CZ288536B6 - Bifunkční varianty urokinázy se zlepšenými fibrinolytickými vlastnostmi a s trombininhibičním účinkem, plazmidy pro jejich získávání, způsob jejich výroby a trombolytika tyto látky obsahující - Google Patents

Bifunkční varianty urokinázy se zlepšenými fibrinolytickými vlastnostmi a s trombininhibičním účinkem, plazmidy pro jejich získávání, způsob jejich výroby a trombolytika tyto látky obsahující Download PDF

Info

Publication number
CZ288536B6
CZ288536B6 CZ19941706A CZ170694A CZ288536B6 CZ 288536 B6 CZ288536 B6 CZ 288536B6 CZ 19941706 A CZ19941706 A CZ 19941706A CZ 170694 A CZ170694 A CZ 170694A CZ 288536 B6 CZ288536 B6 CZ 288536B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
psj
gly
pro
glu
leu
Prior art date
Application number
CZ19941706A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ170694A3 (en
Inventor
Gerd J. Prof. Dr. Steffens
Stephan Dr. Wnendt
Johannes Dr. Schneider
Regina Dr. Heinzel-Wieland
Derek John Dr. Saunders
Original Assignee
Grünenthal GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Grünenthal GmbH filed Critical Grünenthal GmbH
Publication of CZ170694A3 publication Critical patent/CZ170694A3/cs
Publication of CZ288536B6 publication Critical patent/CZ288536B6/cs

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/48Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/48Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6456Plasminogen activators
    • C12N9/6462Plasminogen activators u-Plasminogen activator (3.4.21.73), i.e. urokinase
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y304/00Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21073Serine endopeptidases (3.4.21) u-Plasminogen activator (3.4.21.73), i.e. urokinase
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

eÜen se t²k bifunk n ch variant urokin zy se zlepÜen²mi fibrinolytick²mi vlastnostmi a s trombininhibi n m · inkem obecn ho vzorce I M4-X.sub.1.n.-Y.sub.1.n., ve kter m M4 zna aminokyselinovou sekvenci .sup.47.n.Ser a .sup.411.n.Leu glykosidu zbaven prourokin zy podle obr. 1, plazmid pou it²ch p°i z sk v n t chto polypeptid , zp sobu jejich v²roby, jako i trombolytik, kter obsahuj jako · innou l tku bifunk n varianty urokin zy obecn ho vzorce I.\

Description

Oblast techniky
Vynález se týká bifunkčních variant urokinázy se zlepšenými fibrinolytickými vlastnostmi a s trombininhibičním účinkem, plazmidů použitých při získávání těchto polypeptidů, způsobu jejich výroby, jakož i trombolytik, která obsahují jako účinnou látku bifunkční varianty urokinázy.
Dosavadní stav techniky
Důležitou vlastností lidské krve je schopnost uzavřít poškozené krevní řečiště vytvořením trombů. Srážení krve je vyvoláváno řadou enzymů, obsažených v krvi, které v takzvané srážecí kaskádě vedou k tomu, že enzym trombin proteolyticky přemění předchozí fibrinogen na fibrin. Fibrin je polymerován v místě poškození vlivem trombocytů, erytrocytů a dalších krevních součástí za vytvoření trombů.
Kromě toho obsahuje krev také řadu enzymů, které působí proti srážení a zajišťují po regeneraci cévní stěny průtok krve. Nejdůležitějším enzymem pro trombolýzu je plazmin, který proteolyticky napadá fibrinová vlákna a tím ovlivňuje rozpouštění trombů. Plazmin je tvořen proteolytickým štěpením plazminogenu, svého neaktivního bílkovinného předchůdce (prekurzoru). Aktivace je způsobena proteolytickým štěpením plazminogenu plazminogenaktivátorem. Jsou známé dva lidské plazminogenaktivátory, totiž urokináza, plazminogenaktivátor, nacházející se v moči, a tkáňový plazminogenaktivátor.
Srdeční infarkt a mozkový infarkt jsou úzce spojeny s patologickým obrazem trombů. Při obou formách infarktu vznikají - často z důvodu arteriosklerotických změn arterií - za určitých podmínek tromby na stěnách cév. Tyto tromby porušují krevní proud v cévách, takže tkáně nemohou být dostatečně zásobovány kyslíkem. Toto vede při srdečním infarktu k částečnému nebo úplnému odumření srdečního svalu. Obdobně vede blokáda mozkových cév k těžkému poškození mozkové tkáně.
Při terapii nemocných s infarktem se nasazují aktivátory plazminogenu jako trombolytika, která startují odbourávání trombů plazminem. V současné době slouží k léčbě streptokináza, APSAC (Anisolated Plazminogen Streptokinase Activator Complex), dvouřetězcová urokináza (UK), rekombinantní jednořetězcová urokináza (rekombinante Prourokinase) a tkáňový plazminogenaktivátor (tPA) (Collen a Lijnen, Blood 78,3114-3124 /1991/).
U streptokinázy se jedná o bílkovinu hemolytických streptokoků. Streptokináza aktivuje plazminogen tím, že s ním vytváří komplex, čímž převede plazminogen na aktivní konformaci. Tento komplex sám přemění volný plazminogen na plazmin, který potom opět štěpí streptokinázou vázaný plazminogen. Dalším vývojem streptokinázy je APSAC, což je in vitro připravená sloučenina ze streptokinázy a lidského plazminogenu. APSAC vykazuje na základě chemické modifikace aktivního centra plazminogenu oproti streptokináze zvýšené biologické poločasové hodnoty.
Urokináza je lidská bílkovina, kterou je možno získat z moče ve dvou formách jako biologicky účinný protein, totiž vysokomolekulámí urokinázu (HUK) a nízkomolekulámí urokinázu (LUK) (Stump a kol., J. Biol. Chem. 261, 1267-1273 /1986/). HUK a LUK jsou dvouřetězcové molekuly. Urokináza se jako jednořetězcová urokináza (prourokináza) tvoří v různých tkáních a může být jako proenzym zjištěna v nepatrných množstvích v lidské krvi (Wun a kol., J. Biol.
-1 CZ 288536 B6
Chem. 257, 3276-3283 /1982/). Aktivovaná forma prourokinázy má jako HUK molekulovou hmotnost 54 kilodaltonů a sestává ze tri domén: amino-terminální Growth-Factor-Dománe, z kruhu a ze Serin-Protease-Dománe (Giinzler a kol., Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 363, 1155-1165 /1982/); Steffens a kol., Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 363,1043-1058 /1982/).
Ačkoliv prourokináza a plazminogen se vyskytují jako proenzymy, je prourokináza schopna na základě vnitřní aktivity přeměňovat plazminogen na plazmin. Plnou aktivitu získá ale tento plazminogenaktivátor teprve tehdy, když vytvořený plazmin štěpí prourokinázu mezi 158lysinem a 59isoleucinem (Lijnen a kol., J. Biol. Chem. 261, 1253-1258 /1986/). Genetickou technikou získaná urokináza v Escherichia coli byla poprvé popsaná Heynekerem (Procedings of the IVth Intemational Symposium on Genetics of Industrial Microorganismu 1982). Neglykosylovaná prourokináza (Saruplase) byla připravena za použití syntetického genu (Brigerius-Flohé a kol. Appl. Micobiol. Biotech. 36, 640-649 /1992/).
Tkáňový plazminogenaktivátor je bílkovina, vyskytující se v tkáních a v krvi o molekulové hmotnosti 72 kilodaltonů. Tento plazminogenaktivátor sestává z pěti domén: z aminoterminální prstové domény, z Growth-Factor domény, kruhu 1, kruhu 2 a ze Serin-Protease domény. Na rozdíl od prourokinázy je tPA teprve navázáním na fibrin schopná štěpit plazminogen. Stejně jako prourokináza je tPA schopná vlivem štěpení mezi kruhem 2 a Serin-Protease doménou, katalyzovaného plazminem, přejít do aktivní formy. Při tom se váže tkáňový plazminogenaktivátor na fibrin, ne však na fíbrinogen, čímž je plazminogen trombusspecifícky aktivován. Na rozdíl od dvouřetězcové urokinázy je všeobecná plazminogenaktivace značně snížena (Collen a Lijnen, Blood 78,3114-3124 /1991/).
Od počátku osmdesátých let se ukázalo aktivní léčení infarktu myokardu trombolytiky jako účinné a užitečné. V řadě studií bylo ukázáno, že léčení nemocných se srdečním infarktem pomocí streptokinázy, APSAC, UK, rekombinantní prourokinázy nebo tPA vedlo ve srovnání s neléčenými pacienty ke značnému snížení úmrtnosti.
Aby se zlepšila účinnost těchto preparátů, byla připravena za pomoci metod genové techniky řada derivátů tkáňového plazminogenaktivátoru a prourokinázy. Vedle zvýšené fibrinolytické aktivity a omezení vedlejších účinků, byl v centru pozornosti vývoj forem, které by byly způsobilé pro bolus-apliaci. Přehled o vkladech ke zlepšení plazminogenaktivátorů je uveden v Thrombosis and Haemostasis 66, 88-110 (1991), jakož i v Trends in Biotech. 9, 86-90 (1991).
Aby se zlepšila účinnost plazminogenaktivátorů při lýzové terapii a zvláště pak aby se zvýšily jejich hodnoty biologického poločasu, byly připraveny deleční a substituční varianty tkáňového plazminogenaktivátoru, u kterých byly například odstraněny prstové domény a Growth-Factor domény, nebo byla vyměněna Serin-Protease doména za Serin-Protease doménu urokinázy (Collen a kol., Thromb. Haemostasis 65, 174-180 /1991/; Fromage a kol., Fibrinolysis 5, 187— 190 /1991/; Lu a kol., Blood 78,125-131 /1991/).
Skutečně se ukázalo, že odstraněním prstové domény a Growth-Factor domény se zvýšily hodnoty biologického poločasu tPA-variant (Lijnen a Collen, Thromb. Haemostasis 66, 94-95 /1991/). Deleční a substituční varianty, které sestávají zobou kruhových domén tPA a SerinProtease domény UK, byly výhodnější při trombolýze na základě podstatného prodloužení hodnot původního poločasu, to znamená hodnot dosahovaných s nepozměněným plazminogenaktivátorem. Tyto varianty plazminogenaktivátoru mají však pouze velmi malou fibrinovou specifitu (Lu a kol., Blood 78, 125-131 /1991/).
Byly provedeny různé pokusy na výrobu plazminogenaktivátorů se zvýšenou fibrinovou specifitou. Pro snížení nebezpečí krvácení by takové účinné látky měly aktivovat pokud možno výhradně plazminogen v blízkosti trombu, neměly by však vyvolávat systemickou aktivaci plazminogenu. Je například známá varianta tPAS, při které byl vyměněn u původní molekuly kruh 1 za kruh 2. Tato varianta vykazuje zvýšenou afinitu k N-terminálním lysinovým zbytkům,
-2CZ 288536 B6 ale ne k fibrinu. V pokusech na zvířatech nebyla tato varianta, se zřetelem na tromblýzu, účinnější než původní tkáňový plazminogenaktivátor (Collen a kol., Thromb. Haemostasis 65, 174-180/1991/).
Ostatní známé varianty, které vznikají fúzí mezi trombus specifickými protilátkami a plazminogenaktivátorem, jsou na zvířatech účinnější, než původní plazminogenaktivátory (Lijnen a Collen, Thromb. Haemostasis 66, 88-110 /1991/). Velmi vysokou fibrinovou specifítu vykazuje plazminogenaktivátor, izolovaný z netopýra Desmodus retundus (Gardell a kol., J. Biol. Chem. 264,17947-17952 /1989/). Tento plazminogenaktivátor vykazuje v pokusech na zvířatech zlepšenou trombolýzu oproti tPA při zvýšených hodnotách poločasu a snížené systemické aktivaci plazminogenu (Gardell a kol., Circulation 84, 244-253 /1991/); Mellot a kol., Arterioscl. Thromb. 12, 212-221 /1992/).
Úspěch léčení pacientů s infarktem plazminogenaktivátory nezávisí však pouze na trombolýze, ale také na tom, jak dalece se může zabránit opětovnému ucpávání průchodných cév. Různé nálezy ukazují na to, že v trombech vázaný trombin se při trombolýze opět uvolňuje jako aktivní enzym a může způsobovat opětné ucpání cév (Szczeklik a kol., Arterioscl. Thromb. 12, 548-553 /1992/; Eisenberg, Circulation 84, 2601-2603 /1991/). Skutečně je působení trombolytika zlepšeno současnou nebo předřazenou dávkou trombinového inhibitoru heparinu. Také dávkou argatrobanu, hirugenu nebo proteinu C se může snížit výskyt opětovného ucpání cév při lýzové terapii (Schneider, Thromb. Res. 64, 677-689 /1990/; Yao a kol., Am. Physiol. 262; Heart Circ. Physiol. 31, H 374 - H 379 /1992/; Gruber a kol., Circulation 84, 2454-2462 /1991/). Kromě toho je známé, že úmrtnost pacientů po srdečním infarktu je oproti kontrolní skupině signifikantně redukována po předcházející dávce heparinu a následné aplikaci prourokinázy oproti kontrolní skupině (aplikace prourokinázy bez předchozí dávky heparinu) (Tebbe a kol., Z. Kardiol. 80. Suppl. 3, 32 /1991/).
Jedním z nejúčinnějších inhibitorů trombinu je hirudin, izolovaný z krve pijavice Hirudo medicinales, který se váže svojí karboxy-terminální polovinou specificky na takzvané aniontové vazebné místo trombinu. Určité aminokyseliny amino-terminální poloviny molekuly hirudinu uzavírají přístup k substrátovému vazebnému místu trombinu (Rydel a kol., Science 249, 277280 /1990/). Kromě toho je známo, že i menší deriváty hirudinu mohou brzdit účinek trombinu, obzvláště pak ty, které popsal Maraganore a kol. v Biochemistiy 29, 7095-7101 (1990), zdůrazněné jsou Hirulog-molekuly (Krstenansky a kol., m J. med. Chem. 30, 1688-1691 /1987/; Yue a kol., Protein Engineering 5, 77-85 /1992/).
Použití hirudinu v kombinaci s plazminogenaktivátorem k léčení trombolyticky podmíněných onemocnění cév byla popsána v evropských patentových přihláškách EP 328 057 a EP 365 468. Terapeutická použití hirudinových derivátů v kombinaci s trombolytiky jsou známa z PCT přihlášky WO 91/01142.
Trombin může být také blokován peptidem, který se odvozuje z amino-terminální sekvence lidského trombinového receptorů (Vu a kol., Nátuře 253, 674-678 /1991/). Trombinový receptor obsahuje v amino-terminální oblasti trombin vázající sekvenci se sousedním místem pro štěpení trombinu. Oblast receptorů, která váže trombin, je velmi podobná strukturou karboxy-terminální oblasti hirudinu. Receptor je trombinem aktivován tak, že je receptorová sekvence štěpena. Na základě afinity mezi receptorem a trombinem působí fragment receptorů s vazebnou oblastí a modifikovaným místem štěpení jako trombininhibitor.
Stejně tak může být trombin blokován peptidem, který je odvozen od aminokyselin 41 až 57 hemadinu (Strube a kol., J. Biol. Chem. 268, 8590-8595 /1993/).
-3CZ 288536 B6
Podstata vynálezu
Úkolem předloženého vynálezu je objevení účinné látky pro léčení trombolyticky podmíněného ucpání cév, která během krátké doby způsobí úplnou trombolýzu a zároveň zabrání opětnému ucpání cévy po zprvu úspěšné trombolýze. Kromě toho by se mělo pomocí těchto účinných látek zabránit systemické aktivaci plazminogenu.
Nyní bylo zjištěno, že vysoké nároky, které jsou kladeny na tyto účinné látky, jsou splněny určitými bifunkčními variantami urokinázy.
Předmětem předloženého vynálezu tedy jsou bifúnkční varianty urokinázy obecného vzorce I
M4-Xl-Y1 (I), ve kterém
M4 značí aminokyselinovou sekvenci 47Ser až 411Leu glykosidu zbavené prourokinázy podle obr. 1,
Xi značí přímou vazbu mezi M4 a Yi nebo peptid o sekvenci
Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Pro-Gly-Gly-Phe nebo
Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Pro-Gly-Gly-Phe nebo
Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Pro-Gly-Gly-Phe-Gly nebo peptidovou sekvenci obecného vzorce II
Ser-Xr-Xj-Xr-Xj-Xff-X? (II), přičemž
X2 značí Pro nebo Leu,
X3 značí Val nebo Pro,
X» značí Lys, Val, Arg, Gly nebo Glu,
X5 značí Ala, Val, Gly, Leu nebo Ile,
X6 značí Phe, Trp, Tyr nebo Val a
X7 značí Gly nebo přímou vazbu mezi X6 a Yi a
Yi značí peptid sekvence
Y 2-Arg-Pro-Yj-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-GluTyr-Leu-Y4 nebo
Y2-Arg-Pro-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn-Pro-Asn-Asp-Lys-Tyr-Glu-Pro-Phe-T rpGlu-Asp-Glu-Glu-Lys-Asn-Glu nebo
Yr-Arg-Pro-Ser-Ser-Glu-Phe-Glu-Glu-Phe-Glu-Ile-Asp-Glu-Glu-Glu-Lys, přičemž
Y2 značí Pro nebo Val,
Y3 značí Leu nebo přímou vazbu mezi Pro a Gly a
Y4 značí Gin nebo hydroxylovou skupinu.
V bifunkčních variantách urokinázy obecného vzorce I, kde Y] značí peptid sekvence
Y2-Arg-Pro-Y3-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leuγ4, přičemž
Y2 značí Pro nebo Val,
Y3 značí Leu nebo přímou vazbu mezi Pro a Gly a
Y4 značí Gin nebo hydroxylovou skupinu, značí Xi výhodně peptidovou sekvenci obecného vzorce II
Ser-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (II), ve kterém
X2 značí Pro nebo Leu,
X3 značí Val,
X4 značí Lys, Val nebo Arg,
X5 značí Ala, Val nebo Gly,
X6 značí Phe, Trp, Tyr nebo Val a
X7 značí Gly nebo přímou vazbu mezi Xe a Yj.
Obzvláště výhodné jsou v těchto bifunkčních variantách urokinázy peptidové sekvence obecného vzorce II, ve kterém
X2 značí Pro nebo Leu,
X3 značí Val,
X4 značí Lys, Val,
X5 značí Ala, Val,
X6 značí Phe, Trp, nebo Tyr a a obzvláště takové, ve kterých X7 značí přímou vazbu mezi X6 a Y^
V bifunkčních variantách urokinázy obecného vzorce I, ve kterém Yi značí peptid sekvence
Yr-Arg-Pro-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn-Pro-Asn-Asp-Lys-Tyr-Glu-Pro-Phe-Trp-Glu-AspGlu-Glu-Lys-Asn-Glu ve kterém značí Y2 Pro nebo Val, představuje Xi výhodně peptidovou sekvenci obecného vzorce II
Ser-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (II), ve kterém
X2 značí Pro nebo Leu,
X3 značí Val,
-5CZ 288536 B6
X4 značí Lys, nebo Val,
X5 značí Ala nebo Val,
Xé značí Phe nebo Trp a
X7 značí přímou vazbu mezi X6 a Y,.
Ve srovnání se známými plazminogenaktivátory a známými směsemi plazminogenaktivátorů a inhibitoru trombinu, se vyznačují bifunkční varianty urokinázy podle předloženého vynálezu silnějším fibrinolytickým účinkem, spojeným s nepředvídaně dobrým trombin-inhibičním účinkem. Kromě toho se polypeptidů plazmatického fibrinogenu podle předloženého vynálezu překvapivě spotřebuje podstatně menší množství. Z toho vyplývající signifikantně vyšší fibrinová specifíta, obzvláště také ve srovnání se známými směsmi plazminogenaktivátorů a trombinového inhibioru, způsobuje, že je srážlivost krve ovlivněna jen mírně a nebezpečí nekontrolovatelného krvácení jako možné komplikace systemického odbourávání fiblinogenu je minimalizované.
Vysoká fibrinová specifíta variant urokinázy podle předloženého vynálezu umožňuje tedy bolusaplikaci s jasné sníženým rizikem krvácení ve srovnání s bolusaplikací známých trombolytik.
Bifunkční varianty urokinázy obecného vzorce I jsou toxikologicky neškodné, takže jsou jako takové ve vhodných farmaceutických přípravcích způsobilé k aplikaci pacientům s tromboticky podmíněným ucpáním cév.
Dalším předmětem předloženého vynálezu jsou odpovídající trombolytika, která obsahují jako účinnou látku bifunkční varianty urokinázy obecného vzorce I.
Pro léčení tromboticky podmíněných ucpání cév, například srdečního infarktu, mozkového infarktu, periferního akutního ucpání arterií, plicní embolie a hluboké trombózy vén nohy a pánve, je zapotřebí 0,1 až 1 mg/kg polypeptidu podle předloženého vynálezu. Bifunkční varianty urokinázy mohou být aplikovány intravenózně a obzvláště pomocí bolus-injekce.
Trombolytika podle předloženého vynálezu obsahují vedle alespoň jedné bifunkční varianty urokinázy pomocné látky, jako jsou například nosiče, rozpouštědla, ředidla, barviva a pojivá. Volba pomocných látek, jakož i jejich používané množství, závisí na tom, jak má být léčivo aplikováno a jak nepřipravit odborníkovi při aplikaci problémy.
Výroba bifunkčních variant urokinázy probíhá pomocí postupů genové techniky. Předmětem předloženého vynálezu jsou tedy také plazmidy pro použití při získávání bifunkčních variant urokinázy obecného vzorce I, jejichž operon má regulovatelný promotor, účinnou ShineDalgamo sekvenci jako vazebné místo pro ribozomy, startovací kodon, syntetický strukturní gen se sekvencemi ID č. 1 až 24 pro bifunkční varianty urokinázy obecného vzorce I a dále od strukturního genu jeden nebo dva terminátoiy, přičemž tyto plazmidy jsou vhodné pro expresi bifunkčních variant urokinázy ve kmenech Escherichia coli.
Jako regulovatelný promotor je vhodný obzvláště trp-promotor nebo tac-promotor. Jako terminátor se výhodně používá trp A terminátor a/nebo tet A /orf L terminátor z Tn 10.
V kontrolním regionu plazmidů podle předloženého vynálezu činí odstup mezi Shine-Dalgamosekvencí a startovacím kodonem 6 až 12, výhodně 8 až 10 nukleotidů.
Výhodné jsou plazmidy, které jsou vybrané ze skupiny, zahrnující pSJ 69 podle obr. 2e, pSJ 76 podle obr. 2h, pSJ 77 podle obr. 2h, pSJ 78 podle obr. 2h, pSJ 79 podle obr. 2h, pSJ 81 podle obr. 2j, pSJ 83 podle obr. 21, pSJ 90 podle obr. 21, pSJ 91 podle obr. 21, pSJ 92 podle obr. 21, pSJ 93 podle obr. 21, pSJ 94 podle obr. 21, pSJ 95 podle obr. 21, pSJ 101 podle obr. 21, pSJ 102 podle obr. 21, pSJ 103 podle obr. 21, pSJ 104 podle obr. 21, pSJ 105 podle obr. 21, pSJ 106 podle obr. 2o, pSJ 109 podle obr. 21, pSJ 111 podle obr. 21, pSJ 114 podle obr. 2n a pSJ 113 podle ob. 2p.
-6CZ 288536 B6
Obzvláště výhodné jsou plazmidy, které jsou vybrané ze skupiny, zahrnující pSJ 76 podle obr. 2h, pSJ 81 podle obr. 2j, pSJ 83 podle obr. 21, pSJ 90 podle obr. 21, pSJ 91 podle obr. 21, pSJ 92 podle obr. 21, pSJ 93 podle obr. 21, pSJ 94 podle obr. 21, pSJ 95 podle obr. 21, pSJ 101 podle obr. 21, pSJ 102 podle obr. 21, pSJ 103 podle obr. 21, pSJ 105 podle obr. 21, pSJ 106 podle obr. 2o, pSJ 109 podle obr. 21, pSJ 111 podle obr. 21 a pSJ 114 podle obr. 2n.
Dále jsou obzvláště výhodné plazmidy, které jsou vybrané ze skupiny, zahrnující pSJ 76 podle obr. 2h, pSJ 81 podle obr. 2j, pSJ 83 podle obr. 21, pSJ 91 podle obr. 21, pSJ 92 podle obr. 21, pSJ 94 podle obr. 21, pSJ 95 podle obr. 21, pSJ 101 podle obr. 21, pSJ 102 podle obr. 21, pSJ 103 podle obr. 21, pSJ 105 podle obr. 21, pSJ 106 podle obr. 2o, pSJ 109 podle obr. 21, pSJ 111 podle obr. 21 a pSJ 114 podle obr. 2n.
Obzvláště je třeba uvést plazmidy, které jsou vybrané ze skupiny, zahrnující pSJ 76 podle obr. 2h, pSJ 94 podle obr. 21, pSJ 95 podle obr. 21, pSJ 101 podle obr. 21, pSJ 102 podle obr. 21, pSJ 103 podle obr. 21, pSJ 106 podle obr. 2o, pSJ 109 podle obr. 21, pSJ 111 podle obr. 21 a pSJ 114 podle obr. 2n.
Uváděné plazmidy jsou vyrobitelné z plazmidů pBlueskript KS II+, pUC 8 a pGR 201 podle obr. 2 a 2a až 2p.
Předmětem předloženého vynálezu je dále způsob výroby bifunkčních variant urokinázy obecného vzorce I, při kterém se uvedeným plazmidem transformuje kmen Escherichia coli, indukuje se exprese strukturního genu, vytvořený předstupeň proteinu bifunkční varianty urokinázy obecného vzorce I se z média a lýzovaných bakteriálních buněk oddělí, tento předstupeň proteinu se solubilizuje a potom se působením redox systému převede na bifunkční variantu urokinázy obecného vzorce I.
Exprese plazmidů podle předloženého vynálezu byla prováděna v kmenech Escherichia coli, zvláště pak ve kmenech Escherichia coli skupiny K 12, jako je například Escherichia coli K 13 JM 101 (ATC 33876), Escherichia coli K 12 JM 103 (ATCC 39403), Escherichia coli K 12 JM 105 (DSM 4162) a Escherichia coli K 12 DH 1 (ATCC 33849). V bakteriálních buňkách vznikají bifunkční varianty urokinázy podle předloženého vynálezu obecného vzorce I s vysokou výtěžností ve shlucích, ve kterých se vyskytuje protein v denaturované formě. Po izolaci shluků se denaturovaný protein pomocí postupů z chemie proteinů za působení redox systému zpětně převede na požadovanou terciární strukturu.
Příklady povedení vynálezu
Příklad 1
Příprava, izolace a čištění bifunkčních variant urokinázy podle předloženého vynálezu
a) Postup klonování
Plazmidy pro expresi pro výrobu polypeptidů podle předloženého vynálezu pomocí genové techniky v Escherichia coli byly připraveny pomocí o sobě známých metod. Sled jednotlivých kroků přípravy je znázorněn v tabulce 2 a 2a až 2p. Výchozí produkty pro přípravu plazmidů byly plazmidy pBlueskript KS 11+ (firma Stratagene, Heidelberg), pUC8 (firma Pharmacia, Freiburg) a pGR201. Plazmid pGR210 je identický s plazmidem pBF 160, který je popsaný v EP 408 945 a vAppl. Micobiol. Biotechn. 36, 640-649 (1992). Restrikční endonukleázy Bánil, BamHI, Clal, HindlII, Ncol, Ndel, Nhel a Notl, jakož i DNA-modifikující enzymy, jako je
-7CZ 288536 B6 alkalická fosfatáza, T4-ligáza, T4-kináza a T7-polymeráza, byly odebrány od firem Pharmacia, Stratagene, Boehringer Mannheim a Gibco Eggenstein.
Změny plazmidů během jejich přípravy byly zkoušeny pomocí restrikční analýzy a DNA5 sekvencování. DNA-sekvencování bylo prováděno podle návodu výrobce se sadou reagencií firmy Pharmacia. Při přípravě plazmidů byly použity různé oligodesoxyribonukleotidy (Oligos), jejichž sekvence jsou uvedeny spolu s příslušným označením v následující tabulce 1.
-8CZ 288536 B6
Tabulka 1
Označení oligosekvence od 5’ po 3’
0105 TATGAGCAAAACTTGCTACGAAGGTAACGGTCACTTCTA CCGTGGTAAGGCTTCTACCGACAC
0106 CATGGTGTCGGTAGAAGCCTTACCACGGTAGAAGTGACC GTTACCTTCGTAGCAAGTTTTGCTCA
0220 CGGITAAGGCTTTCCCGAGGCCTGGTGGTGGTGGTAACG GTGACTTCGAAGAAATCCCGGAAGAGTACCTGTGATAGG ATCAA
0221 CTAGTTGATCCTATCACAGGTACTCTTCCGGGATTTCTT CGAAGTCACCGTTACCACCACCACCAGGCCTCGGGAAAG CCTTAACCGGGCT
0222 CGCCGAGCCCGCCGAGCCCGCCGGGTGGTTTCCCGAGGC CTGGTGGTGGTGGTAACGGTGACTTCGAAGAAATCCCGG AAGAGTACCTGTGATAGGATCAA
0223 CTAGTTGATCCTATCACAGGTACTCTTCCGGGATTTCTT CGAAGTCACCGTTACCACCACCACCAGGCCTCGGGAAAC CACCCGGCGGGCTCGGCGGGCTCGGCGGGCT
0224 CGCCGGGTGGTTTCCCGAGGCCTGGTGGTGGTGGTAACG GTGACTTCGAAGAAATCCCGGAAGAGTACCTGTGATAGG ATCAA
0225 CTAGTTGATCCTATCACAGGTACTCTTCCGGGATTTCTT CGAAGTCACCGTTACCACCACCACCAGGCCTCGGGAAAC CACCCGGCGGGCT
0226 CGCCGAGCCCGCCGAGCCCGCCGGGTGGTTTCGGTCCGA GGCCTGGTGGTGGTGGTAACGGTGACTTCGAAGAAATCC CGGAAGAGTACCTGTGATAGGATCAA
0227 CTAGTTGATCCTATCACAGGTACTCTTCCGGGATTTCTT CGAAGTCACCGTTACCACCACCACCAGGCCTCGGACCGA AACCACCCGGCGGGCTCGGCGGGCTCGGCGGGCT
0265 CACCCGGCGGAGACGGCGGGCTCAGAGCCAGACCGTTTT CTTCTTTGGTGTGAGAACG
0281 CGTCCGGGTGGTGGTGGTAACGGTGACTTCGAAGAAATC CCGGAAGAATACCTGTAAG
0282 GATCCGTTCTCACACCAAAGAAGAAAACGGTCTGGCTCT GAGCCCGCCGTCTCCGCCGGGTGGTTTCCCG
-9CZ 288536 B6
Tabulka 1 - pokračování
0283 CTAGCTTACAGGTATTCTTCCGGGATTTCTTCGAAGTCA CCGTTACCACCACCACCCGGACGCGGGAAAC
0329 AAGAAATCCCGGAAGAATACCTGCAATAAG
0330 CGGTTAAGGCTTGGGGACCGCGGCCGCTGGGTGGTGGTG GTAACGGTGACTTCG
0331 ACCACCACCCAGCGGCCGCGGTCCCCAAGCCTTAACCGG GCT
0332 CTAGCTTATTGCAGGTATTCTTCCGGGATTTCTTCGAAG TCACCGTTACC
0333 CGGTTAAGGCTTTCGGACCGC
0334 GGCCGCGGTCCGAAAGCCTTAACCGGGCT
0335 CGGTTCGGGCTTTCGGTCCGC
0336 GGCCGCGGACCGAAAGCCCGAACCGGGCT
0337 CGGTTAAGGCTTACGGACCGC
0338 GGCCGCGGTCCGTAAGCCTTAACCGGGCT
0339 CGGTTGTTGCTTTCGGTCCGC
0340 GGCCGCGGACCGAAAGCAACAACCGGGCT
0341 CGGTTCGGGCTTTCCCGC
0342 GGCCGCGGGAAAGCCCGAACCGGGCT
0343 CGGTTAAGGCTTACCCGC
0344 GGCCGCGGGTAAGCCTTAACCGGGCT
0347 CGGTTGTTGCTTTCCCGC
0348 GGCCGCGGGAAAGCAACAACCGGGCT
0381 CGGTTAAGGCTTGGCCGC
0383 GGCCGCGGCCAAGCCTTAACCGGGCT
0384 CGGTTAAGGCTTTCCCGC
0385 GGCCGCGGGAAAGCCTTAACCGGGCT
0386 CGGTTGTAGTTTTCCCGC
0387 CGGTTGAAGTTTTCCCGC
0388 GGCCGCACTACAACTACAACCGGGCT
0389 CGGTTGTAGTTGTAGTGC
0390 GGCCGCGGGAAAACTTCAACCGGGCT
0391 GGCCGCGGGAAAACTACAACCGGGCT
0392 CrAGOTATTCGTTTTTTTCTTCGTCTTCCCAGAACGGT TCGTATTTGTCGTTCGGGTTCCGCAGCAGGAAC
-10CZ 288536 B6
Tabulka 1 - pokračování
0393 GGCCGTTCCTGCTGCGGAACCCGAACGACAAATACGAAC CGTTCTGGGAAGACGAAGAAAAAAACGAATAAG
0453 TGGTTAAAGCTTTCCCGC
0454 GGCCGCGGGAAAGCTTTAACCAGGCT
0455 TGGTTGTTGCTTTCCCGC
0456 GGCCGCGGGAAAGCAACAACCAGGCT
0465 GGCCGCGGGAACAGAGCCAGACCGTTTTCTTCTTTGGTG TGAGAACG
0466 GATCCGTTCTCACACCAAAGAAGAAAACGGTCTGGCTCT GTTCCCGC
0467 CGGTTAAGGCTTTCCCGCGGCCGTTCCTGCTGCGGAAC
0468 TTTGTCGTTCGGGTTCCGCAGCAGGAACGGCCGCGGGAA AGCCTTAACCGGGCT
0469 CTAGCTTATTCGTITTTITCTTCGTCTTCCCAGAACGGT TCGTA
0470 CCGAACGACAAATACGAACCGTTCTGGGAAGACGAAGAA AAAAACGAATAAG
Oligodesoxyribonukleotidy byly v detritylované formě v měřítku 0,1 pmol připraveny pomocí syntetizéru firmy Appield Biosystems, Weiterstadt (model 391) podle údajů výrobce za použití b-kyanoethylovými skupinami chráněného diisopropylaminofosfoamiditu. Vždy 100 pmol oligodesoxyribonukleotidu bylo fosforylováno v 50 mM chloridu hořečnatého a 5 mM dithiothreitolu při pH 7,5 s jednou enzymovou jednotkou T4-kinázy za přítomnosti 10 mM adenosintrifosfátu a konečně ve stejném pufru konvertováno na dvouvláknové molekuly DNA. Získané syntetické dvouvláknové molekuly DNA byly vyčištěny pomocí gelové elektroforézy na polyakrylamidovém gelu (5 % polyakrylamidu) a následně převedeny do ligace s odpovídajícím způsobem připravenými plazmidy. Příprava plazmidů štěpením restrikčními enzymy, izolace odpovídajících restrikčních fragmentů a defosforylace 5'-konců, následující ligace a transformace v Escherichia coli K 12 JM 103, jakož i všechny další genově technické práce, byly provedeny o sobě známým způsobem a jsou uvedeny v práci Sambrooka a kol., „Molecular Cloning: A Laboratory Manual“, 2. vydání, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbour, USA, 1989.
b) Příprava trvalých kultur a fermantace
Rekombinantní expresní plazmidy pSJ69, pSJ76, pSJ77, pSJ78, pSJ79, pSJ81, pSJ83, pSJ90, pSJ91, pSJ92, pSJ93, pSJ94, pSJ95, pSJÍOl, pSJl02, pSJ103, pSJ104, pSJ105, pSJ106, pSJ109, pSJlll, pSJl 14 a pSJl 13 byly přeneseny do Escherichia coli K12 JMI03 (ATCC 39403) a natřeny na Standard-I-agar (150mg/l ampicilinu) (Sambrook a kol., „Molecular Cloning: A Laboratory Manual“). Nyní byla každá jednotlivá kolonie každé transformace kultivována ve Standard-I-médiu (pH 7,0; 150 ml/1 ampicilinu) při teplotě 20 °C až do optické hustoty (OD) 1 při 578 nm, v pěti dávkách po 2 ml jako trvalá kultura za přídavku dimethylsulfoxidu (DMSO) (7,5 °/o konečná koncentrace) v tekutém dusíku hluboce zmrazená a ponechána při teplotě -70 °C.
-11CZ 288536 B6
K získání bifúnkčních variant urokinázy byl nyní vždy 1 ml každé trvalé kultury suspendován ve 20 ml Standard-I-media (pH 7,0; 150 mg/1 ampicilinu) a kultivován při teplotě 37 °C až do OD 1 při 578 nm.
Potom bylo celé množství získané kultury suspendováno v 1 1 Standard-I-média (pH 7,0; 150 mg/1 ampicilinu) a fermentováno v baňkách na třepačce při teplotě 37 °C. Indukce následovala po přídavku 2 ml roztoku kyseliny indolakiylové (60 mg ve 2 ml ethylalkoholu) při OD 0,5 až 1 při 578 nm.
c) Testování exprese
Pro testování řádu exprese (Ploug-jednotky pro OD pro ml) byly bezprostředně před indukcí a každou hodinu po indukci (celkem 6 hodin) buňky, odpovídající 1 ml buněčné suspense s OD 1 při 578 nm odcentrifugovány. Odstředěné buňky byly rozloženy pomocí lysozymu (1 mg 15 lysozymu pro 1 ml v 50 mM Tris/HCl pufru,pH 8,0, 50 mM kyseliny ethylendiamintetraoctové (EDTA) a 15% objemových sacharózy). Lýzované buňky byly solubilizovány ve 4 až 5 M roztoku guanidiniumhydrochloridu a po naředění na 1,2 M guanidiniumhydrochloridu a za přídavku redukčního činidla (glutathion nebo cystein) podrobeny po dobu 2 až 5 hodin reakci (Winkler a kol., Biochemistry 25, 4041-4045 (1986)). Získané jednořetězcové bifunkční deriváty 20 urokinázy byly přídavkem plazminu přeměněny na odpovídající dvouřetězcové deriváty urokinázy a jejich aktivita zjištěna za pomoci chromogenního substrátu pyro-Glu-Gly-Arg-pnitroanilidu, který je štěpen pouze dvouřetězcovou aktivní urokinázou.
Aktivace bifúnkčních variant urokinázy podle předloženého vynálezu plazminem se provádí v 25 50 mM Tris/HCl pufru, 12 mM chloridu sodného, 0,02 % tweenu 80 při pH 7,4 a teplotě 37 °C.
Poměr bifúnkčních variant urokinázy k plazminu činí asi 100 až 1 500 ku 1, vztaženo na molaritu, nebo asi 8 000 až 36 000 ku 1, vztaženo na enzymové jednotky. Inkubační test se provádí v 50 mM Tris/HCl pufru a 38 mM chloridu sodného při pH 8,8 za přítomnosti 0,36 μΜ aprotininu (pro blokování plazminu) a 0,27 mM substrátu pyro-GIu-Gly-Arg-p-nitroanilidu při 30 teplotě 37 °C. V závislosti na koncentraci bifúnkčních variant urokinázy se reakce přeruší po 5 až minutové inkubaci přídavkem 50% kyseliny octové a měří se extinkce při 405 nm. Podle údajů výrobce substrátu (Kabi Vitrum, Švédsko) odpovídá podle tohoto návodu změna extinkce 0,05 pro minutu při 405 nm aktivitě urokinázy 25 Ploug-jednotek pro 1 ml testovaného roztoku. Bifunkční deriváty urokinázy podle předloženého vynálezu vykazují specifickou aktivitu 35 v rozmezí 120 000 až 155 000 Ploug-jednotek pro jeden mg vyčištěného proteinu. Bílkovinný obsah roztoků byl zjištěn pomocí BCA-Assay firmy Pierce.
d) Izolace a čištění
5 až 6 hodin po indukci se ukončí fermentace, prováděná za podmínek popsaných v odstavci lb) (hustota 5 až 6 OD při 578 nm), načež se buňky odstředí. Buněčný sediment se resuspenduje ve 200 ml vody a rozloží se ve vysokotlakém homogenizátoru. Po nové centrifugaci se sediment, který obsahuje celé množství jednořetězcové bifunkční varianty urokinázy, rozpustí v 500 ml 5 M guanidiniumhydrochloridu, 40 mM cysteinu, 1 mM EDTA při hodnotě pH 8,0 a zředí se
2 000 ml 25 mM Tris/HCl pufru s hodnotou pH 9,0. Reake se ukončí po asi 12 hodinách.
Získané bifunkční varianty urokinázy se po přídavku 8 g křemeliny a dvouhodinovém míchání úplně navážou na křemelinu. Navázaná křemelina se oddělí a promyje se acetátovým pufrem (pH4). Varianty urokinázy se eluují 0,5 M tetramethylamoniumchloridem (TMAC) v 0,1 M 50 acetátového pufru (pH 4). Po dvojím chromatografickém dělení (sloupec měď-chelát a kationtoměnič) se varianty urokinázy získají v čisté formě. Po N-terminální sekvenční analýze byla jednak dokázána jednořetězcová povaha a jednak požadovaná amino-terminální sekvence. Charakterizace změněné karboxy-terminální oblasti jednotlivých variant bílkovinářskou chemií bylo po modifikovaném CNBr-štěpení proteinu (rozpuštěného v 1 ml 90% kyseliny mravenčí a 55 1 ml kyseliny heptafluormáselné), dosaženo štěpením peptidového řetězce za tryptofanovými
-12CZ 288536 B6 zbytky. Karboxy-terminální peptid byl před sekvenční analýzou oddělen a vyčištěn pomocí HPLC (High Pressure Liquid Chromatography).
Všechny izolované bifunkční varianty urokinázy, uvedené v tabulce 2, nevykazují v přímém testu 5 aktivity na chromogenním substrátu pro urokinázu žádnou aktivitu nebo vykazují jen velmi slabou aktivitu (pod 1 200 Ploug-jednotek projeden mg vyčištěného proteinu). Teprve po štěpení plazminem (podmínky jsou uvedeny v odstavci lc)) bylo dosaženo enzymové aktivity v rozmezí 12 000 až 155 000 Ploug-jednotek pro jeden mg vyčištěného proteinu. Všechny varianty urokinázy byly pro v E. coli K12 JM103 exprimovány jako jednořetězcové proteiny.
Tabulka 2
Bifunkční varianty urokinázy (bU) podle vynálezu obecného vzorce I M4-X^-Y-^
bU Xi Y1
Mil Ser-Pro-Pro-Ser-ProPro-Gly-Gly-Phe A3-3 Y2=Pro, Y3= vazba mezi Pro a Gly, Y4=OH
M12 Ser-Pro-Val-Lys-AlaPhe A3·) Y2=Pro, ^3=· vazba mezi Pro a Gly, Y4=OH
Ml 3 Ser-Pro-Pro-Ser-ProPro-Ser-Pro-Pro-GlyGly-Phe A1) Y2=Pro, Y3=. vazba mezi .. Pro a Gly, Y4=OH
Ml 4 Ser-Pro-Pro-Gly-GlyPhe Al) Y2=Pro, Y3- vazba mezi Pro a Gly, Y4=OH
Ml 5 Ser-Pro-Pro-Ser-Pro- Pro-Ser-Pro-Pro-Gly- Gly-Phe-Gly Al) Y2=Pro, Y3= vazba mezi Pro a Gly, Y4=OH
Ml 6 Ser-Pro-Val-Lys-AlaTrp-Gly Al) Y2-Pro, Y3=Leu, Y4=Gln
M17 Ser-Pro-Val-Lys-AlaPhe-Gly A1) Y2=Pro, Y3=Leu, Y4=Gln
Ml 8 Ser-Pro-Val-Arg-AlaPhe-Gly A3·) Y2=Pro, Y3=Leu, Y4=GIn
Ml 9 Ser-Pro-Val-Lys-Ala- Tyr-Gly A3·) . Y2=Pro, Y3=Leu, Y4=Gln
M20 Ser-Pro-Val-Val-AlaPhe-Gly A3·) Y2=Pro, Y3=Leu, Y4=Gln
M21 Ser-Pro-Val-Arg-Ala- Phe Al) Y2=Pro, Y3=Leu, Y4»Gln
-13CZ 288536 B6
Tabulka 2 - pokračování
bU xi *1
M22 Ser-Pro-Val-Lys-AlaTyr A1) Υ2βΡΓο, Y3=Leu, Y4=Gln
M23 Ser-Pro-Val-Val-Ala- Phe A1) Y2=Proz Y3=Leuz Y4=Gln
M24 Ser-Pro-Val-Lys-AlaTrp AD Y2=Pro, Y3=Leu, Y4=Gln
M25 Ser-Pro-Val-Lys-AlaPhe Al) Y2=Pro, Y3=Leu, Y4=Gln
M26 Ser-Pro-Val-Val-ValPhe A1) Y2=Pro, Y3=Leu, Y4=Gln
M27 Ser-Pro-Val-Glu-Val- Phe A1) Y2=Pro, Y3=Leu, Y4=Gln
M28 Ser-Pro-Val-Val-ValVal aD Y2=Valz Y3=Leuz Y4=Gln
M29 Ser-Pro-Val-Val-Ala- Phe β2) Y2=Pro
M30 Ser-Leu-Val-Val-AlaPhe AÍ) Y2=sProz Y3=Leuz Y4=Gln
M31 Ser-Leu-Val-Lys-AlaPhe aD Y2=Proz Y3=Leuz Y4=Gln
M32 Ser-Pro-Val-Lys-AlaPhe B2) Y2=Pro
M33 přímá vazba mezi M4 a Y1 A1) Y2=Proz Y3=Leu, Y4=Gln
A = Y2”Arg-Pro-Y3-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-PheGlu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Y4
2) b = Y2_Ary-Pro-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn-Pro-Asn-Asp-LysTyr-Glu-Pro-Phe-Trp-Glu-Asp-Glu-Glu-Lys-Asn-Glu
-14CZ 288536 B6
Příklad 2
Farmakologické zkoušky
Zjišťování trombininhibičního účinku
Inhibiční aktivita bifunkčních variant urokinázy byla zjišťována měřením trombinového času ve směsi 200 μΐ lidské citrátové plazmy, zředěné 1:10 veronalovým pufrem, s 50 μΐ trombinového ίο roztoku (0,2 jednotky) a 50 μΐ vodného roztoku, obsahujícího 0,5 až 50 μg bifunkční varianty urokinázy. Potom byla měřena doba až do vytvoření fibrinových vloček. V následující tabulce 3 jsou uvedeny naměřené inhibiční faktory, které udávají prodloužení trombinového času za přítomnosti vždy 10 pg bifunkční varianty urokinázy podle předloženého vynálezu.
Bylo rovněž zjišťováno prodloužení trombinového času v závislosti na koncentraci a je pro bifunkční varianty urokinázy M12, M23, M29, M32, M33 a jako srovnání pro M4 znázorněno graficky na obr. 3. Na rozdíl od bifunkčních variant urokinázy podle předloženého vynálezu nebyla prodloužena doba do sražení ani vlivem M4, to znamená pro aminokyselinovou sekvenci 47Ser až 41'Leu prourokinázy bez glykosidu podle obr. 1, ani vlivem prourokinázy bez glykosidu 20 (saruplase), ani vlivem LUK samotné v dávkování 1 mg.
Tabulka 3
Prodloužení trombinového času vlivem bifunkčních variant urokinázy podle vynálezu obecného 25 vzorce I M4-X]Yi
Bifunkční varianta urokinázy inhibiční faktor1)
Mil 1,8
M12 4,6
M13 1,7
M14 1,8
M15 2,5
M16 3,2
M17 3,1
M18 2,9
M19 2,0
M20 2,2
M21 2,3
M22 3,7
M23 5,3
M24 6,2
M25 2,9
M26 3,2
M27 2,0
M28 2,1
M29 2,6
M30 3,4
M31 2,0
M32 3,0
M33 2,0
') vztaženo na účinek 10 pg proteinu
Inhibiční faktor = kvocient z trombinového času za přítomnosti inhibitoru a trombinového času 30 za nepřítomnosti inhibitoru.
-15CZ 288536 B6
Farmakologické vlastnosti bifunkčních variant urokinázy M12 a M23 v pokusech na zvířatech
Na farmakologickém in vivo modelu byl testován účinek bifunkčních variant urokinázy Ml2 a M23 na trombolýzu arterielní krevní ucpávky ve srovnání se saruplasou (prourokináza bez 5 glykosidu). K tomu byl narkotizovaným králíkům temporálně izolován cca 1 cm dlouhý segment arterie a vedlejší větší injikován trombin a lidský fibrinogen, značený jodem125. Tím se vytvořil trombus, který vedl ke kompletnímu ucpání cévy. Velikost vytvořeného trombu byla zjišťována pomocí inkorporované radioaktivity lidského fíbrinu extrakorporálním gama-detektorem. Elektromagnetické měření průtoku krve a evidence radioaktivity trombu se provádělo 10 kontinuálně po celou dobu trvání pokusu.
Fibrinolytický účinek tedy byl nejen kvantifikován jako zprůchodnění trombolyticky uzavřených cév, tak také jako odbourávání radioaktivně značeného inkorporovaného fíbrinu trombu.
Před aplikací bifunkčních variant urokinázy podle předloženého vynálezu, jakož i 30, 60 a 90 minut po aplikaci variant urokinázy, byly odebrány vzorky krve, ve kterých byly zjišťovány koncentrace plazmatického fíbrinogenu. Bylo vždy aplikováno 6 mg/kg Ml2, M23 a saruplasy intravenózně jako bolusinjekce. Protože M12 a M13 mají na rozdíl od saruplasy doplňkový antikoagulační účinek, byla saruplasa kombinovaná ve 4. pokusné skupině s antikoagulantem 20 heparinem (150 U/kg i.v.-bolus). Pokusné skupiny měly vždy 6 zvířat.
Po devadesátiminutovém trvání pokusu vykazovala trombolýza značeného fibrinového trombu ± 11 % pro Ml2, 43 ± 12 % pro M23, 22 ± 5 % pro saruplasu a 39 ±15 % pro kombinaci saruplasy a heparinu. Bolusaplikace M12 a M23 vedla u všech šesti zvířat ke zprůchodnění 25 trombolyticky ucpaných cév; při aplikaci saruplasy mohla být uvolněna céva u pěti ze šesti zvířat a při aplikaci saruplasy a heparinu u čtyřech ze šesti zvířat. Maximální množství reperfusiovaného toku (v % výchozí hodnoty) činilo 95 ± 10 % pro M12 a 82 ± 9 % pro M23 a lišilo se signifikantně od maximálního množství reperfusiované tekutiny 43 ± 12 % pro saruplasu. Maximální množství reperfusiované tekutiny 58 ± 8 % při použití saruplasy a heparinu 30 leželo mezi výsledky s M12 a M23 z jedné strany a se saruplasou ze strany druhé.
Celkový fibrinolytický účinek byl vyjádřen jako plocha reperfusiovaného toku (jako % výchozího toku) po devadesátiminutovém trvání pokusu. Tento celkový efekt činil 4.502 ± 1.127 %. min pro Ml2 a 4.270 ± 855 % . min pro M23 a byl pro obě varianty urokinázy 35 podle předloženého vynálezu signifikantně větší než je hodnota pro saruplasu 1.519 ±643 % .
min. Pro kombinované podání saruplasa-heparin byl naměřen celkový efekt 2.217 ± 761 % . min, který nebyl signifikantně lepší než při podání samotné saruplasy a byl podstatně vzdálený od výsledků s M12 a M23. Výsledky jsou uvedené v následující tabulce 4.
Tabulka 4
Trombolytický účinek po i.v.-bolusaplikaci; trombóza femorální arterie, narkotizovaní králíci
Polypeptid dávka % 125J-fibrinolýza max. reperfusní tok (% pův. hodn.) kumulativní reperf. tok (%.min)
M12 6 mg/kg 46 ± 11 95 ± 10* 4502 ±1127
M23 6 mg/kg 43 ±12 82 ±9* 4270 ± 885*
saruplasa 6 mg/kg 22 ±5 43 ± 12 119±643
saruplasa + heparin 6 mg/kg 150 U/kg 39± 15 58 ±8 2217 ±761
* p < 0,05 vs saruplasa
-16CZ 288536 B6
Překvapivě bylo zjištěno, že jak po bolusaplikaci Ml2, tak také po bolusaplikaci M23 klesaly koncentrace fibrinogenu v plazmě signifikantně méně, než po bolusaplikaci saruplasy. Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce 5.
Tabulka 5
Účinek bolusaplikace M12 a M23 ve srovnání se saruplasou bez heparinu a s heparinem na pokles koncentrace fibrinogenu v plazmě; narkotizovaní králíci
Polypeptid dávka pokles plazmového fibrinogenu (% změny oproti výchozí hodnotě)
doba po aplikaci
30 min 60 min 90 min
M12 6 mg/kg -19 ±9 -20 ±9* -19 ±9*
M23 6 mg/kg -20±11* -21 ±11* -20±11*
saruplasa 6 mg/kg -64 ±7 —66 ± 6 -67 ±6
saruplasa + heparin 6 mg/kg 150U/kg n.s.1) -46±8 -45 ±9
* p < 0,05 vs saruplasa ') n.s. = nebylo stanoveno
Výsledky ukazují, že bifunkční deriváty urokinázy M12 a M23 uvolní a upraví opět plný průchod krve trombotickými cévami, které byly ucpány tromby. Tohoto účinku bylo dosaženo jednorázovou bolusaplikaci M12, popřípadě M23 na zvířatech bez podání heparinu. Překvapující bylo, že tyto látky měly ve srovnání se saruplasou silnější fíbrinolytický účinek, spojený s menší spotřebou plazmatického fibrinogenu. To znamená, že M12 a M23 vykazují signifikantně vyšší fibrinovou specifítu ve srovnání se saruplasou.
Lepší ochrana plazmatického fibrinogenu pomocí M12 a M23 ve srovnání se saruplasou znamená, že schopnost srážení krve zůstane lépe zachován a tím je sníženo nebezpečí nekontrolovatelného krvácení jako možné komplikace systemického odbourávání fibrinogenu. M12 a M23 jsou ve vztahu k riziku hemostazeologických vedlejších účinků tedy jistější než saruplasa.
-17CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 1
Délka: 1182 BP, 393 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M24 (pSJÍOl)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
'1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met Ser Lys Thr Cys Tyr Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
1 5
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-18CZ 288536 B6
528 TCT CGT Ser Arg TTA Leu AAC TCT Asn Ser 180 AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu 190 Val Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT AAG GCT TGG CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC TTC
Val Lys Ala Trp Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe
370 375 380
1152 GAA GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
G1U Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
385 390
-19CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 2
Délka: 1182 BP,393 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M25 (pSJ102)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met Ser Lys Thr Cys Tyr Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
1 5
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-20CZ 288536 B6
528 TCT CGT TTA AAC TCT Ser AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Ser Arg Leu Asn 180 Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val 190 Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys G1U Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ΑΤΓ GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT AAG GCT TTC CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC TTC
Val Lys Ala Phe Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe
370 375 380
1152 GAA GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
385 390
-21CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 3
Délka: 1182 BP, 393 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M26 (pSJl 03)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-22CZ 288536 B6
528 TCT Ser CGT TTA AAC TCT AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Arg Leu Asn 180 Ser Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val Glu 190
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GIT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT GTA GTT TTC CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC TTC
Val Val Val Phe Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe
370 375 380
1152 GAA . GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
Glu G1U ile Pro G1U Glu Tyr Leu Gin
385 393
-23CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 4
Délka: 1182 BP, 393 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M27 (pSJ104)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly 15 Lys
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT .CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-24CZ 288536 B6
528 TCT CGT Ser Arg TTA Leu AAC TCT Asn Ser 180 AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu 190 Val Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT GAA GTT TTC CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC TTC
Val Glu Val Phe Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe
370 375 380
1152 GAA GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
385 390
-25CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 5
Délka: 1182 BP, 393 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M28 (pSJ 105)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 , 170 175
-26CZ 288536 B6
528 TCT CGT Ser Arg TTA Leu AAC TCT Asn Ser 180 AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val Glu 190
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Meť Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT GTA GTT GTA GTG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC TTC
Val Val Val Val Val Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe
370 375 380
1152 GAA GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
385 390
-27CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 6
Délka: 1191 BP,396AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M29 (pSJ106)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC ΆΆΑ ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met Ser Lys Thr Cys Tyr Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
1 5
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Přo Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-28CZ 288536 B6
528 TCT CGT TTA AAC TCT Ser AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Ser Arg Leu Asn 180 Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val 190 Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp iyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 32Ó
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT GTT GCT TTC CCG CGG CCG TTC CTG CTG CGG AAC CCG AAC GAC AAA
Val Val Ala Phe Pro Arg Pro Phe Leu Leu Arg Asn Pro Asn Asp Lys
370 375 380
1152 TAC GAA CCG TTC TGG GAA GAC GAA GAA AAA AAC GAA TAA
Tyr Glu Pro Phe Trp Glu Asp Glu Glu Lys Asn Glu
385 390 395
-29CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 7
Délka: 1182 BP, 393 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineami
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M30 (pSJ109)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lya Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly 15 Lys
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Aap Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-30CZ 288536 B6
528 TCT CGT Ser Arg TTA Leu AAC TCT Asn Ser 180 AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val Glu 190
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Qly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC GTG
Trp Ile Arg Seř His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Leu
355 360 365
1104 GIT GTT GCT TTC CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC TTC
Val Val Ala Phe Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe
370 375 380
1152 GAA GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
385 390
-31CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 8
Délka: 1182 BP, 393 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M31 (pSJl 11)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 .125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-32CZ 288536 B6
528 TCT CGT TTA AAC TCT Ser AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Ser Arg Leu Asn 180 Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val 190 Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC GTG
Trp ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Leu
355 360 365
1104 GTT AAA GCT TTC CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC TTC
Val Lys Ala Phe Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe
370 375 380
1152 GAA GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
Glu Glu ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
385 390
-33CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 9
Délka: 1167 BP, 388 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M33 (pSJl 13)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG Met 1 AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT
Ser Lys Thr Cys 5 Tyr Glu Gly Asn Gly His Phe 10 Tyr Arg
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu val
65 70 75
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser
85 90
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr
145 150 155
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu
165 170
GGT AAG Gly Lys 15
TCT GCT Ser Ala
TTG CAG Leu Gin
CGT CGT Arg Arg
CAG GAA
Gin Glu 80
CCG CCG Pro Pro 95
CGT TTT Arg Phe
TGG -TTC Trp Phe
GTT TGC Val Cys
CAC TGC His Cys
160
GGC CGT
Gly Arg
175
-34CZ 288536 B6
528 TCT CGT Ser Arg TTA Leu AAC TCT Asn Ser 180 AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val 190 Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp ile Ala Leu Leu Lys ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
G1U Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG TTC CCG
Trp ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Phe Pro
355 360 365
1104 CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC TTC GAA GAA ATC CCG GAA
Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe G1U Glu Ile Pro Glu
370 375 380
1152 GAA TAC CTG CAA TAA
Glu Tyr Leu Gin
385
-35CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 10
Délka: 1191 BP,396AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M32 (pSJl 14)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-36CZ 288536 B6
528 TCT CGT Ser Arg TTA Leu AAC TCT AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Asn Ser Asn 180 Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu 190 Val Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT AAG GCT TTC CCG CGG CCG TTC CTG CTG CGG AAC CCG AAC GAC AAA
Val Lys Ala Phe Pro Arg Pro Phe Leu Leu Arg Asn Pro Asn Asp Lys
370 375 380
1152 TAC GAA CCG TTC TGG GAA GAC GAA GAA AAA AAC GAA TAA
Tyr Glu Pro Phe Trp Glu Asp Glu Glu Lys Asn Glu
385 390 395
-37CZ 288536 B6
Sekv.IDč. 11
Délka: 1101 BP, 366 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M4 (pSJ41)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Xle Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Sér Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-38CZ 288536 B6
TCT CGT TTA AAC TCT AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Ser Arg Leu Asn Ser Asn Thr Gin Gly Glu Met Lys Phe Glu Val Glu
180 185 190
AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys G1U Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Seř His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu (tys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu
355 360 365
Sekv. IDč. 12
Délka: 1185 BP, 394 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein Mil (pSJ69)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-40CZ 288536 B6
528 TCT CGT TTA AAC TCT AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Ser Arg Leu Asn 180 Ser Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val 190 Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys. Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr ASp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 CCG TCT CCG CCG GGT GGT TTC CCG CGT CCG GGT GGT GGT GGT AAC GGT
Pro Ser Pro Pro Gly Gly Phe Pro Arg Pro Gly Gly Gly Gly Asn Gly
370 375 380
1152 GAC TTC GAA GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG TAA
Asp Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu
385 390
-41CZ 288536 B6
Sekv.IDČ. 13
Délka: 1176BP, 391 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M12 (pSJ76)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys 5 Tyr Glu Gly Asn Gly His Phe Tyr Arg Gly Lys
10 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Mét Gly Arg Pro Cys Leu Pro TiP Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 17Q 175
-42CZ 288536 B6
528 TCT CGT TTA AAC TCT Ser AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Ser Arg Leu Asn 180 Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val 190 Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ÁTC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT AAG GCT TTC CCG AGG CCT GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC TTC GAA
Val Lys Ala Phe Pro Arg Pro Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe Glu
370 375 380
1152 GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG TGA
Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu
385 390
-43CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 14
Délka: 1194BP, 397 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M13 (pSJ77)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met Ser Lys Thr Cys Tyr Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
1 5
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC OTT TAC CTC GGC CGT
Phe ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-44CZ 288536 B6
528 TCT CGT Ser Arg TTA Leu AAC TCT Asn Ser 180 AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val Glu 190
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu iyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 CCG AGC CCG CCG AGC CCG CCG GGT GGT TTC CCG AGG CCT GGT GGT GGT
Pro Ser Pro Pro Ser Pro Pro Gly Gly Phe Pro Arg Pro Gly Gly Gly
370 375 380
1152 GGT AAC GGT GAC TTC GAA GAA ATC CCG GAA GAG TAC CTG TGA
Gly Asn Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu
385 390 395
-45CZ 288536 B6
Sekv. IDč. 15
Délka: 1176 BP, 391 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M14 (pSJ78)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-46CZ 288536 B6
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-47CZ 288536 B6
Sekv. IDč. 16
Délka: 1197 BP, 398 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein Ml5 (pSJ79)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
G1U Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-48CZ 288536 B6
528 TCT CGT TTA AAC TCT Ser AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Ser Arg Leu Asn 180 Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val Glu 190
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile 195 Leu His Lys Asp Tyr 200 Ser Ala Asp Thr Leu 205 Ala His His
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp 210 Ile Ala Leu Leu Lys 215 Ile Arg Ser Lys Glu 220 Gly Arg Cys Ala
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin 225 Pro Ser Arg Thr Ile 230 Gin Thr Ile Cys Leu 235 Pro Ser Met Tyr Asn 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly 245 Thr Ser Cys Glu Ile 250 Thr Gly Phe Gly Lys 255 Glu
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr 260 Leu Tyr Pro Glu 265 Gin Leu Lys Met Thr 270 Val Val
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile 275 Ser His Arg Glu Cys 280 Gin Gin Pro His Tyr 285 Tyr Gly Ser
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val 290 Thr Thr Lys Met Leu 295 Cys Ala Ala Asp Pro 300 Gin Trp Lys Thr
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp 305 Ser Cys Gin Gly Asp 310 Ser Gly Gly Pro Leu 315 Val Cys Ser Leu Gin 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu 325 Thr Gly Ile val Ser 330 Trp Gly Arg Gly Cys 335 Ala
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys 340 Pro Gly Val Tyr Thr 345 Arg Val Ser His Phe 350 Leu Pro
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg 355 Ser His Thr Lys Glu 360 G1U Asn Gly Leu Ala 365 Leu Ser Pro
1104 CCG AGC CCG CCG AGC CCG CCG GGT GGT TTC GGT CCG AGG CCT GGT GGT
Pro Ser 370 Pro Pro Ser Pro Pro 375 Gly Gly Phe Gly Pro 380 Arg Pro Gly Gly
1152 GGT Gly GGT Gly AAC Asn GGT GAC Gly Asp TTC Phe GAA Glu GAA ATC Glu Ile CCG Pro GAA Glu GAG Glu TAC Tyr CTG Leu TGA
385 390 395
-49CZ 288536 B6
Sekv. IDč. 17
Délka: 1185 BP, 394 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein Ml6 (pSJ81)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATC AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
nn ισκ
-50CZ 288536 B6
528 TCT CGT TTA AAC TCT AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Ser Arg Leu Asn 180 Ser Asn Thr Gin Gly Glu Met Lys Phe Glu Val Glu
185 190
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys G1U Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 . GTT AAG GCT TGG GGA CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC
Val Lys Ala Trp Gly Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp
370 375 380
1152 ! TTC GAA . GAA , ATC CCG GAA . GAA . TAC CTG CAA TAA
Phe G1U Glu ile Pro Glu Glu . Tyr Leu Gin
385 390
-51CZ 288536 B6
Sekv.IDč. 18
Délka: 1185 BP, 394 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M17 (pSJ83)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met Ser Lys Thr Cys Tyr G1U Gly Asn Gly His Phe Tyr Arg Gly Lys
1 5 10 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Glý Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-52CZ 288536 B6
528 TCT CGT TTA AAC Ser Arg Leu Asn 180 TCT AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA Phe Glu Val Glu 190
Ser Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT AAG GCT TTC GGA CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC
Val Lys Ala Phe Gly Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp
370 375 380
1152 : ttc GAA GAA . ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
385 390
-53CZ 288536 B6
Sekv.IDč. 19
Délka: 1185 BP, 394 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein Ml8 (pSJ90)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile G1U Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-54CZ 288536 B6
528 TCT CGT TTA AAC TCT Ser AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Ser Arg Leu Asn 180 Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu Val Glu 190
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT CGG GCT TTC GGA CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC
Val Arg Ala Phe Gly Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp
370 375 380
1152 TTC GAA GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
3Θ5 390
-55CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 20
Délka: 1185 BP, 394 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M19 (pSJ91)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 G1U Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys HÍS Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin G1U
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg HÍ3 Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-56Cl 288536 B6
528 TCT CGT Ser Arg TTA Leu AAC TCT Asn Ser 180 AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu 190 Val Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT AAG GCT TAC GGA CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC
Val Lys Ala Tyr Gly Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp
370 375 380
1152 TTC GAA GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
385 390
-57CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 21
Délka: 1185 BP, 394 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M20 (pSJ92)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met Ser Lys Thr Cys Tyr Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
1 5
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-58CZ 288536 B6
528 TCT CGT TTA AAC Asn 180 TCT AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Ser Arg Leu Ser Asn Thr Gin Gly Glu 185 Met Lys Phe Glu 190 Val Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT GTT GCT TTC GGA CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC
Val Val Ala Phe Gly Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp
370 375 380
1152 TTC GAA GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA . TAA
Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
385 390
-59CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 22
Délka: 1182 BP, 393 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M21 (pSJ93)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen io
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met Ser Lys Thr Cys Tyr Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
1 5
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr Val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu Glu Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu ile Ser Pro Cys Trp Val ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp Tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-60CZ 288536 B6
528 TCT CGT Ser Arg TTA Leu AAC TCT Asn Ser 180 AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Asn Thr Gin Gly 185 Glu Met Lys Phe Glu 190 Val Glu
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr Ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys G1U
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val Val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
Glu Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT CGG GCT TTC CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC TTC
Val Arg Ala Phe Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe
370 375 380
1152 GAA GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
385 390
-61CZ 288536 B6
Sekv. ID č. 23
Délka: 1182 BP, 393 AK
Typ: sekvence nukleotidů společně s odpovídající sekvencí aminokyselin
Topologie: lineární
Druh molekuly: syntetický gen pro protein M22 (pSJ94)
Zvláštnost: N-terminální methionin byl v Escherichia coli proteolyticky odštěpen
1 ATG AGC AAA ACT TGC TAC GAA GGT AAC GGT CAC TTC TAC CGT GGT AAG
Met 1 Ser Lys Thr Cys Tyr 5 Glu Gly Asn Gly 10 His Phe Tyr Arg Gly Lys 15
48 GCT TCT ACC GAC ACC ATG GGT CGT CCG TGC CTG CCG TGG AAC TCT GCT
Ala Ser Thr Asp Thr Met Gly Arg Pro Cys Leu Pro Trp Asn Ser Ala
20 25 30
96 ACC GTT CTG CAG CAG ACC TAC CAC GCT CAC CGT TCT GAT GCA TTG CAG
Thr Val Leu Gin Gin Thr Tyr His Ala His Arg Ser Asp Ala Leu Gin
35 40 45
144 CTG GGT CTG GGT AAA CAC AAC TAC TGC CGT AAC CCG GAC AAC CGT CGT
Leu Gly Leu Gly Lys His Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Arg Arg
50 55 60
192 CGT CCG TGG TGC TAC GTT CAG GTT GGT CTG AAA CCG CTA GTT CAG GAA
Arg Pro Trp Cys Tyr val Gin Val Gly Leu Lys Pro Leu Val Gin Glu
65 70 75 80
240 TGC ATG GTT CAC GAC TGC GCT GAC GGT AAA AAA CCG TCT TCT CCG CCG
Cys Met Val His Asp Cys Ala Asp Gly Lys Lys Pro Ser Ser Pro Pro
85 90 95
288 GAA GAG CTC AAA TTC CAG TGC GGT CAA AAA ACC CTA CGT CCG CGT TTT
Glu G1U Leu Lys Phe Gin Cys Gly Gin Lys Thr Leu Arg Pro Arg Phe
100 105 110
336 AAA ATC ATC GGT GGT GAG TTC ACC ACC ATC GAA AAC CAG CCG TGG TTC
Lys Ile Ile Gly Gly Glu Phe Thr Thr Ile Glu Asn Gin Pro Trp Phe
115 120 125
384 GCT GCT ATC TAC CGT CGT CAC CGT GGT GGT TCT GTT ACC TAC GTT TGC
Ala Ala Ile Tyr Arg Arg His Arg Gly Gly Ser Val Thr Tyr Val Cys
130 135 140
432 GGT GGT TCT CTG ATC TCT CCG TGC TGG GTT ATC TCT GCT ACC CAC TGC
Gly Gly Ser Leu Ile Ser Pro Cys Trp Val Ile Ser Ala Thr His Cys
145 150 155 160
480 TTC ATC GAC TAC CCG AAA AAA GAA GAC TAC ATC GTT TAC CTC GGC CGT
Phe Ile Asp Tyr Pro Lys Lys Glu Asp tyr Ile Val Tyr Leu Gly Arg
165 170 175
-62CZ 288536 B6
528 TCT CGT TTA AAC Asn 180 TCT Ser AAC ACC CAG GGT GAA ATG AAA TTC GAA GTT GAA
Ser Arg Leu Asn Thr Gin Gly Glu Met Lys Phe Glu Val Glu
185 190
576 AAC CTG ATC CTG CAC AAA GAC TAC TCT GCT GAC ACC CTG GCT CAC CAC
Asn Leu Ile Leu His Lys Asp Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Ala His His
195 200 205
624 AAC GAC ATC GCT CTG CTA AAA ATC CGT TCT AAA GAA GGT CGT TGC GCT
Asn Asp Ile Ala Leu Leu Lys Ile Arg Ser Lys Glu Gly Arg Cys Ala
210 215 220
672 CAG CCG TCT CGT ACC ATC CAG ACC ATC TGC CTG CCG TCT ATG TAC AAC
Gin Pro Ser Arg Thr ile Gin Thr Ile Cys Leu Pro Ser Met Tyr Asn
225 230 235 240
720 GAC CCG CAG TTC GGT ACC TCT TGC GAA ATC ACC GGT TTC GGT AAA GAA
Asp Pro Gin Phe Gly Thr Ser Cys Glu Ile Thr Gly Phe Gly Lys Glu
245 250 255
768 AAC TCT ACC GAC TAC CTG TAC CCG GAA CAG CTG AAA ATG ACC GTT GTT
Asn Ser Thr Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gin Leu Lys Met Thr Val val
260 265 270
816 AAA CTG ATC TCT CAC CGT GAA TGC CAG CAG CCG CAC TAC TAC GGT TCT
Lys Leu Ile Ser His Arg Glu Cys Gin Gin Pro His Tyr Tyr Gly Ser
275 280 285
864 GAA GTT ACC ACC AAA ATG CTG TGC GCT GCT GAC CCG CAG TGG AAA ACC
G1U Val Thr Thr Lys Met Leu Cys Ala Ala Asp Pro Gin Trp Lys Thr
290 295 300
912 GAC TCT TGC CAA GGT GAC TCT GGT GGT CCA CTA GTT TGC TCT CTC CAG
Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Ser Leu Gin
305 310 315 320
960 GGT CGT ATG ACC CTG ACC GGT ATT GTT TCT TGG GGT CGT GGT TGC GCT
Gly Arg Met Thr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Arg Gly Cys Ala
325 330 335
1008 CTG AAA GAC AAA CCG GGT GTT TAC ACC CGT GTT TCT CAC TTC CTG CCG
Leu Lys Asp Lys Pro Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser His Phe Leu Pro
340 345 350
1056 TGG ATC CGT TCT CAC ACC AAA GAA GAA AAC GGT CTG GCT CTG AGC CCG
Trp Ile Arg Ser His Thr Lys Glu Glu Asn Gly Leu Ala Leu Ser Pro
355 360 365
1104 GTT GTT GCT TTC CCG CGG CCG CTG GGT GGT GGT GGT AAC GGT GAC TTC
Val Val Ala Phe Pro Arg Pro Leu Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe
370 375 380
1152 : GAA . GAA ATC CCG GAA GAA TAC CTG CAA TAA
Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin
385 390

Claims (17)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Bifunkční varianty urokinázy obecného vzorce I
    M4-XJ-Y, (I), ve kterém
    M4 značí aminokyselinovou sekvenci 47Ser až 411Leu glykosidu zbavené prourokinázy podle obr. 1,
    Xi značí přímou vazbu mezi M4 a Yi nebo peptid o sekvenci
    Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Pro-Gly-Gly-Phe nebo
    Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Pro-Gly-Gly-Phe nebo
    Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Pro-Gly-Gly-Phe-Gly nebo peptidovou sekvenci obecného vzorce II
    Ser-Xz-Xj-X^Xj-Xfi-Xy (II), přičemž
    X2 značí Pro nebo Leu,
    X3 značí Val nebo Pro,
    X4 značí Lys, Val, Arg, Gly nebo Glu,
    X5 značí Ala, Val, Gly, Leu nebo Ile,
    X6 značí Phe, Trp, Tyr nebo Val a
    X7 značí Gly nebo přímou vazbu mezi Xe a Yj a
    Yi značí peptid sekvence
    Yz-Arg-Pro-Yj-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-GluTyr-Leu-Yí nebo
    Yr-Arg-Pro-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn-Pro-Asn-Asp-Lys-Tyr-Glu-Pro-Phe-TrpGlu-Asp-Glu-Glu-Lys-Asn-Glu nebo
    Yr-Arg-Pro-Ser-Ser-Glu-Phe-Glu-Glu-Phe-Glu-Ile-Asp-Glu-Glu-Glu-Lys, přičemž
    -64CZ 288536 B6
    Y2 značí Pro nebo Val,
    Y3 značí Leu nebo přímou vazbu mezi Pro a Gly a
    Y4 značí Gin nebo hydroxylovou skupinu.
  2. 2. Bifunkční varianty urokinázy podle nároku 1 obecného vzorce I, kde
    Yi značí peptid sekvence
    Y2-Arg-Pro-Y3-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-GluTyr-Leu-Y4, přičemž Y2 a Y4 mají v nároku 1 uvedený význam.
  3. 3. Bifunkční varianty urokinázy podle nároku 1 obecného vzorce I, kde
    Yi značí peptid sekvence
    Y2-Arg-Pro-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn-Pro-Asn-Asp-Lys-Tyr-Glu-Pro-Phe-TrpGlu-Asp-Glu-Glu-Lys-Asn-Glu, přičemž Y2 má v nároku 1 uvedený význam.
  4. 4. Bifunkční varianty urokinázy podle nároku 1 a/nebo 2 obecného vzorce I, kde
    X] značí peptidovou sekvenci obecného vzorce II
    Ser-Xr-Xy-Xr-Xr-Xe-X? (II), ve kterém
    X2 značí Pro nebo Leu,
    X3 značí Val,
    X4 značí Lys, Val nebo Arg,
    X5 značí Ala, Val nebo Gly,
    X6 značí Phe, Trp, Tyr nebo Val a
    X7 značí Gly nebo přímou vazbu mezi X6 a Y].
  5. 5. Bifunkční varianty urokinázy podle nároku 4 obecného vzorce I, kde
    X4 značí Lys nebo Val,
    X5 značí Ala nebo Val,
    X6 značí Phe, Trp nebo Tyr a
    X7 značí Gly nebo přímou vazbu mezi X6 a Y].
  6. 6. Bifunkční varianty urokinázy podle nároku 4 a/nebo 5 obecného vzorce I, kde
    X7 značí přímou vazbu mezi Xe a Yi.
  7. 7. Bifunkční varianty urokinázy podle nároku 1 a/nebo 3 obecného vzorce I, kde Xi značí peptidovou sekvenci obecného vzorce II, ve kterém
    X2 značí Pro nebo Leu,
    X3 značí Val,
    X» značí Lys nebo Val,
    X5 značí Ala nebo Val,
    X6 značí Phe nebo Trp a
    -65CZ 288536 B6
    X7 značí přímou vazbu mezi Xg a Y].
  8. 8. Plazmidy pro použití při získávání bifunkčních variant urokinázy podle nároků 1 až 7, u kterých operon má regulovatelný promotor, Shine-Dalgamo sekvenci účinnou jako vazebné místo pro ribozomy, startovací kodon, syntetický strukturní gen se sekvencemi ID č. 1 až 24 pro bifunkční varianty urokinázy obecné vzorce I podle nároků 1 až 7 a dále od strukturního genu jeden nebo dva terminátory, přičemž tyto plazmidy jsou vhodné pro expresi bifunkčních variant urokinázy ve kmenech Escherichia coli.
  9. 9. Plazmidy podle nároku 8, u kterých odstup mezi Shine-Dalgamo-sekvencí a startovacím kodonem činí 6 až 12, výhodně 8 až 10 nukleotidů.
  10. 10. Plazmidy podle nároku 8 a/nebo 9, které jsou vybrané ze skupiny, zahrnující pSJ 69 podle obr. 2e, pSJ 76 podle obr. 2h, pSJ 77 podle obr. 2h, pSJ 78 podle obr. 2h, pSJ 79 podle obr. 2h, pSJ 81 podle obr. 2j, pSJ 83 podle obr. 21, pSJ 90 podle obr. 21, pSJ 91 podle obr. 21, pSJ 92 podle obr. 21, pSJ 93 podle obr. 21, pSJ 94 podle obr. 21, pSJ 95 podle obr. 21, pSJ 101 podle obr. 21, pSJ 102 podle obr. 21, pSJ 103 podle obr. 21, pSJ 104 podle obr. 21, pSJ 105 podle obr. 21, pSJ 106 podle obr. 2o, pSJ 109 podle obr. 21, pSJ 111 podle obr. 21, pSJ 114 podle obr. 2n a pSJ 113 podle obr. 2p.
  11. 11. Plazmidy podle nároku 10, které jsou vybrané ze skupiny, zahrnující pSJ 76 podle obr. 2h, pSJ 81 podle obr. 2j, pSJ 83 podle obr. 21, pSJ 90 podle obr. 21, pSJ 91 podle obr. 21, pSJ 92 podle obr. 21, pSJ 93 podle obr. 21, pSJ 94 podle obr. 21, pSJ 95 podle obr. 21, pSJ 101 podle obr. 21, pSJ 102 podle obr. 21, pSJ 103 podle obr. 21, pSJ 105 podle obr. 21, pSJ 106 podle obr. 2o, pSJ 109 podle obr. 21, pSJ 111 podle obr. 21 a pSJ 114 podle obr. 2n.
  12. 12. Plazmidy podle nároků 10 a/nebo 11, které jsou vybrané ze skupiny, zahrnující pSJ 76 podle obr. 2h, pSJ 81 podle obr. 2j, pSJ 83 podle obr. 21, pSJ 91 podle obr. 21, pSJ 92 podle obr. 21, pSJ 94 podle obr. 21, pSJ 95 podle obr. 21, pSJ 101 podle obr. 21, pSJ 102 podle obr. 21, pSJ 103 podle obr. 21, pSJ 105 podle obr. 21, pSJ 106 podle obr. 2o, pSJ 109 podle obr. 21, pSJ 111 podle obr. 21 a pSJ 114 podle obr. 2n.
  13. 13. Plazmidy podle jednoho nebo několika z nároků 10 až 12, které jsou vybrané ze skupiny, zahrnující pSJ 76 podle obr. 2h, pSJ 94 podle obr. 21, pSJ 95 podle obr. 21, pSJ 101 podle obr. 21, pSJ 102 podle obr. 21, pSJ 103 podle obr. 21, pSJ 106 podle obr. 2o, pSJ 109 podle obr. 21, pSJ 111 podle obr. 21 a pSJ 114 podle obr. 2n.
  14. 14. Plazmidy podle nároků 8 až 13, vyrobitelné z plazmidů pBlueskript KS II+, pUC 8 a pGR 201 podle obr. 2 a 2a až 2p.
  15. 15. Způsob výroby bifunkčních variant urokinázy obecného vzorce I podle nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že se plazmidem podle nároků 8 až 13 transformuje kmen Escherichia coli, indukuje se exprese strukturního genu, vytvořený předstupeň proteinu bifunkční varianty urokinázy obecného vzorce I se z média a lýzovaných bakteriálních buněk oddělí, tento předstupeň proteinu se solubilizuje a potom se působením redox systému převede na bifunkční variantu urokinázy obecného vzorce I.
  16. 16. Trombolytikum, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou látku bifunkční variantu urokinázy obecného vzorce I podle nároků 1 až 7.
  17. 17. Trombolytikum podle nároku 16 pro bolusaplikaci.
CZ19941706A 1993-07-15 1994-07-14 Bifunkční varianty urokinázy se zlepšenými fibrinolytickými vlastnostmi a s trombininhibičním účinkem, plazmidy pro jejich získávání, způsob jejich výroby a trombolytika tyto látky obsahující CZ288536B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4323754A DE4323754C1 (de) 1993-07-15 1993-07-15 Bifunktionelle Urokinasevarianten mit verbesserten fibrinolytischen Eigenschaften und thrombinhemmender Wirkung

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ170694A3 CZ170694A3 (en) 1995-02-15
CZ288536B6 true CZ288536B6 (cs) 2001-07-11

Family

ID=6492909

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19941706A CZ288536B6 (cs) 1993-07-15 1994-07-14 Bifunkční varianty urokinázy se zlepšenými fibrinolytickými vlastnostmi a s trombininhibičním účinkem, plazmidy pro jejich získávání, způsob jejich výroby a trombolytika tyto látky obsahující

Country Status (26)

Country Link
US (2) US5681721A (cs)
EP (1) EP0669394B1 (cs)
JP (1) JPH07143878A (cs)
KR (1) KR960014346A (cs)
CN (1) CN1057124C (cs)
AT (1) ATE189261T1 (cs)
AU (1) AU679512B2 (cs)
CA (1) CA2127897A1 (cs)
CZ (1) CZ288536B6 (cs)
DE (2) DE4323754C1 (cs)
DK (1) DK0669394T3 (cs)
ES (1) ES2145075T3 (cs)
FI (1) FI943354L (cs)
GR (1) GR3032488T3 (cs)
HR (1) HRP940366B1 (cs)
HU (1) HU217101B (cs)
IL (1) IL109107A0 (cs)
NO (1) NO941561L (cs)
NZ (1) NZ260991A (cs)
PL (1) PL176971B1 (cs)
PT (1) PT669394E (cs)
RU (1) RU2143490C1 (cs)
SI (1) SI0669394T1 (cs)
SK (1) SK281586B6 (cs)
UA (1) UA27132C2 (cs)
ZA (1) ZA944202B (cs)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4440892A1 (de) * 1994-11-17 1996-05-23 Gruenenthal Gmbh Proteine mit fibrinolytischen und gerinnungshemmenden Eigenschaften
DE4442665A1 (de) * 1994-11-30 1996-06-05 Gruenenthal Gmbh Chimäre Proteine mit fibrinolytischen und thrombinhemmenden Eigenschaften
CN1057125C (zh) * 1996-04-26 2000-10-04 南京大学 五种尿激酶变体基因及在大肠杆菌中的表达
CN1111739C (zh) * 1997-02-04 2003-06-18 许文俊 凝血、纤溶功能动态测定试剂
WO1999037149A1 (en) * 1998-01-27 1999-07-29 Brigham & Women's Hospital Methods of treating cytotoxic damage
US7498310B1 (en) * 1998-08-13 2009-03-03 Beiersdorf Ag Cosmetic or dermatological preparations comprising oligopeptides for lightening the skin of age marks and/or for preventing tanning of the skin, in particular tanning of the skin caused by UV radiation
WO2001097752A2 (en) * 2000-06-20 2001-12-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions comprising urokinase for modulating muscle contractility and angiogenisis
US7361493B1 (en) 2004-05-26 2008-04-22 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Veterans Affairs Production of urokinase in a three-dimensional cell culture
CN101094867B (zh) 2004-10-19 2011-08-24 隆萨股份公司 用于固相肽合成的方法
CN104193807B (zh) * 2014-09-28 2016-06-15 广州贝奥吉因生物科技有限公司 凝血酶抑制多肽及其制备方法、应用
CN105385617A (zh) * 2015-09-23 2016-03-09 河北省科学院生物研究所 一株产纤溶酶的海洋放线菌株、用途以及由其制备的纤溶酶及纤溶酶的应用
US11091535B2 (en) 2016-12-16 2021-08-17 The University Of Sydney Thrombin inhibitors for treatment of stroke and related coagulative disorders

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3930944A (en) * 1975-03-31 1976-01-06 Abbott Laboratories Urokinase production
DE3445517C2 (de) * 1984-12-13 1993-11-18 Ciba Geigy Für ein Hirudin-ähnliches Protein codierende DNA-Sequenz und Verfahren zur Herstellung eines Hirudin-ähnlichen Proteins
US4751180A (en) * 1985-03-28 1988-06-14 Chiron Corporation Expression using fused genes providing for protein product
US5002887A (en) * 1986-01-31 1991-03-26 Genetics Institute, Inc. Truncated thrombolytic proteins
EP0330700B1 (en) * 1987-08-19 1993-12-22 Sagami Chemical Research Center Human prourokinase-like polypeptide
DE3804600A1 (de) * 1988-02-13 1989-08-24 Basf Ag Mischung aus einer thrombolytisch wirkenden und einer antithrombotischen substanz
GB8822147D0 (en) * 1988-09-21 1988-10-26 Ciba Geigy Ag Pharmaceutically active combination
US5256770A (en) * 1990-04-09 1993-10-26 Schering Ag Oxidation resistant thrombomodulin analogs
CA2064231A1 (en) * 1989-07-20 1991-01-21 John M. Maraganore Combinations and methods for treating or preventing thrombotic diseases
GB8927722D0 (en) * 1989-12-07 1990-02-07 British Bio Technology Proteins and nucleic acids
US5328898A (en) * 1990-06-22 1994-07-12 Duke University Factor XIIIA fibrin binding fragments
GB9015369D0 (en) * 1990-07-12 1990-08-29 Erba Carlo Spa Amidated fibrinolytic enzymes and their precursors,and processes for their preparation
US5242810A (en) * 1990-12-07 1993-09-07 Biogen, Inc. Bifunctional inhibitors of thrombin and platelet activation
US5688768A (en) * 1991-02-19 1997-11-18 Cor Therapeutics, Inc. Recombinant thrombin receptor and related pharmaceuticals
WO1992018139A1 (en) * 1991-04-09 1992-10-29 Brigham And Women's Hospital Chimeric molecule with plasminogen activator activity and affinity for atherosclerotic plaques
US5376367A (en) * 1991-11-22 1994-12-27 Immunex Corporation Fusion proteins comprising MGF and IL-3
US5571708A (en) * 1993-04-19 1996-11-05 Bristol-Myers Squibb Company Thrombin-activatable plasminogen activator
RU2061043C1 (ru) * 1993-11-16 1996-05-27 Научно-производственная фирма "Нарт" Способ повышения устойчивости урокиназы к нагреванию

Also Published As

Publication number Publication date
CN1102438A (zh) 1995-05-10
SK84594A3 (en) 1995-03-08
DE4323754C1 (de) 1994-12-01
US5747291A (en) 1998-05-05
ZA944202B (en) 1995-02-08
EP0669394A1 (de) 1995-08-30
HRP940366B1 (en) 2001-02-28
SI0669394T1 (en) 2000-04-30
ATE189261T1 (de) 2000-02-15
FI943354A7 (fi) 1995-01-16
FI943354A0 (fi) 1994-07-14
AU6452594A (en) 1995-01-27
EP0669394B1 (de) 2000-01-26
FI943354L (fi) 1995-01-16
HK1010109A1 (en) 1999-06-11
GR3032488T3 (en) 2000-05-31
PT669394E (pt) 2000-07-31
HUT70579A (en) 1995-10-30
CA2127897A1 (en) 1995-01-16
HRP940366A2 (en) 1997-04-30
RU94026095A (ru) 1997-03-10
KR960014346A (ko) 1996-05-22
SK281586B6 (sk) 2001-05-10
PL176971B1 (pl) 1999-08-31
UA27132C2 (uk) 2000-02-28
NZ260991A (en) 1995-10-26
ES2145075T3 (es) 2000-07-01
HU217101B (hu) 1999-11-29
US5681721A (en) 1997-10-28
NO941561L (no) 1995-01-16
PL304290A1 (en) 1995-01-23
RU2143490C1 (ru) 1999-12-27
NO941561D0 (cs) 1994-04-28
IL109107A0 (en) 1994-06-24
JPH07143878A (ja) 1995-06-06
DE59409104D1 (de) 2000-03-02
HU9402063D0 (en) 1994-09-28
CZ170694A3 (en) 1995-02-15
CN1057124C (zh) 2000-10-04
AU679512B2 (en) 1997-07-03
DK0669394T3 (da) 2000-05-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI88932C (fi) Framstaellning av funktionellt maenskligt urokinasprotein
JP2529816B2 (ja) 新規なヒト組織プラスミノゲン活性化因子突然変異体
DK174236B1 (da) Fremgangsmåde til fremstilling af et protein som har human vævsplasminogenaktivatorfunktion, fremgangsmåde til fremstilling af et farmaceutisk præparat indeholdende proteinet, DNA-isolat, som koder for proteinet, rekombinante klonings- og ......
AU628854B2 (en) Pharmaceutically active combination
US5830849A (en) Vampire bat salivary plasminogen activators
EP0771211A4 (en) PREPARATIONS AND METHODS FOR THE ADMINISTRATION OF MEDICINAL PRODUCTS BY BLOOD PLATE FOR TREATING CARDIOVASCULAR DISEASES
US5747291A (en) Bifunctional urokinase variants with improved fibrinolytic characteristics and thrombin inhibiting effect
US5246850A (en) DNA molecules encoding human tissue plasminogen activator variants with decreased clearance, vectors, and host cells
JPH08231595A (ja) 繊維素溶解性のトロンビン阻害性質を有するキメラたん白質
DK175369B1 (da) Anvendelse af tPA-varianter til fremstilling af et terapeutisk præparat til behandling af vaskulæresygdomme
WO1989012681A1 (en) Tissue plasminogen activator analogues having improved activity
JPH08231594A (ja) 繊維素溶解性の血液凝固阻害性質を有するたん白質
CA2086835C (en) Tissue plasminogen activator variants with decreased clearance
JP2000504941A (ja) トロンビンによって活性化され得るプラスミノーゲンアクチベーター
HU211335A9 (en) New polipeptide compounds
HK1010109B (en) Bifunctional derivatives of urokinase with improved fibrinolytic activity and thrombin inhibiting activity
HK1010111A (en) Chimera proteins with fibrinolytic and coagulation inhibiting characteristics
MXPA99000966A (en) Plasminogen activator capable of being activated by thrombin
HK1010110A (en) Proteins with fibrinolytic and coagulation inhibiting characteristics

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20020714