CZ2002831A3

CZ2002831A3 - Nearomatické estrogenní steroidy

Info

Publication number: CZ2002831A3
Application number: CZ2002831A
Authority: CZ
Inventors: Hubert Jan Jozef Loozen; Gerrit Herman Veeneman; Wilhelmus Gerardus Eduardus Joseph Schoonen
Original assignee: Akzo Nobel N. V.
Priority date: 1999-09-06
Filing date: 2000-08-28
Publication date: 2002-05-15
Also published as: ES2241657T3; CA2382489C; CN1372565A; JP2003508541A; CN1185249C; EP1224204A1; WO2001018027A1; DE60020260D1; US6677329B1; HUP0202595A2; ECSP013947A; DE60020260T2; EP1224204B1; KR20020092907A; IL148116A0; HUP0202595A3; CA2382489A1; AU770331B2; ATE295851T1; ZA200201250B

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nearomatických estrogenních steroidů se steroidní kostrou, obsahující nearomatický kruh A· a hydroxylovou skupinu na atomu uhlíku v poloze 3. Tyto estrogenní látky je možno využít při antikoncepci a při léčení poruch, spojených s nedostatkem estrogenů, například v potížích v menopauze a při osteoporóze.

Dosavadní stav techniky

Je známa velká řada estrogenních sloučenin.

Například v US 3413287 je uvedena řada estrogenních látek s nearomatickým kruhem A a s volnou nebo substituovanou hydroxylovou skupinou na atomu uhlíku v poloze 3. V řadě dalších dokumentů se popisují estrogenní nebo jiné hormonální účinky nearomatických steroidů s hydroxylovou skupinou v poloze 3 a s dvojnou vazbou v poloze 4, 5. Jde například o WO 94 18224, US 3465010, FR 2099385, US 3657606 a EP 145493. Dokumentem, v němž se popisují nearomatické steroidy se ketoskupinou v poloze 3 a dvojnou vazbou v poloze 5, 10, je US 3377366 (Baran a další). Tyto látky jsou obecně popisovány jako látky, které mimo jiné mají estrogenní nebo antiestrogenní účinky. V poslední době se při výzkumu látek, které působí na receptory estrogenů ER výzkum zaměřuje na dva odlišné typy receptorů estrogenů, které se označují ERa ERp podle publikace Mosselman a další, FEBS Letters 392, 1996, 49-53, tytéž receptory jsou popsány také v EP 798378. Vzhledem k tomu, že tyto receptory mají v lidských tkáních odlišnou distribuci, znamená zjištění • · · · • · · · látek se selektivní afinitou pro některý z těchto receptoru důležitý technický pokrok vzhledem k tomu, že tímto způsobem lze umožnit selektivnější léčení poruch, spojených s nedostatkem estrogenů, čímž je možno se vyvarovat zbytečných vedlejších účinků.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří nearomatické estrogenní steroidy obecného vzorce I

kde

R¹ znamená atom vodíku, Cl-C3alkyl nebo C2-C3acyl,

R² znamená atom vodíku, cc-Cl-C4alkyl, ct-C2-C4alkenyl nebo cc-C2-C4alkinyl,

R³ znamená atom vodíku, Cl-C4alkyl, C2-C4alkenyl nebo C2-C4alkinyl v poloze 15 nebo 16 steroidní struktury,

R⁴ znamená atom vodíku, Cl-C5alkyl, C2-C5alkenyl nebo C2-C5alkinyl, vždy popřípadě substituované atomem halogenu, výhodnou skupinou je ethinyl,

R⁵ znamená atom vodíku, Cl-C3alkyl nebo C2-C3acyl,

R⁶ znamená Cl-C5alkyl, C2-C5alkenyl nebo C2-C5alkinyl nebo Cl-C5alkylidenovou skupinu, vždy popřípadě substituované atomem halogenu nebo Cl-C3alkyloxyskupinou, výhodnou skupinou je allyl a výhodným halogenem ve skupinách ve významu R⁶ je atom fluoru a chloru.

• · • · · · · · • · · · ·· ··

Přerušované čáry znamenají případné dvojné vazby. V případě, že R⁶ znamená alkylidenovou skupinu, znamená přerušovaná čára, směřující k R⁶, přídatnou vazbu, přítomnou v alkylidenové skupině. V případě, že R⁵znamená alkyl nebo alkenyl, 'představuje vazba, směřující od uhlíkového atomu v poloze 11 k R⁶ jednoduchou vazbu.

Bylo prokázáno, že tyto nearomatické estradiolové deriváty se substituentem v poloze 11 steroidní struktury mají selektivní afinitu pro receptor ERa.

Součeniny podle vynálezu znamenají zlepšený typ esterogenů v tom smyslu, že je možno je použít u poruch s nedostatkem estrogenů, například při obtížích v menopauze a při osteoporóze. Uvedené látky je možno využít také při antikoncepci a dále mohou být vhodné při léčení nebo prevenci Alzheimerovy choroby, při nádorech mléčné žlázy, u benigní hypertrofie prostaty a u srdečních a cévních chorob. Sloučeniny podle vynálezu jsou zvláště vhodné při léčení a prevenci poruch, vyvolaných nedostatkem estrogenů tak, aby současně docházelo ke sníženému množství vedlejších účinků, vyvolaných estrogeny.

V popisu přihlášky vynálezu mají jednotlivé pojmy následující významy:

Cl-C5alkyl znamená přímou, rozvětvenou nebo cyklickou skupinu o 1 až 5 atomech uhlíku, například methyl, ethyl, isopropyl, 2-methylcyklopropyl, butyl, sek.butyl, terc.butyl a podobně,

C2-C5alkenyl s přímým, rozvětveným nebo cyklickým řetězcem obsahuje 2 až 5 atomů uhlíku a jde například o ethenyl, 2-butenyl a podobně, • · · · ► · · • · · · t · φ « • · «

C2-C5alkinyl znamená přímou nebo rozvětvenou alkinylovou skupinu o 2 až 5 atomech uhlíku, jako ethinyl a propinyl, C2-C3acyl znamená skupinu, obsahující 2 až 3 atomy uhlíku, odvozenou od alkylkarboxylové kyseliny, v níž alkylová skupina má svrchu uvedený význam,

Cl-C5alkyliden znamená rozvětvenou, přímou nebo cyklickou alkylidenovou skupinu o 1 až 5 atomech uhlíku, například methylenovou a ethylidenovou skupinu.

V rámci svrchu uvedeného obecného vzorce I jsou výhodnými sloučeninami podle vynálezu sloučeniny obecného vzorce II

kde

R¹ znamená R² znamená atom vodíku, atom vodíku,

Cl-C3alkyl nebo C2-C3acyl, a-Cl-C4alkyl, cc-C2-C4alkenyl nebo cc-C2-C4alkinyl,

R³ znamená atom vodíku, Cl-C4alkyl v poloze 16 steroidní struktury,

R⁴ znamená ethinyl,

R⁵ znamená atom vodíku, Cl-C3alkyl nebo C2-C3acyl,

R^s znamená Cl-C5alkyl, C2-C5alkenyl nebo C2-C5alkinyl, vždy popřípadě substituovaný atomem chloru nebo fluoru a v případě, že R⁶ znamená Cl-C2alkyl, ethenyl nebo ethinyl, popřípadě substituovaný atomem chloru nebo • · · · • · • · · · · · • · · · · • · · · · · · • · β · · · · fluoru, znamená R³ s výhodou methyl v poloze 16 steroidní struktury.

Velmi výhodné jsou ty steroidní sloučeniny podle vynálezu, v nichž v obecném vzorci II R¹ znamená atom vodíku,

R² znamená atom vodíku,

R³ znamená atom vodíku nebo α-methyl v poloze 16,

R⁴ znamená ethinyl,

R⁵ znamená atom vodíku,

R⁶ znamená propenyl, allyl nebo butenyl.

Sloučeniny podle vynálezu je možno připravit různými postupy, které jsou v organické chemii obecně známé, zvláště v chemii steroidních sloučenin, jde například o souhrnnou publikaci Fried J. a Edwards, J. A., Organic Reactions in Steroid Chemistry, sv. I a II, Van Nostrand Reinhold Company, New York, 1972, a C. Djerassi, Steroid Reactions, Holden-Day, lne., San Francisco, 1963.

Steroidy s určitými substituenty na atomu uhlíku v poloze 7 je například možno syntetizovat konjugací organokovových sloučenin s příslušnými steroidy typu

4,6-dien-3-onu za vzniku steroidních derivátů s funkčními skupinami v poloze 7a (spolu s menším množstvím 7p-steroidů, které je možno snadno odstranit krystalizaci nebo chromatografií). Příklady těchto reakcí jsou známé z literatury. Do polohy na atomu uhlíku v poloze 11 steroidní struktury je možno zavést substituenty několika způsoby. Adice organokovových sloučenin na příslušně chráněný 5a,10a-epoxy, 9(11)-olefin, popsaná v publikaci Teutsch a další, Steroids 37, 361, 1981 je jedním z * · možných postupů, je však možno použít i jiné postupy, využívající 11-oxoskupinu příslušně chráněného 19-norandrost-5-enu jako reaktivní funkční skupinu například pro přeměnu na aldehyd v této poloze známými chemickými postupy, například podle' publikace E. Ottow a další, Tetr. Lett., 5253, 1993. Je samozřejmé, že je možno použít také kombinace uvedených postupů. Dvojnou vazbu do polohy 5(10) je možno zavést například tak zvanou Birchovou redukcí kruhu A ve steroidech s příslušnými funkčními skupinami, redukcí Δ-4,5-9,11-dienonů v roztoku působením kovů nebo ketalizací 3-keto-Á-4,5-steroidů. Posledním z uvedených postupů je možno přímo získat požadovaný selektivní Δ-5(10)-isomery nebo se získá směs ketalů, kterou je pak možno rozdělit chromatografií nebo krystalizací v příslušném stupni postupu. Opatrnou hydrolýzou ketalu na atomu uhlíku v poloze 3 je obecně možno připravit požadované 3-οχο-Δ-5(10)isomery, které je pak možno převést redukcí působením hydridu na sloučeniny s hydroxyskupinou v poloze 3. Nasycené steroidy, to znamená 5ccH-deriváty je možno snadno získat za reduktivních podmínek, například v roztoku v aminech nebo amoniaku působením alkalických kovů. Dvojná vazba v poloze C14,15 se obvykle zavádí tak, že se nejprve zavede dvojná vazba do polohy C15,C16 a pak se uskuteční isomerace této vazby do polohy C14,C15 známým způsobem. Dvojná vazba, zavedená do polohy C15,C16 může být také použita k dosažení adice konjugátu, například s kyanidem tak, aby bylo možno uskutečnit vazbu dalších substituentů na atomu uhlíku v poloze 15. Substituenty do polohy 16 je možno snadno zavést alkylací působením příslušné baze a elektrofilních sloučenin.

• · · · · * • « · · • ·

Součást podstaty vynálezu tvoří také farmaceutický prostředek, který jako svou účinnou složku obsahuje steroidní sloučeniny podle vynálezu ve směsi s běžnými farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami, tak jak jsou uvedeny v základní publikaci Gennaro a další, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. vydání, Mack publishing Company, 1990, zvláště část 8, Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture. Směs steroidních sloučenin podle vynálezu a farmaceuticky přijatelných pomocných látek je možno slisovat na pevné lékové formy, jako pilulky nebo tablety nebo zpracovat na kapsle nebo čípky. Při použití farmaceuticky přijatelného kapelného nosného prostředí je možno sloučeniny podle vynálezu podávat také v injekční formě jako roztoky, suspenze nebo emulze nebo ve formě spreye, například do nosu. Při výrobě lékových forem, například tablet, je možno používat běžné pomocné látky, jako jsou plniva, barviva, polymerní pojivá a podobně. Obecně je možno použít jakoukoliv farmaceuticky přijatelnou přísadu, která neinterferuje s funkcí použité účinné látky. Steroidní sloučeniny podle vynálezu je možno podávat také ve formě implantátu, pesarů, náplastí a gelů a v jakýchkoliv jiných prostředcích pro prodloužené podávání.

Z vhodných nosičů pro uvedené farmaceutické prostředky lze uvést laktózu, škrob, deriváty celulózy nebo směsi těchto látek.

Vynález se mimoto týká použití steroidních sloučenin podle vynálezu pro výrobu farmaceutického prostředku, určeného pro léčení poruch, k nimž dochází v důsledku nedostatku estrogenů, například poruch v přechodu nebo po » · • ·

přechodu. Z těchto klimakterických potíží lze uvést zejména osteoporózu, při níž se steroidní sloučeniny podle vynálezu podávají ve formě vhodné farmaceutické lékové formy.

Vynález se dále týká použití steroidních sloučenin podle vynálezu pro výrobu farmaceutického prostředku pro antikoncepční účely. V tomto případě se běžně podává progestagen a estrogen, přičemž estrogenem může být sloučenina podle vynálezu ve vhodné farmaceutické lékové formě.

Konečně se vynález týká použití steroidních sloučenin podle vynálezu pro výrobu farmaceutického prostředku se selektivním estrogenním účinkem, jde obvykle o prostředek, použitelný při substituční terapii v případě nedostatku hormonů.

Množství podaného steroidu se bude pohybovat v obvyklém rozmezí pro deriváty estradiolu, půjde tedy například o množství 0,01 až 10 mg pro jednotlivé podání

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

V tomto příkladu se popisuje syntéza (3α,11β,17β)-11-(2-propenyl)-19-norpregn-5(10) -en-20-in-3,17-diolu, sloučeniny 11 a syntéza (3α,11β,16a,17β)-16-methyl-ll• · · • · · * * • · · ♦ « • · · · • · · · » t • *

• · · • · · · · ·

-(2-propenyl) -19-norpregn-5(10)-en-20-in-3,17-diolu, sloučeniny 16 podle schématu 1. Sloučeniny jsou uváděny pod svými čísly. Tato čísla odpovídají strukturním vzorcům v následujících schématech I až VII.

Schéma I

9999

Sloučenina 2

K roztoku 17,3 g Cul a 3,84 g LiCl ve 250 ml bezvodého THF se při teplotě 70 °C přidá 90,6 ml 1 M roztoku allylmagnesiumbromidu v diethyletheru. Pak se směs ještě 20 minut míchá, načež se přidá 11,4 ml trímethylchlorsilanu a pak roztok 7,5 g steroidu 1 ve 100 ml THF. Reakční směs se po celou dobu udržuje na teplotě nižší než -60 °C. Směs se ještě 1 hodinu míchá a pak se reakce zastaví vlitím směsi do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Produkt se extrahuje ethylacetátem a pak se čistí chromatografií na sloupci, čímž se získá 6,25 g sloučeniny 2 ve formě bezbarvého olej e.

NMR 5,20 (m CH allyl), 5,0 (CH₂, allyl) , 3,04 (m Hll) .

Sloučenina 3

K roztoku 9,6 g sloučeniny 2 ve směsi 100 ml methanolu a 30 ml methylenchloridu s obsahem 800 mg NaOH se přidá 0,4 g hydroborátu sodíku při teplotě 0 až 5 °C. Směs se 1,5 hodiny míchá, po této době je reakce ukončena a ke směsi se na 0,5 hodiny přidá 20 ml acetonu.

Pak se reakční směs vlije do vody a výsledná směs se extrahuje ethylacetátem, čímž se získá 9,5 g produktu 3. NMR 3,59 (t, CHOH) , 2,98 (m, Hll), 0,92 (s, CH₃) .

Sloučenina 4

K roztoku 9,5 g sloučeniny 3 ve 100 ml acetonu se přidá 8 ml 6 N HCI. Směs se 2 hodiny míchá, pak se neutralizuje hydrogenuhličitanem sodným, odpaří na malý objem, zředí vodou a extrahuje ethylacetátem. Tímto způsobem se získá 8,2 g sloučeniny vzorce 4 jako bezbarvý amorfní materiál.

NMR 5,68 (m, H4), 3,10 (m, Hll), 3,65 (m, CHOH).

Sloučenina 5

Roztok 8,2 g sloučeniny 4 ve 100 ml bezvodého THF se přidá k 500 ml kapalného amoniaku při teplotě 70 °C. Ke směsi se přidá přibližně 500 mg kovového lithia, lithium se přidává tak dlouho, až modré zbarvení reakční směsi přetrvává po dobu alespoň 15 minut. Pak se reakce zastaví přidáním chloridu amonného.

Zbytek, který se získá odpařením amoniaku, se zředí vodou a extrahuje ethylacetátem.

Chromatografickým čištěním se získá 4,0 g sloučeniny 5 ve formě bezbarvého oleje. R_f = 0,55 při použití heptanu a ethylacetátu v objemovém poměru 1:1.

NMR 2,80 (ab, CH2 při C4), 0,93 (s, CH₃) .

Sloučenina 6

K roztoku 4,0 g sloučeniny 5 v 80 ml methanolu se přidá 6 ml trimethylorthomravenčanu a pak ještě 0,8 g kyseliny toluensulfonové. Směs se 2 hodiny míchá, po této době je ketalyzace ukončena. Ke směsi se přidá 6 ml pyridinu a směs se odpaří na malý objem. Pak se směs zředí vodou a extrahuje ethylacetátem. Po odpaření extraktu se získá 4,7 g téměř čisté sloučeniny 6.

Rf = 0,7 při použití chromatografie na tenké vrstvě tle a směsi heptanu a ethylacetátu v objemovém poměru 1:1.

•· ·· ·· ·« ·· ····

NMR 3,22, 3, 25 (2x s, OCH₃) .

Sloučenina 7

K roztoku 33 g sloučeniny 6 v 50 ml acetonu se přidá 6 g molekulového síta 4A a pak ještě 3,2 g N-methylmorfolin-N-oxidu a 150 mg tetrapropylamoniumperoxyruthenátu. Směs se 1 hodinu míchá. Pak se k reakční směsi přidá 5 g silikagelu a pak ještě 50 ml heptanu a směs se ještě 5 minut míchá. Pak se směs zfiltruje přes vrstvu prostředku hyflo a po částečném odpaření se směs rozpustí v ethylacetátu, promyje se vodou a odpaří. Odparek se nechá projít krátkým sloupcem oxidu křemičitého, čímž se získá 2,9 g sloučeniny 7. R_f = 0,52 při použití heptanu a ethylacetátu v poměru 7:3.

NMR 1,02 (s, CH₃) .

Sloučenina 8

Pro ethinylaci byl připraven lithiumacetylid z dibromethenu a butyllithia.

K roztoku 0,74 ml 1,2-dibromethenu ve 20 ml THF se při teplotě -70 °C přidá 11 ml 1,6 M roztoku butyllithia v hexanu. Směs se 15 minut míchá a pak se přidá roztok 800 mg sloučeniny 7 ve 2 ml THF. Směs se nechá v průběhu 15 minut zteplat na teplotu místnosti a po dalších 15 minutách při této teplotě se reakce zastaví přidáním vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Pak se produkt koncentruje průchodem krátkým sloupcem silikagelu, čímž se získá 810 mg sloučeniny 8 ve formě bílé amorfní látky. R_f = 0,48 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3. Rf pro výchozí látku je 0,52.

NMR 2,61 (s, acetylen).

• A • AAA

A A · A • A A A

Sloučenina 9

K suspenzi 3,2 g sloučeniny 8 v 60 ml ethanolu se přidá 0,16 g kyseliny šťavelové v 16 ml vody. Směs se 2,5 hodiny míchá a pomalu se stává homogenní. K reakční směsi se přidá hydrogenuhličitan sodný a směs se zahustí na malý objem. Přidá se voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Takto izolovaný surový produkt se nechá projít krátkým sloupcem silikagelu a krystalizovat z diisopropyletheru, čímž se získá 2,3 g sloučeniny 9 s teplotou tání 136 °C. Rf = 66 při použití heptanu a ethylacetátu 1:1.

NMR 2,78 (ab, 2, H4), 2,61 (s, acetylen).

Sloučenina 10 a 11

K roztoku 1 g sloučeniny 9 ve 12 ml THF se přidá 1,6 g lithium-tri-terc.butoxyaluminiumhydridu. Směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, pak se přidá voda a směs se neutralizuje přidáním 2 N HCI. Produkt se extrahuje ethylacetátem a chromatografuje na sloupci silikagelu při použití heptanu a ethylacetátu 8:2 jako elučního činidla. Tímto způsobem se získá 0,56 g 3p-alkoholu vzorce 10 s teplotou tání 121 až 123 °C a 0,24 g 3ct-alkoholu vzorce 11 s teplotou tání 84 až 87 °C. Rf = 0,53 pro sloučeninu 10 a 0,45 pro sloučeninu 11 při použití heptanu a ethylacetátu 1:1.

NMR (3aOH) 3,82 (m, CHOH), (3βΟΗ) 4,08 (m, CHOH) • · • ·

• · · · · · · * • · ·· ·· · · · · · ·

Sloučenina 12

K roztoku lithiumhexamethyldisilazidu (připraveného z 1,9 ml 1,6 M roztoku butyllithia v hexanu a 0,71 ml hexamethyldisilazanu ve 4 ml bezvodého THF) se při teplotě -40 °C přidá 1 g sloučeniny 7 a 0,7 ml DMPU v 5 ml THF. Směs se míchá 0,5 hodiny při teplotě -40 °C a pak se injekční stříkačkou přidá 225 μΐ methyljodidu. Směs se míchá ještě 0,5 hodiny při teplotě -40 °C, po této době je reakce ukončena. Pak se směs zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Chromatografii takto izolovaného surového produktu se získá 1,3 g sloučeniny

12, Rf - 0,43 při použití směsi heptanu a ethylacetátu 8:2.

Sloučenina 13

Způsobem, uvedeným pro přípravu sloučeniny 8 se převede 1,3 g sloučeniny 12 na požadovaný produkt vzorce

13, který se získá v množství 1,2 g. Rf = 0,46 při použití směsi heptanu a ethylacetátu 7:3. Rf pro sloučeninu 12 je 0,55.

Sloučenina 14

K roztoku 800 mg sloučeniny 13 ve 20 ml ethanolu se přidá roztok 80 mg kyseliny šťavelové v 5 ml vody. Směs se 1 hodinu míchá a pak se neutralizuje přidáním hydrogenuhličitanu sodného. Po zředění vodou a extrakci ethylacetátem se získá 0,7 g sloučeniny 14 ve formě krystalického materiálu. R_f= 0,47 při použití směsi heptanu a ethylacetátu 7:3.

• · · · · · ···· • · ♦ · · · • » · · · · * · • · * 9 · · » ·· ·· * *

Sloučenina 15 a 16

K roztoku 725 mg sloučeniny 14 ve 20 ml směsi ethanolu a THF v poměru 1:1 se přidá 130 mg hydroborátu sodného. Směs se 1 hodinu míchá a pak se přidají 2 ml acetonu k rozrušení přebytku reakčních složek. Po 15 minutách se směs vlije do vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Takto získaný materiál se čistí chromatografií na silikagelu při použití směsi methylenchloridu a acetonu nebo směsi hexanu a ethylacetátu jako elučního činidla. Tímto způsobem se získá 300 mg sloučeniny 16 (3a-0H) a 75 mg sloučeniny 15 (3β-ΟΗ). R_f pro sloučeninu 15 = 0,47 (methylenchlorid a aceton 95:5), R_f pro sloučeninu 16 = 0,54 (methylenchlorid a aceton 95:5).

Přiklad 2

Syntéza (3β,5α,11β,17β)-ll-difluormethyl-19-norpregn-20-in-3,17-diolu, sloučeniny 21, tak jak je znázorněno ve schématu II.

Sloučenina 18

K roztoku 4 g známého aldehydu vzorce 17 ve 200 ml methylenchloridu se přidá 10 ml trifluoridu dimethylsíry. Směs se míchá 48 hodin při teplotě místnosti, pak se vlije do směsi ledu a vody a extrahuje methylenchloridem, načež se promyje hydrogenuhličitanem sodným. Po zahuštění a chromatografií na oxidu křemičitém při použití směsi heptanu a ethylacetátu 2:1 se získá 2,5 sloučeniny 18 s teplotou tání 138 až 139 °C.

NMR (CDCI3) 6/05 ppm, dvojitý triplet CHF₂, 5,9 s, H4, 0,95 (s, CH₃) .

Sloučenina 19

Plynný acetylen se nechá 45 minut procházet směsí

1,3 g terč.butoxidu draslíku a 1 g sloučeniny 18 v 7 ml THF a 2 ml terč.butanolu, zbavené plynů, při teplotě 0 °C. Pak se směs vlije do vody a extrahuje ethylacetátem. Po promytí a odpaření se zbytek zpracovává působením diisopropyletheru, čímž se získá 0,85 g sloučeniny 19 ve formě bílé látky s teplotou tání 178 až 180 °C. Rf = 0,43 při použití heptanu a ethylacetátu 1:1.

Sloučenina 20 * * φ · • β * • · · ·« » ♦ - 9 9 • * « ·

Κ roztoku 20 mg lithia v 10 ml kapalného amoniaku se při teplotě -60 °C přidá roztok 300 mg sloučeniny 19 v 6 ml THF. Směs se 1 minutu míchá a pak se přidá 0,5 g chloridu amonného. Amoniak se odpaří a odparek se smísí s vodou a extrahuje ethylačetátem. Takto získaný materiál se čistí chromatografií, čímž se získá 140 mg sloučeniny 20 s teplotou tání 224 až 225 °C. Rf = 0,64 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3.

Sloučenina 21

K roztoku 25 mg lithiumaluminiumhydridu ve 4 ml THF se při teplotě -60 °C přidá 85 mg sloučeniny 20 v 1 ml THF. Směs se 5 minut míchá, pak se rychle zahřeje na teplotu místnosti a zpracuje přidáním 45 μΐ vody, 45 μΐ 3 N roztoku NaOH a 140 μΐ vody. Vzniklá sraženina se odfiltruje, filtrát se smísí s ethylačetátem a pak se promyje 2 N roztokem HCI a vodou. Po vysušení a odpaření se odparek rozetře s diisopropyletherem, čímž se získá 5 mg sloučeniny 21 s teplotou tání 168 až 169 °C. R_f = 0,30 při použití toluenu a ethylacetátu 7:3.

NMR 3,6 ppm CHOH, 2,65 CH acetylen, 6,0 dvojitý triplet CHF₂.

Příklad 3

Syntéza (3β,5α,11β,17β)-11- (2-fluorethyl) -19-norpregn-20-in-3,17-diolu, sloučeniny 31 a (3α,5α,11β, 17β) -11- (2-fluorethyl) -19-norpregn-20-in-3,17-diolu, sloučeniny 32 tak, jak je znázorněna ve schématu III.

• Λ *<

·« ·» ·· · ·

Sloučenina 23

K roztoku 4,95 g lip-hydroxyethylestron-3-methyletheru vzorce 22 ve 115 ml THF se přidá 66 g molekulového síta 4A a pak ještě 45 ml 1 M roztoku TBAF v bezvodém THF a 5,3 g tosylfluoridu. Směs se míchá 2 hodiny za varu pod zpětným chladičem. Pak se reakční směs zchladí a vlije se do 700 ml 10% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, načež se extrahuje ethylacetátem. Po odpaření rozpouštědla a chromatografií se tímto způsobem získá 3,4 g sloučeniny 23. Rf = 0,39 při-použití heptanu a ethylacetátu 7:3.

Sloučenina 24

Roztok 4 g sloučeniny 23 ve směsi 30 ml THF a 30 ml methanolu se zpracovává přidáním 0,1 ml 4 N roztoku NaOH a pak přidáním 0,23 g hydroborátu sodného. Směs se 1 hodinu míchá, pak se vlije do vody a vzniklá směs se extrahuje ethylacetátem. Surový materiál se zfiltruje přes krátký sloupec oxidu křemičitého, čímž se získá

3,8 g sloučeniny 24. R_f - 0,26 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3. R_f pro sloučeninu 23 = 0,33.

Sloučenina 25

K roztoku 3,8 g sloučeniny 24 ve směsi 40 ml THF a 230 ml kapalného amoniaku se pří teplotě -33 °C přidá 5 g lithia. Směs se 5 minut míchá a pak se přebytek lithia rozruší přidáním 45 ml ethanolu. Amoniak se nechá odpařit, odparek se zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Po vysušejí a odpaření se získá 3,7 g surového 1,2,5 (10)dienoletheru. Tento materiál se rozpustí ve 30 ml acetonu s obsahem 3 ml 6 N roztoku HCl. Směs se 3 hodiny míchá, neutralizuje se hydrogenuhličitanem sodným, zředí se vodou a extrahuje se ethylacetátem, čímž se získá 2,8 g sloučeniny 25.

R_f = 0,10 při použití heptanu a ethylacetátu 4:6.

Sloučenina 26

Roztok 0,84 g sloučeniny 25 ve směsi 30 ml kapalného amoniaku a 6 ml THF se při teplotě -60 °C zpracovává přidáváním malých kousků lithia tak dlouho, až modré zbarvení reakční směsi přetrvává nejméně 5 minut. Pak se přebytek reakčního činidla rozruší přidáním malého • · • · • ·

množství chloridu amonného a amoniak se odpaří. Zbývající materiál se zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Odpařením rozpouštědla se získá 0,80 g v podstatě čistého materiálu. R_f = 0,39 při použití heptanu a ethylacetátu 1:1, Rf = pro sloučeninu 25 = 0,24.

Sloučenina 27

K roztoku 0,8 g sloučeniny 26 v 8 ml dichlormethanuý se přidá 2,8 ml ethylenglykolu, 2,5 ml triethylorthomravenčanu a 5 mg kyseliny toluensulfonové. Směs se míchá přes noc, pak se vlije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje ethylacetátem. Takto získaný surový produkt se čistí průchodem krátkým sloupcem silikagelu, čímž se získá 0,72 g sloučeniny 27. R_f = 0,46 při použití směsi heptanu a ethylacetátu 1:1. R_f = pro sloučeninu 26 = 0,38.

Sloučenina 28

K roztoku 0,72 g sloučeniny 27 v 15 ml acetonu se přidá 1 g molekulového síta 4A a pak ještě 0,70 g N-methylmorfolin-N-oxidu a 30 mg tetrapropylamoniumperoxyruthenátu. Směs se 1 hodinu míchá a pak se k ní přidá 1 g silikagelu a 15 ml heptanu, načež se směs míchá ještě dalších 5 minut. Pak se směs zfiltruje a částečně odpaří, smísí s ethylacetátem, promyje vodou a odpaří do sucha. Odparek s nechá projít krátkým sloupcem oxidu křemičitého, čímž se získá 0,59 g sloučeniny 28. R_f =

0,62 při použití heptanu a ethylacetátu 1:1.

t

Sloučenina 29

Pro ethinylaci se připraví lithiumacetylid z dibromethenu a butyllithia.

K roztoku 0,74 ml 1,2-dibromethenu ve 20 ml THF se při teplotě -70 °C přidá 11 ml 1,6 M roztoku butyllithia v hexanu. Směs se 15 minut míchá a pak se přidá roztok 590 mg sloučeniny 28 ve 2 ml THF. Směs se nechá zteplat v průběhu 15 minut na teplotu místnosti a po dalších 15 minutách stání při teplotě místnosti se reakce zastaví přidáním vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Směs se odpaří a odparek se nechá projít krátkým sloupcem silikagelu, čímž se získá 430 mg sloučeniny 29 ve formě bílé amorfní látky. R_f = 0,11 při použití heptanu a acetonu 9:1, Rf výchozí látky = 0,21.

Sloučenina 30

K roztoku 0,43 g sloučeniny 29 v 15 ml acetonu se přidá 1 ml 2 M roztoku HC1. Směs se míchá 2 hodiny a pak se k ní přidá nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného, načež se směs extrahuje ethylacetátem, čímž se získá 0,40 g v podstatě čisté sloučeniny 30. Rf = 0,18 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3, R_f pro sloučeninu 29 = 0,23.

Sloučeniny 31 a 32

K roztoku 0,40 g sloučeniny 30 ve 4 ml THF a 4 ml ethanolu se přidá 30 mg hydroborátu sodného. Směs se 0,5 hodiny míchá a pak se přidá několik kapek acetonu k rozrušení přebytku reakčního činidla. Po dalším

15minutovém míchání se reakční směs vlije do vody a výsledná směs se extrahuje ethylacetátem. Takto získaný surový produkt se podrobí chromatografií na sloupci, čímž se získá 80 mg 3aOH isomeru vzorce 32 a 160 mg 3βΟΗ derivátu vzorce 31. R_f pro sloučeninu 31 = 0,37, R_f pro sloučeninu 32 = 0,42, R_f pro výchozí látku = 0,48 při použiti heptanu a acetonu 6:4.

Příklad 4

Syntéza (3α,11β,17β)-11-(3-butenyl)-19-norpregn-5(10)-en-20-in-3,17-diolu, sloučeniny 42 a (3β,11β,17β)-11-(3-butenyl)-19-norpregn-5(10)-en-20-in-3,17-diolu, sloučeniny 43, tak jak je znázorněna na schématu IV.

Sloučenina 33

Roztok 55 g steroidu vzorce 1 ve směsi 300 ml THF a 300 ml methanolu se zpracovává přidáním roztoku 2,7 g hydroborátu sodného ve 30 ml vody s obsahem 3 mg NaOH. Směs se 1 hodinu míchá, po této době je redukce ukončena a přebytek hybridu se rozruší přidáním 75 ml acetonu. Pak se směs míchá ještě další hodinu, načež se vlije do vody a výsledná směs se extrahuje ethylacetátem. Organická fáze se odpaří, čímž se získá 54 g sloučeniny vzorce 33. R_f = 0,31 při použití směsi heptanu a ethylacetátu 4:6,

R_f výchozí látky = 0,42.

Sloučenina 34

K roztoku 54 g sloučeniny 33 ve 350 ml DMF se přidá 35 g imidazolu a pak při teplotě -10 °C ještě 37 ml trimethylsilylchloridu. Směs se míchá ještě další 0,5 hodiny, po této době je reakce ukončena. Směs se vlije do

1,5 litru vody a extrahuje se etherem. Organický materiál • · • · • · * · • ·

se odpaří a získaný odparek se rozetře s 80% vodným ethanolem, čímž se získá 50 g čisté sloučeniny vzorce 34 s teplotou tání 90 až 91 °C. R_f = 0,79 při použití heptanu a ethylacetátu 4:6, R_f výchozí látky = 0,36.

Sloučenina 35

K roztoku butenylmagnesiumbromidu, připravenému z 0,51 ml 4-brom-l-butenu a 119 mg hořčíku ve 20 ml THF se při teplotě -10 °C přidá 100 mg jodidu měďného. Směs se ještě 0,5 hodiny míchá, pak se zchladí na -30 °C a přidá se roztok 1 g sloučeniny vzorce 34 v 5 ml THF. Reakční směs se v průběhu 1 hodiny nechá zteplat na teplotu místnosti. Pak se přidá 100 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a směs se extrahuje ethylacetátem. Chromatografií se získá 0,9 g sloučeniny 35, Rf = 0,54 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4, R_f výchozí látky = 0,60 .

Sloučenina 36

K roztoku 8,65 g sloučeniny 35 v 80 ml acetonu se přidají 2 ml 2 N roztoku HCI. Směs se míchá 2 hodiny a pak se neutralizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, odpaří se na malý objem, zředí vodou a extrahuje ethylacetátem. Takto získaný surový produkt se nechá projít krátkým sloupcem silikagelu, čímž se získá 5,3 g sloučeniny 36. Rf = 0,18 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3. R_f pro výchozí látku = 0,51.

f • · ···· · · ·· • « * · » · • « · · ·

Sloučenina 37

Malé kousky kovového lithia se přidají k roztoku

5,3 g sloučeniny 36 ve směsi 340 ml kapalného amoniaku, 110 ml THF a 9 ml terč.butanolu při teplotě -70 °C, lithium se přidává tak dlouho, dokud nepřetrvává modrá barva směsi. Obvykle se přidává množství 350 mg v průběhu 45 minut. Přebytek reakčního činidla se rozruší přidáním chloridu amonného. Amoniak se odpaří a odparek se zředí vodou a extrahuje ethylacetátem. Takto získaný surový produkt se nechá projít krátkým sloupcem silikagelu, čímž se získá 3,8 g sloučeniny 37. R_f = 0,46 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4, R_f výchozí látky = 0,22.

Sloučenina 38

K roztoku 3,3 g sloučeniny 37 v 60 ml methanolu se přidá 5 ml trimethylorthomravenčanu a 0,3 g kyseliny p-toluensulfonové. Směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti a pak se neutralizuje přidáním 1 ml pyridinu. Pak se směs zahustí na třetinu původního objemu, vlije se do vody a výsledná směs se extrahuje ethylacetátem, čímž se získá po chromatografickém čištění celkem 3,7 g sloučeniny 38. R_f = 0,60 při použití heptanu a ethylacetátu 1:1. R_f výchozí látky = 0,48.

Sloučenina 39

K roztoku 3,7 g sloučeniny 38 ve 45 ml acetonu se přidá 5 g molekulového síta 4A a pak ještě 3,6 g N-methylmorfolin-N-oxidu a 100 mg tetrapropylamoniumperoxyruthenátu. Směs se 1 hodinu míchá, pak se k reakční směsi přidá 5 g silikagelu a pak ještě 100 ml heptanu a » · * • · > · · • · Β · směs se míchá dalších 5 minut. Pak se směs zfiltruje a částečně zahustí, načež se vlije do ethylacetátu a vzniklá směs se promyje vodou a odpaří. Odparek se nechá projít krátkým sloupcem oxidu křemičitého, čímž se získá

3,3 g sloučeniny 39. Rf = 0,51 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3, R_f výchozí látky = 0,38.

Sloučenina 40

Pro ethinylaci se připraví lithíumacetylid z dibromethenu a butyllithia.

K roztoku 0,74 ml 1,2-dibromethenu ve 20 ml THF se při teplotě -70 °C přidá 11 ml 1,6 M roztoku butyllithia v hexanu. Směs se 15 minut míchá a pak se přidá roztok 0,8 g sloučeniny 39 ve 2 ml THF. Směs se nechá zteplat v průběhu 15 minut na teplotu místnosti, pak se nechá stát při téže těplotě ještě 15 minut, reakce se zastaví přidáním vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Extrakt se odpaří a odparek se nechá projít krátkým sloupcem silikagelu, čímž se získá 0,96 g sloučeniny 40 jako bílé amorfní pevné látky. R_f = 0,15 při použití heptanu a acetonu 95:5, R_f výchozí látky = 0,30.

Sloučenina 41

K roztoku 0,95 g sloučeniny 40 ve 20 ml ethanolu se přidá 0,6 g kyseliny šťavelové ve 3 ml vody. Směs se 1,5 hodiny míchá, pak se ke směsi přidá hydrogenuhličitan sodný a směs se odpaří na malý objem. Přidá se voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Takto izolovaný surový produkt se nechá projít krátkým sloupcem silikagelu, čímž se získá 0,55 g sloučeniny 41. R_f = 0,33 • 4 •4 44 44 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3, R_f výchozí látky = 0,40.

Sloučenina 42 a 43

K roztoku 0,55 g sloučeniny 41 ve 4 ml THF a 4 ml ethanolu se přidá 30 mg hydroborátu sodného. Směs se míchá 0,5 hodiny, pak se přidá několik kapek acetonu k rozrušení přebytku reakčního činidla. Po dalším míchání 15 minut se reakční směs vlije do vody a extrahuje ethylacetátem, takto získaný surový produkt se chromatografuje na sloupci, čímž se získá 90 mg 3aOH-isomeru sloučeniny 42 s teplotou tání 159 °C a 150 mg 3P0H-derivátu 41 s teplotou tání 90 °C. Rf pro sloučeninu 41 = 31, pro sloučeninu 42 = 0,23, a pro výchozí látku = 0,41 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4.

Příklad 5

Syntéza (3β,7α,11β,17β)-11-(2-fluorethyl)-7-methyl-19-norpregn-5(10)-en-20-in-3,17-diolu, syntézasloučeniny 54 a (3α,7a,11β,17β)-11-(2-fluorethyl)-7-methyl-19-norpregn-5(10)-en-20-in-3,17-diolu, sloučeniny 55, tak jak je znázorněna ve schématu V.

Sloučenina 45

K roztoku 4 g sloučeniny 44 ve 35 ml methanolu se přidá 12 ml trimethylorthomravenčanu a pak ještě 0,3 g kyseliny toluensulfové. Směs se 1 hodinu míchá, po této době je výchozí materiál spotřebován, reakční směs se neutralizuje přidáním 1 g hydrogenuhličitanu sodného a • · «· ·· ···· · · ·· ··· · · · «··· ····<* ·· · «· * odpaří se. Odparek se zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Chromatografií surového produktu se získá

3,4 g sloučeniny 45. Rf = 0,61 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3, R_f výchozí látky = 0,35.

Schéma V

• · · · • ·

Sloučenina 46

K roztoku 3,4 g sloučeniny 45 v 50 ml methanolu se přidá 0,5 g NaOH. Směs se 2 hodiny míchá, po této době je zmýdelnění ukončeno. Směs se zahustí, zředí vodou a extrahuje ethylacetátem, čímž se získají 3 g sloučeniny 46 ve formě bezbarvého oleje. R_f = 0,31 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3. Rf výchozí látky = 0,65.

Sloučenina 47

K roztoku 3,6 g sloučeniny 46 ve 30 ml DMF se přidá

2,8 g imidazolu a pak ještě 2 g terč.butyldimethylsilylchloridu. Směs se 2 hodiny míchá, načež se vlije do vody a extrahuje se ethylacetátem. Surový produkt se nechá projít krátkým sloupcem silikagelu, čímž se získá 3,8 g sloučeniny 47 ve formě oleje. Rf - 0,70 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3, R_f výchozí látky = 0,61.

Sloučenina 48

Roztok 9-BBN se připraví z 1,75 ml 1,5-cyklooktadienu a 1,4 ml komplexu boranu a dimethylsulfidu ve 40 ml THF. K roztoku se přidá 3,8 g sloučeniny 47 v 5 ml THF. Směs se 2 hodiny míchá a pak se reakce zastaví opatrným přidáním 5 ml vody, pak se přidá ještě 10 ml 2 N roztoku NaOH a 8 ml 30% peroxidu vodíku. Směs se energicky míchá ještě 2 hodiny, pak se zředí vodou, extrahuje se ethylacetátem a promyje se 10% vodným roztokem siřičitanu sodného. Po odpaření a chromatografií se tímto způsobem izoluje 2,8 g sloučeniny 48. Rf = 0,27 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3. R_fvýchozí látky = 0,70.

• ·

Sloučenina 49

Směs 1 g sloučeniny 48 a 0,5 g tosylchloridu v 5 ml pyridinu se míchá 5 hodin při teplotě 0 až 5 °C. Pak se přidá 1 ml vody a směs se míchá ještě 15 minut. Pak se reakční směs dále zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem, získaný surový produkt se čistí chromatografii, čímž se získá 1,1 g sloučeniny 49 s teplotou tání 120 °C. R_f = 0,57 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3. Rf výchozí látky = 0,30.

Sloučenina 50

Roztok 400 mg sloučeniny 49 v 5 ml bezvodého 1 M roztoku TBAF v THF se 5 hodin míchá, čímž vznikne fluorid a současně se odštěpí silylová skupina. Směs se vlije do vody a extrahuje se ethylacetátem. Po chromatografickém čištění se získá 185 mg sloučeniny 50 s teplotou tání 161 až 162 °C. R_f = 0,35 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3. Rf výchozí látky = 0,53.

Sloučenina 51

K roztoku 180 ml sloučeniny 50 v 5 ml acetonu se přidá 0,5 g molekulového síta 4A a pak ještě 200 mg N-methylmorfolin-N-oxidu a 10 mg tetrapropylamoniumperoxyruthenátu. Směs se 1 hodinu míchá. Pak se k reakční směsi přidá 0,5 g silikagelu a 10 ml heptanu a směs se ještě 5 minut míchá. Pak se směs zfiltruje a částečně odpaří, načež se vlije do ethylacetátu, směs se promyje vodou a odpaří, čímž se získá 150 mg sloučeniny 51 s teplotou tání 166 °C. R_f = 0,45 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3. R_f výchozí látky = 0,35.

Sloučenina 52

Pro ethinylaci se připraví lithiumacetylid z dibromethenu a butyllithia. K roztoku 0,30 ml 1,2-dibromethenu v 6 ml THF se při teplotě -70 °C přidá

4.5 ml 1,6 M roztoku butyllithia v hexanu. Směs se 15 minut míchá a pak se přidá roztok 150 mg sloučeniny 50 v 1 ml THF. Směs se nechá v průběhu 15 minut zteplat na teplotu místnosti a po dalších 15 minutách stání při teplotě místnosti se reakce zastaví přidáním vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Po odpaření a přidání heptanu se získá 140 mg sloučeniny 40 ve formě bílé pevné látky s teplotou tání 168 °C. R_f = 0,38 při použití heptanu a acetonu 95:5, R_f výchozí látky = 0,40.

Sloučenina 53

K roztoku 145 mg sloučeniny 52 ve 3 ml ethanolu a

1.5 ml THF se přidá 0,2 g kyseliny šťavelové ve 3 ml vody. Směs se míchá 1,5 hodiny, pak se přidá hydrogenuhličitan sodný a směs se odpaří na malý objem. Přidá se voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Takto izolovaný surový produkt se nechá projít krátkým sloupcem silikagelu, čímž se získá 125 mg sloučeniny 53. Rf = 0,23 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3, R_f výchozí látky = 0,38.

• ·

Sloučenina 54 a 55

K roztoku 125 mg sloučeniny 53 ve dvou ml THF a 1 ml ethanolu se přidá 20 mg hydroborátu sodného. Po 0,5 hodině je redukce ukončena. Směs se zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Takto izolovaný surový produkt se čistí průchodem sloupce C-18 v reversní fázi při použití směsi acetonitrilu a vody jako elučního činidla, čímž se získá 40 mg 3ccOH-derivátu 55 a 20 mg 3pOH-derivátu 54, v obou případech jde o amorfní látky s totožnou hodnotou R_f na silikagelu. R_f = 43 při použití methylenchloridu a acetonu 9:1, R-- výchozí látky = 0,70.

Příklad 6

Sloučeniny podle tohoto příkladu byly připraveny podle schématu VI.

Sloučenina 57

Roztok 80 mg hydroborátu sodného a 112 mg hydroxidu sodného ve 12 ml methanolu se při teplotě 0 °C po kapkách přidá k roztoku 7a,lip-dímethylestr-4-en-3,17-dionu vzorce 56 ve směsi 18 ml methanolu a 4 ml methylendichloridu. Směs se 1 hodinu míchá a pak se přebytek hydroborátu rozruší přidáním 12 ml acetonu, pak se směs ještě 15 minut míchá. Po této době se směs vlije do vody a extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší, odpaří a odparek se čisti na sloupci oxidu křemičitého, čímž se získá 0,74 g sloučeniny 57, znečištěné malým množstvím 3,17-diolu, který se odstraní • « · « • · « • · · · · • · » v následujícím stupni. R_f = 0,40 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4.

NMR (CDC1₃) δ 3,60 (t, 1, 17αΗ) , 0,77 (d, 3, 7ccCH₃) , 1,08 (d, 3, 11βΟΗ₃) .

Sloučenina 58

K roztoku 0,74 g sloučeniny 57 v 15 ml methanolu a 1,1 ml trimethylorthomravenčanu se přidá 0,2 g kyseliny p-toluensulfonové. Směs se 2 hodiny míchá, pak se přidá 0,1 ml pyridinu a směs se vlije do vody. Produkt se extrahuje ethylacetátem a čistí chromatografií na oxidu křemičitém při použití směsi heptanu a ethylacetátu jako elučního činidla, čímž se získá 0,59 g 3,3-dimethylketalu 58. R_f = 0,47 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4.

NMR δ 3,20 (2 s, 6, OCH₃) 3,65 (t, 1, 17αΗ) , 0,86 (s, 3, 18CH₃) , 0,77 (d, 3, 7ccCH₃) , 0,90 (d, 3, 11βΟΗ₃) .

Sloučenina 59

K roztoku 0,59 g steroidu 58 v 10 ml acetonu se postupně přidá 0,6 g N-methylmorfolin-N-oxidu a 40 mg tetrapropylamoniumperoxyruthenátu. Směs se 1 hodinu míchá a pak se přidá 10 ml heptanu a 1 g oxidu křemičitého. Pak se směs míchá ještě 15 minut, načež se zfiltruje přes vrstvu celitu, odpaří se a odparek se nechá projít krátkým sloupcem oxidu křemičitého, čímž se získá 0,56 g sloučeniny 59. Rf = 0,55 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4.

NMR δ 0,98 (s, 3, 18 CH₃) , 0,82 (d, 3, 7ccCH₃) , 0,92 (d,

3, llpCH₃) , 3,20 (2xs, 6, OCH₃) .

• · • · » · · · · · · * · ···« ·· · · · »

Sloučenina 60

Lithiumhexamethyldisilazid se připraví přidáním

1,24 ml 1,55 M roztoku butyllithía v hexanu při teplotě -40 °C k roztoku 0,44 ml bistrimethylsilylaminu ve 4 ml THF. Směs se 0,5 hodiny míchá a pak se přidá roztok 0,56 g sloučeniny 59 a 0,46 ml DMPU v 8 ml THF. Směs se míchá ještě 45 minut při teplotě -40 °C a pak se přidá ještě 140 μΐ methyljodidu. Po dalším míchání po dobu 30 minut je alkylace ukončena. Směs se vlije do 40 ml nasyceného roztoku chloridu amonného a extrahuje se ethylacetátem. Po chromatografickém čištění se získá 0,55 g 16a-methylovaného produktu 60. Rf = 0,73 při použití heptanu a ethylacetátu 1:1, R_f výchozí látky = 0,69.

·«··· · · · 0 · _ _ « · « 0 0 · 0 ····

NMR δ 1,11 (d, 3, 16aCH₃) , 1,02 (s, 3, 18CH₃) , 0,82 (d,

3, 7cxCH₃) , 0,91 (d, 3, 11βΟΗ₃) .

Sloučenina 61

Lithiumacetylid se připraví přidáním roztoku 9,5 ml

1,55 M roztoku butyllithia v hexanu k 0,60 ml 1,2-dibromethanu ve 20 ml THF při teplotě -60 °C. Směs se 0,5 hodiny míchá a pak se přidá roztok 0,55 g ketonu 60 ve 2 ml THF a chladicí zařízení se odstraní a směs se nechá postupně zteplat na teplotu místnosti. Pak se přidá voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Po chromatografickém čištění se získá 0,50 g sloučeniny 61. R_f = 0,22 při použití heptanu a ethylacetátu 9:1. R_fvýchozí látky = 0,42.

NMR δ 1,18 (d, 3, 16a CH₃) , 1,02 (s, 3, 18CH₃) , 0,78 (d,

3, 7aCH₃) , 0,94 (d, 3, 11βΟΗ₃) , 2,66 (s, 1, acetylen) .

Sloučenina 62

K roztoku 0,49 sloučeniny 61 ve 20 ml ethanolu se přidá 50 mg kyseliny šťavelové ve 3 ml vody. Směs se 4 hodiny míchá. Pak se ke směsi přidá 5% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného, produkt se extrahuje ethylacetátem a nechá projít sloupcem oxidu křemičitého k odstranění nečistot, čímž se získá 250 mg sloučeniny 63. R_f = 0,40 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4, R_f pro výchozí látku = 0,49.

NMR δ 2,80 (m, 2, H4), 1,19 (d, 3, 16aCH₃) , 1,04 (s, 3, 18CH₃), 0,82 (d, 3, 7aCH₃) , 0,93 (d, 3, 11βΟΙ₃) , 2,67 (s, 1, acetylen).

Μ»· • · e ·· * *··· ·>·«· ·· * * * * • «κ ·♦· » · » * * ·

Sloučenina 63 a 64

K roztoku 240 mg sloučeniny 62 v 5 ml THF se přidá 260 mg lithium(terč.butoxy) ₃A1H. Směs se 1 hodinu míchá, pak se vlije do vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Takto získané isomerní alkoholy se oddělí preparativní vysokotlakou kapalinovou chromatografií HPLC v reversní fázi na sloupci C18 při použití gradientu acetonitrilu ve vodě. Produkty, získané po odpaření elučního činidla se nechají krystalizovat ze směsi vody a ethanolu. Tímto způsobem se získá 68 mg

3a-hydroxyderívátu 64 a 70 mg 3p-isomeru 63. Rf pro obě látky = 0,36 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4, Rf výchozí látky = 0,54. Teplota tání sloučeniny 63 je 165 až 167 °C, teplota tání sloučeniny 64 je 171 až 172 °C. NMR pro sloučeninu 64 δ 3,80 (m, 1, H₃) , 2,67 (s, 1, acetylen), 1,17 (d, 3, 16aCH₃) , 1,02 (s, 3, 18 CH₃) , 0,77 (d, 3, 7ccCH₃) , 0,90 (d, 3, 11βΟΗ₃) .

NMR pro sloučeninu 63 δ 4,05 (m, 1, H₃) , 2,67 (s, 1, acetylen), 1, 18 (d, 3, 16aCH₃) , 1,02 (s, 3, 18 CH₃) ,

0,77 (d, 3, 7ccCH₃) , 0,93 (d, 3, llpCH₃) .

Příklad 7

Sloučeniny podle tohoro příkladu se připravují způsobem podle schématu VIZ

T

• * ► · · « » • · 6 ·· ··

4· «·»·

Sloučenina 66

Κ roztoku 10 g lla-hydroxynordiendionu 65 ve 45 ml DMF se přidá 10 g imidazolu a pak při teplotě 0 °C ještě

8,6 ml trimethylsilylchloridu. Směs se 1 hodinu míchá, pak se vlije do směsi vody a ledu a produkt se extrahuje ethylacetátem. Surový produkt se chromatografuje a pak se rozetře s heptanem, čímž se získá 7,8 g 11-trimethylsilyloxyderivátu 66 s teplotou tání 89 až 90 °C.

NMR δ 4,08 (m, 1, ΙΙαΗ), 5,80 (s, 1H, H4), 6,25 (m, 2, H6,7), 0,15 (s, 9, trimethylsilyl).

Sloučenina 67

K roztoku 5,3 g sloučeniny 66 a 500 mg octanu měďnatého ve 20 ml THF se při teplotě -30 °C po kapkách přidá 9,8 ml 1 M roztoku methylmagnesiumchloridu v THF. Směs se 1 hodinu míchá a pak se vlije do roztoku 6 ml koncentrované kyseliny sírové ve 300 ml vody a vzniklá směs se míchá přes noc. Produkt se extrahuje ethylacetátem, vysuší se a odpaří do sucha, čímž se získá

4,8 g pevného produktu s dostatečnou čistotou pro následující reakci.

NMR δ 5,85 (s, 1, H4), 3,92 (m, 1, Hllcc) , 0,83 (d, 3, 70(,(¾) , 0,95 (s, 3, I8CH3) , Rf = 0,22 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3, Rf výchozí látky = 0,65.

Sloučenina 68

K roztoku 4,8 g sloučeniny 67 a 6, 6 g NMO ve 100 ml acetonu se přidá 130mg tetrapropylamoniumperoxyruthenátu. Směs se míchá 2 hodiny, pak se přidají 2 g silikagelu a •· ·· ·· ·· ·· ···· pak ještě 100 ml silikagelu. Směs se míchá ještě 0,5 hodiny a pak se zfiltruje přes celit. Filtrát se odpaří a odparek se smísí s diisopropyletherem, čímž se získají 4 g v podstatě čistého trionu 68.

NMR δ 5,89 (s, 1, H4), 0,89 (s, 3, 18CH₃) , 0,92 (d, 3, 7ctCH₃) , Rf = 0,46 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3, Rf výchozí látky =0,24.

Sloučenina 69

Směs 3,5 g steroidu 67, 1,3 ml ethandithiolu, 300 mg kyseliny p-toluensulfonové a 35 ml ethanolu se 1 hodinu vaří pod zpětným chladičem. Pak se reakční směs zchladí na teplotu místnosti a přidá se 80 ml chladného 0,5 N roztoku NaOH. Pak se směs míchá ještě 1 hodinu, načež se produkt odfiltruje a promyje se chladnou vodou. Po usušení ve vakuu při teplotě 50 °C se získá 4,6 g sloučeniny 69.

NMR δ 5,66 (s, 1, H4), 3,22 a 3,38 (m, 4, thioketal),

0,85 (s, 3, 18CH₃) , 0,88 (d, 3, 7aCH₃) , R_f = 0,88 při použití toluenu a ethylacetátu 7:3, R_f výchozí látky = 0,59.

Sloučenina 70

K roztoku 4,0 g sloučeniny 69 ve směsi 100 ml methanolu a 50 ml methylenchioridu se při teplotě -20 °C po malých podílech přidá 450 mg hydroborátu sodného. Pak se směs ještě 1 hodinu míchá, po této době je reakce ukončena, ke směsi se přidá 5 ml acetonu a pak se směs odpaří na malý objem a zředí 100 ml vody, načež se extrahuje methylenchloridem. Po vysušení a odpaření se tímto způsobem získá 3,9 g v podstatě čisté sloučeniny 70.

NMR δ 3,90 (m, 1, 17ccH) , 0,82 (d, 3, 7ctCH₃) , 0,73 (s, 3, 18CH₃) , Rf = 0,39 při použití heptanu a ethylacetátu 1:1, R_f výchozí látky = 0,65.

Sloučenina 71

Roztok 2,5 ml trimethylsílylchorídu ve 20 ml etheru se po kapkách přidá ke směsi 4,7 g sloučeniny 70 a 2,6 g imidazoiu v 50 ml DMF při teplotě 0 °C. Směs se 1 hodinu míchá, pak se zředí směsí vody a ledové drti a produkt se extrahuje ethylacetátem. Po vysušení a odpaření organické fáze se odparek rozetře s 80% vodných ethanolem na ledové lázni, odfiltruje a suší ve vakuu při teplotě 50 °C, čímž se získá 5,2 g sloučeniny 71.

NMR δ 3,76 (t, 1, 17ccH) , 0,65 (s, 3, 18CH₃) , 0,80 (d, 3, 7ccCH₃) , 5,60 (s, 1, H4), R_f = 0,86 při použití heptanu a ethylacetátu 1:1, Rf výchozí látky = 0,37.

Sloučenina 73

Suspenze 4,4 g terč.butoxidu draslíku a 16,2 g methyltrifenylfosfoniumbromidu ve 130 ml toluenu se zahřívá 0,5 hodiny na teplotu 100 °C pod dusíkem.

Výsledná žlutá směs se zchladí na teplotu 50 °C a přidá se roztok 4,6 g steroidu 71 ve 20 ml toluenu. Reakční směs se ještě 1 hodinu míchá při teplotě 100 °C, pak se zchladí a vlije do 500 ml směsi vody a ledové drti. Výsledný produkt se extrahuje toluenem, extrakt se promyje, vysuší a odpaří. Odparek se chromatografuje na silikagelu v toluenu k odstranění znečištění reakčním činidlem. Tímto způsobem se získá 6,3 g sloučeniny 72, • · která se rozpustí ve 20 ml THF a k roztoku se přidá 18 ml 1 M roztoku TBAF v THF. Směs se míchá ještě 0,5 hodiny, pak se zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Takto získaný produkt se čistí chromatografií, čímž se získá

4,7 g sloučeniny 73 s teplotou tání 177 až 180 °C.

NMR δ 4,77 a 4,86 (AB, 2, methylen Η), 5,60 (s, 1, H4),

3,72 (m, 1, 17aH) 0,70 (s, 3, 18CH₃) , 0,77 (d, 3, 7aCH₃) , Rf = 0,10 při použití heptanu a ethylacetátu 9:1, Rf výchozí látky = 0,73.

Sloučenina 74

Roztok 2,45 g kyseliny jodisté ve směsi 12 ml vody a 12 ml methanoiu se přidá k roztoku 4,7 g sloučeniny 73 ve 40 ml methylenchloridu. Směs se míchá 45 minut a pak se zředí vodou. Produkt se extrahuje methylenchloridem. Organická vrstva se několikrát promyje 5% vodným roztokem thiosíranu sodného a vodou a pak se vysuší a odpaří. Odparek se čistí chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá 2,6 g sloučeniny 74.

NMR δ 0,73 (s, 3, 18CH₃) , 0,79 (d, 3, 7aCH₃) , 5,88 (s, 1, H4), 4,83, 4,94 (AB, 2, methylen Η), 3,78 (m, 1, 17αΗ),

Rf = 0,25 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4, R_fvýchozí látky - 0,48.

Sloučenina 75

Směs 2,6 g sloučeniny 74, 7 ml trimethylorthomravenčanu, 480 mg kyseliny p-toluensulfonové a 50 ml methanoiu se míchá při teplotě místnosti a současně se reakce sleduje chromatografií na tenké vrstvě, TLC. Po

2,5 hodinách se reakční směs vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a vzniklá směs se extrahuje ethylacetátem. Po vysušení a odpaření ve vakuu se získá směs Δ5,6- a Δ5 (10)-ketalu v poměru 1:1. Rf = 0,46 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4, Rf výchozí látky = 0,25.

NMR (směs ketalů 1:1) δ 3,15, 3, 22, 3,24 (singlety, 6, signály OCH3) , 0,77, 0,87 (2x d, 3, 7aCH₃) , 0,65, 0,71 (2x s, 3, 18CH₃) .

Sloučenina 76

Surový produkt 75 se rozpustí v 60 ml acetonu. K roztoku se přidá 3,7 g N-methylmorfolin-N-oxidu a 75 mg tetrapropylamoniumperoxyruthenátu. Směs se 2 hodiny míchá a pak se přidá 1 g silikagelu a 60 ml heptanu. Směs se ještě 15 minut míchá, pak se zfiltruje přes celit a filtrát se odpaří do sucha. Odparek se nechá projít krátkým sloupcem oxidu křemičitého, čímž se získá 1,9 g směsi ketanu 76 jako směs Δ5(10)- a A5,6-ketalu.

NMR má typické signály při δ 0,82, 0,93 (2xd, 3, 7ccCH₃) , 0,79, 0, 85 (2xs, 3, I8CH3) , 3, 15, 3,22, 3,25 (s, 6, signály OCH₃) , 4,70, 4,85 a 4,87 a 4,93 (2x AB, 2, methylen Η), R_f = 0,58 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4, Rf výchozí látky = 0,45.

Sloučenina 77

Roztok 500 mg sloučeniny 76 v 10 ml THF a 0,4 ml DMPU se po kapkách přidá při teplotě -40 °C k 1,6 ml 1 M roztoku hexamethyldisilazidu lithného v 10 ml THF. Směs se ještě 45 minut míchá a pak se přidá 120 μΐ methyljodidu. Pak se směs míchá ještě 1 hodinu při teplotě -20 °C, načež se reakční směs vlije do vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Materiál, získaný po promytí, vysušení a odpaření organické fáze, se nechá projít sloupcem oxidu křemičitého, čímž se získá 510 mg 16cc-methylderivátu 77 ve formě směsi isomerů na dvojné vazbě. R_f = 0,56 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3,

Rf výchozí látky = 0,48.

NMR δ 1,15, 1,17 (2x d, 16aCH₃) .

Sloučenina 78

Acetylid lithia se připraví tak, že se 7,1 ml 1,6 M roztoku butyllithia v hexanu po kapkách přidá k 0,46 ml 1,2-díbromethenu v 10 ml THF při teplotě -60 °C. Směs se 0,5 hodiny míchá, pak se přidá roztok 500 mg steroidu 77 v 10 ml THF a reakční směs se míchá ještě 0,5 hodiny, přičemž v průběhu této doby se teplota nechá stoupnout na teplotu místnosti. Pak se přidá voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Takto získaný materiál se nechá projít krátkým sloupcem oxidu křemičitého, čímž se získá 540 mg sloučeniny 78 ve formě isomerů na dvojné vazbě.

NMR δ 2,74 a 2,76 (2x, s, 1, acetylen), 1,17, 1,19 (2xd, 3, 16aCH₃) , 0,78 , 0,88 (2x d, 3, 7ccCH₃) , R_f = 0,50 při použití heptanu a ethylacetátu 7:3, Rf výchozí látky = 0,60.

Sloučenina 79

K roztoku 440 mg sloučeniny 78 ve 20 ml acetonu se přidají 4 mg 4 N roztoku HCI. Směs se 1 hodinu míchá do ukončení reakce a pak se směs vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného vzniklá směs se • 9 extrahuje ethylacetátem. Po promytí, vysušení a odpaření se získá 380 mg v podstatě čisté sloučeniny 78, která se přímo užije v následujícím stupni.

NMR δ 5,88 (s, 1, H4), 5,90 (AB, 2, methylen), 2,76 (s,

1, acetylen) , 1,18 (d, 3, 16aCH₃) , 0,88 (s, 3, 18CH₃) ,

0,79 (d, 3, 7ccCH₃) .

Sloučenina 80

K roztoku 280 mg sloučeniny 79 ve směsi 30 ml kapalného amoniaku a 10 ml THF se při teplotě -40 °C přidávají malé části fólie lithia tak, dlouho, až modré zbarvení směsi přetrvá 15 minut. Pak se malý přebytek lithia rychle rozruší přidáním pevného chloridu amonného a amoniak se nechá odpařit. Ke zbývajícímu materiálu se přidá 100 ml vody a směs se extrahuje ethylacetátem. Organický materiál, který se izoluje po promytí, vysušení a odpaření směsi, obsahuje téměř čistou sloučeninu 80.

Rf = 0,57 při použití směsi heptanu a ethylacetátu 6:4. NMR δ 4,78, 4,88 (AB, 2, methylen), 2,66 (s, 1, acetylen), 1,19 (d, 3, 16aCH₃) , 0,86 (s, 3, 18CH₃) , 0,90 (d, 3, 7ctCH₃) .

Sloučenina 81

K roztoku 160 mg sloučeniny 80 v 10 ml THF se při teplotě 0 °C po malých podílech přidává lithiumaluminiumhydrid až do ukončení reakce. Pak se přidá ještě 1 ml nasyceného vodného roztoku síranu sodného a pak ještě malé množství pevného síranu sodného. Směs se 15 minut míchá a pak se zfiltruje přes celit. Filtrát se odpaří a odparek se čistí pomocí preparativní • · • · · · • ·

HPLC na sloupci C-18 oxidu křemičitého v reverzní fázi při použití směsi acetonitrilu a vody jako elučního činidla, čímž se získá 55 ml sloučeniny 81 s teplotou tání 198 až 199 °C. Rf = 0,33 při použití heptanu a ethylacetátu 6:4, R_f výchozí látky =0,57.

NMR δ 3,67-(m, 1, 3αΗ), 4,70, 4,82 (AB, 2, methylen) 2,65 (s, 1, acetylen) , 1,18 d, 3, 16aCH₃) , 0,83 (s, 3, 18CH₃) , 0,89 (d, 3, 7aCH₃) .

Příklad 8

Sloučeniny podle vynálezu byly podrobeny zkouškám na svou účinnost na receptor estrogenu při zkoušce na vazbu a na transaktivaci.

Stanovení kompetitivní vazby na lidský receptor pro estrogen v cytoplasmě z buněk CHO bylo použito k určení relativní afinity zkoumaných látek pro receptor estrogenu, přítomný v cytosolu rekombinantních buněk vaječníků čínského křečka, CHO, jde o buňky po stabilní transfekci lidským receptorem pro estrogen, výsledky byly srovnávány s výsledky při použití estradilu E₂. Tímto způsobem je možno stanovit poměr účinnosti jednotlivých látek. Uvedená buněčná linie CHO se získává od Department of Biotechnology and Biochemistry BBC (Ν. V. Organon) pod obchodním názvem CHO-ER (2B1). Referenčními sloučeninami byly ethinylestradiol a estriol.

Antiestrogenní účinnost sloučenin byla stanovena při biologické zkoušce in vitro při použití rekombinantních buněk vaječníků čínského křečka, které byly po stabilní transfekci současně lidským receptorem α pro estrogen, • * « · · · · ··· · · • ·· · · ·· · « · Β ♦ * ·· · · ♦ · · » ···· hERa nebo receptorem β, hERp, krysím promotorem oxytocinu RO a reportérovým genem pro luciferázu. Antiestrogenní účinnost (poměr účinnosti) pro zkoumanou látku při inhibici transaktivace enzymu luciferázy přes receptor pro estrogen při použití estrogenu Org 2317 (estradiol,

1,3,5(10)-estratrien-3,17β-άίο1) se srovnává se standardem Org 34790 (ICI 164.384, (7α,17β)-N-butyl-3,17-dihydroxy-N-methylestra-1, 3, 5 (10) -trien-7-undekanamid) .

Prostředí pro provedení zkoušek: Šlo o neporušené rekombinantní buňky CHO po stabilní současné transfekci lidským receptorem pro estrogen, krysím receptorem oxytocinu a reportérovým genem pro luciferázu. Buněčná linie je produkována Department of Biotechnology and Biochemistry BBC, (N. V. Organon) pod.názvem CHO-ERRO 2B1-1E9.

Získané výsledky jsou uvedeny v následující tabulce. Údaje v tabulce jsou vyjádřeny v procentech účinnosti použité referenční sloučeniny.

• 4 44 4 · 4 4

Tabulka .

Sloučenina	a-vazba	a-trans- aktivace	β-vazba	β-trans- aktívace
11	57	58	1,1	0,8
15	35	27	0,3	0,3
21	8,6	7,7	0,2	0,1
31	37	9, 6	0,1	0,2
32	2,6	2,4	<0,1	0,1
42	29	2	0,1	<0,04
43	11,9	1,3	0,1	<0, 1
54	27,5	29,7	0,1	1,0
55	36	61,5	0,1	1,9
63	25	22	0,4	0,1
64	35	29	0,2	0,2
81	n . t. ř .	27	n.t.r.	0,1

n.t.r.: nebylo provedeno

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

Nearomatické estrogenní steroidy obecného vzorce I kde

R¹ znamená atom vodíku, Cl-C3alkyl nebo C2-C3acyl,

R² znamená atom vodíku, a-Cl-C4alkyl, a-C2-C4alkenyl nebo a-C2-C4alkinyl,

R³ znamená atom vodíku, Cl-C4alkyl, C2-C4alkenyl nebo C2-C4alkinyl v poloze 15 nebo 16 steroidní struktury,

R⁴ znamená atom vodíku, Cl-C5alkyl, C2-C5alkenyl nebo C2-C5alkinyl, vždy popřípadě substituované atomem halogenu, výhodnou skupinou je ethinyl,

R⁵ znamená atom vodíku, Cl-C3síkyl nebo C2-C3acyl,

R⁶ znamená Cl-C5alkyl, C2-C5alkenyl nebo C2-C5alkinyl nebo Cl-C5alkylidenovou skupinu, vždy popřípadě substituované atomem halogenu nebo Cl-C3alkyloxyskupinou, přerušovaná čára znamená případnou dvojnou vazbu.
2. Nearomatické estrogenní steroidy podle nároku 1, obecného vzorce II ·ι»« kde R¹ znamená atom vodíku, Cl-C3alkyl nebo C2-C3acyl,

R² znamená atom vodíku, a-Cl-C4alkyl, a-C2-C4alkenyl nebo a-C2-C4alkinyl,

R³ znamená atom vodíku, Cl-C4alkyl v poloze 16 steroidní struktury,

R⁴ znamená ethinyl,

R⁵ znamená atom vodíku, Cl-C3alkyl nebo C2-C3acyl,

R^s znamená Cl-C5alkyl, C2-C5alkenyl nebo C2-C5alkinyl, vždy popřípadě substituovaný atomem chloru nebo fluoru a v případě, že R⁶ znamená Cl-C2alkyl, ethenyl nebo ethinyl, popřípadě substituovaný atomem chloru nebo fluoru.
3. Nearomatické estrogenní steroidy podle nároku 2, kde R¹ znamená atom vodíku,

R² znamená atom vodíku,

R³ znamená atom vodíku nebo α-methyl nebo a-ethyl v poloze 16,

R⁴ znamená ethinyl,

R⁵ znamená atom vodíku,

R⁶ znamená propenyl, allyl nebo butenyl.
4. Farmaceutický prostředek, vyznačuj íci se t i m, že jako svou účinnou složku obsahuje nearomatický estrogenní steroid obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 3 spolu s farmaceutickými pomocnými látkami.
5. Použití nearomatických estrogenní steroidů obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 3 pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení poruch, vyvolaných nedostatkem estrogenu. Zastupuje: