CZ285672B6

CZ285672B6 - Farmaceutický prostředek obsahující definovaný lipidový systém

Info

Publication number: CZ285672B6
Application number: CZ932477A
Authority: CZ
Inventors: Hakan Nyqvist; Monica Einarsson; Christer Mattsson
Original assignee: Pharmacia & Upjohn Aktiebolag
Priority date: 1992-03-27
Filing date: 1993-03-26
Publication date: 1999-10-13
Also published as: WO1993019737A1; MX9301716A; ATE165971T1; SE9200951D0; NO305537B1; HUT70405A; EP0591492A1; NZ251488A; DE69318503T2; AU3912493A; DE69318503D1; JP3577312B2; HU9303357D0; NO934284L; IL105017A0; IL105017A; JPH06508155A; PL172896B1; CA2102494C; HU219240B

Abstract

Řešení se týká farmaceutických prostředků, které obsahují definovaný lipidový systém z alespoň dvou lipidových složek, kde alespoň jedna z lipidových složek je amfifatická a polární a jedna je nepolární a kde farmaceuticky účinnou sloučeninou je heparin nebo jeho fragment. V prostředcích je také obsažena voda obsahující rozpouštědlo v takovém množství, že jsou přítomny jednotlivé oddělené lipidové částice a tyto prostředky mohou být upraveny pro různé formy podávání, jako k rektálnímu, orálnímu, bukálnímu nebo transdermálnímu podání a podobně.ŕ

Description

Oblast techniky

Tento vynález se týká farmaceutických prostředků, které obsahují definovaný lipidový systém z nejméně dvou lipidových složek, kde alespoň jedna z lipidových složek je amfifatická a polární a jedna je nepolární a kde farmaceuticky účinnou sloučeninou je heparin, jeho fragment nebo jeho derivát. Prostředky dále obsahují vodné rozpouštědlo v takovém množství, že jsou přítomny oddělené lipidové částice. Vynález se také týká způsobu výroby těchto prostředků.

Dosavadní stav techniky

Heparin a fragmenty, působící jako heparin, se jen slabě absorbují přes biologické membrány. Tento problém se dosud nepodařilo uspokojivě vyřešit. Cílem tohoto vynálezu je zlepšit absorpci heparinu a fragmentů působících jako heparin. To s překvapením umožňuje zvláštní lipidový systém, s kterým bylo dosaženo různých neparenterálních prostředků, obzvláště orálních nebo bukálních.

Tento vynález je založen na definovaném lipidovém systému, který je popsán ve švédské patentové přihlášce SE 9003100-6 a který sestává z alespoň dvou lipidových složek, vybraných ze souborů o různé polaritě, kde nejméně jedna ze sloučenin je amfifatická a polární a jedna je nepolární.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je farmaceutický prostředek obsahující lipidový systém, kteiý obsahuje

a) lipidový systém zahrnující

i) alespoň jednu amfifatickou, polární a dvojitou vrstvu tvořící lipidovou složku ze souboru zahrnujícího fosfatidylcholin a fosfolipidy ve hmotnostním množství 5 až 50 %, vztaženo na lipidový systém, a ii) nepolární lipidovou složku,obsahující monoglyceridy složené z 8:0 kaprylátu a 10:0 kaprátu v množství do 100 % lipidového systému,

b) terapeuticky účinné množství heparinu ve hmotnostním množství 1 až 200 % se zřetelem na lipidový systém, a

c) vodu nebo fyziologický roztok chloridu sodného k vytvoření jednotlivých oddělených lipidových částic.

Farmaceutický prostředek podle tohoto vynálezu výhodně jako amfifatickou a polární lipidovou složkou obsahuje fosfatidylcholin.

Dalším znakem farmaceutického prostředku podle vynálezu je, že nepolární složka obsahuje přídavně triglycerid, tvořený směsí 8:0 kaprylátu a 10:0 kaprátu.

- 1 CZ 285672 B6

Účelně farmaceutický prostředek podle vynálezu obsahuje heparin nebo jeho fragment nebo derivát v hmotnostním množství od 4 do 80 % se zřetelem na lipidový systém. Přitom obzvláště výhodně obsahuje heparin v podobě fragmentu o molekulové hmotnosti 2000 až 10 000.

Farmaceutický prostředek podle tohoto vynálezu je upraven pro orální, rektální, bukální, sublinguální, nasální, subkutánní nebo transdermální podání nebo pro podání sliznicemi a obsahuje vhodné excipienty pro každou příslušnou cestu podání. Farmaceutický prostředek podle vynálezu je účelně určen k topickému podání, a proto obsahuje excipient pro topické podávání.

Dalším předmětem tohoto vynálezu je způsob výroby výše charakterizovaného farmaceutického prostředku, kteiý spočívá v tom, že se roztok heparinu nebo jeho fragmentu nebo jeho derivátu vnáší do míchané směsi lipidových složek, poté se přidá voda nebo fyziologický roztok a výsledná směs se zpracuje mechanicky, nebo se heparin nebo jeho fragmenty nebo jeho deriváty smíchají s vodou nebo fyziologickým roztokem před přidáním směsi k míchaným lipidovým složkám.

Pokud se zde používá výrazu amfífatická a polární sloučenina, jde o sloučeninu, tvořící dvojitou vrstvu, a oddělené lipidové částice se tvoří spontánně z lipidového systému, když vzájemně na sebe působí s přebytečným množstvím vody nebo rozpouštědel, která obsahují vodu.

Definovanou lipidovou složkou je lipid, jehož chemické složení je známo a sledováno. Tyto skutečnosti budou vysvětleny detailně dále a v příkladech.

Vlastnost „tvořící dvojitou vrstvu“ je dobře známý fyzikální parametr a může se snadno zjistit vhodnými fyzikálně chemickými způsoby (například způsobem určení rovnovážného stavu povrchu). Vzniklé oddělené lipidové částice se mohou stanovit fyzikálními a/nebo chemickými způsoby, jako mikroskopicky za použití polarizovaného světla, zobrazovací analýzou nebo difrakčními způsoby.

Změny ve složení lipidu umožňuje řídicí mechanizmus, pomocí kterého se tvoří lipidové částice a tím ovlivňuje stupeň tvorby lipidových částic. Tento mechanizmus bude sloužit jako řídicí faktor buď pro bezprostřední nebo trvalé uvolňování zachycených nebo připojených biologicky aktivních materiálů.

Používají se takto definované výrazy:

Lipidy - obecný výraz pro přírodní nebo syntetické sloučeniny, které sestávají z nosičů obsahujících acyl, jako je glycerol, sfingosin, cholesterol a jiné látky nebo jejich deriváty, ke kterým je nebo může být vázána jedna nebo větší počet mastných kyselin. Pod tento výraz mohou být také zahrnuty podobné molekuly, které obsahují důležitou uhlovodíkovou část.

Lipidy, používané pro lipidové částice, tvořící systémy mohou být seskupeny do různých souborů lipidů, v závislosti na jejich polaritě, a to:

Soubory nepolárních lipidů - mají nepolární hlavní skupiny nebo hydrofilní část, která je tak malá nebo tak stericky bráněná, že nemůže dojít ke vzájemnému působení s vodou. Příklady nepolárních složek jsou uhlovodíky nebo nebotnající amfifilní látky, jako jsou monoacylglyceroly, diacylglyceroly a triacylglyceroly, cholesterol, alifatické alkoholy nebo estery cholesterolu.

Soubory polárních lipidů - jako jsou fosfolipidy nebo glykolipidy, které mají povrchovou rozpustnost v důsledku výrazně polární složky. V závislosti na jejich zvláštním vzájemném působení s vodou se dále dělí do kategorie botnajících a rozpustných amfifilních látek.

-2CZ 285672 B6

Soubory amfifatických nebo amfífilních lipidů, jako jsou fosfolipidy a glykolipidy, které mají povrchovou aktivitu.

Soubory dvojí vrstvu tvořících lipidů - amfífatické lipidy, jako je fosfatidylcholin (PC), sfingomyelm, fosfatidylinositol (Pl) nebo fosfatidylethanoamin (PE) s molekulární geometrií, která výhodně tvoří struktury dvojích vrstev v přítomnosti vody.

Lipidy, používané v nosných systémech podle tohoto vynálezu, sestávají ze směsi lipidových souborů, charakterizovaných jejich rozdílnými polaritami. Polární lipidy, jako jsou fosfolipidy nebo glykolipidy, a nepolární lipidy, jako jsou monoglyceridy, diglyceridy a triglyceridy, jsou hlavními složkami v systému, ačkoli steroly, jako je cholesterol, mastné kyseliny, alifatické alkoholy a jejich estery, stejně jako jiné skupiny lipidů se mohou také používat. Tyto dobře definované směsi lipidů z různých souborů, vymezených výše, nemohou být znatelné u průmyslově dostupných produktů, jako je sojový olej, kukuřičný olej nebo sojový lecithin a vaječný lecithin. K získání dobře definovaných skupin lipidů se průmyslově dostupný olej frakcionuje a poté se různé soubory lipidů míchají, jak bude podrobněji vysvětleno v příkladech uvedených dále. Jinou cestou k získání dobře definovaných souborů lipidů je použití lipidů, vyrobených synteticky.

Kromě toho se deriváty lipidů mohou také používat v kombinaci s výše uvedenými lipidy. Jedním z jejich příkladů je polyethylenglykol vázaný s fosfatidylethanolaminem, u kterého se projevuje prodloužená doba cirkulace liposomů po injekci do proudu krve. Jiným příkladem takového derivátu je palmitoylkamitin, který působí jako látka zvyšující absorpci pro biologicky aktivní látky ve střevě.

Při vhodné cestě k vyvolání tvorby lipidového nosičového systému se biologicky aktivní látka přimíchá k zvolenému lipidu a poté se přimíchá lipid rozdílné polarity. V tomto střídání polárního a nepolárního lipidu se může pokračovat během tolika cyklů, kolika je zapotřebí ve zvláštním případě, a zahrnuje řadu lipidů s rozdílnými polaritami.

Výhodný způsob zavedení biologicky aktivní látky do lipidového nosičového systému spočívá v přidávání biologicky účinné látky k amfifilním lipidům v pořadí, které vytváří homogenní prostředek, ve kterém množství amfifilních lipidů obecně je v celkovém rozmezí od 1 do 90 % hmotnostních. Takový amfifilní lipid má být schopen samovolně vytvářet dvojitou vrstvu. Příklady takových látek jsou soubory amfífilních a polárních lipidů, jako je fosfatidylcholin, fosfatidylglycerol, fosfatidylinositol a fosfatidylserin nebo jejich směsi.

Návrh lipidového nosičového systému zahrnuje nejen správný výběr a/nebo kombinaci souborů lipidů, které jsou přizpůsobeny k solubilizaci každé biologicky aktivní látky, ale také správný výběr rozložení mastných kyselin, to znamená acylových skupin připojených k použitým souborům lipidů. Změna acylových skupin poskytuje rozdílné fyzikálně chemické vlastnosti, jak bude zřejmé z příkladů uvedených dále.

Míra, v jaké se lipidové částice tvoří ze systému v daném vodném okolním prostředí, se může ovlivňovat a řídit změnou geometrického tvaru hlavního souboru lipidu tvořícího dvojitou vrstvu, to znamená účinkem oblasti hlavních skupin ve vztahu k sterické konformaci uhlovodíkových řetězců.

Druhou cestou k ovlivňování a řízení tvorby lipidových částic je měnění struktury, a tím tekutosti, uhlovodíkového řetězce v nepolární Části lipidového systému. To bude ovlivňovat stupeň vzájemného působení endogenních amfifatických lipidů a exogenního vodného prostředí.

-3CZ 285672 B6

Detailní popis vynálezu

Podle tohoto vynálezu se svrchu popsaný definovaný lipidní systém používá ve farmaceutických prostředcích, které obsahují heparin, jeho fragment nebo jeho derivát, a vodu obsahující rozpouštědlo.

Výraz „heparin“ označuje libovolnou frakci nebo skupinu heparinů z přírodních, biologicky syntetizovaných, syntetických nebo genovým inženýrstvím získaných zdrojů, stejně jako jejich libovolné deriváty, to znamená estery heparinů a Jejich fragmenty“, které označují libovolné nízko molekulární fragmenty heparinů nebo jejich deriváty včetně chemicky upravených syntetických oligosacharidů podobných heparinů. U řady neparenterálních forem podání jsou zkušenosti s podstatnými obtížemi při překonávání malé biologické absorpce heparinů. Předmět tohoto vynálezu řeší tento problém tím, že poskytuje pružný prostředek, založený na již zmíněném lipidním systému.

Jiný znak tohoto vynálezu se týká prostředku obzvláště vhodného pro obvyklé formy dlouhodobého samopodávání heparinů, jako alternativy k podávání parenterálnímu.

Takový prostředek se může použít pro výrobu prostředků, upravených pro orální, rektální, bukální, sublinguální, nasální, subkutánní nebo jiné transmembránní nebo transdermální podávání, přidáním vhodných vehikul, rozpouštědel nebo nosičů pro každou vhodnou cestu podání.

Amfifatická a polární sloučenina je výhodně fosfatidylcholin. Nepolární lipid je s výhodou zvolen z monoglyceridů, diglyceridů a triglyceridů.

Množství vody v prostředku by mělo být tak velké, aby se vytvořily oddělené částice lipidů.

Tato podmínka se testuje pro každý lipidový systém, protože skutečné omezení systému k vytvoření lipidových částic je závislé na povaze a složení lipidových složek a na povaze biologicky aktivní složky určené k podávání systémem.

Nejdůležitější úvahy, pokud se vybírají složky lipidního systému, se týkají složení lipidů a polarity biologicky aktivní léčivé látky, určené pro vpravení do systému.

Absorpce se může řídit změnou délky řetězce glyceridů mezi 6 a 18 atomy uhlíku, výhodně mezi 6 a 12 atomy uhlíku. Volba polarity a výběr odlišně nabitých skupin složky může také ovlivnit prostředek, obsahující lipidové částice.

Lipidové částice mohou být smíšeným souborem obsahujícím rozdílné jednoduché, dvojité a vícenásobné vrstvené struktuiy, jako jsou micely, liposomy a vyšší vícenásobné vrstvené struktury.

Existuje řada způsobů, dobře známých v oboru pro řízení souboru jak z hlediska rozmezí velikosti, tak struktury, jako je působení ultrazvuku, řízené míchání a zpracování v zařízení, vybaveném k ovlivnění změny rozmezí velikosti. Potřeba takového zařízení se zvažuje odděleně pro každou formu podání a každou terapeuticky účinnou sloučeninu, která má být zavedena s prostředkem.

Prostředky ze souboru lipidních částic jsou také ovlivňovány volbou lipidní látky s ohledem na její polaritu, délku uhlíkového řetězce nebo řetězců a jiné okolnosti, které byly rozebrány výše.

-4CZ 285672 B6

Ve výhodném prostředku podle tohoto vynálezu je sloučeninou heparin nebo jeho fragment a lipidní systém obsahuje fosfatidylcholin jako amfifílní sloučeninu a monoglycerid jako nepolární sloučeninu.

Množství amfifílní sloučeniny v prostředku může být v rozmezí od 1 do 90 % hmotnostních, výhodně od 1 do 50 % hmotnostních a zvláště výhodně od 5 do 50 % hmotnostních, vztaženo na lipidní systém.

Výhodným heparinovým fragmentem je Fragmin^R, což je nízkomolekulámí heparinový fragment vyráběný firmou Kabi Pharmacia z vepřového heparinu řízeným depolymeračním postupem využívajícím kyselinu dusičnou, jak je popsáno v evropském patentu č. 14 184. Fragmin^R může být ve formě roztoku nebo suspenze, pokud se přidá nebo smíchá s jinými složkami prostředku. Může se také smíchat se základní látkou v podstatě obsahující vodu a neobsahující lipidy předtím, než se přidají jiné složky prostředků.

Fragmin^R je velmi snadno rozpustný ve vodě a takový vodný roztok je pokládán za stabilní.

Vlastnosti Fragminu^R umožňují dosáhnout řady prostředků, založených na definovaném lipidním systému, při přidání vhodných vehikul.

Prostředky mohou být uzpůsobeny k rektálnímu použití, obecně ve formě pěn, nálevů, kapslí a čípků nebo různých prostředků, obecně vyráběných pro orální, bukální, sublinguální, nasální, transdermální a subkutánní podání nebo pro podání sliznicemi. Prostředky podle vynálezu, obsahující Fragmin^R a definované lipidy, jsou také vhodné pro výrobu depotních prostředků k dosažení trvalého uvolňování, například subkutánním podáním nebo pro aplikace na porézní polymemí základní látku s mukoadhezními vlastnostmi, například pro bukální podání.

Průmyslová využitelnost

Prostředky jsou vhodné pro ošetřování a/nebo prevenci velmi různorodých patologických procesů, jako jsou tromboembolické choroby, předinfarktová angína, koronární srdeční choroby, zánětlivé choroby, tromboflebitida, autoimunitní choroby a arterioskleróza, nebo pro ošetřování chorob, souvisejících s metastázou nebo nemocemi, příbuznými angiogenezi.

Jakákoli úprava prostředků pro výše uvedené cesty podání k libovolnému svrchu uvedenému ošetření bude zřejmá odborníkovi v oboru.

Celková dávka Fragminu^R u výše uvedených forem podání tak může být velmi vysoká a je omezena pouze biologickou dostupností a tím, zda je terapeuticky nebo klinicky vhodná při aplikaci a zda bude dobře snášena.

Příklady klinických dávek jsou 120 mezinárodních jednotek (IU) na kilogram tělesné hmotnosti dvakrát denně pro hlubokou žilní trombózu a pro profylaxi trombózy (pro nízko rizikové pacienty) 2500 mezinárodních jednotek za den nebo 5000 mezinárodních jednotek za den (pro vysoce rizikové pacienty).

Například poměrné množství Fragminu^R k lipidům může být v rozmezí od 1 do 200 % hmotnostních, s výhodou od 2 do 80 % hmotnostních.

Avšak vyšší množství jak Fragminu^R, tak lipidů je možné použít v souvislosti s tímto vynálezem, pokud je to klinicky vhodné.

-5CZ 285672 B6

Jestliže množství lipidů bude v prostředcích nízké, zvýšený účinek absorpce bude snížen, což se může kompenzovat zvýšením množství Fragminu^R za účelem dosažení stejných hladin séra po podání.

Toto široké rozmezí koncentrace, umožňující, aby Fragmin^R k lipidu byl v relativním množství až do 200 % hmotnostních, ukazuje pružnost složek určených k úpravě na prostředek pro vhodné formy dávkování, které jsou určeny k podávání různým typům pacientů.

Rozpustnost a stabilita Fragminu^R usnadňuje přizpůsobení prostředku pro vhodnou formu podání a kromě toho je naprosto zřejmé, že může mít stabilizační vliv na soubor lipidových částic v prostředku, pravděpodobně v důsledku vysoké hustoty jeho záporného náboje.

Dále uvedené příklady, které nemají být pokládány za omezení rozsahu tohoto vynálezu, uvádějí Fragmin^R, obsažený v prostředcích s lipidy, definovanými v příkladech, s podílem 25 % fosfatidylcholinu jako amfifilní sloučeninou a 75 % monoglyceridu jako nepolární sloučeninou.

Prostředky se podávají rektálně nebo intraduodenálně in vivo s různým množstvím přídavného rozpouštědla na bázi vody. U intraduodenálně použitelných prostředků se obsah vody může měnit od 1 do 4 dílů hmotnostních, vztaženo na lipidovou složku v prostředku.

Relativní množství Fragminu^R k lipidům, určeným k testování, je od 2 do 200 % hmotnostních.

Příklady 1 až 5, uvedené dále, ilustrují změnu lipidových složek lipidového systému v nepřítomnosti biologicky aktivních sloučenin, zvolených z lipidů a jejich kombinací, bez omezení rozsahu ochrany.

Příklady 6 a 7 ukazují způsob výroby prostředků, které obsahují definovaný lipidový systém, sestávající z fosfatidylcholinu, esterů glycerolu a Fragminu^R. Tyto prostředky na počátku neobsahují rozpouštědlo na bázi vody v množství, umožňujícím, aby tvorba lipidových částic nastávala přímo a samovolně.

Příklad 8 ukazuje zvířecí model, použitý při pokusech v následujících příkladech a biologickou dostupnost Fragminu^R po intraduodenálním nebo rektálním podání v nepřítomnosti lipidového systému.

Příklad 9 ukazuje, že intraduodenální absorpce Fragminu^R se významně zvýší, pokud se zahrne lipidový systém.

Příklad 10 ukazuje, že se intraduodenální absorpce zvyšuje, pokud se před podáním přidá vnější voda.

Příklad 11 ukazuje, že intraduodenální absorpce se také podobně zvyšuje, pokud voda v příkladu 10 se vymění za fyziologický roztok chloridu sodného ve stejném množství.

V příkladu 12 je ukázáno, že rektální absorpce Fragminu^R je významně vyšší, pokud se vpraví do lipidového systému, v porovnání s Fragminem^R, rozpuštěným ve fyziologickém roztoku chloridu sodného v nepřítomnosti lipidového systému.

Příklad 13 ukazuje, že přidání vnější vody nebo fyziologického roztoku chloridu sodného k lipidovému systému má kladný účinek na rektální absorpci.

V příkladech 14 a 15 je ukázáno, že Fragmin^R nemusí být nezbytně zahrnut do lipidového systému před rozpuštěním ve vodě nebo ve fyziologickém roztoku chloridu sodného, aby se absorboval z dvanáctníku nebo konečníku.

-6CZ 285672 B6

Příklad 16 ilustruje, že testované průmyslově dostupné surové lipidy projevují nižší rektální absorpci než definované lipidy.

V příkladu 17 je porovnání absorpce při odlišných poměrech Fragminu^R k lipidu a ukazuje se, že rektální absorpce je vysoká během širokého rozmezí koncentrace lipidu a Fragminu^R.

Příklad 18 porovnává absorpci heparinu a Fragminu^R v prostředcích, které obsahují lipidový systém.

Příklad 19 ukazuje, že po vyrobení prostředku se roztok může skladovat během proměnného časového období před podáním bez významného vlivu na absorpční vlastnosti.

Příklady 20 a 21 ukazují, že účinek Fragminu^R se uchová a jeho absorpce je stále vysoká po prodloužené období skladování prostředku.

Výsledky ukazují, že definovaný lipidový systém zvyšuje intraduodenální absorpci a že nej vyšší absorpce intraduodenálně aplikovaného Fragminu^R se dosáhne s nejvyšším testovaným obsahem vody v prostředku. Testované koncentrace složek ukazují příznivé výsledky. Avšak může být ještě dále možné optimalizovat podmínky.

Příčinami zvýšené absorpce může být, že se dosáhne vyššího styku povrchové plochy mezi prostředkem a střevními membránami, ale pravděpodobně také to, že soubor lipidových částic má výhodné strukturní složení ve stupni příslušného ředění.

Lipidové částice mohou také chránit léčivou látku před enzymatickým odbouráváním ve střevech, jak v případě, že v roztoku jsou přítomny lipidové částice, nesoucí léčivou látku, tak jestliže jsou jinak přítomny v roztoku. Velké množství přítomných lipidů může bránit enzymům degradujícím Fragmin^R, a v takovém případě Fragmin^R může být dobře chráněn mimo lipidové částice. Avšak pokud je množství lipidů malé, může být výhodné obklopit Fragmin^R lipidovými částicemi.

S inhibitory enzymů se může uvažovat jako s přísadou k prostředkům podle tohoto vynálezu.

Je také třeba poznamenat, že absorpce je vysoká bez ohledu na to, zda Fragmin^R je na počátku přítomen volně v roztoku, neboje vpraven do lipidových částic. Vynikající výsledky absorpce se také ukazují po rektálním podání prostředků, obsahujících Fragmin^R s lipidovým systémem v širokém rozmezí obsažené vody nebo fyziologického roztoku chloridu sodného. Tyto výsledky jsou srovnatelné se subkutánními injekcemi, které jsou v současnosti nejobvyklejší cestou podání.

Také se ukázalo, že definovaný lipidový systém je výhodný v porovnání s komerčně dostupnými lipidy s ohledem na řízení a stabilizování prostředků, stejně jako reprodukovatelnost absorpce.

Také se zjistilo, že velikost vzniklých částic se může značně měnit bez ovlivnění příznivých absorpčních vlastností Fragminu^R. Prostředky se ukazují být rovněž použitelné po uplynutí krátkého nebo dlouhého časového období po jejich výrobě.

Prostředky podle tohoto vynálezu také umožňují, aby se zvýšila absorpce heparinu, pokud se podávají s lipidovým systémem. Definovaný lipidový systém, používaný podle tohoto vynálezu, je také výhodný, protože jeho dobře definované složky umožňují biologickou absorpci a také uvolňování a solubilizace léčivé látky se mohou řídit mnohem přesněji.

To znamená, že volba vhodných lipidových složek ze souboru lipidů umožní lepší řízení absorpce, které se má dosáhnout. Je také třeba poznamenat, že vysoké absorpce se může

-7CZ 285672 B6 dosáhnout, pokud Fragmin^R není zahrnut do lipidového systému během výroby, ale přidá se jako roztok k lipidové složce během protřepávání nebo působení ultrazvuku.

Konečně se musí vzít v úvahu, že prostředky, založené na definovaném lipidovém systému aheparinech nebo heparinových fragmentech, jsou překvapivě výhodné s ohledem na zvýšenou absorpci a skýtají výhodu umožňující řízenou rychlost absorpce.

Odborníkovi v oboru budou zřejmé různé modifikace a ekvivalentní řešení. Mohou se používat sloučeniny, prostředky a způsoby podle tohoto vynálezu, aniž by se vybočilo z celkového rázu a rámce tohoto vynálezu, a proto je zapotřebí vzít v úvahu, že vynález není omezen na zvláštní příklady a v nich zahrnutá provedení.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

1,25 g fosfolipidů ze sojových bobů (I) se přidá k 1,25 g směsi glyceridů (Π) a opatrně míchá za teploty 60 °C po dobu 12 hodin. Ke směsi se potom přidá 2,50 g triglyceridů (ΠΙ) a celá směs se míchá za teploty 60 °C po dobu 1 hodiny.

Složka ze souboru lipidů (g)	I	Π	ΙΠ	Složení mastných kyselin z triglyceridů (% hmotnostní)
fosfatidylcholin fosfatidylethanolamin fosfatidylinositol nepolární lipidy monoacylglycerol diacylglycerol triacylglycerol	0,50 0,40 0,23 0,12	0,63 0,63	2,50	8:0 kapry lát 10:0 kaprát 12:0 laurát 16:0 palmitát 18:0 stearát 18:1 oleát 18:2 linoleát 18:3 linolenát minoritní složky	58.5 40.5 0,6 0,4
celkem	1,25	1,25	2,50		100

-8CZ 285672 B6

Příklad 2

1,25 g fosfolipidů ze sojových bobů (I) se přidá k 1,25 g směsi glyceridů (H) a opatrně míchá za teploty 60 °C po dobu 12 hodin. Ke směsi se potom přidá 2,50 g triglyceridů (ΙΠ) a celá směs se míchá za teploty 60 °C po dobu 1 hodiny.

Složka ze souboru lipidů (g)	I	Π	ΙΠ	Složení mastných kyselin z triglyceridů (% hmotnostní)
fosfatidylcholin fosfatidylethanolamin fosfatidylinositol kyselina fosforečná nepolární lipidy monoacylglycerol diacylglycerol triacylglycerol	0,40 0,35 0,18 0,07 0,25	0,63 0,63	2,50	8:0 kapry lát 10:0 kaprát 12:0 laurát 16:0palmitát 18:0 stearát 18:1 oleát 18:2 linoleát 18:3 linolenát minoritní složky	58.5 40.5 0,6 0,4
celkem	1,25	1,25	2,50		100

Příklad 3

1,25 g fosfolipidů ze sojových bobů (I) se přidá k 1,25 g směsi glyceridů (Π) a opatrně míchá za teploty 60 °C po dobu 12 hodin.

Složka ze souboru lipidů (g)	I	Π
fosfatidylcholin	0,40
fosfatidylethanolamin	0,35
fosfatidylinositol	0,18
neutrální lipidy	0,32
monoacylglycerol		0,63
diacylglycerol triacylglycerol		0,63
celkem	1,25	1,25

Příklad 4

1,25 g fosfolipidů ze sojových bobů (I) se přidá k 1,25 g směsi glyceridů (Π) a 0,16 g ethanolu. Celá směs se opatrně míchá za teploty 60 °C po dobu 6 hodin. Ke směsi se potom přidá 0,16 g triglyceridů (ΙΠ) a celá směs se míchá za zvýšené teploty další hodinu.

-9CZ 285672 B6

Složka ze souboru lipidů (g)	I	Π	m
fosfatidylcholin fosfatidylethanolamin fosfatidylinositol neutrální lipidy monoacylglycerol diacylglycerol triacylglycerol	0,40 0,35 0,18 0,32	0,63 0,63	0,16
celkem	1,25	1,25	0,16

Příklad 5

2,50 g fosfatidylcholinu ze sojových bobů (I) a 7,50 g monoglyceridu (Π) se opatrně míchá za teploty 60 °C po dobu 6 hodin. Ke směsi se potom přidá 1,25 g vody a v míchání se pokračuje za zvýšené teploty další hodinu.

Složka ze souboru lipidů (g)	I	Π
fosfatidylcholin monoacylglycerol	2,50	7,50
celkem	2,50	7,50

Příklad 6

2,50 g fosfatidylcholinu ze sojových bobů (I) a 7,50 g monoglyceridu (II) se opatrně míchá za teploty 60 °C po dobu 6 hodin. Ke směsi se potom přidá 1,25 g roztoku Fragminu* (120 mg/g vody) a pokračuje se v míchání za zvýšené teploty další hodinu.

Složka ze souboru lipidů (g)	I	II
fosfatidylcholin monoacylglycerol	2,50	7,50
celkem	2,50	7,50

Příklad 7

2,50 g fosfatidylcholinu ze sojových bobů (I) a 7,50 g monoglyceridů (Π) se opatrně míchá za teploty 60 °C po dobu 6 hodin. Ke směsi se potom přidá 0,625 g roztoku Fragminu^R (120 mg/g vody) a v míchání se pokračuje za zvýšené teploty další hodinu.

Složka ze souboru lipidů (g)	I	Π	Složení mastných kyselin z triglyceridů (% hmotnostní)
fosfatidylcholin monoacylglycerol	2,50	7,50	8:0 kaprylát 10:0 kaprát 12:0 laurát minoritní složky	78,4 21,2 0,2 0,2
celkem	2,50	2,50		100

-10CZ 285672 B6

Rozložení velikosti lipidových částic vzniklých ve vodě za teploty 37 °C, se stanovuje pro příklad 15 za použití zařízení Malvem. Prostředek se opatrně třepe s vodou po dobu 17 hodin a poté se odstředí k oddělení lipidové fáze od fáze vodné. Dostanou se výsledky, které jsou shrnuty dále.

Velikost	%
<1 pm	36
>1 pm, <2 pm	60

Příklad 8

Zvířecí model

Při všech pokusech se používají novozélandští bílí králíci obého pohlaví o hmotnosti 2,5 až 3,5 kg. Po odpírání potravy po dobu 12 hodin se každé zvíře uklidní 0,1 ml/kg Hypnormu (Janssen Pharmaceuticals, Belgie), podaného intravenózní injekcí, a 0,5 mg/kg Atropine (Kabi Pharmacia, Švédsko), podaného subkutánní injekcí. Králíci se anestetizují 20 mg/kg mebumalu, přičemž anestezie se dále udržuje, jak je zapotřebí. Zvířata se oholí a provede se mediální laparotomie. Poté se testované sloučeniny injekčně zavedou přímo do dvanáctníku a poté se peritoneální dutina uzavře. Rektální podání se provádí pomocí injekční stříkačky připojené k plastické trubici, navržené pro použití v rektu králíka. Dávka se kontroluje stanovením hmotnosti injekční stříkačky a připojené trubice před podáním testovaných sloučenin a po tomto podání.

Vzorky krve o objemu 1 ml se zachytí po 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 a 10 hodinách za pomocí katetru, zavedeného do ušní tepny, a smíchají s citrátem sodným na konečnou koncentraci 0,04 mol. Zkumavky, obsahující vzorky, se udržují v ledu, dokud se neprovede odstřeďování při přetížení 800 g po dobu 10 minut. Anti-FXa aktivita v plazmě se určí při počátečním stanovení velikosti za použití hovězího FXa (Kabi Pharmacia) a chromogenního substrátu S-2222.

Zřejmá biologická dostupnost Fragminu^R po intraduodenálním nebo rektálním podání se vyjadřuje jako podíl z plochy pod křivkou anti-FXa aktivity, to znamená (AUCint^uodenJrekt) a (AUC_{s e} ), přičemž tato druhá hodnota je stanovena ve výši 5,14 ± 0,34 libovolných jednotek u 6 králíků, kteří obdrželi subkutánní injekci Fragminu^R v dávce 2 mg/kg.

Biologická dostupnost Fragminu^R v nepřítomnosti lipidů

Biologická dostupnost Fragminu^R po intraduodenálním podání v nepřítomnosti lipidového systému se testuje na 4 králících. Dva z králíků obdrží Fragmin^R v dávce 25 mg/kg jako prášek vložený do želatinové kapsle, která se umístí v dvanáctníku v úrovni vrátníku. Zbývající dva králíci obdrží Fragmin^R rozpuštěný ve fyziologickém roztoku chloridu sodného, který se zavede injekcí přímo do dvanáctníku v celkové dávce 25 mg/kg. U žádného z těchto zvířat se nepozoruje během 8 až 10 hodin anti-FXa aktivita.

Biologická dostupnost Fragminu^R po rektálním podání se testuje na 3 králících. Fragmin^R se rozpustí ve fyziologickém roztoku chloridu sodného a injekčně zavede přímo do rekta v dávce 10 mg/kg. Dva z těchto králíků mají nestanovitelnou anti-FXa aktivitu v krevní plazmě, ale u jednoho se projevuje účinek 0,2 mezinárodní jednotky na mililitr po dobu 45 minut, což odpovídá biologické dostupnosti menší než 1 %.

-11CZ 285672 B6

Závěr

Biologická dostupnost Fragminu^R v nepřítomnosti přísad zvyšujících účinek je menší než 1 % po intraduodenálním nebo rektálním podání.

Příklad 9

Intraduodenální absorpce Fragminu^R obsaženého v lipidovém systému podle příkladů 5 až 7 se testuje na 8 králících. Fragmin^R a lipidový systém se smíchají s vodou v takovém množství, že se vytvoří oddělené, jednotlivé lipidové částice a za 10 minut poté se zavedou do dvanáctníku. Složení směsi je toto: 1 díl hmotnostní Fragminu^R a lipidů a 1 díl hmotnostní destilované vody. Voda a lipidový systém se intenzivně třepají po dobu 5 až 10 minut a poté se směs nechá stát za teploty místnosti dalších 10 minut a to se injekčně zavede do dvanáctníku. Koncentrace Fragminu^R činí 2 % z hmotnosti lipidu. Všichni králíci obdrží dávku 25 mg/kg Fragminu^R, 1250 mg/kg lipidů a 1250 mg/kg destilované vody. Všichni králíci při tomto pokusu mají stanovitelnou úroveň anti-FXa aktivity v plazmě. Maximální koncentrace v plazmě (C_max) se vypočítá za 0,5 až 1,5 hodiny a je od 0,37 do 1,76 mezinárodních jednotek na mililitr. Průměrná hodnota při tomto pokusu činí 4,7 ± 3,0 %.

Závěry

Intraduodenální absorpce Fragminu^R se významně zvýší, pokud se vnese do lipidového systému, v porovnání se systémem neobsahujícím lipidy.

Příklad 10

Tento pokus je identický se studií popsanou v příkladě 9 s tím rozdílem, že Fragmin^R a lipidový systém se smísí s větším množstvím vody. Složení směsi je toto: 1 díl hmotnostní Fragminu^R a lipidů a 4 díly hmotnostní destilované vody. Koncentrace Fragminu^R činí 2 % z hmotnosti lipidu. Všichni králíci (n = 9) obdrží tyto dávky: 25 mg/kg Fragminu^R, 1250 mg/kg lipidů a 5000 mg/kg destilované vody (to znamená přibližně 5 ml). Všichni králíci při tomto pokusu mají stanovitelnou úroveň anti-FXa aktivity v plazmě. Maximální koncentrace v plazmě (Cmax) se dosáhne za 0,75 až 1,5 hodiny a je od 0,73 do 3,79 mezinárodních jednotek na mililitr. Průměrná hodnota při tomto pokusu činí 14,7 ± 5,6 %.

Závěr

Intraduodenální absorpce Fragminu^R se významně zvýší, pokud lipidový systém obsahující Fragmin^R se smíchá s vodou předtím, než se injekčně zavede do dvanáctníku.

Příklad 11

Tento pokud je shodný se studií, popsanou v příkladě 10 s tím rozdílem, že Fragmin^R a lipidový systém se smíchají se 4 díly fyziologického roztoku chloridu sodného, na místo stejného množství destilované vody. Toto se provádí při studii zjišťující, zda iontová síla systému tvořeného Fragminem^R, lipidem a vodou má nějaký účinek na intraduodenální absorpci Fragminu^R. Směs má toto složení: 1 díl hmotnostní Fragminu^R a lipidu a 4 díly hmotnostní fyziologického roztoku chloridu sodného. Koncentrace Fragminu^R činí 2 % z hmotnosti lipidu. Všichni králíci (n=10) obdrží tuto dávku: 25 mg/kg Fragminu^R, 1250 mg/kg lipidů a 5000 mg/kg fyziologického roztoku chloridu sodného. Všichni králíci při tomto pokusu mají stanovitelnou úroveň anti-FXa aktivity v plazmě. Maximální koncentrace v plazmě (C_max) se

-12CZ 285672 B6 dosáhne za 0,75 až 1,5 hodiny a je v rozmezí od 0,62 do 2,60 mezinárodních jednotek na mililitr. Průměrná hodnota při tomto pokusu činí 13,4 ± 7,3 %.

Závěr

Intraduodenální absorpce Fragminu^R se významně zvýší, pokud se systém obsahující Fragmin^R a lipid smíchá s fyziologickým roztokem chloridu sodného.

Příklad 12

Rektální absorpce Fragminu^R, obsaženého v lipidovém systému, se testuje na 5 králících. Lipidový systém bez vody se zavede injekcí přímo do rektu v dávce 100 mg/kg, což odpovídá dávkování 2 mg/kg Fragminu^R. Všichni králíci při tomto pokusu mají stanovitelnou úroveň antiFXa aktivity v plazmě. Maximální koncentrace v plazmě (C_max) se dosáhne za 1,5 až 2,5 hodiny a je v rozmezí od 0,53 do 1,98 mezinárodních jednotek na mililitr. Průměrná hodnota při tomto pokusu činí 67,0 ± 18,2 %.

Závěr

Rektální absorpce Fragminu^R, obsaženého v lipidovém systému bez přídavku vodného roztoku je výrazně vyšší než rektální absorpce samotného Fragminu^R, rozpuštěného ve fyziologickém roztoku chloridu sodného.

Příklad 13

Přídavek vnější vody nebo fyziologického roztoku chloridu sodného k lipidovému systému má kladný účinek na intraduodenální absorpci (viz příklady 9, 10 a 11). Tento pokus se provádí za účelem stanovení, zda by podobný účinek mohl být zřejmý po rektálním podání. Fragmin^Ra lipidový systém se smíchají se 4 díly fyziologického roztoku chloridu sodného, jak je popsáno v příkladu 11, deset minut před podáním do rektu. Složení směsi je toto: 1 díl hmotnostní Fragminu^R a lipidového systému a 4 díly hmotnostní fyziologického roztoku chloridu sodného. Koncentrace Fragminu^R činí 2 % z hmotnosti lipidu. Prostředek se zkouší na 7 + 7 králících při dávce 2 a 5 mg/kg Fragminu^R. Dávka lipidu je 100 a 250 mg/kg, množství fyziologického roztoku chloridu sodného činí 400 a 1000 mg/kg. Výsledky jsou shrnuty do tabulky, uvedené dále.

Dávka (mg/kg)	AUC(IU/ml.h)	CnUIU/ml)	Absorpce (%)
2	4,4	1,43 ±0,51	85,6 ± 29,7
5	11,8	2,89 ±0,78	91,6 ±30,0

Závěr

Rektální absorpce Fragminu^R, obsaženého v lipidovém systému a smíšeného s vnějším roztokem chloridu sodného, je takřka tak vysoká, jako se pozoruje po subkutánní injekci, která je v současné době nejobecněji používanou cestou pro podávání Fragminu^R. Rektální absorpce Fragminu^R ukazuje dobrou proporcionalitu k dávce, jako 2,5-násobné zvýšení výsledků dávkování při podobném vzrůstu AUC a C_max, i když absorpční rychlost je konstantní.

-13CZ 285672 B6

Příklad 14

Ve všech pokusech popsaných výše je Fragmin^R obsažen v lipidovém systému před přidáním vody nebo fyziologického roztoku chloridu sodného do systému. V dále uvedených pokusech se používá naprosto stejného lipidového systému, ale bez zahrnutí Fragminu^R. Tento lipidový systém bez Fragminu^R bude v další části označován jako „placebové lipidy“.

Intraduodenální absorpce Fragminu^R smíšeného s placebovými lipidy se testuje na 7 králících. Práškový Fragmin^R se rozpustí ve fyziologickém roztoku chloridu sodného na konečnou koncentraci 5 mg/ml (0,5 %). 4 díly hmotnostní tohoto Fragminového^R roztoku se smíchají s 1 dílem hmotnostním placebových lipidů. Koncentrace Fragminu^R v této směsi činí 2 % z hmotnosti lipidu, což představuje stejný poměr Fragminu^R k lipidům, jako v příkladech 11 až 15. Směs se intenzivně třepe po dobu 5 až 10 minut nebo se podrobí působení ultrazvuku o vhodné vlnové délce v době, předcházející intraduodenální injekci. Všichni králíci obdrží tuto dávku: 25 mg/kg Fragminu^R, 1250 mg/kg lipidů a 5000 mg/kg destilované vody. Všichni králíci při tomto pokusu mají stanovitelnou úroveň anti-FXa aktivity v plazmě. Maximální koncentrace v plazmě (C_miK) se dosáhne za 0,5 až 2,0 hodiny a je v rozmezí od 0,53 do 3,55 mezinárodních jednotek na mililitr. Průměrná hodnota při tomto pokusu činí 13 ± 8 %.

Závěr

Tento pokus ukazuje, že Fragmin^R nemusí být nezbytně obsažen v lipidovém systému před přidáním vody, aby se dosáhlo absorpce z dvanáctníku. Směs placebových lipidů a vody nebo roztoku chloridu sodného, obsahující rozpuštěný Fragmin^R, se absorbuje v podobném stupni. Příznivé výsledky se dostanou jak při třepání, tak při působení ultrazvuku na prostředek.

Příklad 15

Rektální absorpce Fragminu^R, smíšeného s placebovými lipidy, se testuje na 6 králících. Směs se připraví jak je popsáno v příkladě 14 a zavede rektální injekcí v této dávce: 2 mg/kg Fragminu^R, 100 mg/kg lipidů a 400 mg/ml fyziologického roztoku chloridu sodného. Všichni králíci při tomto pokusu mají stanovitelnou úroveň anti-FXa aktivity v plazmě. Maximální koncentrace v plazmě (C_max) se dosáhne za 0,5 až 2,0 hodiny a je v rozmezí od 0,59 do 1,95 mezinárodních jednotek na mililitr. Průměrná hodnota při tomto pokusu činí 64,2 ± 31 %.

Závěr

Tento pokus v souladu s příkladem 14 ukazuje, že Fragmin^R nemusí být nezbytně na počátku obsažen v lipidovém systému, aby se dosáhlo absorpce z rekta. Směs placebových lipidů a roztoku chloridu sodného, obsahující rozpuštěný Fragmin^R, se také absorbuje ve vyšším stupni než v FragmÍn^R bez lipidů (srov. s příkladem 13).

Příklad 16

Rektální absorpce Fragminu^R, smíšeného s komerčně dostupnými lipidy se testuje na 4 králících. K tomu se použijí tyto komerčně dostupné lipidy: IMWITORMG 742 (od firmy mg Hůls AG, kteiý obsahuje přibližně 50 % monoglyceridů a 50 % diglyceridů a triglyceridů s acylovými radikály v podstatě odvozenými od kyseliny kaprylové a kyseliny kaprinové) a fosfatidylcholin Zigma PC (P-5394 od firmy Sigma, který obsahuje 84 % PC, 13 % PE a 3 % jiných složek). Komerčně dostupné lipidy se smíchají s fyziologickým roztokem chloridu sodného, jak je popsáno v příkladech 14 a 15 a zavedou rektální injekcí v těchto dávkách: 2 mg/kg Fragminu^R, 100 mg/kg lipidů a 400 mg/ml fyziologického roztoku chloridu sodného. Dva ze 4 králíků při

-14CZ 285672 B6 tomto pokusu mají nestanovitelnou úroveň anti-FXa aktivity v plazmě a dva dosahují úrovně v rozmezí od 0,13 do 0,25 mezinárodních jednotek na mililitr. Průměrná hodnota absorpce při tomto pokusu činí 0,7 ± 1,5 % (včetně králíků s nezjistitelnou absorpcí).

Závěr

Pokud se vysoce definovaný lipidový systém zamění za surové lipidy, ze kterých lipidy nebyly vyčištěny, pozoruje se výrazný pokles rektální absorpce, což dokládá, že zvýšená absorpce popsaná v řadě příkladů uvedených výše není obecným účinkem lipidů, ale může se přičítat k účinku definovaného lipidového systému.

Příklad 17

Množství Fragminu^R ve vztahu k množství lipidů jev příkladech popsaných výše vždy 2 mg/kg tělesné hmotnosti na 100 mg/kg tělesné hmotnosti. Dále popsaný pokus je určen ke studii rektální absorpce jako funkce poměru Fragminu^R a lipidu. Jedna část placebového systému se smíchá se 4 díly fyziologického roztoku chloridu sodného, který obsahuje Fragmin^R jak je popsáno v příkladu 16 s tím rozdílem, že doba skladování činí 16 hodin. Vyšší poměr Fragminu^Ra lipidu se dosáhne zvýšením množství Fragminu^R rozpuštěného v roztoku chloridu sodného. Dále uvedené prostředky se testují s ohledem na rektální absorpci:

Skupina	Počet	Fragmin^R/lipid mg/kg	Poměr mg Fragminu^Rna 100 mg lipidu	Fyziologický roztok, mg/kg
1	(n = 8)	2:100	2	400
2	(n = 9)	2:50	4	200
3	(n = 8)	2:25	8	100
4	(n = 7)	2:10	20	40
5	(n = 8)	2:5	40	40*
6	(n = 8)	2:2,5	80	40*
7	(n = 4)	2:1	200	15*

* z praktických důvodů (příliš malé objemy) se nemůže udržet konstantní koncentrace lipidů n počet testovaných králíků.

Dostanou se tyto výsledky:

Skupina č.	Poměr Fragmin^R/lipid	AUC	Cmax IU/ml	Absorpce %
1	2	3,0 ± 1,3	1,1 ±0,4	53,2 ± 9,4
2	4	3,6 ± 1,1	1,1 ±0,4	74,3 ± 17,3
3	8	4,6 ±1,5	1,6 ±0,5	86,0 ± 27,2
4	20	3,2 ±1,4	1,3 ± 0,4	73,5 ± 18,1
5	40	3,7 ± 1,2	1,3 ± 0,6	80,1 ± 12,9
6	80	2,0 ± 1,1	0,6 ± 0,3	48,5 ± 20,9
7	200	1,0 ±0,6	0,3 ± 0,2	20,7 ± 11,4

Závěry

Všechny testované prostředky s Fragminem^R a lipidem skýtají vysokou rektální absorpci, což ukazuje, že koncentrace Fragminu^R a lipidů v popsaném systému vede ke zvýšené absorpci, ve

-15CZ 285672 B6 srovnání s Fragminem^R bez lipidů. Lipidový prostředek má zlepšený účinek na rektální absorpci Fragminu^R.

Příklad 18

Fragmin^R je nízko molekulární heparinový fragment, vyrobený z prasečího heparinu řízeným depolymeraČním postupem za použití kyseliny dusičné. Různí výzkumní pracovníci ukázali, že se heparin slabě absorbuje (< 1 %) po vytvoření podmínek pro orální nebo intraduodenální absorpci. Pomocí této studie bylo zjištěno, že lipidový systém by mohl zvýšit rektální absorpci heparinu. Pokusný postup je naprosto stejný, jako je popsán v příkladě 14 s tím rozdílem, že Fragmin^R se zamění za heparin. Osm králíků obdrží tyto dávky: 2 mg/kg heparinu, 100 mg/kg lipidů a 4000 mg/kg destilované vody. Všichni králíci při tomto pokusu mají stanovitelné úrovně anti-FXa aktivity v plazmě. Maximální koncentrace v plazmě (C_max) se dosáhne za 0,5 až 2,0 hodiny a je v rozmezí od 0,12 do 0,53 mezinárodních jednotek na mililitr. Průměrná hodnota při tomto pokusu činí 15,7 ± 8 %.

Závěry

Rektální absorpce heparinu se významně zvýší, pokud roztok heparinu se smíchá s lipidovým systémem. Stupeň absorpce je však výrazně nižší než u Fragminu^R, pokud se porovnání provádí za stejných podmínek. To ukazuje, že existuje závislost velikosti nebo specifického vzájemného působení v absorpčním modelu molekul pocházejících z heparinu, co umožňuje navrhnout a ovládat prostředky určené k podávání.

Příklad 19

Všechny vzorky až dosud popsané se zavádějí ve formě injekce 10 minut po přípravě prostředku, obsahujícího Fragmin^R, lipid a vodu.

Na 3 králících, kteří obdrží prostředek sestávající z lipidu a roztoku chloridu sodného, který obsahuje 4 % Fragminu^R, se zkouší zjistit, zda časový interval mezi přípravou prostředku a jeho podáním má nějaký vliv na absorpci nebo tento vliv nemá.

Směs se vyrobí jako v příkladu 14 s tím rozdílem, že se nechá stát po dobu 16 hodin před tím, než se podá rektální injekcí dávka 2 mg/kg tělesné hmotnosti Fragminu^R, 50 mg/kg tělesné hmotnosti lipidů a 200 mg/kg tělesné hmotnosti fyziologického roztoku chloridu sodného. Všichni králíci při tomto pokusu mají stanovitelné úrovně anti-FXa aktivity v plazmě. Maximální koncentrace v plazmě (Cmax) se dosáhne za 0,5 až 2,0 hodiny a je v rozmezí od 0,72 do 1,90 mezinárodních jednotek na mililitr, s průměrem 1,12 mezinárodní jednotky na mililitr. Průměrná hodnota při tomto pokusu činí 65 %.

Závěry

Údaje dokládají, že poté co se prostředek připravil, může se podávat po ponechání v klidu během rozdílného časového období bez významného vlivu na absorpční vlastnosti.

Příklad 20

Pokusy in vitro se provádějí za účelem studia vlivu lipidových prostředků na Fragminem^Rvyvolanou anti-FXa aktivitu z hlediska doby skladování. Fragmin^R se vpraví do lipidového systému vymezeného v příkladech, uvedených výše. Koncentrace Fragminu^R činí 2 %

-16CZ 285672 B6 z hmotnosti lipidů. Jeden díl hmotnostní Fragminu^R a lipidu a 4 díly hmotnostní destilované vody se smíchají třepáním a poté nechají stát po dobu 6 týdnů. Během této doby se pravidelně zkouší účinek Fragminu^R. Počáteční účinek je 85 mezinárodních jednotek na mg (u série 1) a 78 mezinárodních jednotek na mg (u série 2), přičemž po 6 týdnech účinek činí 96 mezinárodních jednotek na mg (u série 1) a 85 mezinárodních jednotek na mg (u série 2).

Závěr

Výsledky ukazují, že účinek Fragminu^R se udržuje během prodlouženého skladování prostředku.

Příklad 21

Stejný postup jako v příkladu 19 se provede na 4 králících s prostředkem obsahujícím lipid a roztok chloridu sodného, ve kterém jsou obsaženy 2 % Fragminu^R. Podávaná dávka Fragminu^Rčiní 2 mg/kg, se 100 mg/kg lipidů a 200 mg/kg roztoku chloridu sodného. Všechna zvířata mají stanovitelné úrovně anti-FXa aktivity v plazmě. Maximální koncentrace v plazmě (C_max) se dosáhne za 0,75 až 1,5 hodiny a je v rozmezí od 0,82 do 0,86 mezinárodních jednotek na mililitr, se střední hodnotou 0,86 mezinárodních jednotek na mililitr. Průměrná absorpce při tomto pokusu je okolo 48 %.

Závěr

Disperze se snadno podává, upravuje na vypočtené objemy a projevuje zvýšenou absorpci Fragminu^R.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Farmaceutický prostředek, obsahující lipidový systém, vyznačující se tím, že obsahuje

a) lipidový systém, obsahující

i) alespoň jednu amfifatickou, polární a dvojitou vrstvu tvořící lipidovou složku ze souboru, zahrnujícího fosfatidylcholin a fosfolipidy ve hmotnostním množství 5 až 50 %, vztaženo na lipidový systém, a ii) nepolární lipidovou složku, obsahující monoglyceridy, složené z 8:0 kaprylátu a 10:0 kaprylátu v množství do 100 % lipidového systému, a

b) terapeuticky účinné množství heparinu nebo jeho fragmentu nebo derivátu ve hmotnostním množství 1 až 200 % se zřetelem na lipidový systém, a

c) vodu nebo fyziologickou solanku k vytvoření jednotlivých oddělených lipidových částic.

2. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že je ve formě pro orální, rektální, bukální, sublinguální, nasální, subkutánní nebo transdermální podání nebo pro podání sliznicemi a obsahuje vhodné excipienty pro každou příslušnou cestu podání.

-17CZ 285672 B6

3. Farmaceutický prostředek podle nároků 1 až 2, vyznačující se tím, že amfífatickou nebo polární lipidovou složkou je fosfatidylcholin.

4. Farmaceutický prostředek podle některého z nároků laž3, vyznačující se tím, že nepolární složka obsahuje přídavně triglycerid, tvořený směsí 8:0 kaprylátu a 10:0 kaprátu.

5. Farmaceutický prostředek podle některého z nároků laž4, vyznačující se tím, že obsahuje heparin nebo jeho fragment nebo derivát ve hmotnostním množství 4 až 80 % se zřetelem na lipidový systém.

6. Farmaceutický prostředek podle některého z nároků laž5, vyznačující se tím, že obsahuje heparin v podobě fragmentu o molekulové hmotnosti 2000 až 10 000.

7. Farmaceutický prostředek pro topické podání podle některého z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že obsahuje excipient pro topické podání.

8. Způsob výroby farmaceutického prostředku podle některého z nároků laž7, vyznačující se tím, že se roztok heparinu nebo jeho fragmentu nebo jeho derivátu vnáší do míchané směsi lipidových složek, poté se přidá voda nebo fyziologický roztok a výsledná směs se zpracuje mechanicky, nebo se heparin nebo jeho fragmenty nebo jeho deriváty smíchají s vodou nebo s fyziologickým roztokem před přidáním směsi k míchaným lipidovým složkám.