JPH06508155A - 定義された脂質系を含有する薬剤組成物 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 定義された脂質系を含有する薬剤組成物発明の詳細な説明 本発明は少なくとも一方が両親媒性で極性がありかつ他方が非極性である少なく とも２つの脂質成分からなる定義された脂質系を含有し、生物活性化合物がヘパ リンまたはその断片または誘導体である薬剤組成物に関するものである。該組成 物はさらに離散脂質粒ｔが存在するような量において水性溶媒を含有し、そして 前記組成物は直腸、経「１、頬側、舌ド、経皮等のごとき種々の投与形状に適合 させることができる。

本発明は少なくとも一方の化合物が両親媒性および極性を有しか一つ他方が非極 性である異なる極性の種類から選ばれた少なくとも２つの脂質成分からなるスウ ェーデン特許出願第９００３１００−６号明細書に記載の定義された脂質系を基 礎にしている。　゛ 両親媒性および極性を有する化合物は二層構造体形成であり、離散脂質粒ｐは脂 質系が過剰な量の水または水含有溶媒と相互に作用するとき脂質系から自然に形 成される。

定義された脂質成分はその化学的組成が知られかつ制御される脂質である。これ は以下でかつ例においてより詳細に説明する。

特性「二層構造体形成」は公知の物理的パラメータでありかつ適宜な物理化学方 法（例えば表面バランス方法）により容易に確立させることができる。そして形 成された離散脂質粒子は偏向された光、画像分析または回折方法を使用する顕微 鏡検査法のごとき物理的および／または化学的方法により確立させることができ る。

脂質組成の変化は脂質粒子がそれによって形成される制御メカニズムおよびそれ により捕らえられたまたは関連の生物活性物質の直接のまたは抑制された解放の ための制御要因として役立つ脂質粒子形成の割合を提供する。

以下の定義が使用される。

脂質−１一つまたはそれ以上の脂肪酸がそれに結合されるかまたは結合され得る グリセロール、スフィンゴシン、コレステロール、およびその他またはそれらの 誘導体のごどきアシル担体からなる天然または合成化合物に関する一般的な用語 。また実質的な炭化水素部分を含有する同様な分子が包含され得る。

脂質粒子形成系に使用される脂質は、それらの極性に依存して、種々の脂質種類 に分類されることができる。

非極性脂質種類−は極性を有するヘッドグループまたは水と相互に作用し得ない ように小さいかまたは立体的に隠される親水性部分を持たない。非極性構成成分 の例は炭化水素、または千ノー、ジーおよびトリグリセロール、コレステロール 、脂肪アルコールまたはコレステロールエステルのごとき非膨張両親媒性の化合 物である。

極性を有する脂質種類−顕著な極性を有する構成成分による表面溶融性を有する 燐脂質または糖脂質のごとき。

水との顕著な相互作用に依存して、それらはさらにそれぞれ膨張および溶融可能 な両親媒性の化合物に細分されている。

両親媒性または両親媒性脂質種類−表面活性を有する、燐脂質および糖脂質のご とき。

二層形成脂質種類−好ましくは水の存在において二層構造を形成する分子幾何学 を有するＰＣ（ホスファチジルコリン）、スフィンゴミエリン、ＰＩ（ホスファ チジルイノシトール）またはＰＥ（ホスファチジルエタノールアミン）。

本発明による担体系に使用される脂質はそれらの種々の極性により特徴付けられ る脂質種類の混合物からなる。

燐脂質または糖脂質のごとき極性を有する脂質、およびモノ−、ジーおよびトリ グリセリドのごとき非極性脂質が系の主要構成成分である。けれども、コレステ ロール、脂肪酸、脂肪アルコールおよびそのエステルならびに他の脂質種類もま た使用することができる。上記で定義されたような種々の種類からの脂質のこの 良好に定義された混合物は大豆油、トウモロコシ油または大豆レシチンおよび卵 レシチンのごとき市販製品と混同されるべきでない。良好に定義された脂質種類 を得るために市販の油は分別されかつ次いで種々の脂質種類が以下に例において より詳細に説明されるごとく混合される。良好に定義された脂質を得るための他 の方法は合成的に製造された脂質を使用することである。

さらに、脂質の誘導体もまた上述した脂質と組み合わせて使用することもできる 。この１例は血流への注入後リポソームの循環時間を延長することを示したホス ファチジルエタノールアミンに結合されるポリエチレングリコールである。かか る誘導体の他の例は腸内の生物活性物質用の吸収増強剤として作用するバルミト イルカルニチンである。

脂質担体系の形成を開始する適宜な方法において、生物活性物質は選択された脂 質に混合され、それに異なる極性の脂質を混合することが続く。この極性／非極 性変更は、種々の極性を有する脂質の範囲をともなう、特別な場合において必要 であると同じ多数のサイクルだけ継続され得る。

脂質担体系への生物活性物質の組み込みの好適な方法は両親媒性脂質の量が一般 に１〜９ｏ％の合計範囲にある場合に、均一の形成を作るために生物活性物質を 両親媒性脂質に混合することである。かかる両親媒性脂質は自然の二層構造体形 成を可能にする。それゆえ例はホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロ ール、ホスファチジルイノシトールまたはホスファチジルセリンまたはその混合 物のごとき両親媒性および極性を有する脂質種類である。

脂質担体系の構成は各生物活性物質の可溶化の目的にぴったり合った脂質種類の 適切な選択および／または組み合わせだけでなく、また脂肪酸、すなわち使用さ れる脂質種類に付属されるアシル基の分布の適切な選択を包含する。アシル基の 変化は以下の例に見られるように異なる物理化学特性を付与する。

脂質粒子が付与された水性環境において系から形成される割合は主要な二層構造 体形成脂質種類の幾何学的形状、すなわち炭化水素尾部の立体構造に関連して有 効なヘッドグループを変化することにより左右されかつ制御させることができる 。

脂質粒子の形成を左右しかつ制御する第２の方法は脂質系の非極性部分の炭化水 素鎖の構造を変化させること、したがってその流動性を変化させることによる。

これは内因性の両親媒性脂質および外因性の水性媒体の相互作用の割合に影響を 及ぼす。

本発明によれば、上述の定義された脂質系は水含有溶媒とともにヘパリン、その 断片または誘導体を含有する薬剤組成物において利用される。表現「ヘパリン」 は天然、生合成、合成または遺伝学的に実行される源からのヘパリンの割合また は種類、ならびにあらゆる誘導体、すなわちヘパリンエステルを示しそして「そ の断片」はヘパリンのあらゆる低分子量断片または化学的に変性された合成ヘパ リン状オリゴ糖を含むそれらの誘導体を示す。

本発明の目的はこの問題を記載した脂質系に基礎を置いた柔軟な組成物を提供す ることにより解決することにある。

本発明の他の目的は非経口投与に対する代替物としてヘパリンの長期間自己投与 の便利な形状に十分適する組成物を提供することにある。

本発明によれば、かかる組成物は、各々適切な投与ルート用の賦形剤、溶媒また は担体を添加することにより、経口、直腸、類例、舌下、扉側、皮Ｆまたは経膜 または経皮投与に適合される製剤の製造に使用することができる。

両親媒性および極性のある化合物は好ましくはホスファチジルコリンでありそし て非極性の脂質は好ましくはモノ、ジまたはトリグリセリドから選ばれている。

組成物中の水の量は離散脂質粒子が形成されるような趣旨から成るべきである。

この条件は、脂質粒子を形成するための糸の実際の限界が脂質成分の性質および 組成および系により投与されるような生物活性成分の性質に依存する。

脂質系の成分を選択するときの最も重要な考慮は脂質の構成および系に組み込ま れる生物活性薬剤の極性である。

吸収は、６ないし１８個の炭素原子の間の、好ましくは６ないし１２個の炭素原 子の間のグリセリドの鎖長さを変化させることにより制御させることができる。

極性の選択および構成成分の異なって電荷されたグループの選択はまた脂質粒子 形成に影響を及ぼすこともできる。

脂質粒子は微胞、リポソーム、およびより高い多層構造のごとき種々のモノ、ジ および多層構造を含んでいる混合集団にすることもできる。

サイズ範囲および構造において集団を制御するための多数の方法が当該技術にお いて良く知られ、それらは例えばａ液処理、凍結−解凍制御攪拌および種々のサ イズ範囲に影響を及ぼす装置である。かかる装置の要求は各投与形状および組成 物により供給される各治療に活性の化合物に関して別個に検討されるべきである 。

脂質粒子集団の組成物はまた極性、炭素鎖長さおよび」二連されたような他の要 因によって脂質材料の選択により左右される。

本発明による好適な実施例において化合物はヘパリンまたはその断片でありそし て脂質系は両親媒体性化合物としてホスファチジルコリンおよび非極性成分とし てモノグリセリドからなっている。

組成物中の両親媒性化合物の量は脂質系において１ないし９０％（Ｗ／Ｗ）　、 好ましくは１ないし５０％（Ｗ／Ｗ）の間そして最も好ましくはは脂質系に対し て５〜５０％（Ｗ／Ｗ）の間の範囲にすることができる。

好適なヘパリン断片はフラグミン（商標）であり、これは制御された亜硝酸解重 合方法により豚ヘパリンからカビ・ファーマシア社により製造された低分子量へ バリン断片である（ＥＩ）　１４１．８４参照）。

フラグミン（商標）は、組成物の他の成分に添加されるかまたはそれと混合され るとき、溶液または懸濁液の形式にすることができる。それはまた組成物の他の 成分が添加される前に本来水のない脂質マトリクスと混合させることができる。

フラグミン（商標）は非常に容易に水に可溶でかつかかる水溶液は安定であると 見做されている。

フラグミン（商標）の特性は適宜な試薬の添加により定義された脂質系に基づい て多くの製剤を製造することを可能にする。かかる製剤は発砲剤、注液、カプセ ルおよび座薬または経口、類例、舌下、扉側、経皮または皮下投与のためにまた は一般に粘膜への投与のためにとくに製造された種々の製剤の形式において直腸 使用に適合させることができる。フラグミン（商標）と定義された脂質とを含有 する本発明の組成物はまた例えば皮下投与に関して抑制された解放を得るための デポ−製剤の製造または例えば類例投与のための粘性接着特性を有する多孔性重 合マトリクスへの適用に適する。その製剤は冠動脈性心臓病、炎症性疾患、自己 免疫症、動脈硬化症のごとき広範な病理学過程を治療および／または阻止するた めにまたはメタスタシスまたは血管形成関連疾患の治療に有用である。

上記に記載した治療のために上述した投与ルート用の組成物の適合はこの技術に 熟練した者には自明である。

上述した投与形状におけるフラグミン（商標）の合計つ臨床的に投与するのに適 しかつ十分に許容される。

臨床的投与量の例は極度の静脈血栓症に関して１日２回１２０ＩＵ／ｋｇ体重お よび血栓症予防法（危険の少ない患者に関して）に関しては２５００ＩＵ／日ま たは合させられる成分の柔軟性を示す。

本発明の範囲を限定するものと見做すべきでない以下の例は両親媒性化合物とし て２５％のホスファチジルコリンおよび非極性の化合物として７５％のモノグリ セリドの比率において例に定義された脂質を有する組成物中のフラグミン（商標 ）を示す。

組成物は種々の量の追加的な水を基礎にした溶媒とともに生体内で直腸および十 二指腸に投与された。十二指腸に付与された組成物において水含量は組成物の脂 質成分に対して重量部で１ないし４に変化させることができる。

試験されたフラグミン（商標）対脂質の相対的な量は２から２００（ｗ／ｗ）ま でであった。

以下の例１〜５は、本発明の範囲を制限することなしに脂質およびその組み合わ せの選択により、生物活性化合物の不存在において、脂質系の脂質成分の変化を 示す。

例６〜７はホスファチジルコリンと、グリセロールエステルと、フラグミン（商 標）とからなる定義された脂質系を含む組成物の製造を示す。これらの組成物は 脂質粒子形成が直接および自然に発生するような量において水を基礎にした溶媒 からなる。

例８は以下の例における実験に使用された動物モデルおよび脂質系の存在におい て十二指腸または直腸投与後のフラグミン（商標）の生物利用性を示す。

例９はフラグミン（商標）のヒニ指腸吸収が脂質系に含まれるとき顕著に増加す ることを示す。

例１０は外部の水が投与前に添加されるとき十二指腸吸収が増加することを示す 。

例１１は例１０の水が同一量の生理食塩水と交換されるとき十二指腸吸収がまた 同様に増強することを示す。

例１２はフラグミン（商標）の直腸吸収が、脂質系の存在において、生理食塩水 中に溶解されたフラグミン（商標）と比べて脂質系に組み込まれるとき著しく高 いことを示す。

例１３は脂質系への外部の水または生理食塩水の添加が直腸についての正の作用 を有することを示す。

例１４および１５は、フラグミン（商標）が、十二指腸または直腸により吸収さ れるために、水または食塩水との溶解前に脂質系に必ずしも含有される必要がな いことを示す。

例１６は試験された市場で入手可能な加工してない脂質が定義された脂質より低 い直腸吸収を付与することを示す。

例１７は種々のフラグミン（商標）対脂質比の吸収の比較でありかつ直腸吸収が 広い脂質およびフラグミン（商標）の濃度範囲にわたって高いことを示す。

例１８は脂質系を含む製剤におけるヘパリンおよびフラグミン（商標）吸収の比 較である。

例１９は組成物の形成後、溶液が吸収特性の顕著な影響なしに投与前に変化する 時間長さにおいて蓄えることができることを示す。

例２０〜２１はフラグミン（商標）活性が保持されかつその吸収が組成物の延長 された貯蔵後さらに高いことを示す。

結果は定義された脂質系が十二指腸吸収を増強しかつ１−二指腸に付与されたフ ラグミン（商標）の最大吸収が組成物の最大の試験水含量により達成されること を示す。

成分の試験された濃度は好都合な結果を示した。しかしながらさらに条件を最適 化することも可能である。

増強された吸収の理由は組成物と脇腹との間のより高い接触表面積が得られるが 、また多分そのため脂質粒子集団が関連の希釈度において好都合な構造的組成を 有することである。

脂質粒子はまた、脂質粒子が薬剤を支持するかまたは他の方法で溶液中に存在す るならば、腸内の酵素の低下から薬剤を保護することが可能である。存在する多 量の脂質は酵素を減少するフラグミン（商標）を阻止することができかつかかる 場合においてフラグミン（商標）は脂質粒子の外部で十分に保護される。しかし ながら、脂質の量が低いとき、脂質粒子内にフラグミン（商標）を封入するのが 有利である。

酵素抑制剤が本発明の組成物に対する考え得る添加物である。

また留意することは、形成された粒子のサイズはフラグミン（商標）の好都合な 吸収特性に影響を及ぼすことなく、かなり変化可能である。組成物はそれらの製 造後短いおよび長い時間周期後等しく有用であることが示される。

本発明による組成物はまた、脂質系とともに投与されるとき、ヘパリン吸収を増 強させることができる。本発明において使用された定義された脂質系はまたその 十分に定義された成分が生物学的吸収および薬剤の解放および可溶性をより正確 に制御することがでるため好都合である。

これは脂質種類からの適切な脂質成分の選択が良好な吸収の制御を達成できるこ とを意味する。また留意すべきことは、フラグミン（商標）が製造中に脂質系に 含まれないとしても高い吸収が得られるが、攪拌または音波処理中に脂質系に溶 液として添加されることである。結論において定義された脂質系およびヘパリン またはヘパリン断片は増強された吸収によって意外にも好都合でありかつ吸収率 を制御する好都合な可能性を備えている。

種々の変更および同等物は当該技術に熟練したものには明らかでありそしてその 精神または範囲から逸脱することなしに本発明の化合物、組成物および方法にお いて使用可能であり、そしてそれゆえ理解されることは本発明が特別な例および 本実施例に限定されないということである。

例１ 大豆（Ｉ）からの１．２５ｇの燐脂質が１．２５ｇのグリセリド混合物（ＩＩ） に添加されかつ６０℃で１２時間静かに攪拌された。２．５０ｇのトリグリセリ ド（ｍ）が次いで添加されそして合計混合物が６０℃で１時間攪拌された。

１貫１１１ｉ！ｌｌａ物（ｇ）　Ｉ　ｎ　ｍ　）ＩＪグＩＪｔ’Ｊｌ’のｌｌｉ １Ｍｔ物（ｗｔ％） ホスファチジルコリン　０．５０ ホスフアチジルエタノールアミン　０．４０ホスフアチジルイノシトール　０． ２３非極性脂質　０．１２ モノアシルグリセロール　０．６２５ ジアシルグリヤロール　０．６２５ トリアジルグリセロール　２．５０　８：Ｏカプリル酸塩５８．５１０二〇　カ プリン酸塩　４０．５ １２：０　ラウレート　０．６ １６：０　パルミテート １８：０　ステアレート １８：１　オレＩ−ト １８：２　リノール酸塩 １８：３　リノール酸塩 ミノールス　０．４ 合計　１２５１．２５２．５０　合計　１００例２ 大豆（１）からの１．２５ｇの燐脂質が１．２５ｇのグリセリド混合物（ｎ）に 添加されかつ６０℃で１２時間静かに攪拌された。２．５０ｇのトリグリセリド （ｍ）が次いで添加されそして合計混合物が６０℃で１時間攪拌された。

ｌ質１１ｔＮ１物（ｇ）　ｒ　ｎ　ｍ　トリグリセリドの脂肪酸組成物（ｗｔ％ ） ホスファチジルコリン　０．４０ ホスフアチジルエタノールアミン　０．３５ホスフアチジルイノシトール　０． １８燐酸塩酸０．０７ 非極性脂質　０．２５ モノアシルグリセロール　０．６２５ ジアシルグリヤロール　０．６２５ トリアジルグリセロール　２．５０　８：Ｏカプリル酸塩５８，５１０二〇　カ プリン酸塩　４０．５ １２−〇　ラウレート　０．６ １６二〇　パルミテート １８：０　ステアレート １８：１　オレＩ−ト １８二２　リノール酸塩 １８：３　リノール酸塩 ミノールス　０．４ 合計　１．２５１，２５２．５０　合計　１００例３ 大豆（１）からの１．２５ｇの燐脂質が１，２５ｇのグリセリド混合物（ｎ）に 添加されかつ６０℃で１２時間静かに攪拌された。

脂質種類組成物（ｇ）　Ｉ　ＩＩ ホスファチジルコリン　０．４０ ホスフアチジルエタノールアミン　０．３５ホスフアチジルイノシトール　０． １８中性脂質　０．３２ モノアシルグリセロール　０．６２５ ジアシルグリセロール　０．６２５ トリアジルグリセロール 合　計　１．２５　１．２５ 例４ 大豆（１）からの１．２５ｇの燐脂質が１．２５ｇのグリセリド混合物（ＩＩ） および０．１６ｇのエタノールに添加された。合計混合物が６０℃で６時間静か に攪拌された。０．１６ｇのトリグリセリド（ｍ）が添加されそして合計混合物 が上昇された温度で他の時間攪拌された。

脂質種類組成物（ｇ）　ｉ　ｎ　ｍ ホスファチジルコリン　０．４０ ホスフアチジルエタノールアミン　０．３５ホスフアチジルイノシトール　０． １８中性脂質　０．３２ モノアシルグリセロール　０．６２５ ジアシルグリセロール　０．６２５ トリアジルグリセロール　０．１６ 合　計　１．　２５　１．　２５　０．　１６例５ 大豆（Ｉ）からの２．５０ｇのホスファチジルコリンおよび７．５０ｇのモノグ リセリド（ＩＩ）が６０℃で６時間静かに攪拌された。１．２５ｇの水が添加さ れそし攪拌が上昇した温度で他の時間継続した。

脂質種類組成物（ｇ）　工　■ ホスファチジルコリン　２．５０ モノアシルグリセロール　７．５０ 合　Ｎｆ’　２．　５０　７．　５０ 例６ 大豆（１）からの２．５０ｇのホスファチジルコリンおよび７．５０ｇのモノグ リセリド（ＩＩ）が６０℃で６時間静かに攪拌された。１．２５ｇのフラグミン （商標）溶液（１２０ｍｇ／ｇ水）が添加されそして攪拌が上昇した温度で他の 時間継続した。

脂質種類組成物（ｇ）　■　■ ホスファチジルコリン　２．５０ モノアシルグリセロール　７．５０ 合　計　２．５０　７．５０ 例７ 大豆（１）からの２．５０ｇのホスファチジルコリンおよび７．５０ｇのモノグ リセリド（ＩＩ）が６０℃で６時間静かに攪拌された。０．６２５ｇのフラグミ ン（商標）（１２０ｍｇ／ｇ水）が添加されそして攪拌は上昇した温度で他の時 間継続した。

脂質種類組成物（ｇ）　Ｉ　ＩＩ　モノグリセリドの脂肪酸組成物（ｗｔ％） ホスファチジルコリン　２．５０ モノアシルグリセロール　７．５０ ８：０カプリル酸塩７８．４ １０：０カプリン酸塩２１．２ １２二〇ラウレート　０．２ ミノールス　０．２ 合　計　２．５０　７．５０　合　計　１００３７℃で水中に形成された脂質粒 子のサイズ分布は、モールビアン装置を使用して、例１５に関して決定された。

調合剤が１７時間水中で静かに振動されかつ次いで水性相から脂質相を分離する ように遠心分離された。以下の結果が得られた。

サイズ　％ 〉１μｍ、＜２μｍ　６０ 例８ 動物モデル ２．５〜３．５ｋｇの重さの、雌雄両方のニューシーラント白兎がすべての実験 に使用された。１２時間絶食後、各動物はハイブノームＯ，１ｍｌ／ｋｇ　（ベ ルギー国所在のジャンセン・ファーマシューティヵルズ社）の静脈注射およびア トロビンｏ、５ｍｇ／ｋｇ　（スウェーデン国所在のカビ・ファーマシア社）の 皮下注射により鎮静剤を飲まされた。兎はメブマル２０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇに より麻酔をかけられた。麻酔はその後必要時に維持された。

動物は薄く切られそして中央開腹が行われた。試験化合物はその場合に十二指腸 に直接注入され、その後腹膜凹所が閉止された。直腸投与は兎の直腸に使用する ために構成されたプラスチック管に結合された注射器によって実施された。投与 量は試験化合物を投与する前後に注射器および接続管の重さによってチェックさ れた。

血液サンプル（１ｍｌ）は耳動脈に挿入されたカテーテルによって０．２５，０ ．５，０．７５．ｌ、１．５゜２、　２．　２．　５．３．４．　５．　６．　 ７．　８．　９．および１０時間で集められかつ０．０４Ｍの最終濃度へクエン 酸ナトリウムと混合された。管は１０分間８００ｇで遠心分離されるまで水上に 保持された。血漿内の抗ＦＸａ活性は牛ＦＸａ　（カビ・ファーマシア）および 色素基体Ｓ−２２２２を使用する初期量検定により決定された。

十二指腸または直腸投与後のフラグミン（商標）の明瞭な生物利用性が抗ＦＸａ 活性による面積の部分、すなわち（ＡＵＧ十二指腸／直腸）および（ＡＵＣｓ　 、ｃ　、）として表現され、後者は２ｍｇ／ｋｇの投与量でフラグミン（商標） の皮下注射を受ける６匹の兎において５゜１４±０．３４任意ユニツトであるよ うに決定された。

脂質の不存在におけるフラグミン（商標）の生物利用性脂質系の不存在における 十二指腸投与後のフラグミン（商標）の生物利用性が４匹の兎において試験され た。

これらの兎の中の２匹は幽門レベルで十二指腸内に配置されたゼラチンカプセル に含まれる粉末として、フラグミン（商標）、２５ｍｇ／ｋｇを受容した。残り の２匹の兎は生理食塩水中に溶解されたフラグミン（商標）を受容した。それは 十二指腸に直接注入された（合計投与量２５ｍｇ／ｋｇ）、抗ＦＸａ活性は８〜 １０時間の観察期間にわたってこれらの動物のいずれにも検出され得なかった。

直腸投与後のフラグミン（商標）の生物利用性が３匹の兎において試験された。

フラグミン（商標）は生理食塩水中に溶解されかつ１０ｍｇ／ｋｇの投与量で直 腸に直接注入された。これらの兎の中の２匹は血漿中に検出し得る抗ＦＸａを持 たなかったが１匹は１％以下の生物利用性に対応する４５分０．２　Ｉ　Ｕ／ｒ ｎ　ｌの活性を示した。

結論：増強添加物の不存在においてフラグミン（商標）の生物利用性は十二指腸 または直腸投与後１％以下である。

例９ 例５〜７による脂質系に含まれるフラグミン（商標）の十二指腸吸収が８匹の兎 において試験された。フラグミン（商標）／脂質系は、離散の、個々の脂質粒子 が十二指腸に付与される前１０分に形成されるような量において水と混合された 。混合物の組成は以下の通りであった。すなわち、１部（重量）フラグミン（商 標）／脂質＋１部（重量）蒸留水。水／脂質系は５〜１０分間勢いよく攪拌され かつ次いで十二指腸へ注入される前の他の１０分室温にあるように放置された。

フラグミン（商標）の濃度は脂質重量の２％であった。すべての兎は以下の投与 量を受容した。すなわち、フラグミン２５ｍｇ／ｋｇ、脂質１２５０ｍｇ／ｋｇ および蒸留水１２５０ｍｇ／　ｋ　ｇ。この実験においてすべての兎が血漿中に 抗ＦＸａ活性の検出可能なレベルを有した。最大血漿濃度（Ｃ７，え）は０．５ 〜１．５時間に達しそして０，３７ＩＵ／ｍｌ　〜ｌ、７６ＩＵ／ｍｌの間の範 囲であった。この実験における平均吸収は４．７±３．０％であった。

結論：フラグミン（商標）の十二指腸吸収は、系中の脂質の不存在に比して、脂 質系に含まれるとき顕著に増加される。

例１０ この実験は、フラグミン（商標）／脂質系がより多量の水と混合された以外、例 ９に記載された研究と同一であった。混合物の組成は以下の通りであった。すな わち、１部（重量）フラグミン（商標）／脂質＋４部（重量）蒸留水。フラグミ ン（商標）の濃度は脂質重量の２％であった。すべての兎（ｎ＝９）は以下の投 与量を受容した。すなわち、フラグミン２５ｍｇ／ｋｇ、脂質１２５０ｍｇ／ｋ ｇおよび蒸留水５０００ｍｇ／ｋｇ　（＃５ｍ■）。この実験においてすべての 兎が血漿中に抗ＦＸａ活性の検出可能なレベルを有した。０．１８は０．７５〜 １　、　５時間に達しそして０．７３ＩＵ／ｍ１〜３．７９ＩＬＪ／ｍｌの間の 範囲であった。この実験における平均吸収は１４．７±５．６％であった。

結論：フラグミン（商標）の十二指腸吸収は脂質系（フラグミン（商標）を含有 する）が十二指腸に注入される前に水と混合されるとき著しく増加される。

例１１ この実験はフラグミン（商標）／脂質系が同一量の蒸留水に代えて４部の生理食 塩水と混合された以外例１０に記載された研究と同一であった。これはフラグミ ン（商標）／脂質／水系のイオン強さがフラグミン（商標）の十二指腸吸収に何 らかの作用を有するかどうかを研究するために行われた。組成は以下の通りであ った。すなわち、１部（重量）フラグミン（商標）／脂質＋４部（重量）生理食 塩水。フラグミン（商標）の濃度は脂質重量の２％であった。すべての兎（ｎ＝ １０）は以下の投与量を受容した。すなわち、フラグミン２５ｍｇ／ｋｇ、脂質 １２５０ｍｇ／ｋｇおよび生理食塩水５０００ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ。この実験に おいてすべての兎が血漿中に抗ＦＸａ活性の検出可能なレベルを有した。Ｃｍ　 ａ　Ｘは０゜７５〜１．５時間に達しそして０．６２　Ｉ　Ｕ／ｍ　１〜２゜６ ０　Ｉ　Ｕ　／　ｍ　ｌの間の範囲であった。この実験における平均吸収は１３ ．７±７．３％であった。

結論：フラグミン（商標）の十二指腸吸収はフラグミン（商標）／脂質系が生理 食塩水と混合されるとき顕著に増加される。

例１２ 脂質系に含まれるフラグミン（商標）の直腸吸収が５匹の兎において試験された 。水なしで、脂質系が２　ｍ　ｇ／ｋｇのフラグミン（商標）投与量に対応する １００ｍｇ／ｋｇの投与量で直腸に直接注入された。この実験においてすべての 兎が血漿中に抗ＦＸａ活性の検出可能なレベルを有した。Ｃ，、、、ｘは１．５ 〜２．５時間に達しそして０．　５３　Ｉ　Ｕ／ｒｎｌ　〜１．９８　Ｉ　Ｕ／ ｍｌの間の範囲であった。この実験における平均吸収は６７．０±１８．２％で あった。

結論。水溶液の添加なしに脂質系中に含まれるフラグミン（商標）の直腸吸収は 生理食塩水中に単に溶解されるフラグミン（商標）の直腸吸収より劇的に高い。

例１３ 脂質系への外部の水または生理食塩水の添加は十二指腸吸収についての正しい作 用を有した（例９．」０および１１参照）。この実験は同様な作用が直腸投与後 見られ得る場合を試験するために実施された。フラグミン（商標）／脂質系は直 腸に投与される前１ｏ分に例１１に記載されたように生理食塩水の４部と混合さ れた。混合物の組成は以下の通りであった。すなわち、１部（重量）フラグミン （商標）／脂質系＋４部（重量）生理食塩水。フラグミン（商標）の濃度は脂質 重量の２％であった。この組成物がそれぞれ２および５　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇの フラグミン（商標）投与量で７＋７匹の兎において試験された。脂質の投与量は １００および２５ｏｍｇ／ｋｇでかつ生理食塩水の量は４００および１０００ｍ ｇ／ｋｇであった。結果は以下の表に要約される。

ラグミン（商標）の直腸吸収は皮下注射後観察されたものとほぼ同じ高さであり 、それは今日フラグミン（商１ＩＡ）を投与する最も普通に使用されるルートで ある。フラグミン（商標）の直腸吸収は投与量の２．５倍の増加が吸収量が一定 でありながらＡＵＧおよびＣ□、Ｘの同様な増加を結果として生じるとき良好な 投与比例を示す。

例１４ 上述したすべての実験においてフラグミン（商標）は系への水または生理食塩水 の添加の前に脂質系に含まれた。以下の実験において、正確には同一の脂質系が 使用されたが、含有フラグミン（商標）なしであった。フラグミン（商標）なし の、この脂質組成は、以下の議論においては「プラセボ脂質」と称する。

プラセボ脂質と混合されたフラグミン（商標）の十二指腸吸収が７匹の兎につい て試験された。フラグミン（商標）粉末が５ｍｇ／ｍｌ　（０，５％）の最終濃 度に対して生理食塩水中に溶解された。このフラグミン（商標）溶液の４部（重 量）がブラセボ脂質の１部（重量）と混合された。この混合物中のフラグミン（ 商４１）の濃度は脂質重量の２％であり、それは例１１〜１５におけるものと同 一のフラグミン（商標）／脂質比である。混合物は５〜１０分間勢いよく攪拌さ れるかまたは十二指腸に注入される前の適切な時間長さにわたって代替的に音波 処理された。すべての兎は以下の投与量を受容した。

すなわち、フラグミン（商標）２５ｍｇ／ｋｇ、脂質１２５０ｍｇ／ｋｇおよび 蒸留水５０００ｍｇ／ｋｇ。この実験においてすべての兎が血漿中に抗Ｆ　Ｘ　 ａ活性の検出可能なレベルを有した。最大血漿濃度（Ｃ，、、’）は０．５〜２ ．０時間に達しそして０．５３ＩＵ／ｍ１〜３．３５ＩＵ／ｍｌの間の範囲であ った。この実験における平均吸収は１３．８％であった。

結論。この実験は、フラグミン（商標）は、十二指腸により吸収されるために、 水を添加する以前に脂質系に含まれる必要がないことを示す。溶解されたフラグ ミン（商標）を含有する、プラセボ脂質および水または食塩水の混合物は同様な 程度に吸収される。好適な結果が組成物を攪拌および音波処理することにより得 られる。

例１５ プセセボ脂質と混合されたフラグミン（商標）の直腸吸収が６匹の兎において試 験された。混合物は例１４に記載されたように製造されかつ以下の投与量、すな わちフラグミン２　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ、脂質１００ｍｇ／ｋｇおよび生理食塩 水４００ｍｇ／ｍｌで直腸に注入させた。この実験においてすべての兎が血漿中 に抗ＦＸａ活性の検出可能なレベルを有した。Ｃｍ　ａ　Ｘは０．５〜２．　０ 時間に達しそして０．５９１Ｕ／ｍ１〜１．９５ＩＵ／ｍｌの間の範囲であった 。この実験における平均吸収は６４゜２±３１％であった。

結論二二の実験は例１４にしたがってフラグミン（商標）が直腸により吸収され るために脂質系に必ずしも最初に含まれる必要がないことを示す。溶解されたフ ラグミン（商標）を含有する、プラセボ脂質および食塩水の混合物は、また脂質 なしのフラグミン（商標）より高い程度に吸収される（例１３と比較）。

例１６ 市場で入手し得る脂質と混合されたフラグミン（商標）の直腸吸収が４匹の兎に ついて試験された。以下の市場の脂質、すなわち、インヴイトールＭＧ７４２（ ＭＧフルスＡＧ製、約５０％のモノグリセリドおよび主としてカプリル酸および カプリン酸から誘導されたアシル基を有する５０％のジーおよびトリグリセリド を含有する）およびホスファチジルコリンシグマＰＣ（シグマ製のＰ−５３９４ ，８４％ＰＣ１１３％ＰＥおよび３％の他の成分を含有する）が使用された。市 場の脂質は例１４および１５に記載されたように生理食塩水と混合されかっ以下 の投与量、すなわち、フラグミン２　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ、脂質１００ｍｇ／ｋ ｇおよび生理食塩水４００　ｍ　ｇ　／　ｍ　１で直腸に注入された。。この実 験において４匹の兎中の２匹は血漿中に抗ＦＸａ活性の検出可能なレベルを持た ずかつ２匹は０．１３ＩＵ／ｍ１〜０．２５ＩＵ／ｍｌの間の範囲の低いレベル を有した。この実験における平均吸収は０．　７±１．５％であった（検出不能 な吸収を有する２つを含む）。

結論：非常に限定された脂質系がそれらがそれから純化されるより天然の脂質と 交換されたとき、上記された多数の例において記載された増強された吸収が一般 に脂質の作用を持たないが、定義された脂質系の作用に帰因され得ることを示す 直腸吸収の劇的な増加が観察された。

例】７ 脂質の量に関連してフラグミン（商標）の量は上述した例において常にｚｍｇ／ ｋｇ体重／　ｌ　ＯＯｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ体重であった。以下の実験はフラグミ ン（商標）／脂質比の結果として直腸吸収を研究するために行われた。プラセボ 脂質の１部が、１６時間の貯蔵周期を有するが、例１６に記載されたよ゛うな溶 解フラグミン（商標）を含有する４部の生理食塩水と混合された。より高いフラ グミン（商標）／脂質比が食塩水中に溶解されたフラグミン（商標）の量を増加 することにより得られた。以下の組成物が直腸吸収に関連して試験された。

グループ番号　フラグミン／脂質　ｍｇフラグミン／　ｍｇ食塩水／ｋｇｍ　ｇ 　／　ｋ　ｇ　１００ｍｇ脂質比Ｌ　（ｎ＝８）　２：１００　２　４００２（ ｎ＝９）　２：５０　４　２００ ３（ｎ＝８）　２：２５　８　１００ ４（ｎ＝７）　２：１０　２０　４０ ５（ｎ＝８）　２：５　４０　４０※ ６　（ｎ＝８）　２：２．５　８０　４０※７（ｎ＝４）　２：１　２００　１ ５※※実際の理由（余りにも小さい容量）により脂質濃度は一定に維持されない 。ｎは試験された兎の数である。

以下の結果が得られた。

グループ　フラグミン／　ＡＵＣ（、、、吸収（％）番号　脂質比　ＩＵ／ｍ１ １　２　３．０±１．３　１．１±０．４　５３．２±９．４２　４　３．６± １１．１　１．１±０．４　７４．３±１７．３３　８　４．６±１．５　１． ．６±０．５　８６．０±２７．２４　２０　３．２±１．．４　１．３±０． ４　７３．５±１８．１５　４０　３．７±１．２　１．．３±０．６　８０． １±１２．９６　８０　２．０±１．１　０．６±０．３　４８．５±２０．９ ７　２００　１．０±０．６　０．３±０．２　２０．７±１１．４結論：試験 されたすべてのフラグミン（商標）／脂質組成物は上述した系中のフラグミン（ 商標）／脂質の濃度が脂質なしのフラグミン（商標）に比して増加した吸収を付 与する。脂質組成物はフラグミン（商標）の直腸吸収についての増強作用を有す る。

例１８ フラグミン（商標）は制御された亜硝酸解凍重合法により豚ヘパリンから製造さ れた低分子量ヘパリン断片である。幾らかの研究者はヘパリンが経口または十二 指腸吸収値後不十分に吸収される（く１％）ことを示した。

本研究の目途は脂質系がヘパリンの直腸吸収を増加し得るかどうかを研究するこ とであった。実験の手順はフラグミン（商標）がヘパリンと交換されたことを除 いて例１４に記載された手順と精密に同一であった。８匹の兎が以下の投与量、 すなわちフラグミン２　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ、脂質１００ｍｇ／ｋｇおよび蒸留 水４００ｍｇ／ｋｇを受容した。この実験においてすべての兎が血漿中に抗ＦＸ ａ活性の検出可能なレベルを有した。最大血漿濃度（Ｃ１，８）は０．５〜２． ０時間に達しそして０．１２ＩＵ　／　ｍ、　１〜００５３ＩＵ／ｍｌの間の範 囲であった。この実験における平均吸収は１５．７部８％であった。

結論：ヘパリンの直腸吸収はその溶液が脂質系と混合されるとき顕著に増加され る。しかしながら、吸収の度合いは、それらが同一の条件により比較されるとき 、フラグミン（商標）の度合いより著しく低い。これは投与されるべき製剤を構 成しかつ制御するような可能性を付与する、サイズ依存またはヘパリン起源の分 子の吸収パターンの特別な相互作用があることを示す。

例１９ これまで記載されたすべての例はフラグミン（商標）／脂質／水組成物を製造後 １０分で注入された。

４％フラグミン（商標）を含有する脂質／食塩水組成物を受容した３匹の兎が組 成物製造およびその投与との間の時間低下が吸収に影響を及ぼしたがどうかを確 認するためにチェックされた。

混合物は例１４におけるように製造されたが、加えてフラグミン２　ｍ　ｇ　／ 　ｋ　ｇ、脂質５０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇおよび生理食塩水２００ｍｇ／ｋｇ体 重の投与量において直腸に注入される前に１６時間置くように許容された。この 実験においてすべての兎が血漿中に抗Ｆ　Ｘ　ａ活性の検出可能なレベルを有し た。ｃｆｆｉ、はＱ、５〜２．０時間に達しそして１．１２ＩＵ／ｒｎｌの平均 をもって０．７２ＩＵ／ｍ１〜１．９０ＩＵ／ｍ、］−の間の範囲であった。

この実験における平均吸収は６５％であった。

結論：データは形成された後、組成物は吸収特性についての顕著な影響なしに種 々の時間長さを置いた後投与され得ることを示す。

例２０ 生体外実験が貯蔵時間に関してのフラグミン（商標）抗ＦＸａ活性についての脂 質組成物の影響を研究するために実施された。フラグミン（商標）が上記例にお いて定義された脂質系に組み込まれた。フラグミン（商標）の濃度は脂質重量の ２％であった。１部（重量）フラグミン（商標）／脂質および４部（重量）蒸留 水が攪拌により混合物されかつ次いで６週間置くように許容された。

フラグミン（商標）活性がこの期間にわたって規則的に試験された。初期の活性 はそれぞれ８５　Ｉ　Ｕ／ｍｇ　（シリーズ１）および７８ＩＵ／ｍｇ（シリー ズ２）、そして６週間後の活性は９６１Ｕ／ｍｇ（シリーズ１）および８５　Ｉ 　ｔＪ／ｍｇ　（シリーズ２）であった。

結論：結果はフラグミン（商標）活性が組成物の延長された貯蔵中に保持される ことを示す。

例２１ 例１９におけると同一の手順が２％フラグミン（商標）の脂質／食塩水組成物に より４匹の兎について行われた。

フラグミン（商標）の投与された量は脂質１００ｍｇ／ｋｇおよび食塩水２００ 　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇとともに２　ｍ　ｇ　／　ｋｇであった。すべての動物が 血漿中に抗ＦＸａ活性の検出可能なレベルを有した。Ｃｍ　ａ　ｘは０．７５〜 ｌ、５時間に達しそして平均値０，８６ＩＵ／ｍｌで、０．　８２ＩＵ／ｍｌお よび〜０．　８６　Ｉ　Ｕ／ｍ　ｌの間の範囲であった。この実験における平均 吸収は４８％であった。

結論二分散は投与および計算された容量を調整し易くそして増強されたフラグミ ン（商標）の吸収を示した。

フロントページの続き （８１）指定回　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＰＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ） 、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、 　ＭＲ，ＮＥ、　ＳＮ。

ＴＤ、　ＴＧ）、　ＡＴ、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ。

ＣＨ，ＣＺ、　ＤＥ、　ＤＫ、　ＥＳ、ＦＩ、　ＧＢ、　ＨＵ、ＪＰ、　ＫＰ、 　ＫＲ，ＬＫ、　ＬＵ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　ＮＬ、　Ｎｏ、　ＮＺ、　 ＰＬ、　ＰＴ、　ＲＯ，ＲＵ、　ＳＤ、ＳＥ。

ＳＫ、　ＵＡ、　ＵＳ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）少なくとも２つの脂質成分と少なくとも１つの生物活性化合物とを有する定 義された脂質系を基礎にした薬剤組成物において、脂質成分の少なくとも一方が 両親媒性で極性がありかつ他方が非極性であり、前記生物活性化合物がヘパリン またはその断片または誘導体であり、そして前記組成物が水含有溶媒を含むこと を特徴とする薬剤組成物。 ２）水含有溶媒が個々のおよび離散脂質粒子が形成されるような量で存在するこ とを特徴とする請求項１に記載の薬剤組成物。 ３）経口、直腸、頬側、舌下、鼻側、皮下または経皮使用にまたは粘膜への投与 に適合されかつそれとともに各適切な投与ルートに適する試薬を含むことを特徴 とする請求項１ないし２に記載の薬剤組成物。 ４）両親媒性および極性のある脂質成分がホスフアチジルコリンを形成しかつそ れから選はれる二層構造体でありかつ他方の燐脂質が脂質系の１ないし９０％Ｗ ／Ｗの量でかつ好ましくは１ないし５０％Ｗ／Ｗの範囲において存在することを 特徴とする請求項１ないし３のいずれか１項に記載の薬剤組成物。 ５）非極性の脂質成分がモノ、ジまたはトリグリセリドの種類から選ばれること を特徴とする請求項１ないし４のいずれか１項に記載の薬剤組成物。 ６）非極性の成分が、 ａ．６ないし１８個の炭素原子の範囲内の定義された鎖長さを有するモノグリセ リドおよび／またはｂ．６ないし１８個の炭素原子の範囲内の定義された鎖長さ を有するジグリセリドおよび／またはｃ．６ないし１８個の炭素原子の範囲内の 定義された鎖長さを有するトリグリセリドからなることを特徴とする請求項５に 記載の薬剤組成物。 ７）非極性脂質成分が、 ａ．本質的に８：０カプリル酸塩および１０：０カプリン酸塩の混合物を有する トリグリセリドおよび／または ｂ．本質的に８：０カプリル酸塩および１０：０カプリン酸塩の混合物を有する ジグリセリドおよび／またはｃ．８：０カプリル酸塩および１０：０カプリン酸 塩の混合物を有するモノグリセリドからなることを特徴とする請求項５または６ に記載の薬剤組成物。 ８）両親媒性および極性を有する脂質成分がホスフアチジルコリンでありかつ非 極性の成分が、本質的に８：０カプリル酸塩および１０：０カプリン酸塩から構 成される、モノグリセリドであることを特徴とする請求項４ないし７のいずれか １項に記載の薬剤組成物。 ９）ヘパリンまたはその断片または誘導体が脂質系に対して１ないし２００％（ Ｗ／Ｗ）の、好ましくは４−８０％（Ｗ／Ｗ）間の量において存在することを特 徴とする請求項１ないし８のいずれか１項に記載の薬剤組成物。 １０）ヘパリンが約２０００ないし１００００Ｄａの分子質量を有する低分子量 断片であることを特徴とする請求項１ないし９のいずれか１項に記載の薬剤組成 物。 １１）請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の組成物および適宜な試薬を含 有する局所製剤。 １２）請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の組成物を製造する組成物製造 方法において、ヘパリンまたはその断片または誘導体の溶液を脂質成分の撹拌さ れた混合物に添加し、その後水含有溶媒を添加しそして混合物を撹拌された脂質 成分に添加する前にヘパリンまたはその断片または誘導体を水含有溶媒と機械的 にまたは交互に混合する結果として生じる混合物を処理することを特徴とする組 成物製造方法。 １３）経口、頬側、舌下、直腸または経皮投与または粘膜への投与のための製剤 の製造への前記請求項のいずれか１項に記載の組成物の使用。 １４）血漿中の抗血栓症活性増大および／または予め形成された血塊の溶解方法 において、患者に治療的に有効な量の請求項１ないし１０に記載の組成物および 適宜な試薬を投与することを特徴とする血漿中の抗血栓症活性増大および／また は予め形成された血塊溶解方法。 １５）患者に請求項１ないし１０に記載の組成物および適宜な試薬を投与するこ とを特徴とするアテローム性動脈硬化症の阻止および／または治療方法。 １６）請求項１ないし１０に記載の治療的に有効な量の組成物および適宜な試薬 を投与することを特徴とする虚血性心臓病および関連の血管障害の治療方法。 １７）患者に請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の組成物および適宜な試 薬を投与することを特徴とする炎症治療方法。