CZ2002212A3 - Varianty subtilisinové proteasy mající aminokyselinové substituce v definovaných epitopových oblastech - Google Patents
Varianty subtilisinové proteasy mající aminokyselinové substituce v definovaných epitopových oblastech Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2002212A3 CZ2002212A3 CZ2002212A CZ2002212A CZ2002212A3 CZ 2002212 A3 CZ2002212 A3 CZ 2002212A3 CZ 2002212 A CZ2002212 A CZ 2002212A CZ 2002212 A CZ2002212 A CZ 2002212A CZ 2002212 A3 CZ2002212 A3 CZ 2002212A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- amino acid
- phe
- tyr
- asp
- trp
- Prior art date
Links
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 title claims abstract description 628
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 title claims abstract description 613
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 title description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 94
- 102100038946 Proprotein convertase subtilisin/kexin type 6 Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 22
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 claims description 18
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 claims description 18
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 14
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 claims description 8
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 claims description 8
- 101710135785 Subtilisin-like protease Proteins 0.000 claims description 7
- 239000012459 cleaning agent Substances 0.000 claims description 7
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 7
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 claims 1
- 108010020132 microbial serine proteinases Proteins 0.000 claims 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract description 44
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 abstract description 27
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 abstract description 26
- 239000004365 Protease Substances 0.000 abstract description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 22
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 6
- 108700037663 Subtilisin-like proteases Proteins 0.000 abstract description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 302
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 296
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 279
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 268
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 268
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 268
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 267
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 265
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 265
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 264
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 260
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 257
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 255
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 246
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 245
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 245
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 236
- -1 His Chemical compound 0.000 description 93
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 64
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 22
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 description 21
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 19
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 18
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 18
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 12
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 238000004851 dishwashing Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 6
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 5
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 5
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 4
- 229940031012 anti-acne preparations Drugs 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000551 dentifrice Substances 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 102220496133 5-hydroxytryptamine receptor 3B_G70V_mutation Human genes 0.000 description 3
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 3
- 229920000289 Polyquaternium Polymers 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 101710174704 Subtilisin-like serine protease Proteins 0.000 description 3
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 3
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 239000000882 contact lens solution Substances 0.000 description 3
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 description 3
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 3
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 3
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 3
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 3
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 3
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- WCOXQTXVACYMLM-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(12-hydroxyoctadecanoyloxy)propyl 12-hydroxyoctadecanoate Chemical compound CCCCCCC(O)CCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCC(O)CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCC(O)CCCCCC WCOXQTXVACYMLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010027805 Azocoll Proteins 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 150000004996 alkyl benzenes Chemical class 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229940116224 behenate Drugs 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- WSDISUOETYTPRL-UHFFFAOYSA-N dmdm hydantoin Chemical compound CC1(C)N(CO)C(=O)N(CO)C1=O WSDISUOETYTPRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- UZABCLFSICXBCM-UHFFFAOYSA-N ethoxy hydrogen sulfate Chemical class CCOOS(O)(=O)=O UZABCLFSICXBCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 150000004688 heptahydrates Chemical class 0.000 description 2
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 2
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 229940079842 sodium cumenesulfonate Drugs 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229940057950 sodium laureth sulfate Drugs 0.000 description 2
- SXHLENDCVBIJFO-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOS([O-])(=O)=O SXHLENDCVBIJFO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QEKATQBVVAZOAY-UHFFFAOYSA-M sodium;4-propan-2-ylbenzenesulfonate Chemical compound [Na+].CC(C)C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 QEKATQBVVAZOAY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 2
- 229940057400 trihydroxystearin Drugs 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N (+)-propylene glycol Chemical compound C[C@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 1,3-propanediol Substances OCCCO YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CUVLMZNMSPJDON-UHFFFAOYSA-N 1-(1-butoxypropan-2-yloxy)propan-2-ol Chemical compound CCCCOCC(C)OCC(C)O CUVLMZNMSPJDON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWNUSVWFHDHRCJ-UHFFFAOYSA-N 1-butoxypropan-2-ol Chemical compound CCCCOCC(C)O RWNUSVWFHDHRCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JCTXKRPTIMZBJT-UHFFFAOYSA-N 2,2,4-trimethylpentane-1,3-diol Chemical compound CC(C)C(O)C(C)(C)CO JCTXKRPTIMZBJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFPOJWPDQWJEMO-UHFFFAOYSA-N 2-(1,2-dicarboxyethoxy)butanedioic acid Chemical class OC(=O)CC(C(O)=O)OC(C(O)=O)CC(O)=O CFPOJWPDQWJEMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZMAAYIALGURDQ-UHFFFAOYSA-N 2-(2-hexoxyethoxy)ethanol Chemical compound CCCCCCOCCOCCO GZMAAYIALGURDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWLALWYNXFYRGW-UHFFFAOYSA-N 2-Ethyl-1,3-hexanediol Chemical compound CCCC(O)C(CC)CO RWLALWYNXFYRGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POAOYUHQDCAZBD-UHFFFAOYSA-N 2-butoxyethanol Chemical compound CCCCOCCO POAOYUHQDCAZBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OARDBPIZDHVTCK-UHFFFAOYSA-N 2-butyloctanoic acid Chemical compound CCCCCCC(C(O)=O)CCCC OARDBPIZDHVTCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UPGSWASWQBLSKZ-UHFFFAOYSA-N 2-hexoxyethanol Chemical compound CCCCCCOCCO UPGSWASWQBLSKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 2-methylbutyric acid Chemical compound CCC(C)C(O)=O WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000193375 Bacillus alcalophilus Species 0.000 description 1
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 1
- 241000193422 Bacillus lentus Species 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CBOCVOKPQGJKKJ-UHFFFAOYSA-L Calcium formate Chemical compound [Ca+2].[O-]C=O.[O-]C=O CBOCVOKPQGJKKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 1
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 description 1
- SNPLKNRPJHDVJA-ZETCQYMHSA-N D-panthenol Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCCO SNPLKNRPJHDVJA-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 235000004866 D-panthenol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011703 D-panthenol Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 101001135770 Homo sapiens Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 101001135995 Homo sapiens Probable peptidyl-tRNA hydrolase Proteins 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000288147 Meleagris gallopavo Species 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000006057 Non-nutritive feed additive Substances 0.000 description 1
- 229920002292 Nylon 6 Polymers 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 239000004280 Sodium formate Substances 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N Triclosan Chemical compound OC1=CC(Cl)=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- LSTDYDRCKUBPDI-UHFFFAOYSA-N acetic acid cetyl ester Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCOC(C)=O LSTDYDRCKUBPDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000987 azo dye Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019255 calcium formate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004281 calcium formate Substances 0.000 description 1
- 229940044172 calcium formate Drugs 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229940082484 carbomer-934 Drugs 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- 108010079058 casein hydrolysate Proteins 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940049297 cetyl acetate Drugs 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000571 coke Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N decan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCO MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960003949 dexpanthenol Drugs 0.000 description 1
- 229940028356 diethylene glycol monobutyl ether Drugs 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N dodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCO LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000007938 effervescent tablet Substances 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000002979 fabric softener Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940075529 glyceryl stearate Drugs 0.000 description 1
- 229940100242 glycol stearate Drugs 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- GKKMCECQQIKAHA-UHFFFAOYSA-N hexadecyl dihydrogen phosphate;2-(2-hydroxyethylamino)ethanol Chemical compound OCCNCCO.CCCCCCCCCCCCCCCCOP(O)(O)=O GKKMCECQQIKAHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIRDTKBZINWQAW-UHFFFAOYSA-N hexaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCOCCO IIRDTKBZINWQAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000058004 human PTH Human genes 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 239000003752 hydrotrope Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 229940060367 inert ingredients Drugs 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229940015418 ketaset Drugs 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- FDSIFWDGJSJXMP-UHFFFAOYSA-N methyl 3-methyl-5-(5-methyl-1,2-oxazol-3-yl)-1,2-oxazole-4-carboxylate Chemical compound CC1=NOC(C2=NOC(C)=C2)=C1C(=O)OC FDSIFWDGJSJXMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- SAOSCTYRONNFTC-UHFFFAOYSA-N methyl-capric acid Natural products CCCCCCCCC(C)C(O)=O SAOSCTYRONNFTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IZXGZAJMDLJLMF-UHFFFAOYSA-N methylaminomethanol Chemical compound CNCO IZXGZAJMDLJLMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- CQDGTJPVBWZJAZ-UHFFFAOYSA-N monoethyl carbonate Chemical class CCOC(O)=O CQDGTJPVBWZJAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002324 mouth wash Substances 0.000 description 1
- HLERILKGMXJNBU-UHFFFAOYSA-N norvaline betaine Chemical compound CCCC(C([O-])=O)[N+](C)(C)C HLERILKGMXJNBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002601 oligoester Polymers 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- JCGNDDUYTRNOFT-UHFFFAOYSA-N oxolane-2,4-dione Chemical compound O=C1COC(=O)C1 JCGNDDUYTRNOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N phosphoramidic acid Chemical class NP(O)(O)=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920005646 polycarboxylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000059 polyethylene glycol stearate Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229920000166 polytrimethylene carbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 150000003138 primary alcohols Chemical class 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002572 propoxy group Chemical group [*]OC([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002940 repellent Effects 0.000 description 1
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 229940069575 rompun Drugs 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 229910021647 smectite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- BTURAGWYSMTVOW-UHFFFAOYSA-M sodium dodecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC([O-])=O BTURAGWYSMTVOW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HLBBKKJFGFRGMU-UHFFFAOYSA-M sodium formate Chemical compound [Na+].[O-]C=O HLBBKKJFGFRGMU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019254 sodium formate Nutrition 0.000 description 1
- 229940082004 sodium laurate Drugs 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940074404 sodium succinate Drugs 0.000 description 1
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- FAGUFWYHJQFNRV-UHFFFAOYSA-N tetraethylenepentamine Chemical class NCCNCCNCCNCCN FAGUFWYHJQFNRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000000606 toothpaste Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 229960003500 triclosan Drugs 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical class [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
- QYEFBJRXKKSABU-UHFFFAOYSA-N xylazine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 QYEFBJRXKKSABU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
- C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Oblast techniky
Tento vynález se (subtili sinových genovým inženýrstvím, jež jsou užitečné jsou například prostředky péče o tělo, prostředky k čištění pevných povrchů prostředky.
proteas pozměněných v prostředcích^ jako prací prostředky, a jemné čistící
Dosavadní stav techni kv
Enzymy tvoří největší třídu přirozeně se vyskytujících bílkovin. Jedna třída enzymů zahrnuje proteasy, jež katalysují hydrolysu jiných bílkovin. Schopnost hydrolyzovat bílkoviny byla využita zahrnutím přirozeně se vyskytujících a genovým inženýrstvím pozměněných proteas do čistících prostředků, obzvláště těch, co jsou relevantní pro prací aplikace.
Nej šíře používanými z těchto proteas jsou v oboru čištění serinové proteasy. většina z těchto serinových proteas je produkována bakteriálními organismy, zatímco některé jsou produkovány jinými organismy, jako jsou houby, viz siezen, Ronald J. et al. „Homology Modelling and Protein Engineering Stratégy of Subtilases, the Family of Subtilisin-Like Serine Proteases“, Protein Engineering, sv. 4, č. 7, str. 719-737 (1991). Bohužel, účinnost proteas divokého typu v jejich přirozeném prostředí často není optimalizována pro umělé prostředí čistícího prostředku. Konkrétně nejsou pro použití mimo přirozené prostředí enzymu nutně optimalizovány proteasové charakteristiky, jako jsou například tepelná stabilita, pH stabilita, oxidativní stabilita a substrátová spéci fita.
S cílem zvýšit účinnost proteasy v nepřirozeném mycím/pracím prostředí se použilo několik přístupů ke změně aminokyselinové sekvence divokého typu serinové proteasy. Tyto • · přístupy zahrnovaly nový genový design pro zvýšení tepelné stability a zlepšení oxidační stability za poměrně různorodých podmínek.
Protože však takto modifikované proteasy jsou pro savce cizí, jsou potenciálními antigeny. Jako antigeny způsobují tyto proteasy u savců imunogenní nebo alergenní odezvy (zde hromadně popisované jako imunogenní odezvy).
Dále: Zatímco genové inženýrství bylo prominentní složkou trvajícího vyhledávání vysoce účinných proteas pro použití v pracích aplikacích, proteasy pocházející z genového inženýrství nebyly komerčně využity v prostředcích péče o tělo nebo jemných detergentů. Prvotným důvodem pro absenci použití proteas pocházejících z genového inženýrství v produktech, jakými jsou například gely, tělové šampony, a vlasové šampony, byl problém zcitlivění osob vedoucí k nežádoucím imunologickým odezvám. Bylo by proto vysoce výhodné poskytovat prostředek péče o tělo nebo jemný detergent, jež by poskytovaly čistící vlastnosti proteasy z genového inženýrství s minimalizovaným vyvoláváním imunologické odezvy.
Jedna cesta ke zmírnění imunologické aktivity proteasy vede přes nový design jednoho nebo více epitopů proteasy. Epitopy jsou ty aminokyselinové oblasti antigenu, jež vyvolávají imunologickou odezvu prostřednictvím vazby protilátek nebo presentace zpracovaného antigenu T buňkám přes bílkovinu hlavního histokompatibilitního komplexu (MHC). změny v epitopu mohou ovlivňovat jeho účinnost jako antigenu. viz Walsh, B. J. a Μ. E. H. Howden, „A Method for the Detection of igE Binding Sequences of Allergens Based on a Modification Epitope Mapping“, Journal of Immunological Methods, sv. 121, str. 275 - 280 (1989).
Předkladatelé objevili, že serinové proteasy běžně známé jako subtilisiny, včetně subtilisinu BNP', mají prominentní epitopové oblasti u aminokyselinových posic 103 - 126 a 220 246, jakož i u aminokyselinových posic 70 - 84 odpovídajících subtilisinu BNP'. Předkladatelé zde nově geneticky designovali takovéto subtilisiny ke zmírnění imunogenních odezev připisovaných této epitopové oblasti. Předkladatelé přitom objevili subtilisiny, jež vyvolávají sníženou imunologickou • · • · odezvu, ale udržují svou aktivitu jako účinná čistící proteasa. v souladu s tím jsou takovéto proteasy vhodné k použití v různých typech prostředků včetně, ale bez omezení, v pracích prostředcích, prostředcích k mytí nádobí, pevných povrchů, prostředcích péče o kůži, vlasy, v krášlících prostředcích, prostředcích ústní hygieny a péče o kontaktní čočky.
Podstata vynálezu
Tento vynález se týká variant serinových proteas majících sníženou imunogenicitu ve srovnání s odpovídajícími proteasami divokého typu. Konkrétněji se vynález týká variant majících aminokyselinové sekvence divokého typu modifikované, přičemž modifikovaná aminokyselinová sekvence zahrnuje substituci jedné nebo více epitopových oblastí, kde epitopovými oblastmi jsou 103 - 126 a 220 - 246 odpovídající subtilisinu bnp'. Navíc se vynález týká modifikovaných aminokyselinových sekvencí obsahujících jednu nebo více substitucí ve dvou nebo více epitopových oblastech, kde epitopovými oblastmi jsou 70 84, 103 - 126 a 220 - 246 odpovídající subtilisinu BNP'. Vynález se dále týká mutantních genů kódujících takovéto varianty a čistících prostředků a prostředků péče o tělo obsahujících takovéto varianty.
Podrobný popis vynálezu
Podstatné složky vynálezu jsou zde popsány níže. zahrnuty jsou rovněž neomezující popisy různých případných a výhodných složek užitečných v provedeních vynálezu.
Vynález se může skládat, nebo se může v podstatě skládat z kterýchkoli požadovaných nebo případných složek nebo omezení zde popsaných nebo je zahrnovat.
Všechna procenta a poměry jsou počítány podle hmotnosti pokud se neuvádí jinak. Všechna procenta jsou počítána podle úplného prostředku pokud se neuvádí jinak.
• · • · • · · • · · · • · · · · • · · všechny hladiny složky nebo prostředku jsou s odkazem k aktivní hladině této složky nebo prostředku, a nezahrnují nečistoty, například zbytková rozpouštědla nebo vedlejší produkty, jež mohou být přítomné v komerčně dostupných produktech.
Všechny dokumenty, na něž se zde odkazuje, včetně všech patentů, patentových přihlášek a tištěných publikací, jsou zde v úplnosti zahrnuty odkazem.
Jak se zde používá, k popisu aminokyselin jsou použity zkratky. Tabulka I poskytuje seznam zde použitých zkratek:
Tabulka I
| Aminokyselina | Tří písmenková zkratka | Jednopísměnková zkratka |
| Alanin | Ala | A |
| Arginin | Arg | R |
| Asparagin | Asn | N |
| Kys. asparagová | Asp | D |
| Cystei n | Cys | C |
| Glutamin | Glň | Q |
| Kys. glutamová | ČTii | E |
| Glycin | G | |
| Histidin | His | H |
| isoleucin | Ile | I |
| Leucin | Leu | L |
| Lysin | Lys | K |
| Methionin | Met | M |
| Feny! alanin | pfiě | F |
| Prolin | pro | P |
| Serin | Ser | S |
| Threonin | ŤEr | T |
| Tryptofan | Trp | w |
| Tyrosi n | Tyr | Y |
| Val i n | Val | v |
Definice
Jak se zde používá, výraz „mutace“ odkazuje na změnu v sekvenci genu nebo v aminokyselinové sekvenci produkované těmito sekvencemi genů. Mutace zahrnují delece, substituce a adice aminokyselinových zbytků v bílkovinné sekvenci divokého typu.
Jak se zde používá, výraz „divoký typ“ odkazuje na bílkovinu, zde konkrétně na proteasu, produkovanou nemutovaným organismem.
Jak se zde používá, výraz „variant“ znamená bílkovinu, zde konkrétně proteasu, mající aminokyselinovou sekvenci, jež se liší od sekvence odpovídající bílkoviny divokého typu.
Jak se zde používají (i když varianty podle vynálezu nejsou omezeny na varianty subtilisinu BNP') všechna číslování aminokyselin jsou s odkazem na aminokyselinovou sekvenci subtilisinu BNP', jež je předvedena v SEQ ID č. 1. Tato aminokyselinová sekvence pro subtilisin BNP' je dále popsána wellsem et al., NucTeic Acids Research, sv. li, 7911 - 7925 (1983), zahrnuto zde odkazem.
Varianty podle vynálezu
Předkladatelé objevili v serinových proteasach tři epitopové oblasti, jež odpovídají posicím 103 - 126 (na něž se zde odkazuje jako na první epitopovou oblast), 220 - 246 (na něž se zde odkazuje jako na druhou epitopovou oblast), a 70 84 (na něž se zde odkazuje jako na třetí epitopovou oblast) subtilisinu BNP'. Předkladatelé dále objevili, že jedna nebo více substitucí v jedné nebo více epitopových oblastech poskytuje varianty, jež vyvolávají sníženou alergenní nebo imunitní odezvu v porovnání se setinovými proteasami divokého typu.
Jak se zde používá, variant může být označen odkazy na substituované aminokyselinové posice, jež variant charakterizují, substituce jsou zde vyznačeny poskytnutím aminokyselinového zbytku divokého typu, následovaným posičním číslem, následovaným substituovaným zbytkem k substituci. Tam, kde substituovaný aminokyselinový zbytek může být libovolná přirozená aminokyselina povolená pro tuto konkrétní posici, poskytuje se symbol Násobné substituce zakládající určitý variant jsou odděleny symbole Pro ilustraci, substituce val i nu za glycin v posici 70 je označen buď Gly70Val nebo G70V. Příklad variantu majícího substituci ve dvou posicích 70 a 108 může být označen Gly70Val + llelO8Ala nebo G70v + H08A.
varianty podle vynálezu jsou varianty proteas podobných subtilisinu. lak se zde používá, „proteasa podobná subtilisinu“ znamená proteasu, jež má přinejmenším 50 %, a s výhodou 80 %, identity aminokyselinové sekvence se sekvencemi subtilisinu BNP'. Proteasy divokého typu podobné subtilisinu jsou produkovány například mikroorganismy Bači Hus alcalophilus, Bači 11us amyloliquefaciens, Bacili us amylosaccharics, Bači Hus licheniformis, Bači Hus lentus, a Bači 7 7us subtilis. Diskusi týkající se serinových proteas podobných subtilisinu a jejich homologií lze nalézt v siezen et al., „Homology Modelling nad Protein Engineering Stratégy of subtilases, the Family of Subtilisin-Like Serine Protease“, Protein Engineering, sv. 4, č. 7, str. 719 737 (1991).
Varianty podle vynálezu jsou varianty serinových proteas mající aminokyselinové sekvence divokého typu modifikované, přičemž modifikovaná aminokyselinová sekvence zahrnuje substituci jedné nebo více epitopových oblastí, kde epitopová oblast odpovídá posicím 103, 104, 105, 106, 107,
110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119,
122, 123, 124, 125 a 126 (103 - 126) subtilisinu BNP’ epitopová oblast odpovídá posicím 220, 221, 222,
225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234,
237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246 (220 - 246)
| epitopová | |
| 108, | 109, |
| 120, | 121, |
| >’ a | druhá |
| 223, | 224, |
| 235, | 236, |
předcházejících aminokyselinová předcházejících aminokyselinová předcházejících subtilisinu BNP'. výhodněji obsahuje aminokyselinová sekvence substituci dvou posic. Ještě výhodněji obsahuje sekvence substituci tří posic. Nejvýhodněji obsahuje sekvence substituci čtyř posic. Substituce v těchto modifikovaná nebo více módifi kovaná nebo více módifi kovaná nebo ví ce posicích se • 4 ·
44 » 4 4 • 4 4 4 ·· ·4 · · · • 4 · ·
4 4
4444 realizují náhradou aminokyselinového zbytku divokého typy jiným zbytkem přirozené aminokyseliny, jak je uvedeno v Tabulce I.
S výhodou: Když má variant serinové proteasy aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším v jedné nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastí, kde
| když | substituce nastává | v první | epitopové | |||
| oblasti v jedné | nebo | více z | posic 103, | 104, | 105, | |
| 106, | 107, 108, | 109, | 110, | 111, 112, | 113, | 114, |
| 115, | 116, 117, | 118, | 119, | 120, 121, | 122, | 123, |
| 124, | 125 a 126, | kde |
1) když substituce nastává v posici 103, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
2) když substituce nastává v posici 104, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Trp;
3) když substituce nastává v posici 105, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;
4) když substituce nastává v posici 106, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val a Tyr;
• ·
5) když substituce nastává v posici 107, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, ·· *· • * · • · ··
Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
14) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
15) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
16) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
17) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
18) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
19) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;
• ·
- 10 • · · • ·♦· • · • 9 ·♦·· ·· ·« <
• · ·
9 · · ♦ · 999·
9 9 *·
9999
20) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
21) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
22) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
23) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr; a
24) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a
B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 220, 221, 222,
223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231,
232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240,
241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde
1) když substituce nastává v posici 220, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;
• ·
- 11 • ···
♦··· ·· ·♦ ♦♦ • · ·
·«► ·· • · · · • · · • · ♦ ·· ····
2) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
3) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
4) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
5) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe,
- 12 9 9
9 9 9 9 9
999 9 9 9 9 9
9 999 9999999
9 9 9 9 9 9
99999 99 9
Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
14) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
15) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
16) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
- 13 • 9 9 9 ♦ ♦ · • ···
9999
9
9 9
9 9 9 • 99999
9 9
99
9 9 9
9 9
9 9
9 9
9999
17) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;
18) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
19) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
20) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
21) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
22) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
23) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;
24) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, • 4
Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
25) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;
26) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr; a
27) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr.
Výhodněji: Když má variant serinové proteasy aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším v jedné nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastí, kde
A) když substituce nastává v první epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125 a 126, kde
1) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;
- 15 • ··· · · » · · · * ·· · * · ···*·*· · · «»· 9 · · * · · • |«| fc* ·· * ·· ·♦··
2) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Phe, Gly, His, Leu, Met, Pro, Gin, Trp a Tyr;
3) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
4) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
5) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Phe, Gly,
- 16 «« ·· « ·> ·* » ·« · »» * »> * • ·»· α · · · * · · • · · » · · ···* · · · · • · · « · · Λ · ·
His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Pro, Gin, Arg, Thr, Trp a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
14) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;
15) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
16) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, val, Trp a Tyr;
n ·
17) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze
| skupiny sestávající | z | Cys, | Asp, | Glu, |
| Phe, Gly, His, Asn, Thr, val, Trp a Tyr; | Pro, | Gin, | Arg, | Ser, |
| 18) když substituce nastává | v posici | 125, | ||
| substituující aminokyselina je | vybrána ze | |||
| skupiny sestávající z | Ala | , Cys, | Asp, | Glu, |
| Phe, Gly, His, ile, | Lys, | Leu, | Met, | Asn, |
Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr; a
19) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a
B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 221, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde
1) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
2) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
3) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
- 18 • · · · • · · • · ··
4) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Asn, Thr, Trp a Tyr;
5) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly,
- 19 His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
14) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gin, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
15) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;
16) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
17) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
18) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
- 20 44 ·4 ·4
4 4 ♦
4 4 4 4
4 4 4 4
4 4 4
4444 4 · · ·
19) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze
| skupiny sestávající z Ala, | Cys, | Asp, | Glu, | |
| Phe, | Gly, His, Ile, Leu, | Met, | Pro, | Gin, |
| Ser, | Thr, Val, Trp a Tyr; | |||
| 20) když | substituce nastává | v posici | 241, |
substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr a Val;
21) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;
22) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
23) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;
24) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a
25) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr.
Ještě výhodněji: Když má variant serinové proteasy aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové
- 21 β * · » • · · · • · · · · · • · · · · · « · · · · ···· · · · · sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou ve dvou nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastí, kde
A) když substituce nastává v první epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125 a 126, kde
1) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
2) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
3) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
4) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
5) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze « · « · • «
- 22 skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
14) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;
15) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
16) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
17) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
18) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr; a
B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde
1) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;
- 24 » · · • ♦ • Μ·
2) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
3) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
4) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;
5) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, • *
Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
14) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
15) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
16) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
• » · »
- 26 ι: . • · · ·
« · · « > « · · ·
17) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
18) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
19) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
20) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
21) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
22) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;
23) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
24) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, • ·
- 27 - ·*!·*·· ·*« · · · «···«« ·* · ·* ··1
Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, val, Trp a Tyr;
25) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr; a
26) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr.
v jiném výhodném provedení varianty obsahují substituci substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích ve dvou nebo více epitopových oblastech, přičemž epitopovými oblastmi jsou první epitopová oblast odpovídající posicím 103 - 126 subtilisinu bnp', druhá epitopová oblast odpovídající posicím 220 - 246 subtilisinu BNP' a třetí epitopová oblast odpovídající posicím 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79,
80, 81, 82, 83 a 84 (70 - 84) subtilisinu BNP'. V tomto provedení slovní spojení „substituce substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích ve dvou nebo více epitopových oblastech“ znamená, že přinejmenším jedna substituce nastává v jedné z epitopových oblastí a přinejmenším jedna substituce nastává v odlišné epitopové oblasti. Samozřejmě v tomto provedení alespoň jedna substituce může nastat v každé epitopové oblasti, výhodně v tomto provedení obsahuje modifikovaná aminokyselinová sekvence substituci substituující aminokyselinou ve dvou nebo více posicích ve dvou nebo ve více epitopových oblastech (tj. variant obsahuje substituci substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích v jedné nebo ve více epitopových oblastech a substituci substituující aminokyselinou ve dvou nebo více posicích jiné epitopové oblasti), výhodněji v tomto provedení obsahuje modifikovaná aminokyselinová sekvence substituci substituující aminokyselinou ve třech nebo více posicích v jedné nebo ve více epitopových oblastech (tj.
Φ· Φφ φ· · ♦ · ·· • « · ·>· » « φ ·
Φ·»Φ ·Ι<Φ φ · » «-) Q ··♦····»··♦·· *
- 20 - φφφφφ· φ · φ «•V »» ·· φ «· ΦΦ·· variant obsahuje substituci substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích v jedné nebo ve více epitopových oblastech a substituci substituující aminokyselinou ve třech nebo více posicích jiné epitopové oblasti). Substituce v předcházejících posicích se realizují náhradou aminokyselinového zbytku divokého typy jiným zbytkem přirozené aminokyseliny, jak je uvedeno v Tabulce I.
S výhodou: Když má variant serinové proteasy aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším v jedné nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastí, kde
A) když substituce nastává v první epitopové oblasti,
| substituce | nastává v jedné nebo více z posic | 103, | ||
| 104, | 105, | 106, 107, 108, 109, 110, | 111, 112, | 113, |
| 114, | 115, | 116, 117, 118, 119, 120, | 121, 122, | 123, |
| 124, | 125 a | 126, kde | ||
| 1) | když substituce nastává | v posici | 103, |
substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
2) když substituce nastává v posici 104, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Trp;
3) když substituce nastává v posici 105, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
• »
4) když substituce nastává v posici 106, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;
5) když substituce nastává v posici 107, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,
- 30 Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
14) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
15) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
16) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
17) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
18) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
- 31 4 4* ♦ <
19) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;
20) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
21) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
22) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
23) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr; a
24) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr; a když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a
B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více
99 »99 9
9 * »99 9
- 32 99 99
9 9
9 99 9 9
9 99 9·
99 9·99 z posic 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236,
237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde
1) když substituce nastává v posici 220, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;
2) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;
3) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
4) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
5) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,
- 33 Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,
Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
14) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
- 34 • 4 ♦· · 4
444
15) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
16) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
17) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;
18) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
19) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
20) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
21) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
22) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, • * 4 · · · ·
4 4 4 4 · ·
4 4 4·· 4 4 4 ·
Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn,
Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
23) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;
24) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
25) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;
26) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a
27) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr; a
C) když substituce nastává v třetí epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 a 84, kde
1) když substituce nastává v posici 70, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
♦ ♦
- 36 • ···
* · • · · • ··*· ·· • · · • · ♦ · · ·» ····
2) když substituce nastává v posici 71, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;
3) když substituce nastává v posici 72, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;
4) když substituce nastává v posici 73, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Ser, Val, Trp a Tyr;
5) když substituce nastává v posici 74, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 75, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 76, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 77, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 78, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,
- 37 Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn,
Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 79, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 80, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 81, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 82, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
14) když substituce nastává v posici 83, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
15) když substituce nastává v posici 84, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
výhodněji v tomto provedení: Když má variant serinové proteasy aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast, druhou epitopovou oblast a třetí epitopovou
- 38 ·* · 99 99
9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 ·
9999999 9 9
9 9 9 9
9 9 9 9 9 99 9 oblast, modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích ve dvou nebo více epitopových oblastech, kde
A) když substituce nastává v první epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 a 125 kde
1) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
2) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;
3) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
4) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
5) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,
- 39 ·* ·
9 · 99 ···· ·· ««
9 9 ·
• · « * « ·♦ 99
Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
- 40 • * · • »·· ♦ * * * • * · ···* ·· ·* » · · · • ·»·*«· • · · «· * »« ·· • 4 4 4 · · » « · « 4 ♦ *4 ·♦**
14) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;
15) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
16) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
17) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a
18) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe,
| Gly, His, Lys, Leu, Met, Arg, Thr, val, Trp a Tyr; | Asn, Pro, | Gin, | ||
| když substituce nastává v druhé epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde | ||||
| 1) | když substituce nastává | v posici | 221, |
substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;
- 41 ♦· ·* • * · • ··* « · • · »»«f ·« ♦ · · • 0 0 • · · 0 • 0 t·»· • * * «0 0 »0 ·· • 0< * • · · • · ·
0 0
W0 0000
2) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
3) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
4) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
5) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
6) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
7) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr;
8) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
9) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, ·
- 42 ·· ·· • · · • ··« η* ·· 9 • · · · · · • · ···· • · · ·· * • C ·· • · 9 • · • · • · ····
Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
10) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
11) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
12) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
14) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
15) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
16) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
- 43 ·· · · · * · · · • · · · · · · • ··· ····· ·· e· · ······
17) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
18) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
19) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
20) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
21) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
22) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;
23) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
24) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,
- 44 • · 4 4 · 4 4
Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;
25) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a
26) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr.
C) když substituce nastává v třetí epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 a 84, kde
1) když substituce nastává v posici 70, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
2) když substituce nastává v posici 71, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
3) když substituce nastává v posici 72, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, ser, Thr, Trp, a Tyr;
4) když substituce nastává v posici 73, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Arg, Asn, Asp, cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
· ·· ··· ♦ ♦ · ♦ ···· « ··· · · ·
-45- .* ! ί * ί ! * ί ί ·* ···· ·· ·· · ·· ····
5) když substituce nastává v posici 74, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Arg, Asn, Asp, cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
6) když substituce nastává v posici 75, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;
7) když substituce nastává v posici 76, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, cys, Ile, Leu, Met, Gin, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
8) když substituce nastává v posici 77, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Cys, Glu, Gin, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
9) když substituce nastává v posici 78, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Thr, Trp, Tyr a val;
10) když substituce nastává v posici 79, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
11) když substituce nastává v posici 80, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;
12) když substituce nastává v posici 81, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp,
- 46 φ · ·
Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 82, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Met, Pro, ser, Thr, Trp, Tyr a val;
14) když substituce nastává v posici 83, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;
15) když substituce nastává v posici 84, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp a Tyr; a
Ještě výhodněji v tomto provedení: Když substituce nastává v třetí epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 a 84, kde
1) když substituce nastává v posici 70, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
2) když substituce nastává v posici 71, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Cys, Gin, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, ser, Thr, Trp, Tyr a val;
3) když substituce nastává v posici 72, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, pro, ser, Thr, Trp, a Tyr;
- 47 4) když substituce nastává v posici 73, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Arg, Asn, Asp, Cys, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
5) když substituce nastává v posici 74, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;
6) když substituce nastává v posici 75, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
7) když substituce nastává v posici 76, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, cys, ile, Leu, Met, Gin, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
8) když substituce nastává v posici 77, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Cys, Glu, Gin, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;
9) když substituce nastává v posici 78, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Thr, Trp, Tyr a val;
10) když substituce nastává v posici 79, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Cys, Gin, Gly, Phe, His, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;
11) když substituce nastává v posici 80, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, • *
- 48 Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, ser, Thr, Trp, Tyr a Val;
12) když substituce nastává v posici 81, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, ser, Thr, Trp, a Tyr;
13) když substituce nastává v posici 82, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;
14) když substituce nastává v posici 83, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val; a
15) když substituce nastává v posici 84, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, ser, Thr, Trp a Tyr.
Nejvýhodněji, když substituce nastává v třetí epitopové oblasti, varianty podle vynálezu zahrnují substituci nastává v jedné nebo více z posic 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 (73 - 83), výhodněji v jedné nebo více z 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82 (75 - 82), a nejvýhodněji 78 nebo 79.
Navíc mohou být v kterékoli posici serinové proteasy vytvořeny jedna nebo dvě substituční mutace („stabilizační mutace“) například proto, aby znovu stabilizovaly proteasu po mutaci epitopové oblasti nebo aby zvýšily proteolytickou aktivitu daného variantu. Mnohé takovéto stabilizační mutace jsou v oboru známé. Příklady takovýchto stabilizačních mutací jsou zveřejněny například v wo 95/10591, Baeck et al., zveřejněno 20. dubna 1995; US patent čís. 4 914 031, Zukowski et al., vydán 3. dubna 1990; US patent čís. 5 470 733, Bryan « · •» ··· ·· ·» • · · ··« ·»·< • · · · · ··· · · »
- 49 - <* Z Z * Z Ζ **Ζ* * Z Ζ ···· ·· ·· · ·* ···· et al., vydán 28. listopadu 1995; US patent čís. 5 567 601, Bryan et al., vydán 22. října 1996; WO 89/07642, US patent čís. 5 707 848, Bryan et al., vydán 13.ledna 1998; Van Eckelen et al., publikováno 24. srpna 1989; WO/87/04461, Stabinski et al., publikováno 30. července 1987; US patent čís. 4 760 025, Estell et al., vydán 26. července 1988; WO 92/11348, Branner et al., vydáno 9. července 1992; ep 0 405 901, Casteleijn et al., publikováno 2. ledna 1991; WO 91/00345, Branner et al., publikováno 10. ledna 1991; a WO 94/11348, Brode et al., vydáno 23. března 1995.
výhodné stabilizační mutace zahrnují jednu nebo více z: H07V; Y217L; Y217K; N218S; G162A; M50F; Q19e, P5A; I31L;
E156S; G169A; N212G; S188P; T254A; S3C + Q206C; a Q271E.
výhodnější stabilizační mutace zahrnují jednu nebo více z: I31L; E156S; G169A; N212G; S188P; T254A; S3C + Q206C; Q271E; Y217L a Y217K. Nejvýhodnější stabilizační mutace zahrnují Y217L a Y217K.
způsoby provedení varianty jsou připravovány mutováním nukleotidových sekvencí, jež kódují serinovou proteasu divokého typu, což vede k variantům, jež mají modifikované nukleotidové sekvence. Takovéto způsoby jsou v oboru dobře známé a jeden takovýto způsob je načrtnut níže:
Fagemid pSS-5 obsahující gen subtilisinu bnp' divokého typu (Mitchison, c. aj. A. Wells, „ Protein Engineering of Disulfide Bonds in Subtili sin BNP'“, Biochemistry, sv. 28, str. 4807-4815 (1989)) je transformován do kmene Escherichia coli dut- ung- 0236 a jednovláknový uráčil obsahující DNA templát je produkován s použitím pomocného fága VCSM13 (Kunkel et al., „Rapid and Efficient Site-Specific Mutagenesis without Phenotypic selection“, Methods in Enzymology, sv. 154, str. 367 - 382 (1987), v modifikaci podle Yuckenberga et al., „Site-Directed in vitro Mutagenesis using Uracil-Containing DNA and Phagemid vectors“, Di rected Mutagenesis - A Practicai Approach, McPherson, M. J. ed., str. 27 - 48 (1991).
« ·
- 50 ♦ « · » · <
• · f · · « ··«·*«« · ·
K vytvoření všech mutantů se použila řízená mutagenese s primery modifikovaná ze způsobu zollera a Smithe (zoller, M.
3., a M. Smith, „Oligonucleotide-Directed Mutagenesis Using Ml3-Derived vectors: An Efficient and General Proceduře for the Production of Point Mutation in any Fragment of dna“, v podstatě jak je uváděna v Yuckenberg et al., shora.
Oligonukleotidy byly připraveny s použitím DNA syntetizátoru 380B (Applied Biosystems, lne.) Reakční produkty mutagenesy byly transformovány do Escherichia coli kmene MM294 (American Type culture Collection 33625). Všechny mutace byly potvrzeny sekvenováním DNA a isolovaná dna byla transformována k expresi do kmene Bacillus subtilis PG632 (Saunders et al., „Optimazation of the Signál-Sequence cleavage Site for Secretion from Bacillus subtilis of a 34-amino acid Fragment of Human Parathyroid Hormone“, Gene sv. 102, str. 277-282 (1991) a Ynang et al., „Cloning of the Neutra! Protease Gene of Bacillus subtilis and the Use of the Cloned Gene to Create an in 1/7 tro-Der i ved Deletion Mutation“, Journal of
Bacteriology, sv. 160, str. 15-24 (1984). Předběžné určení aktivity variantu se stanoví schopností buněk PG623 transformovaných mutantním plasmidem hydrolyzovat kasein.
Fermentace je jak následuje: Buňky Bacillus subtilis (PG623) obsahující variant, jenž je předmětem zájmu, se nechají růst do střední logaritmické fáze v jednom litru LB půdy obsahující 10 g/1 glukosy a jsou dány jako inokulum do fermentoru Biostat C (Braun Biotech, lne., Allentown, PA) do celkového objemu 9 litrů. Fermentační médium obsahuje kvasníčný extrakt, hydrolyzát kaseinu, rozpustný částečně hydrolyzovaný škrob (Maltrin M-250), činidlo proti pěnění, pufry, a stopové minerály (viz „Biology of Bacilli:
Applications to Industry“, Doi, R. H. a M. McGloghlin, ed. (1992)). Půda je během fermentace držena na stálém pH 7,5. K antibiotické selekci mutagenisovaného plasmidu je přidán kanamycin (50 pg/ml). Buňky se nechají růst po 18 hodin při 37 °C k k hodnotě A600 asi 60 a produkt se sklidí.
Fermentační půda se bere k získání čistého variantu do následujících kroků: z půdy se odstraní buňky Bacillus subtilis tangenciálním tokem proti membráně s póry 0,16 pm.
- 51 • · « · · · · · · • · · · · · » * · ' • · · · · · » β · » ♦ • · · « · ·····«« · * «··· · ♦ «· 4 ·» · · · ·
Půda prostá buněk je pak zkoncentrována ult rafii trací s membráno o hraně molekulové hmotnosti 8000. Hodnota pH je nastavena na 5,5 koncentrovaným MES pufrem (kyselina 2-(Nmorfolino)ethansulfonová). Variant je dále purifikován katexovou chromatografií S-sepharosou a elucí gradienty Nad. (Viz Scopes R. K., „Protein Purification Principles and Practice“, springer-verlag, New York (1984)).
Ke stanovení koncentrace aktivního variantu ve frakcích sebraných při gradientově eluci se použije pNA test (DelMar et al., Analyticaf Biochemistry, sv. 99, str. 316-320 (1979)). Tento test měří rychlost, s níž je uvolňován p-nitroanilin, když daný variant hydrolyzuje rozpustný syntetický substrát sukci nyl-alani n-alani n-proli n-fenylalani n-p-ni troani1 i n (sAAPF-pNA). Rychlost tvorby žlutého zabarvení z hydrolyzační reakce se měří při 410 nm na spektrofotometru a je úměrná koncentraci aktivního enzymu. Navíc se ke stanovení celkové koncentrace bílkoviny používá měření absorbance při 280 nm. Poměr aktivní enzym/celková bílkovina udává čistotu variantu a používá se k identifikaci frakcí, jež mají být spojeny do zásobního roztoku.
Aby se předešlo autolýze variantu během skladování, ke spojeným frakcím získaným z chromatografické kolony se přidá stejný objem propylenglykolu. Po dokončení purifikačního postupu se ověří čistota zásobního roztoku variantu pomocí SDS-PAGE (gelové elektroforesy s dodecylsulfátem na polyakrylamidovém gelu) a absolutní koncentrace enzymu se stanoví metodou titrace aktivního místa s použitím trypsinového inhibitoru typu Il-T:krůtího vaječného bil ku (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri).
Při přípravě k použití je zásobní roztok enzymu eluován přes kolonu Sephadex-G25 (Pharmacia, Piscataway, New Jersey) s exklusí podle velikosti k odstranění propylenglykolu a výměně pufru. Pufr MES ze zásobního roztoku enzymu je vyměněn za 0,1 M tris pufr (tris(hydroxymethyl-aminomethan) obsahující 0,01 M cacl2 a pH je nastaveno na 8,6 pomocí HCl. Všechny experimenty se provádějí při pH 8,6 v tris pufru za termostatování na 25 °C.
« · « 9
- 52 9 9 9
99 ·9
9 9 9 · *
9 9 9 9 ·
9 9 9 9 9 9 » ·
Analytické metody
Varianty mohou být testovány na enzymatickou aktivitu a imunitní nebo alergenickou odezvu s použitím následujících metod, jež jsou obě známé zběhlému v oboru. Alternativně lze použít jiné metody v oboru dobře známé.
Aktivita variantu
Proteasová aktivita variantu podle vynálezu může být testována způsoby, jež jsou v oboru dobře známy. Dva takovéto způsoby jsou načrtnuty níže:
Metoda aktivity k vločkám kůže
S použitím pásky Scotch® #375OG se z nohou osoby strhávají opakovaně vločky lidské kůže dokud nemá páska od vloček v podstatě kalný vzhled. Páska je pak rozřezána na čtverečky 2,5 cm x 2,5 cm a odložena stranou. Do Petři ho misek rozměrů 10 mm x 35 mm se přidají 2 ml roztoku 0,75 mg/ml kontrolního enzymu (například subtilisinu bnp') nebo variantu k testování v pufru 0,01 M KH2PO4 , pH 5,5. K tomuto roztoku se přidá 1 ml 2,5 %-ního laurátu sodného, pH 8,6. Roztok se jemně míchá na platformě třepačky. Předem připravené čtverečky pásky se na 10 minut namočí do tohoto roztoku (nahoru stranou s vločkami) za pokračujícího jemného míchání, čtvereček pásky se pak jemně promyje ve vodovodní vodě po patnáct vteřin. Do čisté Petři ho misky se napipetuje barvivo Stevenel Blue stain (3 ml, komerčně dostupné od Sigma Chemical Co., St. Louis, MO). Promytý čtvereček pásky se na tři minuty umístí do barviva (nahoru stranou s vločkami) za jemného míchání. Čtvereček pásky se vyjme z barviva a promyje postupně ve dvou kádinkách s 300 ml destilované vody, vždy po patnácti vteřinách, čtvereček pásky se nechá uschnou na vzduchu. Visuálně nebo pomocí chromametru se porovnají intensity zabarvení mezi čtverečkem pásky získaného z kontrolního enzymu a čtverečkem pásky získaného z variantu. Když vzhledem ke kontrolnímu enzymovému čtverečku pásky vykazuje čtvereček • * • » pásky variantu menši intensitu zabarvení, ukazuje to na variant, jež má vyšší aktivitu.
Metoda pro aktivitu se zabarveným kolagenem
Smísí se 50 ml 0,1 M tris pufru (tri s(hydroxymethy!aminomethanu) obsahujícího 0,01 M CaCl2 o pH 8,6 a 0,5 g azocollu (kolagen impregnovaný azobarvivem, komerčně dostupný od sigma Chemical Co., St. Louis, MO). Směs se inkubuje při 25 °C za jemného míchání na platformě třepačky. Dva mililitry této směsi se zfiltrují přes 0,2 mikronový filtr na injekční stříkačce a absorbance této směsi se odečte jako nula na spektrofotometru při 520 nm. K zbývajícím 48 ml směsi tris / azocoll se přidá 1 ppm buď kontrolního enzymu (například subtilisinu BNP') anebo variantu k testování. Každé dvě minuty po celkem 10 minut se zfiltrují přes 0,2 mikronový filtr na injekční stříkačce 2 ml roztoku obsahujícího kontrolu / variant. Pro každý vzorek se okamžitě odečte absorbance při 520 nm. výsledky se vynesou proti času. Směrnice kontroly a testovaného variantu ukazují relativní aktivity vzorků. Strmější směrnice ukazuje na vyšší aktivitu. Aktivita testovaného variantu (směrnice) může být vyjádřena jako procento aktivity (směrnice) kontroly.
Myší intranasální test na imunogenitu imunogenní potenciál variantů serinové proteasy podle vynálezu může být stanoven způsobem známým v oboru jako myší intranasální test na imunogenitu, jak je presentován zde níže. Tento test je podobný testu popsanému v Robinson et al., „Spéci fic Antibody Responses to Subtilisin Carlsberg (Alcalase) in Míce: Development of intranasal Exposure Model“, Fundamental and Applied Toxicology, sv. 34, str. 15-24 (1996) a Robinson et al., „Use of the Mouše intranasal Test (MINT) to Determine the Allergenic Potency of Detergent Enzymes: Comparison to the Guinea Pig Intratracheal (GPIT) Test“, • · «4 ·9 φ 44 44 ♦ 4 4 444 4*4*
444 444· 4 4 » * 4 ♦ · 4 4 4444 444 4
Toxicological Science, sv. 43, str. 39-46 (1998), přičemž oba testy lze použít místo testu nečrtnutého níže.
Pro test se použijí samice myší BDFl (Charles River Laboratories, Portage, MI) vážící od asi 18 do asi 20 g. Myši jsou jeden týden před dávkováním v karanténě. Myši jsou chovány v klecích s podestýlkou dřevité vlny v místnostech s řízenou vlhkostí (30 - 70 %), teplotou (20 - 25 °C) a 12-ti hodinovým cyklem světla a tmy. Myši byly krmeny myším krmením Purina® (Purina Mills, Richmond, IN) a vodou ad Tibidum.
Potenciální antigen určený k testování (buď subtilisin BNP' jako positivní kontrola, nebo variant podle vynálezu) je dávkován skupině pěti myší. Před dávkováním jsou všechny myši anestetizovány intraperitonální (i.p.) injekcí směsi Ketasetu (88,8 mg/kg) a Rompunu (6,67 mg/kg). Anestetizovaná zvířata jsou držena v dlani, dolu hřbetem, a dávkována itranasálně 5 ml proteasy v pufrovém roztoku (0,01 M kh2po4 , pH 5,5). i když každá skupina dostává stejnou dávku, lze testovat různá dávkování. Dávkovači roztoky se jemně podávají na vnější stranu obou nozder a jsou myší inhalovány. Dávkování se opakuje ve dnech 3, 10, 17 a 24.
vzorky sér se odebírají v den 29. Enzym-specifické protilátky igGl se v myším séru měří metodou ELIS se zachycením antigenu. imunogenita variantu může být porovnána proti imunogenitě subtilisinu BNP' s použitím standardních hodnot ED50.
Prostředky podle vynálezu varianty mohou být použity v čistících prostředcích včetně, ale bez omezení, pracích prostředků, prostředků k čištění pevných povrchů, jemných čistících prostředků zahrnujících prostředky k mytí nádobí a detergenční prostředky do myček nádobí.
Čistící prostředky zde obsahují účinné množství jednoho nebo více variantů podle vynálezu a nosič čistícího prostředku.
- 55 Jak se zde používá, „účinné množství variantu“, nebo podobně, odkazuje na množství variantu potřebné k dosažení proteolytické aktivity, jež je zapotřebí v konkrétním čistícím prostředku. Takováto účinná množství jsou snadno určena osobou s obyčejnou zběhlostí v oboru a jsou založena na mnohých faktorech, jako je konkrétní použitý variant, čistící aplikace, konkrétní složení čistícího prostředku, a na tom, zda je žádoucí kapalný nebo suchý prostředek (např. granulární nebo ve formě kostky), a podobně, s výhodou obsahuje čistící prostředek od asi 0,0001 % do asi 10 %, výhodněji od asi 0,001 do asi 1 % a nejvýhodněji od asi 0,01 % do asi 0,1 % jednoho nebo více variantů podle vynálezu. Několik příkladů různých čistících prostředků, u nichž lze varianty používat, je rozebráno podrobněji níže.
Navíc k variantům podle vynálezu obsahují čistící prostředky nosič čistícího prostředku, jenž obsahuje jeden nebo více materiálů čistícího prostředku, jež jsou kompatibilní s daným variantem, výraz „materiál čistícího prostředku“ jak se zde používá, znamená jakýkoli materiál vybraný pro konkrétní typ žádoucího čistícího prostředku, a pro danou formu produktu (např. kapalnou, granulární, kostku, sprej, tyčinku, pastu, gel), přičemž materiály jsou rovněž kompatibilní s variantem použitým v daném prostředku. Konkrétní výběr materiálů čistícího prostředku se snadnou učiní uvážením materiálu, jenž má být čištěn, a žádoucí formy prostředku pro čistící podmínky v průběhu použití. Výraz „kompatibilní“ jak se zde používá, znamená materiály čistícího prostředku, jež nesnižují proteolytickou aktivitu variantu do té míry, jež by činila variant neúčinným oproti tomu jak je žádoucí v normálních situacích používání. Příklady konkrétních materiálů čistících prostředků budou zde uvedeny podrobně později.
Varianty podle vynálezu detergentových prostředků, kde dobrá čistící aktivita. Takto s různými konvenčními složkami k poskytnutí plně formulovaných čistidel pevných povrchů, prostředků k mytí nádobí, prostředků k praní tkaní a podobně. Takovéto prostředky mohou být použity v řadě vysoké pěnění a varianty použity mohou být je žádoucí mohou být
- 56 ·· «
φ φ ·φφφ » · ·
formulovány jako „koncentrované“ detergenty, které mají tak vysoký obsah povrchově aktivních látek, jako je až od asi 30 % do asi 60 %, podle hmotnosti.
Čistící prostředky mohou případně, a s výhodou, obsahovat různé povrchově aktivní látky (t j. anionické, neionické nebo zwitterionické povrchově aktivní látky). Takovéto povrchově aktivní látky jsou typicky přítomné v hladinách od asi 5 % do asi 35 % prostředku.
Neomezující příklady povrchově aktivních látek zde užitečných zahrnují konvenční Cu-C18 alkyl benzensulfonáty a primární a randomní alkyl sul fáty, C10-C18 sekundární (2,3) alkyl sul fáty o vzorcích CH3(CH2)X(CHOSO3)M+)CH3 a
CH3(CH2)X(CHOSO3'M+)CH2CH3 kde x a y+1 jsou celá čísla přinejmenším asi 7, s výhodou přinejmenším asi 9, a M je kati on pro rozpustnost ve vodě, obzvláště sodík, c10-c18 alkylalkoxysul fáty (obzvláště EO 1-5 EO 1-5 ethoxysulfáty), C10-C18 alkyl alkoxy karboxyláty (obzvláště EO 1-5 ethoxykarboxyláty), C10-C18 alkylpolyglykosidy a jejich odpovídající sulfatované polyglykosidy, C12-C18 a-sulfonované estery mastných kyselin, C12-C18 alkyl a alkyl fenol alkoxyláty (obzvláště ethoxyláty a směsné ethoxy/propoxy), C12-C18 betainy a sulfobetainy („sultainy“), C10-C18 aaminoxidy a podobně.
Výhodné zde jsou alkoxysulfáty (AES) a alkylalkoxykarboxyláty (AEC). Použití takových povrchově aktivních látek v kombinaci s povrchově aktivním aminoxidem a/nebo betainem nebo sultainem je, v závislosti na přání formulátora, rovněž výhodné. Jiné užitečné konvenční povrchově aktivní látky jsou uváděny ve standardních textech. Obzvláště užitečné povrchově aktivní látky zahrnují C10-C18 N-methylglukamidy zveřejněné v US patentu čís. 5 194 639, Connor et al., vydaném 16. března 1993.
Do detergentních čistících prostředků zde může být zahrnuta velká řada jiných složek včetně, například, jiných aktivních složek, nosičů, hydrotropů, pomocných látek zpracování, barviv nebo pigmentů, a rozpouštědel pro kapalné formulace. Když je žádoucí jakýkoli další přírůstek pěnění, mohou být do prostředku zařazeny látky podporující pěnění, jako jsou C10-C16 alko!amidy, typicky v hladinách asi 1 % až 10 %. Typickou třídu takovýchto činidel podporujících pěnění • * • ·
- 57 představují C10-C14 monoethanol- a diethanolamidy. Použití takovýchto činidel podporujících pěnění s vysoce pěnícími přídatnými povrchově aktivními látkami, jako jsou aminoxidy, betainy a sultainy, může rovněž být výhodné. Pokud je to žádoucí, k poskytnutí dalšího pěnění mohou být přidány rozpustné hořečnaté sole jako MgCl2 nebo MgSO4 , typicky v hladinách od asi 0,1 % do asi 2 %.
Kapalné detergentové prostředky mohou zde jako nosiče obsahovat vodu a jiná rozpouštědla, vhodné jsou primární a sekundární alkoholy o nízké molekulové hmotnosti, jejichž příklady jsou methanol, ethanol, propanol a /so-propanol. Pro sol ubil i začni povrchově aktivní látky jsou výhodné monohydroxylové alkoholy, ale lze rovněž použít polyoly, jako jsou ty, co obsahují od asi dvou do asi šesti uhlíkových atomů a od asi dvou do asi šesti hydroxylových skupin (např.
1,3-propandiol, ethylenglykol, glycerin a 1,2-propandiol). Prostředek může obsahovat od asi 5 % do asi 90 %, typicky od asi 10 % do asi 50 % takovýchto nosičů.
Detergentové prostředky zde budou s výhodou formulovány tak, že během používání ve vodných čistících procesech bude mycí voda mít pH mezi asi 6,8 a asi 11. Hotové produkty jsou typicky formulovány v tomto rozmezí. Techniky pro řízení pH při používání k těmto doporučovaným hladinám zahrnují například použití pufrů, alkálií a kyselin. Takovéto techniky jsou zběhlým v oboru dobře známé.
Když se formulují prostředky k čištění pevných povrchů a prostředky k čištění tkanin podle vynálezu, může si formulátor přát použít různé výstavbové substance v hladinách od asi 5 % do asi 50 % podle hmotnosti. Typické výstavbové substance zahrnují 1-10 mikronové zeolity, polykarboxyláty jako jsou citrát a oxydisukcináty, vrstvené silikáty, fosfáty a podobně. Jiné konvenční výstavbové substance jsou uváděny v seznamech standardních předpisů.
Podobně si může formulátor přát použít v takovýchto prostředcích různé další enzymy, jako jsou celulasy, lipasy, amylasy a proteasy, typicky v hladinách od asi 0,001 % do asi 1 % podle hmotnosti, v oboru pracích detergentů jsou dobře známé odpuzující enzymy a enzymy k péči o tkaniny.
- 58 • · «♦ » · · • · ·· ♦ · « • · « t · · · * · · • · · ·· v takovýchto prostředcích mohou být použity různé bělící sloučeniny, jako jsou peruhličitany, perboritany a podobně, typicky v hladinách od asi 1 % do asi 15 % podle hmotnosti. Když je to žádoucí, takovéto prostředky mohou rovněž obsahovat aktivátory bělení, jako je tetraacetyldiamin, nonanoyloxybenzen sulfonát a podobně, jež jsou rovněž v oboru známé. Hladiny k použití jsou typicky v rozsahu od asi 0,1 % do asi 10 % podle hmotnosti.
v takovýchto prostředcích mohou být použita činidla k uvolňování znečištění, obzvláště typu anionických oligoesterů, chelatační činidla, obzvláště aminofosfonáty a ethylendiamindisukcináty, činidla k uvolňování znečištění hlínou, obzvláště ethoxylovaný tetraethylenpentamin, dispergační činidla, obzvláště polyakryláty a polyaspartáty, činidla ke zvýšení jasu, obzvláště anionická činidla ke zvýšení jasu, čindila k potlačení pěnění, obzvláště silikony a sekundární alkoholy, změkčovače tkanin, obzvláště smektitové hlinky, a podobně, v hladinách typicky v rozsahu od asi 1 % do asi 35 % podle hmotnosti. Standardní seznamy předpisů a publikované patenty obsahují mnohé podrobné popisy takovýchto konvenčních materiálů.
v čistících prostředcích mohou být použity rovněž stabilizátory enzymů. Takovéto stabilizátory enzymů zahrnují propylenglykol (s výhodou od asi 1 % do asi 10 %), mravenčan sodný (s výhodou od asi 0,1 % do asi 1 %) a mravenčan vápenatý (s výhodou od asi 0,1 % do asi 1 %).
Varianty podle vynálezu jsou užitečné v prostředcích k čištění pevných povrchů. Jak se zde používá, „prostředek k čištění pevných povrchů“ odkazuje na kapalný nebo granulární detergentové prostředky k čištění pevných povrchů, jako jsou podlahy, zdi, koupelnové kachlíky a podobně. Prostředky k čištění pevných povrchů podle vynálezu obsahují účinné množství jednoho nebo více variantů podle vynálezu, s výhodou od asi 0,001 % do asi 10 %, výhodněji od asi 0,01 % do asi 5 %, ještě výhodněji od asi 0,05 % do asi 1 %, bráno na hmotnost prostředku. Navíc k obsahu jednoho nebo více variantů obsahují takovéto prostředky k čištění pevných povrchů typicky povrchově aktivní látku a ve vodě rozpustnou
- 59 • 0 00 0 0 0
0 00 0 0 0 ·
0 0
0 0 0 0 0
0 0 0 0
0 0 0
00000
0 0
0· 0
0* • 0 0 0
0 0
0 0 0 0 0 0 ft 0000 sekvestrační výstavbovou substanci. v určitých specialisovaných výrobcích, jako jsou sprejové čističe oken, povrchově aktivní látka však není někdy používána, protože může zanechávat na povrchu skla nános nebo šmouhy.
Složka povrchově aktivní látky, pokud je přítomna, může zde tvořit tak málo, jako je 0,1 % prostředků, ale typicky budou prostředky obsahovat od asi 0,25 % do asi 10 %, výhodněji od asi 1 % do asi 5 % povrchově aktivní látky.
Typicky budou prostředky obsahovat od asi 0,5 % do asi 50 %, detergentové výstavbové substance, výhodněji od asi 1 % do asi 10 %.
PH má být s výhodou v rozsahu od asi 7 do asi 12. Pokud je potřebné nastavení, lze použít konvenční činidla k nastavení pH, jako hydroxid sodný, uhličitan sodný a kyselina chlorovodíková.
v prostředcích mohou být zařazena rozpouštědla, užitečná rozpouštědla zahrnují, ale bez omezení, glykolethery jako je diethylenglykol monohexylether, diethylenglykol monobutylether, ethylenglykol monobutylether, ethylenglykol monohexylether, propylenglykol monobutylether, dipropylenglykol monobutylether, a dioly, jako je 2,2,4trimethyl-1,3-pentandiol a 2-ethyl-l,3-hexandiol. Když se použijí, takováto rozpouštědla jsou typicky přítomna v hladinách od asi 0,5 % do asi 15 %, výhodněji od asi 3 % do asi 11 %.
Navíc mohou být v prostředcích použity vysoce těkavá rozpouštědla jako ťso-propanol nebo ethanol pro umožnění rychlejšího odpařování prostředků z povrchů, když povrch není omyt po aplikaci prostředku na povrch „plnou silou“. Když se použijí, těkavá rozpouštědla jsou typicky v prostředku přítomna v hladinách od asi 2 % do asi 12 %.
- 60 ·» • 99 99 • · 9 · 9 9 · 9 9 9
9*9 9··· 9 9 ♦ * 9 9 9 9999 999 4
9 9 99 9 994
99«· 94 9· 9 9* 9949
Příklady provedení vynálezu
Příklady 1 až 6
Kapalné prostředky k čištění pevných povrchů
| Př. 1 | Př. 2 | Př. 3 | Př. 4 | Př. 5 | Př. 6 | |
| variant n109a | 0,05 % | 0,50 % | 0,02 % | 0,03 % | 0,30 % | 0,05 % |
| edta | - | - | 2,90 % | 2,90 % | - | - |
| Citrát sodný | - | - | - | - | 2,90 % | 2,90 % |
| NaCi2 alkyl benzen sulfonát | 1,95 % | ““ | 1,95 % | 1,95 % | ||
| NaCi2 alkyl sul fát | - | 2,20 % | - | 2,20 % | - | 2,20 % |
| NaCi2 (ethoxy) sulfát | 2,20 % | — | 2,20 % | — | 2,20 % | |
| C12 dimethylamin- oxi a | ·“ | 0,50 % | 0,50 % | 0,50 % | ||
| Kumen sulfonát sodný | 1,30 % | 1,30 % | 1,30 % | ·“ | ||
| Hexylkaroitol | 6,30 % | 6,30 % | 6,30 % | 6,30 % | 6,30 % | 6,30 % |
| Voda | 90,4 % | 88,3 % | 87,53 % | 85,87 % | 87,25 % | 85,85 % |
všechny formulace jsou nastaveny na pH 7.
Příklady 7 až 10
Kapalné detergenty k mytí nádobí
V jiném provedení vynálezu obsahují jeden nebo více variantů prostředky k mytí nádobí. Jak se zde používá, „prostředek k mytí nádobí“ odkazuje na veškeré formy prostředků k čištění nádobí včetně, ale bez omezení, granulárních a kapalných forem. Prostředky k mytí nádobí podle vynálezu jsou vysvětleny následujícími příklady.
• 4
- 61 ·· · • · 4 4«
44·« 4 444
4«4 44«·
4 4 4 4
| př. 7 | Př. 8 | Př. 9 | Př. 10 | |
| Variant I115A | 0,05 % | 0,50 % | 0,02 % | 0,40 % |
| C12-C14 N-methylglukosamid | 0,90 % | 0,90 % | 0,90 % | 0,90 % |
| C12 ethoxy(l) sulfát | 12,0 % | 12,0 % | 12,0 % | 12,0 % |
| Kyselina 2-methylundekanová | 4,50 % | 4,50 % | 4,50 % | 4,50 % |
| C12 etoxy(2)karboxylát | 4,50 % | 4,50 % | 4,50 % | 4,50 % |
| C12 alkoholethoxylát(4) | 3,00 % | 3,00 % | 3,00 % | 3,00 % |
| C12 aminoxid | 3,00 % | 3,00 % | 3,00 % | 3,00 % |
| Kumen sulfonát sodný | 2,00 % | 2,00 % | 2,00 % | 2,00 % |
| Ethanol | 4,00 % | 4,00 % | 4,00 % | 4,00 % |
| Mg2+ (jako MgCb) | 0,20 % | 0,20 % | 0,20 % | 0,20 % |
| ca2+ (jako Cách) | 0,40 % | 0,40 % | 0,40 % | “0,40 % |
| voda | 65,45 % | 65 % | 65,48 % | 65,1 % |
všechny formulace jsou nastaveny na pH 7.
Příklady 11 až 13
Kapalné prostředky k čištění tkanin
Kapalné prostředky k čištění tkanin podle vynálezu jsou vysvětleny následujícími příklady.
| Př. 11 | Př. 12 | Př. 13 | |
| Variant A116V | 0,05 % | 0,03 % | 0,30 % |
| C12-C14 alkyl sul fát sodný | 20,0 % | 20,0 % | 20,0 % |
| Kyselina 2-butyloktanová | 5,0 % | 5,0 % | 5,0 % |
| Citrát sodný | 1,0 % | 1,0 % | 1,0 % |
| C10 alkoholethoxylát(3) | 13,0 % | 13,0 % | 13,0 % |
| Monoethanolamin | 2,50 % | 2,50 % | 2,50 % |
| voda/propylenglykol/ethanol (100:1:1) | 58,45 % | 58,47 % | 58,20 % |
- 62 • · · ·« *· • · « » < · ♦ · · • · · · · 1 »····»· · · • · « · · • ·· · · * ·
Příklady 14 až 27
Prostředky péče o tělo
Varianty podle vynálezu jsou obzvlášť vhodné pro použití v prostředcích péče o tělo, jako jsou například depositní a smývací vlasové kondicionéry, šampony, depositní a smývací áprostředky proti akné, pleťové obličejová mléka a kondicionéry, sprchové gely, mýdla, pěnivé a nepěnivé prostředky k čištění obličeje, kosmetika, vody a zvlhčovače rukou, obličeje a těla, depositní zvlhčovače obličeje, kosmetické a čistící tampony, prostředky péče o oči a prostředky péče o kontaktní čočky. Prostředky péče o tělo zde obsahují jeden nebo více variantů podle vynálezu a nosič prostředku péče o tělo.
Pro vysvětlení: varianty podle vynálezu jsou vhodné k zařazení do prostředků popsaných v následujících odkazech. US patent čís. 5 641 479, Linares et al., vydaný 24. června 1997 (prostředky k čištění pokožky); US patent čís. 5 559 549, wivell et al., vydaný 4. února 1997 (prostředky k čištění pokožky); US patent čís. 5 585 104, Ha et al., vydaný 17. prosince 1996 (prostředky k čištění pokožky); US patent čís. 5 540 852, Kefauver et al., vydaný 30. července 1996 (prostředky k čištění pokožky); US patent čís. 5 510 050, Dunbar et al., vydaný 23. dubna 1996 (prostředky k čištění pokožky); US patent čís. 5 612 324, Guang Lín et al., vydaný
18. března 1997 (prostředky proti akné); US patent čís. 5 587 176, Warren et al., vydaný 24. prosince 1996 (prostředky proti akné); US patent čís. 5 549 888, venkateswaran et al., vydaný 27. srpna 1996 (prostředky proti akné); US patent čís. 5 470 884, Corless et al., vydaný 28. listopadu 1996 (prostředky proti akné); US patent čís. 5 650 384, Gordon et al., vydaný 22. července 1997 (sprchové gely); US patent čís. 5 650 384, Moore et al., vydaný 4. března 1997 (sprchové gely); US patent čís. 5 624 666, coffindaffer et al., vydaný 29. dubna 1997 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. 5 618 524, Bol lích et al., vydaný 8. dubna 1997 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. 5 612 301, Inman et al., vydaný 18. března 1997 (vlasové kondicionéry a šampony);
- 63 4 4 4 4 4 4 4
4 4 4 4 4 4
4444444 4 4
4 4 4 4 4
4 44 4 4 4 4
US patent čís. 5 573 709, Wells et al., vydaný 12. listopadu 1996 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. 5 482 703, Pings, vydaný 9. ledna 1996 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. Re. 34 584, Grote et al., znovu vydaný 12. dubna 1994 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. 5 641 493, Dáte et al., vydaný 24. června 1997 (vlasové kondicionéry a šampony); US patent čís. 5 605 894, Blank et al., vydaný 25. února 1997 (kosmetika); US patent čís. 5 585 090, Yoshioka et al., vydaný 17. prosince 1996 (kosmetika); US patent čís. 4 939 179, Cheney et al., vydaný
3. července 1990 (pleťové vody na ruce, obličej a tělo); US patent čís. 5 607 980, McAtee et al., vydaný 4. března 1997 (pleťové vody na ruce, obličej a tělo); US patent čís. 4 045 364, Richter et al., vydaný 30. srpna 1977 (kosmetické a čistící tampony); evropská patentová přihláška EP 0 619 074, Touchet et al., publikovaná 12. října 1994 (kosmetické a čistící tampony); US patent čís. 4 975 217, Brown-Skrobot et al., vydaný 4. prosince 1990 (kosmetické a čistící tampony); US patent čís. 5 096 700, Seibel, vydaný 17. března 1992 (prostředky ústní hygieny); US patent čís. 5 028 414, Sampathkumar, vydaný 2. července 1991 (prostředky ústní hygieny); US patent čís. 5 028 415, Benedict et al. , vydaný
2. července 1991 (prostředky ústní hygieny); US patent čís. 4 863 627, Davies et al., vydaný 5. září 1989 (roztoky k čištění kontaktních čoček); US patent čís. Re. 32 672, Huth et al., vydaný 24. května 1988 (roztoky k čištění kontaktních čoček); a US patent čís. 4 609 493, Davies et al., vydaný
2. září 1986 (roztoky k čištění kontaktních čoček).
K dalšímu vysvětlení prostředků ústní hygieny podle vynálezu: Do prostředků je zařazeno farmaceuticky přijatelné množství jednoho nebo více variantů podle vynálezu, jež jsou užitečné k odstraňování skvrn bílkovinného charakteru ze zubů nebo zubních náhrad. Jak se zde používá, „prostředky ústní hygieny“ odkazují na prostředky k čištění zubních náhrad, zubní pasty, zubní gely, zubní prášky, ústní vody, ústní spreje, ústní gely, žvýkačky, pastilky, parfémované ubrousky, tablety, biogely, profylaktické pasty, roztoky k ošetření zubů a podobně. Prostředky ústní hygieny obsahují s výhodou od asi
- 64 4« 44
I · 4 • · 44 ( · «φ Φ4 • 4 4 4 4 «
4 4 «4 * «444444 · 4
4 4 4 4 k 4 44 4444 zde používá, médi kamenty a
0,0001 % do asi 20 % jednoho nebo více variantů podle vynálezu, výhodněji od 0,001 % do asi 10 %, ještě výhodněji od asi 0,01 % do asi 5 %, podle hmotnosti prostředku, a farmaceuticky přijatelný nosič. Jak se „farmaceuticky přijatelný“ znamená, že léky, inertní složky, jež výraz popisuje, jsou vhodné pro použití v kontaktu s tkáněmi lidí nebo nižších živočichů bez nevhodné toxicity, nekompatibility, nestability, podráždění, alergické odezvy a podobně, s přiměřeným rozumným poměrem prospěchu a rizika.
Typicky budou farmaceuticky přijatelné orální čistící nosičové složky orálních čistících prostředků prostředku ústní hygieny tvořit obecně od asi 50 % do asi 99,99 %, výhodně od asi 65 % do asi 99,99 %, výhodněji od asi 65 % do asi 99 % hmotnosti prostředku.
Farmaceuticky přijatelné nosičové složky a případné další složky, jež mohou být obsaženy v prostředcích ústní hygieny podle vynálezu jsou dobře známé zběhlým v oboru, velká řada typů prostředků, nosičových složek a případných dalších složek je zveřejněna v odkazech citovaných zde shora.
V jiném provedení vynálezu obsahují prostředky k čištění zubních náhrad, pro použití mimo ústní dutinu, jeden nebo více variantů podle vynálezu. Takovéto prostředky čištění chrupu obsahují účinné množství jednoho nebo více variantů podle vynálezu, s výhodou od asi 0,0001 % do asi 50 % jednoho nebo více variantů podle vynálezu, výhodněji od 0,001 % do asi 35 %, ještě výhodněji od asi 0,01 % do asi 20 %, podle hmotnosti prostředku, a nosič čištění chrupu. Různé formáty prostředků k čištění chrupu, jako jsou efervescentní tablety a podobně, jsou v oboru dobře známé (viz např. US patent čís. 5 055 305, Young), a jsou obecně vhodné pro zařazení jednoho nebo více variantů k odstraňování skvrn bílkovinného charakteru z chrupu.
V jiném provedení vynálezu obsahují prostředky k čištění kontaktních čoček jeden nebo více variantů podle vynálezu. Takovéto prostředky čištění kontaktních čoček obsahují účinné množství jednoho nebo více variantů podle vynálezu, s výhodou od asi 0,01 % do asi 50 % jednoho nebo více variantů,
- 65 • * · • ·«« • · · • » · • ·· · 99 *
» · · • · · · • Λ * H·* • · · ·· 9 *· ·«
9 9 9
9 * « 9 9 9
9 9 »« 9999 výhodněji od 0,01 % do asi 20 %, ještě výhodněji od asi 1 % do asi 5 %, podle hmotnosti prostředku, a nosič čištění kontaktních čoček. Různé formáty prostředků k čištění konaktních čoček, jako jsou tablety, kapaliny a podobně, jsou v oboru dobře známé a jsou obecně vhodné pro zařazení jednoho nebo více variantů podle vynálezu k odstraňování skvrn bílkovinného charakteru z kontaktních čoček.
Provedení vynálezu jako čistících prostředků na kontaktní čočky je ilustrováno Příklady 14 - 17.
Roztok k čištění kontaktních čoček
| Př. 14 | Př. 15 | Př. 16 | Př. 17 | |
| Variant M119A | 0,01 % | 0,5 % | 0,1 % | 2,0 % |
| Glukosa | 50,0 % | 50,0 % | 50,0 % | 50,0 % |
| Neionická povrchově aktivní látka (polyoxyethylen - | 2,0 % | 2,0 % | 2,0 % | 2,0 % |
| Aniiomcka povrchově aktivní látka (polyoxyethylen - alkyl fenylether thioester, sodná sůl) | 1,0 % | 1,0 % | 1,0 % | 1,0 % |
| Chlorid sodný | 1,0 % | 1,0 % | 1,0 % | 1,0 % |
| Borax | 0,30 % | 0,30 % | 0,30 % | 0,30 % |
| voda | 45,69 % | 45,20 % | 45,60 % | 43,70 % |
- 66 Produkty k mytí těla
| Př. 18 | Př. 19 | Př. 20 | Př. 21 | |
| Voda | 62,62 % | 65,72 % | 57,72 % | 62,62 % |
| Dvoj sodná sůl EDTA | 0,2 % | 0,2 % | 0,2 % | “072 % |
| Glycerin | 3,0 % | 3,0 % | 3,0 % | 3,0 % |
| Polykvaternium 10 | 0,4 % | 0,4 % | 0,4 % | 0,4 % |
| Lauretsulfát sodný | 12,0 % | 12,0 % | 12,0 % | 12,0 % |
| Kokamid MEA | 2,8 % | 2,8 % | 2,8 % | 2,8 % |
| Laurafoacetát sodný | 6,0 % | 6,0 % | 6,0 % | 6,0 % |
| Kyselina myristylová | 1,6 % | 1,6 % | 1,6 % | 1,6 % |
| siran horečnatý, heptahydrát | 0,3 % | 0,3 % | 0,3 % | 0,3 % |
| Tri hydroxysteari n | 0,5 % | 0,5 % | 0,5 % | 0,5 % |
| PEG-6 kaprylová / kapronové tnglyceridy | 3,0 % | ”· | - | |
| Sacharosové polyestery kotonatové mastné kyseliny | 3,0 % | - | ||
| sacharosové polyestery behenatové mastné kyseliny | 3,0 % | 4,0 % | — | |
| vaselina | - | 4,0 % | 8,0 % | |
| Minerální olej | - | - | - | 6,0 % |
| DMDM hydantoin | 0,08 % | 0,08 % | 0,08 % | 0,08 % |
| Variant D120A | 0,1 % | 2,0 % | 2,0 % | 5,0 % |
| Kyselina citrónová | 1,40 % | 1,40 % | 1,40 % | 1,40 % |
- 67 • ·
Produkty k mytí obličeje
| Př. 22 | Př. 23 | Př. 24 | Př. 25 | |
| voda | 62,62 % | 65,17 % | 68,47 % | 68,72 % |
| Dvoj sodná sůl edta | 0,1 % | 0,1 % | 0,1 % | 0,1 % |
| Kyselina citrónová | - | — | 1,4 % | 1,4 % |
| Lauret-3 sulfát sodný | 3,0 % | 3,0 % | - | - |
| Lauret-4 karboxylát sodný | 3,0 % | 3,0 % | - | - |
| Laureth-12 | 1,0 % | 1,2 % | - | - |
| Polykvaternium 10 | - | - | 0,4 % | 0,4 % |
| Polykvaternium 25 | 0,3 % | 0,3 % | — | - |
| Glycerin | 3,0 % | 3,0 % | 3,0 % | 3,0 % |
| Laurafoacetát sodný | - | - | 6,0 % | 6,0 % |
| Kyselina laurová | 6,0 % | 6,0 % | 3,0 % | 3,0 % |
| Kyselina myristylová | - | - | 3,0 % | 3,0 % |
| Síran horečnatý, heptahydrát | 2,3 % | 2,0 % | 2,0 % | 2,0 % |
| Triethanolamin | 4,0 % | 4,0 % | 4,0 % | 4,0 % |
| Tri hydroxysteari n | 0,5 % | 0,5 % | 0,5 % | 0,5 % |
| Sacharosové polyestery behenatové mastné kyseliny | 2,0 % | 2,0 % | — | |
| sacharosové polyestery kotonatové mastné kyseliny | 3,0 % | 2,0 % | — | |
| peg-6 kapry!ová / kapronové triglyceridy | — | 2,0 % | ||
| vaselina | - | - | 4,0 % | — |
| Minerální olej | - | - | 2,0 % | |
| Kokami dop ropylbetai n | 2,0 % | 3,0 % | 1,8 % | 1,8 % |
| Lu ryldi methyloxi d | 1,0 % | 1,2 % | 1,2 % | 1,2 % |
| Dex panthenol | 1,0 % | 0,25 % | 0,25 % | |
| DMDM Hydantoin | 0,08 % | 0,08 % | 0,08 % | 0,08 % |
| variant A114* | 1,0 % | 2,0 % | 0,5 % | 0,5 % |
| Parfém | 0,2 % | 0,2 % | 0,2 % | 0,2 % |
- 68 • · · • · ··· ·
Prostředek ke zvlhčování pokožky, depositní
| Př. 26 | Př. 27 | |
| Glycerin | 5,0 % | |
| Kyselina stearová | 3,0 % | - |
| Cu.13 isoparafin | 2,0 % | - |
| Glykol stearát | 1,5 % | |
| Propylenglykol | - | 3,0 % |
| Minerální olej | 1,0 % | 10,0 % |
| Sezamový olej | - | 7,0 % |
| Vaselina | - | 1,8 % |
| Triethanolamin | 0,7 % | - |
| Cetylacetát | 0,65 % | - |
| Glyceryl stearát | 0,48 % | 2,0 % |
| TEA stearát | - | 2,5 % |
| Cetylalkohol | 0,47 % | - |
| Lano!in alkohol | - | 1,8 % |
| DEA-cetylfosfát | 0,25 % | — |
| Methylparaben | 0,2 % | 0,2 % |
| Propulparaben | 0,12 % | 0,1 % |
| Carbomer 934 | 0,11 % | — |
| Dvoj sodná sůl EDTA | 0,1 % | — |
| Variant N117A | 0,1 % | 0,5 % |
| voda | 84,32 % | 71,1 % |
·· ·· • · · ♦
- 69 Příklad 28
Prostředek čistících tamponů
| Propylenglykol | 1,0 % |
| Lurylsulfát, sodná sůl | 0,6 % |
| Kyselina jantarová | 4,0 % |
| Jantaran sodný | 3,2 % |
| Tri closan® | 0,15 % |
| Variant 1122a | 0,05 % |
| Voda | 91,0 % |
Prostředek shora se naimpregnuje do tkaného absorpčního tamponu z celu!osy a/nebo polyesteru v množství asi 250 % hmotnosti absorpčního tamponu.
• · . . · · > · · · · · .
» ······· · * »4 4 · · · • 4 4 44 4444
tím, že
- 70 - : :
« · 4 4 · ·
Claims (27)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Variant serinové proteasy, charakteristický řečený variant má aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, a modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším v jedné nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastech, kdeA) když substituce nastává v první epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125 a 126, kde1) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;
- 2) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Phe, Gly, His, Leu, Met, Pro, Gin, Trp a Tyr;
- 3) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze
skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; 4) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;5) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze v ·- 71 • · • · · · • · · · · • · · · ·· ·· skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val a Tyr;7) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;8) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;9) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Val, Trp a Tyr;10) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, ser, Thr, val, Trp a Tyr;11) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Pro, Gin, Arg, Thr, Trp a Tyr;12) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;13) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;14) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;15) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;16) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána zeskupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, val, Trp a Tyr; 17) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;18) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr; a19) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a- 73 • · · ·B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 221, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde1) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;2) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;3) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr; - 4) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Asn, Thr, Trp a Tyr;
- 5) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
- 6) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;
- 7) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, • aHis, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
- 8) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
- 9) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
- 10) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;
- 11) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
- 12) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
- 13) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
- 14) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;- 75 • · · · • · · ♦ » · ♦ · · · » · ······· · 9 • · 119 • · · · · · ·
- 15) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;
- 16) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
- 17) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
- 18) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
- 19) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Leu, Met, Pro, Gin, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;
- 20) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr a val;
- 21) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;
- 22) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,- 76 4 4 44 > 4 44 4 4444 4«4 * · ’4 4 <Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;
- 23) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, val, Trp a Tyr;
- 24) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a
- 25) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Trp a Tyr.2. Variant proteasy podobné subtilisinu, charakteristický tím, že řečený variant má aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, a modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším v jedné nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastech, kdeA) když substituce nastává v první epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 a 125, kde1) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;9· ··-77 ·« • 9 ♦ • ··· »· 9 • 9 99 9 9 9 • · · · · 99 9 999 99 · · • · · • 9999 99·92) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;3) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;4) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;5) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val a Tyr;7) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;8) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;9) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe,- 78 • 4· ·· • · · · · · * « « ♦ · · ··»···* · · • · » · · • ·4 ·»··Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;10) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;11) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;12) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;13) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;14) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;15) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;16) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;·· 999 99 • 9 9 99 · *9 · ·9 · ·99 99··17) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a18) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr.b) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti v jedné nebo více z posic 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde1) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;2) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;3) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;4) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;• · ·* ·- 80 • · · • · ·♦ ♦ · • · • W · · · « ·· ·»··5) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;6) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;7) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;8) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;9) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;10) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;11) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;12) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe,- 81 • ·9 9 9 ·· ··*· • · ♦Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;13) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;14) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;15) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;16) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;17) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;18) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;19) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;• ·20) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;21) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;22) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;23) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;24) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;25) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a
- 26) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr.- 83 «« • · 99 9··9 9 9 99 9 99 9·· 9· r· 09 · · • 0 0 00 0 00000 0 000 »00 00 • 0 0 ♦ • 0 »0 0« *0 0 000 00003. Variant proteasy podobné subtilisinu, charakteristický tím, že řečený variant má aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast, druhou epitopovou oblast a třetí epitopovou oblast, a modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou v jedné nebo více posicích ve dvou nebo více epitopových oblastech, kdeA) když substituce nastává v první epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 a 125 kde1) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;2) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;3) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;4) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;- 84 5) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;6) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;7) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;8) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;9) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;10) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;11) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;12) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu,- 85 Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;13) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;14) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;15) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;16) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;17) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a18) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231,232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241,242, 243, 244, 245 a 246, kde1) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;2) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Asn, Pro, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;3) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;4) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;5) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;6) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;7) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;8) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze4 4 skupiny sestávající z Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;9) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;10) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;11) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;12) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;13) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;14) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;15) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;- 88 • · · · · · ·16) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;17) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;18) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;19) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;20) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;21) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;22) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Val, Trp a Tyr;23) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, • ·· ·· ·«· ··· · · ♦ • ··· · ··· · ·-89- w· j j * ; ; ··;· · ; i .······ ·· · ·····Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;24) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn,Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;25) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn,Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a26) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn,Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr; aC) když substituce nastává v třetí epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79,80, 81, 82, 83 a 84, kde1) když substituce nastává v posici 70, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp,Cys, Gin, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu,Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;2) když substituce nastává v posici 71, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp,Cys, Gin, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu,Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;3) když substituce nastává v posici 72, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp,Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys,Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, a Tyr;• · ·- 90 • · ·4) když substituce nastává v posici 73, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;5) když substituce nastává v posici 74, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;6) když substituce nastává v posici 75, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;7) když substituce nastává v posici 76, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, cys, ile, Leu, Met, Gin, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;8) když substituce nastává v posici 77, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Cys, Glu, Gin, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;9) když substituce nastává v posici 78, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Thr, Trp, Tyr a val;10) když substituce nastává v posici 79, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Gly, Phe, His, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;11) když substituce nastává v posici 80, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, « «- 91 cys, Gin, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val;12) když substituce nastává v posici 81, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, a Tyr;13) když substituce nastává v posici 82, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;14) když substituce nastává v posici 83, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, cys, Gin, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a val;15) když substituce nastává v posici 84, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp a Tyr.4. Variant podle kteréhokoli z předcházejících nároků, kde modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou ve dvou nebo více posicích ve dvou nebo více epitopových oblastech.5. Variant podle kteréhokoli z předcházejících nároků, kde serinová proteasa je vybrána ze skupiny sestávající ze subtilisinu BPN', subtilisinu Carlsberg, subtilisinu DY, subtilisinu 309, proteinasy K a termitasy, a kde řečený variant dále obsahuje jednu nebo více stabilizujících mutací.• · _ 92 - «····· ·.·. . · ······ · * · ·6. Variant podle kteréhokoli z předcházejících nároků, kde modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou ve třech nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastech.7. čistící prostředek vyznačující se tím, ž e obsahuje variant podle nároku 1 a nosič čistícího prostředku.8. Prostředek péče o tělo vyznačující se tím, ž e řečený prostředek obsahuje nosič prostředku péče o tělo a variant proteasy podobné subtilisinu, jenž má aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast a druhou epitopovou oblast, a modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším v jedné nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastech, kdeA) když substituce nastává v první epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113,114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123,124, 125 a 126, kde1) když substituce nastává v posici 103, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;2) když substituce nastává v posici 104, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Trp;• *3) když substituce nastává v posici 105, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;4) když substituce nastává v posici 106, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val a Tyr;5) když substituce nastává v posici 107, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;6) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;7) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;8) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;9) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;10) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, « ·-94- **;* * :······ ·· · ··Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;11) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val a Tyr;12) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;13) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;14) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;15) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;16) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;17) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;- 95 »* • ·· • · · • · · • · · • · ··· ·18) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;19) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;20) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;21) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;22) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;23) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr; a24) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu,- 96 Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; aB) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde1) když substituce nastává v posici 220, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;2) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;3) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;4) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;5) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;6) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, ·· 9- 97 ·· ·· * · · • ·«·9 9 ·9999 9999 999 9 9 99 9 · • 9 · • ♦ · ·· 9999Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;7) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;8) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;9) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;10) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;11) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;12) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;13) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;- 98 ·* 99 • 9 · • ··· • 9 999 9 9 · • · * ····14) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;15) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;16) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;17) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;18) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;19) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;20) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;21) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,- 99 ·« ·· k · · • ···Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;22) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;23) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;24) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;25) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;26) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a
- 27) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr.• 4 ·· • 4 4 ·4 4 44 4 44 4·44 4444-100• 4 · « · · Μ· • · · · · ·4444 ·· ·· ·9. Prostředek péče o tělo vyznačující se tím, ž e řečený prostředek obsahuje nosič prostředku péče o tělo a variant proteasy podobné subtilisinu, jenž má aminokyselinovou sekvenci modifikovanou z aminokyselinové sekvence divokého typu, přičemž aminokyselinová sekvence divokého typu obsahuje první epitopovou oblast, druhou epitopovou oblast a třetí epitopovou oblast, a modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci substituující aminokyselinou přinejmenším ve dvou nebo více posicích v jedné nebo více epitopových oblastech, kdeA) když substituce nastává v první epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125 a 126, kde1) když substituce nastává v posici 103, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;2) když substituce nastává v posici 104, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Trp;3) když substituce nastává v posici 105, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;4) když substituce nastává v posici 106, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val a Tyr;-101• Φ ·· ·· · φφ ·· φ · · φ · φ · ·* φ · ···· φ · φ · φφ * φ φ φ · · ·»···· φ φ · φφφ φφφ φφφ ···· ·· φφ φ φφ φφφφ5) když substituce nastává v posici 107, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;6) když substituce nastává v posici 108, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;7) když substituce nastává v posici 109, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, His, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Pro,Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;8) když substituce nastává v posici 110, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;9) když substituce nastává v posici 111, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;10) když substituce nastává v posici 112, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe,Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro,Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;11) když substituce nastává v posici 113, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn,Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val a Tyr;12) když substituce nastává v posici 114, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe,-102Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;13) když substituce nastává v posici 115, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;14) když substituce nastává v posici 116, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;15) když substituce nastává v posici 117, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;16) když substituce nastává v posici 118, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;17) když substituce nastává v posici 119, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;18) když substituce nastává v posici 120, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;19) když substituce nastává v posici 121, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, lle, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Pro, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;*-10320) když substituce nastává v posici 122, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;21) když substituce nastává v posici 123, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;22) když substituce nastává v posici 124, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;23) když substituce nastává v posici 125, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr; a24) když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr; a když substituce nastává v posici 126, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a • ·-104- ·..* : ·· ··B) když substituce nastává v druhé epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 a 246, kde1) když substituce nastává v posici 220, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;2) když substituce nastává v posici 221, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;3) když substituce nastává v posici 222, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;4) když substituce nastává v posici 223, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;5) když substituce nastává v posici 224, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;6) když substituce nastává v posici 225, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;• ·-1057) když substituce nastává v posici 226, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;8) když substituce nastává v posici 227, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;9) když substituce nastává v posici 228, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;10) když substituce nastává v posici 229, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;11) když substituce nastává v posici 230, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;12) když substituce nastává v posici 231, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;13) když substituce nastává v posici 232, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;14) když substituce nastává v posici 233, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, • ·-106Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;15) když substituce nastává v posici 234, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;16) když substituce nastává v posici 235, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;17) když substituce nastává v posici 236, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Val, Trp a Tyr;18) když substituce nastává v posici 237, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;19) když substituce nastává v posici 238, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;20) když substituce nastává v posici 239, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;21) když substituce nastává v posici 240, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;• ·22) když substituce nastává v posici 241, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;23) když substituce nastává v posici 242, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;24) když substituce nastává v posici 243, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;25) když substituce nastává v posici 244, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, val, Trp a Tyr;26) když substituce nastává v posici 245, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr; a27) když substituce nastává v posici 246, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;C) když substituce nastává v třetí epitopové oblasti, substituce nastává v jedné nebo více z posic 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 a 84, kde • ·-1081) když substituce nastává v posici 70, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;2) když substituce nastává v posici 71, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Val, Trp a Tyr;3) když substituce nastává v posici 72, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;4) když substituce nastává v posici 73, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, Ser, val, Trp a Tyr;5) když substituce nastává v posici 74, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;6) když substituce nastává v posici 75, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, val, Trp a Tyr;7) když substituce nastává v posici 76, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;8) když substituce nastává v posici 77, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu,-109• · • · ··Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro,Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;9) když substituce nastává v posici 78, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Thr, val, Trp a Tyr;10) když substituce nastává v posici 79, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;11) když substituce nastává v posici 80, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, val, Trp a Tyr;12) když substituce nastává v posici 81, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Trp a Tyr;13) když substituce nastává v posici 82, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, ser, Thr, Val, Trp a Tyr;14) když substituce nastává v posici 83, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr;15) když substituce nastává v posici 84, substituující aminokyselina je vybrána ze skupiny sestávající z Ala, cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Trp a Tyr.4 ·-11010. Prostředek péče o tělo vyznačující se tím, že obsahuje variant podle nároku 1 a nosič prostředku péče o tělo.11. Čistící prostředek vyznačující se tím, ž e obsahuje variant podle nároku 3 a nosič čistícího prostředku.12. Prostředek péče o tělo vyznačující se tím, že obsahuje variant podle nároku 3 a nosič prostředku péče o tělo.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14498099P | 1999-07-22 | 1999-07-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2002212A3 true CZ2002212A3 (cs) | 2002-07-17 |
Family
ID=22511053
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2002212A CZ2002212A3 (cs) | 1999-07-22 | 2000-07-11 | Varianty subtilisinové proteasy mající aminokyselinové substituce v definovaných epitopových oblastech |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6586223B1 (cs) |
| EP (1) | EP1210415A2 (cs) |
| JP (1) | JP2003505070A (cs) |
| KR (1) | KR20020021398A (cs) |
| CN (1) | CN1399677A (cs) |
| AU (1) | AU6085800A (cs) |
| BR (1) | BR0012660A (cs) |
| CA (1) | CA2376045A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ2002212A3 (cs) |
| MX (1) | MXPA02000840A (cs) |
| WO (1) | WO2001007578A2 (cs) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL210859B1 (pl) * | 2001-03-23 | 2012-03-30 | Genencor Int | Odmiana subtylizyny zawierająca zmieniony epitop limfocytów T, kwas nukleinowy kodujący tę odmianę subtylizyny, wektor ekspresyjny i komórka gospodarza zawierająca kwas nukleinowy oraz kompozycje zawierające tę odmianę subtylizyny |
| DK200101090A (da) | 2001-07-12 | 2001-08-16 | Novozymes As | Subtilase variants |
| BR0215383A (pt) * | 2001-12-31 | 2006-11-28 | Genencor Int | proteases que produzem resposta imunogênica alterada e métodos de fabricação e uso das mesmas |
| WO2003062380A2 (en) * | 2002-01-16 | 2003-07-31 | Genencor International, Inc. | Multiply-substituted protease variants |
| DK1523553T3 (da) * | 2002-01-16 | 2010-04-19 | Genencor Int | Multi-substituerede proteasevarianter |
| US7888093B2 (en) * | 2002-11-06 | 2011-02-15 | Novozymes A/S | Subtilase variants |
| EP2500423B1 (en) | 2003-02-26 | 2015-06-17 | Danisco US Inc. | Amylases producing an altered immunogenic response and methods of making and using the same |
| CN1745169A (zh) | 2003-02-26 | 2006-03-08 | 金克克国际有限公司 | 产生改变的免疫原应答的淀粉酶及其制备和使用方法 |
| AU2003901917A0 (en) * | 2003-04-22 | 2003-05-08 | Novapharm Research (Australia) Pty Ltd | Endoscope cleaning pad |
| EP1735433B1 (en) * | 2004-04-02 | 2010-12-08 | Novozymes A/S | Subtilase variants having altered immunogenicity |
| US20090060933A1 (en) * | 2004-06-14 | 2009-03-05 | Estell David A | Proteases producing an altered immunogenic response and methods of making and using the same |
| WO2009149144A2 (en) * | 2008-06-06 | 2009-12-10 | Danisco Us Inc. | Compositions and methods comprising variant microbial proteases |
| US20100192985A1 (en) * | 2008-11-11 | 2010-08-05 | Wolfgang Aehle | Compositions and methods comprising serine protease variants |
| EP2362896A2 (en) | 2008-11-11 | 2011-09-07 | Danisco US Inc. | Bacillus subtilisin comprising one or more combinable mutations |
| MX339581B (es) * | 2009-09-25 | 2016-06-01 | Novozymes As | Variantes de subtilasa. |
| JP5863666B2 (ja) * | 2009-12-09 | 2016-02-17 | ダニスコ・ユーエス・インク | プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法 |
| KR200453956Y1 (ko) * | 2009-12-17 | 2011-06-13 | 진정욱 | 렌즈 고정구조를 갖는 반테안경 |
| WO2016096711A2 (en) * | 2014-12-15 | 2016-06-23 | Novozymes A/S | Subtilase variants |
| CN109481336B (zh) * | 2018-12-19 | 2021-10-26 | 广州立白企业集团有限公司 | 口腔护理组合物及其应用 |
Family Cites Families (83)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE795238A (fr) | 1972-02-09 | 1973-08-09 | Schering Ag | Derives d'insuline reticules de maniere intramoleculaire, leur procede de preparation et leur utilisation |
| US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| DE2631656C2 (de) | 1976-07-14 | 1983-02-10 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verwendung eines Hydroxysuccinimidoester-Derivats zur Bindung von biologisch aktiven Proteinen aneinander und/oder an flüssige oder feste Trägerstoffe |
| HU182981B (en) | 1978-07-04 | 1984-03-28 | Novo Industri As | Process for producing protease consentrate |
| US4556554A (en) | 1981-06-01 | 1985-12-03 | Germaine Monteil Cosmetiques Corp. | Immobilized enzymes |
| NZ208612A (en) | 1983-06-24 | 1991-09-25 | Genentech Inc | Method of producing "procaryotic carbonyl hydrolases" containing predetermined, site specific mutations |
| US4760025A (en) | 1984-05-29 | 1988-07-26 | Genencor, Inc. | Modified enzymes and methods for making same |
| US5155033A (en) * | 1989-01-06 | 1992-10-13 | Genencor, Inc. | Subtilisins modified at position 225 resulting in a shift in catalytic activity |
| US4732863A (en) | 1984-12-31 | 1988-03-22 | University Of New Mexico | PEG-modified antibody with reduced affinity for cell surface Fc receptors |
| US4844897A (en) | 1985-09-13 | 1989-07-04 | Hiroshi Maeda | Anti-tumor protease preparations |
| WO1987004461A1 (en) | 1986-01-15 | 1987-07-30 | Amgen | THERMALLY STABLE AND pH STABLE SUBTILISIN ANALOGS AND METHOD FOR PRODUCTION THEREOF |
| US4980288A (en) | 1986-02-12 | 1990-12-25 | Genex Corporation | Subtilisin with increased thermal stability |
| US4908773A (en) | 1987-04-06 | 1990-03-13 | Genex Corporation | Computer designed stabilized proteins and method for producing same |
| WO1987005050A1 (en) | 1986-02-12 | 1987-08-27 | Genex Corporation | Mutagenesis and screening method and product |
| DE3750916T2 (de) | 1986-04-30 | 1995-06-01 | Genencor Int | Mutante einer nicht menschlichen Carbonyl-Hydrolase, für diese kodierende DNS-Sequenzen und Vektoren und durch diese Vektoren transformierte Wirte. |
| NZ221627A (en) | 1986-09-09 | 1993-04-28 | Genencor Inc | Preparation of enzymes, modifications, catalytic triads to alter ratios or transesterification/hydrolysis ratios |
| WO1988007578A1 (en) | 1987-04-02 | 1988-10-06 | Genentech, Inc. | Substrate assisted catalysis |
| WO1988008028A1 (en) | 1987-04-06 | 1988-10-20 | Genex Corporation | The engineering of electrostatic interactions at metal ion binding sites for the stabilization of proteins |
| US4853871A (en) | 1987-04-06 | 1989-08-01 | Genex Corporation | Computer-based method for designing stablized proteins |
| US4914031A (en) | 1987-04-10 | 1990-04-03 | Amgen, Inc. | Subtilisin analogs |
| DK6488D0 (da) * | 1988-01-07 | 1988-01-07 | Novo Industri As | Enzymer |
| US5543302A (en) | 1988-05-27 | 1996-08-06 | Solvay Enzymes, Inc. | Proteases of altered stability to autolytic degradation |
| JPH02219571A (ja) | 1989-02-20 | 1990-09-03 | Kanebo Ltd | 修飾プロテアーゼ及びその製造法 |
| US5122614A (en) | 1989-04-19 | 1992-06-16 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
| US5324844A (en) | 1989-04-19 | 1994-06-28 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
| KR100188532B1 (ko) | 1989-05-17 | 1999-06-01 | 스티븐 엠. 오드리 | 돌연변이 섭티리신 및 그를 함유하는 조성물 |
| US5665587A (en) * | 1989-06-26 | 1997-09-09 | Novo Nordisk A/S | Modified subtilisins and detergent compositions containing same |
| ES2227508T3 (es) * | 1989-06-26 | 2005-04-01 | Unilever N.V. | Composiciones detergentes enzimaticas. |
| US5658871A (en) | 1989-07-07 | 1997-08-19 | Lever Brothers Company, Division Of Conopco, Inc. | Microbial lipase muteins and detergent compositions comprising same |
| DK97190D0 (da) | 1990-04-19 | 1990-04-19 | Novo Nordisk As | Oxidationsstabile detergentenzymer |
| US5133968A (en) | 1990-08-20 | 1992-07-28 | Kanebo, Ltd. | Modified protease, method of producing the same and cosmetic products containing the modified protease |
| US5230891A (en) | 1990-08-20 | 1993-07-27 | Kanebo Limited | Modified protease, method of producing the same and cosmetic products containing the modified protease |
| US5766898A (en) | 1990-12-05 | 1998-06-16 | Novo Nordisk A/S | Proteins with changed epitopes and methods for the production thereof |
| CA2095852C (en) * | 1990-12-05 | 2001-05-08 | Uffe Lovborg | Proteins with changed epitopes and methods for the production thereof |
| ES2090481T3 (es) | 1991-05-01 | 1996-10-16 | Unilever Nv | Composiciones detergentes que contienen enzimas estabilizadas. |
| US5340735A (en) * | 1991-05-29 | 1994-08-23 | Cognis, Inc. | Bacillus lentus alkaline protease variants with increased stability |
| US5414135A (en) | 1991-12-30 | 1995-05-09 | Sterling Winthrop Inc. | Vinyl sulfone coupling of polyoxyalkylenes to proteins |
| IT1260468B (it) | 1992-01-29 | 1996-04-09 | Metodo per mantenere l'attivita' di enzimi proteolitici modificati con polietilenglicole | |
| GB9207280D0 (en) | 1992-04-02 | 1992-05-13 | Unilever Plc | Skin care method and composition |
| GB9207288D0 (en) | 1992-04-02 | 1992-05-13 | Unilever Plc | Cosmetic composition |
| ES2290976T3 (es) | 1992-06-05 | 2008-02-16 | The Scripps Research Institute | D-proteina ligada y metodo para identificar compuestos que modulan la actividad de receptores. |
| WO1994004193A1 (en) | 1992-08-21 | 1994-03-03 | Enzon, Inc. | Novel attachment of polyalkylene oxides to bio-effecting substances |
| CA2101361A1 (en) | 1992-08-27 | 1994-02-28 | Robert A. Snow | Low diol polyalkylene oxide biologically active proteinaceous substances |
| US5470733A (en) * | 1993-06-01 | 1995-11-28 | University Of Maryland | Calcium free subtilisin mutants |
| US5567601A (en) | 1993-06-01 | 1996-10-22 | University Of Maryland | Subtilisin mutants lacking a primary calcium binding site |
| US6436690B1 (en) * | 1993-09-15 | 2002-08-20 | The Procter & Gamble Company | BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis wherein one or more loop regions are substituted |
| BR9407502A (pt) | 1993-09-15 | 1997-01-07 | Procter & Gamble | Variantes subtilisina bpn com adsorção diminuída e hidrólise aumentada |
| MA23346A1 (fr) | 1993-10-14 | 1995-04-01 | Genencor Int | Variantes de la subtilisine |
| US6187579B1 (en) | 1993-10-28 | 2001-02-13 | Carlsberg A/S | Customized proteases |
| US5446090A (en) | 1993-11-12 | 1995-08-29 | Shearwater Polymers, Inc. | Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules |
| ZA952220B (en) | 1994-05-02 | 1995-12-14 | Procter & Gamble | Bpn' variants having decreased adsorption and increased hydrolysis wherein one or more loop regions are substituted |
| US5629384A (en) | 1994-05-17 | 1997-05-13 | Consiglio Nazionale Delle Ricerche | Polymers of N-acryloylmorpholine activated at one end and conjugates with bioactive materials and surfaces |
| AU3924095A (en) | 1994-11-24 | 1996-06-17 | Novo Nordisk A/S | A process for producing polypeptides with reduced allergenicity |
| AU697440B2 (en) | 1994-12-07 | 1998-10-08 | Novozymes A/S | Polypeptide with reduced allergenicity |
| ATE257844T1 (de) | 1995-03-10 | 2004-01-15 | Nakamura Toshikazu | Menschlicher wachstumsfaktor (hgf), verändert durch polyethylenglykol |
| AU5893696A (en) | 1995-06-07 | 1996-12-30 | Novo Nordisk A/S | Modification of polypeptides |
| AU5893796A (en) | 1995-06-07 | 1996-12-30 | Novo Nordisk A/S | Modification of polypeptides |
| DE19530816A1 (de) | 1995-08-23 | 1997-02-27 | Cognis Bio Umwelt | Verwendung von mutierter Subtilisin-Protease in kosmetischen Produkten |
| CA2241593A1 (en) | 1995-12-29 | 1997-07-10 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising immobilized enzymes |
| WO1997024421A2 (en) | 1995-12-29 | 1997-07-10 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising immobilized enzymes |
| CN1273589C (zh) | 1996-02-15 | 2006-09-06 | 诺沃奇梅兹有限公司 | 多肽缀合 |
| US6946280B1 (en) | 1996-03-29 | 2005-09-20 | Genencor International, Inc. | Enzyme multimer and process of producing same |
| US6060546A (en) * | 1996-09-05 | 2000-05-09 | General Electric Company | Non-aqueous silicone emulsions |
| CA2273079C (en) | 1996-11-26 | 2012-04-10 | Genencor International, Inc. | Chemically modified subtilisin mutants |
| JP2002510963A (ja) | 1997-01-10 | 2002-04-09 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | スキンケア用酵素修飾体 |
| JP2001511162A (ja) | 1997-02-06 | 2001-08-07 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 付加され、そして／又は除去された付着基を有するポリペプチド−ポリマー結合体 |
| WO1999000489A1 (en) | 1997-06-25 | 1999-01-07 | Novo Nordisk A/S | A modified polypeptide |
| AR016969A1 (es) * | 1997-10-23 | 2001-08-01 | Procter & Gamble | VARIANTE DE PROTEASA, ADN, VECTOR DE EXPRESIoN, MICROORGANISMO HUESPED, COMPOSICIoN DE LIMPIEZA, ALIMENTO PARA ANIMALES Y COMPOSICIoN PARA TRATAR UN TEXTIL |
| US5972339A (en) | 1997-11-13 | 1999-10-26 | The General Hospital Corporation | Method of eliciting anti-HIV-1 helper T cell responses |
| GB9727262D0 (en) | 1997-12-24 | 1998-02-25 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| KR20010040397A (ko) | 1998-01-23 | 2001-05-15 | 마가렛 에이.혼 | 개질된 효소 및 펩티드 합성에 이들을 사용하는 용도 |
| CA2320960A1 (en) | 1998-02-11 | 1999-08-19 | Maxygen, Inc. | Optimization of immunomodulatory properties of genetic vaccines |
| EP1053015A2 (en) | 1998-02-12 | 2000-11-22 | American Cyanamid Company | Pneumococcal and meningococcal vaccines formulated with interleukin-12 |
| WO1999042098A1 (en) | 1998-02-24 | 1999-08-26 | Dovetail Technologies Inc. | Small molecules that increase the conversion of food to body weight gain |
| US5985264A (en) | 1998-03-05 | 1999-11-16 | The Medical College Of Ohio | IL-12 Stimulation of Neonatal immunity |
| AU747917B2 (en) | 1998-03-05 | 2002-05-30 | Medical College Of Ohio, The | Enhancement of immunity by intranasal inoculation of IL-12 |
| US6328967B1 (en) | 1998-03-12 | 2001-12-11 | Allergenics, Inc. | Delivery system to modulate immune response |
| US6495136B1 (en) | 1998-03-26 | 2002-12-17 | The Procter & Gamble Company | Proteases having modified amino acid sequences conjugated to addition moieties |
| BR9909130A (pt) * | 1998-03-26 | 2000-12-19 | Procter & Gamble | Variantes de protease de serina tendo substituições de amino-ácido |
| US6835550B1 (en) * | 1998-04-15 | 2004-12-28 | Genencor International, Inc. | Mutant proteins having lower allergenic response in humans and methods for constructing, identifying and producing such proteins |
| WO2000009707A1 (en) | 1998-06-24 | 2000-02-24 | Genencor International, Inc. | Cellulase producing actinomycetes, cellulase produced therefrom and method of producing same |
| AU772427B2 (en) | 1998-11-10 | 2004-04-29 | Genencor International, Inc. | Chemically modified mutant serine hydrolases show improved catalytic activity and chiral selectivity |
| DE69941223D1 (de) | 1998-12-21 | 2009-09-17 | Billig Fritz | Chemisch modifizierte enzymen mit mehrfachgeladenen varianten |
-
2000
- 2000-07-11 CA CA002376045A patent/CA2376045A1/en not_active Abandoned
- 2000-07-11 KR KR1020027000949A patent/KR20020021398A/ko not_active Ceased
- 2000-07-11 JP JP2001512849A patent/JP2003505070A/ja not_active Abandoned
- 2000-07-11 EP EP00947205A patent/EP1210415A2/en not_active Withdrawn
- 2000-07-11 MX MXPA02000840A patent/MXPA02000840A/es unknown
- 2000-07-11 CZ CZ2002212A patent/CZ2002212A3/cs unknown
- 2000-07-11 CN CN00810747A patent/CN1399677A/zh active Pending
- 2000-07-11 AU AU60858/00A patent/AU6085800A/en not_active Abandoned
- 2000-07-11 BR BR0012660-8A patent/BR0012660A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-07-11 WO PCT/US2000/018868 patent/WO2001007578A2/en not_active Ceased
- 2000-07-18 US US09/618,573 patent/US6586223B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2376045A1 (en) | 2001-02-01 |
| JP2003505070A (ja) | 2003-02-12 |
| CN1399677A (zh) | 2003-02-26 |
| WO2001007578A3 (en) | 2002-04-11 |
| EP1210415A2 (en) | 2002-06-05 |
| MXPA02000840A (es) | 2002-07-30 |
| US6586223B1 (en) | 2003-07-01 |
| KR20020021398A (ko) | 2002-03-20 |
| WO2001007578A2 (en) | 2001-02-01 |
| AU6085800A (en) | 2001-02-13 |
| BR0012660A (pt) | 2002-04-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6569663B1 (en) | Serine protease variants having amino acid substitutions | |
| US6495136B1 (en) | Proteases having modified amino acid sequences conjugated to addition moieties | |
| US6586223B1 (en) | Subtilisin protease variants having amino acid substitutions in defined epitope regions | |
| US6586224B1 (en) | Subtilisin protease variants having amino acid deletions and substitutions in defined epitope regions | |
| AU750336B2 (en) | Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions | |
| US6566115B1 (en) | Protease conjugates having sterically protected clip sites | |
| US6946128B1 (en) | Protease conjugates having sterically protected epitope regions | |
| AU5928300A (en) | Protease conjugates having sterically protected epitope regions | |
| US6908757B1 (en) | Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions | |
| CZ20003397A3 (cs) | Varianta serinové proteázy; prostředek pro osobní hygienu, čistící prostředek, mutovaný gen | |
| AU5928200A (en) | Intramolecularly cross-linked subtilisin proteases having reduced immunogenicity | |
| CZ20003394A3 (cs) | Varianta serinové proteázy, mutovaný gen, prostředek pro osobní hygienu | |
| CZ20003396A3 (cs) | Proteázový konjugát a prostředek osobní hygieny | |
| MXPA00009442A (en) | Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions | |
| MXPA00009385A (en) | Protease conjugates |