveratrolu pro kožní aplikaci nebo kosmetické použití, neuvádějí resveratrol jako fytoestrogen ani neuvádějí, že inhibuje proliferaci keratinocytů či že navozuje diferenciaci keratinocytů, ani neuvádějí to, že resveratrol kontroluje podráždění kůže způsobené α-hydroxy kyselinami.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález obsahuje prostředek pro ošetřování kůže obsahující resveratrol v množství od 0,00002 do 10% hmotnostních a kosmeticky přijatelné vehikulum.

Předkládaný vynález také obsahuje způsob pro zlepšení tvorby vrásek na kůži, pro zmírnění suchosti kůže, tvorby šupin na kůži, pro zlepšení stavu stárnoucí kůže nebo kůže poškozené světlem a pro zlepšení síly kůže, elesticity, flexibility, lesku, teploty a napětí kůže, který obsahuje aplikaci prostředku podle předkládaného vynálezu na kůži. Prostředky podle předkládaného vynálezu jsou určeny pro lokální aplikaci na kůži savce, která je již suchá, šupí se, má vrásky a rýhy, je stará či poškozená světlem, nebo mohou být prostředky podle předkládaného vynálezu aplikovány profylakticky na normální zdravou kůži pro prevenci nebo zabránění vzniku takových změn na kůži.

Předkládaný vynález také obsahuje kosmetické způsoby dodání estrogenní aktivity do kůže, způsoby pro inhibici proliferace keratinocytů v lidské kůži a pro zvýšení diferenciace keratinocytů. Vynález dále obsahuje kosmetický způsob pro kontrolu iritace kůže, podráždění kůže nebo kožních zánětů, které mohou být způsobeny α-hydroxy kyselinami. V tomto ohledu vynález také obsahuje kosmetický prostředek obsahující resveratrol v kombinaci s α-hydroxy kyselinou.

Resveratrol (též známý jako 5-parahydrostyrylresorcinol, nebo

3,4', 5-stilbentriol) je základní složkou prostředků podle předkládaného vynálezu. Resveratrol má následující vzorec:

»·« ·

OH

Resveratrol může být získán komerčně od Sigma.

Obecně je množství resveratrolu v prostředcích podle předkládaného vynálezu v rozmezí od 0,00002 do 10% hmotnosti prostředku. Výhodně je - pro snížení nákladů a maximalizaci účinku - množství resveratrolu v rozmezí od 0,001% do 5% a nejlépe od 0,1% do 5%.

Prostředky podle předkládaného vynálezu také obsahují kosmeticky přijatelné vehikulum, které působí v prostředku jako ředidlo, disperzní činidlo nebo nosič pro resveratrol, takže usnadňuje distribuci resveratrolu při aplikaci prostředku na kůži.

Mezi vehikula jiná než je voda patří například kapalné nebo pevné změkčovací prostředky, rozpouštědla, zvlhčovači činidla, zahušťovací činidla a prášky. Zejména výhodným nosičem jiným než voda je polydimethylsiloxan a/nebo polydimethylfenylsiloxan. Silikony podle předkládaného vynálezu mohou být ty silikony, které mají viskozitu v rozmezí od 10 do 10000000 mm²/s (centistoky) při 25 °C. Zejména výhodné jsou směsi silikonů s vysokou a nízkou viskozitou. Tyto silikony jsou dostupné od • · · ·

General Electric Company pod obchodním názvem Vicasil, SE a SF a od Dow Corning Company jako 200 a 550 serie. Množství silikonu, které může být použito v prostředcích podle předkládaného vynálezu, je v rozmezí od 5% do 95%, lépe od 25% do 90% hmotnosti prostředku.

Kosmeticky přijatelné vehikulum bude obvykle tvořit od 5% do 99.9%, lépe od 25% do 80% hmotnosti prostředku a může, za nepřítomnosti jiných kosmetických přísad, tvořit zbytek prostředku. Výhodně je vehikulem alespoň z 80% hmotnostních voda. Výhodně tvoří voda alespoň 50% hmotnostních prostředku podle předkládaného vynálezu, lépe 60 až 80% hmotnostních prostředku podle předkládaného vynálezu.

V jednom provedení předkládaného vynálezu obsahují prostředky podle předkládaného vynálezu také α-hydroxy kyselinu.

Hydroxykyseliny zvyšují proliferací a biosyntézu ceramidu v keratinocytech, zvyšují tloušťku epidermis a zvyšují deskvamaci normání kůže, což vede ke vzniku hladší kůže mladšího vzhledu.

Hydroxy-kyselina může být vybrána z α-hydroxy kyselin, β-hydroxykyselin (například kyseliny salicylové), jiných hydroxykarboxylových kyselin (například dihydroxykarboxylových kyselin, hydroxydikarboxylových kyselin, hydroxytríkarboxylových kyselin) a jejich směsí nebo kombinací jejich stereoizomerů (DL,

D nebo L).

Nejlépe obsahují prostředky podle předkládaného vynálezu obsahující resveratrol jako protidráždivé činidlo kyselinu glykolovou a/nebo kyselinu mléčnou, protože bylo zjištěno, že tyto složky mohou být dráždivě ještě před tím, než bylo zjištěno, že mají kosmeticky příznivé účinky.

• · · · • · • · « · • · · · • · » · · • · · • *·

Výhodně je hydroxy-kyselina vybrána z a-hydroxy-kyselin majících obecný vzorec (1)

OH

MCHCOOH (1) kde M je H nebo nasycený nebo nenasycený, přímý nebo rozvětvený uhlovodík obsahující od 1 do 27 atomů uhlíku.

Ještě lépe je hydroxy-kyselina vybrána ze skupiny skládající se z kyseliny mléčné, kyseliny 2-hydroxyoktanové, kyseliny hydroxylaurové, kyseliny glykolové a jejich směsí. Pokud existuje stereoizomer, pak je přednostně použit L-izomer.

Jednou výhodou prostředků podle předkládaného vynálezu je to, že může být použito velké množství hydroxy-kyseliny bez podráždění kůže. Výhodně je množství hydroxy-kyseliny v prostředcích podle předkládaného vynálezu v rozmezí od 0,01% do 20% hmotnostních, lépe od 2% do 12% a nejlépe od 4 do 12% hmotnostních.

Je třeba si uvědomit, že podle pH prostředku může být hydroxy-kyselina přítomná jako sůl, například jako amonná, draselná či sodná sůl.

Ačkoliv mohou mít prostředky podle předkládaného vynálezu jakékoliv pH v rozmezí od 2,5 do 10, jsou zejména užitečné, pokud mají kyselé pH (zejména tehdy, pokud obsahují hydroxy-kyselinu), výhodně 3-5, lépe pH 3 - 4, protože takové prostředky jsou dráždivěj ší.

Volitelné materiály s příznivým účinkem na kůži a kosmetické pomocné přísady

Může být použit olej nebo olejový materiál, spolu s emulgačním Činidlem, za vzniku emulse buď voda v oleji nebo olej ve vodě, podle průměrné hydrofilní-lipofilní rovnováhy (HLB) použitého emulgačního činidla.

Prostředky podle předkládaného vynálezu výhodně obsahují činidla pro ochranu proti slunci. Mezi činidla pro ochranu proti slunci patří ty materiály, které jsou běžně používané pro blokování ultrafialového světla. Příkladem takových sloučeniny jsou deriváty PABA, cinnamatu a salicylaty. Například může být použit oktylmethoxycinnamat a 2-hydroxy-4-methoxy-benzofenon (též známý jako oxybenzon) . Oktylmethoxycinnamat a 2-hydroxy-4-methoxy-benzofenon jsou komerčně dostupné pod obchodními názvy Parsol MCX a Benzophenone-3, v příslušném pořadí. Přesné množství činidla pro ochranu proti slunci použité v emulsích závisí na požadovaném stupni ochrany před slunečním UV zářením.

Změkčovací činidla jsou často součástí kosmetických prostředků podle předkládaného vynálezu. Taková změkčovací činidla mohou tvořit 0,5% až 50%, lépe 5% až 30% celkové hmotnosti prostředku. Změkčovací činidla mohou být rozdělena do chemických kategorií na estery, mastné kyseliny a alkoholy, polyoly a uhlovodíky.

Estery mohou být mono- či di-estery. Přijatelné příklady diesterů mastných kyselin zahrnují dibutyladipat, diethylsebaceat, diisopropyldimerat a dioktylsukcinat. Mezi přijatelné estery rozvětvených mastných kyselin patří 2-ethyl-hexyl-myristat, isopropylstearat a isostearylpalmitat. Mezi přijatelné estery tribazických kyselin patří triisopropyltrilinoleat a trilaurylcitrát. Mezi přijatelné estery přímých mastných kyselin patří laurylpalmitat, myristylaktat a ··*· ♦ · · stearyloleat. Výhodnými estery jsou koko-kaprylat/kaprat (směs koko-kaprylatu a koko-kapratu), propylenglykolmyristyletheracetat, diisopropyladipat a cetyloktanoat.

Mezi vhodné alkoholy mastných kyselin a mastné kyseliny patří ty sloučeniny, které obsahují od 10 do 20 atomů uhlíku. Zejména výhodné sloučeniny jsou cetyl, myristyl, palmityl a stearyl alkoholy a kyseliny.

Mezi polyoly, které mohou být použity jako změkčovací činidla, patří přímé a rozvětvené alkyl-polyhydroxylové sloučeniny. Výhodnými sloučeninami jsou například propylenglykol, sorbitol a glycerin. Také mohou být použity polymerické polyoly, jako je poly-propylenglykol a polyethylenglykol. Butylen a propylenglykol jsou také výhodnými činidly pro zlepšení penetrace.

Mezi uhlovodíky, které mohou být použity jako změkčovací činidla, patří ty uhlovodíky, které mají od 12 do 30 atomů uhlíku. Příklady zahrnují minerální olej, žlutou vazelínu, skvalen a isoparafiny.

Jinou třídou funkčních složek v kosmetických prostředcích podle předkládaného vynálezu jsou zahušůovací činidla.

Zahuštovací činidlo bude obvykle přítomné v množství od 0,1 do 20% hmotnosti prostředků, lépe od 0,5% do 10% hmotnosti prostředku. Příkladyzahušúovacích činidel jsou zesítěné polyakrylatové materiály dostupné pod jménem Carbopol od B.F. Goodrich Company. Mohou být použity klovatiny jako je xanthanová klovatina, karagenan, želatina, karaya, pektin a pryž z lusku rohovníku. Za určitých okolností může být zahuštění provedeno za použití materiálu, který slouží také jako změkčovací činidlo, nebo silikon. Například, silikonové pryže s viskozitou vyšší než 10 centistoke a estery jako je glycerolstearat mají dvojí funkci.

··· · • · ·· ·· • · · · * · · ♦ · • · * · · » · · • · · · ·

Do kosmetických prostředků podle předkládaného vynálezu mohou být zapracovány také prášky. Mezi tyto prášky patří křída, talek, kaolin, škrob, smektitové hlinky, chemicky modifikované křemičitany hořečnato-hlinité, organicky modifikované montmorillonitové jíly, hydratovaný křemičitan hlinitý, koloidní oxid křemičitý, aluminum-škrob-oktenylsukeinat a jejich směsi.

Do kosmetických prostředků mohou být také zapracovány další minoritní pomocné složky. Mezi takové pomocné složky patří například barviva, činidla zabraňující průniku světla a parfémy. Množství takových dalších minoritních pomocných složek může tvořit 0,001% až 20% hmotnosti prostředku.

Použití prostředků

Prostředek podle předkládaného vynálezu je určen primárně pro lokální aplikaci na lidskou kůži, zejména jako prostředek pro udržování, zvlhčování a vyhlazení kůže a jako prostředek pro zlepšení vrásek a rýh na kůži a zlepšení vzhledu kůže ve stáří.

Při použití je malé množství prostředku, například 1 až 100 ml, aplikováno na určité oblasti kůže, z vhodného zásobníku nebo aplikátoru, a - pokud je to nutné - potom je toto množství rozetřeno a/nebo vmasírováno do kůže dlaní nebo prsty nebo jiným vhodným prostředkem.

Forma prostředku a balení

Prostředek podle předkládaného vynálezu pro lokální kožní aplikaci může být připraven jako pleťové mléko, krém nebo gel. Prostředek může být balen ve vhodném zásobníku, který odpovídá jeho viskozitě a určenému použití. Například, pleťové mléko nebo krém mohou být baleny v lahvičce nebo kuličkovém aplikátoru nebo • · * · • ·.· ·«·· • ·»»· *··· * 99 999999« 9« * * 999 999« * 99 9 «· «« v aerosolovém prostředku s hnacím plynem nebo v zásobníku opatřeném pumpou vhodnou pro stlačování prstem. Pokud je prostředek ve formě krému, tak může být jednoduše uskladněn v nedeformovatelné lahvičce nebo ve vymačkávacím zásobníku, jako je tuba nebo ve sklenici s víčkem. Prostředek může být také ve formě kapslí, jako jsopu kapsle popsané v U.S. patentu č. 5063507, který je zde uveden jako odkaz. Vynález proto také obsahuje uzavřený zásobník obsahující kosmeticky přijatelný prostředek, jak je zde definován.

Následující příklady ilustrují předkládaný vynález, ale žádným způsobem ho neomezují. Ve všech příkladech byl resveratrol získán od Sigma. Pro výpočet všech p-hodnot byl použit Student t-test.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Tento příklad ukazuje, že resveratrol je fytoestrogen.

Následující test byl použit pro určení toho, zda má resveratrol estrogenní aktivitu.

ZR75 buněčná linie je buněčná linie duktálního karcinomu prsu, která byla původně izolovaná z maligního epitelu mléčné žlázy 63 leté ženy kavkazské rasy (Engel et al., Human breast carcinoma cells in continuous culture: A review., Cancer res. 38:

4327-4339, 1978). Tato buněčná linie obsahuje receptory pro estrogen, progesteron a jiné steroidní hormony, ale reaguje zvýšením proliferace pouze na estrogen. Buněčná linie obsahuje vysoce afinitní estrogenové receptory. Proto je tato buněčná linie použita pro testování estrogenní aktivity (Markiewiczet al., In vitro bioassays of non-steroidal phytoestrogens, J.

φφφ »

9 9 9 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9

Φ Φ ΦΦΦΦ ΦΦΦΦ

Φ Φ ΦΦ ΦΦΦΦΦΦφ φφ φ

ΦΦ ΦΦΦ ΦΦΦΦ

ΦΦΦΦ ΦΦ Φ ΦΦ ΦΦ

Steroid Biochem. Molec. Biol. 45:

Technika použitá pro stanovení

399-405, 1993) .

stupně syntézy DNA v buňkách.

Inkorporace ³H-thymidinu kultivovanými buňkami byla použita jako test buněčné proliferace (jak pro ZR75 buňky, tak pro keratinocyty). Thymidin je jedním ze čtyřech deoxynukleosidů, které jsou monomerními jednotkami DNA. Před buněčným dělením somatických buněk se kompletní genom buňky replikuje. Tato replikace vyžaduje rozsáhlou syntézu DNA v buňkách a umožňuje to, že obě dceřinné buňky dostanou identické kopie genetického materiálu. Pokud je v kultivačním mediu buněk syntetizujících DNA v přípravě na buněčné dělení obsažen ³H-thymidin, tak je značený thymidin inkorporován do nově syntetizované DNA. Míra inkorporace ³H-thymidinu do buněčné populace je úměrná stupni syntézy DNA v této populaci a proto odráží proliferaci buněk.

ZR75 buňky (od Amwerican Type Culture Collection, Rockville, Maryland) byly kultivovány v RPMI1640 mediu (od Gibco Life Technologies) s 10% fetálním hovězím sérem (FBS), 100 jednotkami penicilinu na ml a 100 jednotkami streptomycinu na ml. Všechny inkubace byly provedeny při 37 °C v 5% CO₂. Medium neobsahovalo fenolovou červeň (která je slabě estrogen-mimetická). Buňky byly umístěny v hustotě 1000000/zkumavka o 75 mm². Pro pokus byly buňky umístěny v 24 jamkových plotnách při koncentraci 100000 buněk na jamku.

Po 24-hodinové kultivaci bylo medium odstraněno, buňky byly promyty PBS (fosfátem pufrovaný salinický roztok, 0,01 M fosforečnan sodný, 0,138 M chlorid sodný, 0,0027 M chlorid draselný,pH 7,4) a byl přidán 1 mM RPMI1640 bez séra (ale se streptomycinem a penicilinem). Byl připraven zásobní roztok resveratrolu v dimethylsulfoxidu (DMSO) a roztok estradiolu ve • »· · vodě. Různé koncentrace resveratrolu a estradiolu, jak jsou uvedené v tabulce 1, byly potom přidány přímo do každé jamky. Po 24 hodinách byl do každé jamky přidán 1 gCi (methyl-3H)-thymidinu. Medium bylo odstraněno po 24 hodinách.

Buňky byly promyty jednou v PBS, PBS byl zcela odstraněn a buňky byly umístěny na ledu pro inkubaci s 1 ml/jamku 10% TCA (kyselina trichloroctová) po dobu 30 minut. Plotny byly promyty 3-krát 5%

TCA pro odstranění všech stop thymidinu, který nebyl inkorporován do buněk. Do každé jamky bylo přidáno 500 μΐ 0,1 M hydroxidu sodného a plotny byly inkubovány při teplotě okolí po dobu alespoň 30 minut. 250 μΐ každého vzorku bylo přeneseno do scintilačních zkumavek a po adici 5 ml kapaliny pro odečet byly zkumavky hodnoceny po dobu 5 minut na přítomnost tritia. Data ze čtyř jamek byla vypočítána jako % inkorporace thymidinu do DNA ve srovnání s kontrolními jamkami, do který nebyl přidán ani resveratrol, ani estradiol. Hodnoty jsou vyjádřeny jako průměry ze 4 jamek ± standardní odchylka.

Získané výsledky j sou shrnuty v tabulce 1.

·»· · • φ φ φ φ • · · · φ φ φ φφφφ φ φ ·

Μ ·

Φφ Φφ • Φ Φ Φ • Φ Φ · • · · ·

Φ Φ Φ φ

ΦΦ ··

Tabulka 1:

Sloučenina (μΜ)	Pokus 1 Syntéza DNA (% kontroly)	Pokus 1 p-hodnota	Pokus 2 Syntéza DNA (% kontroly)	Pokus 2 p-hodnota
Kontrola (voda)	100 ± 20,4		100 ± 1,9
Estradiol (1 nM)	220 ± 11	0,00059	133,4 ± 29	0,062
10 nM	210 ± 9,7	0,00079	152,0 ± 17,7	0,0011
100 nM	205 + 15,6	0,0016	156,0 ± 11,7	0,00008
1000 nM	190 ± 24,5	0,0068	142,0 + 18,3	0,0039
Kontrola (DMSO)	100 ± 7,0		100 ± 0,08	--
Resveratrol (0,5 μΜ)	69,7 ± 10,0		56,8 ± 4,2
1 μΜ	58,8 ± 9,0		60,5 ± 3,6
5 μΜ			158,8 ± 4,1	0,000008
10 μΜ	207,8 ± 32,5	0,0026	163,0 ± 13,7	0,00029
15 μΜ			119 + 2,5	0,00009
20 μΜ	134,8 ± 21,4	0,612	68 ± 3,9
40 μΜ	60,8 + 26,4
50 μΜ	4,1 ± 1,4

Kontrolní hodnota inkorporace ³H thymidinu pro pokus 1 byla 71513 cpm a kontrolní hodnota pro pokus 2 byla 114958 cpm.

Výsledky uvedené v tabulce 1 ukazují, že estradiol, známý estrogen, stimuluje proliferaci ZR75 buněk, jak bylo předpokládáno. Reveratrol zvyšuje proliferaci ZR75 buněk v koncentraci od 5 do 20 μΜ.

Příklad 2 ·** · • « « · *

9999 ♦ · 99

9 9 9

99

Tento příklad ukazuje, že resveratrol inhibuje proliferaci keratinocytů.

1. Normální lidské keratinocyty izolované z neonatálních předkožek pomocí trypsinového zpracování byly kultivovány v Dulbecco modifikovaném Eaglově mediu (DME)/ 5% fetálním telecím séru v přítomnosti mitomycinem C ošetřených 3T3 myších fibroblastů pro přípravu kolonií dělících se keratinocytů. Keratinocyty byly kultivovány za výše uvedených podmínek do jejich třetí pasáže.

2. Pro pokusy byly keratinocyty třetí pasáže umístěny do bezsérového keratinocytového kultivačního media (KGM, od

Clonetics, San Diego, California) obsahujícího 0,09 M vápník. Přibližně 30000 buněk bylo umístěno do každé jamky 6-jamkových kultivačních plotěn a byla provedena kultivace po dobu 5 dnů, dokud buňky nedosáhly přibližně 40% konfluence.

3. Medium bylo vyměněno za čerstvé medium (KGM, od Clonetics) a do media byl přidán resveratrol v různých koncentracích (uvedených v tabulce 2) z DMSO (dimethylsulfoxidového) zásobního roztoku. Konečná koncentrace DMSO v kulturách byla 0,1%. Do kontrolních kultur nebyl přidán žádný resveratrol, ale místo něj byl do těchto kultur přidán 0,1% DMSO. Každá koncentrace byla testována ve třech jamkách. Po 4 hodinách byl do 1 ml media v každé jamce přidán 1 μθί ³H-thymidinu (Amersham Corp., spec. aktivita 40 Ci/mmol). Buňky byly inkubovány po dobu 2 hodin. Množství ³H-thymidinu inkorporovaného do buněčné DNA keratinocytů bylo hodnoceno způsobem popsaným výše.

»er · ·· t • · · · · • · · · · · • · · ···» · 4 • · · · ·

44 • 4 9 «

4 9 4

4 9 0

44

4. Medium bylo aspirováno a jamky byly promyty 1 ml PBS. DNA a proteiny buněk na plotně byly potom vysráženy přidáním 1 ml ledově chladné 10% TCA. Plotny se nechaly stát na ledu po dobu 30 minut pro dokončení srážení. Potom byla TCA aspirována a každá jamka byla promyta 4-krát 5% TCA. Buňky v jamkách byly rozpuštěny v 0,5 ml 0,1 N hydroxidu sodného. 200 μΐ bylo potom přeneseno do scintilační zkumavky pro hodnocení inkorporace thymidinu a 25 μΐ bylo použito pro proteinový test za použití BCA činidel pro proteinový test, jak jsou popsána dále.5 ml scintilační kapaliny (Scintiverse) bylo přidáno do zbytku roztoku ve zkumavce a zkumavky byly hodnoceny scintilačním počítačem pro stanovení množství radioaktivity v každé zkumavce.

BCA (kyselina bicinchoninová) - proteinový test μΐ buněčné suspenze bylo umístěno do 96-jamkové plotny. Standardy BSA (hovězího sérového albuminu) v 0,1 N hydroxidu sodném byly také pipetovány trojmo na stejné 96-jamkové plotně. Byla přidána činidla proteinového testu (Pierce) (200 μΐ/jamku) a plotna byla inkubována podobu 2 hodin při teplotě okolí. Absorbance byla hodnocena při vlnové délce 570 nm za použití Dynatech MR7000 čtečky ploten.

Stupeň syntézy DNA byl potom stanoven jako cpm ³H-thymidinu inkorporovaného do celkové buněčné DNA/^g buněčného proteinu pro každou jednotlivou jamku. Byly také vypočítány průměry a standardní odchylky pro každou skupinu. Tyto hodnoty byly také vyjádřeny v procentech vzhledem ke kontrolním jamkám. Káždá hodnota je průměr třech jamek ± standardní odchylka.

Získané výsledky jsou shrnuty v tabulce 2.

p hodnoty menší než 0,5 byly považovány za ukazatel · » 4 • ♦ 4 • · statistické významnosti.

Tabulka 2

Resveratrol (μΜ)	Syntéza DNA (cpm/^g proteinu)	% inhibice	p hodnota
Pokus 1
0	29,52 ± 44	0	--
50	0,62 ± 0,09	98	0,012
Pokus 2
0	17,17 ± 1,21	0	--
0,78	11,57 ±1,7	33	0,053
1,56	8,89 ± 1,12	48	0,016
3,12	5,11 ± 0,27	70	0,0074
6,25	2,45 ± 0,56	86	0,0053
12,5	1,07 ± 0,11	94	0,003
25	0,58 ± 0,05	97	0,029
50	0,44 ± 0,12	97	0,028

Jak je vidět z výsledků uvedených v tabulce 2, již koncentrace 1,56 μΜ resveratrolu významně snižovaly syntézu DNA v keratinocytech. Koncentrace 1,56 μΜ resveratrolu snižuje proliferaci keratinocytů o 50%. V obou pokusech inhiboval resveratrol v koncentraci 50 μΜ zcela syntézu DNA.

Příklad 3

Příklad 2 byl opakován při různých dalších koncentracích resveratrolu. Získané výsledky jsou shrnuty v tabulce 3.

• · • · · · • · · · · • · · · · · · • · · · · • · · · ·

Tabulka 3: Účinek resveratrolu v nízkých koncentracích na vychytávání thymidinu v keratinocytech

Resveratrol (koncentrace)	Syntéza DNA (cpm/^g proteinu	% inhibice	p hodnota	Statistická významnost (při p < 0,5)
0,0 μΜ	63,4 ± 5,2	—	—	—
0,1 μΜ	60,4 ± 4,1	5	0,502	ne
0,2 μΜ	56,3 ± 3,0	12	0,079	ne
0,3 μΜ	58,8 ± 0,4	7	0,254	ne
0,4 μΜ	54,2 ± 1,2	14	0,051	ne
0,6 μΜ	59,3 ± 5,5	6	0,310	ne
0,8 μΜ	44,4 ± 2,6	30	0,00013	ano
1,0 μΜ	37,7 ± 4,0	40	<0,0001	ano
2,0 μΜ	25,7 ± 2,4	59	<0,0001	ano

Jak je vidět z výsledků uvedených v tabulce 3, není resveratrol účinný ve snížení proliferace keratinocytů v koncentracích nižších než 0,8 μΜ (nebo 0,000018 % hmotnostních), včetně velmi nízké koncentrace 0,33 μπι, která může být maximální koncentrací v 0,5% extraktu z vinných hroznů, který je popsán v JP 6336421.

Příklad 4

Tento příklad ukazuje, že resveratrol indukuje diferenciaci keratinocytů.

Způsob stanovení transglutaminasy

Během terminální diferenciace epidermis se tvoří 15 nm silná proteinová vrstva, známá jako zrohovatělý obal (CE) na vnitřním straně buněčné periferie. CE se skládá z mnoha různých proteinů, které jsou vzájemně vázány N-((-glutamyl)-lysinovými isopeptidovými vazbami katalyzovanými působením alespoň dvou různých transglutaminas exprimovaných v epidermis. Transglutaminasa (TG-1) je hojně exprimována v diferencované vrstvě epidermis, zejména v granulosové vrstvě, ale není přítomná v bazální vrstvě epidermis. Proto je TG-l užitečným markérem epidermání diferenciace keratinocytů, kdy vysoké koncentrace TG-1 ukazují na více diferencovaný stav. ELISA test na TG-l, využívající anti-TG-1 protilátky, byl použit pro hodnocení stavu diferenciace kultivovaných keratinocytů v následujícím příkladu.

Koncentrace TG-1 byla měřena následujícím způsobem. Keratinocyty byly získány způsobem popsaným v příkladu 2. Pro pokus bylo přibližně 30000 buněk umístěno do každé jamky 6-jamkových ploten a tyto buňky byly kultivovány po dobu 5 dnů, dokud nebylo dosaženo 20-30% konfluence buněk. Denně po dobu 3 dnů byly přidávány 2 ml/jamku čerstvého KGM s 2 μΐ 2-50 mM resveratrolu v DMSO. Do kontrolních jamek byly přidávány 2 μΐ DMSO. Po třech dnech byly buňky dvakrát promyty PBS a byly na dvě hodiny umístěny do chladničky. Potom se nechaly buňky roztát během 2 hodin. Obsah DNA v buňkách byl kvantifikován pomocí fluoroforu vážícího se na DNA, bis-benzimidazolu (Hoechst 33258) a měřením specifické fluorescence fluoroforu navázaného na DNA při 450 nm (excitace při 360 nm).

Koncentrace TG-1 v buňkách v jamkách byly stanoveny pomocí TG-1 specifické monoklonální protilátky (BC1) (první protilátka) (získaná od Amersham Life Sciences) a pomocí peroxidasou značeného králičího fragmentu proti myšímu IgG (druhá protilátka). Plotny byly blokovány 5% odtučněným mlékem v TBS • 9

9 · · · • · · · · • «9 99999·· • ··· ···· (Tris pufrovaný salinický roztok, 0,01 M Tris, 0,150 M chlorid sodný, pH 8,0) po dobu 1 hodiny a potom byla provedena inkubace s první protilátkou (ředění 1:4000) v 1% mléku/TBS při teplotě okolí. Po trojím propláchnutí ploten 1% mlékem/TBS obsahujícím 0,05% Tween 20 byly plotny inkubovány s druhou protilátkou (ředění 1:4000) při teplotě okolí po dobu 2 hodin. Plotny byly třikrát promyty 1% mlékem/TBS/Tween a třikrát TBS. Zabarvení bylo vyvíjeno inkubací s o-fenylendiaminem a peroxidem vodíku. Absorbance byla odečítána při 492 nm na Ultrospec 3 000 spektrofotometru (Pharmacia Biotech) a koncentrace TG-1 byly vypočítány jako Abs/DNA fluorescence. Pro výpočet a statistickou analýzu dat byl použit průměr ± standardní odchylka z alespoň 3 samostatných jamek. Hodnoty byly vyjádřeny jako absorbance pro TG-1 na arbitrážní jednotku DNA fluorescence tří jamek ± standardní odchylka. Výsledky jsou také uvedeny jako % kontroly.

Získané výsledky jsou uvedeny v tabulce 4.

• · · 9

Tabulka 4

Resveratrol (μΜ)	Koncentrace TG-1/ μ<3 DNA	% kontroly	ρ hodnota
Pokus 1
0 μΜ	6,74 ± 0,79	—	—
10 μΜ	8,49 ± 1,77	126	0,1195
25 μΜ	10,22 ± 2,29	162	0,0008
50 μΜ	22,2 ± 1,50	329	0,0001
Pokus 2
0 μΜ	1,91 ± 0,03	—	—
2 μΜ	3,42 ± 0,42	179	<0,0001
5 μΜ	3,51 ± 0,41	184	<0,0001
10 μΜ	3,61 ± 0,17	189	<0,0001
25 μΜ	4,69 ± 0,21	246	<0,0001
50 μΜ	4,65 ± 0,46	243	<0,0001

μΜ resveratrolu se významně nelišilo od kontroly v pokusu 1 z důvodů běžných experimentálních variací v biologických systémech, ale všechny ostatní koncentrace statisticky významně zvyšovaly expresi transglutaminasy v keratinocytech, což je důkazem, že resveratrol zvyšuje diferenciaci keratinocytů. V pokus 2 všechny koncentrace resveratrolu od 2 μΜ výše významně zvyšovaly diferenciaci keratinocytů.

Příklad 5

Tento příklad ukazuje, že resveratrol zmírňuje zánětlivou reakci kůže, která může být způsobena α-hydroxy kyselinami.

· ·♦· · ·

Resveratrol je známým inhibitorem cyklo-oxygenasy. Inhibice cyklooxygenasy redukuje konversi kyseliny arachidonové na prozánětlivé substance jako jsou prostaglandiny, včetně PGE2. Ačkoliv se dá předpokládat, že inhibice cyklooxygenasy bude redukovat zánětlivou reakci, ne všechny inhibitory cyklooxygenasy redukují zánětlivou reakci spojenou s aplikací kosmetických přísad, jako jsou α-hydroxy-kyseliny.

Příklad 5A

Testování podrážděním:

Náplasčový test obsahující čtyři aplikace: Cílem testu bylo srovnání podráždění vyvolaného různými testovanými materiály při opakované aplikaci náplasti. Testované materiály byly udržovány v kontaktu s kůží za neprodyšných podmínek. Zevní strana horní končetiny účastníků testu byla označena jako oblast aplikace. Pro udržování náplastí v pozici byl použit obvaz (Scanpor páska) (25 mm Hill Top chamber opatřený diskem o průměru 18 mm z Webril vaty). Byly použity obě horní končetiny účastníků. Náplasti byly aplikovány v náhodném pořadí.

Náplasti byly aplikovány v 9,00 v pondělí a byly odstraněny v 9,00 v úterý (24 hodinové působení). Nová sada náplastí byla aplikována ve 15,00 v úterý a tyto náplasti byly odstraněny v 9,00 ve středu (18-hodinové působení). Třetí sada náplastí se aplikovala ve 15,00 ve středu a tyto náplasti se odstranily v 9,00 ve čtvrtek (18-hodinové působení). Poslední sada náplastí se aplikovala v 15,00 ve čtvrtek a tato sada se odstranila v 9,00 v pátek (18-hodinové působení).

Po každém odstranění náplastí bylo místo aplikace opláchnuto teplou vodou a vysušeno vatou. Potom byla testovaná místa • · · · ♦ ♦ φ • · • · φ φ · φφφ» • ·· ······· φ · · • φφφ φφφφ • « φφ · φφφφ označena chirurgickým perem po zajištění správné lokalizace pro hodnocení a pro další aplikaci. Testovaná místa byla hodnocena v 15,00 v úterý, středu, čtvrtek a pátek během studie, před aplikací dalších náplastí.

Bylo očekáváno podráždění kůže jako je střední začervenání, suchost a/nebo svědění v oblasti testovaných míst. Otok v místě aplikace byl považován za možný. Pokud bylo na jakémkoliv testovaném místě zjištěno zarudnutí nebo otok při jakémkoliv hodnocení, tak na toto místo nebyla aplikována další náplast.

Testovaná místa na každé končetině byla vizuálně hodnocena dvěma výzkumníky za stálých světelných podmínek. Hodnocení bylo provedeno podle závažnosti nálezu. Výzkumník vyšetřující místo při prvním hodnocení hodnotil toto místo v průběhu celé studie.

Při hodnocení reakcí mělo místo s nej těžší reakcí nejnižší skoré. Místo s druhou nej těžší reakcí mělo druhé nejnižší skoré, atd.. Nebylo provedeno další podrobnější skorování. Pokud neměla dvě místa žádnou reakci nebo měla stejnou reakci (nebyl rozdíl mezi místy), tak bylo přiřazeno průměrné skoré. Pokud nebylo místo dále hodnoceno z důvodů podráždění, tak bylo dále u tohoto místa uváděno skoré z doby přerušení.

Statistická analýza

Výsledky z aplikace náplastí byly statisticky srovnávány neparametrickými statistickými metodami. Testované materiály obsahující proti-dráždivá činidla byly srovnávány s příslušnými kontrolami obsahujícími pouze hydroxy-kyselinu, za použití Friedmanova Rank Sum při každém hodnocení s účastníkem jako blokem (t.j. každý účastník byl testován s každým testovaným materiálem). P-hodnota menší než 0,10 byla považována za statisticky významnou.

Prostředky obsahující složky uvedené v tabulce 5A byly testovány za použití testu na podráždění. Bylo testováno 20 jedinců. Získané výsledky jsou shrnuty v tabulce 5A. Vyšší součet skoré znamená menší podráždění.

Základní materiál

Chemický název nebo Obchodní název CFTA název % aktivní složky (hmotností)

voda, DI		46,54
Na EDTA 2	Sequesterene Na2	0,05
křemičitan hořečnato-	Veegum Ultra	0,6
hlinitý
methylparaben	Methyl Paraben	0,15
simethicon	DC Antifoam Emulsion	0,01
butylenglykol 1,3	Butylen Glycol 1,3	3,0
hydroethylcelulosa	Natrosol 250 HHR	0,5
glycerin, USP	Glycerin, USP	2,0
xanthanová klovatina	Keltrol 1000	0,2
triethanolamin	Triethanolamin 99 (%)	1,2
kyselina stearová	Pristeren 4911	3,0
propylparaben NF	Propylparaben NF	0,1
glycerylhydrostearat	Naturechem GMSH	1,5
stearyl alkohol	Lanette 18 DEO	1,5
isostearylpalmitat	Protachem ISP	6,0
C12-15 alkohol-oktanoat	Hetester FAO	3,0
dimethicon	Silicone Fluid 200 (50	Ct) 1,0
cholesterol, NF	Cholesterol, NF	0,5
sorbitan stearat	Sorbitan Stearat	1,0
butylovaný hydroxytoluen	Embanox BHT	0,05

• ·· · • ·

Chemický název nebo CFTA název	Obchodní název	% aktivní složky (hmotností)
tokoferylacetat	Vitamin E Acetát	0,1
PEG-100 stearat	MYRJ 59	2,0
laktylat stearoyl sodný	Pationic SSL	0,5
retinyl palmitat	Vit. A Palmitate	84% 0,06
kyselina	Hydroxy Caprylic	Acid 0,1
hydroxykapry1ová
voda, DI		q. s . 99,80
a-bisabolol	Alpha-bisabolol	0,2
pH		7-8

Tabulka 5A

Prostředek	Složení	Součet skoré (den 1)	Součet skoré (den 4)
1	Základní materiál	65,5	79,5
2	Základní materiál + 8% kyselina glykolová	63	72
3	Prostředek 2 + 0,1% resveratrol	85*	66

* významně méně dráždivý než prostředek 2.

Jak je vidět z výsledků uvedených v tabulce 5A, resveratrol (prostředek 3) významně snižuje podráždění indukované prostředkem 2 (obsahujícím 8% kyselinu glykolovou) v den 1 po zahájení aplikace prostředku 2.

Srovnávací příklad 5B

Prostředky obsahující složky uvedené v tabulce 5B byly • · · · • · testovány za použití testu na podráždění, který byl popsán v příkladu 5A. Bylo testováno 22 jedinců. Získané výsledky jsou shrnuty v tabulce 5B. Vyšší součet skoré znamená menší podráždění.

Tabulka 5B

Prostředek	Složení	Součet skoré (den 1)	Součet skoré (den 4)
1	Základní materiál	81	90,5
2	Základní materiál + 8% kyselina glykolová	75	73,5
4	Prostředek 2 + 5% ibuprofen	71,5	65,5

Jak je vidět z výsledků uvedených v tabulce 5B, ibuprofen, známé protizánětlivé činidlo (prostředek 4) neredukoval podráždění způsobené prostředkem obsahujícím 8% kyselinu glykolovou (prostředek 2) .

Srovnávací příklad 5C

Prostředky obsahující složky uvedené v tabulce 5C byly testovány za použití testu na podráždění, který byl popsán v příkladu 5A. Bylo testováno 19 jedinců. Získané výsledky jsou shrnuty v tabulce 5C. Vyšší součet skoré znamená menší podráždění.

* 9 9 9

9 9 9

99

Tabulka 5C

Prostředek	Složení	Součet skoré (den 1)	Součet skoré (den 4)
2	Základní materiál + 8% kyselina glykolová	70	62,5
5	Prostředek 2 + 1% indometacin	53,5	52,5

Jak je vidět z výsledků uvedených v tabulce 5C, indometacin, známý inhibitor cyklooxygenasy a protizánětlivé činidlo (prostředek 5) neredukoval podráždění způsobené prostředkem obsahujícím 8% kyselinu glykolovou (prostředek 2).

Příklady 6-11 ilustrují prostředky pro ošetřování kůže podle předkládaného vynálezu. Tyto prostředky mohou být vyrobeny běžným způsobem. Tyto prostředky jsou vhodné pro kosmetické použití. Konkrétně jsou tyto prostředky vhodné pro aplikaci na vrásčitou, rýhovanou, hrubou, suchou, supící se, starou a/nebo UV zářením poškozenou kůži, za účelem zlepšení vzhledu kůže a pocitu, a stejně tak jsou vhodné pro aplikaci na zdravou kůži pro prevenci nebo zpomalení zhoršení stavu takové kůže. Prostředky jsou také vhodné pro redukci zánětu, podráždění nebo iritace, které jsou spojeny s použitím α-hydroxy-kyselin.

Příklad 6

Tento příklad ukazuje emulsy voda v oleji s vysokou vnitřní fází podle předkládaného vynálezu.

• ·· · • · · • * · · • · · · · • · · · ···· • · · · * ·· · • · · 9 • 9 9 9 • 9 9 · • · · · • · 99 % hmot./hmot.

Resveratrol	0,5
1,3-dimethyl-2 -imidazolidinon	0,2
Brij 92*	5,0
Bentone 38	0,5
MgSO₄ 7 H_zO	0,3
Butylovaný hydroxytoluen	0,01
Parfém	q.s.
Voda	do 100

* Brij 92 je oleyl ester polyoxyethylenu (2)

Příklad 7

Tento příklad ukazuje krém olej ve vodě podle předkládaného vynálezu.

% hmot./hmot.

Resveratrol 2,0

Kyselina glykolová 8,0

Minerální olej 4,0

1,3-dimethyl-2-imidazolidinon 1,0

Brij 56* 4,0

AlfOl 16RD* 4,0

Triethanolamin 0,75

Butan-1,3-diol 3,0

Xanthanová klovatina 0,3

Parfém q.s.

Butylovaný hydroxytoluen 0,01

Voda do 100

Brij 56 je cetylalkohol POE (10) ; Alfol 16RD je cetylalkohol ···· • φ · φ · φ · φ φ φφφφ φφφφ • φφ ΦΦΦΦ··· ·· · • ··· ···· φ φφ φ ·♦ ··

Příklad 8

Tento příklad ukazuje alkoholovou pleťovou vodu podle předkládaného vynálezu.

% hmot./hmot.
Resveratrol	5,0
1,3-dimethyl-2-imidazolidinon	0,1
Ethanol	40,0
Parfém	q.s.
Butylováný hydroxytoluen	0,01
Voda	do 100
Příklad 9
Tento příklad ukazuje jinou	alkoholovou pleťovou vodu ]
předkládaného vynálezu.

% hmot./hmot.

Resveratrol		10,0
1,3-dimethyl-	2 -imidazolidinon	0,01
Ethanol		40,0
Antioxidační	činidlo	0,1
Parfém		q.s.
Voda		do 100

φφφφ φφ • * · · φ · · φ φ φφφφ φφφφ φ φφ φφφφφφφ φφ φ • φφφ φφφφ • · φφ φ φφ φφ

Příklad 10

Tento příklad ukazuje sluneční krém podle předkládaného vynálezu.

% hmot./hmot.
Resveratrol	2,0
1,3-dimethyl-2-imidazolidinon	0,2
Silikonový olej 200 cts	7,5
Glycerylmonostearat	3,0
Cetosteryl alkohol	1,6
Polyoxyethylen-(20)-cetyl	1,4
alkohol
Xanthanová klovatina	0,5
Parsol 1789	1,5
Oktylmethoxycinnat (Parsol MCX)	7,0
Parfém	q.S.
Barvivo	q.S.
Voda	do 100

94 9

4 49 ··

4 9 4 9 9 4 4

9 4 4 4 9 9 4 4

9 4 9 4444 4 4 4 4 4

4 9 4 4 4 9 4

99 4 49 49

Příklad 11

Tento příklad ukazuje non-vodný prostředek pro péči o pleť podle předkládaného vynálezu.

	% hmot./hmot.
Resveratrol	5,0
1,3-dimethyl-2-imidazolidinon	1,0
Silikonová pryž SE-30^	10,0
Silikonová kapalina 345^{1 2}	20,0
Silikonová kapalina 344³	50,26
Skvalen	10,0
Kyselina linoleová	0,01
Cholesterol	0,03
Kyselina 2-hydroxy-n-oktanová	0,7
Vitamin E linoleat	0,5
Rostlinný olej	0,5
Ethanol	2,0

¹ Dimethyl-silikonový polymer mající molekulovou hmotnost alespoň 50000 a viskozitu alespoň 10000 centistoke při 25 °C, dostupný od GEC ² Dimethylsiloxanový cyklický pentamer, dostupný od Dow Corning Corp.

³ Dimethylsiloxanový tetramer, dostupný od Dow Corning Corp.

Claims

n sl r o Jc y

1. Prostředek pro ošetřování kůže vyznačující se tím, že obsahuje (a) resveratrol v množství od 0,00002 do 10% hmotnostních;

(b) hydroxy-kyselinu v množství od 0,01% do 20%; a (c) kosmeticky přijatelný nosič.
2. Prostředek podle nároku lvyznačující se tím, že množství hydroxy-kyseliny je od 2% do 12%.
3. Prostředek pro ošetřování kůže podle jakéhokoliv z nároků 1 nebo 2 vyznačující se tím, žepH prostředku je od 3 do 5.
4. Kosmetický způsob pro zlepšení nebo prevenci vzniku vrásčité, rýhované, suché, šupící se a staré kůže a pro zlepšení tloušťky, elasticity, flexibility, napětí a teploty kůže vyznačující se tím, že obsahuje aplikaci prostředku obsahujícího resveratrol v množství od 0,00002 do 10% hmotnosti prostředku a kosmeticky přijatelný nosič na kůži.