CZ284196A3 - Quick microbiological test for detection of antibacterial compounds - Google Patents
Quick microbiological test for detection of antibacterial compounds Download PDFInfo
- Publication number
- CZ284196A3 CZ284196A3 CZ962841A CZ284196A CZ284196A3 CZ 284196 A3 CZ284196 A3 CZ 284196A3 CZ 962841 A CZ962841 A CZ 962841A CZ 284196 A CZ284196 A CZ 284196A CZ 284196 A3 CZ284196 A3 CZ 284196A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- test
- agar medium
- microorganism
- sample
- added
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 43
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 36
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 7
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 title abstract description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 147
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims abstract description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000002824 redox indicator Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000002696 acid base indicator Substances 0.000 claims abstract description 9
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 claims abstract description 7
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 claims abstract description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 73
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 73
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 38
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 32
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 18
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 4
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000005192 partition Methods 0.000 claims 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 abstract description 23
- 239000008267 milk Substances 0.000 abstract description 23
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 abstract description 23
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 6
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 abstract description 6
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 abstract description 5
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 abstract description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 20
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 10
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 7
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 7
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 6
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- SEEPANYCNGTZFQ-UHFFFAOYSA-N sulfadiazine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=NC=CC=N1 SEEPANYCNGTZFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960004306 sulfadiazine Drugs 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- -1 Gallocianin Chemical compound 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical class OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 3
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- MKNQNPYGAQGARI-UHFFFAOYSA-N 4-(bromomethyl)phenol Chemical compound OC1=CC=C(CBr)C=C1 MKNQNPYGAQGARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical class F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIRDPEPUXNCOLD-UHFFFAOYSA-N [9-(diethylamino)benzo[a]phenoxazin-5-ylidene]azanium;sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O.C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=[NH2+])C2=C1.C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=[NH2+])C2=C1 QIRDPEPUXNCOLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 2
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 235000018343 nutrient deficiency Nutrition 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- LNOBZXNCABUBKK-UHFFFAOYSA-N 2,3,5-triphenyltetrazolium Chemical compound C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 LNOBZXNCABUBKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical compound O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 description 1
- KEEYRKYKLYARHO-UHFFFAOYSA-N 5-[(4,5-dimethoxy-2-methylphenyl)methyl]pyrimidine-2,4-diamine Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC(C)=C1CC1=CN=C(N)N=C1N KEEYRKYKLYARHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006149 Electron carriers Proteins 0.000 description 1
- XXACTDWGHQXLGW-UHFFFAOYSA-M Janus Green B chloride Chemical compound [Cl-].C12=CC(N(CC)CC)=CC=C2N=C2C=CC(\N=N\C=3C=CC(=CC=3)N(C)C)=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 XXACTDWGHQXLGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- IURGIPVDZKDLIX-UHFFFAOYSA-M [7-(diethylamino)phenoxazin-3-ylidene]-diethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC3=CC(N(CC)CC)=CC=C3N=C21 IURGIPVDZKDLIX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- CQPFMGBJSMSXLP-UHFFFAOYSA-M acid orange 7 Chemical compound [Na+].OC1=CC=C2C=CC=CC2=C1N=NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 CQPFMGBJSMSXLP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000003432 anti-folate effect Effects 0.000 description 1
- 229940127074 antifolate Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- VSSMQLIMSVAUDK-UHFFFAOYSA-L disodium;5-[(4-ethoxyphenyl)diazenyl]-2-[4-[(4-ethoxyphenyl)diazenyl]-2-sulfonatophenyl]sulfanylbenzenesulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1N=NC(C=C1S([O-])(=O)=O)=CC=C1SC1=CC=C(N=NC=2C=CC(OCC)=CC=2)C=C1S([O-])(=O)=O VSSMQLIMSVAUDK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BMYUQZABARGLAD-UHFFFAOYSA-L disodium;8-(4-methylanilino)-5-[[4-[(3-sulfonatophenyl)diazenyl]naphthalen-1-yl]diazenyl]naphthalene-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC(C)=CC=C1NC(C1=C(C=CC=C11)S([O-])(=O)=O)=CC=C1N=NC(C1=CC=CC=C11)=CC=C1N=NC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 BMYUQZABARGLAD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-4-(trifluoromethyl)-1,3-thiazole-5-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C=1SC(N)=NC=1C(F)(F)F XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000004052 folic acid antagonist Substances 0.000 description 1
- FETSQPAGYOVAQU-UHFFFAOYSA-N glyceryl palmitostearate Chemical compound OCC(O)CO.CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O FETSQPAGYOVAQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- KHLVKKOJDHCJMG-QDBORUFSSA-L indigo carmine Chemical compound [Na+].[Na+].N/1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C(=O)C\1=C1/NC2=CC=C(S(=O)(=O)[O-])C=C2C1=O KHLVKKOJDHCJMG-QDBORUFSSA-L 0.000 description 1
- 229960003988 indigo carmine Drugs 0.000 description 1
- 235000012738 indigotine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004179 indigotine Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000011946 reduction process Methods 0.000 description 1
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003584 silencer Effects 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003464 sulfur compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- WSWJIZXMAUYHOE-UHFFFAOYSA-N tetroxoprim Chemical compound C1=C(OC)C(OCCOC)=C(OC)C=C1CC1=CN=C(N)N=C1N WSWJIZXMAUYHOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004809 tetroxoprim Drugs 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012780 transparent material Substances 0.000 description 1
- IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N trimethoprim Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001082 trimethoprim Drugs 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 1
- PEAGNRWWSMMRPZ-UHFFFAOYSA-L woodstain scarlet Chemical compound [Na+].[Na+].OC1=CC=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C=C(S([O-])(=O)=O)C2=C1N=NC(C=C1)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 PEAGNRWWSMMRPZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
(57, Anotace:
Tento vynález se zabývá metodou mikrobiologického testu pro detekci antibakteriálních sloučenin v kapalných vzorcích, jako Je mléko, tělní tekutiny, sérum a moč. Tato metoda využívá acidobazické, nebo redoxní Indikátory k detekcí produkce testovaných organizmů, a vyznačuje se tím, že termofllní bakteriální kmen Baclllus nebo Streptoccocus, to jest Bacillus stearothermophylus var. calidolactls C953, je zde použit v koncentraci okolo 107 CFU/ml, s výhodou mezi 2x107 a 3xlO8CFU/ml.
Λ 77i i
<* _ i
Od -2.044 -36 - cV
Ca c
o
ΟΉ
-j
O cn
Rychlý mikrobiologický antibakteriálních sloučenin test pro detekci
Oblast techniky
Tento vynález se zabývá novými mikrobiologickými metodami testů pro rychlé určení přítomnosti, nebo nepřítomnosti antibakteriálních sloučenin v kapalinách jakc je mléko, masové šťávy'·, sérum a moč.
Tento vynález také popisuje jednotku pro detekci zbytků antibakteriálních sloučenin v kapalných vzorcích a použití této jednotky.
Dosavadní stav techniky
Metody mikrobiologických testů pro určení antibakteriálních sloučenin, zvláště antibiotických a chemoterapeutických zbytků jako jsou sulfonamidy v kapalných vzorcích jako je mléko,masová štáva , sérum a moč byly známy již delší dobu. Například takové testy byly popsány v GB-A-1467439, E? 005391, DE 3613794,CA 2056581, a EP 0295792. Všechny tyto dokumenty se zabývají testy, u kterých se obecně očekává výsledek od 2 1/2 do 4 1/2 hodiny, který je indikován barevnou změnou acidobazických , nebo redoxních indikátorů přidaných do systému. Podstata je v tom, že antibakteriální sloučenina je přítomna ve vzorku v dostatečné koncentraci k inhibici produkce testovaného organizmu a barva indikátoru zůstane stejná, zatímco jestliže inhibice neprobíhá, produkce testovaného organizmu je doprovázena tvorbou kyselin, nebo snižováním metabolitú, a toto vede ke změně barvy indikátoru.
Výše zmíněné známé testovací jednotky mohou zahrnovat agarové médium, naočkované vhodným testovacím organizmem, zvláště bakteriálním kmenem Bacillus nebo Scr&ptoccocus, a acidobazickýra indikátorem, nebo redoxním indikátorem. Vhodný testovací organizmus spolu s indikátorem jsou optimálně zavedeny do agarového tlumícího roztoku, dále jsou do roztoku zavedeny živiny, a látky pro změnu citlivosti určitých antimikrobiálních sloučenin, přesným, nebo neutralizačním způsobem.
Nakonec je agarový roztok ustálen, na přípustnou formu takovým způsobem, že testovaný organizmus zůstane činný, ale nebude se množit, protože je zajištěn nedostatek živin, a/nebo nízká teolota. Volitelně mohou být sloučeniny přidávány do agarového média, takovými sloučeninami jsou živiny, nebo indikátor(y) jako samostatný zdroj ve formě tablet nebo papírových disků
Výhodné druhy SCrepíococcus pro použití v obecných mikrobiologických testech pro antibakteriální sloučeniny jsou druhy Streotoooccus thermophilus. Výhodnými druhy Bacillus pro použití v takovýchto testech je Bacillus stearothermophilus. Tyto druhy mohou být použity pro tyto účely jako výtrusy.
Mnoho dokumentů obsahuje mikrobiologické testy pro antibakteriáir.í sloučeniny pro velmi široké koncentrace testovaných organizmů, které jsou uváděny od 10^ do 10θ - 1C5 jednotek tvořících kolonie (CFU) na ml. Příklady takovýchto dokumentů jsou G3-A- 1467439, E? 000581, EP 0611001, DE 3429823, US 394,1658, US 4946777 a EP 0285792,. Nicméně žádný z těchto dokumentů nemá specifický příklad kde je uváděna koncentrace testovaných organizmů vyšší než 1G7 CFU/ml.
Tento fakt naznačuje, že v praxi by mikrobiologické testy pro antibakteriální sloučeniny měly být obvykle prováděny s testovanými organizmy o koncentraci nižší než 107 CFU/ml. V CA 2056581 ( str.11, ř. 27 )je specielně uvedeno, že koncentrace testovaných organizmů v tomto zvláštním případě pro spory Bacillus stearothermophyllus se může měnit, ale nikdy nemůže překročit koncentraci 107 CFU/ml agarového média.
Takže až do dnešní doby nebylo běžně přípustné,že testovaný organizmus o koncentraci 107 CFU/ml je maximální koncentrace, která může být použita v tomto typu mikrobiologických testů popsaných v tomto dokumentu.
Až do této doby bylo běžně uvažováno, že použití vyšších koncentrací mikroorganizmů v takovýchto testech vede ke ztrátě citlivosti pro relevantní antibakteriální sloučeniny.
Zajisté vhodná testy pro antibakteriální sloučeniny by měly mezi jinými splňovat následující požadavky:
vysokou citlivost pro široký okruh antibakteriálních sloučenin používaných v praxi.
Testy s bakteriální koncentrací od lO^do 107 CFU/ml obecně poskytují výsledky mezi 2i/s až 4i/2 hodinami, dokonce i v pozdějším čase. Ačkoliv je doba těchto testů zmiňována ( například EP 000581, G3-A1467439, US 3941658, US 49467777) minimálně I1/2 hodiny, takové testy nebyly nikdy demonstrovány, v příkladech, ani nikde jinde.
Až do dnešní doby nebylo možné uvažovat provedení mikrobiologických testů pro antibakteriální sloučeniny s testem, který by trval kratší dobu než 21/2 hodiny za použití koncentrace testovaných organizmů vyšší než 107 /ml, s tím, aby byla dodržena dobrá retenční citlivost pro široký okruh antibakteriálních sloučenin.
Tato technická podmínka nyní ukazuje, že jsou proveditelné mikrobiologické testy s opačnými podmínkami, než které jsou uvedeny shora.
Podstata vynálezu
Tento vynález se zabývá způsobem detekce jedné, nebo více antimikrobiálních sloučenin v kapalném vzorku, jako je mléko, masové štávy, sérum, nebo moč, který zahrnuje následující kroky:
(i) kontakt kapalného vzorku se zde testovacím mikroorganizmem vybraným z termoíilního bakteriálního kmene Bacillus a Streptoccocus u kterých je ještě před přidáním zabráněno růstu.
(ii) poskytnutí podmínek testovacím mikroorganizmům, při kterých v nepřítomnosti antibakteriálních sloučenin mohou růst a mohou být detekovány (iii) zajištění růstu uvedených mikroorganizmů po době dostatečné ke zjištění růstu testovacího mikroorganizmu, za nepřítomnosti antibakteriálních sloučenin ale během kterého perioda detekovatelné produkce testovancích mikroorganizmů je udržovaná pomocí známého množství antibakteriální sloučeniny v testovaném vzorku;
čímž uvedený testovaný organizmus je přítomen v rozmezí okolo 107 jednotek tvořících kolonie ( CcU )/ml.
Takovéto testy poskytují patrné zkrácení doby průběhu testu ve srovnání s obecnými mikrobiologickými testy, pro antibakteriální sloučeniny.
Zatímco obecné mikrobiologické testy pro antibakteriální sloučeniny obecně dávají výsledek mezi 2:/2 a 4i/2 hodinami, způsob popsaný v tomto dokumentu poskytuje zkrácení doby testu na méně než 2i/2 hodiny, to odpovídá 70 minutám, nebo 60 minutám , nebo ještě kratší.
To je velice důležité pro použití protože kvalita kapalného vzorku je známá rychleji.xxx
Mimoto je překvapivé použití mikrobiologických testů podle vynálezu s koncentrací testovaného organizmu vyšším než 107 CFU/ml a výsledek může být obdržen za kratší dobu než 150 minut bez ztráty citlivosti.
Byla objevena možnost použití mikrobiologických testů podle vynálezu k detekcikterá trvá méně než 2i/2 hodiny , např. kratší dobu než 70 minut,pro Penicillin
Ί
G pro 0,003IU/ml ve vzorku mléka ( uvedeno v příkladech).
Testovaný mikroorganizmus přítomný v testu je uchování za takových podmínek, že mikroorganizmy jsou aktivovány dokonce po jednom roce, jestliže dojde ke kontaktu s testovaným vzorkem.
Testovaný mikroorganizmus může být uchován v disperzní formě, v tuhém médiu, kterým je tuhé agarové médium.
Dalším aspektem tohoto vynálezu je skutečnost, že testovaný mikroorganizmus je uchován v koncentrované formě, to jest v suché formě.
V případě, že mikroorganizmus je dispergován v pevném médiu, množství, nebo přítomnost mikroorganizmů je definováno jako CFU uvedených mikroorganizmů na ml uvedeného média (CFU/ml).
V případě, že mikroorganizmus je přítomen v jiné formě (suchý led)pak množství, nebo přítomnost mikroorganizmu je definováno jako CFUs uvedených mikroorganizmů na ml testovaného vzorku( mléka ), přidaného během detekční metody.(CFU/ml)
Antibakteriální sloučeniny, které mohou být detekovány podle tohoto vynálezu, jsou antibiotika a chemoterapeutika podobné sulfátovým sloučeninám.xxx Testovací metoda podle vynálezu může být použita pro detekci antibakteriálních sloučenin v širokém rozmezí pro kapalné vzorky, například mléko, mléčné produkty, tělní ščávy, sérum, moč, vajíčka, med, voda, a extrakt z masa, vajíčka nebo med.
Dalším aspektem tohoto vynálezu je, že jednotkový test za použití metody podle vynálezu zahrnuje udržování kontejneru s pevným agarovým médiem ve které je dispergován testovaný mikroorganizmus ,který je vybrán z termofilního rodu Bacillus a Střeptococcus o koncentraci okolo 107 CFU/ml uvedeného agarového média s optimálním přídavkem ,který obsahuje živiny pro produkci určeného testovaného organizmu a/nebo jeden , nebo více komponentů pro detekci uvedené produkce.
Příklady nádob použitých pro postup podle vynálezu mohou být trubičky, nebo bloky s trubičkovými zářezy, například transparentní trubičky, samostatné, nebo v sadách, nebo kombinované ve formě bloků z průhledného materiálu mající díry ve tvaru zde uvedeném to jest mikrotitrové plátky.
Agarové médium v takové jednotce může být agarovým médiem, které je tlumeno a přidáno do testovaného organizmu,dále je přidán zdroj živin, který obsahuje dostatečnou výživu, která podporuje vzrůst bujení testovaného organizmu, a acidobazický indikátor,
nebo jeden, nebo více redoxních indikátorů, a volitelné látky pro změnu citlivosti, jistých antimikrobiálních sloučenin, v pozitivním , nebo negativním postupu. Všechny tyto komponenty mohou být včleněny do počátečního agarového roztoku, použitého pro přípravu testované jednotky, nebo alespoň některá může být přidána odděleně, do agarového média.
Živiny mohou být alespoň z části volitelné, a mohou být postupně přidány do agarového média, do testované jednotkové formy, a odděleně použitelné jako zdroj například ve formě tablet, papírového kotouče, kterýje umístěn do agarového média před provedením testu.
Alespoň jeden indikátorový komponent může být také přidán odděleně do agarového media, to jest pomocí začlenění do samostatného živného zdroje.
Také tlumič a testovaný organizmus může být přidán jako separátní zdroj.
Zdroj výživy a /nebo jedna nebo více indikátorových komponent např. redoxní indikátory mohou být přidány do testovaného vzorku.
Jestliže živiny a/nebo indikátory a/nebo testovaný organismus jsou přidány do agarového média, nebo testovaný vzorek ze separátního použitého zdroje, kterým jsou tablety, pomocí kerých je zabráněno transportu vlhkosti z agarového media do použitého dopln/kového zdroje. Jestliže je použita tableta pro tyto účely přenos vlhkosti může býz učiněn povlečením tablet vrstvou odolnou proti vlhkosti, například voskem, a tento povlak musí degradovat, nebo tát během průběhu testu. Tento vosk , má teplotu tání od 35 do 55 °C, výhodně od 4 0 do 4 5 °C.
Ziviny jsou přidávány a umožn~ují množení testovaného mikroorganizmu bez přítomnosti antibakteriálních sloučenin.
Vhodnými živinami jsou například zdroje podobné uhlíku ( lakto'za, glukóza, nebo dextroza ), zdroje podovné dusíku ( pepton } , a zdroje produkčních faktorů a minerály ( kvasinkový extrakt ).
Bujení testovaného mikroorganizmu muže být detekováno pomocí barevné změny agarového média, nebo výsledného testovaného vzorku, za přítomnosti acidobazického , nebo redoxního indikátoru.
Jestliže použitý indikátor je acidobazický indikátor,který je určen pro výhodné pH, které je okolo
5.5 /tímto výhodným indikátorem je nachový bromokrezol nebo fenolová červěn.
Nicméně mohou být také použity ostatní acidobazické indikátory.
Jestliže je požadováno použití redoxního indikátoru, nebo kombinace dvou, nebo více redoxních indikátorů, vhodnými indikátory jsou Brilliantová čem“, Methylenová modř, Toluidinová modř, Nile modř A, 2,3,5-trifeny1tetrazolium, Safranin 0, Indigo Karmínové, Gallocianin, Brilliant Crocein MGO, Acid Yellow 38, Acid Orange 51, Acid Blue 120, Basic Blue 3, Azure A, Azure B, Congo Red, 1-10 Fenantrolin, Janus Green B, Brilliant Cresil Blue.
Ostatní redoxní indikátory ( redoxní mediátory, redoxní katalyzátory a nosiče elektronů) mohou být také použity.
Výhodné redoxní indikátory jsou Brilliant Black, Methylen Blue, Toluidin Blue, Nile Blue A,nebo jejich kombinace, to jest kombinace Brilliant Black,a
Toluidin Blue.
Vhodným testovaným mikroorganizmem pro metodu podle vynálezu je Streptococcus thermophilus, s výhodou Streptococcus thsrmophilus T101 (DSM 4022,uložený v březnu 1987)
Bacillus stearothermophilus může být také alternativně použit.
Zvláště výhodný pro použití v metodě podle tohoto vynálezu je Bacillus stearothermophilus var. calidolactis C953. Rod Bacillus stearothezmolphilus var. calidolactis C953 byl uložen v Mikrobiologické laboratoři na technické univerzitě v Delftu pod přístupovým číslem LMD 74.1 v roce 1974 v Centrální databance voor Schimmelcultures (CBS), Baarn pod číslem CBS 750,83 v roce 1933, kde je dostupný pro veřejnost.
Bacillus stearothermophílus var. calidolactis C953 a Streptococcus thermophilus T101 jsou velmi citlivé na antibakteriální sloučeniny, zvláště na antibiotika jako je penicilín a chemoterapeutika, jako jsou sulfátové sloučeniny.
Tyto mikroorganizmy jsou rychle reprodukovatelné, a mají další výhody v tom , že jejich optimální reprodukční teplota je vysoká,( Bacillus s beazothermolphilus: mezi 50 a 70 °C; Streptococcus bhermophilus,mezi 35 a 45°C )
Tyto vlastnosti těchto mikroorganizmů jsou velmi vhodné pro testy podle tohoto vynálezu, protože nemohou růst při pokojové teplotě, a je velmi malá možnost, že možné mikroorganizmy, které jsou přítomny v testované kapalině, nebo které mají být jinak zahrnuty v testovaném systému, by ovlivnily výsledek testu.
Jestliže testovaným organizmem je rod Bacillus je výhodné do agarového média začlenit suspenzi ve formě sporů, která může být připravena a přidána do agarového media dříve než zkrystalízuje, za pomoci známých metod.( například G8-A-1457439 ) Alternativně, jak je uvedeno výše, testovaný mikroorganizmus může být přidán do agarového média jako oddělený zdroj, například za použití tablet, nebo papírových disků .
Jestliže testovaný mikroorganizmus je rod Streptococcus, bakterie jsou výhodně přidány do agarového média ve formě bakteriálních buněk, které mohou být připraveny podle známých metod ( EF 3 235 792 ).
Jestliže testovaný mikroorganizmus je v koncentrované formě, ( v sublimačně sušené formě, tablet, papírových disků, atd. ) koncentrát je umístěn do nádoby, kterou může být obecně ampule, zapečetění schopná trubice, láhev na vzorky, kvádr s dírami, jako je mikrotitrový plátek, a podobné ( E? 0235792 ).
Koncentrace testovacího organizmu v agarovém médiu je možná okolo 107 CFU/ml, ale nesmí překročit 1010 CFU/ml,to znamená, že testovací organizmus, by měl mít koncentraci mezi 2xl07 a 109 CFU/ml, s výhodou 2xl07 až 3xl03 CFU/ml. Nejvýhodněji by měl mít koncentraci mezi 3xl07 a 2xl03 CFU/ml.
Podle výhodného provedení podle tohoto vynálezu je nastavitelná citlivost testovacího organizmu. Citlivost může být změněna pomocí různých prostředků, například přídavkem určitých látek, pomocí změny podmínek, za kterých probíhá testování, jako je pH, nebo, koncentrace tlumících látek, nebo agaru, nebo pomocí různého poměru agaru a testované kapaliny.
Příklady látek, které mohou být přidány do testovaného saystérau pro změnu citlivosti, mohou být nukleosidy, jako je adenosid, a antifoláty, jako je trircethoprira, ormethoprim, a tetroxoprim, který zlepšuje citlivost testovacího organizmu k sulfátovým sloučeninám. Soli oxalové kyseliny, nebo fluorovodíkové kyseliny mohou být přidány za účelem zlepšení citlivosti k tetracyklinúm. Cystein může být přidán pro zmenšení citlivosti k penicillinúm.
Dále bude vynález popsán podrobněji, pro testy , které používají agarové médium, nicméně odborník v tomto oboru, bude oceňovat, že tyto uvedení mohou být také aplikována pro testy bez agarového média.
Výše uvedené komponenty, které jsou potřebné, nebo které jsou volitelně žádoucí v agarovém médiu, zahrnují volitelné látky, pro změnu citlivosti, k jistým antibakteriálním sloučeninám, mohou být výhodně přidány do tlumičového agarového roztoku.
Agarový roztok umožní krystalizaci v testované jednotce, takovým způsobem, že testovcí organizmus zůstane živý, ale nebude se množit, protože je zajištěn nedostatek živin, a/nebo nízká teplota.
Potřebné sloučeniny, které neměly být přidány do agarového média před krystalizaci, mají být přidány ve formě odděleného zdroje, například ve formě tablet,nebo papírových disků.
Potřebné sloučeniny jsou , testovcí organizmus jeden, nebo výce indikátorů, a živiny. Ostatní sloučeniny, látky pro zvětševí, nebo zmenšení citlivosti jistých antibakteriálních sloučenin, a tlumící roztoky,jsou volitelné.
Výhodnou cestou způsobu podle tohoto vynálezu, je takový způsob , že testovací mikroorganizmus se nereprodukuje a nemnoží v agarovém médiu za přítomnopsti známého minimálního množství antibakteriální sloučeniny, která má být detekována. Také testovací jednotky ,kterými jsou testovací trubičky obsahující agarové médium , které jsou uloženy takovým způsobem, že testovací organizmus se nemůže množit v agarovém médiu.
Toho je obecně docíleno odstraněním živin během provádění testu, nebo udržování kultury ( během produkčních procesů ) a testované jednotky ( během uložení ) při dostatečně nízké teplotě, výhodně mezi 4 a 30 °C s výhodou mezi 40a 15 °C, nebo obojí.
Testované jednotky jsou během uskladnění neprodyšně uzavřeny, a za těchto podmínek mohou být uskladněny po několik málo měsíců.
Optimální tlumící agarové médium obsahující testovací organizmus, a/nebo indikátor(y) a/nebo živiny, a/nebo určité látky, které mění citlivost testu, umožňuje krystalizací ve vertikální testovací jednotce , kterou je trubička.
Tyto jednotky mají stanoveny výhodné velikosti.To je z důvodu zajištění spolehlivosti testu. Množství agarového média v testované jednotce je velice důležitý.
Jestliže je přítomné antibiotikum v testovaném vzorku, pak bude difundovat do agaru. Citlivost testu je nicméně s výhodou zajištěna s různým množstvím krystalického agaru v testované jednotce.
Výhodné množství agarového média v testované jednotce je vybráno takovým způsobem, že se změní barva indikátoru, jestliže detekovaná antibakteriální sloučenina je přítomna v koncentraci nižší, než určitá hodnota, ale barva indikátoru se nezmění, jestliže koncentrace je vyšší než tato hodnota.
η
Výhodně tento test je zařízený na to , že může snímat zdali jistá koncentrace antibakteriální sloučeniny je přítomna, nebo není.
Pro tuto velikost testované jednotky bude výhodný dostatečně vysoký obsah množství agarového média a vzorek odpovídá výšce od 3 -30mm, s výhodou 5-15mm,
Vnitřní rozměr plochy testované jednotky je výhodně 12 Omni , s výhodou l-14mm.
Množství agarového média v testované jednotce je určeno pomocí vrcholů testované jednotky, vnitřním rozměrem plochy testované jednotky a procentickým množstvím testované jednotky, která je plněna agarovým médiem.
Objem agarového média je výhodně 10ul-3ml, výhodněji 15gl-lml, nejvýhodněji 20gl-500ul.
Vhodné množství vzorku testované kapaliny je například 0,01-05ml.
Takovýto příklad testované jednotky podle vynálezu tvořené krystalickým agarovým roztokem o objemu 0,3 ml v sterilní testovací trubičce, která je ve svislé l
poloze, s vnitřním průměrem 9mm bylvhodně nalezen pro detekci 0,003I.U/ml Penicillinu G ve vzorku mléka.
Jestliže jsou použity spory Bacillus steazoZhezmophilus var. je vhodná inkubační teplota mezi 55 a 70 °C, nebo výhodněji mezi 60 a 66 °C.
Inkubace může být provedena pomocí některé konvenční metody inkubace, · kterou může být vodní lázeň, plotýnkový ohřívač,sušička, nebo suchý inkubátor.
Jestliže jsou použity buňky Streptococcuc thermophylus je vhodná inkubační teplota mezi 36 a 44 0 C, nebo výhodněji mezi 39 a 42 °C.
Inkubace může být provedena pomocí některé konvenční metody inkubace, kterou může být vodní lázeň, plotýnkový ohřívač,sušička, nebo suchý inkubátor.
Jak je uvedeno výše je vhodná inkubační perioda kratší než 150 minut, to jest 70 minut, ale je možná ještě menší jak 60 minut, dokonce je možná 30 minut.
Takováto inkubační perioda je zjevně kratší než inkubační doba jiných konvenčních mikrobiologických testovacích systémů pro antibakteriální sloučeniny, používaných v menší koncentraci než 107 CFUs/ml.
Test popsaný vynálezem je velmi jednoduše proveditelný, takže osoby, které provádějí tento test nemusejí být specielně vyškoleni.
Výsledek se stanoví velmi jednoduše.
Po inkubační době barva agarového média, které obsahuje barevný indikátor ukáže jestli se testovací organizmus opravdu reprodukuje nebo ne.
Všechny dokumenty zmíněné v tomto vynálezu jsou zde uvedeny pomocí referencí, právě v takovém rozsahu, jako je každý individuální vynález, nebo patent, který byl specificky a individuálně uveden a začleněn pomocí reference.
Obrázek 1: popisuje závislost trvání testu jako funkce koncentrace spor pro testovací jednotku typu A použité v příkladu IV.
Obrázek 2: popisuje časovou závislost trvání testu jako funkce koncentrace spor pro testovací jednotku typu B použité v příkladu V.
Příklady provedení vynálezu
Příklad I
Příprava testovacích trubiček typu A pro detekci antibiotik
Testovací trubičky typu A obsahovaly agarové médium připravené následujícím způsobem:
Roztok byl připraven z 12g agaru, 9g chloridu sodného, a 50ml 0,1 M triethanolaminového roztoku pufru (pH = 8.0 ) v lOOOml destilované vody. Množství roztoku bromokrezolu nachového dává konečnou koncentraci 20 mg na lOOOml, které bylo také přidáno.
Konečný roztok byl sterilizován po dobu 20 minut při
121 °C a ochlazen na teplotu okolo 60 °C.
K tomuto roztoku byla přidána suspenze sporu Bacillus síearorhermopilus var. calidolactis C953 v destilované vodě a konečná koncentrace byla mezi 10θ a 1010 sporů na ml.
Sterilní trubičky s průměrem okolo Smm byly plněny s 0.3 ml agarového roztoku za aseptických podmínek, a ihned utěsněny, aluminiovou folií.
Agarový roztok v testovaných trubičkách byl potom ustálen, zatímco testované trubičky byly drženy ve svislé poloze.
Trubičky byly uloženy při teplotě mezi 5aC a 15°C.
Příklad II
Příorava testovacích trubiček typu B pro detekci antibiotik
Testovací trubičky typu A obsahovaly agarové médium připravené následujícím způsobem:
Roztok byl připraven z lOg agaru, 9g chloridu sodného, 2g glukózy, 2g peptonu , 2g tryptonu ,
4g kvasinkového extraktu a 50 ml 0.1 M triethanolaminového roztoku pufru (pH = 9.0 ) v lOOOml destilované vody.
Konečný roztok byl sterilizován po dobu 20 minut při
121 °C a ochlazen na teplotu okolo 60 °C.
Množství přidaného roztoku Brilliant Black poskytl konečnou koncentraci 80 mg na 1000ml,a k tomuto roztoku bylo také přidáno množství roztoku Toluidin Blue a byla obdržena konečná koncentrace 3 mg na lOOOml.
K tomuto roztoku byla přidána suspenze sporů Bacillus stearothermopilus var. calidolactis C953 v destilované vodě a konečná koncentrace byla mezi IQ5 a 1010 sporů na ml.
Sterilní trubičky s průměrem okolo 9mm byly plněny s 0.3 ml agarového roztoku za aseptických podmínek, a ihned utěsněny, aluminiovou folií.
Agarový roztok v testovaných trubičkách byl potom ustálen, zatímco testované trubičky byly drženy ve svislé poloze.
Trubičky byly uloženy při teplotě mezi
5°C a 15°C.
Ežlklad. III
Příprava živných tablet
Směs byla vyrobena z lOOg dextrozy, 160g Avicelu PH101, 50g tryptozy , 14g kvasinkového extraktu, a 15g precirolu.
Tato směs byla dostatečná k přípravě okolo 18000 tablet s průměrem přibližně okolo 3mm a tloušťkou přibližně
1.9 mm.
Příklad IV
Provedení testu tvou A
Každá z testovaných trubiček typu A s různými koncentracemi sporů Bacillus stearothermopilus var. calidolactis popsaných v příkladu I byly otevřeny odstraněním plomb.
Zvivne tablety popsané v příkladu III byly přidány do
| každé z | testovaných trubiček. | |||
| Potom 0 . | . 1 ml | čerstvého vzorku kravského mléka | bylo | |
| př idáno | do | každé z testovaných | trubiček a | tyto |
| trubičky | byly | ihned vloženy do vodní | lázně a drženy | při |
teplotě 64 °C.
Každou púl hodinu bylo prováděno sledování těchto trubiček po dobu dvou a púl hodiny. Poté byl určen čas, kdy se barva agarového media změnila na žlutou.
Obrázek I popisuje časový průběh testu korelovaný počtem přidaných sporů do agarového media.
Jestliže v tomto specifickém čase, byla barva agarového media modrá, bylpřítomen známý obsah detekovatelného množství antibakteriální sloučeniny vzorku.
( to jest 0.003 I.U. na ml nebo více penicillinu G )
Obr. 1 ukazuje, že testovaný průběh redukce alespoň do 60 minut je realizovatelný.
Příklad V
Průběh testu typu B
Postup popsaný v příkladu IV byl použit kromě toho, že do testovaných trubiček typu B které byly použity nebyla přidána tableta.
Obr. 2 ukazuje, že testovaný průběh redukce alespoň'' do 60 minut je realizovatelný.
Vzorek VI
Průběh testu typu B
Množství penicilinu G 0.003 I.U. na ml bylo přidáno do čerstvého kravského mléka.
Kontrolní vzorek neobsahoval penicilín G.
Dvě z testovaných trubiček typu B s koncentracemi sporů Bacillus stearothermophilus var. calidolactis popsaných v příkladu II byly otevřeny odstraněním plomb.
Potom bylo přidáno do každé z testovaných trubiček 0.1 ml čerstvého kravského vzorku mléka a tyto
-23«
Tabulka 1: Citlivost testu B pro různé koncentrace spor
| o r» | 9> O X cn | 1 | -r |
| 100 | o X LO <o | I | -r |
| 110 | P* o X O v' | 1 | -r |
| 120 | o X cn cn | 1 | -r |
| 130 | Ρ» o X <o cm | 1 | |
| o v | P* o X o CÍ | 1 | • + |
| 155 | ρ» o X cn T“ | + | |
| 180 | 6,5 x 10“ | 1 | + |
| ls 5 2 λ .£ V | £ b a | Mléko bez antibiotika | Mléko s 0,003 IU/ml pen. |
trubičky byly ihned vloženy do vodní lázně a drženy při teplotě 64 °C.
Každou půl hodinu bylo prováděno sledování těchto trubiček po dobu tří hodin.?oté byl určen čas, kdy barva agarového media se změnila na žlutou.
Obrázek I popisuje časový průběh testu korelovaný počtem přidaných spor do agarového media bez vlivu účinku citlivosti testu v negativním účinku působení.
Tabulka I ukazuje snižování trvání průběhu testu směrem dolů až k alespoň 70 minutám.
Dokonce 70 minutový průběh testu při koncentraci 0.003
I.U. na ml dostačuje k detekci penicilinu G .
Dokonce mohou být detekovány vyšší koncentrace penicilinu G.
Příklad VII
Detekce antibiotik a sloučenin síry na mikrotitračních plotnách ( test tvou C )
Postup přípravy testovaných plátků(test typu C)způsobem popsaným v příkladu I byl stejný kromě toho, že Živiny popsané v příkladu III ( dextroza, tryptoza, a kvasinkový extrakt ), nebyly přidány separátně,ale byly přidány do počátečního agarového média ve stejné koncentraci, jak je popsáno v příkladu I.Také společně s roztokem pufru a množstvím trimethoprimového roztoku bylo přidáno do roztoku a konečná koncentrace byla 6 0pg na litr.
K 20 ul agarového roztoku byly přidány sterilní mikrotitrplátky za aseptických podmínek.Plátky byly ihned zaplombovány aluminiovou fo^iií.
Plátky byly uskladněny při teplotě v rozmezí od 5 °C do 15 °C.
Množství 3ppb penicillinu G bylo přidáno do čerstvého kravského mléka. Mléčný vzorek byl také připraven s obsahem sulfadiazinu o koncentraci 100 ppb.
Kontrolní vzorek neobsahoval peniciiiin G, nebo sulíadiazin.
Mikrotitrační plotny byly otevřeny po odstranění plomb.
Potem bylo 20 ul každého ze třech mléčných vzorků přidáno do každého ze třech testovaných plátků ( duplo) obsahující různé koncentrace, do sporů Bacillus stearobhermopilus var. calidolactis C953. Plátky byly rychle umístěny do vodní lázně a drženy při teplotě °C.
Pozorování bylo prováděno každých 30 minut po dobu 150 minut.Poté byl stanoven čas, kdy barva agarového media se změnila na žlutou.
Jak je ukázáno tabulka 2 popisuje časový průběh testu korelovaný počtem přidaných sporů do agarového media bez vlivu účinku citlivosti testu za negativních podmínek.
Dokonce časový průběh testu je 90 minut, upenicillinu G a sulfadiazinu, mohou být detekovány v koncentracích výhodně v hodnotách 3 ppb penicillinu G a 100 ppb sulfadiazinu.Penicillin G ( 3ppb ) může být dokonce detekován pro trvání testu okolo 30 minut. Dokonce mohou být detekovány vyšší koncentrace upenicillinu G a sulfadiazinu.
Tabulka 2: Citlivost testu typu C pro různé koncentrace spor .
| průběh testu (minuty) | 140 | 123 | 105 | 90 | 80 |
| spoty/ml : media | 1.3 X 107 | 2.5 χ 107 | 5.1 χ 107 | 1.0 X 10® | 2.0 x 10® |
| Mléko bez antibiotika | - | - | - | - | - |
| Mléko s 3ppb penicilinu G | + | + | + | + | + |
| Mléko s 100 ppb sulfadiazinu | + | + | + | + | - |
Příklad VIII
Určení antibiotik v mléku ( test tvou D )
V tomto experimentu byl použit pro určení antibiotik v mléku Streptococcus thermophilus T 101 (
DSM 4022 ).
Streptococcus thermophilus T 101 rostl za použití metody známé jako takové .
Množství roztoku bromokrezolu nachového, který poskytl konečnou koncentraci 45 mg na 1000 ml bylo také přidáno do čerstvého kravského mléka.
Část kravského mléka také obsahovala penicillin G o koncentraci 4 ppb, který byl přidán do vzorku mléka.
Kontrolní vzorek neobsahoval penicilín G.
Do vzorků mléka bylo přidáno různé množství
Streptoccocus thermophilus T101 a konečná koncentrace , která byla dosažena byla v rozmezí od 107 do 109 CFU na ml.
Ihned po přípravě vzorků sterilních trubiček, které měly průměr okolo 9 mm byly tyto trubičky plněny 0.3 ml každým ze vzorku mléka ( duplo ).
Trubičky byly ihned vloženy do vodní lázně a drženy při teplotě 42 °C.
Pozorování bylo prováděno každých 30 minut po dobu 2 hodin a 30 minut.
Byl utčen čas, za který se agarové médium přeměnilo na žlutou barvu. Tabulka 3 udává, korelaci množství buněk během, testu, které byly přidány do mléka bez vlivu citlivosti testu za negativních podmínek.
Dokonce v čase testování během 80 minut byl detekován peniccilin G v koncentracích o 4 ppb , nebo vyšších.
Tabulka 3: Citlivost testu typu D pro různé koncentrace buněk.
| průběh testu (minuty) | 145 | 125 | 103 | 80 |
| buňky/ml media | 3.0 X 107 | 6.0 x 107 | 1,3 x 10® | 2,5 x 10® |
| Mléko bez antibiotika | - | - | - | - |
| Mléko s 4ppb penicilinu G | + | + | + | 4“ |
Claims (13)
- Partentové nároky ;oC»X to oo c/x occ / —4 n< * • í1. Způsob detekce jedné, nebo více antibakteriálních sloučenin v kapalném vzorku,vyznačený tím, že zahrnuje tyto kroky:(i) kontakt kapalného vzorku se zde testovacím mikroorganizmem vybraným z termofilního bakteriálního kmene Bacillus a Sireptoccocus u kterých je ještě před přidáním zabráněno růstu.(ii) poskytnutí podmínek testovacím mikroorganizmům, při kterých v nepřítomnosti antibakteriálních sloučenin mohou růst a mohou být detekovány (iii) zajištění růstu uvedených mikroorganizmů po dob-.'U dostatečn oq ke zjištění růstu testovacího mikroorganizmu, za nepřítomnosti antibakteriálních sloučenin ale během které perioda detekovatelné produkce testovacích mikroorganizmů je udržovaná pomocí známého množství antibakteriální sloučeniny v testovaném vzorku;čímž uvedený testová ' organizmus je přítomen v rozmezí okolo 107 jednotek tvořících kolonie ( CFU )/ml..r.4
- 2. Způsob podle nároku 1,vyznačený tím, že testovaný mikroorganizmus je dispergován v ustáleném médiu s výhodou v ustáleném agarovém médiu.
- 3. Způsob podle nároku 1,vyznačený tím, že testovací mikroorganizmus je už před přidáním do testovaného vzorku, v koncentrované formě, s výhodou v suchém stavu.
- 4. Způsob podle některého nároku 1 -3,vyznačený tím, že je vhodný pro detekci v čase kratším než 2,5 hodiny pro Penicillin G v 0.003 I.U. na ml.
- 5. Způsob podle některého nároku 1 - 4,vyznačený tím, že dříve než je přidán vzorek uvedený testovací mikroorganizmus je přítomen v již uvedeném agarovém médiu v množství 2x 106 7 * až do 3xl09 CFU/ ml, nebo v případě , že testovací mikroorganizmus není přítomen v uvedeném médiu pak je testovací mikroorganizmus přidán do přítomného vzorku o koncentraci 2x 107 až do 3χ10θ CFU/ ml,vzorku.
- 6. Způsob podle nároku 1,vyznačený tím, že produkce uvedeného testovacího organizmu je detekována změnou barvy agarového média, jako výsledku přítomnosti acidobazického, nebo redoxního indikátoru.
- 7. Způsob podle některého z nároků 1 -6,vyznačený tím, že použitým testovacím mikroorganizmem je bakteriální kmen Bacillus Stearothermophilus, s výhodou Bacillus Stearothermophilus,var. calidolaczis C953,nebo kde použitým testovacím mikroorganizmem je Strapbococcus thermophilus,výhodně Sbrepbococcus ihermophilus T101.
- 8. Způsob podle nároku 2,vyznačený tím, že výše uvedené agarové médium bylo připraveno z agarového roztoku obsahujícího dostatečné množství živin udržující produkci uvedených testovacích organizmů.
- 9. Způsob podle nároku 9,vyznačený tím, že zdrojem uvedených testová: ících mikroorganizmů, nebo jejich části je použito stabilní agarové médium.
- 10. Způsob podle nároku 2,vyznačený tím, že uvedené agarové médium obsahuje alespoň jednu látku pro změnu citlivosti testovacího organizmu, k antibakteriální sloučenině.
- 11. Způsob podle nároku 2, vyznačený tím, že je použito agarové médium v množství 10μ1- až 3ml.
- 12. Testovací jednotka za použití metody podle nároku 2, obsahující pevné agarové médium, které je dispergováno v zde testovaném mikroorganizmu , který je vybrán z termofilního bakteriálního kmene Bacillus a Streptococcus v množstvíokolo IQ7 CFU/ml řečeného agarového média s optimální příměsí obsahující živiny pro produkci uvedených, testovaných organizmů, a/nebo jednu nebo více komponent pro detekci uvedené produkce.
- 15. Jednotkový test podle nároku 12, vyznačený tím, že uvedený obsah se nachází v trubičce, nebo v kvádru s tubulárnimi zářezy.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP95200243 | 1995-02-01 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ284196A3 true CZ284196A3 (en) | 1997-03-12 |
Family
ID=8219988
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ962841A CZ284196A3 (en) | 1995-02-01 | 1996-02-01 | Quick microbiological test for detection of antibacterial compounds |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6867015B1 (cs) |
| EP (1) | EP0755456B1 (cs) |
| JP (1) | JPH09511150A (cs) |
| AT (1) | ATE197477T1 (cs) |
| AU (1) | AU693993B2 (cs) |
| BG (1) | BG100882A (cs) |
| BR (1) | BR9603963A (cs) |
| CA (1) | CA2186728A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ284196A3 (cs) |
| DE (1) | DE69610879T2 (cs) |
| ES (1) | ES2153562T3 (cs) |
| HU (1) | HUP9602995A2 (cs) |
| NO (1) | NO964142L (cs) |
| NZ (1) | NZ301691A (cs) |
| PL (1) | PL184460B1 (cs) |
| SK (1) | SK123496A3 (cs) |
| WO (1) | WO1996023901A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA96786B (cs) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0755456B1 (en) | 1995-02-01 | 2000-11-08 | Dsm N.V. | A rapid microbiological test for the detection of antibacterial compounds |
| CN100375788C (zh) * | 2003-07-02 | 2008-03-19 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 用于测定流体中是否存在抗生素的经过改进的检验系统 |
| PL1639122T3 (pl) * | 2003-07-02 | 2009-07-31 | Dsm Ip Assets Bv | Ulepszony zestaw testowy do oznaczania obecności antybiotyków w płynach |
| EP1664330B1 (en) * | 2003-09-11 | 2008-11-19 | DSM IP Assets B.V. | Blood and urine test |
| ATE528389T1 (de) * | 2003-11-18 | 2011-10-15 | Charm Sciences Inc | Hemmtestverfahren und -vorrichtung zum nachweis von antibiotika |
| EP1766046B1 (en) | 2004-06-02 | 2010-10-20 | DSM IP Assets B.V. | High ph test system for the determination of the presence of an antibiotic in a fluid |
| ES2263361B1 (es) * | 2004-11-30 | 2007-11-01 | Universidad De Zaragoza | Metodo de deteccion de residuos de antibioticos y otros compuestos antibacterianos. |
| US8476064B2 (en) * | 2006-05-09 | 2013-07-02 | Charm Sciences, Inc. | Inhibition assay method and device for detection of antibiotics |
| EP2365968B1 (en) | 2007-09-29 | 2018-08-22 | Timothy James Williams | Composition and method to modify sperm function and increase male gender ratio in mammals |
| CN102656275A (zh) * | 2009-07-01 | 2012-09-05 | 生物梅里埃有限公司 | 用于中和培养基中的抗生素的方法 |
| WO2013037888A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Immunoassay for detecting antibiotics |
| WO2013037887A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Competitive immunoassay for the detection of antibiotics |
| EP2756306B1 (en) | 2011-09-16 | 2019-08-21 | DSM IP Assets B.V. | Immunoassay for detecting antibiotics |
| WO2013037886A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Immunoassay for detecting antibiotics |
| EA201400482A1 (ru) * | 2011-10-18 | 2014-09-30 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. | Способ определения присутствия антибиотика в жидкости |
| JP5954640B2 (ja) * | 2012-10-25 | 2016-07-20 | 学校法人福岡大学 | 感染評価系モデル |
| CN104293661B (zh) * | 2014-10-22 | 2016-08-24 | 哈德逊（天津）生物技术有限责任公司 | 一种快速抗菌试验方法及试剂盒 |
| CN106554987A (zh) * | 2015-09-29 | 2017-04-05 | 北京华益精点生物技术有限公司 | 一种检测食源性动物组织中抗生素的试剂盒及其检测方法 |
| CN105524975A (zh) * | 2015-12-24 | 2016-04-27 | 丽珠集团新北江制药股份有限公司 | 一种用于恩拉霉素微生物效价测定的检定培养基 |
| AU2017207860A1 (en) | 2016-01-15 | 2018-06-28 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for detecting an analyte |
| EP3630997B1 (en) | 2017-06-02 | 2021-12-29 | Fastinov S.A. | Therapeutic drug monitoring |
| CN114323876B (zh) * | 2022-03-14 | 2022-05-13 | 广东江门中医药职业学院 | 一种检测水产品中氯唑西林药物残留的方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE755456C (de) | 1938-10-05 | 1955-05-05 | Schaeffer & Budenberg G M B H | Sicherheitsventil mit einem Ellipsenlenker zur senkrechten Fuehrung des Ventilkoerpers |
| GB1467439A (en) * | 1973-05-31 | 1977-03-16 | Gist Brocades Nv | Method for determination of the presence of antibiotics |
| NL7806086A (nl) | 1978-06-05 | 1979-12-07 | Gist Brocades Nv | Analyse-unit. |
| DE3429823A1 (de) | 1984-08-14 | 1986-02-27 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Mittel und verfahren zum nachweis antimikrobiell wirksamer substanzen |
| FI75865C (fi) | 1987-04-07 | 1988-08-08 | Valio Meijerien | Testanordning och foerfarande foer bestaemning av antibiotika i mjoelk samt i dessa anvaendbar ny streptococcus thermophilus-stam. |
| US5354663A (en) * | 1988-05-04 | 1994-10-11 | Charm Sciences, Inc. | Microbial inhibition test kit and method |
| US5008255A (en) | 1989-01-12 | 1991-04-16 | Alcon Laboratories, Inc. | Method for enhancing solubility of trimethoprim with sodium sulfacetamide, and synergistic pharmaceutical compositions derived therefrom |
| CA2056581A1 (en) * | 1991-11-12 | 1993-05-13 | Stanley E. Charm | Microbial inhibition test kit and method |
| CZ251094A3 (en) * | 1993-02-11 | 1995-02-15 | Gist Brocades Nv | Unit for detecting residues of antibacterial substances in liquids |
| DE4432771A1 (de) * | 1994-09-14 | 1996-03-21 | Landesvereinigung Der Bayerisc | Testmedium für einen mikrobiologischen Hemmstofftest und Verfahren zu seiner Durchführung |
| EP0755456B1 (en) | 1995-02-01 | 2000-11-08 | Dsm N.V. | A rapid microbiological test for the detection of antibacterial compounds |
-
1996
- 1996-02-01 EP EP96902983A patent/EP0755456B1/en not_active Revoked
- 1996-02-01 JP JP8523277A patent/JPH09511150A/ja active Pending
- 1996-02-01 BR BR9603963A patent/BR9603963A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-02-01 US US08/704,747 patent/US6867015B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-02-01 NZ NZ301691A patent/NZ301691A/en unknown
- 1996-02-01 CA CA002186728A patent/CA2186728A1/en not_active Abandoned
- 1996-02-01 AU AU47180/96A patent/AU693993B2/en not_active Ceased
- 1996-02-01 DE DE69610879T patent/DE69610879T2/de not_active Revoked
- 1996-02-01 HU HU9602995A patent/HUP9602995A2/hu unknown
- 1996-02-01 AT AT96902983T patent/ATE197477T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-02-01 ZA ZA96786A patent/ZA96786B/xx unknown
- 1996-02-01 CZ CZ962841A patent/CZ284196A3/cs unknown
- 1996-02-01 WO PCT/EP1996/000488 patent/WO1996023901A1/en not_active Ceased
- 1996-02-01 SK SK1234-96A patent/SK123496A3/sk unknown
- 1996-02-01 PL PL96316582A patent/PL184460B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-02-01 ES ES96902983T patent/ES2153562T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-30 NO NO964142A patent/NO964142L/no unknown
- 1996-10-01 BG BG100882A patent/BG100882A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0755456A1 (en) | 1997-01-29 |
| ES2153562T3 (es) | 2001-03-01 |
| US6867015B1 (en) | 2005-03-15 |
| NO964142D0 (no) | 1996-09-30 |
| NZ301691A (en) | 1997-03-24 |
| NO964142L (no) | 1996-11-20 |
| HUP9602995A2 (en) | 1997-05-28 |
| AU4718096A (en) | 1996-08-21 |
| HU9602995D0 (en) | 1997-01-28 |
| DE69610879T2 (de) | 2001-05-17 |
| PL184460B1 (pl) | 2002-10-31 |
| JPH09511150A (ja) | 1997-11-11 |
| SK123496A3 (en) | 1997-07-09 |
| BR9603963A (pt) | 1997-10-07 |
| PL316582A1 (en) | 1997-01-20 |
| ZA96786B (en) | 1996-08-12 |
| CA2186728A1 (en) | 1996-08-08 |
| MX9604494A (es) | 1997-11-29 |
| ATE197477T1 (de) | 2000-11-11 |
| DE69610879D1 (de) | 2000-12-14 |
| AU693993B2 (en) | 1998-07-09 |
| EP0755456B1 (en) | 2000-11-08 |
| BG100882A (en) | 1997-08-29 |
| WO1996023901A1 (en) | 1996-08-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ284196A3 (en) | Quick microbiological test for detection of antibacterial compounds | |
| DK175229B1 (da) | For en eftersögt mikrobe specifikt medium til detektering af tilstedeværelsen eller fraværelsen af en eftersögt mikrobe samt fremgangsmåde til detektering af tilstedeværelsen eller fraværelsen af en eftersögt mikrobe i en miljöpröve eller en...... | |
| EP0871854B1 (en) | Medium for detecting enterococci in a sample | |
| US6737266B1 (en) | Devices and methods for microorganism detection | |
| US7262021B1 (en) | Method for antimicrobial susceptibility testing of microorganisms | |
| DK151898B (da) | Fremgangsmaade til hurtig paavisning af tilstedevaerelsen eller fravaerelsen af rester af antibiotikum og proevebeholder og saet til anvendelse ved fremgangsmaaden | |
| CZ251094A3 (en) | Unit for detecting residues of antibacterial substances in liquids | |
| ES2305912T3 (es) | Medio para detectar microbios objetivo en una muestra. | |
| EP1528106B1 (en) | Medium for detecting target microbes in a sample | |
| GB2059990A (en) | Enhancement of the sensitivity of viable microbial cell count by bioluminescent assay of ATP and its use for identification of microbes by means of a short incubation in nutrient media | |
| US4766063A (en) | Process and device for detecting the activity of a substance on a micro-organism or on a mixture of micro-organisms | |
| EP1222469B1 (en) | One step test to detect antimicrobial residues in eggs | |
| EP0418113A2 (en) | Microbiological assay kit and method for detecting antibacterial compounds | |
| US20100120026A1 (en) | Particulate Substrates for Improved Recovery of Microbes | |
| Notermans et al. | Microbiological Contamination of Food: Analytical Aspects | |
| MXPA96004494A (en) | A rapid microbiological test for the detection of antibacteria compounds | |
| WO2025250926A1 (en) | Compositions for the isolation and quantitation of bacillus cereus in thin film dehydrated culture medium | |
| US20110097745A1 (en) | Method For Detecting Microbes | |
| Chen et al. | Effects of cholate and selenite on polymyxin-cloth enzyme immunoassay of Salmonella statically cultured in the presence of microflora from chicken faeces | |
| JP2002281959A (ja) | 糞便中大腸菌ｏ１５７の検出用培地 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |