CZ284645B6

CZ284645B6 - Neuromuskulární blokážní prostředek

Info

Publication number: CZ284645B6
Application number: CS923833A
Authority: CZ
Inventors: Derek Anthony Hill; Geoffrey Lloyd Turner
Original assignee: The Wellcome Foundation Limited
Priority date: 1990-07-13
Filing date: 1991-07-12
Publication date: 1999-01-13
Also published as: EP0539470B1; IL98814A0; ITRM910518A0; ES2083315A1; SK383392A3; GB9224764D0; FR2665701A1; AU1134695A; JP2823356B2; PA8401801A1; LV10432B; IL98814A; HU218766B; PT98306B; AU8190491A; BE1003407A3; MY113017A; LV10432A; DE4191541T1; FI982342A0

Abstract

1R-cis, 1'R-cis-isomer 2', 2'-(3,11-dioxo-4,10- -dioxatridecylen)-bis-(1,2,3,4-tetrahydro-6,7- -dimethoxy-2-methyl-1-veratrylisochinolinové) soli v podstatě prosté jiných jejích geometrických a optických isomerů. Bylo zjištěno, že 1R-cis, 1'R-cis isomer má výhodnou kombinaci farmakologických vlastností, zejména větší neuromoskulární blokážní účinnost, slabší histamin uvolňující účinek a při ekvivalentních úrovních neuromoskulární blokády méně potenciálních škodlivých účinků na autonomní nervový systém (sympatická a parasympatická blokáda) ve srovnání se známou směsí geometrických a optických isomerů.ŕ

Description

(57) Anotace:

Řešení se týká fyziologicky přijatelné lR-cis, l’R-cls2, 2'-(3,ll-dloxo-4,10- dioxotridekamethylen)bls-( 1,2,3,4-tetrahydro-6,7-methoxy-2-methyl-lveratryllzochinoliniové) soli. Součást řešení tvoří také použití uvedené soli, farmaceutický prostředek s Jejím obsahem a způsob její izolace.

CZ 284 645 B6

Fyziologicky přijatelná lR-cis, l'R-cis-2,2'-(3,ll-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis(1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinoliniová) sůl, způsob její izolace, použití a farmaceutický prostředek

Oblast techniky

Vynález se týká fyziologicky přijatelné lR-cis, l'R-cis-2,2'-(3,ll-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis-(l,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinoliniové) soli, vhodné pro použití k neuromuskulámí blokádě.

Dosavadní stav techniky

Prostředky pro blokádu nervosvalového přenosu jsou široce používány při chirurgické anestézii k uvolnění kosterních svalů, aby se usnadnila práce chirurga. Takovéto prostředky se také rozsáhle používají v jednotkách intenzivní péče (JIP) v nemocnicích k zajištění dlouhodobé relaxace svalů u pacientů kteří jsou intubováni pro zajištění řízeného dýchání pacienta.

Atracuriumbesylát (tj. 2,2'-(3,1 l-dioxo-4,10-dioxatridecylen)-bis-(l,2,3,4-tetrahydro-6,7dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinolindibesylát) je nedepolarizující prostředek, blokující neuromuskulámí přenos, který se poprvé stal dostupným pro humánní chirurgické použití ve Velké Británii v prosinci 1982 a o rok později v USA. Tato sloučenina je popsána v britském patentovém spisu č. 1 579 822 a US patentovém spisu č. 4 179 507. Tento prostředek se nyní rozsáhle používá v chirurgii a v terapii na jednotkách intenzivní péče (JIP). Tento prostředek byl vytvořen jedině ke spontánní degradaci Hofmannovou eliminací při fyziologickém pH a teplotě a esterovou hydrolýzou, která probíhá nezávisle na funkci jater a ledvin. Pro humánní chirurgické použití se atracuriumbesylát využívá jako směs deseti optických a geometrických izomerů. Eur. J. Med. Chem.-Chem., Ther. 1984-19, č. 5, str. 441 až 450, se zabývá geometrickými a optickými izomery atracuriumbesylátu.

Prostředky pro neuromuskulámí blokádu, jako je atracuriumbesylát, působí blokováním receptoru pro acetylcholin na neuromuskulámím spojení.

Mohou však také blokovat cholinenergní přenos v autonomním nervovém systému a vytvářet nežádoucí kardiovaskulární vedlejší účinky. Například parasympatická blokáda vede ktechykardii a hypertenzi, zatímco blokáda sympatického ganglia vyvolá bradykardii a hypotenzi. Prostředky pro neuromuskulámí blokádu také mají sklon k uvolňování histaminu, který může vyvolat život ohrožující anafylakroidní reakce u některých pacientů.

Antigenní skupinou u relaxačních látek pro kosterní svaly je kvartemí nebo terciární amoniová struktura, která také vyvolává neuromuskulámí blokádu pro podání těchto prostředků. V tomto ohledu je atracurium slabou látkou, uvolňující histamin. Jako ujiných takových prostředků existují nahodilé zprávy o anafylaktoidních reakcích, přisouzených tomuto léku.

Nyní bylo zjištěno, že atracuriové soli, v kterých má atraceuriová část příslušné geometrické a optické izomemí uspořádání, mají zvlášť výhodnou kombinaci farmakologických vlastností, která působí, že tyto soli jsou zvláště prospěšné pro vyvolání neuromuskulámí blokády.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří fyziologicky přijatelná lR-cis,l'R-cis-2,2'-(3,ll-dioxo-4,10dioxatridekamethylen)-bis-( 1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinoli

- 1 CZ 284645 B6 niová) sůl ve směsi s méně než 5 % jiných geometrických a optických izomerů této látky. Tyto soli budou zde dále označovány jako lR-cis, l'R-cis atracuriové soli.

Podle jednoho provedení tohoto vynálezu jsou vytvořeny lR-cis, l'R-cis atracuriové soli, v podstatě prosté jiných jejich geometrických a optických izomerů.

lR-cis, l'R-cis atracuriové soli podle tohoto vynálezu jsou v podstatě prosté jiných geometrických a optických izomerů v takové míře, že jsou obecně ve směsi s méně než 5 % hm/hm. výhodně méně než 2 % hmotnostními takovýchto jiných izomerů, vztaženo na celkovou hmotnost příslušné směsi. Zejména výše uvedené lR-cís, l'R-cis soli podle tohoto vynálezu výhodně obsahují (a) méně než 1 % hmotnostní odpovídajících cis-trans izomerů a/nebo méně než 0,5 % hmotnostního trans, trans izomerů, a/nebo (b) obecně méně než 5 % hmotnostních, výhodně méně než 2 % hmotnostní odpovídajících S-izomerů.

Pro humánní podání, například pro použití při chirurgické nebo lékařské terapii, například při anestézii lR-cis, l'R—cis atracuriové soli podle vynálezu zahrnují fyziologicky akceptovatelný anion, přičemž výhodné anionty zahrnují halogenid, například chlorid, bromid, nebo jodid, sulfát, fosfát, hydrogenfosfát, acetát, propionát, sukcinát, maleát a organosulfonát, například methansulfonát /mesylát/, benzensulfonát /besylát/, p-toluensulfonát /tosylát/ a naftalensulfonátové anionty, přičemž mesylátové a besylátové anionty jsou zvlášť výhodné.

Tyto soli, obsahující fyziologicky akceptovatelný anion, zde budou dále označovány jako fyziologicky akceptovatelné lR-cis, l'R-cis atracuriové soli.

Atracuriové soli, obsahující fyziologicky neakceptovatelný anion, mohou být použity při syntéze odpovídající fyziologicky akceptovatelné soli.

Pokud jde o zvlášť výhodnou kombinaci farmakologických vlastností výše zmíněných, bylo z experimentů zjištěno u zvířat, že lR-cis, 1'R-cis atracuriové soli mají významně vyšší neuromuskulámí blokážní potenci než atracuriumbesylát ve formě směsi geometrických a optických izomerů, přičemž mají podobnou dobu působení.

lR-cis, 1'R-cis atracuriové soli také vykazují nižší úroveň potenciálních nepříznivých účinků na autonomní nervový systém včetně sympatické blokády a parasympatické blokády a s menší pravděpodobností vytvoření histaminoidních kardiovaskulárních účinků při terapeutických dávkách, čímž se vytváří vyšší míra bezpečnosti pacientů ve srovnání s atracuriumbesylátem ve formě směsi geometrických a optických izomerů.

Další výhoda lR-cis, 1'R-cis atracuriových solí podle vynálezu je vtom, že vytvářejí účinnější neuromuskulámí blokádu s tvorbou nižších úrovní degradačních produktů než výše uvedená směs atracuriumbesylátových izomerů. Tato výhoda je zvlášť žádoucí pro delší chirurgické postupy a pro JIP použití, zahrnující vyšší dávky a/nebo delší periody léčení.

Předložený vynález dále vytváří:

a) fyziologicky akceptovatelné lR-cis, 1'R-cis atracuriové soli podle tohoto vynálezu pro použití při chirurgické nebo lékařské terapii, například při anestezii, zejména pro vyvolání neuromuskulámí blokády u živočichů, například savců, jako je člověk;

-2 CZ 284645 B6

b) použití fyziologicky akceptovatelných lR-cis, l'R-cis atracuriových solí podle vynálezu pro výrobu farmaceutických přípravků pro vyvolání neuromuskulámí blokády; a

c) způsob vyvolání neuromuskulámí blokády u živočichů, například savců, jako je člověk, který’ zahrnuje podání k této neuromuskulámí blokádě účinného množství fyziologicky akceptovatelné lR-cis, l'R-cis atracuriové soli podle tohoto vynálezu.

Fyziologicky akceptovatelné lR-cis, 1'R-cis atracuriové soli podle tohoto vynálezu se obecně používají v chirurgii nebo lékařské terapii, například při anestezii, podáním těchto solí příslušnému subjektu, například člověku, příslušnou cestou a v příslušné dávce pro dosažení požadované úrovně neuromuskulámí blokády. Tyto soli se obecně podávají injekčně, intravenózní nebo intramuskulámí cestou, nebo když je třeba, kontinuální intravenózní infuzí.

Přesná dávka, v jaké tyto soli jsou podávány, závisí na stupni požadované neuromuskulámí blokády, věku a stavu subjektu. Avšak, když se podávají intravenózní cestou, používají se tyto soli obecně v dávce 0,1 až 0,6 mg/kg, výhodně 0,2 až 0,4 mg/kg. V případě podávání infuzí se tyto soli obecně používají v dávce 0,1 až 0,6 mg/kg/hod, výhodně 0,2 až 0,4 mg/kg/hod.

lR-cis, 1'R-cis atracuriové soli podle tohoto vynálezu se obecně používají v chirurgii nebo lékařské terapii ve formě farmaceutických přípravků, obsahujících tuto sůl spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem pro tuto sůl. Takovéto přípravky se výhodně adaptují pro podání injekcí nebo infuzí, například jako roztok, emulze nebo suspenze této soli ve farmaceuticky akceptovatelné vodné nebo nevodné kapalině, například ve sterilní vodě, která může navíc obsahovat, když je třeba, jeden nebo více jiných vhodných excipientů, jako jsou bakteriostatické prostředky, antioxidanty, pufry, zahušťovací prostředky nebo suspendační prostředky. Takovéto kapalné přípravky obecně obsahují tuto sůl v množství 5 až 15, výhodně 5 až 10 mg/ml.

Alternativně tyto soli mohou být přítomny jako lyofilizované tuhé látky pro rekonstrukci vodou pro injekce, nebo dextrózovými nebo solnými roztoky. Tyto přípravky podle vynálezu jsou obecně uváděny v jednodávkových formách, jako jsou ampule, nebo jednorázových injekčních zařízeních nebo ve vícedávkových formách, jako jsou lahve, ze kterých může být příslušná dávka odebrána; všechny takovéto přípravky by měly být sterilní. Jednodávkové formy obecně obsahují 10 až 250 mg, výhodně 25 až 50 mg soli podle vynálezu v roztoku nebo jako lyofilizované tuhé látky.

lR-cis, 1'R-cis atracuriové soli podle vynálezu mohou být připraveny podrobením odpovídající IR, l'R atracuriové soli podmínkám nebo reagenciím, sloužícím k účelu izolace lR-cis, 1'R-cis izomeru od odpovídajících geometrických izomerů, obsažených v uvedené IR, l'R atracuriové soli.

Izolace požadované lR-cis, 1'R-cis atracuriové soli výše uvedenými postupy se výhodně provádí chromatografii, zejména vysokovýkonnou kapalinovou chromatografii, i když může být také použita kapalinová protiproudá chromatografie, sloupcová chromatografie nebo iontoměničové chromatografie.

Zvlášť účinné izolace požadované soli se může dosáhnout vysoce výkonnou kapalinovou chromatografii, využívající kolony, naplněné oxidem křemičitým nebo oxidem hlinitým, a mobilní fáze obsahující vhodnou směs rozpouštědel, například směs chlorovaného uhlovodíku, jako je methylenchlorid nebo acetonitril; alkoholu, například alifatického alkoholu s krátkým řetězcem jako je methanol, ethanol nebo propanol; a silné kyseliny, jako je benzensulfonová kyselina, methansulfonová kyselina, p-toluensulfonová kyselina nebo kyselina fosforečná. Směs methylenchlorid : methanol: methansulfonová kyselina, výhodně v poměru 80:20:0,5, byla zjištěna jako zvlášť výhodná pro eluci methansulfonátové (mesylátové) soli z kolony. Podobně

-3 CZ 284645 B6 pro eluci benzensulfonatové (besylátové) soli je výhodná rozpouštědlová směs methylenchlorid: methanol: benzensulfonová kyselina (4000:500:0,25).

Eluovaný roztok soli může být následně promyt pro odstranění rozpouštědel, jako je methanol a jakékoli přebytečné kyseliny, a sůl může být izolována odpařením chlorovaného uhlovodíku. Požadovaná sůl může být získána jako tuhá látka lyofilizací vodného roztoku soli nebo rozpuštěním v rozpouštědle, jako je ether, a pak vysrážením přídavkem nepolárního rozpouštědla jako je petrolether nebo cyklohexan.

IR, l'R atracuriové soli, používané jako výchozí materiál ve výše uvedeném postupu, mohou být připraveny z (R)-l,2,3,4-tetrahydropapaverinu konvenčním způsobem, například postupem, popsaným v Eur. J. Med. Chem.-Chim. Ther. 1984-19, č. 5, str. 441—450.

Následující příklady provedení ilustrují předložený vynález.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

a) 1,5-Pentamethylendiakrylát

1,5-Pentandiol /15,6 g/ byl zahříván v refluxujícím toluenu /500 ml/ s 3-brompropionovou kyselinou /50,5 g/ a trochou p-toluensulfonové kyseliny po dobu 4 hodin. Ochlazený toluenový roztok byl pak promyt vodným roztokem octanu sodného a zpracován s triethy 1aminem /50 ml/ za refluxu. Ochlazená reakční směs byla dobře promyta vodou k odstranění triethylaminu a triethylaminhydrobromidu a pak byl toluen odstraněn za sníženého tlaku.

Produkt, 1,5-pentamethylendiakrylát /24,0 g, 75%ní výtěžek/ byl získán jako světlá kapalina vysoce vakuovou destilací /teplota varu 90° - 95 °C/0,l mm Hg/.

b) (R)-Tetrahydropapaverin (±)-Tetrahydropapaverinhydrochlorid /105 g/ byl rozpuštěn ve vodě a roztok byl zalkalizován zředěným vodným amoniakem. Vysrážená (±)-tetrahydropapaverinová báze byla pak rozpuštěna v toluenu a pak bylo oddělené rozpouštědlo odpařeno, aby se získala báze jako světležlutý olej. Tento olej byl rozpuštěn v methanolu /1575 ml/ azpacován sN-acetyl-Lleucinem /47,5 g/.

Roztok byl zpracován s diethyletherem /274 ml/ a (S)-tetrahydropapaverin-N-acetyl-Lleucinát /35,5 g/ postupně vykrystalizoval. Po odfiltrování krystalů byl matečný louh odpařen na malý objem, čímž se získal tuhá látka /100 g/, která pak byla rekrystalizována z vroucího acetonu /50 objemů/. Při ochlazení se objevily krystaly /74 g, 83 % (R)-diastereoizomeru, 17 % (S)-diastereoizomeru/, které byly odfiltrovány.

Tuhá látka byla rekrystalizována znovu z vroucího acetonu /50 objemů/, čímž se získalo 58,7 g (R)-tetrahydropapaverin-N-acetyl-L-leucinátu /97 % (R)-izomeru, 3 % (S)-izomeru/.

-4CZ 284645 B6

c) (IR, l'R)-2,2,-(3,l 1-Dioxo—4,10-dioxatridekamethylen)-bis-(l,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-l-veratrylizochinolin)-dioxalát (R)-l,2,3,4-Tetrahydropapaverin-N-acetylleucinát /58,7 g/ byl rozpuštěn ve vodě a zpracován s vodným amoniakem. Vysrážená báze byla extrahována do toluenu /600 ml/ a po odpaření rozpouštědla byla získána jako olej /39,0 g/. (R)-1,2,3,4-Tetrahydropapaverinová báze byla zahřívána s 1,5-pentamethylenakrylátem /10,7 g/ a ledovou kyselinou octovou /3,0 ml/ při 70 °C po dobu 4 hodin. Reakční směs byla rozpuštěna v toluenu /400 ml/ a smíchána se silikagelem 60 /Měrek, jako pro sloupcovou chromatografii, 70 až 230 mesh/, zfiltrována a odpařena, čímž se získal žlutý olej.

Produkt byl rozpuštěn v acetonu /600 ml/, zpracován s kyselinou šťavelovou /9,3 g/ adioxalátová sůl (IR, 1'R)~2,2’—(3,1 l-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen}-bis-(l,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-l-veratrylizochinolinu) byla vysrážena jako bílá tuhá látka /54,2 g, 99 % výtěžek/, teplota tání 125 °C, vysoce výkonná kapalinová chromatografie - 97,8 %.

d) (IR, 1 'R)~2,2'—(3,1 l-Dioxo-4,10-dioxatridekamethylen}-bis-(l,2,3,4-tetrahydro-6,7dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinolin)benzensulfonát /(IR, l'R)-Atracurium-besylát/ (1R, 1 ’R)—2,2'—(3—1 l-Dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis-( 1,2,3,4-tetrahydro-6,7dimethoxy-l-veratrylizochinolindioxalát /54,0 g/ byl rozpuštěn ve vodě /1,6 1/ a zpracován s uhličitanem sodným, aby se dosáhl pH 7,0. Vysrážená báze byla extrahována do toluenu /600 ml/ a rozpouštědlo pak bylo odpařeno, čímž se získal velmi viskózní žlutý olej /42,7 g/. Tento olej byl zpracován s methylbenzensulfonátem /75 ml/ při teplotě místnosti přes noc.

Produkt (IR, l'R)-2,2'-(3,l l-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis-(l,2,3,4-tetrahydro-

6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinolin)benzensulfonát byl izolován rozdělením mezi vodu a toluen. Vodná fáze pak byla dále promyta dvěma alikvoty toluenu a pak podrobena lyofilizaci. Produkt /49,7 g, 80%ní výtěžek/ byl získán jako světležlutá tuhá látka.

Produkt je směsí (IR, l'R)atrakuriumbesylátových izomerů, totiž lR-cis, l'R-cis, lR-cis, l'R-trans a lR-trans, l’R-trans v poměru 58:34: 6.

e) lR-cis, l'R-cis-2,2'-(3,l l-Dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis-(l,2,3,4—tetrahydro-6,7dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinolin)methansulfonát /(1 R-cis, 1 'R-cis)-atracuriummesylát/

Směs (IR, l’R)atracuriumbesylátových izomerů /10 g/, získaná ve stupni d), byla rozpuštěna v dichlormethanu /50 ml/ a byla načerpána na axiálně stlačený 500 mm x 50 mm chromatografický sloupec, naplněný 520 g 20 až 45 mikrometrového oxidu křemičitého a tento sloupec byl eluován směsí dichlormethanu, methanolu a methansulfonové kyseliny /80:20:0,5/. Frakce sloupcového eluátu byly shromážděny a frakce, obsahující požadovaných lR-cis, l'R-cis izomery byly sloučeny a promyty 10%ní solankou. Dichlormethanový roztok byl odpařen do sucha, zbytkový bezbarvý olej byl rozpuštěn ve vodě a pH roztoku bylo nastaveno na 4,0 methansulfonovou kyselinou.

Vodný roztok byl lyofilizován, čímž se získala nadepsaná sloučenina /5 g/ jako bílá látka, která byla identifikována jako v podstatě prosta jiných geometrických a optických izomerů této sloučeniny, zejména ve směsi s méně než 5 % hmotnostními takových izomerů, zejména méně než 3% hmotnostní odpovídajícího lR-cis, l'S-trans izomerů a méně než 0,3% hmotnostního odpovídajícího lR-cis, l'R-trans izomerů.

-5CZ 284645 B6

Příklad 2

R-cis, 1 'R-cis-2,2'-(3,1 l-Dioxo-4,10-trioxatridecylen)-bis-( 1,2,3,4-tetrahydro-6,7di methoxy-2-methy 1-veratry 1 izoch inol in)benzen su lfonát /1 R-cis, rR-cis-Atracuriumbesylát/

Stupně a), b), c) a d) z příkladu 1 byly opakovány. Získaný produkt ve stupni d) byl buď izolován, jak je popsáno, nebo chromatografován, jak je popsáno dále.

Směs (IR, l'R)-atracuriumbesylátových izomerů /1,5 g izomerů, izolovaných ve stupni d) nebo 3,5 g reakční směsi ze stupně d) /byla rozpuštěna v dichlormethanu /10 ml/ a byla čerpána na axiálně stlačený 300 mm x 25 mm chromatografický sloupec, naplněný 80 g 10 mikrometrového kulovitého oxidu křemičitého a tento sloupec byl eluován směsí dichlormethanu, methanolu a benzensulfonové kyseliny v poměru 4000:500:0,25. Frakce sloupcového eluátu byly zachyceny a frakce, obsahující požadovaný lR-cis, I'R-cis izomer, byly sloučeny a promyty 10%ní solankou nebo vodou. Dichlormethanový roztok byl odpařen do sucha, zbylý bezbarvý olej nebo polotuhá látka byly rozpuštěny ve vodě a pH roztoku bylo nastaveno na asi 4,0 vodným roztokem benzensulfonové kyseliny.

Vodný roztok byl lyofilizován, čímž se získala nadepsaná sloučenina /0,5 g/jako bílá tuhá látka, která byla identifikována jako v podstatě prosta jiných geometrických a optických izomerů této sloučeniny, totiž byla ve směsi s méně než 5 % hmotnostními těchto izomerů, zejména méně než 3% hmotnostními odpovídajícího lR-cis, 1'S-transizomeru a méně než 0,3% hmotnostního odpovídající 1 R-cis, l'R-transizomerů.

Produkt byl analyzován ^]H NMR (CDC1₃) následovně:

δ 1,52 /m, 7CH₂-trideka/, 1,63 /m, 6CH₂-trideka, 8CH₂-trideka/, 2,84 /m, 1/2^1CH₂, 1/2-CH,veratryl/, 3,15 /m, l/2-4CH₂/, 3,22 /s, NCH₃/, 3,26 /m, 2CH₂-trideka, 12 CH₂-trideka/, 3,34 /s, OCH₃/, 3,47 /m, l/2-3CH₂, 1/2-CHr-veratryl/, 3,58 /s, OCH₃/, 3,73 /2s, OCH₃, OCH₃/, 3,84 /m, l/2-3CH₂/, 3,95 až 4,24 /m, 5CH₂-trideka/, 9CH₂-trideka, lCH₂-trideka, 13 CH₂-trideka/, 4,86 /dd, J=3, 8Hz, 1H/, 5,87 /s, 8H/, 6,36 /dd, J=8, 2Hz, 6H-veratryl/, 6,42 /d, J=2Hz, 2H-veratryl/, 6,48 /s, 5H/, 6,59 /d, J=8Hz, 5H-veratryl/, 7,24 /m, meta- a para-besylát/, 7,78, /m, orthobesylát/.

Následující příklady ilustrují farmaceutické přípravky podle vynálezu, ve kterých je aktivní složkou 1 R-cis, rR-cis-atracuriumbesylátová sůl podle vynálezu.

Příklad 3

Jednodávkový injekční roztok

Aktivní složka benzensulfonové kyselina podle potřeby do pH voda pro injekce mg 3až4 do 5 ml.

Aktivní složka se rozpustí ve vodě pro injekce a pH výsledného roztoku se nastaví podle potřeby kyselinou. Roztok se sterilizuje filtrací a naplní do sterilních 5 ml ampulí.

-6 CZ 284645 B6

Příklad 4

Vícedávkový injekční roztok

Aktivní složka benzensulfonová kyselina podle potřeby do pH benzylalkohol voda pro injekce

100 mg až 4 mg do 10 ml.

Aktivní složka a benzylalkohol se rozpustí ve vodě pro injekce apH výsledného roztoku se nastaví podle potřeby kyselinou. Roztok se sterilizuje filtrací a naplní do sterilních 10 ml ampulí.

Příklad 5

Vymrazený injekční roztok

Aktivní složka benzensulfonová kyselina podle potřeby do pH mannitol voda pro injekce mg až 4

62,5 mg do 2,5 ml.

Aktivní složka a mannitol se rozpustí ve vodě pro injekce a pH výsledného roztoku se nastaví podle potřeby kyselinou. Roztok se sterilizuje filtrací a naplní do sterilních ampulí a vymrazí.

Farmakologické vyhodnocení lR-cis, TR-cis-atracuriummesylatsulfonát /identifikovaný dále jako sloučenina A/ byl vyhodnocen, jak je dále popsáno, ve srovnání s konvenční směsí geometrických a optických izomerů /identifikovaných dále jako atracuriumbesylát/ k určení neuromuskulámího blokážního působení a účinku na sympatickou a parasympatickou blokádu.

a) Způsoby a materiály

Mongrel kocouři /Southeastem Laboratories Animal Farm/, vážící 2,2 až 4,25 kg, byly anestezováni směsí pentobarbitalu sodného, 7 mg/kg i.p., a alfa-chloralózy, 80 mg/kg i.p. Odpovídající úrovně anesteze byly udržovány dodatečnými dávkami alfa-chloralózy, podávanými intravenózně podle potřeby. Průdušnice byla opatřena kanylou a zvířata byla zásobována 20 ml na kg vzduchem z místnosti pomocí Harvard Apparatus respiračního čerpadla, nastaveného pro dodávku 20 zdvihů za minutu. Tlak tepenné krve byl měřen pomocí kanyly v pravé stehenní tepně, připojené k Statham P23 snímači. Srdeční rytmus byl určován z ECG pomocí Grassova tachografu. Pravý cervikální sympatický nerv byl obnažen, přetnut přibližně 5 cm v blízkosti k hornímu cervikálnímu gangliomu a uložen na stíněné bipolámí platinové elektrodě. Pravý vagus byl obnažen, rozdrcen přibližně ve 2 cm vzdálenosti k uzlovitému gangliomu a uložen na stíněné bipolámí platinové elektrodě. Cervikální sympatický nerv a vagus byly stimulovány po 10 s každých 5 minut Grassovým S88 stimulátorem za použití následujících parametrů:

Hz, 0,5 ms trvání a nadmaximální napětí /10 až 15 voltů/. Izometrické koncentrace mžurky byly zaznamenávány během klidové tenze 5 g pomocí Grassova FT.C3 silového posuvného snímače a Grossova polygrafii. Klidová tenze na mžurce byla 5 g.

Levá zadní noha byla pevně zajištěna a tibiální šlacha byla izolována a připojena ke Grossovu

FT.03 silovému posuvnému snímači. Po nakrájení ischiatického nervového kmene byl peroneální nerv uložen na stínovou bipolámí platinovou elektrodu. Stimuly o trvání 0,2 ms a při nadmaximálním napětí byly aplikovány na nerv ve frekvenci 0,15 Hz za použití Grassova S88

-7CZ 284645 B6 stimulátoru. Záškubové napětí v přední tibiální oblasti byly zaznamenáváno během klidového napětí 50 g.

Testované sloučeniny byly rozpuštěny v pufrovaném solném roztoku při pH 3,0 a pak udržovány na ledu a podávány kanylou v pravé stehenní cévě. Byla sledována jícnová teplota pomocí Yellow Springs termistorové sondy a vnitřní teplota udržována mezi 37 ° až 38 °C pomocí sálavého tepla. Všechny záznamy byly prováděny na Grass Model 7 polygrafii. Na konci těchto experimentů byly kocouři usmrceni intravenózně podaným nasyceným roztokem KC1 nebo pentobarbitalem sodným.

b) Výsledky

ED95 hodnota pro neuromuskulámí blokážní potenci byla vypuštěna z dávkových odezvových křivek.

ED₅o a ED₂₅ hodnoty pro inhibiční účinek sloučenin na stimulaci příslušného parasympatického /vagus/ a sympatického nervu byly vypočteny podobně.

Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce.

Tabulka

Sloučenina	vypočteno +ED₉₅ /mg/kg/	poměr 50%ní vagus inhibice oproti ED₉₃	poměr 25%ní sympat. inhibice oproti ED95
Atracuriumbesylát	0,092 ±0,010	17	34
Sloučenina A	0,062 ± 0,008	27	60

+ED95 vypočteno jako mg/kg jako volná báze, vztaženo na hmotnost atracuriového kationtů.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Fyziologicky přijatelná lR-cis, rR-cis-2,2'(3,ll-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis(l,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinoliniová)sůl ve směsi sméně než 5 % hmotn. jiných geometrických a optických izomerů této látky.
2. Fyziologicky přijatelná lR-cis, TR-cis-2,2'-(3,l l-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis(l,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinoliniová)sůl podle nároku 1 ve směsi s méně než 2 % hmotn. jiných geometrických a optických izomerů této látky.
3. 1 R-cis, 1 'R-cis-2,2'-(3,1 l-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis-( 1,2,3,4-tetrahydro-

6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinolinium)mesylát nebo -besylát podle nároku 1 nebo 2.
4. Fyziologicky přijatelná lR-cis, l'R-cis-2,2'-(3,ll-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis(l,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinoliniová) sůl podle některého z nároků 1 až 3, pro použití k léčebným účelům v chirurgii nebo lékařství.

- 8 CZ 284645 B6
5. Fyziologicky přijatelná lR-cis, l'R-cis-2,2'-(3,l l-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis(l,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinoliniová) sůl podle některého z nároků 1 až 3 pro použití k vyvolání neuromuskulámí blokády u živočichů.
6. Použití fyziologicky přijatelné lR-cis, l’R—cis—2,2’—(3,1 l-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis-( 1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinoliniové) soli podle některého z nároků 1 až 3 pro výrobu farmaceutického prostředku k vyvolání neuromuskulámí blokády.
7. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje fyziologicky přijatelnou lR-cis, l'R-cis-2,2'-(3,l l-dioxo-4,10-dioxatridekamethyIen)-bis-( 1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinoliniovou) sůl podle některého z nároků 1 až 3 spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.
8. 1 R-cis, 1 ’R-cis-2,2'-(3,1 l-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis-( 1,2,3,4-tetrahydro-

6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinolinium)besylát ve směsi s méně než 5 % hmotnostními jiného geometrického a optického izomeru této látky.
9. Způsob izolace 1 R-cis, l'R-cis-2,2'-(3,l l-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis(l,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinoliniové) soli ve směsi s méně než 5 % jiných geometrických a optických izomerů této látky, vyznačující se tím, že se odpovídající IR, l'R-atracuriová sůl podrobí vysoce účinné kapalinové chromatografíi k dosažení izolace 1 R-cis, l’R-cis-izomeru zodpovídajících geometrických izomerů, obsažených v této IR, l'R-atracuriové soli.
10. Způsob izolace 1 R-cis, lR-cis-2,2'-(3,ll-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)-bis(l,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinoliniové) soli podle nároku 1, vyznačující se tím, že se odpovídající IR, l'R-atracuriová sůl podrobí vysoce účinné kapalinové chromatografíi k dosažení izolace lR-cis, l'R-cis-izomerů zodpovídajících geometrických izomerů, obsažených v této IR, l'R-atracuriové soli.
11. Způsob izolace lR-cis-l'R-cis-2,2'-(3,ll-dioxo-4,10-dioxatridekamethylen)bis-( 1,2,3,4tetrahydro-6,7-dimethoxy-2-methyl-l-veratrylizochinolinium)besylátu podle nároku 8, vyznačující se tím, že se odpovídající IR, 1'R-atracuriová sůl podrobí vysoce účinné kapalinové chromatografíi kdosažení izolace lR-cis, l'R-cis-izomeru zodpovídajících geometrických izomerů, obsažených v této 1R, 1’R-atracuriové soli.