CZ292297A3

CZ292297A3 - Dialkylethery obsahující koncové karboxyskupiny nebo tetrazolové skupiny

Info

Publication number: CZ292297A3
Application number: CZ972922A
Authority: CZ
Inventors: Charles Larry Bisgaier; Paul Leroy Creger; Alan Robert Saltiel; Sherrie Rae Tafuri
Original assignee: Warner-Lambert Company
Priority date: 1995-03-24
Filing date: 1996-02-05
Publication date: 1998-10-14
Also published as: NO974397D0; ZA962275B; FI973713A0; EE9700375A; GR3034109T3; BG63534B1; HK1009438A1; UA46020C2; DE69608268T2; US5783600A; PL181673B1; PL322407A1; AU4776896A; SK282897B6; KR100408612B1; NO307878B1; HUP9801825A3; EE03520B1; FI973713L; BG101993A

Description

(57) Anotace:

Dialkylethery mající koncové karboxyskupiny nebo tetrazolové skupiny, snižují Lp/a/, triílyceridy a zvyšují hladinu HDL-choleslerolu tak. že jsou použitelné při léčení vaskulárních onemocnění a neinzulínovč depenentního diabetes mellitus.

CZ 2922-97 A3 • · · · * · ·

0« · · ·· · · · · 0 · « ·

Díalkylethery obsahující koncové karboxyskupiny nebo tetrazolové skupiny

Oblast techniky

Vynález se týká dialkyletherů, majících koncové karboxyskupiny nebo tetrazolové skupiny. Tyto sloučeniny jsou použitelné při snižování určitých plazmových lipidů v těle zvířat včetně Lp(a), triglyceridů, VLDL-cholesterolu a LDL-cholesterolu a zvyšování hladiny dalších lipidů, například HDL-cholesterolu. Sloučeniny jsou účinné pří prevenci a léčení vaskulárních onemocnění a cukrovky, například zvýšením inzulínové senzítivity.

Dosavadní stav techniky

Vaskulární onemocnění, například koronární srdeční onemocnění, mrtvice, restenóza a periferní vaskulární onemocnění, si v celosvětovém měřítku zachovávají vedoucí postavení v počtu úmrtí a případů, končících invaliditou.

ττ^,-Γ. ' ' i ... H .1 ---1 ? 4 X _ ϊ i rt « 1 Ί i < _, , Ί i

UUli V υΟΛ U.ilLJ_J_d Λ- Cl zt wy ťjm _i_ / u nixxxuuu nu infarkt myokardu, který způsobuje městnavé poškození srdce, i když je pravda, že stravovací návyky a životní styl mohou urychlit nástup vaskulárních onemocnění, významným faktorem pro vývoj vaskulárního onemocnění, končícího trvalou invaliditou nebo smrtí, je geneticky daná predispozice způsobující dyslipidemii. „Dyslipidemíí se rozumí abnormální hladiny lipoproteinů v krevní plazmě.

Vážnými rizikovými faktory, které jsou spojovány se zvýšeným rizikem vzniku vaskulárních onemocnění, jsou, mimo « a • ·

jiné, dyslipidemie vysokých lipoproteinů (LDL) a nízkých lipoproteinů (HDL) . Poměr hladin nízkohustotního hladin vysokohustotních HDL-cholesterolu ku LDLcholesterolu je často používán k posouzení možného rizika vzniku vaskulárního onemocněni. Vzhledem k tomu, že je žádoucí vysoký poměr HDL/LDL, jsou sloučeniny, které tento poměr zvyšují buď snížením LDL nebo zvýšením HDL případně obojím způsobem vysoce žádané a přínosné. Nedávné studie ukázaly škodlivost vysokých hladin modifikované formy LDL, označované jako lipoprotein(a), „Lp(a).

Zdá se, že Lp(a) je nežádoucí, protože zvýšené hladiny Lp(a) jsou spojovány s vývojem aterosklerózy, koronárního srdečního onemocnění, infarktu myokardu, mrtvice, cerebrálního infarktu a restenózy po provedení balónového angioplastiky. Ve skutečnosti se zdá, že Lp(a) je vynikajícím faktorem pro předpověď vzniku mrtvice. Vysoké koncentrace cholesterolu ve formě Lp(a) jsou tedy jedním z nejdůležitějších rizikových faktorů pro vznik srdečních onemocnění s následkem smrti.

Nyní se zjistilo, že určité ethery jsou účinné při knncpnlrarí Τ,ρ I a) v olezme. Vvnález tedy poskytuje způsob snižování úrovní Lp(a) v plazmě, který zahrnuje podání dialkanového etheru nebo jeho esteru. Tyto typy sloučenin nebyly doposud používány pro léčení vaskulárního onemocnění. Patent US 3,320,079 například popisuje 3,3'-oxybis(2,2-dimethyxlpropionovou kyselinu) jako plastifikační činidlo. Patent US 3,930,024 zase popisuje řadu alkandíolů jako triglyceridů v séru. Patent

Lčnoxydlkčirioy s činidel pro US 3,674,836 sníženi popisuj e

X -1 -r -i 1 -i triglyceridů. Patent US 4,711,896 popisuje určité α,ω3 • « · dikarboxylové kyseliny jako činidla pro snižování koncentrace lipidů.

Cílem vynálezu je tedy poskytnout řadu díalkyletherů substituovaných karboxyskupinou, které jsou účinné při snižováni koncentrace Lp(a) v plazmě. Dalším cílem vynálezu je poskytnout farmaceutické formulace obsahující tyto sloučeniny a způsob léčení vaskulárních onemocnění za použití těchto sloučenin.

Podstata vynálezu

Jak již bylo uvedeno, vynález poskytuje nové chemické entity, charakterizované jako čialkylethery substituované karboxyskupinou nebo tetrazolovou skupinou a jejich sole a estery. Vynález poskytuje zejména sloučenin definované obecným vzorcem I

v '2

ve kterém n a m nezávisle znamenají celé číslo od 2 do 9;

Di, R₂, R₃ a R₄ nezávisle znamenají alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku; a Ri a R₂ společně s uhlíkem, na který jsou navázány, a R₃ a R₄ společně s uhlíkem, na který jsou v · • » /1 i

navázány, mohou tvořit karbocyklický kruh mající 3 až 5 atomy uhlíku;

Yi a Y₂ nezávisle znamenají karboxylovou skupinu, aldehydovou skupinu, tetrazolovou skupinu a COOR₅, ve které R₅ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, přičemž alkylová skupina, alkenylová skupina a alkinylové skupina mohou být substituovány jednou nebo dvěmi skupinami, zvolenými z halogenoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku a fenylové skupiny.

Výhodné sloučeniny podle vynálezu mají výše uvedený obecný vzorec, ve kterém n a m znamenají stejné celé číslo a Ri, Rs, Rs a R₄ znamenají alkylovou skupinu.

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou sloučeniny, ve kterých Y\ a Y₂ nezávisle znamenají karboxylovou skupinu nebo COOR₅, ve které R₅ znamená alkylovou skupinu.

Nejvýhodnějšími sloučeninami podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce

ve kterém n a m nezávisle znamenají celé číslo od 2 do 5, v ideálním případě 4 nebo 5.

Zvláště výhodnou sloučeninou je sloučenina obecného vzorce

Vynález rovněž poskytuje farmaceuticky přijatelné soli kyselin podle vynálezu.

Další provedení vynálezu představují farmaceutické kompozice obsahující sloučeninu obecného vzorce I společně s farmaceuticky přijatelným nosičem, ředidlem nebo masťovým základem.

Vynález rovněž poskytuje způsoby léčení vaskulárních onemocnění, například koronální srdeční onemocnění, mrtvíce, restenóza a periferní vaskulární onemocnění. Vynález poskytuje způsob snížení Lp(a), triglyceridů, vysokohustotního cholesterolu, nízkohustotního cholesterolu a apolipoproteinu B. Vynález dále poskytuje způsob zvýšení plazmového vysokohustotního lipoproteinového plazmových lipoproteinového (VLDL) lipoproteinového (LDL)

ÍHDTL chnlest eroln.

anolioonroteinu A-T ano! i onproteinu E. Vynález rovněž poskytuje způsob léčení a prevence neinzulínově-dependentního diabetes mellitus, jehož podstata spočívá ve zvýšení inzulínové senzitívity v podáním sloučeniny obecného vzorce I,

Sloučeniny podle vynálezu budou označeny jako alkanové kyseliny a estery. Například sloučenina obecného vzorce * »4 • · » « • · ·

CH, v

CH. ( ch₂ch,ch₃

OH bude nazvána jako kyselina pentanová, konkrétněji jako kyselina 2-methyl-2n-propyl-5-(3-methyl-3-hydroxykarbonyl) pentoxypentenová. Jak již bylo uvedeno výše, výhodnými sloučeninami jsou ty sloučeniny, ve kterých n a rn v obecném vzorci I znamenají stejné celé číslo a R_lř R₂, R₃a R₄ znamenají stejné alkylové skupiny. Pokud jak Y_x tak Y₂znamená karboxylovou skupinu, potom budou tyto sloučeniny označeny jako oxybisalkanové kyseliny. Výhodnou sloučeninu obecného vzorce

ve které n a m znamenají 4, lze například nazvat jako 6,6'oxybis(2,2-dímethylhexanovou kyselinu} .

tak, mohou znamenat „alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku. Tento výraz zahrnuje methylovou skupinu, ethylovou skupinu, ísopropylovou skupinu, terč.-butylovou skupinu, nhexylovou skupinu a 2-methylpentylovou skupinu. Tato alkylová skupina může být substituována halogenoskupinou, hydroxyskupinou, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku a fenylovou skupinou. Výraz „halogenoskupina, jak je zde použit, zahrnuje chloroskupinu, bromoskupinu a jodoskupinu. Výraz „alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku, jak je zde • ·

9 • * použit, znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, navázanou přes atom kyslíku, například ethoxyskupinu, isopropoxyskupinu, n-hexyloxyskupinu a pod.. Typickými substituovanými alkylovými skupinami jsou chlormethylová skupina, 3-hydroxyhexylová skupina, 4-fenylbutylová skupina, 2-jodopentylová skupina, isopropoxymethylová skupina a pod..

Ri, R-2/ R3 a R4 mohou rovněž znamenat alkenylovu skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku a substituovanou alkenylovou skupinu a alkinylovu skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku a substituovanou alkinylovou skupinu. Typickými skupinami jsou například vinylová skupina, 2-propenylová skupina, 3chloro-4-hexenylová skupina, 2-fenyl-3-pentenylová skupina, ethinylová skupina, 2-methoxyethinylová skupina, 2bromoethinylová skupina, 6-fenyl-3-hexinylová skupina a pod. .

Rj. a R₂ mohou v kombinací s atomem jsou navázány, tvořit karbocyklický cyklopropylový kruh, cyklobutylový kruh, a cyklopentylový kruh. Podobně R₃ a R₄atomem uhlíku, na kterém jsou karbocyklický kruh se 3 až 6 atomy cyklopropylový, cyklohexylový'a pod..

uhlíku, na kterém kruh, například cyklohexylový kruh mohou společně s navázány, tvořit uhlíku, například

Yi a Y₂ mohou v obecném vzorci i nezávisle znamenat COOR₅ skupinu, ve které R₅ znamená alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu nebo alkinylovu skupinu nebo substituovanou alkylovou skupinu, substituovanou alkenylovou skupinu nebo substituovanou alkinylovu skupinu. Tyto skupiny jsou ilustrovány výše v souvislosti s Ri, R₂, R3 a R4.

* · · *

Sloučeniny podle vynálezu, které mají alespoň jednu karboxylovou kyselinovou skupinu (tj. Yi nebo Y₂ znamená COOH), snadno tvoří farmaceuticky přijatelné soli uvedeném do reakce s organickou nebo anorganickou bází. Typickými bázemi, běžně používanými pro tyto účely, jsou hydroxid sodný, hydroxid draselný, uhličitan sodný, triethylamin, pyridin, amoniak a pod..

Typickými sloučeninami podle vynálezu jsou níže jmenované sloučeniny obecného vzorce

ve kterém

X X o o o o o o rn

X

O o

o o

+ rt

I o

o o

m

X o

o o

o

X o

o o

o o X X

X	X	+ w	►τ' ►*4	T> k-M	J—	X
o	o		O	O	O	o
o	o	o	o	o	o	o
o	o	o o	o	o	o	o

4-1 a

o o

o

H4 hts	X	X	X	X	TO 2:	X
O	o	o	o	o	M	o
o	o	o	o	o	o	o
o	o	o	o	o	o	o
	o				u

4-1

H

O o

O r—I >. i-4 O N rt 54 X ω x

X o

o o

X X X hd O O O ' O O O O o o o o

X X o o o o o o +

en

Jj

H ó

o o

f—I r4 >- >1 et

Od rn

X o

JJ 4-)

Μ H

X jJ

0) >.

X

O

M

Ό

ÍH

X i

CS rt m

L rtl <S

X M O X O C X

4-1 4J W H >1

X 54 O X X C

4J X^S “ ři o„S 5

X o

rd >t

X

4-1

Jj a

enyime x

a.

Od

0Í

ΓΊ

X

Jj 4J υ^ΗΗΰΰ rt m

OJ

X 54 O th en

X

O

1-4 >7* >_i m_, X ^nEudVun χ X x a}X7dOXXX_MO O ^M X G ^M v ° U O ^W H I ® X o

es te

X

Cel

V?

x X X X O x o U ' O O ^w O O rt Ή[ X m m d? mm., X x & ~ kh X m m 54

XXX

OO-4 >1 >! rt ω m mX

X o O «-4 o

I—f h rn en g X X

Oj

4J 4-1 a a í—4 >1 Čm o ft

CS X »4 u x M £ »S H w O B f «

X υ

(ΪΠΟΙΠ'ί^'ί'?'*

>

X

4-1 rt e

Ή c

rt <44 r4 >1

X rt rt X X Ή es mX X O o o

X >1 £ g g a a u

4J JJ e? LT Π LI '41 > CO <Jl ® CTl

• 4 • · • · ♦ • · · · · ·

Sloučeniny podle vynálezu se připravují za použití metodoligie, která je oblasti organické chemie známá. U typických syntéz se alkylhalogenid, substituovaný karboxyskupinou, uvede do reakce s alkoholem, substituovaným karboxyskupinou, v přítomnosti báze, což povede ke kondenzaci a vzniku sloučeniny podle vynálezu. Pro syntézu se zpravidla se používají karboxyestery, které poskytnou sloučeniny podle vynálezu, ve kterých jak Y_x tak Y₂ znamenají COOR5. Prosté zmýdelnění převede v případě potřeby jednu nebo obě esterové skupiny na volnou kyselinu. Níže uvedené reakční schéma ilustruje výše zmíněnou kondensační reakcí:

^Yi X

Λ (CHJ—halo HO-(CH₂) ς—7^ ^R! ^r2 ‘ R₃ R,

Výraz „-halo“ označuje například bromoskupinu, chloroskupinu, jodoskupinu a Yi a Y₂ znamenají výhodně COOR5, nicméně reakce bude probíhat stejně dobře, pokud budou Y_x a Y₂ nezávisle znamenat tetrazolylovou skupinu nebo CHO. Popsaná reakce se zpravidla provádí tak, že se nejprve uvede do reakce alkanol a přibližně ekvimolární množství báze, například hydridu sodného, nebo kovového sodíku, zpravidla v ínaktivním organickém rozpouštědle, například benzenu, toluenu, xylenu, tetrahydrofuranu a pod. . Tímto způsobem se připraví oxidová forma alkanolu, která se následně nechá snadno zreagovat s ekvimolárním množstvím alkylhalogenidem za vzniku sloučeniny podle vynálezu. Reakce je zpravidla v podstatě ukončena během přibližně 2 až 10 hodin, pokud se provádí za zvýšené • « • · teploty, tj. teploty přibližně 50°C až 120^eC. Sloučenina podle vynálezu se snadno izoluje prostým odstraněním reakčního rozpouštědla, například odpařením. Získaný produkt se může, pokud je to potřeba, dále čistit běžnými metodami, například krystalizací z rozpouštědel, jakými jsou například ethylacetát, benzen, hexan apod., nebo chromatograřícky, například přes silikagel.

Alternativní metodou pro přípravu sloučenin podle vynálezu je uvedení dialkyletheru; substituovaného halogenoskupinou, do reakce s a,a-disubstituovanou kyselinou octovou nebo esterem, ethanalem nebo methyltetrazolem. Tuto reakci ilustruje následující reakční schéma:

halo—(CH₂)—O—(CK₂) —halo + HC

R, R.

Y.

c— (CH₂) — o— (CK₂) —halo \

ro /

Y.

\

• ♦ • · ±2 • · · · • 4 *4 • 4 4 4 ·

Výše popsaný způsob se výhodně používá pro přípravu sloučenin podle vynálezu, ve kterých jsou R_x a R₂ stejné jako R₃ resp. R₄ a ve kterých jsou Yi a Y₂ stejné. V takovém případě se dialkylether, substituovaný halogenoskupinou, uvede do reakce se 2 ekvivalenty, nebo větším množstvím, derivátu kyseliny octové nebo tetrazolem, například sloučeninou

N-N

ch₃ ch₃

Reakce se zpravidla provádí v rozpouštědle, jakým je například tetrahydrofuran, dioxan, diethylether, a v přítomnosti báze, například hydridu sodného, kovového sodíku, butyllithia. reakce je zpravidla ukončena přibližně během 2 až 10 hodin, pokud se provádí při teplotě Q°C až 50°C. Produkt, tj . sloučenina podle vynálezu, se snadno izoluje odstraněním reakčního rozpouštědla, přičemž jeho další čištění lze v případě potřeby provádět běžnými metodami včetně chromatografie a krystalizace.

Kolikrát může být pro eliminování nežádoucích vedlejších reakcí žádoucí chránit některé reakční skupiny s odtržitelnými organickými radikály. Hydroxyskupiny a volné karboxyskupiny lze například derivatizovat radikály, které eliminují jejich schopnost zasáhnout do chemických reakcí, které probíhají, přičemž tento radikál snadno odstranit, pokud je žádoucí regenerovat volnou hydroxyskupinu nebo karboxyskupinu. Typické ochranné skupiny pro karboxyskupinu a hydroxyskupinu a způsoby jejich navázání a následného odtržení jsou plně popsány Greenem a Wirtsem v „Protective

00* 0 000 0*0000000 13 .·.····· ···

Groups in Organic Synthesis, 2. ed., John Wiley & Sons, lne., New York, NY, 1991. Hydroxyskupiny se na příklad snadno chrání převedením na o-benzylovou skupinu, kterou lze v případě potřeby snadno štěpit hydrogenolýzou. karboxyskupiny se zpravidla převádějí na estery, například para-mtrobenzylestery nebo 2,2, 2-trichloroethylestery. Tyto esterové skupiny jsou v případě potřeby snadno hydrolyzovatelné za vzniku volné karboxylové skupiny.

Jak bylo zmíněno výše, karboxylové kyseliny podle vynálezu snadno tvoří soli uvedením do reakce s anorganickou nebo organickou bází. Výhodnými solemi jsou anorganické soli připravené reakcí s bázemi, jakými jsou na příklad hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid vápenatý a pod.. Typickými organickými bázemi jsou například triethylamin, pyridin, methylamín a pod..

Následující podrobné příklady provedení vynálezu si dávají za cíl dále ilustrovat syntézu sloučenin podle vynálezu. Je třeba uvést, že tyto příklady mají pouze ilustrativní charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen přiloženými patentovými nároky.

* · · ·· · «

Ί ,1 X 1

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

6_, 6' -Oxybís (2,2-dimethylhexanová kyselina)

Do míchaného roztoku hydridu sodného (28 g 60% dispergovaného v minerálním oleji, 700 mmolů) v 600 ml suchého tetrahydrofuranu, obsahujícího 61 g (600 mmolů) diisopropylaminu, se přidalo 52,9 g (600 mmolů) kyseliny isobutyrové. Reakční směs se míchala 30 minut při 24 °C a následně ochladila na 0°C v ledovo-acetonové lázni. Do studeného roztoku se přidalo 286 ml 2,1M roztoku nbutyllithia (600 mmolů) a směs se míchala při 0°C 1 hodinu. Do studené míchané reakční směsi se po kapkách v průběhu 15 minut přidalo 59,7 g (297 mmolů) 4,4 '-dichlorobutyletheru. Směs se ohřála na 24°C a míchala dalších 48 hodin. Reakční směs se dále naředíla přidáním 600 ml vody. Vodná vrstva se separovala, promyla 200 ml diethyletheru a následně okyselila na pH 5,0 (Kongo červeň) přidáním přibližně 150 ml 6N kyseliny chlorovodíkové. Vodný kyselinový roztok se třikrát extrahoval 300 ml podíly diethyletheru. Etherové extrakty se sloučily, promyly solankou, sušily nad MgSCg a po odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku poskytly produkt ve formě oleje. Získaný olej se destiloval pří 160°C a tlaku přibližně 400 Pa a poskytl 66,7 g 6,6'oxybis(2,2-dimethylhexanové kyseliny), t.t. 49 až 51°C.

Elementární	analýza	(pro CieHaoOs)
	C	H
vypočteno:	63,47	9, 88
nalezeno:	63,75	10,00.

a · « v··· · · · · • · · « · « * ·»·· « • · · · « · · ·

Příklady 2 až 9

Způsobem, obecně popsaným v příkladu 1 se připravily následující sloučeniny:

7,7'-oxybis(2,2-dimethylheptanová kyselina),

5,5'-oxybis(2,2-dimethylpentanová kyselina),

4,4'-oxybis(2,2-dimethylbutanová kyselina),

8,8'-oxybis(2,2-dimethyloktanová kyselina), ethyl 2,2-dimethyl-5-(4-methyl-4-ethoxykarbonylpentyloxy)pentanoát, ethyl· 2,2-dimethyl-6-(5-methyl-5-ethoxykarbonylhexyloxy)hexanoát, methyl 2,2-dimethyl-8-(7-methyl-7-methoxykarbonyloktyloxy)oktanoát a kyselina 7-(4-methyl-4-hydroxykarbonylpentyloxy)-2,2dimethylheptanová.

Jak již bylo zmíněno výše, dialkylethery podle vynálezu jsou použitelné při léčeni a prevenci vaskulárních onemocnění, například koronální srdeční onemocnění, mrtvice, restenóza a periferní vaskulární onemocnění díky jejích sohupnusti snižovat koncentrace npoproteinu bohatého na triglycerid, například nízkohustotního lipoproteinového (LDL) cholesterolu v plazmě a zvyšovat koncentrace plazmového vysokohustotního lipoproteinového (HDL) cholesterolu. Sloučeniny podle vynálezu jsou účinné zejména při snižování Lp(a) a stejně tak při zvyšování HDLcholesterolu.

Schopnost dialkyletherových derivátů obecného vzorce I snižovat hladinu Lp(a) a zvyšovat hladinu HDL-cholesterolu, se stanovila v in vivo studiích, běžně používaných * « ·

i 6

odborníky v daném oboru. Studie na krysách se prováděli podle následujícího protokolu.

Z laboratoří Charles River Laboratories se získaly samečci Sprague-Dawleyovy krysy (100 až 200 g) , které se umístily po 3 až čtyřech zvířatech do klecí a dle chuti krmily krysím žrádlem Purina a vodou. V klecích se udržovala pokojová teplota a světelný režim, při kterém se po dvanácti hodinách střídalo světlo a tma, přičemž cyklus zahajovalo světlo v 6 hodin ráno. Krysám se denně mezi 6 a 9 hodinou ranní podávaly prostřednictvím žaludeční sondy testované sloučeniny, rozpuštěné nebo suspendované v 0,2% činidle Tween-20 a 1,5% karboxymethylcelulózovém (ve vodě) vehikulu nebo pouze ve vehikulu. jako referenční činidlo pro všechny studie se použily vehikulum v objemu, reprezentujícím 0,25% tělesné hmotnosti, a gemfibrozil (100 mg/kg/den).Testované sloučeniny se podávaly 7A ž 14 dní v dávce dosahující až 100 mg/kg/den. Krysy se bez předchozího půstu znecitlivěly inhalací etheru, zvážily, provedl se u nich srdeční odběr krve a podrobily se hepatikotomii, pomocí které se stanovila hmotnost jater jednotlivých zvířat. Odebraná krev se převedla do kyvet vakuLejneru, obsahující edta, s cílem izolovat krevní plazmu. Krev opic Cynomolgus se odebrala přímo do kyvet vakutejneru s cílem izolovat krevní sérum a plazmu.

Samečci opic Cynomolgus (macaca fascicularis] poskytly Charles River Laboratories (Wilmington, MA) a individuálně umístily do klece a krmily denní dietou, tvořenou 20 normálními opičími sušenkami (Ralston Purina, St. Louis, MO) a ovocem (1 banán a 12 vinných hroznů). Opice se umístily do omezovačů pohybu pro základní primáty (Primáte Products, Woodside, CA) a byl jim zaveden vaskulární • · · · · · · » · · · ·«·* « • β 4 * . · • · ft /

vstupní port (Norfolk Medical Products, Skokie, II) pro získání krevních vzorků. Účinky sloučeniny z příkladu 1 se studovaly v režimu rostoucích dávek. V průběhu tří týdnů se získaly od opic, upevněných ve fixačních křeslech, přes vaskulární porty tři předstudijní bazální krevní vzorky. Při studiích sloučeniny z příkladu 1 se opice fixovaly v křeslech a denně mezi 5 až 7 ranní jim byla orálním způsobem pomocí žaludeční sondy podávána dávka obsahující 3 mg/kg (1. týden), 10 mg/kg (2. týden) a 30 mg/kg (3. týden) sloučeniny z příkladu 1, suspendované v 0,2% povrchově aktivním činidle Tween-20 plus 1,5% karboxycelulózovém vehikulu. V průběhu studijní periody se zvířatům každý týden a to vždy 24 hodin po aplikaci dávky a na laČno odebraly krevní vzorky. Další krevní vzorky odebrané na lačno se získaly jeden týden po ukončení aplikací sloučeniny z příkladu 1. Konzumace potravy a chování pozorovaných zvířat bylo v průběhu celé studijní periody normální.

Vzorky opičí plazmy se udržovaly na ledu, rozdělily na podíly odpovídající množině kyvet mikrofúgy, rychle zmrazily a skladovaly při -70°C, Vzorky séra se před piuvedením níže popsané analýzy, Která mela urcrt přítomnost specifických enzymů nebo albuminu v krevním séru, se skladovaly při 4°C.

Analýza vzorků

Triglyceridy se určily za použití komerčně dostupné sady (Trigli-cinct2, Sclavo, Siena, Italy, nebo Tríglyceride G, Wako Pure Chemical Industries, Ltd; Osak, japan). Celkový obsah cholesterolů v plazmě se určil enzymatiky způsobem, popsaným Allainem a kol. v Clín.

i 8 « · · · · a· · · *··» * • · « · · · · · · ♦ ii ir *« e * «» ♦ ♦

Chem., 20:470-474 (1974). Celkové profily cholesterolových lipoproteinů v plazmě se určily post-sloupcovou vysoko výkonnou gelovou chromatografii (HPGC) analýzou na Superose 6 v reálném čase (on-line) na Rainin HPLC (víz Kieft a kol., J. Lipid Res., 32:859-866 (1991)). Lipoproteinový cholesterol se určil z celkově stanoveného cholesterolu a procentické plošné distribuce cholesterolu, stanoveného pomoci HPGC.

Apolipoprotein A-I a E se v celé plazmě kvantifikovaly pomoci raketové imunoelektroforézy metodou Laurella a kol., Methods Enzymol, 73:339-369 (1981) za použiti protilátek, vypěstovaných v těle králíka proti krysímu apo A-I, v těle kozy proti apo E (získáno od Dr Patrick Tso, LSU Medical Center, Shreveport, LA). Vzorky plazmy se před imunoelektroforézou naředily 4 M močovinou, 1% Tritonem X100, 12 mM Tricinem, 40 m Trisem, 0, 6 mM laktátem vápenatým, 0,01% azidem sodným, pH 8,2 60 minut při 52°C a inkubovaly. Pro stanoveni apolipoproteinů v lineárním rozmezí se provedla příslušná rozředění krysí plazmy. Imunoelektroforéza se prováděla na GelBond fólii (Cat 53748, FMC Bioproducts, Rockland, ME) zpravidla η ·ί L , i -i -í /-1 n η i r—Λ Q· ιΙπι-’Ί í-λ +- I _ l/Vi rn Ί —i ι\ 7\ _ T T\ <> l-\ f-\ 0 5- *7 Ί

U U. 1 i H J -U -i- '_A ‘•-A J U J. l. J--i- v> _v VA i ± k.. , k j- j J- VA -yj A _ -k. a a ·α> -ά- v — w · - -anti-krysí apo E antisérum v 1% agaróze, 2% polyethylenglykolu 6000 ve 24 mM Tricínu, 80 mM Trisu a 1,2 mM laktátu vápenatém. Výška rakety se určila na gelech zabarvených amidovou černí. Při vyhodnocování dat představovala hladina apolipoproteiny v plazmě, odebrané zvířatům kontrolních skupin, na stupnici hodnocení 100.

Krysí apo B se hodnotila v mikrotitrových plotnách s malými modifikacemi, popsanými Rifaiem a kol. v Clin. Chem., 32:957-961 (1980), tj. metodou používající • 44 y

» · · 1 ·« ·*

4 4*

4444 4

4 4 4

4 4· » · 4 1

44 protilátky myšího apo B, vypěstované v těle ovcí, která reaguje s krysím apo-B. Vzorky plazmy získané od pokusných zvířat (5, 10, 20 a 30 μΐ) nebo shromážděného krysího plazmového standardu (0 až 50 μΐ) se sloučily s 2 M močoviny, 10% ovčího anti-myšího apo B séra, 1,6% polyetny]englykolu 8000 (konečné koncentrace) v celkovém objemu 200 μΐ fosfátem pufrovaného solného roztoku. Po určení turbiditv (OD = 340 nm) následovala celonoční inkubace při pokojové teplotě za použití 96 jamkového absorbančního spektrofotometru Títertek Multiscan MCC/340MK II (Elow Laboratories). Pro stanovení apo B v lineárním rozmezí testu se použila vhodná rozředění krysí plazmy (zpravidla 10 μΐ). Při vyhodnocení dat se hladiny apo B v plazmě zvířat, ošetřených účinnou látkou, porovnala s hladinou, získanou od kontrolních zvířat, která pro účely experimentu tvořila odebrané zvířatům kontrolních skupin, na stupnici hodnocení 100.

Lp(a) hladiny u opic se hodnotily pomocí komerčně dostupné Lp(a) ELISA sady (Apo-Tek Lp(a) Elisa Test System, Organon Teknika, Biotechnology Research Institute), vyvinuté pro detekci lidského Lp(a). Lp(a) se kvantifikuje sendvičovou technikou, ve které se apo(a), zachycená antiapo(a) (potaženými mikrotitrovýmí plotnami), stanovila díky spojeni s apo B pomocí rozpuštěné enzymaticky navázané protilátky. Standardní křivky, sestrojené pro lidskou plazmu a plazmu opice cynomolgus, mohly být použity pro kvantifikování Lp(a) opice cynomolgus. V jednom testu se pro každý vzorek plazmy opic cynomolgus, který byl pouze jednou rozmražený, provedla vždy tři stanovení Lp(a) hodnoty.

U krys krmených žrádlem se provedlo srovnání potenciálních účinků gemfibrozilu s potenciálními účinky sloučeniny z příkladu 1 na celou řadu lipidových parametrů. Tato data reprezentují data shromážděná z několika samostatných jednotýdenních studii a jedné dvoutýdenní studie (N - 8 krys/skupinu) . Data pro každou studii se normalizovaly vzhledem k hodnotám, získaným pro krysy každé skupiny ošetřené vehikulem. Gemfíbrozil (100 mg/kg/den) neměl žádný vliv na apo A-I plazmy, jejíž hladina se většinou při aplikaci vyšších dávek sloučeniny z příkladu 1 zvýšila. Apo E se při aplikaci gemfibrozilu zvýšila pouze mírně, ale podstatně se zvýšila při aplikaci sloučeniny z příkladu 1, přičemž toto zvýšení odpovídalo velikosti dávky. Tato data byla zřejmější při jednotýdenních studiích (první týden, N = 30; druhý týden N = 8) a neodráží tedy podstatnější zvýšení apo E v plazmě, které bylo možné pozorovat při dvoutýdenní aplikaci gembrozilu. Jak gemfíbrozil, tak sloučenina z příkladu 1 podstatným způsobem redukují apo B. Tyto apolipoproteinové změny lze rovněž hodnotit jakou poměry apo E ku apo B nebo apo A-I ku apo B. Parametry pro plazmové lipidy včetně celkové hladiny cholesterolu, lipoproteinového cholesterolu a triglyceridů, jsou sloučeninou z příkladu 1 rovněž příznivě ovlivněny (obrázek 2). Celková hladina cholesterolu v plazmě se aplikací 100 mg/kg gemfibrozilu mírně snížila, zatímco aplikace sloučeniny z příkladu 1 tuto hladinu zvýšila dávkově dependentním způsobem. Tento vliv se odrazil zejména na zvýšení HDL-cholesterolu. Jak gemfíbrozil, tak sloučenina z příkladu 1 redukovaly VLDL- a LDL-cholesterol. Tyto účinky lze hodnotit jako poměr HDL-cholesterolu ku VLDL- a LDL-cholesterolu, zatímco 100 mg gemfibrozilu zvýší tento poměr na podobnou hladinu jako 10 mg sloučeniny z příkladu 1 (Ix až 2x) , vyšší hladiny (30 až 100 mg) sloučeniny z příkladu 1 dále zvyšují tento poměr a toto zvýšení, získané při nej vyšších koncentracích dosahuje až osmi- a devítinásobku. Jak gemfibrozil, tak sloučenina z příkladu 1 redukují triglyceridy v plazmě.

100 mg/kg/den 100 mg/kg/den

Pro charakterizaci lipoproteinových cholesterolových profilů u krys (obrázek 3) a opic cynomolgus ošetřených sloučeninou z příkladu 1 (obrázek 4) se použila vysokovýkonná gelové chromatografie (HPGC). Obrázek 3 znázorňuje lipoproteinové cholesterolové profily krys (8/skupinu) ošetřené samotným vehikulem, gemffbrozilu nebo 1, 3, 10, 30 nebo sloučeniny z příkladu 1 po dobu dvou týdnů. Pro každou krysu se charakterizoval vždy jeden profil. Všechny profily se vynesly ve stejném měřítku a profil první krysy kontrolní skupiny (vytečkovaný profil) se pro srovnání předřadil před profily krys testované skupiny. Profily skupiny ošetřené 100 mg/kg/den gemfibrozilu byly podobné profilům skupiny ošetřené 3 až 10 mg/kg/den sloučeniny z příkladu 1. Při předepsaných dávkách sloučeniny z příkladu 1 se účinky na lipoproteinový cholesterol dále zvyšovaly včetně redukce VLDL- a LDL-cholesterolu a zvýšení HDLcholesterolu .

HPGC se rovněž použila pro charakterizaci lipoproteinových cholesterolových profilů pro tři samce opice cynomolgus, před ošetřením, v průběhu ošetření a po ošetření sloučeninou z příkladu 1. Zvířata se předem zvolila tak, aby reprezentovala zvířata s vysokým, průměrným nebo nízkým poměrem LDL- ku HDL-cholesterolu. Tři bazální profily pro každou opici byly v podstatě identické a proto se zprůměrovaly a použily pro sestrojení bazálního ·· ·· 9 · 9 · · · · • > » · * profilu. Jednotýdenní ošetřování 3 mg/kg/den sloučeninou z příkladu 1 nemělo žádný vliv na lipoproteinové cholesterolové profily. Nicméně ošetření 10 mg/kg/den sloučeninou z příkladu 1 v průběhu druhého týdne a 30 mg/kg/den v průběhu třetího týdne, progresivně snížilo VLDL-, LDL- a HDL-cholesterol, který se začal u dvou ze tří opic po jednotýdenním průplachu opět vracet ke kontrolním hladinám. U primátů tvoří Lp(a) cholesterol stoupající výběžek na LDL píku. S postupujícím ošetřením se LDL pík stává symetričtější, což pravděpodobně odráží snížení Lp(a). Lp(a) se měřil přímo pomocí měřícího vybavení ELISA (obrázek 5). Přímá Lp(a) kvantifikace demonstruje dávkově dependentní redukci Lp(a) hladin, dosahující 62%, 83% a 89% redukci (78 + 8% průměr) při 30 mg/kg dávky sloučeniny z příkladu 1, nezávisle na bazálních hladinách tří pokusných opic (obrázek 5). Po jednotýdením průplachu Lp(a) dosáhl zpět hladiny před ošetřením, nebo ji dokonce překročil.

Na rozdíl od krys, u kterých se hladina HDL značně zvýšila v průběhu ošetřování sloučeninou z příkladu 1, způsobila tato sloučenina u opice cynomolgus snížení HDLcholesterolu. odrazit na redukce HDL u opice cynomolgus se může vysoké hladině cholesterylesterového transferového proteinu (CETP) v těchto druzích. Krysí plazma má pouze malou nebo vůbec žádnou CETP aktivitu. Vysoké úrovně CETP mohou tedy urychlovat rychlost transferu HDL-cholesteroíu 1 LDL a LDL prekurzorům, což má za následek snížení hladin HDL-cholesterolu. Analýza hladin CETP aktivity u králíků a řady různých primátů ukazuje, ze hladiny CETP v plazmě u opic cynomolgus jsou podstatně vyšší (lOx až 12x) než u lidí (obrázek 6) . Takže se dá nřoká va e ošetření lidí sloučeninou podle vynarezu «*· · · ♦ · · · 0 0 0 • *·«· «00 zahrnuje snížení VLDL, LDL a Lp(a)-cholesterolu a zvýšení HDL-cholesterolu.

Obrázky 1 až 6 ukazují výsledky biologického hodnocení sloučenin podle vynálezu. Výsledky jsou uváděny pro výhodnou sloučeninu z příkladu 1. Obrázek 1 ukazuje strukturu výhodné sloučeniny z příkladu 1 a označuje jí jako „PD 72953, což je označení, pod kterým je uvedena i na některých dalších obrázcích. Referenčním činidle je gemfibrozil, někdy též označovaný jako „CI-719.

Obrázek 2 ukazuje účinky sloučeniny z příkladu 1, pokud se podá krysám krmeným krysím žrádlem. Po dobu sedmi dní se samečkům Sprague-Dawleyovy krysy denně mezi 5 a 9 hodinou ranní orálně aplikovaly vehikulum tvořené karboxymethylcelulózou a povrchově aktivním činidlem Tween, gemfibrozil, nebo sloučenina z příkladu 1 v naznačených koncentrace. Při jednom experimentu se jako kontrolní skupina použila skupina, tvořená osmi krysami, a po dobu čtrnácti dní se jedné skupině, tvořené osmi krysami, podával gemfibrozil a osmi krysám jednotlivých testovaných skupin se podávalo 1, 3, 10, 30 a 100 mg/kg/den sloučeniny z příkladu 1. Zvířata se nechala nažrat a napít dle chuti a přibližně 12 hodin po podání poslední dávky se utratila inhalací etheru. Celková hladina cholesterolu a triglyceridů se stanovila enzymaticky. Lipoproteinové profily se určily pomoci kvantitativní vysokovýkonné gelové chromatografie (HPGC). HPGC píkové (viz například obrázek 3) plochy plus hodnota celkové koncentrace cholesterolu v plazmě se použily pro stanovení cholesterolu v lipoproteinových frakcích. Apolipoproteíny A-I a E se určily pomocí imunoelektroforézy, Apoiipoprotein B se určil za použití ímunoturbidometrické metody. U čtrnáctidenního v · • » experimentu se jako indikace aktivity peroxísomatického enzymu stanovila aktivita hepatícké karnitínové acyltransferázy. Tuto metodologii popsal Krause a kol. v Pharmacol. Res. , 29:345-357 (1994). Tato data ukazují, že sloučenina z příkladu 1 způsobuje dávkově dependentní zvýšení zmíněné aktivity, přičemž aktivace je podobná jako v případě 100 mg/kg/den dávky gemfibrozilu. Údaj reprezentuje průměrnou hodnotu + SEM pro hodnoty stanovené s ohledem na kontrolní skupinu, získanou z devíti samostatných experimentů.

Pokud jde o obrázek 2, krysy se ošetřily výše' popsaným způsobem. Plazma se podrobila HPGC, která určila distribuci cholesterolu mezi lipoproteiny. Všechny profily pro jednotlivé skupiny osmi krys se vynesly ve stejném měřítku. Před profily testovaných skupin osmy krys je vždy předřazen jeden referenční profil pro krysu z kontrolní skupiny.

HPGC se použila pro analyzování lipoproteinových cholesterolových profilů v 10 μ plazmy, získané od tří opic cynomolgus (opice 90 až 98, 90 až 122, 90 až 182) před ošetřením a následně po jednotýdením průplachu sloučeninou z příkladu 1. V průběhu periody týdenního ošetření, kdy se postupně zvyšovala dávka se denně mezi 5 a 6 hodinou ranní podávala na lačno orální žaludeční sonda účinné složky ve vehikulu, tvořeném karboxymethylcelulózou a povrchově aktivním činidlem Tween. před aplikací dávky se odebrala zvířatům na lačno krev. Zvířata se krmila 20 normálními opičími sušenkami, 12 hrozny a 1 banánem denně. Vzhledem k tomu, že profily tří bazálních vzorků pro každou opici byly v podstatě identické, se tyto profily zprůměrovaly a vytvořil se reprezentativní profil. Je třeba zmínit, Že spolu s probíhajícím ošetřením, které postupně redukuje Lp(A), se redukuje LDL pík a stává se symetričtějším,

Lp(a) hodnoty se stanovily pomocí komerčně dostupné testovací sady ELISA. Vzorky plazmy z každého odběru krve se rozdělily na malé alikvotní objemy (100 μΐ) a zmrazily při -70°C. Lp(a) pro všechny vzorky plazmy se stanovily ve stejném testu. Data, která ukazuje obrázek 5, reprezentují absolutní (horní část obrázku) a relativní vztažené k bazálním (spodní část obrázku) Lp(a) hladiny tří opic, znázorněné na obrázku 4.

Aktivita transferového proteinu cholesterylesteru (CETP), jak ukazuje obrázek 6, se určila pro celou řadu primátů a pro krmením krmené a cholesterolem krmené králíky. CETP aktivita se určovala v celé plazmě stanovením rychlosti transferu fluorescenčního syntetického cholesterylesterového analogu, obsaženého v mikroemulzích, způsobem, který popsal Bigsgaier a kol. v Lipid Res., 34 -.1625-1634 (1993) .

Pro s rovnání relativní účinnosti sloučeniny z příkladu 1 s dalšími sloučeninami podle vynálezu se provedl jednotýdenní experiment na žrádlem krmených krysách. Samcům Sprague-Dawleyovy krysy se sedm dní, vždy mezi 6 a 9 ranní orálně podávaly karboxymethyl-celulózové vehikulum, obsahující tween, nebo sloučeniny podle vynálezu, naznačené na obrázku 7 (struktury viz diagram na obrázku) v dávce 30 mg/kg/den. Zvířata se nechala nažrat a napít dle libostí a přibližně 12 hodin po aplikaci poslední dávky se utratily inhalováním etheru. Triglyceridy v plazmě, celková koncentrace cholesterolu v plazmě, distribuce cholesterolu · · · • ·

6 • · mezi lipoproteiny a apolipoproteíny se určily již popsaným způsobem.

Obrázek 7 uvádí výsledky výše popsaného testu. Tento obrázek ukazuje, že výhodná sloučenina z příkladu 1 prudce snižuje triglyceridy v plazmě a VLDL cholesterol a zvyšuje HDL cholesterol.

Ukázalo se, že dialkylethery rovněž zvyšují inzulínovou senzitivitu a jako takové jsou použitelné pro zvýšení využití glukózy u diabetických zvířat a pro ošetření cukrovky, zejména neinzulínově dependentního diabetes mellitus. Sloučeniny podle vynálezu se hodnotily standardním testem, používajícím 3T3-L1 adipocyty, které jsou zvláště citlivé na insulin, tj . spotřeba cukru může být náhle aktivována inzulínem patnáctí násobně až dvacetinásobně. Metodologie použitá pro test je podrobněji popsána Frostem a kol. v J. Biol. Chem,, 260:2646-2652 (1985) .

Konkrétněji se 3T3-L1 fibroblastové buňky získaly ze sbírky American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, MD). Buňky se nechaly růst až vytvořily shluk a následně se diferenciovaly do adipocytů. V den 0 se shluk buňek ošetřil 167 mm inzulínu, 0,25 μΜ dexamethasonu a 0,5 mM methylisobutylmethylxanthinu v 10% fetálním bovrnním séru (FBS), obsahujícím DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) . O dva dny později se médium změnilo na DMEM, obsahující 167 nm inzulínu a 10% FBS. Medium se následně vyměnilo za 10% DMEM a měnilo každý další den až do sklizně. Testované sloučeniny, rozpuštěné v dimethylsulfoxidu, se inkubovaly v médiu v den 0 a doplnily s každou změnou media. Rozdíl se stanovil vizualízací • * kapiček tuku shromážděných v buňkách. Transport glukózy se měřil kvantifikací zabudování [¹⁴C] deoxyglukózy do diferenciovaných buněk v devátém metodologie, popsané Sandoukem a kol 133:352-359 (1993).

dni za použiti v Endocrínology,

Obrázek 8 reprezentativních glukózy, který buněčného vývoje Transport ukazuje výsledky sloučenin podle vynálezu se hodnotil při bazálních hladinách, naznačuje expresi glukózového transportéru Glut 1 v těchto pěstovaných adipocytech. Jako referenční sloučenina se použil troglítazon, sloučenina, která je klinicky vyvinuta jako činidlo, zvyšující využití glukózy u zvířat a lidí (plně. popsáno v příkladu 2 patentu US 4,572,912), a která produkuje 70% zvýšení transport glukózy v těchto buňkách při dávce 5 μΜ. Tato aktivita troglítazonu je předzvěstí jeho ínzulínově-senzitizačních účinků. Z testovaných sloučenin podle vynálezu testované sloučeniny jak z příkladu 1, tak z příkladu 2 produkovaly podstatné zvýšení transportní aktivity glukózy, přičemž sloučenina z příkladu 2 způsobuje dvojnásobnou stimulaci. Sloučeniny podle vynálezu se hodnotily při dávce 100 μΜ.

Jak je patrné z předcházejících údajů, dialkylethery podle vynálezu jsou účinné pokud jde o snižování Lp(a), triglyceridů, apolipoproteinu B, VLDL-cholesterolu a LDLcholesterolu. Sloučeniny podle vynálezu rovněž zvyšují apolipoprotoeín A-I, apolipoprotein E, HDL-cholesterol a HDL/(VLDL + LDL) poměr. Sloučeniny jako takové jsou použitelné pří léčení a prevenci před vaskulárním onemocněním a neinzulínově dependentním diabetes mellitus. Dalším provedením tohoto vynálezu je způsob léčení a prevence před vaskulárním onemocněním a diabetes, který

Z, o zahrnuje podání účinného množství sloučeniny obecného vzorce I. „Účinným množstvím“ se rozumí dávka, potřebná pro léčení nebo prevenci proti vaskulárnímu onemocnění nebo diabetes savce. Sloučeniny jsou zpravidla podávány v dávce přibližně 50 až 5000 mg/den, běžněji přibližně 50 až 2000 mg/den. Běžně používaným dávkovači režimem bude přibližně 50 až 300 mg podávaných jednou až čtyřikrát denně. Stejné dávkovači hladiny se budou používat pro léčení a prevenci před vaskulárním onemocněním a rovněž pro specifické snížení hladin Lp(a) v plazmě a zvýšení HDLcholesterolu v plazmě a pro léčení a prevenci před diabetes.

Další provedení vynálezu představují farmaceutické formulace, obsahující sloučeninu obecného vzorce I společně s farmaceuticky přijatelným masťovým základem, nosičem nebo ředidlem. Sloučeniny lze formulovat pro běžné orální nebo parenterální podání , přičemž orální způsob podání je výhodnější. Typickými farmaceutickými nosiči a masťovými základy, používanými v orálních formulacích jsou například laktóza; sacharóza; škroby, například kukuřičný škrob a bramborový škrob; deriváty celulózy, například methylceluloza a ethylceluloza; želatiny; mastek; oleje, například rostlinné oleje, sezamový olej, olej ze semen bavlníku; a glykoly, například polyethylenglykol. Orální přípravky budou mít zpravidla formu tablet, kapslí, emulzí, roztoků a pod.. Rovněž lze použít formulace s řízeným uvolňováním, například využívající polymerní matrici nebo osmotické čerpadlo a pod. obsahovat přibližně 5 hm.%

Typické formulace budou až 95 hm.% díalkyletherů, podaného spolu masťovým základem nebo nosičem. Do • · · · »000 • 00 · · · · · « 0 0 0 « 1 · · · 0 0 formulace lze zabudovat ochucovadla, například příchuť třešní nebo pomeranče.

Pro parenterální podání, tj . pro běžný intramuskulární a intravenózní způsob aplikace mohou být sloučeniny formulovány spolu s ředidly, například isotonickým solným roztokem, 5% vodným roztokem glukózy a pod. . Sloučeniny mohou být rovněž formulovány s vosky a gely ve formě čípků. Sloučeniny podle vynálezu jsou rovněž vhodné pro transdermální aplikaci a mohou být formulovány spolu s penetračními činidly a pod. ve formě náplastí. Následující příklad dále ilustruje typické formulace podle vynálezu.

Příklad 10

Přísada	Množství
kyselina 2,2-dimethyl-6-(3-methyl-3-hydroxykarbonylbutyloxy)hexanová	1000 g
Laktóza	960 g
Stearát hořečnatý	40 g

Složky se dokonale promíchaly a získanou homogenní směsí se naplnily #4 tvrdé želatinové kapsle. Každá kapsle se naplnila 200 mg směsí a obsahovala 100 mg účinného dialkyletherů. Kapsle se podávaly dospělé osobě rychlostí denně jedna až tři kapsle pro snížení Lp(a) v plazmě.

• · * ·

Příklad 11

Přísada	Množství
kyselina 2,2-dimethyl-6-(6-methyl-6-ethoxykarbonylheptyloxy)hexanová	3000 g
Laktóza	750 g
Kukuřičný škrob	300 g
Želatina	120 g
Voda	1000 g
Stearát hořečnatý	20 g

Dialkylether, laktóza a 150 g kukuřičného škrobu se smísilo s roztokem želatiny ve vodě. Mokré granule se přesily, vysušily a opět přesily. Vysušené granule se smísily se stearátem hořečnatým a zbývajícím kukuřičným škrobem a směs se slisovala do 698 mg tablet za použití 15/32 palcových standardních konkávních lisovníků. Každá tableta obsahovala 500 mg dialkyletheru.

• ·

Příklad 12 • v « V « « * · •A « ···· · · ·· » · ♦ · · ·« · · · · · · ··*· « « » « «·*

Přísada	Množství
6, 6'-oxybis(2,2-dimethylhexanová kyselina)	4,0 g
Polyoxyethylensorbitanmonostearát	0,1 cm³
Nátrium karboxymethylcelulóza	0, 3 g
Komplexní křemičitan hiinitohořečnatý	0,5 g
Cukr	10 g
Glycerin	2 cm³
Benzoát sodný	0, 5 g
Citrát sodný	0,2 g
Schválené červené barvivo	1 mg
Třešňová příchuť	0,02 cm³
Destilovaná voda	100 cm³

Jako polyethylensorbítanmonstearát lze použít například produkty polysorbát 60 nebo Tween 60. Komplexní křemičitan hlínitohořečnatý je gelutvorné činidlo. Lze použít například produkt Veegum H.V.. Tato látka se hydrátu je přes noc v 10 cm³ destilované vody, Z polyethylensorbitanmonstearátu, třešňové příchuti, 30 cm³destilované vody a dialkyl· etheru se připraví směs, která se vede skrz homogenizér. Za intenzivního míchání se přidají cukr, glycerin, citrát sodný, benzoát sodný a nátrium karboxymethylcelulóza a následně hydratovaný komplexní křemičitan hlínitohořečnatý a roztok červeného barviva ve 2 cm³ vody. Výsledná suspenze se homogenizuje , okyselí na pH 5.,0 přidáním kyseliny citrónové a naředí do konečného objemu 100 cm³ destilovanou vodou. 55 cm³ orální * · · • · • 4 dávková jednotka této suspenze obsahuje 200 mg díalkyletheru. Pokud je to žádoucí, lze červené barvivo a třešňovou příchuť vynechat nebo nahradit jiným barvivém a ochucovadlem.

Výhodným provedením vynálezu je použití dialkyl etherů při. prevenci a léčení neinzulínově dependentního diabetes mellitus a stavů, které tomuto onemocnění předcházejí.

Neinzulínově dependentní diabetes mellitus (NIDDM) nebo jinak označovaný diabetes typu II je forma diabetes mellitus, která se vyskytuje převážně u dospělých jedinců, u kterých je pro použití dostupná odpovídající produkce inzulínu a u kterého existuje defekt v inzulínem mediovaném využití s metabolismu glukózy v periferních tkáních. Vyvinutý NIDDM se vyznmačuje třemi hlavním abnormalitami metabolismu: rezistencí k inzulínem mediovanému použití glukózy, narušením stravou mediované inzulínové sekrece a nadprodukcí glukózy v játrech.

Lidé, u kterých se aktuálně vyvíjí NIDDM, se zdá, že se tak děje proto, že jejich B-buňky nakonec přestanou udržovat dostatečnou sekreci inzulínu, aby kompenzovaly inzulínovou rezistenci. Mechanizmus zodpovědný za poškození funkce B-buněk nebyl doposud identifikován, ale může souviset s chronickými poškozeními na B-buňkách, způsobenými periferálním inzulínovou rezistenci a/nebo účinky hyperglykemíe. Poškození B-buněk se může rovněž vyskytovat jako independentní inherentní defekt u „prediabetických jedinců.

NIDDM se často vyvíjí u určitých rizikových skupin populace, přičemž jednou takovou skupinou jsou jedinci s PCOS (polycystický vaječníkový syndrom). PCOS je • » · • v « Φ · · * t · · « φ φ *

Φ» · * * v * « · φφφφ φφφφ φ · φ nejběžnější endokrlnovým onemocněním u žen v reprodukčním věku. Tento syndrom je charakterizován hyperandrogenizmem a nepravidelnou gonadotropinovou sekrecí produkující oligonebo anovulací.

PCOS je spojen s hlubokou inzulínovou rezistencí, která vede k podstatné hyperinzulínemii. V důsledku této inzulínové rezistence, hrozí u PCOS žen zvýšené riziko možnosti vývoje NIDDM. Hirsutizmus, akné a plešatost, které jsou běžně zjišťovány u PCOS žen, jsou klinickými známkami hyperandrogenizmu. Menstruační poruchy a neplodnost jsou důsledkem dysfunkce vaječniku souvisejíc s nepravidelnou gonadotropinovou sekrecí. Nadbytek androgenu, způsobený pravděpodobně eventuální konverzí androgenů na estrogen, hraje rovněž důležitou roli při porušení uvolňování gonadotropinu u PCOS.

NIDDM se rovněž vyvíjí u jedinců rizikové skupiny populace trpící GDM (těhotenský diabetes mellitus). Těhotenství je normálně spojeno s postupnou rezistencí na inzulínem mediované použití glukózy. Je faktem, že neinzultován senzitivita je nižší spíš v pozdějším stadiu těhotenství. Dá se předpokládat, že inzulínová rezistence je z velké části zprostředkována účinky cirkulujících hormonů, například placentálního laktogenu, progesteronu a kortisolu, které se vyvíjejí v průběhu těhotenství. Z pohledu inzulínové rezistence se citlivost pankreatických B-buněk ke glukóze zpravidla zvyšuje skoro až třikrát v pozdějším stadiu těhotenství a úkolem odezvy je minimalizovat účinky inzulínové rezistence na hladiny cirkulující glukózy. Těhotenství tedy poskytuje hlavní „stres-test kapacity B-buněk kompenzovat inzulínovou rezistenci.

a a a « a a a a » * · · a a a * a · a · a a a· · · a a a a a a a a a * a * · a a ·

Další populací, která je považována za rizikovou, pokud jde o vývoj NIDDM, jsou osoby se Syndromem X; osoby s hyperinzulínemií jako průvodním jevem; osoby s inzulínovou rezistencí, vyznačující se hyperinzulínemií a poruchou odezvy na exofenní inzulín; a osoby s abnormáním inzulínem a/nebo výskytem glukózových poruch spojených s přebytkem cirkuluj j.cích glukokortikoídů, růstového hormonu, katecholamínů, glukagonu, parathyroidového hormonu a dalších dalšími inzulínově rezistentními podmínkami.

Selhání léčení NIDDM může mít za následek úmrtí v důsledku kardiovaskulární poruchy a dalších diabetických komplikací včetně retinopatie, nefropatie a periferální neuropatie. Dlouhodobé léčení NIDDM zahrnuje program, jehož úkolem je napomáhat ve snižování krevního cukru v kombinaci s dietou a cvičením. Alternativně léčení NIDDM zahrnuje podávání orálních hypoglykemických činidel, například sulfonylmočovin samotných nebo v kombinaci s inzulínovými inj ekcemí.

Ve všech případech by bylo tedy žádoucí vyvinout způsob léčení rizikových skupin populace osob trpících PCOS a GDM, který by zabránil nebo oddálil nástup NIDDM, čímž by přinesly úlevu, zvýšil kvalitu života, zabránil akutním a dlouhodobým komplikacím, snížil úmrtnost a redukoval léčení doprovázejících onemocnění populace, u nichž existuje riziko vzniku NIDDM. Způsoby použití sloučenin podle vynálezu při ošetřování rizikových skupin populace, trpících například PCOS a GDM, jehož cílem je zabránit nebo zpomalit nástup NIDDM, výše jmenované požadavky splňuj i.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce

Y ve kterém n a m nezávisle znamenají celé číslo od 2 do 9;

Ri, R2z R-3 a R* nezávisle znamenají alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku; a Ri a R₂ společně s uhlíkem, na který jsou navázány, a R₃ a R₄ společně s uhlíkem, na který jsou navázány, mohou tvořit karbocyklický kruh mající 3 až 6 atomy uhlíku;

Yi a Y₂ nezávisle znamenají COOH, CHO, tetrazolovou skupinu a COOR₅, ve které R₅ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, přičemž alkylová skupina, alkenylové skupina a alkinylové skupina mohou být substituovány jednou nebo dvěmi skupinami, zvolenými z halogenoskupiny, hydroxy-skupiny, alkoxyskupiny s 1 az 6 atomy uhlíku a fenylove šxupiny a její farmaceuticky přijatelné soli.

4 · «· « 4 · « « 4 · · * 44 *4

4 4

4 ·

44 4

A 4

4 4
2. Sloučenina podle nároku 1, vyznačená tím, že Ri, R₂, R₃ a R₄ znamenají, jednotlivě alkylovou skupinu.
3. Sloučenina podle nároku 1, vyznačená tím, že Yi a Y₂ nezávisle znamenají karboxylovou skupinu nebo COOR₅.
4. Sloučenina podle nároku 1, vyznačená tím, že Υχ a Y₂ nezávisle znamenají karboxylovou skupinu nebo COORs, ve které R₅ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.
5. Sloučenina podle nároku 4, vyznačená tím, že Ri, R₂, R₃ a R₄ znamenají jednotlivě stejnou alkylovou skupinu a jak Υχ tak Y₂ znamená karboxylovou skupinu.
6. Sloučenina podle nároku 5, vyznačená tím, že Ri, R₂, R₃ a R₄ znamenají methylovou skupinu,
7. Sloučenina podle nároku 6, vyznačená tím, že n a m jsou stejná celá čísla.

• 0

0 · 0 · · *· * • ··· 0 0·· • 0« 0· 0000 · 0 0 0 0 0 0 ·
8, Sloučenina podle nároku 6, tím, že jak n tak m znamená 4.

vyznačená
9. Sloučenina podle nároku 8, vyznačená tím, že znamená 6,6'-oxybis(2,2'-dimethylhexanovou kyselinu).

10. Sloučenina podle nároku 7, vyznač e n á t i m , že n a m se zvolí ze 2, 3 , 5 nebo 6. t 11. Sloučenina i m , že znamená podle nároku 10, vyznač e n á

5,5'-oxybís(2,2-dimethylpentanovou kyselinu),

4,4'-oxybis(2,2-dimethylbutanovou kyselinu),

8,8'-oxybis(2,2-dimethyloktanovou kyselinu).
12. Sloučenina podle nároku 7, vyznačená tím, že jak Yj. tak Y₂ znamená COOR₅.
13. Sloučenina podle nároku 12, vyznačená t i m , že R₅ znamená methylovou skupinu.
14. Sloučenina podle nároku 13, vyznačená tím, že znamená methyl 2,2-dimethyl-8-(7-methyl-7methoxykarbonyloktyloxy)oktanoát.
15. Sloučenina podle nároku 12, vyznačená t i m , že R₅ znamená ethylovou skupinu.

• fc • · * · · 9 · · · · · · · • I · « · «· · · · 9 · · β Q ········ * ·
16. Sloučenina podle nároku 15, vyznačená tím, že znamená ethyl 2,2-dimethyl-5-(4-methyl-4ethoxykarbonylhexyloxy)hexanoát.
17. Farmaceutická formulace, vyznačená tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1 společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem, nosičem nebo masťovým základem.
18. Farmaceutická formulace podle nároku 17, vyznačená tím, že používá sloučeninu, ve které Yi a Y₂ znamenají nezávisle COOH nebo COOR₅, ve kterém R₅znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.
19. Farmaceutická formulace podle nároku 18, vyznačená tím, že používá sloučeninu, ve které Ri, R2, R3 a R4 znamenají methylovou skupinu.
20. Farmaceutická formulace podle nároku 19, vyznačená tím, že používá sloučeninu, ve které n a m jsou identické.
21. Farmaceutická formulace podle nároku 20, vyznačená tím, že používá sloučeninu, ve které n a m znamenaj í 4 .

• · • · • ·
22. Farmaceutická formulace podle nároku 21, vyznačená tím, že používá 6,6'-oxybis(2,2'dímethylhexanovou kyselinu).
23. Způsob snížení Lp(a), vyznačený tím, že zahrnuje podání Lp(a) snižujícího množství sloučeniny podle nároku 1 savci.
24. Způsob prevence nebo léčení vaskulárního onemocnění, vyznačený tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny podle nároku 1 savci.
25. Způsob zvýšení HDL-cholesterolu v plazmě, vyznačený tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny podle nároku 1 savci.
26. Způsob snížení triglyceridů v plazmě, vyznačený tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny podle nároku 1 savci.
27. Způsob prevence nebo léčení neinzulínově dependentního diabetes mellitus, vyznačený tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny podle nároku 1 savci.

• 4 « 4
28. Způsob snížení LDL-cholesterolu, vyznačený tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny podle nároku 1 savci.
29. Způsob snížení VLDL-cholesterolu, vyznačený tím, že zahrnuje podání VLDL-cholesterol snižujícího množství sloučeniny podle nároku 1 savci.
30. Způsob snížení apolipoproteinu B, vyznačený tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny podle nároku 1 savci.
31. Způsob zvýšení apolipoproteinu A-l, vyznačený tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny podle nároku 1 savci.
32. Způsob zvýšení apolipoproteinu E v plazmě, vyznačený tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny podle nároku 1 savci.